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一 果 酱 中 亚 硝 酸 盐 的 测 定 : 亚 硝 酸 盐 广 泛 存 在 于 自 然 界, 在 果 酱 中 也 有 一 定 的 含 量 现 已 证 明, 亚 硝 酸 盐 与 食 品 中 固 有 的 胺 类 化 合 物 是 产 生 致 癌 物 质 - 亚 硝 胺 的 前 体 物 质 因 此, 对 果 酱 中 亚 硝 酸 盐 含 量 的 检 测 和 控 制 是 非 常 有 必 要 的 在 果 酱 测 定 亚 硝 酸 盐 的 过 程 中, 用 沉 淀 剂 将 样 品 处 理 后 进 行 过 滤, 在 滤 液 中 加 入 磺 胺 和 N-1- 萘 基 - 乙 二 胺 二 盐 酸 盐, 使 其 显 粉 红 色, 然 后 用 分 光 光 度 计 在 其 最 大 吸 收 波 长 下 测 定 其 吸 光 度 将 测 得 的 吸 光 度 与 亚 硝 酸 钠 标 准 系 列 比 较 定 量 亚 硝 酸 根 与 芳 胺 或 苯 甲 胺 反 应 生 成 致 癌 物 亚 硝 胺 已 经 引 起 国 内 外 的 普 遍 关 注 随 着 分 析 化 学 新 方 法 和 新 技 术 的 不 断 出 现 和 发 展, 食 品 中 亚 硝 酸 盐 的 检 测 方 法 也 更 加 多 样 化, 新 的 检 测 方 法 层 出 不 穷 亚 硝 酸 盐 是 潜 在 的 致 癌 物 质, 而 乳 与 乳 制 品 中 亚 硝 酸 盐 含 量 过 高 会 引 起 高 铁 蛋 白 症, 因 而 要 严 格 控 制 其 含 量 1 主 要 试 剂 和 仪 器 1.1 仪 器 :UV-6100S 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ( ) 1.2 试 剂 : 标 准 亚 硝 酸 盐 溶 液 :GBW(E)0802230504 水 中 亚 硝 酸 盐 - 氮, 浓 度 :100mg/mL, 并 逐 级 稀 释 为 0.9857μg/mL 的 标 准 贮 备 液 ; 硫 酸 锌 溶 液 :535g/L; 亚 铁 氰 化 钾 溶 液 :172g/L; 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液 :ph9.6~9.7; 显 色 液 1: 盐 酸 : 水 = 450:550(V:V) 盐 酸 溶 液 ; 显 色 液 2:5g/L 磺 胺 溶 液 ; 显 色 液 3:1g/L 萘 胺 盐 酸 盐 溶 液 试 验 中 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯, 所 用 水 为 去 离 子 水 2 试 验 方 法 2.1 工 作 曲 线 标 准 曲 线 的 绘 制 : 取 6 个 50mL 容 量 瓶, 分 别 加 入 浓 度 为 0.9857μg/mL 的 亚 硝 酸 钠 标 准 贮 备 液 0.1,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL, 加 水 至 20mL, 并 做 空 白 试 验, 然 后 依 次 加 入 3mL 显 色 液 1,2.5mL 显 色 液 2, 混 合 均 匀 后, 静 置 5min, 加 1mL 显 色 液 3, 静 置 5min, 用 去 离 子 水 定 容 至 刻 度, 此 溶 液 浓 度 分 别 为 0.00 1.96 9.86 19.72 59.14 98.56 197.14μg/L 静 置 5min 后 于 540nm 处, 用 1cm 比 色 皿 进 行 测 定, 并 以 吸 光 度 为 纵 坐 标, 浓 度 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ( 见 图 1) 工 作 曲 线 方 程 为 A=0.0011C+0.0026, 相 关 系 数 r2=0.9995

图 1 工 作 曲 线 2.2 样 品 测 定 2.2.1 样 品 前 处 理 将 样 品 用 粉 碎 机 粉 碎 后, 称 25~30g 样 品, 按 顺 序 加 入 25mL 硫 酸 锌 溶 液,25mL 亚 铁 氰 化 钾 溶 液,40mL 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液, 每 加 一 种 试 剂 充 分 混 合, 用 去 离 子 水 定 容 于 250mL 容 量 瓶 中, 静 置 40min, 用 定 性 中 速 滤 纸 过 滤 后 收 集 滤 液 2.2.2 样 品 测 定 移 取 20mL 滤 液 于 50mL 容 量 瓶 中, 加 3mL 显 色 液 1,2.5mL 显 色 液 2, 摇 匀, 静 置 5min; 加 1mL 显 色 液 3, 静 置 5min, 定 容 后 静 置 5min, 上 机 同 时 移 取 20mL 滤 液 于 50mL 容 量 瓶 中 做 为 参 比 溶 液, 加 水 定 容 至 刻 度, 摇 匀 后 静 置, 与 样 品 同 测, 测 定 结 果 见 表 1 3. 结 果 讨 论 3.1 参 比 选 择 选 择 适 当 的 参 比 溶 液, 消 除 滤 液 中 有 色 物 质 的 干 扰 本 试 验 以 被 测 溶 液 作 参 比 溶 液, 不 仅 能 消 除 吸 收 池 壁 对 光 的 反 射 和 散 射 带 来 的 干 扰, 还 能 消 除 滤 液 中 共 存 离 子 对 光 的 选 择 性 吸 收 和 滤 液 中 有 色 物 质 所 带 来 的 干 扰, 所 以 采 用 不 加 显 色 剂 的 被 测 溶 液 作 参 比 溶 液 3.2 干 扰 消 除 在 样 品 前 处 理 后, 在 滤 液 中 的 某 些 成 分 影 响 被 测 组 分 吸 光 度 时, 将 构 成 干 扰, 影 响 测 量 结 果 的 准 确 性 某 些 干 扰 离 子 与 试 剂 生 成 有 色 配 合 物, 使 测 定 结 果 偏 高 ; 某 些 干 扰

离 子 与 试 剂 反 应, 生 成 的 配 合 物 虽 然 无 色, 但 消 耗 大 量 的 显 色 剂, 使 被 测 离 子 的 显 色 反 应 不 完 全, 使 测 定 结 果 偏 低 ; 某 些 干 扰 离 子 与 被 测 离 子 结 合 成 离 解 度 小 的 另 一 种 化 合 物, 使 被 测 离 子 与 显 色 剂 不 反 应, 使 测 定 结 果 偏 低 加 入 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液, 控 制 溶 液 的 酸 度, 从 而 消 除 干 扰 因 为 控 制 溶 液 酸 度 在 一 定 范 围, 可 以 使 亚 硝 酸 盐 与 显 色 剂 反 应, 干 扰 离 子 不 能 生 成 有 色 化 合 物 3.3 分 析 结 果 及 回 收 率 4. 结 论 双 光 束 分 光 光 度 法 测 定 果 酱 中 的 亚 硝 酸 盐, 非 常 有 效 的 消 除 了 果 酱 中 有 色 物 质 对 测 定 的 影 响, 灵 敏 度 高, 检 出 限 低, 选 择 性 强, 准 确 可 靠, 测 定 方 法 简 便, 快 速 5. 果 料 酸 奶 的 测 定 果 料 酸 奶 中 果 料 对 测 定 结 果 的 影 响, 尤 其 草 莓 等, 采 用 双 光 束 消 除 下 表 为 果 酱 中 亚 硝 酸 盐 和 硝 酸 盐 的 数 值 : 乳 清 蛋 白 粉 酸 奶 一 类, 滤 液 浑 浊 的 消 除, 从 比 尔 定 律 角 度 分 析

5.1 果 料 酸 奶 此 类 情 况 最 显 著 的 表 现 是 滤 液 有 颜 色, 草 莓 类 果 料 酸 奶 情 况 尤 为 严 重, 在 用 硫 酸 锌 和 亚 铁 氰 化 钾 沉 淀 过 程 中, 果 料 中 的 色 素 没 有 被 沉 淀 完 全 而 进 入 滤 液, 使 滤 液 显 一 定 的 颜 色, 如 果 完 全 按 照 国 家 标 准 GB/T5009.33-2003 或 GB/T5413.32-1997 中 直 接 测 定, 则 测 定 结 果 偏 高, 势 必 造 成 假 阳 性 的 情 况 当 滤 液 澄 清 但 有 颜 色 时, 其 滤 液 中 的 有 色 物 质 在 可 见 光 区 有 吸 收, 在 538nm 处 与 亚 硝 酸 盐 吸 收 峰 叠 加, 使 吸 光 度 偏 高 为 此, 采 用 双 光 束 分 光 光 度 法 来 消 除 滤 液 背 景 的 干 扰, 从 而 真 实 反 映 出 亚 硝 酸 盐 的 响 应 值 5.2 乳 清 蛋 白 粉 类 此 类 样 品 的 表 现 是 滤 液 无 颜 色, 但 稍 微 有 浑 浊 浑 浊 样 品 在 上 机 过 程 中, 偏 离 朗 伯 - 比 尔 定 律, 使 测 定 结 果 偏 高 样 品 浑 浊, 其 中 被 测 物 质 的 分 布 不 均 匀, 入 射 单 色 光 就 会 因 色 散, 反 射 而 使 透 射 光 的 强 度 减 弱, 检 测 器 所 得 到 的 吸 光 度 就 会 比 实 际 的 正 确 值 偏 大, 导 致 偏 离 朗 伯 - 比 尔 定 律 Griess 法 的 测 定 极 限 是 0.02~2 mol/l, 最 大 检 出 限 为 1mg/kg, 具 有 高 灵 敏 性 高 准 确 度 和 再 现 性 好 的 特 点, 且 简 单 有 效, 但 在 复 杂 介 质 中 侧 定 会 受 到 样 品 本 身 颜 色 影 响 格 里 斯 试 剂 比 色 法 的 原 理 : 样 品 经 沉 淀 蛋 白 质 除 脂 肪 后, 在 弱 酸 条 件 下 N0z 与 对 氨 基 苯 磺 酸 ( 磺 胺 ) 重 氮 化 反 应 后, 再 与 N 一 卜 蔡 基 乙 二 胺 ( 即 盐 酸 蔡 乙 二 胺 ) 偶 合 形 成 红 色 偶 氮 苯 染 料, 其 最 大 吸 收 波 长 为 550nm, 若 所 选 择 的 反 应 物 不 同, 最 大 吸 收 光 谱 也 有 所 不 同 ( 一 般 为 500-600nm) 目 前 使 用 最 多 的 反 应 剂 是 磺 胺 和 N-1- 萘 基 乙 二 胺 在 540nm 处 比 色 测 定 二 乳 与 乳 制 品 中 亚 硝 酸 盐 的 测 定 : 亚 硝 酸 盐 广 泛 存 在 于 自 然 界, 在 乳 与 乳 制 品 中 都 有 一 定 的 含 量 现 已 证 明, 亚 硝 酸 盐 与 食 品 中 固 有 的 胺 类 化 合 物 是 产 生 致 癌 物 质 - 亚 硝 胺 的 前 体 物 质, 是 潜 在 的 致 癌 物 质, 亚 硝 酸 盐 含 量 过 高 会 引 起 高 铁 蛋 白 症 因 此, 对 乳 与 乳 制 品 亚 硝 酸 盐 含 量 的 检 测 和 控 制 是 非 常 有 必 要 的 在 乳 与 乳 制 品 测 定 亚 硝 酸 盐 的 过 程 中, 将 样 品 沉 淀 脂 肪 和 蛋 白 质 后, 进 行 过 滤 在 滤 液 中 加

入 磺 胺 和 N-1- 萘 基 - 乙 二 胺 二 盐 酸 盐, 使 其 显 粉 红 色, 然 后 用 分 光 光 度 计 在 其 最 大 吸 收 波 长 538nm 下 测 定 其 吸 光 度 将 测 得 的 吸 光 度 与 亚 硝 酸 钠 标 准 系 列 溶 液 的 吸 光 度 进 行 比 较 定 量 1 主 要 试 剂 和 仪 器 1.1 仪 器 :UV-6100S 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ( ) 1.2 试 剂 : 标 准 亚 硝 酸 盐 溶 液 :GBW(E)0802230504 水 中 亚 硝 酸 盐 - 氮, 浓 度 :100mg/mL, 并 逐 级 稀 释 为 0.9857μg/mL 的 标 准 贮 备 液 ; 硫 酸 锌 溶 液 :535g/L; 亚 铁 氰 化 钾 溶 液 :172g/L; 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液 :ph9.6~9.7; 显 色 液 1: 盐 酸 : 水 = 450:550(V:V) 盐 酸 溶 液 ; 显 色 液 2:5g/L 磺 胺 溶 液 ; 显 色 液 3:1g/L 萘 胺 盐 酸 盐 溶 液 试 验 中 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯, 所 用 水 为 去 离 子 水 2 试 验 方 法 2.1 入 射 光 波 长 的 选 择 国 标 GB/T5413.32-1997 乳 粉 硝 酸 盐 亚 硝 酸 盐 的 测 定 中 规 定 最 大 吸 收 波 长 为 538nm, 但 在 实 验 过 程 中, 做 光 谱 扫 描 时, 最 大 吸 收 波 长 往 往 因 为 样 品 的 不 同 而 发 生 变 化, 发 上 红 移 或 蓝 移 的 现 象 考 虑 到 测 定 的 灵 敏 度, 应 采 用 最 大 吸 收 波 长 作 为 入 射 光 波 长 所 以, 在 进 行 定 量 分 析 之 前, 应 先 才 用 光 谱 扫 描 进 行 峰 形 和 峰 位 的 确 认 以 表 1 的 仪 器 条 件, 对 亚 硝 酸 盐 标 准 系 列 进 行 扫 描, 光 谱 图 如 图 1 图 1 中 曲 线 均 比 较 平 滑, 为 了 消 除 干 扰 组 分 的 吸 收, 采 用 吸 收 最 大, 干 扰 最 小 的 原 则, 即 所 选 择 的 测 定 波 长 处 待 测 组 分 的 吸 收 最 大, 但 干 扰 组 分 的 吸 收 最 小 ; 从 消 除 非 单 色 光 引 起 的 对 郎 伯 比 尔 定 律 的 偏 离 角 度 考 虑, 应 选 用 吸 收 曲 线 比 较 平 坦 部 分 对 应 波 长 的 光 作 为 入 射 光 波 长 综 上 所 述, 应 选 择 图 1 中 538nm 作 为 入 射 光 波 长, 与 国 家 标 准 一 致

图 1 标 准 系 列 吸 收 光 谱 图 2.2 标 准 曲 线 标 准 曲 线 的 绘 制 : 取 6 个 50mL 容 量 瓶, 分 别 加 入 浓 度 为 0.9857μg/mL 的 亚 硝 酸 钠 标 准 贮 备 液 0.0,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL, 加 水 至 20mL, 然 后 依 次 加 入 3mL 显 色 液 1, 2.5mL 显 色 液 2, 混 合 均 匀 后, 静 置 5min, 加 1mL 显 色 液 3, 静 置 5min, 用 去 离 子 水 定 容 至 刻 度, 此 溶 液 浓 度 分 别 为 0.00 9.86 19.72 59.14 98.56 197.14μg/L 静 置 5min 后 于 538nm 处, 用 1cm 比 色 皿 进 行 测 定, 并 以 吸 光 度 为 纵 坐 标, 浓 度 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 ( 见 图 2)

图 2 亚 硝 酸 盐 标 准 曲 线 标 准 曲 线 方 程 为 A=0.0011C-0.0005, 相 关 系 数 r2=0.9999 2.3 样 品 测 定 2.3.1 样 品 前 处 理 称 90.0g 左 右 牛 乳 样 品, 按 顺 序 加 入 25mL 硫 酸 锌 溶 液,25mL 亚 铁 氰 化 钾 溶 液,40mL 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液, 每 加 一 种 试 剂 充 分 混 合, 用 去 离 子 水 定 容 于 250mL 容 量 瓶 中, 静 置 40min, 用 定 性 中 速 滤 纸 过 滤 后 收 集 滤 液 2.4.2 样 品 测 定 移 取 20mL 滤 液 于 50mL 容 量 瓶 中, 加 3mL 显 色 液 1,2.5mL 显 色 液 2, 摇 匀, 静 置 5min; 加 1mL 显 色 液 3, 静 置 5min, 定 容 后 静 置 5min, 上 机 测 定 3 结 果 与 讨 论 干 扰 消 除 一 般 有 两 种 方 法, 一 类 是 不 分 离 的 情 况 下 消 除 干 扰, 另 一 类 是 分 离 杂 质 消 除 干 扰 因 为 在 分 离 过 程 中, 会 造 成 硝 酸 盐 和 亚 硝 酸 的 损 失, 所 以 一 般 在 不 分 离 的 情 况 下 消 除 干 扰 本 试 验 采 用 双 光 束 分 光 光 度 法, 在 不 分 离 的 情 况 下 消 除 干 扰 3.1 在 样 品 前 处 理 后, 在 滤 液 中 的 某 些 成 分 影 响 被 测 组 分 吸 光 度 时, 将 构 成 干 扰, 影 响 测 量 结 果 的 准 确 性 干 扰 离 子 与 试 剂 生 成 有 色 配 合 物, 使 测 定 结 果 偏 高 ; 干 扰 离 子 与 试 剂 反 应, 生 成 的 配 合 物 虽 然 无 色, 但 消 耗 大 量 的 显 色 剂, 使 被 测 离 子 的 显 色 反 应 不 完 全, 使 测 定 结 果 偏 低 ; 与 被 测 离 子 结 合 成 离 解 度 小 的 另 一 种 化 合 物, 使 被 测 离 子 与 显 色 剂 不 反 应, 使 测 定 结 果 偏 低 加 入 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液, 控 制 溶 液 的 酸 度, 从 而 有 效 的 消 除 了 干 扰 因 为 控 制 溶 液 酸 度 在 一 定 范 围, 可 以 使 亚 硝 酸 盐 与 显 色 剂 反 应, 干 扰 离 子 不 能 生 成 有 色 化 合 物 3.2 选 择 适 当 的 参 比 溶 液, 消 除 显 色 剂 本 身 颜 色 和 某 些 共 存 的 有 色 离 子 的 干 扰 干 扰 离 子 本 身 有 颜 色, 使 测 定 结 果 偏 高 ; 本 试 验 选 择 溶 剂 参 比 和 试 液 参 比 分 别 进 行 考 察 : 溶 剂 参 比 : 当 显 色 剂 及 其 他 溶 剂 均 无 色, 被 测 溶 液 中 又 无 其 他 有 色 离 子 时, 可 用 溶 剂 - 去 离 子 水 做 参 比 溶 液 试 液 参 比 : 显 色 剂 无 色, 被 测 溶 液 中 有 其 他 有 色 离 子, 可 采 用 不 加 显 色 剂 的 被 测 溶 液 做 参 比 溶 液 以 去 离 子 水 作 溶 剂 参 比, 只 能 消 除 吸 收 池 壁 对 光 的 反 射 和 散 射 所 带 来 的 干 扰 ; 以 被 测 溶 液 作 试 液 参 比, 不 仅 能 消 除 吸 收 池 壁 对 光 的 反 射 和 散 射 带 来 的 干 扰, 还 能 消 除 滤 液 中 共 存 离 子 对 光 的 选 择 性 吸 收 所 带 来 的 干 扰 所 以 采 用 不 加 显 色 剂 的 滤 液 作 试 液 参 比 3.3 选 择 适 当 的 波 长 消 除 干 扰 入 射 光 波 长 的 选 择 必 须 从 灵 敏 度 与 选 择 性 两 方 面 来 考 虑, 从 吸 收 曲 线 的 峰 形 来 看, 无 杂 峰 干 扰, 应 选 择 最 大 吸 收 波 长 进 行 测 定, 这 样 灵 敏 度 高, 偏 离 郎 伯 - 比 尔 定 律 的 程 度 较 小 本 实 验 通 过 光 谱 扫 描, 从 吸 收 光 谱 图 上 测 定 最 大 吸 收 波 长 后 进 行 定 量 分 析, 避 免 了 波 长 偏 差 带 来 的 误 差 和 干 扰 3.4 精 密 度 试 验 分 别 称 取 纯 牛 乳 原 味 酸 牛 乳 全 脂 乳 粉 和 乳 清 蛋 白 粉 样 品, 用 上 述 方 法 进 行 测 定, 计 算 结 果 见 表 2:( 单 位 :μg/l)

3.5 加 标 回 收 率 试 验 在 纯 牛 乳 原 味 酸 牛 乳 全 脂 乳 粉 和 乳 清 蛋 白 粉 样 品 中, 分 别 吸 取 0.50,1.00,1.50,2.00mL 浓 度 10mg/mL 的 标 准 亚 硝 酸 盐 溶 液 进 行 加 标 回 收 试 验, 结 果 见 表 3

4. 结 论 双 光 束 分 光 光 度 法 测 定 纯 牛 奶 中 的 亚 硝 酸 盐, 灵 敏 度 高, 检 出 限 低, 选 择 性 强, 准 确 可 靠, 有 效 的 消 除 了 共 存 离 子 干 扰, 测 定 方 法 简 便, 快 速 三 酸 牛 乳 中 亚 硝 酸 盐 测 定 的 背 景 干 扰 及 消 除 方 法 1 前 言 亚 硝 酸 盐 是 潜 在 的 致 癌 物 质, 而 乳 与 乳 制 品 中 亚 硝 酸 盐 含 量 过 高 会 引 起 高 铁 蛋 白 症, 因 而 要 严 格 控 制 其 含 量 [1] 酸 牛 乳 中 由 于 含 有 各 式 各 样 的 食 品 添 加 剂, 在 测 定 亚 硝 酸 盐 过 程 中, 用 硫 酸 锌 和 亚 铁 氰 化 钾 沉 淀 不 完 全, 导 致 部 分 小 分 子 物 质 进 入 滤 液, 使 滤 液 浑 浊, 而 这 种 浑 浊 一 般 是 肉 眼 不 可 见 的 在 分 光 光 度 计 上 比 色 时, 却 能 引 起 吸 收, 导 致 测 定 结 果 偏 高, 造 成 假 阳 性 的 情 况 笔 者 针 对 此 种 情 况, 建 立 了 以 滤 液 为 参 比 溶 液, 消 除 酸 牛 乳 中 细 小 颗 粒 对 检 测 结 果 的 影 响, 结 果 令 人 满 意 2 试 验 部 分 2.1 仪 器 和 试 剂 2.1.1 仪 器 :UV-6100S 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ( ) 2.1.2 试 剂 : 标 准 亚 硝 酸 盐 溶 液 :GBW(E)0802230504 水 中 亚 硝 酸 盐 - 氮, 浓 度 :100mg ml-1, 并 逐 级 稀 释 为 0.9857μg ml-1 的 标 准 贮 备 液 ; 硫 酸 锌 溶 液 :535g L-1; 亚 铁 氰 化 钾 溶 液 :172g L-1; 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液 :ph9.6~9.7; 显 色 液 1: 盐 酸 : 水 = 450: 550(V:V) 盐 酸 溶 液 ; 显 色 液 2:5g L-1 磺 胺 溶 液 ; 显 色 液 3:1g L-1 萘 胺 盐 酸 盐 溶 液 试 验 中 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯, 所 用 水 为 去 离 子 水 2.2 标 准 溶 液 的 配 置 标 准 曲 线 的 绘 制 : 取 6 个 50mL 容 量 瓶, 分 别 加 入 浓 度 为 0.9857μg ml-1 的 亚 硝 酸 钠 标 准 贮 备 液 0,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL, 加 水 至 20mL, 并 做 空 白 试 验, 然 后 依 次 加 入 3mL 显 色 液 1,2.5mL 显 色 液 2, 混 合 均 匀 后, 静 置 5min, 加 1mL 显 色 液 3, 静 置 5min, 用 去 离 子 水 定 容 至 刻 度, 此 溶 液 浓 度 分 别 为 0.00 9.86 19.72 59.14 98.56 197.14μg L-1 静 置 5min 后 于 538nm 处, 用 1cm 比 色 皿 进 行 测 定 2.3 试 验 过 程 2.3.1 吸 收 光 谱 曲 线 的 绘 制 在 光 谱 模 式 下, 测 定 标 准 系 列 的 光 谱 图, 仪 器 条 件 见 表 1

在 此 仪 器 条 件 下, 扫 描 出 标 准 系 列 的 吸 收 光 谱 图, 见 图 1 图 1 标 准 系 列 吸 收 光 谱 图 2.3.2 标 准 曲 线 的 绘 制 在 光 度 测 定 模 式 下, 以 吸 光 度 为 纵 坐 标, 浓 度 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线, 见 图 2 工 作 曲 线 方 程 为 A= 0.0011C - 0.0005, 相 关 系 数 r 2 =0.9999

图 2 亚 硝 酸 盐 标 准 曲 线 2.2 样 品 测 定 2.2.1 样 品 前 处 理 将 酸 牛 乳 样 品 混 合 均 匀 后, 称 70g 左 右 样 品, 按 顺 序 加 入 35mL 硫 酸 锌 溶 液,35mL 亚 铁 氰 化 钾 溶 液,50mL 盐 酸 - 氨 水 缓 冲 溶 液, 每 加 一 种 试 剂 充 分 混 合, 用 去 离 子 水 定 容 于 250mL 容 量 瓶 中, 静 置 40min, 用 定 性 中 速 滤 纸 过 滤 后 收 集 滤 液 2.2.2 样 品 测 定 移 取 20mL 滤 液 于 50mL 容 量 瓶 中, 加 3mL 显 色 液 1,2.5mL 显 色 液 2, 摇 匀, 静 置 5min; 加 1mL 显 色 液 3, 静 置 5min, 定 容 后 静 置 5min, 上 机 同 时 移 取 20mL 滤 液 于 50mL 容 量 瓶 中 做 为 参 比 溶 液, 加 水 定 容 至 刻 度, 摇 匀 后 静 置, 与 样 品 同 测, 测 定 结 果 见 表 1 3 结 果 与 讨 论

3.1 牛 乳 与 酸 牛 乳 光 谱 图 比 较 国 家 标 准 GB2746-1999[2] 中 规 定 酸 牛 乳 中 亚 硝 酸 盐 的 限 量 为 0.2mg kg-1, 而 按 照 国 加 标 准 规 定 的 方 法 检 测, 则 均 判 定 为 阳 性 样 品, 而 在 扣 除 背 景 干 扰 后, 样 品 检 测 结 果 均 合 格 国 家 标 准 检 测 方 法 在 检 测 牛 乳 类 样 品 时, 几 乎 不 存 在 干 扰 情 况 图 3( 图 中 虚 线 为 标 样 吸 收 光 谱 图, 实 线 为 样 品 吸 收 光 谱 图, 下 同 ) 为 牛 乳 样 品 光 谱 图 与 标 样 吸 收 光 谱 图 比 较, 从 图 中 可 以 看 出, 牛 乳 样 品 的 亚 硝 酸 盐 样 品 光 谱 图 和 标 样 光 谱 图 基 本 一 致, 确 认 其 为 亚 硝 酸 盐, 然 后 测 定 其 峰 高 及 吸 光 度 值 进 行 定 量 计 算 图 3 牛 乳 样 品 光 谱 图 酸 牛 乳 加 入 各 种 辅 料, 比 如 食 品 添 加 剂, 增 稠 剂, 甜 味 剂 等, 经 过 发 酵 以 后, 成 分 相 对 比 牛 乳 复 杂 的 多, 在 经 过 沉 淀 剂 沉 淀 以 后, 滤 液 中 含 有 沉 淀 不 完 全 或 粒 径 较 小 的 颗 粒 而 这 些 颗 粒 在 测 定 波 长 538nm 处 有 吸 收, 从 而 干 扰 目 标 组 分 的 测 定 图 4 为 酸 牛 乳 样 品 光 谱 图, 从 图 中 可 以 看 出, 由 于 干 扰 的 存 在, 各 个 吸 收 峰 叠 加, 分 辨 不 出 亚 硝 酸 的 吸 收 峰 按 照 国 标 方 法, 直 接 测 定 吸 光 度 定 量, 则 造 成 假 阳 性 的 情 况

图 4 酸 牛 乳 样 品 光 谱 图 3.2 背 景 干 扰 及 消 除 方 法 笔 者 经 过 大 量 的 试 验 研 究, 认 为 背 景 干 扰 主 要 来 自 滤 液 中 杂 质 组 分 和 颗 粒 在 538nm 存 在 吸 收, 干 扰 导 致 酸 牛 乳 样 品 吸 收 光 谱 变 形, 其 背 景 干 扰 光 谱 图 如 图 5 所 示 滤 液 中 有 杂 质 组 分 和 小 分 子 物 质, 入 射 单 色 光 就 会 因 色 散 反 射 而 使 透 射 光 的 强 度 减 弱, 检 测 器 所 得 到 的 吸 光 度 就 会 比 实 际 的 正 确 值 偏 大 [3]; 量 子 光 学 认 为, 吸 光 粒 子 间 的 平 均 距 离 减 小, 受 粒 子 间 电 荷 分 布 相 互 作 用 的 影 响, 其 摩 尔 吸 收 系 数 发 生 变 化 [4] 以 上 两 种 情 况 导 致 偏 离 比 尔 定 律 而 这 种 干 扰 往 往 是 肉 眼 不 可 见 的, 常 常 在 检 测 中 被 忽 略

图 5 背 景 干 扰 光 谱 图 本 试 验 采 用 20mL 滤 液 为 参 比 进 行 背 景 扣 除, 以 此 来 消 除 干 扰 [5] 从 图 5 中 可 以 看 出, 背 景 干 扰 在 538nm 处 产 生 一 定 的 响 应 而 这 种 响 应 导 致 偏 离 比 尔 定 律, 使 测 定 结 果 偏 高 扣 除 背 景 干 扰 后, 其 光 谱 图 见 图 6 从 图 6 中 可 以 看 出, 消 除 背 景 干 扰 后 的 光 谱 图 和 标 样 光 谱 图 基 本 吻 合, 说 明 干 扰 已 经 消 除, 此 时 再 进 行 吸 光 度 测 定, 就 能 真 实 反 应 样 品 中 亚 硝 酸 盐 的 含 量

图 6 消 除 干 扰 后 吸 收 光 谱 图 4 结 论 通 过 以 上 试 验 可 以 说 明, 背 景 对 酸 牛 乳 中 亚 硝 酸 的 测 定 干 扰 很 大, 容 易 造 成 假 阳 性 而 通 过 滤 液 参 比 进 行 背 景 的 扣 除, 基 本 消 除 了 背 景 干 扰 对 测 定 结 果 的 影 响 该 方 法 操 作 简 单, 消 除 干 扰 效 果 好, 适 用 于 日 常 酸 牛 乳 中 亚 硝 酸 盐 的 测 定