第 卷 第 期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 -- 年 月!"#$%&!$'%$#"" '! 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 的 相 互 作 用 研 究 刘 家 琴 田 建 袅 边 清 泉 胡 之 德 绵 阳 师 范 学 院 化 学 与 化 学 工 程 系 四 川 绵 阳 兰 州 大 学 化 学 化 工 学 院 甘 肃 兰 州 - 广 西 师 范 大 学 化 学 化 工 学 院 广 西 桂 林 摘 要 以 荧 光 猝 灭 方 法 研 究 了 模 拟 生 理 条 件 下 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 >' 的 相 互 作 用 研 究 发 现 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 有 强 的 结 合 结 合 位 置 与 色 氨 酸 残 基 间 的 距 离 + 为,% 以 已 知 结 合 位 置 的 标 记 药 物 为 探 针 确 定 了 马 兜 铃 酸 与 >' 的 结 合 位 置 为 亚 结 构 域 ' 利 用 和 09* 技 术 考 察 了 马 兜 铃 酸 对 牛 血 清 白 蛋 白 二 级 结 构 的 影 响 结 果 表 明 马 兜 铃 酸 与 >' 的 键 合 使 >' 中 螺 旋 结 构 含 量 从 = 降 到 -= 主 题 词 马 兜 铃 酸 牛 血 清 白 蛋 白 相 互 作 用 中 图 分 类 号 (- 文 献 标 识 码 ' 文 章 编 号 - 引 言 马 兜 铃 酸 '!"1$& 又 名 木 通 甲 素 是 马 兜 铃 酸 科 马 兜 铃 属 植 物 的 果 实 和 根 中 的 一 种 有 效 成 分 在 临 床 上 有 抗 菌 抗 癌 作 用 但 许 多 研 究 也 表 明 它 对 肾 有 害 是 一 种 致 癌 物 含 有 该 物 质 的 药 物 对 人 体 会 产 生 严 重 的 负 面 影 响 比 利 时 加 拿 大 英 国 澳 大 利 亚 德 国 等 国 家 已 经 禁 止 使 用 其 测 定 方 法 很 多 也 曾 有 文 献 报 道 马 兜 铃 酸 与 钙 调 素 相 互 作 用 的 情 况 但 未 见 研 究 与 牛 血 清 白 蛋 白 的 相 互 作 用 血 清 白 蛋 白 "!5$45%' 是 血 浆 中 含 量 最 丰 富 的 载 体 蛋 白 是 目 前 研 究 最 为 广 泛 的 一 种 蛋 白 质 它 能 与 许 多 内 源 及 外 源 性 化 合 物 结 合 起 到 存 储 和 转 运 作 用 对 血 清 白 蛋 白 与 药 物 分 子 相 互 作 用 的 研 究 有 助 于 了 解 药 物 在 体 内 的 运 输 以 及 在 体 内 的 作 用 机 制 对 全 面 阐 明 小 分 子 化 合 物 与 蛋 白 质 的 结 合 规 律 和 机 理 有 重 要 意 义 同 时 也 有 利 于 了 解 中 药 的 药 用 机 理 对 于 提 高 中 药 用 药 的 科 学 性 合 理 性 认 识 中 药 配 伍 禁 忌 等 都 有 积 极 作 用 荧 光 光 谱 是 研 究 药 物 与 蛋 白 质 相 互 作 用 的 重 要 手 段 而 傅 里 叶 红 外 光 谱 09* 技 术 和 圆 二 色 性 光 谱 技 术 是 测 定 溶 液 中 蛋 白 质 二 级 结 构 的 强 有 力 手 段 与 荧 光 光 谱 和 紫 外 光 谱 等 方 法 不 同 的 是 它 们 可 以 从 蛋 白 质 二 级 结 构 变 化 的 层 次 来 讨 论 药 物 与 蛋 白 质 的 作 用 情 况 目 前 利 用 荧 光 09* 技 术 研 究 蛋 白 质 与 药 物 的 相 互 作 用 已 有 许 多 报 道 但 研 究 中 药 活 性 组 分 与 血 清 白 蛋 白 作 用 的 报 道 还 较 少 本 文 用 多 种 分 析 技 术 研 究 了 模 拟 生 理 条 件 - 离 子 强 度 下 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 的 相 互 作 用 利 用 马 兜 铃 酸 对 牛 血 清 白 蛋 白 内 在 荧 光 的 猝 灭 根 据 修 正 的!%! 方 程 分 别 求 出 了 反 应 的 猝 灭 常 数 和 结 合 常 数 由 J"! 能 量 转 移 理 论 确 定 了 马 兜 铃 酸 在 牛 血 清 白 蛋 白 中 的 结 合 位 置 与 色 氨 酸 残 基 间 的 距 离 并 根 据 热 力 学 参 数 确 定 了 它 们 之 间 的 主 要 作 用 力 类 型 以 1%#45$%56%$ $& 和 8% 为 标 记 物 讨 论 了 马 兜 铃 酸 在 牛 血 清 白 蛋 白 上 的 键 合 位 置 同 时 结 合 傅 里 叶 红 外 光 谱 和 圆 二 色 性 光 谱 技 术 讨 论 了 马 兜 铃 酸 对 血 清 白 蛋 白 二 级 结 构 的 影 响 实 验 部 分 仪 器 和 试 剂 * 型 荧 光 光 度 计 日 本 岛 津 ), 型 荧 光 分 光 光 度 计 $1.$" 自 动 记 录 光 谱 仪 日 本 5"- 傅 里 叶 变 换 红 外 光 谱 仪 美 国 公 司 衰 减 全 反 射 附 件 '0*0+ 检 测 器 ()9 数 据 处 理 软 件 05 型 分 光 光 度 计 北 京 牛 血 清 白 蛋 白 >' 购 自 上 海 丽 珠 东 风 生 化 技 术 公 司 以 -0!" 缓 冲 溶 液 配 制 其 储 备 液 @ 保 存 于 暗 处 马 兜 铃 酸 购 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 储 备 液 用 无 水 收 稿 日 期 修 订 日 期,, 基 金 项 目 四 川 省 教 育 厅 重 点 项 目 ', 绵 阳 师 范 学 院 博 士 基 金 启 动 项 目 作 者 简 介 刘 家 琴 女 - 年 生 绵 阳 师 范 学 院 化 学 与 化 工 系 副 教 授 博 士
- 光 谱 学 与 光 谱 分 析 第 卷 乙 醇 配 置 1%#45$%=56%$$&-= 和 8%= 均 为 优 级 纯 +* 购 自 中 国 百 灵 威 有 限 公 司 储 备 液 用 甲 醇 配 制 实 验 用 水 为 二 次 蒸 馏 水 其 他 试 剂 均 为 分 析 纯 实 验 方 法 荧 光 光 谱 测 定 依 次 移 取 一 定 量 的 $ 溶 液 牛 血 清 白 蛋 白 溶 液 和 马 兜 铃 酸 溶 液 于 3 比 色 管 中 以 0!" 缓 冲 溶 液 定 容 以,% 为 激 发 波 长 扫 描 % 范 围 内 的 荧 光 光 谱 石 英 池 狭 缝 宽 % 荧 光 滴 定 实 验 移 取 一 定 量 的 $ 溶 液 和 >' 储 备 液 适 量 的 0!" 缓 冲 溶 液 于 石 英 池 中 三 者 体 积 总 和 为 3 以 微 量 注 射 器 逐 次 加 入 不 同 体 积 的 马 兜 铃 酸 储 备 液 累 加 体 积 3 反 应 时 间 为 % 以, % 为 激 发 波 长 发 射 波 长 测 定 不 同 温 度 下 体 系 的 荧 光 强 度 所 得 实 验 数 据 用 于 结 合 常 数 等 的 计 算 圆 二 色 性 光 谱 测 定 依 次 移 取 一 定 量 的 $ 溶 液 牛 血 清 白 蛋 白 溶 液 和 马 兜 铃 酸 溶 液 于 3 比 色 管 中 以 0!" 缓 冲 溶 液 定 容 使 用 石 英 池 于 室 温 下 测 定 % 波 长 范 围 内 >' 与 马 兜 铃 酸 作 用 前 后 的 光 谱 红 外 光 谱 的 采 集 及 谱 图 处 理 分 辨 率 为 2 取 样 次 数 为 同 样 条 件 下 采 集 缓 冲 溶 液 的 光 谱 然 后 从 蛋 白 质 样 品 溶 液 光 谱 中 减 去 缓 冲 溶 液 的 吸 收 就 得 到 蛋 白 质 溶 液 的 红 外 光 谱 图 以 谱 图 在, 2 呈 一 条 平 滑 直 线 为 差 减 终 点 判 据 紫 外 吸 收 光 谱 测 定 在 3 比 色 管 中 依 次 加 入 一 定 量 的 $ 溶 液 牛 血 清 白 蛋 白 溶 液 和 马 兜 铃 酸 溶 液 以 0!" 缓 冲 溶 液 定 容 在 05 型 分 光 光 度 计 上 扫 描 得 到 紫 外 吸 收 光 谱 石 英 池 狭 缝 宽 % 光 被 猝 灭 的 分 数 $ 为!%! 猝 灭 常 数 8 为 猝 灭 剂 的 浓 度 以 对 8 作 图 可 得 一 直 线 见 图 由 直 线 的 斜 率 和 截 距 可 计 算 & 和 $ 值 结 果 列 于 表 由 表 中 结 果 看 出 猝 灭 常 数 随 温 度 的 升 高 而 减 小 说 明 马 兜 铃 酸 猝 灭 >' 内 在 荧 光 的 过 程 是 静 态 猝 灭 过 程 此 时 猝 灭 常 数 $ 即 是 该 反 应 的 结 合 常 数 我 们 还 用 其 他 方 法 进 行 了 计 算 得 到 的 $ 值 与!! 方 法 相 一 致 且 在 以 上 说 明 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 有 较 强 的 结 合 同 时 也 得 到 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 相 互 作 用 只 有 类 键 合 位 的 结 论 *%!$%#"$'$!!#! $%'&$"!!!"#$%6?,%- 2 3 2 >'% " 2 3 2 >'% 1!"%6-2 - 2 2 3 2 $!"1$&-- 2 3 2 $!"1$& 结 果 与 讨 论 荧 光 猝 灭 机 理 结 合 常 数 与 结 合 位 点 数 图 为 >' 马 兜 铃 酸 及 不 同 浓 度 的 马 兜 铃 酸 与 >' 混 合 后 的 荧 光 光 谱 >' 的 内 源 荧 光 主 要 来 自 于 分 子 中 的 色 氨 酸 残 基 和 酪 氨 酸 残 基 分 子 中 含 有 处 在 和 位 的 两 个 色 氨 酸 残 基 分 别 位 于 $% 和 $% 中 从 图 可 以 看 出 在,% 激 发 下 >' 的 最 大 发 射 在 % 此 时 的 荧 光 主 要 来 自 色 氨 酸 残 基 而 马 兜 铃 酸 在 上 述 条 件 下 几 乎 没 有 荧 光 固 定 >' 的 浓 度 其 荧 光 强 度 随 马 兜 铃 酸 浓 度 的 增 大 而 有 规 律 地 降 低 表 明 马 兜 铃 酸 与 >' 发 生 了 相 互 作 用 猝 灭 了 >' 内 色 氨 酸 残 基 的 荧 光 按 前 面 描 述 的 荧 光 滴 定 实 验 方 法 测 定 不 同 温 度 下 体 系 的 荧 光 强 度 滴 定 过 程 中 最 后 加 入 马 兜 铃 酸 的 累 加 体 积 3 远 小 于 3 所 以 可 忽 略 稀 释 效 应 对 >' 荧 光 强 度 的 影 响 根 据 修 正 的!! 方 程 可 用 于 计 算 反 应 的 结 合 常 数 &$8 & 与 分 别 代 表 有 和 无 猝 灭 剂 时 荧 光 体 的 荧 光 强 度 & 为 荧 "5$'"'$$%#"$'$!!#!6?,% ->'? 2 3 2 $!"1$&? 2 2 2 3 2 $ ":5$!"!"!$%8" 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 的 作 用 力 类 型 通 常 情 况 下 药 物 小 分 子 和 蛋 白 质 等 生 物 大 分 子 发 生 相 互 作 用 主 要 借 助 于 疏 水 作 用 力 静 电 作 用 力 氢 键 和 $%&! /$$" 力 反 应 的 热 力 学 参 数 是 衡 量 作 用 力 类 型 的 重 要 指 标 将 表 中 不 同 温 度 下 的 结 合 常 数 代 入 $% 6 方 程 %$0
第 期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 -, 2,,, 2 2,- -- 式 中 $0 为 不 同 温 度 的 结 合 常 数 为 气 体 常 数 以 %$0 对 作 图 可 得 一 直 线 由 直 线 的 斜 率 和 截 距 可 计 算 焓 变 和 熵 变 的 值 进 而 根 据 方 程 可 求 得 反 应 的 自 由 能 值 结 果 列 于 表 可 以 看 出 马 兜 铃 酸 与 >' 的 结 合 反 应 是 由 焓 驱 动 的 自 发 过 程 根 据 C1# - 0$"16, 和 *"" 的 观 点 & 可 能 是 疏 水 和 静 电 作 用 力 或 较 小 & 为 静 电 作 用 力 时 静 电 作 用 为 主 要 作 用 力 因 此 可 以 推 测 马 兜 铃 酸 与 >' 的 结 合 以 静 电 作 用 为 主 疏 水 作 用 力 亦 存 在 同 时 在 研 究 离 子 强 度 对 体 系 结 合 常 数 的 影 响 时 发 现 随 着 体 系 离 子 强 度 增 大 原 有 体 系 的 结 合 常 数 减 小 进 一 步 表 明 马 兜 铃 酸 与 >' 的 作 用 依 赖 于 静 电 作 用 力 以 上 的 分 析 表 明 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 的 结 合 不 可 能 只 依 赖 于 单 一 的 分 子 间 作 用 力 而 是 疏 水 和 静 电 力 共 同 作 用 的 结 果 0!$5! #,'6#"#" $%#"$'$!!#!6!%!1& $ 3 2 &. 2. 2 2. 2 2 马 兜 铃 酸 在 血 清 白 蛋 白 上 的 结 合 位 置 马 兜 铃 酸 在 >' 上 的 结 合 位 置 与 色 氨 酸 残 基 间 的 距 离 图 为 牛 血 清 白 蛋 白 的 荧 光 光 谱 与 马 兜 铃 酸 的 紫 外 吸 收 光 谱 间 的 重 叠 图 根 据 J"! 能 量 转 移 理 论 当 两 种 化 合 物 分 子 满 足 以 下 条 件 时 将 发 生 非 辐 射 能 量 转 移 供 能 体 发 射 荧 光 供 能 体 的 荧 光 发 射 光 谱 与 受 能 体 的 吸 收 光 谱 有 足 够 的 重 叠 供 能 体 与 受 能 体 足 够 接 近 最 大 距 离 不 超 过 -% 由 图 可 见 >' 有 较 大 的 荧 光 并 且 与 马 兜 铃 酸 的 吸 收 光 谱 有 部 分 重 叠 当 马 兜 铃 酸 在 >' 上 的 结 合 位 置 与 色 氨 酸 残 基 间 的 距 离 小 于 -% 时 色 氨 酸 就 会 将 能 量 传 递 给 马 兜 铃 酸 从 而 使 >' 的 荧 光 值 减 少 距 离 越 小 能 量 转 移 效 率 越 高 >' 的 荧 光 被 猝 灭 得 越 严 重 因 此 利 用 J"! 原 理 可 以 计 算 出 马 兜 铃 酸 在 >' 上 的 结 合 位 置 距 色 氨 酸 残 基 的 距 离 + $"'#$%%'&$"!!!"#$%6 ##,$"$!"#$%#"$'$!!#!?,% ->'? 2 3 2 $!"1$&?- 2 3 2 5!"%"!$6>' %'4"!%"!$6$!"1$& 根 据 J"! 原 理 能 量 转 移 效 率 ' 与 距 离 + 之 间 有 如 下 关 系 式 ' + ' 为 能 量 转 移 效 率 为 = 时 的 临 界 距 离,,* $ 6 式 中 $ 为 偶 极 空 间 取 向 因 子 是 介 质 折 射 指 数 为 供 能 体 的 荧 光 量 子 产 率 6 为 供 能 体 的 荧 光 光 谱 和 受 能 体 的 吸 收 光 谱 间 的 重 叠 积 分 6 - 为 供 能 体 在 波 长 处 的 荧 光 强 度 是 受 能 体 在 波 长 处 的 摩 尔 吸 光 系 数 为 计 算 时 分 割 的 波 长 跨 度 根 据 - 式 将 光 谱 重 叠 部 分 分 割 成 极 小 的 矩 形 面 积 求 和 求 得 光 谱 的 重 叠 积 分 6 为 2 3 2 % 范 围 内 在 上 述 实 验 条 件 下 空 间 取 向 因 子 $ 取 给 体 和 受 体 的 各 向 同 性 随 机 分 布 的 平 均 值 取 水 和 有 机 物 折 射 指 数 平 均 值 取 室 温 下 色 氨 酸 的 量 子 产 率 根 据 上 述 公 式 求 出 马 兜 铃 酸 在 >' 上 的 结 合 位 置 距 色 氨 酸 残 基 的 距 离 + 为,%>' 分 子 中 含 有 处 在 和 位 的 两 个 色 氨 酸 残 基 计 算 所 得 的 +?,% 是 结 合 位 置 与 两 个 色 氨 酸 残 基 间 的 平 均 距 离 所 得 结 果 显 示 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 之 间 存 在 能 量 转 移 马 兜 铃 酸 在 牛 血 清 白 蛋 白 上 结 合 位 置 的 确 定 血 清 白 蛋 白 的 三 维 晶 体 结 构 显 示 其 空 间 结 构 由 三 个 结 构 域 $%$%$% 组 成 每 个 结 构 域 又 含 有 '> 两 个 亚 结 构 域 以 槽 口 相 对 的 方 式 形 成 圆 筒 状 结 构 几 乎 所 有 疏 水 性 氨 基 酸 残 基 都 包 埋 在 圆 筒 内 部 构 成 疏 水 腔 序 列 分 析 表 明 >' 分 子 中 含 有 处 在 和 位 的 两 个 色 氨 酸 残 基 分 别 位 于 $% 和 $% 中 大 多 数 药 物 在 血 清 白 蛋 白 上 的 结 合 部 位 为 亚 结 构 域 ' 和 ' 即 和 ( 和 EJ1 等 的 研 究 发 现 药 物 在 血 清 白 蛋 白 上 还 有 第 三 种 键 合 位 即
-, 光 谱 学 与 光 谱 分 析 第 卷 为 确 定 马 兜 铃 酸 在 >' 上 的 结 合 位 置 选 择 1%#45$ %56%$$& 和 8% 分 别 作 为 位 的 标 记 药 物 加 入 到 马 兜 铃 酸 >' 体 系 三 种 药 物 对 马 兜 铃 酸 >' 键 合 的 影 响 见 图 随 着 56%$$& 浓 度 的 增 加 马 兜 铃 酸 >' 配 合 物 的 荧 光 强 度 明 显 减 小 说 明 56%$$& 置 换 了 与 >' 结 合 的 马 兜 铃 酸 与 >' 作 用 使 >' 的 荧 光 强 度 显 著 降 低 而 1%#45$% 和 8% 的 存 在 对 原 有 体 系 荧 光 强 度 没 有 大 的 影 响 表 明 不 能 置 换 与 >' 作 用 的 马 兜 铃 酸 由 此 确 定 马 兜 铃 酸 在 >' 分 子 中 的 结 合 部 位 为 亚 结 构 域 ' 即 位 同 时 在 上 述 三 种 标 记 药 物 2 3 2 存 在 下 原 有 体 系 的 结 合 常 数 也 发 生 了 变 化 见 表 表 中 结 果 进 一 步 说 明 马 兜 铃 酸 在 >' 分 子 中 的 亚 结 构 域 ' 即 位 与 >' 发 生 作 用 结 构 含 量 加 入 与 >' 等 量 的 马 兜 铃 酸 后 >' 分 子 的 螺 旋 结 构 含 量 从 = 降 到 -= 结 果 说 明 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 发 生 键 合 导 致 了 牛 血 清 白 蛋 白 分 子 中 二 级 结 构 元 素 含 量 的 改 变 1)!"#$%#"$'$!!#!6 2 3 2 >' % 2 >'< 2 3 2 $!"1$& (*%!$%#"$& #"""& $%'&$"!! $%#"$'$!!#!>:? $'.? "!$%6 >:? $'.? + A:(4(: 1%1#45$% 2 3 2 8% 2 3 2 56%$$& 2 3 2 #,'*%!$%#"""& $,!$#$%#"$'$!!#!6 )$!!&!58" 1%#45$% 56%$$& 8% $ 3 2!%!1& - - - ( 马 兜 铃 酸 对 牛 血 清 白 蛋 白 构 象 的 影 响 本 文 利 用 圆 二 色 性 光 谱 红 外 光 谱 技 术 考 察 了 马 兜 铃 酸 对 牛 血 清 白 蛋 白 二 级 结 构 的 影 响 图 为 % 波 长 范 围 内 牛 血 清 白 蛋 白 与 马 兜 铃 酸 作 用 前 后 牛 血 清 白 蛋 白 的 谱 在, 和 -% 附 近 显 示 了 两 负 峰 说 明 牛 血 清 白 蛋 白 的 二 级 结 构 主 要 为 < 螺 旋 结 构 以 谱, % 处 的 摩 尔 椭 圆 率 按 下 式 = ", *, 可 粗 略 计 算 与 马 兜 铃 酸 作 用 前 后 牛 血 清 白 蛋 白 分 子 的 螺 旋 3!"##%"!!"#$% 6#&$& $'&$ $09*"!56>'409*&6!%"!56>' 4$%&4#"54!$%8 1"!561$!"1$&6!6! 6! 1$ 6 1$!"1$&45%&6!% 1!8%6-,, 2 $ 1#"8$ >' 2 3 2 '!" 1$& 2 3 2 图 为 加 入 马 兜 铃 酸 前 后 血 清 白 蛋 白 的 红 外 谱 图 血 清 白 蛋 白 红 外 光 谱 的 酰 氨 带 '&- 2 主 要 是 氨 基 酸 残 基 的 ( 伸 缩 振 动 吸 收 对 其 二 级 结 构 的 变 化 非 常 敏 感 酰 氨 带 '& 2 包 含 了 伸 缩 振 动 和 变 形 振 动 的 信 息 也 是 反 映 血 清 白 蛋 白 结 构 的 一 个 重 要 谱 带 但 对 二 级 结 构 变 化 的 敏 感 程 度 次 于 酰 氨 带 从 图 可 以 看 出 >' 酰 胺 带 的 谱 峰 在 和, 2 加 入 马 兜 铃 酸 后 分 别 位 移 到
第 期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 - 2 以 上 结 果 进 一 步 说 明 马 兜 铃 酸 与 >' 分 子 发 生 了 相 互 作 用 引 起 了 牛 血 清 白 蛋 白 二 级 结 构 的 变 化 结 论 本 文 以 荧 光 光 谱 技 术 为 主 对 模 拟 生 理 条 件 下 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 的 相 互 作 用 进 行 了 研 究 研 究 发 现 马 兜 铃 酸 与 血 清 白 蛋 白 有 强 的 结 合 结 合 位 置 距 色 氨 酸 残 基 的 距 离 为,% 以 已 知 结 合 位 置 的 标 记 药 物 确 定 了 马 兜 铃 酸 在 >' 上 的 结 合 位 置 在 亚 结 构 域 ' 即 位 同 时 圆 二 色 性 光 谱 和 红 外 差 谱 的 结 果 显 示 马 兜 铃 酸 与 牛 血 清 白 蛋 白 作 用 还 引 起 了 血 清 白 蛋 白 二 级 结 构 的 变 化 马 兜 铃 酸 与 >' 的 键 合 使 >' 中 螺 旋 结 构 含 量 从 = 降 到 -= 参 考 文 献.$%8"5 )&%8 江 苏 新 医 学 院 %$!#61%")$!$)&$ 中 华 大 辞 典 1$%81$1$%81$%6$%& 01%8$54"1!" 上 海 上 海 科 技 出 版 社, $%83%1$%8 $'!$%.&%#"$"" 35.0$%.0$%D $>!8$%$%&)&$1"!# ;'(1$%815%;7+ /6$39)%8:5 赵 长 春 郑 维 发 李 梦 秋!"#$%&!$'%$#"" 光 谱 学 与 光 谱 分 析 0$%1'+*5&%8 俞 天 智 杨 汝 栋!"#$%&!$'%$#"" 光 谱 学 与 光 谱 分 析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