基 因 工 程 课 程 实 习 内 容 与 安 排 实 习 时 间 : 一 周 (32 学 时 ) 实 习 地 点 : 大 连 大 学 生 物 学 实 验 教 学 中 心 实 习 项 目 : 大 肠 杆 菌 K88-ST1-LTB 三 价 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 实 验 室 生 产 与 检 验 实 习 目 的 : 基 因 工 程 课 程 实 习 是 学 生 进 入 专 业 课 学 习 阶 段 的 一 个 重 要 的 实 践 性 教 学 环 节 通 过 实 际 操 作, 熟 悉 实 验 方 法 生 产 和 工 艺 流 程 以 及 常 用 仪 器 设 备 的 操 作, 增 强 学 生 对 实 际 工 业 化 生 产 的 认 识, 从 而 加 深 对 课 堂 教 学 内 容 的 理 解, 激 发 学 生 学 习 专 业 知 识 的 热 情, 为 今 后 创 造 性 地 从 事 专 业 工 作 打 下 良 好 的 基 础 通 过 了 解 基 因 工 程 疫 苗 的 生 产 过 程 工 艺 流 程 设 备 结 构 工 作 原 理 等, 为 学 生 今 后 从 事 有 关 生 产 工 作 做 好 准 备 实 习 涉 及 的 相 关 课 程 知 识 : 基 因 工 程 微 生 物 学 免 疫 学 分 子 生 物 学 生 物 化 学 动 物 传 染 病 学 生 物 制 品 学 生 物 工 艺 学 胶 体 化 学 等 实 习 要 求 : 要 求 2 人 一 组, 完 成 一 个 批 次 的 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 的 实 验 室 生 产, 每 人 生 产 10 瓶 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 产 品 实 习 指 导 教 师 : 许 崇 波 实 习 学 生 : 生 物 工 程 专 业 和 生 物 技 术 专 业 本 科 生 实 习 内 容 及 具 体 安 排 : 第 一 阶 段 : 完 成 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 的 前 期 器 材 和 试 剂 的 准 备 工 作 以 及 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 菌 种 的 鉴 定 一 级 和 二 级 生 产 种 子 制 备 及 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 菌 液 的 培 养 第 二 阶 段 : 完 成 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 菌 液 的 灭 活 佐 剂 的 制 备 及 配 苗 及 有 关 检 验 工 作 完 成 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 的 分 装 半 成 品 检 验 和 成 品 的 检 验 工 作
一 大 肠 杆 菌 K88-ST1-LTB 三 价 基 因 工 程 疫 苗 实 验 室 生 产 与 检 验 流 程 大 肠 杆 菌 K88-ST1-LTB 三 价 基 因 工 程 菌 株 用 LB 培 养 基 在 37 振 荡 培 养 18-24h 后, 按 菌 液 总 量 的 0.4% 加 入 甲 醛 溶 液 37 灭 活 48 小 时, 即 可 达 到 完 全 灭 活 故 确 定 其 生 产 工 艺 流 程 如 下 : 一 级 种 子 的 繁 殖 与 鉴 定 二 级 生 产 种 子 的 繁 殖 与 鉴 定 按 培 养 基 总 量 的 5% 接 种 于 培 养 基 中 37 振 荡 培 养 18-24h, 活 菌 计 数, 菌 数 达 到 80 亿 /ml 以 上 者 即 可 用 于 制 备 疫 苗 按 菌 液 总 量 的 0.4% 加 入 甲 醛 溶 液 的 终 浓 度,37 灭 活 48h, 期 间 振 摇 数 次 灭 活 检 验 稀 释 菌 液, 使 其 每 毫 升 达 80 亿 菌 以 上, 按 菌 液 与 灭 菌 氢 氧 化 铝 胶 5:1 的 比 例 加 入 氢 氧 化 铝 胶, 充 分 振 摇 物 理 性 状 检 验 无 菌 检 验 安 全 性 检 验 效 力 检 验 及 甲 醛 含 量 的 检 验 分 装 封 口 贴 标 签 包 装
二 大 肠 杆 菌 K88-ST1-LTB 三 价 基 因 工 程 疫 苗 实 验 室 生 产 与 检 验 质 量 标 准 1 制 苗 用 菌 种 及 标 准 1.1 菌 种 大 肠 杆 菌 K88-ST1-LTB 三 价 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 生 产 菌 株 由 许 崇 波 等 构 建 1.2 菌 种 标 准 1.2.1 形 态 本 菌 株 为 革 兰 氏 阴 性 小 杆 菌 1.2.2 培 养 特 性 在 普 通 琼 脂 平 板 上,37 培 养 16-18h, 菌 落 为 圆 形 边 缘 整 齐 湿 润 半 透 明 微 隆 起 中 等 大 小 的 菌 落 ; 普 通 肉 汤 培 养 16-18h, 呈 均 匀 混 浊, 能 抗 卡 那 霉 素 (30μg/mL) 1.2.3 质 粒 传 代 稳 定 性 重 组 质 粒 pxetksl3 在 受 体 菌 BL21(DE3) 中 能 稳 定 传 代, 经 20 世 代 后, 含 质 粒 率 应 为 100%, 在 无 选 择 压 力 下 培 养, 质 粒 丢 失 率 小 于 5% 1.2.4 质 粒 DNA 检 查 将 该 菌 株 在 LB 液 体 培 养 基 中,37 振 荡 培 养 16-18h 后, 其 培 养 物 用 快 速 碱 性 裂 解 法 提 取 质 粒 DNA, 再 经 过 酶 切 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳, 可 见 特 定 大 小 的 基 因 片 段 1.2.5 纯 粹 检 验 用 适 宜 培 养 基 检 验, 应 无 杂 菌 生 长 2 试 验 动 物 18-22g 小 白 鼠 由 大 连 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供 3 疫 苗 制 造 及 半 成 品 检 验 3.1 生 产 种 子 的 制 备 3.1.1 一 级 种 子 的 繁 殖 与 鉴 定 冻 干 菌 种 经 LB 液 体 培 养 基 增 殖 后, 划 线 接 种 于 含 卡 那 霉 素 (30μg/mL) 的 LB 琼 脂 平 板 上, 置 37 培 养 16-18h, 选 取 符 合 本 规 程 1.2.1 1.2.2 项 规 定 的 典 型 菌 落 5 个, 单 独 接 种 于 含 相 同 抗 生 素 的 LB 液 体 培 养 基, 经 质 粒 DNA 检 查, 符 合 1.2.4 项 规 定 的 接 种 于 含 相 同 抗 生 素 的 琼 脂 斜 面 若 干 支,37 培 养 16-18h, 经 纯 检 合 格 者 作 为 一 级 种 子 此 种 子 液 置 0-4 保 存, 使 用 期 不 超 过 10 天 3.1.2 二 级 种 子 的 繁 殖 与 鉴 定 取 一 级 种 子 接 种 于 含 卡 那 霉 素 (30μg/mL) 的 LB 液 体 培 养 基 中,37 振 荡 培 养 16-18h 后, 转 种 于 含 同 样 抗 生 素 的 大 瓶 LB 液 体 培 养 基 中, 37 振 荡 培 养 16-18h, 以 纯 检 合 格 后 作 为 二 级 种 子, 此 种 子 液 置 0-4 保 存, 限 72h 内 使 用 3.2 制 苗 用 培 养 基 为 LB 液 体 培 养 基 培 养 基 配 方 为 : 胰 蛋 白 胨 10g, 酵 母 粉 5g,NaCl 5g, 蒸 馏 水 1000mL, 用 2N NaOH 调 ph 值 7.4-7.6,121 灭 菌 20min 保 存 备 用 3.3 制 苗 用 菌 液 的 培 养 3.4 菌 液 培 养 将 二 级 种 子 按 培 养 基 总 量 的 5% 接 种 至 含 100mL LB 液 体 培 养 基 的 锥 形 中,37 振 荡 培 养 18-24h, 作 为 制 备 疫 苗 生 产 的 菌 液 3.5 纯 粹 检 验 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行, 检 验 是 否 有 杂 菌 生 长 3.6 活 菌 计 数 菌 液 培 养 完 成 后, 取 样 经 适 当 稀 释 后 接 种 于 含 卡 那 霉 素 (30μg/mL) 的 LB 琼 脂 平 板 上, 置 37 培 养 16-18h, 进 行 活 菌 计 数, 同 时 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行 纯 检, 应 纯 粹 活 菌 数 达 到 80 亿 /ml 以 上, 即 可 用 于 制 苗, 计 数 结 果 作 为 配 苗 时 的 参 考
3.7 灭 活 及 检 验 活 菌 计 数 及 纯 检 合 格 后, 按 菌 液 总 量 的 0.4% 加 入 甲 醛 溶 液,37 灭 活 48h, 其 间 振 摇 数 次, 然 后 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行 无 菌 检 验, 应 无 菌 生 长 3.8 配 苗 灭 活 检 验 合 格 后, 根 据 菌 数 的 计 数 结 果, 用 灭 菌 的 生 理 盐 水 将 菌 液 稀 释 成 配 苗 菌 液, 每 毫 升 达 80 亿 菌 以 上, 然 后 按 菌 液 与 灭 菌 氢 氧 化 铝 胶 5:1 的 比 例 加 入 氢 氧 化 铝 胶, 充 分 振 摇, 并 用 2mol/L NaOH 调 节 ph 值 到 7.2-7.4 3.9 半 成 品 检 验 配 制 的 疫 苗, 进 行 无 菌 检 验, 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行, 检 验 是 否 有 细 菌 生 长 3.10 分 装 半 成 品 检 验 合 格 后, 定 量 分 装 分 装 时 应 随 时 摇 匀, 使 其 混 合 均 匀 3.11 封 口 以 橡 胶 瓶 塞 盖 严 后, 压 铝 盖 3.12 瓶 签 与 包 装 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 进 行 4 成 品 检 验 4.1 物 理 性 状 本 菌 苗 静 置 后 分 层, 上 层 为 淡 黄 色 澄 清 液 体, 下 层 为 灰 白 色 沉 淀, 振 摇 后 呈 均 匀 混 浊 液 4.2 无 菌 检 验 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行, 应 无 菌 生 长 4.3 安 全 性 检 验 疫 苗 腹 腔 注 射 18-22g 小 白 鼠 10 只, 每 只 0.4mL, 观 察 二 周, 应 全 部 健 活 5 作 用 与 用 途 用 于 预 防 由 A 型 产 气 荚 膜 梭 菌 引 起 的 梭 菌 病 6 用 法 与 用 量 肌 肉 注 射 2 次, 间 隔 15 天 进 行 二 次 免 疫, 每 次 5mL/ 头 7 贮 藏 在 4-8 保 存, 保 存 期 暂 定 为 1 年 8 规 格 5mL/ 瓶 9 注 意 事 项 9.1 疫 苗 严 防 冻 结 9.2 使 用 时 应 充 分 摇 匀 9.3 免 疫 动 物 要 健 康, 凡 体 格 瘦 弱 体 温 和 食 欲 不 正 常 的 动 物, 不 宜 注 射 本 疫 苗 9.4 凡 疫 苗 瓶 破 裂, 瓶 塞 松 动 脱 落 及 内 含 异 物 者, 严 禁 使 用 9.5 疫 苗 回 复 至 室 温 (18±2 ) 后 使 用 附 录 1 LB 液 体 培 养 基 胰 蛋 白 胨 10g 酵 母 粉 5g NaCl 10g 加 入 蒸 馏 水 1000mL 溶 解, 用 2mol/L NaOH 调 ph 值 至 7.4,121 灭 菌 20min 2 LB 琼 脂 培 养 基 胰 蛋 白 胨 10g 酵 母 粉 5g NaCl 10g 琼 脂 粉 15g 加 入 蒸 馏 水 1000mL 溶 解, 用 2mol/L NaOH 调 ph 值 至 7.4,121 灭 菌 20min 其 中,LB 液 体 培 养 基 LB 琼 脂 培 养 基 为 菌 种 鉴 定 和 生 产 种 子 用 培 养 基, 改 良 LB 液 体 培 养 基 为 生 产 用 培 养 基
三 基 因 工 程 课 程 实 习 所 需 的 器 材 及 试 剂 ( 一 ) 器 材 管 制 瓶 及 配 套 的 塞 子 铝 盖 和 标 签 各 400 个 ; 手 动 压 盖 机 5 把 ; 液 体 分 装 器 5 个 ; 12mL 试 管 200 支 玻 璃 吸 管 (1 2 5 10mL) 各 50 支 ; 三 角 瓶 (100 250 500mL) 各 50 个 ; 烧 杯 (100 ml 200 ml 500 ml 1000 ml) 各 20 个 ; 各 种 规 格 试 剂 瓶 ( 棕 色 ) 各 20 个 ; 平 皿 50 个 ; 移 液 管 架 5 个 ; 移 液 器 架 2 个 ; 试 管 架 10 个 ;Eppendorf 指 管 架 (1mL 0.5mL) 各 10 个 ; 枪 头 盒 (1 ml 200μL 和 10μL) 各 5 个 ;100μL 玻 璃 微 量 进 样 器 5 支 ;10μL 玻 璃 微 量 进 样 器 5 支 ; 玻 璃 注 射 器 1 ml 2 ml 5mL 10 ml 20 ml 各 20 支 ; 保 鲜 膜 1 卷 ; 锡 箔 纸 1 卷 ; 封 口 膜 1 卷 ; 脱 脂 棉 2 包 纱 布 2 包 线 绳 2 卷 接 种 环 3 个 0.22μm 滤 膜 2 盒 及 配 套 的 硬 塑 料 滤 器 20 个 消 毒 盒 5 个, 电 炉 子 2 个, 葡 萄 糖 瓶 20 个 ( 带 塞 子 50 个 ) 中 号 镊 子 5 把 SDS- 垂 直 板 电 泳 槽 5 套, 精 密 ph 试 纸 10 个 ; 量 筒 (50mL 100 ml 200 ml 500 ml) 各 10 个 ;1000 ml 量 筒 2 个 ; 玻 璃 棒 10 个 酒 精 喷 灯 1 个 温 度 计 ±100 200 各 2 支 管 制 瓶 及 塞 子 各 300 个, 标 签 纸 2 卷 等 其 他 相 关 器 材 ( 二 ) 试 剂 甲 醛 2 瓶 ; 铝 胶 2 瓶 ( 也 可 用 氯 化 铝 和 氨 水 配 制 ); 琼 脂 粉 酵 母 粉 蛋 白 胨 ( 进 口 ) 各 2 瓶 ; 氯 化 钠 4 瓶 ; 卡 那 霉 素 氨 苄 青 霉 素 ( 进 口 ) 各 2g;IPTG 10g; 溴 化 乙 锭 (EB)1g; 琼 脂 糖 20g; 葡 萄 糖 2 瓶 ; 蔗 糖 1 瓶,Tris 碱 3 瓶 ;Na 2 EDTA 2 瓶 ; 氢 氧 化 钠 2 瓶 ;SDS( 十 二 烷 基 硫 酸 钠, 进 口 )2 瓶 ; 乙 酸 钾 2 瓶 ; 冰 乙 酸 2 瓶 ; 甲 醇 3 瓶 ; 饱 和 酚 2 瓶 ; 氯 仿 2 瓶 ; 异 戊 醇 1 瓶 ; 无 水 乙 醇 5 瓶 ; 甘 油 2 瓶 ; 丙 烯 酰 胺 1 瓶 ;N-N- 甲 叉 丙 烯 酰 胺 1 瓶 ; 甲 醛 5 瓶 ; 过 硫 酸 铵 1 瓶 ;TEMED 1 瓶 ; 考 马 斯 亮 蓝 R-250 2 瓶 ; 甘 氨 酸 5 瓶 ; 溴 酚 蓝 1 瓶 ; 低 分 子 量 蛋 白 Marker 2 支 ;DL2000 DNA Marker 1 支 等 其 他 相 关 药 品 与 试 剂
第 一 阶 段 : 四 实 习 内 容 及 具 体 安 排 完 成 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 的 前 期 器 材 和 试 剂 的 准 备 工 作 以 及 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 菌 种 的 鉴 定 一 级 和 二 级 生 产 种 子 制 备 及 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 菌 液 的 培 养 第 二 阶 段 : 完 成 生 产 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 菌 液 的 灭 活 佐 剂 的 制 备 及 配 苗 及 有 关 检 验 工 作 完 成 基 因 工 程 灭 活 疫 苗 的 分 装 半 成 品 检 验 和 成 品 的 检 验 工 作 提 前 准 备 阶 段 : 制 苗 用 菌 种 鉴 定 1. 形 态 : 本 菌 株 为 革 兰 氏 阴 性 小 杆 菌 2. 培 养 特 性 : 在 普 通 琼 脂 平 板 上,37 培 养 16-18h, 菌 落 为 圆 形 边 缘 整 齐 湿 润 半 透 明 微 隆 起 中 等 大 小 的 菌 落 ; 普 通 肉 汤 培 养 16-18h, 呈 均 匀 混 浊, 能 抗 卡 那 霉 素 (30μg/ml) 3. 质 粒 传 代 稳 定 性 : 重 组 质 粒 pxetslt1 在 受 体 菌 BL21(DE3) 中 能 稳 定 传 代, 经 20 世 代 后, 含 质 粒 率 应 为 100%, 在 无 选 择 压 力 下 培 养, 质 粒 丢 失 率 小 于 5% 4. 质 粒 DNA 检 查 : 将 该 菌 株 在 LB 液 体 培 养 基 中,37 振 荡 培 养 16-18h 后, 其 培 养 物 用 快 速 碱 性 裂 解 法 提 取 质 粒 DNA, 再 经 过 酶 切 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳, 可 见 特 定 大 小 的 基 因 片 段 5. 毒 力 : 对 LB 液 体 培 养 基 16-18h 的 培 养 物 进 行 活 菌 计 数 以 30 亿 活 菌 腹 腔 接 种 18-22g 小 鼠 10 只, 观 察 二 周 应 全 部 健 活 第 一 天 : 1. 疫 苗 生 产 前 各 项 准 备 工 作 : 制 作 培 养 基 每 人 试 管 5 支, 每 支 含 5mL LB 液 体 培 养 基, 100mL LB 液 体 培 养 基 加 入 200mL 三 角 瓶 中, 高 压 湿 热 灭 菌 玻 璃 吸 管 (1mL 2mL 5mL) 每 人 各 2 支, 干 热 灭 菌 2. 一 级 生 产 种 子 的 制 备 : 从 培 养 板 上 挑 取 单 菌 落, 接 种 于 LB 试 管 中,37 振 荡 培 养 16-18h, 作 为 一 级 生 产 种 子 3. 一 级 种 子 的 繁 殖 与 鉴 定 冻 干 菌 种 经 LB 液 体 培 养 基 增 殖 后, 划 线 接 种 于 含 卡 那 霉 素 (30μg/ml) 的 LB 琼 脂 平 板 上, 置 37 培 养 16-18h, 选 取 符 合 本 规 程 1.2.1 1.2.2 项 规 定 的 典 型 菌 落 5 个, 单 独 接 种 于 含 相 同 抗 生 素 的 LB 液 体 培 养 基, 经 质 粒 DNA 检 查, 符 合 1.2.4 项 规 定 的 接 种 于 含 相 同 抗 生 素 的 琼 脂 斜 面 若 干 支,37 培 养
16-18h, 经 纯 检 合 格 者 作 为 一 级 种 子 此 种 子 液 置 0-4 保 存, 使 用 期 不 超 过 10 天 第 二 天 : 1. 二 级 种 子 的 繁 殖 与 鉴 定 取 一 级 种 子 接 种 于 含 卡 那 霉 素 (30μg/ml) 的 LB 液 体 培 养 基 中,37 振 荡 培 养 16-18h 后, 转 种 于 含 同 样 抗 生 素 的 大 瓶 LB 液 体 培 养 基 中,37 振 荡 培 养 16-18h, 以 纯 检 合 格 后 作 为 二 级 种 子, 此 种 子 液 置 0-4 保 存, 限 72h 内 使 用 2. 生 产 菌 液 培 养 : 将 二 级 生 产 种 子 按 5% 接 种 于 含 100mL LB 液 体 培 养 基 的 锥 形 瓶 中, 37 振 荡 培 养 16-18h, 作 为 制 苗 用 菌 液 3. 活 菌 计 数 与 纯 检 : 菌 液 培 养 完 成 后, 取 样 经 适 当 稀 释 后 接 种 于 含 卡 那 霉 素 (30μg/ml) 的 LB 琼 脂 平 板 上, 置 37 培 养 16-18h, 进 行 活 菌 计 数, 同 时 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行 纯 检, 应 纯 粹 活 菌 数 达 到 80 亿 /ml 以 上, 即 可 用 于 制 苗, 计 数 结 果 作 为 配 苗 时 的 参 考 第 三 天 : 在 制 苗 菌 液 中 加 入 甲 醛 溶 液, 至 终 浓 度 为 1%,37 灭 活 48-72h, 期 间 每 天 摇 匀 2-3 次 1. 灭 活 : 活 菌 计 数 及 纯 检 合 格 后, 按 菌 液 总 量 的 0.4% 加 入 甲 醛 溶 液,37 灭 活 48h, 其 间 振 摇 数 次 2. 无 菌 检 验 : 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行 无 菌 检 验, 应 无 菌 生 长 第 四 天 : 1. 准 备 分 装 用 品, 管 制 瓶 每 人 10 个,10mL 刻 度 吸 管 2 支 / 人, 干 热 灭 菌, 管 制 瓶 塞 子 10 个 / 人, 高 压 湿 热 灭 菌 第 五 天 : 氢 氧 化 铝 胶 的 制 备 : 此 法 合 成 的 铝 胶 含 量 低, 透 明 无 沉 淀, 目 前 广 泛 用 于 制 备 人 用 生 物 制 品, 认 为 佐 剂 效 果 良 好, 注 射 部 位 无 硬 结 反 应, 其 化 学 反 应 式 为 : AlCl 3 +3NaOH Al(OH) 3 +3NaCl 制 备 过 程 : 先 将 无 水 三 氯 化 铝 用 去 离 子 水 做 成 25% 溶 液, 加 热 溶 化, 使 用 时 再 稀 释 成 8%, 加 温 至 56-60, 另 将 氢 氧 化 钠 配 成 4% 溶 液, 加 温 至 56-60 化 合 时 将 全 量 三 氯 化 铝 溶 液 放 入 反 应 缸, 维 持 温 度 60, 然 后 搅 拌 540r/min, 徐
徐 加 入 氢 氧 化 钠 溶 液, 氢 氧 化 铝 胶 逐 渐 形 成 本 次 是 在 100mL 8% 氯 化 铝 溶 液 中 滴 加 约 90mL 4% 氢 氧 化 钠 溶 液, 时 间 约 需 10min, 边 加 入 碱 液 边 测 ph 值, 当 化 合 液 ph 值 达 5.6-6.0 时, 即 为 终 点, 停 止 加 入 碱 液, 继 续 搅 拌 10min, 分 装 于 试 管 中, 于 121 高 压 灭 菌 30min, 灭 菌 后 的 铝 胶 液 为 透 明 略 带 乳 光 液 体,pH5.5 左 右 此 方 法 合 成 的 铝 胶 含 Al 2 O 3 一 般 在 1.4%-1.5% 另 外, 制 造 氢 氧 化 铝 胶 时 要 注 意 :(1) 氢 氧 化 铝 具 有 较 强 的 吸 附 力, 所 以 制 造 过 程 洗 涤 用 水 不 能 含 有 任 何 杂 质, 一 般 用 去 离 子 水 (2) 氢 氧 化 铝 为 两 性 化 合 物, 要 掌 握 好 化 合 时 的 ph 值, 过 酸 或 过 碱 都 会 失 去 胶 态 (3) 贮 存 铝 胶 应 放 在 耐 酸 搪 瓷 缸 或 耐 酸 持 重 并 严 密 封 盖, 一 般 在 缸 或 池 中 贮 放 不 超 过 3 个 月 (4) 铝 胶 不 能 在 低 温 结 冻 情 况 下 保 存, 否 则 会 破 坏 胶 态 第 六 天 半 成 品 制 备 : 1. 配 苗 : 根 据 菌 数 计 数 结 果, 用 灭 菌 生 理 盐 水 将 菌 液 稀 释 至 每 毫 升 含 菌 数 为 80 亿, 然 后 按 菌 液 与 灭 菌 氢 氧 化 铝 胶 为 5:1 的 比 例 混 合, 充 分 摇 匀, 并 用 2mol/l NaOH 调 节 ph 值 到 7.2-7.4 2. 疫 苗 半 成 品 检 验 : 配 苗 后 取 样 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行 无 菌 检 验, 应 无 菌 生 长 3. 分 装 : 半 成 品 检 验 合 格 后, 定 量 分 装 分 装 时 应 随 时 摇 匀, 使 其 混 合 均 匀 4. 封 口 : 以 橡 胶 瓶 塞 盖 严 后, 压 铝 盖 5. 贴 标 签 与 包 装 : 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 进 行 第 七 天 : 1. 疫 苗 成 品 检 验 : 物 理 性 状 检 验 无 菌 检 验 和 安 全 性 检 验 2. 物 理 性 状 检 验 : 本 菌 苗 静 置 后 分 层, 上 层 为 淡 黄 色 澄 清 液 体, 下 层 为 灰 白 色 沉 淀, 振 摇 后 呈 均 匀 混 浊 液 3. 无 菌 检 验 : 按 九 二 版 中 华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 制 造 及 检 验 规 程 附 录 50 页 进 行, 应 无 菌 生 长 安 全 性 检 验 疫 苗 腹 腔 注 射 18-22g 小 白 鼠 10 只, 每 只 0.4ml, 观 察 二 周, 应 全 部 健 活 4. 安 全 性 检 验 疫 苗 腹 腔 注 射 18-22g 小 白 鼠 10 只, 每 只 0.4ml, 观 察 二 周, 应 全 部 健 活 观 察 无 菌 检 验 结 果 : 抽 检 的 疫 苗 接 种 在 LB 液 体 培 养 基 中 无 杂 菌 生 长