行 业 的 领 先 者 Sequencing Powerhouse Premier provider of consumable kits and reagents Quantum Dot nanocrystals Molecular Probes dye chemistry Premier pro

测 序 仪 在 临 床 检 测 中 的 应 用 钟 晖 MCB 华 东 区

行 业 的 领 先 者 Sequencing Powerhouse Premier provider of consumable kits and reagents Quantum Dot nanocrystals Molecular Probes dye chemistry Premier provider of genetic analysis reagents & services DNA sequencing systems Field service and support Life Technologies Committed to G1, G2, G3 technology leadership 2 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

ABI 公 司 基 因 分 析 仪 发 展 历 史 1986 年 370 型 全 世 界 第 一 台 基 因 分 析 仪 1991 年 1995 年 1997 年 1998 年 1998 年 2000 年 2002 年 2002 年 2004 年 2008 年 373 型 基 因 分 析 仪 377 型 基 因 分 析 仪, 光 栅 +CCD 310 型 毛 细 管 基 因 分 析 仪 377 96 基 因 分 析 仪 3700 型 96 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 Applera 旗 下 Celera 完 成 人 类 全 基 因 组 测 序 3100 16 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 3100 Avant 4 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 3730 48 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 3730xl 96 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 3130 4 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 3130xl 16 道 毛 细 管 基 因 分 析 仪 3130 及 3130XL 获 得 SFDA 认 证 全 世 界 约 2 万 台, 中 国 800 1000 台, 市 场 占 有 率 95% 3 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

ABI 公 司 22 年 研 发 制 造 经 验 书 写 基 因 分 析 仪 历 史! 3730(xl) 1986 年 全 球 第 一 台 基 因 分 析 仪 370 373 377 3100(A), 3130(xl) 平 板 胶 电 泳 310 毛 细 管 电 泳 1996 年 全 球 第 一 台 毛 细 管 基 因 分 析 仪 4 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

377(36/96) 3100 A 3100 3700 310 3130 3130xl 3730 3730xl 5 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

测 序 突 变 检 测 的 黄 金 标 准

再 测 序 流 程 gdna PCR 测 序 电 泳 数 据 分 析 3730 金 牌 酶 BigDye 3130xl 7 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

全 部 人 类 基 因 的 再 测 序 引 物 调 控 序 列 外 显 子 PCR 引 物 M13 测 序 引 物 PCR 引 物 带 正 向 和 反 向 M13 通 用 测 序 引 物 覆 盖 所 有 基 因 的 所 有 Genbank 记 录 ( 超 级 转 录 子 ) 覆 盖 所 有 编 码 和 非 编 码 的 外 显 子 覆 盖 调 控 序 列 ( 外 显 子 5 上 游 1kb 区 域 ) 覆 盖 剪 接 位 点 8 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

试 剂 确 保 数 据 质 量 PCR AmpliTaq Gold PCR Master Mix 最 强 大 的 Taq 酶 测 序 BigDye Terminator v3.1 最 均 一 的 峰 高 9 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

sample files 软 件 简 化 数 据 处 理 SeqScape Project file project template 一 个 按 钮 完 成 所 有 计 算 Analysis reports 碱 基 计 算 杂 合 子 计 算 过 滤 拼 接 组 装 比 较 重 复 数 据 对 齐 与 标 准 数 据 比 对 Analysis settings, preconfigured & stored project templates Sample 处 理 样 品 比 标 准 品 Specimen 处 理 标 本 比 标 准 品 10 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

再 测 序 系 统 VariantSEQr 引 物 SeqScape 软 件 + 标 准 基 因 序 列 PCR mix Seq mix (BigDye) 基 因 分 析 仪 (3130, 3730) PCR 仪 11 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

基 于 AB 基 因 分 析 仪 SNP 研 究 整 体 解 决 方 案 SNP Discovery AB solution SSCP&CSCE 未 知 SNP 检 测 未 知 SNP 高 通 量 检 测 未 知 SNP 金 标 准 测 序 TILLING SEQUENCING AB 毛 细 管 基 因 分 析 仪 SeqScape &Variant Reporter & GeneMapper SNP Validation 低 通 量 SNP 筛 选 中 高 通 量 SNP 筛 选 AB solution SNaPshot kit SNPlex system AB 毛 细 管 基 因 分 析 仪 GeneMapper 软 件 12 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

SNaPshot 中, 低 通 量 基 因 分 型 平 台

SNaPshot Primer Extension Kit ddt ddg ddc Primer Enzyme dda Primer A Template Allele 1 G Template Allele 2 T C SBE 单 碱 基 延 伸 反 应 14 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

SNaPshot Primer Extension Kit Possible elongation products T C wt mut rfu wt rfu wt/mut rfu mut Homozygote = wt Heterozygote Homozygote = mut Colour = Genotype Size = Locus 15 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

SNaPshot 多 重 检 测 系 统 Primers designed with tails of differing lengths T T C A A G Primer Template C ddgtp ddctp ddttp ddatp Extend and Terminate Primer G A T A T G C G C T A T A C G C G Color = genotype Electrophoresis Size = locus 16 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

SNaPshot 实 验 流 程 Multiplex Amplification PCR product purification Multiplex SNaPshot kit Reaction 去 除 of [F]ddNTPs G C 电 泳 分 析 17 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AB 基 因 分 析 仪 在 诊 断 的 应 用 概 况

分 子 诊 断 的 主 要 方 向 基 因 组 突 变 : 指 染 色 体 数 目 的 变 化, 如 人 类 第 21 对 染 色 体 为 三 条 时 能 导 致 唐 氏 综 合 症 可 以 利 用 染 色 体 组 型 分 析 和 传 统 细 胞 遗 传 学 方 法 对 其 鉴 定 染 色 体 突 变 : 指 染 色 体 结 构 的 变 化, 如 转 位 / 大 片 段 缺 失 或 插 入 / 倒 置 / 复 制 或 扩 增, 可 以 通 过 传 统 细 胞 遗 传 学 如 FISH,M-FISH,CGH 和 分 子 生 物 学 方 法 如 Southern blotting, Northern Blotting,Fluorescence Dosage analysis 等 技 术 检 测 点 突 变 或 基 因 突 变 : 指 在 分 子 水 平 上 发 生 变 化 的 突 变, 如 从 大 到 Mbp 小 到 1bp 的 缺 失 / 插 入 / 复 制 等 19 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

对 第 三 类 突 变 检 测 的 技 术 包 括 对 大 片 段 缺 失 / 插 入 / 复 制 分 析 的 FISH,M-FISH,CGH,PFGE, Southern blotting,northern Blotting, Fluorescence Dosage analysis; 对 小 缺 失 / 插 入 / 替 代 分 析 的 SSCP,heteroduplex, DGGE,CMC, RNAse protection,ptt,ddf fingerprinting,dhplc,bess,muts,dna sequencing 对 已 知 的 突 变 分 析 可 以 利 用 Southern blotting,pcr-sizing,rflp, ASO,ARMS,FEN assay,minisequencing, DNA chips/microarrays,dna sequencing 等 在 很 多 基 因 诊 断 方 法 中,DNA 序 列 测 定 和 分 析 是 最 权 威 的 黄 金 标 准 20 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

以 美 国 为 例 看 基 因 检 测 的 使 用 概 况 可 应 用 基 因 检 测 数 量 与 分 布 临 床 检 测 1,151 评 估 中 368 其 中 用 于 疾 病 检 测 的 数 量 与 分 布 疾 病 检 测 1,335 临 床 实 验 室 1035 实 验 室 609 研 究 实 验 室 300 Source: www.genetests.org (12/16/06) 21 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AB 基 因 分 析 仪 在 诊 断 的 应 用 1 产 前 诊 断 及 个 体 识 别 及 遗 传 疾 病 诊 断

片 段 分 析 在 分 子 诊 断 中 的 应 用 应 用 于 个 体 识 别 亲 子 鉴 定 的 微 卫 星 鉴 定 试 剂 盒 (Profiler Plus, Cofiler,Identifiler 16 位 点 ) 的 临 床 应 用 单 核 苷 酸 多 态 性 (SNP) 验 证 试 剂 盒 (SNaPshot Multiplex) 应 用 于 基 因 克 隆 定 位 的 连 锁 分 析 试 剂 盒 (Linkage Mapping Sets-HD5, MD10, LD20) 用 于 脆 性 X 综 合 症 的 Fragile X 检 测 试 剂 盒 染 色 体 异 常 检 测 的 QF-PCR 23 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

市 场 热 点 产 前 诊 断 产 前 诊 断 脆 性 X (FMR1, abnormal number of triplet repeats) 亨 廷 顿 舞 蹈 症 (abnormal number of triplet (CAG) repeats) Cystic Fibrosis (CFTR) 唐 氏 综 合 症 及 其 他 三 染 色 体 的 产 前 诊 断 染 色 体 异 常 检 测 QF PCR 24 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

脆 性 X 标 准 工 作 流 程 DNA Sample PCR Product PCR Clean Up & Denaturation Clean Up Product Agarose Gel (2%) Electrophoresis ABI Genetic Analyzer Results Run 1 5 70 repeats Run 2 71 230 repeats Raw Data Data Analysis & Fragment Sizing 25 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

样 本 数 据 for Male vs Female Y chromosome peak X chromosome peak 30 repeats Sample 24, M, 30 Male X chromosome peak 29 repeats 30 repeats Sample 30, F, 29/30 Female *Unpublished data from Celera Diagnostics 26 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

市 场 热 点 亲 子 鉴 定 亲 子 鉴 定 AB HID kit ABO 血 型 检 查 SnaPshot 27 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

Applied Biosystems HID DNA 分 析 整 体 解 决 方 案 供 应 商 完 整 的 DNA 鉴 定 技 术 平 台 ( 仪 器, 软 件, 试 剂, 技 术 支 持 ) 法 医 产 品 均 经 严 格 系 统 认 证, 符 合 国 际 规 范 专 业 的 技 术 支 持 和 客 户 服 务 高 品 质 的 新 产 品 不 断 推 陈 出 新 28 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

试 剂 平 台 AmpFLSTR 系 列 试 剂 盒, 满 足 不 同 人 群 分 辨 率 需 求! Profiler Plus ID & Cofiler kit Identifiler Kit Yfiler kit Minifiler kit 29 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

16 位 点 STR 试 剂 盒 :Identifiler Kit: 30 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AmpFlSTR Yfiler Kit 17 Y STR 位 点 Y DYS19 DYS389I/II DYS390 European DYS391 Minimal DYS392 Haplotype DYS393 DYS385a/b DYS437 DYS438 SWGDAM DYS439 DYS448 ABI DYS456 DYS458 DYS635 Y GATA H4 2004 Applied Biosystems All Rights Reserved 31 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

Yfiler kit 的 特 色 和 好 处 单 一 PCR 反 应 可 同 时 分 析 17 Y STR 位 点 不 会 和 女 性 DNA 反 应 即 使 样 品 中 含 有 高 量 的 女 性 DNA 也 可 以 检 测 男 性 DNA 基 因 型 已 通 过 国 际 标 准 认 证 在 9700,310, 3100 avant, 3100,3130,3130xl 等 都 经 过 验 证 32 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

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ABO 血 型 检 查 : 人 的 ABO 血 型 是 受 三 个 复 等 位 基 因 控 制 的,i 为 隐 性 基 因,IA IB 为 显 性 基 因 决 定 ABO 血 型 的 基 因 型 有 6 种, 表 现 型 有 4 种 :A 型 B 型 AB 型 和 O 型 ; 根 据 孟 德 尔 遗 传 规 律, 即 可 计 算 出 孩 子 的 可 能 血 型 的 概 率 34 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

遗 传 性 耳 聋 和 易 感 性 耳 聋 遗 传 性 聋 病 基 因 检 测, 线 粒 体 DNA A1555G 基 因 GJB2 基 因 PDS 基 因 GJB3 基 因 等 易 感 性 耳 聋 基 因 检 测, 线 粒 体 DNA A1555G 基 因, GJB2 基 因 等 几 种 基 因 与 药 物 引 起 的 药 物 性 耳 聋 关 系 密 切 AB 的 基 因 分 析 仪 帮 您 快 速 方 便 的 完 成 检 测 35 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

氨 基 糖 甙 类 抗 生 素 导 致 耳 聋 目 前 中 国 的 每 年 新 增 耳 聋 儿 童 四 万 名, 约 有 一 半 者 是 由 于 滥 用 抗 生 素 引 起 的, 因 此 对 儿 童 作 线 粒 体 突 变 的 检 测 可 以 作 为 预 防 药 物 性 耳 聋 的 重 要 手 段, 对 于 做 过 遗 传 学 检 测 的 人, 在 今 后 无 论 遇 到 什 么 情 况, 都 可 以 提 醒 医 生, 防 止 使 用 氨 基 糖 甙 类 抗 生 素 对 于 结 核 病 这 种 普 遍 使 用 链 霉 素 治 疗 的 疾 病, 急 需 开 发 替 代 药 物 目 前 药 物 性 耳 聋 的 遗 传 机 理 已 经 非 常 清 楚, 因 此 可 以 对 新 生 儿 或 者 脐 带 血 进 行 基 因 检 测 来 确 定 是 否 对 药 物 敏 感 检 测 的 商 业 化 试 剂 盒 只 需 要 1 个 反 应 并 且 对 结 果 有 直 观 的 分 析 根 据 检 测 结 果 可 以 告 知 父 母 该 新 生 儿 的 药 物 性 耳 聋 情 况 从 而 注 意 药 物 使 用 该 试 剂 盒 每 个 检 测 成 本 是 200 元 RMB, 收 费 标 准 是 600 元 每 个 反 应 36 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AB 基 因 分 析 仪 在 诊 断 的 应 用 2 微 生 物 及 病 毒 突 变 的 检 测

分 子 诊 断 技 术 是 最 有 望 改 善 全 球 健 康 状 况 的 十 大 关 键 生 物 技 术 之 首 自 然 遗 传 学 杂 志 2002 年 9 月 27 日 发 表 一 项 调 查 报 告, 列 出 了 未 来 5 至 10 年 内 最 有 希 望 为 改 善 世 界 各 国 特 别 是 广 大 发 展 中 国 家 人 们 的 健 康 状 况 作 出 贡 献 的 十 大 关 键 生 物 技 术 其 中, 位 居 第 一 位 的 是 针 对 传 染 病 的 分 子 诊 断 技 术 报 告 指 出, 在 发 展 中 国 家, 近 一 半 的 死 亡 病 例 由 传 染 病 所 导 致 38 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

传 染 病 病 原 微 生 物 和 病 毒 的 鉴 定 HIV 的 RER/LOH 检 测 HBV 基 因 分 型 -YMDD 耐 药 性 分 析 百 日 咳 杆 菌 和 副 百 日 咳 杆 菌 的 分 型 ; 幽 门 螺 旋 杆 菌 (Helicobacter pylori); 炭 疽 热 细 菌 (Bacillus anthracis); 引 起 肺 结 核 等 疾 病 的 分 支 杆 菌 (mycobacteria); 引 起 脑 膜 炎 和 败 血 病 的 细 菌 Neisseria meningitidis (N.meningitidis); SARS 39 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

拉 米 夫 定 及 YMDD 变 异 拉 米 夫 定 是 近 年 用 于 抗 HBV 的 主 要 药 物 之 一, 它 与 乙 肝 多 聚 酶 结 合 后, 竞 争 抑 制 多 聚 酶 活 性, 使 HBV DNA 的 链 合 成 终 止, 从 而 抑 制 病 毒 复 制, 进 而 达 到 控 制 炎 症 稳 定 病 情 甚 至 阻 止 肝 纤 维 化 的 进 展 拉 米 呋 啶 是 脱 氧 嘧 啶 核 苷 类 药 物 国 内 外 研 究 表 明, 拉 米 夫 定 治 疗 期 间, 病 毒 DNA 编 码 的 DNA 聚 合 酶 基 因 序 列 发 生 了 变 异, 这 种 变 异 在 YMDD 序 列 及 其 附 近, 因 而 称 为 YMDD 变 异 YMDD 变 异 既 有 在 拉 米 夫 定 应 用 后 出 现 的, 也 有 病 人 未 用 过 拉 米 夫 定 却 出 现 了 YMDD 变 异 当 长 期 应 用 拉 米 夫 定 时, 发 生 YMDD 变 异 的 比 率 逐 年 增 加, 据 来 自 台 湾 的 文 献 报 道, 应 用 拉 米 夫 定 1 年 时 的 平 均 YMDD 变 异 率 约 为 14%,2 年 3 年 和 4 年 分 别 为 38% 49% 和 66% 当 病 毒 发 生 了 YMDD 变 异 后, 拉 米 夫 定 失 去 了 对 病 毒 的 抑 制 作 用, 病 毒 重 新 出 现 复 制, 会 伴 有 HBVDNA 水 平 反 跳 和 肝 功 能 变 化, 甚 至 导 致 病 情 恶 化 故 开 展 YMDD 变 异 的 检 测 很 有 必 要, 对 及 时 调 整 治 疗 方 案 合 理 用 药 及 提 高 疗 效 具 有 重 要 意 义 40 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

阿 德 福 韦 酯 及 其 耐 药 性 阿 德 福 韦 酯 是 腺 嘌 呤 磷 酸 酯 化 合 物 阿 德 福 韦 的 前 药 口 服 后, 在 体 内 转 化 为 阿 德 福 韦 发 挥 抗 病 毒 作 用 阿 德 福 韦 是 单 磷 酸 腺 苷 的 核 苷 酸 类 似 物, 在 体 内 通 过 细 胞 激 酶 作 用 被 磷 酸 化 为 具 有 活 性 作 用 的 二 磷 酸 阿 德 福 韦, 二 磷 酸 阿 德 福 韦 抑 制 HBV DNA 多 聚 酶 或 逆 转 录 酶 阿 德 福 韦 酯 对 HBV 野 生 株 及 对 拉 米 夫 定 耐 药 的 HBV 变 异 株 均 有 抑 制 活 性 拉 米 夫 定 耐 药 株 涉 及 HBV DNA 聚 合 酶 M552V M552I L528M L552M/M552V 位 点 的 突 变 在 体 外 实 验 中 发 现 这 些 突 变 体 对 阿 德 福 韦 仍 敏 感, 与 野 生 株 比 较, 它 们 的 抑 制 常 数 增 加 了 不 到 2.2 倍, 而 拉 米 夫 定 对 变 异 株 的 抑 制 常 数 则 增 加 了 8~25 倍 阿 德 福 韦 较 少 产 生 耐 药 性 629 例 患 者 在 治 疗 48 周 后 接 受 了 病 毒 变 异 的 检 测, 结 果 未 发 现 产 生 阿 德 福 韦 耐 药 的 病 毒 变 异 2003 年 美 国 肝 病 年 会 上,Gilead 公 司 报 道,238 例 患 者 在 治 疗 96 周 时 有 4 例 发 现 HBV P 基 因 D 区 的 rtn236t 位 点 的 变 异, 发 生 率 为 1.7%, 并 证 实 N236T 变 异 与 阿 德 福 韦 耐 药 有 关 另 一 可 能 与 阿 德 福 韦 耐 药 有 关 的 A181V 位 点 突 变,96 周 时 的 发 生 率 为 0.8% 阿 德 福 韦 酯 较 拉 米 夫 定 在 安 全 性 和 耐 药 性 方 面 有 明 显 的 优 势, 阿 德 福 韦 酯 不 良 反 应 更 少, 且 耐 药 性 更 低, 特 别 是 对 于 拉 米 夫 定 耐 药 的 乙 型 肝 炎 病 毒 株 有 显 著 的 抑 制 作 用 提 示 其 能 够 成 为 解 决 乙 型 肝 炎 病 毒 核 苷 类 似 物 耐 药 问 题 的 有 效 办 法 两 种 药 停 药 后 的 反 跳 现 象 均 存 在, 但 阿 德 福 韦 酯 较 拉 米 夫 定 比 率 为 低, 并 且 有 临 床 研 究 证 实, 两 药 联 合 使 用 抗 HBV 效 果 更 加 显 著 41 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

耐 药 突 变 检 测 方 法 直 接 测 序 法 目 前 的 测 序 试 剂 盒 能 够 检 测 乙 肝 病 毒 耐 药 的 关 键 区 段, 对 于 拉 米 呋 啶, 阿 德 福 韦 等 多 种 药 物 的 耐 药 性 进 行 一 次 性 的 检 测, 该 项 检 测 在 江 苏 省 湖 北 省 物 价 局 的 收 费 标 准 上 是 600 元, 试 剂 盒 的 成 本 在 200 元 左 右 AB 的 基 因 分 析 仪 能 帮 您 快 速 方 便 的 完 成 检 测 42 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

市 场 热 点 应 用 微 生 物 的 检 测 Microbial Sequence typing 通 过 测 序 鉴 定 微 生 物 感 染 基 于 测 序 分 型 多 重 位 点 基 因 型 幽 门 螺 旋 杆 菌 基 因 分 型 炭 疽 热 细 菌 亚 型 鉴 别 百 日 咳 杆 菌 和 副 百 日 咳 杆 菌 遗 传 多 态 利 用 DNA 测 序, 提 供 了 一 个 可 靠 的 鉴 定 微 生 物 及 其 致 病 力 的 快 速 简 单 的 方 法 与 其 他 方 法 相 比, 此 方 法 速 度 快, 几 个 小 时 出 结 果, 而 且 结 果 精 确 43 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

两 种 类 型 的 杆 菌 百 日 咳 杆 菌 属 鲍 特 杆 菌 属 (Bordetella), 长 约 1.0~1.5μm, 宽 为 0.3~0.5μm 革 兰 氏 染 色 阴 性, 两 端 着 色 较 深 有 荚 膜, 无 鞭 毛 副 百 日 咳 杆 菌 也 属 鲍 特 杆 菌 属, 其 形 态 与 百 日 咳 相 似, 亦 可 引 起 百 日 咳 症 状 百 日 咳 杆 菌 和 副 百 日 咳 杆 菌 间 无 交 叉 免 疫 因 此, 在 百 日 咳 的 诊 断 中, 区 分 不 同 类 型 的 鲍 特 杆 菌 是 十 分 重 要 的 44 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

百 日 咳 杆 菌 和 副 百 日 咳 杆 菌 遗 传 多 态 45 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

幽 门 螺 旋 杆 菌 检 测 幽 门 螺 旋 杆 菌 (Helicobacter pylori) 是 引 起 胃 炎, 胃 溃 疡 等 疾 病 的 主 要 细 菌, 并 且 它 与 胃 癌 的 形 成 相 关 因 此, 鉴 定 胃 活 体 组 织 中 的 有 机 成 份 具 有 十 分 主 要 的 临 床 意 义 对 核 糖 体 DNA 进 行 序 列 分 析 是 一 个 鉴 定 细 菌 的 有 效 方 法, 尤 其 是 对 那 些 对 生 长 环 境 要 求 苛 刻 难 以 培 养 的 有 机 体 若 要 治 愈 胃 炎, 根 除 H.pylori, 最 常 用 的 方 法 是 使 用 两 种 抗 生 素, 并 结 合 质 子 泵 抑 制 剂 对 病 人 进 行 治 疗 46 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

幽 门 螺 旋 杆 菌 的 鉴 定 -16S rrna 中 的 典 型 序 列 47 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

幽 门 螺 旋 杆 菌 的 鉴 定 -23S rrna 中 的 多 态 抗 生 素 clarithromycin 是 一 种 常 用 于 治 疗 的 抗 生 素, 一 般 有 5 10% 的 H.pylori 对 其 具 有 抗 药 性 根 据 以 往 的 报 道, 在 23S rrna 基 因 上 的 两 个 A 到 G 的 突 变 会 影 响 其 抗 药 性, 因 此 在 对 病 人 进 行 治 疗 前, 要 检 测 这 个 细 菌 的 基 因 型 野 生 型 :AAA- 药 物 敏 感 性 突 变 型 一 : AGA- 耐 药 性 突 变 型 二 : GAA- 耐 药 性 48 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

炭 疽 热 细 菌 的 遗 传 背 景 B.anthracis 的 致 病 菌 株 有 两 个 质 粒,pXO1 含 炭 疽 热 毒 素 产 生 的 基 因 ( lef, cya, pag) pxo2 编 码 包 装 和 孢 子 形 成 所 必 须 的 产 物 目 前, 通 过 DNA 杂 交 来 检 测 这 些 特 异 致 病 因 子 是 鉴 定 B.anthracis 的 主 要 手 段 但 该 方 法 即 费 时 可 靠 性 又 较 差 其 他 方 法 如 gamma phage sensitivity tests 和 carbohydrate profiles 比 DNA 杂 交 法 更 加 费 时 49 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

炭 疽 热 细 菌 亚 型 鉴 别 不 同 种 类 的 细 菌, 其 16S rrna 基 因 的 序 列 往 往 是 不 相 同 的, 因 此, 测 定 16S rrna 基 因 的 序 列 可 以 帮 助 医 生 区 分 不 同 的 细 菌 类 型 除 区 分 细 菌 类 型 外, 临 床 上 往 往 还 需 要 区 分 细 菌 的 亚 型, 例 如 : 对 内 源 RNase P (endoribonuclease P, RNase P) 基 因 的 序 列 分 析 可 以 判 断 炭 疽 热 细 菌 的 两 个 亚 型 -Bacillus anthracis 和 Bacillus cereus 50 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

炭 疽 热 细 菌 的 鉴 定 不 同 的 炭 疽 热 细 菌 亚 型 具 有 不 同 的 致 病 力 土 壤 细 菌 Bacillus anthracis (B.anthracis) 是 引 起 炭 疽 热 严 重 感 染 的 病 原 细 菌 从 接 触 病 原 体 到 症 状 最 初 出 现 的 感 染 发 展 过 程 一 般 为 1 到 6 天 如 果 确 认 受 到 B.anthracis 攻 击, 利 用 抗 生 素 或 解 毒 剂 可 以 防 治 其 感 染, 因 此 快 速 鉴 定 病 原 微 生 物 种 类 和 其 致 病 力 状 态 具 有 很 重 要 的 意 义 在 接 触 病 原 体 的 起 初 24 48 小 时 内 摄 入 抗 生 素 可 以 防 治 其 传 染 抗 体 检 测 的 诊 断 方 法 可 能 比 病 情 进 展 稍 微 滞 后, 而 在 这 个 时 期 的 防 治 可 能 是 失 败 的 51 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

炭 疽 热 细 菌 分 型 极 其 致 病 状 态 52 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

MicroSeq Microbial Identification System 16S rrna 大 亚 基 (LSU) D1/D2 gene in fungi 基 因 has conserved regions same in all microorganisms, used for PCR primer location 基 因 has divergent regions different in many microorganisms, used for identification (sequencing) 53 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AB 基 因 分 析 仪 在 诊 断 的 应 用 3 肿 瘤 个 体 化 疗 及 风 险 基 因 检 测

基 因 分 析 仪 在 肿 瘤 的 应 用 分 析 肿 瘤 个 体 化 疗 及 靶 向 治 疗 风 险 基 因 的 检 测 55 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

肿 瘤 个 体 化 疗 及 靶 向 治 疗 肺 癌 胃 肠 癌 乳 腺 癌 卵 巢 癌 化 疗 前 应 检 查 ERCC1 ERCC2 等 基 因 表 达 选 择 疗 效 好 的 药 物, 放 弃 毒 性 大 的 药 物 - 个 体 差 异 胃 肠 食 道 癌 前 病 变 检 查 基 因 突 变 后 应 用 西 乐 葆 控 制 发 展 乳 腺 癌 癌 前 病 变 BRCA1 基 因 突 变 服 用 三 苯 氧 胺 类 血 象 异 常, 真 性 红 细 胞 增 多 -JAK2 基 因 测 序 骨 髓 纤 维 化 白 血 病 早 期, 概 率 >80% 老 年 人 眼 黄 斑 变 性 -CFH 基 因 表 达 一 种 老 花 眼 ( 占 30%), 发 病 率 普 遍, 检 查 后 可 提 前 防 治 56 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

肿 瘤 个 体 化 疗 及 靶 向 治 疗 老 年 性 痴 呆 ( 阿 尔 茨 海 默 氏 病 )-APOE 4 型 发 病 率 占 中 国 人 群 17%, 概 率 >90% 心 源 性 猝 死 房 颤 布 加 综 合 症 -SCN5A CDKN2A 心 率 失 常 长 QT 综 合 症, 发 病 率 为 1/800, 检 查 后 可 提 前 防 治 脑 出 血 猝 中 敏 感 和 防 治 耐 药 基 因 -CYP3A4 阿 托 伐 及 它 汀 类 均 由 该 类 基 因 代 谢, 概 率 >60% 57 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

肿 瘤 个 体 化 疗 及 靶 向 治 疗 老 年 人 长 期 使 用 降 血 脂 降 血 压 降 糖 精 神 类 药 物, 应 检 测 药 物 相 应 的 代 谢 酶 基 因 类 型 增 效 减 毒 肺 癌 检 测 K-ras EGFR 基 因 测 序 为 易 瑞 沙 选 择 靶 点 肠 癌 及 肝 转 移 者 检 测 K-ras EGFR 拷 贝 为 爱 必 妥 选 择 靶 点 乳 腺 癌 检 测 Her2 基 因 为 赫 塞 汀 选 择 靶 点 慢 粒 白 血 病 检 测 Bcr/abl 基 因 为 格 列 卫 选 择 靶 点 胃 肠 间 质 瘤 留 检 测 C-kit/PDGFR 基 因 为 格 列 卫 选 择 靶 点 头 颈 部 癌 检 测 K-ras 为 爱 必 妥 选 择 靶 点 胆 道 卵 巢 子 宫 内 膜 脑 肿 瘤 甲 状 腺 肿 瘤 前 列 腺 膀 胱 肾 癌 等 都 可 以 检 查,VEGFR 为 索 拉 非 尼 选 择 靶 点 KRAS 与 EGFR 58 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

什 么 是 KRAS RAS 是 细 胞 内 信 号 传 导 途 径 中 的 下 游 区 的 一 种 信 号 传 导 蛋 白, 于 受 体 激 活 后 被 激 活, 可 以 影 响 细 胞 的 生 长, 存 活 和 分 化 等 功 能 RAS 基 因 与 人 类 肿 瘤 相 关, 其 中 KRAS 最 为 重 要 发 生 突 变 的 称 为 突 变 型, 未 发 生 突 变 的 称 为 野 生 型 59 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

KRAS 突 变 与 化 疗 药 物 KRAS 基 因 突 变 与 肿 瘤 化 疗 药 物 疗 效 之 间 的 关 系 是 目 前 国 际 上 的 一 个 热 门 话 题 在 美 国 FDA 进 行 新 药 批 准 ( 特 别 是 基 因 靶 向 药 物 ) 时 明 确 要 求 提 供 该 药 物 的 疗 效 和 毒 性 的 个 体 化 差 异 的 资 料 如 果 这 样 的 差 异 能 够 进 行 遗 传 学 检 测 的,FDA 会 要 求 在 药 品 的 包 装 上 注 明 推 荐 进 行 何 种 遗 传 学 检 测 然 后 用 药 60 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

EGFR 背 景 近 年 来, 分 子 靶 向 药 物 治 疗 对 肺 癌 显 示 出 其 不 俗 的 疗 效, 但 对 EGFR 突 变 和 (CA) n 重 复 的 靶 向 药 物 确 切 疗 效 作 用 有 不 同 的 结 论 EGFR 在 许 多 肿 瘤 中 过 表 达 和 ( 或 ) 发 生 突 变, 通 过 信 号 转 导 控 制 肿 瘤 生 长, 并 与 新 生 血 管 生 成 肿 瘤 的 侵 袭 和 转 移 等 密 切 相 关, 这 些 特 点 使 其 成 为 一 个 有 潜 力 的 肿 瘤 治 疗 靶 基 因 61 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

EGFR 和 易 瑞 沙 CA 重 复 多 态 性 种 族 间 存 在 差 异, 亚 洲 人 多 数 具 有 CA 长 重 复, 来 自 中 国 台 湾 韩 国 新 加 坡 的 已 发 表 的 资 料 均 表 明, 易 瑞 沙 治 疗 东 方 人 群 肺 癌 的 整 体 生 存 和 缓 解 率 要 明 显 优 于 西 方 人 群, 因 而 有 人 认 为 CA 长 重 复 与 易 瑞 沙 敏 感 性 增 高 有 关 有 研 究 发 现, 在 非 小 细 胞 肺 癌 中, EGFR 基 因 突 变 和 CA 长 重 复 在 亚 洲 人 中 更 常 见, 但 CA 短 重 复 病 人 的 EGFR TKI 治 疗 反 应 性 更 好,EGFR 第 一 内 含 子 CA 短 重 复 与 易 瑞 沙 良 好 反 应 有 关, 是 独 立 于 EGFR 基 因 突 变 的 因 素 62 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

EGFR 突 变 检 测 试 剂 盒 检 测 材 料 和 对 象 各 种 途 径 获 取 的 非 小 细 胞 癌 的 体 细 胞 组 织 肺 癌 的 石 蜡 包 埋 组 织 的 切 片 肺 癌 晚 期 转 移 灶 组 织 和 血 液 中 的 癌 细 胞 肺 癌 胸 水 和 穿 刺 细 胞 或 痰 细 胞 DNA 测 序 是 检 测 EGFR 突 变 最 常 用 的 方 法 目 前 我 们 提 供 的 商 业 化 试 剂 盒 能 够 对 EGFR 东 方 人 突 变 的 18 19 20 21 四 个 外 显 子 同 时 进 行 测 序 测 序 结 果 有 简 单 的 分 析 方 法 该 临 床 项 目 在 江 苏 省 中 医 院, 浙 江 省 温 州 市 肿 瘤 医 院 都 开 展 的 非 常 好 它 对 于 iressa 药 物 使 用 的 指 导 作 用 能 够 挽 救 大 量 肺 癌 患 者, 也 避 免 了 无 效 患 者 花 很 多 钱 在 iressa 上 该 试 剂 盒 4 个 外 显 子 测 序 检 测 的 成 本 约 在 500 元 左 右, 检 测 时 间 是 12 个 小 时 63 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

Kras 突 变 检 测 试 剂 盒 Kras 基 因 的 检 测 需 要 用 组 织 或 者 石 蜡 标 本 进 行 DNA 的 抽 提, 目 前 为 临 床 提 供 的 Kras 突 变 检 测 试 剂 盒 能 够 对 Kras 的 第 一 外 显 子 进 行 单 独 测 序, 或 者 对 它 的 4 个 外 显 子 进 行 分 别 测 序 测 序 结 果 能 够 提 供 详 细 的 突 变 信 息, 并 且 根 据 这 些 信 息 判 断 化 疗 药 物 的 疗 效, 因 此 在 临 床 上 非 常 重 要 目 前, 浙 江 省 肿 瘤 医 院, 福 建 省 肿 瘤 医 院, 江 苏 省 中 医 院 都 开 展 了 这 个 项 目 的 检 测 该 项 目 测 一 个 外 显 子 的 试 剂 盒 成 本 约 是 200 元 RMB,4 个 外 显 子 同 时 测 序 的 成 本 是 500 元 RMB 左 右 收 费 标 准 江 浙 沪 是 每 个 测 序 600RMB 64 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

UGT1A1 与 CPT 11 依 立 替 康 (Irinotecan,CPT 11) 伊 立 替 康, 也 叫 开 普 拓, 它 对 大 多 数 的 癌 症 都 具 有 有 效 的 抗 癌 活 性, 它 是 最 普 遍 的 化 疗 处 方 药 物 之 一 特 别 是 对 提 高 结 直 肠 癌 根 治 术 后 的 长 期 生 存 率 具 有 重 要 意 义 然 而 20% 患 者, 采 用 以 伊 利 替 康 为 基 础 的 联 合 化 疗 方 案, 能 导 致 严 重 的 3 4 级 中 性 粒 细 胞 减 少 及 腹 泻, 毒 性 反 应 是 少 数 患 者 不 能 耐 受 此 药 治 疗 的 关 键 CPT 11 是 一 无 活 性 的 前 药, 需 经 羟 酸 酯 酶 的 活 化 转 变 为 其 活 性 代 谢 产 物 SN 38 而 发 挥 效 用 活 性 SN 38 的 主 要 清 除 途 径 是 通 过 肝 脏 UGT1A1 的 糖 基 化 作 用 转 变 为 无 活 性 的 SN 38G, 后 者 通 过 尿 液 胆 汁 排 出 研 究 发 现 UGT1A1 的 表 达 是 高 度 可 变 的, 由 此 引 起 不 同 患 者 间 SN 38 糖 化 反 应 的 速 率 相 差 最 高 达 50 倍 65 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

UGT1A1 参 与 依 立 替 康 的 代 谢 UGT1A1 基 因 启 动 子 区 具 有 一 定 多 态 性, 其 不 典 型 TATA 盒 区 域 中 包 含 了 5 8 个 TA 重 复 序 列 其 中 以 含 6 个 TA 重 复 序 列 的 基 因 型 最 为 常 见 并 观 察 到 随 着 TA 重 复 序 列 数 目 的 增 加,UGT1A1 表 达 下 降 UGT1A1 的 变 异 型 UGT1A1*28 启 动 子 不 典 型 TATA 盒 区 域 包 含 7 个 TA 重 复 序 列, 该 变 异 型 与 UGT1A1 表 达 下 降 有 关, 并 导 致 SN 38G 水 平 降 低 在 CPT 11 治 疗 中, UGT1A1*28 等 位 基 因 的 存 在 导 致 活 性 代 谢 产 物 SN 38 的 显 著 增 加, 从 而 发 生 腹 泻 / 中 性 粒 细 胞 减 少 的 几 率 显 著 增 加 提 示 UGT1A1 基 因 型 的 检 测 可 用 于 临 床 预 测 与 CPT 11 相 关 的 严 重 毒 副 作 用 的 发 生 美 国 食 品 和 药 品 监 督 管 理 局 要 求 CPT 11 的 包 装 上 注 明 该 药 容 易 使 UGT1A1*28 基 因 纯 合 子 患 者 产 生 neutropenia, 并 且 叮 嘱 临 床 医 师 慎 重 考 虑 给 药 剂 量 与 国 外 研 究 相 比, 中 国 人 与 白 种 人 结 直 肠 癌 患 者 UGT1A 家 族 各 个 基 因 SNP 分 布 均 存 在 显 著 性 差 异, 中 国 人 UGT1A1*28 位 点 的 野 生 型 基 因 型 (TA6/6) 的 分 布 显 著 偏 高 (72.9% 对 45.2%,P=0.005) 而 UGT1A1*6 (211G>A, G71R) 这 一 SNP 在 白 种 人 中 并 未 发 现 这 些 在 中 国 人 群 中 分 布 较 多 的 基 因 型, 对 应 的 UGT1A 活 性 均 较 高, 对 SN38 的 失 活 代 谢 作 用 较 强 66 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

UGT1A1 基 因 型 检 测 试 剂 盒 美 国 FDA 建 议 : 依 利 替 康 药 品 说 明 书 标 示 适 用 基 因 型 中 国 国 家 卫 生 部 在 新 的 临 床 检 验 项 目 目 录 中 也 增 列 了 化 学 药 品 个 体 化 用 药 基 因 检 测 项 目 UGT1A1 基 因 型 检 测 对 于 临 床 正 确 用 药, 减 少 毒 副 作 用, 提 高 疗 效 具 有 明 确 的 临 床 意 义 目 前 的 我 们 提 供 的 现 成 试 剂 盒 能 够 进 行 UGT1A1 的 标 准 化 分 析 和 实 验, 结 果 直 接 利 用 测 序 仪 的 软 件 可 以 进 行 直 接 分 析, 目 前 该 项 目 江 苏 省 的 收 费 标 准 是 600 元, 试 剂 盒 成 本 大 约 是 240 元 67 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

风 险 基 因 检 测 乳 腺 癌 卵 巢 癌 子 宫 内 膜 癌 -BRCA1 基 因 基 因 突 变 者 55 岁 以 上 风 险 增 加 3 倍, 风 险 随 年 龄 增 长 多 系 统 肿 瘤 ( 消 化 / 泌 尿 / 血 液 ) 癌 变 -P53 基 因 该 基 因 突 变 ( 分 子 警 察 罢 工 ), 发 生 严 重 的 多 器 官 恶 性 肿 瘤 68 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

风 险 基 因 检 测 消 化 道 恶 性 肿 瘤 - 多 基 因 突 变 或 不 稳 定 胃 癌 -CDH1 基 因 突 变 胃 肠 癌 -MSH2 MSH1 基 因 突 变 家 族 性 肠 癌 -APC 基 因 突 变 DNA 微 卫 星 不 稳 定 肠 多 发 性 息 肉 腺 瘤 -APC 基 因 突 变 食 道 癌 -P53 CDH1 K-ras 基 因 突 变 泌 尿 系 统 恶 性 肿 瘤 脱 落 细 胞 膀 胱 癌 肾 盂 癌 输 尿 管 癌 - 尿 路 DNA 不 稳 定 69 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

风 险 基 因 检 测 淋 巴 造 血 系 肿 瘤 - 多 种 基 因 突 变 或 表 达 异 常 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 -Bcr/abl 基 因 融 合 慢 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 -Bcr/abl(190) 基 因 融 合 多 发 性 骨 髓 瘤 浆 细 胞 白 血 病 - 染 色 体 五 联 探 针 真 性 红 细 胞 增 多 骨 髓 纤 维 化 血 小 板 增 多 -JAK2 基 因 突 变 70 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

例 : 乳 腺 癌 风 险 基 因 检 测 乳 腺 癌 是 遗 传 倾 向 最 显 著 的 癌 症 之 一,5%-10% 的 乳 腺 癌 来 自 家 族 遗 传 乳 腺 癌 易 感 基 因 Brca1 Brca2 突 变 与 乳 腺 癌 高 度 相 关, 并 具 有 显 性 遗 传 特 征, 在 家 族 性 乳 腺 癌 症 候 群 中, 一 旦 此 基 因 产 生 突 变, 其 家 族 子 代 中 所 有 成 员 皆 有 50% 的 机 会 带 有 此 突 变 基 因 家 族 性 乳 腺 癌 患 者 罹 患 乳 腺 癌 之 平 均 年 龄 比 一 般 妇 女 提 早 约 十 年, 机 率 高 达 普 通 女 性 的 九 倍 71 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

BRCA 突 变 导 致 的 随 年 龄 增 长 的 患 乳 腺 癌 累 计 风 险 : 年 龄 ( 岁 )30 40 50 60 70 BRCA1 3.2% 19.1% 50.8% 54.2% 85% BRCA2 4.6% 12% 46% 61% 86% 72 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

乳 腺 癌 罹 患 风 险 是 可 以 预 测 的 研 究 表 明,Brca1/Brca2 基 因 突 变 是 乳 腺 癌 发 病 风 险 增 高 的 最 重 要 的 遗 传 因 素 一 个 含 有 Brca1 遗 传 突 变 基 因 的 人, 一 生 中 发 生 乳 腺 癌 的 机 会 大 于 80%, 同 时 发 病 的 年 龄 比 较 早, 往 往 在 50 岁 以 前, 并 同 时 伴 有 40%- 60% 患 卵 巢 癌 的 风 险 Brca2 基 因 突 变 者 患 乳 腺 癌 的 风 险 也 高 达 45%, 而 brca1 和 brca2 二 者 共 同 突 变 的 携 带 者 患 乳 腺 癌 的 机 率 近 乎 100% 而 且 brca1 基 因 突 变 的 妇 女 有 40%-60% 的 风 险 患 卵 巢 癌, 带 有 brca2 基 因 突 变 的 妇 女 则 有 10%-20% 的 机 率 患 卵 巢 癌 在 中 国 乳 腺 癌 死 亡 率 逐 年 提 高 并 趋 于 年 轻 化, 主 要 原 因 是 发 现 时 已 经 是 癌 症 中 晚 期, 但 是 如 果 在 癌 症 早 期 发 现 治 疗 后, 治 愈 率 可 高 达 100% 因 此, 提 前 通 过 基 因 检 测 筛 查 出 高 风 险 人 群, 并 对 这 一 人 群 进 行 有 针 对 性 的 健 康 管 理, 就 可 以 做 到 真 正 的 早 发 现, 早 治 疗 73 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

国 外 已 经 常 规 开 展 74 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

简 便 易 行 的 检 测 方 法 腔 咽 拭 子 (10 分 钟 ) 基 因 组 DNA 提 取 (10 分 钟 ) 样 品 准 备 (4 6 小 时 ) 3130xl 遗 传 分 析 仪 器 (1 小 时 ) 乳 腺 癌 高 危 人 群 筛 查, 及 早 健 康 管 理 75 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AB 基 因 分 析 仪 在 诊 断 的 应 用 4 其 它 应 用 热 点

市 场 热 点 应 用 测 序 分 型 的 骨 髓 移 植 HLA 分 型 ( 测 序 基 础 ) Several large scale studies have demonstrated that more precise HLA matching between donor and patient significantly: Improves overall transplant survival Reduces the incidence and severity of both acute and chronic GVHD Improves rates of engraftment Critical HLA Loci: A, B, DR, C Celera/Abbott (Atria) AlleleSEQR reagents 77 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

SBT The Gold Standard 78 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

患 者 遗 传 体 质 鉴 定 -Interleukin 1 beta 白 介 素 1 ß 受 体 的 多 态 性 分 析 位 于 511, 31 和 +3954 的 Interleukin 1 beta (Il 1ß) 的 多 态 性 被 认 为 是 增 强 Il 1ß 的 表 达, 并 提 高 了 由 H.pylori 而 引 起 胃 癌 的 危 险 79 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

患 者 的 基 因 型 80 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

基 因 分 型 指 导 华 法 林 治 疗 剂 量 2007ACC 年 会 上,Intermountain Healthcare and University of Utah 的 研 究 人 员 公 布 了 一 项 试 验 结 果, 首 次 将 基 因 检 测 用 于 日 常 临 床 实 践, 指 导 华 法 林 的 最 佳 使 用 剂 量 因 此, 美 国 FDA 指 南 建 议 进 行 基 因 分 型 以 指 导 华 法 林 起 始 和 维 持 治 疗 的 最 佳 剂 量 81 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

基 因 分 型 指 导 华 法 林 治 疗 剂 量 的 必 要 性 FDA 估 计, 美 国 每 年 有 200 万 患 者 为 预 防 血 栓 心 脏 病 和 卒 中 而 接 受 华 法 林 抗 凝 治 疗 如 果 服 用 过 量 则 可 出 现 致 命 性 出 血, 但 剂 量 过 低 则 有 血 栓 风 险, 因 此 选 择 适 宜 的 起 始 剂 量 十 分 重 要 近 期 研 究 发 现 造 成 患 者 对 华 法 林 治 疗 反 应 不 同 的 部 分 原 因 是 由 于 某 些 基 因 的 变 异 82 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

CYP2C9 和 VKORC1 基 因 变 异 与 华 法 林 个 体 差 异 有 关 研 究 发 现,CYP2C9 和 VKORC1 基 因 变 异 导 致 35-50% 的 患 者 对 华 法 林 反 应 存 在 个 体 差 异, 他 们 需 要 更 低 的 起 始 剂 量 这 两 种 基 因 中, 一 种 基 因 参 与 药 物 的 代 谢 反 应, 其 变 异 可 导 致 药 物 活 性 成 分 在 血 中 停 留 时 间 延 长 另 一 种 基 因 则 作 用 于 华 法 林 的 靶 点, 影 响 患 者 对 药 物 的 敏 感 性 这 两 种 基 因 的 变 异 从 而 主 要 影 响 华 法 林 的 初 始 剂 量 选 择 以 及 患 者 的 出 血 易 患 性 83 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

VKORC1 和 CYP2C9 变 异 对 华 发 林 剂 量 的 影 响 84 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

国 际 华 法 林 遗 传 药 理 学 协 会 搜 集 了 5700 例 使 用 华 法 林 治 疗 的 病 人, 其 中 5052 例 国 际 标 准 化 比 值 在 2 到 3 之 间 的 用 于 本 研 究 的 数 据 分 析 遗 传 药 理 法 则 临 床 法 则 固 定 剂 量 随 机 化 4/5 的 病 人 用 于 建 模 1/5 病 人 用 于 验 证 85 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

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根 据 典 型 的 临 床 和 人 口 统 计 特 征 基 因 型 种 族 有 无 使 用 胺 碘 酮 而 预 测 的 剂 量 的 对 比 87 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

分 别 使 用 遗 传 药 理 法 则 与 临 床 法 则 以 及 固 定 剂 量 方 法 得 出 的 剂 量 估 计 值 在 20% 实 际 剂 量 的 病 人 百 分 数 88 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

简 便 易 行 的 检 测 方 法 静 脉 采 血 1 2ml (10 分 钟 ) 基 因 组 DNA 提 取 (10 分 钟 ) 样 品 准 备 (6 8 小 时 ) 3130xl 遗 传 分 析 仪 器 (1 小 时 ) 89 2008 2008 Applied Biosystems Clinical Applications

AB 基 因 分 析 仪 在 诊 断 的 应 用 期 待 您 的 参 与 带 来 新 的 发 现 谢 谢!