溶 菌 酶 与 口 腔 常 见 疾 病 关 系 研 究 进 展 刘 孝 威 范 毅 杰 缪 挺 君 石 佩 凌 林 欣 祤 李 欣 颖 摘 要 溶 菌 酶 是 一 种 碱 性 蛋 白, 广 泛 存 在 于 人 体 组 织 及 分 泌 物 ( 血 清, 泪 液, 唾 液 和 淋 巴 等 ) 中 溶 菌 酶 作 为 口 腔 非 特 异 性 免 疫 系 统 的 重 要 组 成 部 份, 具 有 抗 真 菌 和 抗 炎 的 作 用 本 文 就 溶 菌 酶 与 口 腔 常 见 疾 病 的 关 系 研 究 做 一 综 述 关 键 词 溶 菌 酶 牙 周 病 龋 病 扁 平 苔 藓 念 珠 菌 感 染 前 言 溶 菌 酶 (lysozyme) 又 称 胞 壁 质 酶 (muramidase) 或 N- 乙 酰 胞 壁 质 聚 糖 水 解 酶 (N-acetylmuramide glycanohydrlase), 是 一 种 能 水 解 致 病 菌 中 黏 多 糖 的 碱 性 酶 广 泛 存 在 于 高 等 动 物 的 组 织 唾 液 泪 液 血 清 淋 巴 等 以 原 生 动 物 昆 虫 植 物 和 微 生 物 中 青 霉 素 的 发 现 者 Fleming 1922 年 在 人 的 多 种 组 织 及 微 生 物 中 证 实 了 这 种 溶 菌 因 子 的 存 在, 并 命 名 为 溶 菌 酶 的 结 晶, 它 是 目 前 功 能 与 结 构 被 了 解 最 清 楚 的 酶 种 之 一 溶 菌 酶 的 生 物 学 活 性 唾 液 溶 菌 酶 由 130 个 氨 基 酸 残 基 组 成, 含 有 4 个 二 硫 链, 相 对 分 子 质 量 为 14600, 相 同 条 件 下, 其 溶 菌 活 性 比 鸡 蛋 清 溶 菌 酶 高 倍 溶 菌 酶 按 其 所 作 用 的 微 生 物 不 同 分 两 大 类, 即 细 菌 细 胞 壁 溶 菌 酶 和 真 菌 细 胞 壁 溶 菌 酶 细 菌 细 胞 壁 溶 菌 酶 有 2 种, 一 种 是 作 用 于 -1,4 糖 苷 链 的 细 胞 壁 溶 解 酶 ; 另 一 种 是 作 用 于 肽 " 尾 " 和 酰 胺 部 分 的 细 胞 壁 溶 菌 酶 真 菌 细 胞 壁 溶 菌 酶 包 括 酵 母 菌 细 胞 壁 溶 解 酶 和 霉 菌 细 胞 壁 溶 解 酶 溶 菌 酶 的 底 物 为 细 菌 的 细 胞 壁, 哺 乳 动 物 并 无 细 胞 壁, 因 此 它 对 口 腔 组 织 无 损 伤, 而 是 起 保 护 作 用
溶 菌 酶 的 作 用 机 理 溶 菌 酶 能 有 效 地 水 解 细 菌 细 胞 壁 的 肽 聚 糖, 其 水 解 位 点 是 N- 乙 酰 胞 壁 酸 (NAM) 的 1 位 碳 原 子 和 N- 乙 酰 葡 萄 糖 胺 (NAG) 的 4 位 碳 原 子 间 的 β-1.4 糖 苷 键 肽 聚 糖 是 细 菌 细 胞 壁 的 主 要 成 份, 它 是 由 NAM NAG 和 肽 尾 ( 一 般 是 4 个 氨 基 酸 ) 组 成,NAM 与 NAG 通 过 β-1.4 糖 苷 键 相 连, 肽 尾 则 是 通 过 D- 乳 酰 羧 基 连 在 NAM 的 第 3 位 碳 原 子 上, 肽 尾 之 间 通 过 肽 桥 ( 肽 键 或 少 数 几 个 氨 基 酸 ) 连 接,NAM NAG 肽 尾 与 肽 桥 共 同 组 成 了 肽 聚 糖 的 多 层 网 状 结 构, 作 为 细 胞 壁 的 骨 架, 上 述 结 构 中 的 任 何 化 学 键 断 裂, 皆 能 导 致 细 菌 细 胞 壁 的 损 伤 对 于 革 兰 氏 阳 性 菌 (G+), 如 藤 黄 微 球 菌 枯 草 杆 菌 或 溶 壁 微 球 菌 等, 与 革 兰 氏 阴 性 菌 (G-), 如 大 肠 杆 菌 变 形 杆 菌 痢 疾 杆 菌 肺 炎 杆 菌 等, 其 细 胞 壁 中 肽 聚 糖 含 量 不 同,G+ 细 菌 细 胞 壁 几 乎 全 部 由 肽 聚 糖 组 成, 而 G- 细 菌 只 有 内 壁 层 为 肽 聚 糖, 因 此, 溶 菌 酶 对 于 破 坏 G+ 细 菌 的 细 胞 壁 较 G- 细 菌 强 溶 酶 菌 与 口 腔 常 见 疾 病 ( 一 ) 溶 菌 酶 与 龋 病 龋 病 是 人 类 的 常 见 病, 目 前 龋 病 的 流 行 病 学 特 点 是 : 发 病 集 中 在 部 分 有 患 龋 倾 向 的 群 体 研 究 表 明, 在 总 的 患 龋 人 群 中 至 少 60% 的 龋 坏 是 集 中 在 人 群 中 20% 的 个 体 中 显 然, 针 对 这 些 高 危 人 群 或 个 体, 采 取 有 针 对 性 的 有 效 的 预 防 措 施 是 最 经 济 有 效 的 方 法 龋 病 研 究 的 重 点 之 一 就 是 筛 查 龋 高 危 个 体 和 寻 找 优 秀 的 龋 预 测 指 标 大 量 临 床 研 究 显 示, 溶 菌 酶 作 为 机 体 非 特 异 免 疫 因 子 之 一, 参 与 口 腔 环 境 的 稳 态 平 衡 调 节 过 程 口 腔 变 形 链 球 菌 是 人 类 龋 病 最 主 要 的 致 病 菌, 其 致 龋 性 主 要 表 现 在 对 牙 面 的 黏 附 产 酸 耐 酸 以 及 产 生 多 糖 和 细 菌 素 等 方 面 Li 等 用 抗 体 检 测 出 牙 齿 釉 质 表 面 覆 盖 的 一 层 薄 膜 中 含 有 溶 菌 酶 等 多 种 蛋 白 质, 该 薄 膜 在 牙 釉 质 和 口 腔 环 境 之 间 提 供 一 个 保 护 性 的 界 面 Tenovuo 等 报 道, 向 口 腔 保 健 产 品 中 添 加 溶 菌 酶 等 抗 菌 剂 比 添 加 人 工 合 成 的 抗 菌 剂 对 预 防 龋 齿 更 有 效 Kirstila 等 研 究 报 道, 在 对 患 者 龋 齿 发 展 的 2 年 观 察 过 程 中, 发 现 口 腔 唾 液 中 的 溶 菌 酶 含 量 下 降 显 着 但 Jentsch 等 在 对 患 龋 齿 的 志 愿 者 长 达 4 年 的 观 察 性 研 究 中 发 现, 龋 齿 发 展 较 慢 的 志 愿 者, 其 口 腔 唾 液 流 量 较 高, 溶 菌 酶 含 量 较 低 郝 高 峰 等 研 究 发 现, 高 龋 均 组 唾 液 总 蛋 白 高 于 对 照 无 龋 坏 组, 而 溶 菌 酶 的 差 异
无 统 计 学 意 义 有 研 究 认 为, 儿 童 全 身 各 系 统 包 括 口 腔 颌 面 部 的 发 育 还 不 成 熟, 其 口 腔 内 的 菌 群 和 宿 主 抵 抗 体 系 的 建 立 还 不 够 健 全, 因 此, 儿 童 与 成 人 唾 液 中 的 蛋 白 成 分 存 在 差 异 但 在 对 儿 童 龋 病 与 溶 菌 酶 的 研 究 中 也 出 现 结 果 不 一 致 的 情 况 有 报 道, 患 有 龋 齿 的 健 康 儿 童, 其 口 腔 唾 液 中 溶 菌 酶 含 量 很 高, 同 时 变 形 链 球 菌 的 含 量 也 很 高 林 琴 等 对 3 ~ 4 岁 无 龋 儿 童 的 唾 液 蛋 白 含 量 研 究 发 现 溶 菌 酶 没 有 差 别 黄 昊 红 等 对 4 ~ 6 岁 龋 坏 和 无 龋 坏 者 的 唾 液 进 行 分 析 发 现 无 龋 者 溶 菌 酶 活 性 高 于 易 患 者 这 与 Twestman 等 和 吴 慧 华 等 研 究 结 果 一 致, 认 为 唾 液 中 的 溶 菌 酶 是 一 种 低 分 子 的 碱 性 蛋 白 质, 在 儿 童 时 期 唾 液 溶 菌 酶 发 挥 了 比 成 人 期 更 重 要 的 保 护 作 用, 在 局 部 免 疫 中 与 SIgA 协 同 作 用 引 起 细 菌 溶 解, 起 到 了 参 与 菌 斑 生 态 系 统 调 节 抵 御 龋 病 发 生 的 作 用 从 理 论 上 讲, 溶 菌 酶 与 龋 病 之 间 应 呈 负 相 关 关 系, 但 由 于 口 腔 内 溶 菌 酶 含 量 较 低, 且 唾 液 多 种 成 分 与 溶 菌 酶 的 相 互 作 用, 以 及 检 测 方 法 等 影 响, 均 会 导 致 实 验 结 果 的 差 异 ( 二 ) 溶 菌 酶 与 念 珠 菌 感 染 念 珠 菌 作 为 人 类 口 腔 中 常 见 的 酵 母 菌, 约 1/3 ~ 1/2 的 健 康 人 中 都 有 由 于 广 谱 抗 菌 素 的 广 泛 使 用 和 免 疫 缺 陷 患 者 的 不 断 增 加, 白 色 念 珠 菌 对 传 统 抗 真 菌 药 物 产 生 耐 药 性 成 为 治 疗 此 类 感 染 的 难 点 与 游 离 型 念 珠 菌 相 比, 形 成 生 物 膜 的 念 珠 菌 对 多 种 传 统 抗 真 菌 药 物 耐 药 性 更 强 因 此, 提 高 念 珠 菌 对 抗 真 菌 药 物 的 敏 感 性 成 为 目 前 研 究 的 重 点 溶 菌 酶 和 抗 菌 剂 同 时 使 用 具 有 协 同 作 用 60% 义 齿 使 用 者 中 都 患 有 顽 固 性 义 齿 型 念 珠 菌 病, 表 现 为 与 义 齿 相 接 触 的 黏 膜 红 肿 局 部 抗 真 菌 治 疗 不 易 去 除 义 齿 表 面 的 念 珠 菌 Samaranay ake 等 体 外 模 型 研 究 发 现, 少 量 的 溶 菌 酶 能 抑 制 念 珠 菌 生 物 膜 的 形 成, 即 100 μg/ml 能 杀 死 45% 的 无 柄 假 丝 酵 母 细 胞, 但 其 质 量 浓 度 继 续 上 升 至 240 μg/ml 杀 菌 能 力 没 有 变 化, 这 说 明 溶 菌 酶 很 可 能 调 节 口 内 念 珠 菌 生 物 膜 的 形 成 体 外 研 究 和 临 床 研 究 均 表 明, 溶 菌 酶 抑 制 念 珠 菌 生 长 在 义 齿 形 成 菌 落 发 挥 重 要 作 用 ; 而 且 100 μg/ml 溶 菌 酶 与 制 霉 菌 素 两 性 霉 素 B 和 酮 康 唑 联 合 使 用 与 单 独 使 用 溶 菌 酶 相 比 有 效 提 高 了 杀 灭 念 珠 菌 生 物 膜 的 能 力 Lee 等 发 现, 过 氧 化 氢 酶 能 提 高 鸡 卵 白 溶 酶 杀 灭 白 色 念 珠 菌 活 性, 其 活 性 与 过 氧 化 氢 酶 浓 度 有 关, 同 时 也 受 到 ph 和 离 子 强 度 的 影 响 继 续 添 加 硫 氢 酸 钾 和 过 氧 化 氢, 对 鸡 卵 白 溶 酶 的 杀 灭 白 念 珠 菌 活 性 无 影 响 Park 等 研 究 发 现,
透 明 质 酸 的 流 变 性 质 对 唾 液 酶 和 念 珠 菌 活 性 无 影 响, 但 透 明 质 酸 的 黏 度 在 找 寻 唾 液 代 替 品 中 发 挥 重 要 作 用 而 Kang 等 发 现, 透 明 质 酸 虽 然 能 抑 制 念 珠 菌 活 性, 但 同 时 亦 抑 制 了 溶 菌 酶 和 过 氧 化 物 酶 系 的 灭 活 念 珠 菌 能 力 韩 剑 星 等 报 道, 临 床 中 使 用 生 物 溶 菌 酶 配 合 盐 酸 特 比 奈 芬 喷 雾 剂 治 疗 小 儿 鹅 口 疮 起 效 快, 可 缩 短 疗 程 ( 三 ) 溶 菌 酶 与 牙 周 炎 龈 沟 液 是 惟 一 的 直 接 从 体 液 渗 出 的 液 体, 其 成 分 与 血 清 相 近, 含 有 电 解 质 氨 基 酸 抗 体 溶 菌 酶 细 胞 因 子 炎 性 介 质 等 牙 周 组 织 的 不 同 状 态 会 引 起 龈 沟 液 成 分 ( 特 别 是 某 些 特 定 的 细 胞 因 子 酶 类 ) 的 改 变 临 床 上 将 它 们 的 量 和 性 质 的 变 化 作 为 监 测 疾 病 发 展 及 治 疗 进 程 的 指 标 唾 液 是 口 腔 中 特 殊 的 微 环 境, 由 口 腔 附 近 各 类 大 小 唾 液 腺 的 分 泌 液 和 龈 沟 液 混 合 而 成, 唾 液 来 源 和 成 分 的 特 点 决 定 了 利 用 唾 液 来 检 查 口 腔 健 康 及 全 身 健 康 的 价 值 唾 液 中 宿 主 来 源 可 作 为 标 志 物 的 有 蛋 白 基 因 组 物 质 离 子 等, 它 们 在 牙 周 炎 诊 断 评 估 特 别 是 牙 周 炎 与 全 身 疾 病 关 系 评 估 中 有 着 潜 在 的 应 用 价 值 唾 液 中 siga IgG 和 溶 菌 酶 的 含 量 变 化, 在 牙 周 病 诊 断 治 疗 方 面 的 应 用 价 值 日 益 受 到 国 内 外 学 者 的 关 注 牙 龈 炎 的 发 生 与 唾 液 中 的 溶 菌 酶 含 量 升 高 相 关 Jentsch 等 在 用 透 明 质 酸 对 由 菌 斑 诱 发 的 齿 龈 炎 的 治 疗 过 程 中 发 现, 发 病 部 位 的 溶 菌 酶 含 量 下 降 Surna 等 发 现, 牙 龈 炎 和 牙 周 炎 患 者 龈 沟 液 和 静 脉 血 中 溶 菌 酶 活 性 大 于 对 照 组, 而 在 唾 液 中 的 溶 菌 酶 活 性 却 小 于 对 照 组 唾 液 中 含 有 大 量 的 抗 菌 蛋 白, 溶 菌 酶 为 其 中 一 种, 研 究 发 现, 牙 周 病 患 者 溶 菌 酶 含 量 比 健 康 人 低, 因 此 认 为, 抗 菌 蛋 白 数 量 的 多 少 可 能 反 映 了 牙 周 炎 的 易 患 性 大 部 分 研 究 都 是 对 龈 沟 液 及 唾 液 中 溶 菌 酶 进 行 检 测 而 Younes 等 对 牙 龈 中 的 溶 菌 酶 研 究 发 现, 健 康 人 及 牙 龈 炎 患 者 牙 龈 中 的 抗 弹 性 纤 维 蛋 白 溶 解 能 力 要 低 于 牙 周 炎 患 者, 进 一 步 研 究 发 现, 牙 周 炎 患 者 牙 龈 弹 性 纤 维 蛋 白 周 围 有 大 量 溶 菌 酶 存 在 这 说 明 溶 菌 酶 在 保 护 病 理 状 态 下 牙 龈 中 的 弹 性 纤 维 蛋 白 发 挥 重 要 作 用 Sakalauskiene 等 检 测 20 ~ 40 岁 牙 周 炎 患 者 牙 周 状 况 和 外 周 静 脉 血 中 的 嗜 酸 性 粒 细 胞 接 触 各 种 抗 原 后 的 分 泌 情 况 发 现, 嗜 酸 性 粒 细 胞 受 到 多 种 抗 原 的 影 响, 在 牙 龈 炎 和 牙 周 炎 患 者 的 非 细 胞 基 质 中 分 泌 大 量 溶 菌 酶 5 溶 菌 酶 与 复 发 性 阿 弗 他 溃 疡 复 发 性 阿 弗 他 溃 疡 是 一 种 极 为 常 见 的 口 腔 黏 膜 疾 病, 其 发 病 实 质 目 前 未 十 分 明 确, 现 代 医 学 倾 向 认 为 主 要 是 由 免 疫 机 制 受 损 所 致 在 口 腔
黏 膜 的 局 部 免 疫 中, 唾 液 起 着 重 要 的 作 用 近 年 来, 不 少 学 者 对 复 发 性 阿 弗 他 溃 疡 进 行 免 疫 学 研 究, 认 为 本 病 是 一 种 自 身 免 疫 性 疾 病 金 丹 对 复 发 性 阿 弗 他 溃 疡 患 者 唾 液 溶 菌 酶 水 平 的 研 究 发 现, 复 发 性 阿 弗 他 溃 疡 患 者 在 发 病 期 的 唾 液 溶 菌 酶 较 正 常 人 有 明 显 降 低, 唾 液 溶 菌 酶 的 降 低 可 影 响 口 腔 的 天 然 防 御 功 能, 致 口 腔 微 生 物 的 侵 袭 以 及 自 身 免 疫 反 应 对 组 织 的 破 坏 而 吴 慧 华 等 发 现, 复 发 性 阿 弗 他 溃 疡 患 者 唾 液 溶 菌 酶 的 含 量 较 正 常 人 明 显 升 高, 认 为 当 口 腔 黏 膜 发 生 病 变 时, 口 腔 内 环 境 发 生 了 变 化, 某 些 条 件 致 病 菌 大 量 繁 殖 成 为 致 病 菌, 溶 菌 酶 对 异 体 具 有 抗 原 性 ( 四 ) 溶 菌 酶 与 扁 平 苔 藓 口 腔 扁 平 苔 藓 (oral lichen planus,olp) 是 一 种 慢 性 炎 症 性 疾 病, 病 损 大 多 左 右 对 称, 可 发 生 在 黏 膜 任 何 部 位, 以 颊 部 多 见 根 据 病 损 基 部 黏 膜 状 况,OLP 分 为 非 糜 烂 型 和 充 血 糜 烂 型, 其 中 糜 烂 型 OLP 长 期 不 愈, 且 可 能 发 生 癌 变 口 腔 是 一 个 持 续 流 动 性 的 环 境, 念 珠 菌 必 须 借 助 其 黏 附 能 力 以 免 被 唾 液 冲 刷 掉 或 被 吞 咽 只 有 在 黏 附 发 生 之 后, 念 珠 菌 才 能 成 功 在 口 腔 中 定 植 并 随 之 致 病 因 此, 黏 附 力 在 念 珠 菌 的 定 植 中 具 有 重 要 意 义 曾 昕 等 发 现, 糜 烂 型 OLP 患 者 口 腔 中 分 离 的 白 色 念 珠 菌 的 黏 附 力 强 于 健 康 对 照 组 分 离 的 白 色 念 珠 菌 这 些 白 色 念 珠 菌 较 强 的 黏 附 力, 为 其 他 毒 力 因 素 作 用 的 发 挥 提 供 了 良 好 的 条 件, 从 而 参 与 了 糜 烂 型 OLP 的 发 生 发 展 不 同 类 型 OLP 与 念 珠 菌 感 染 相 关 性 : 糜 烂 型 念 珠 菌 感 染 高 于 斑 纹 型 研 究 表 明, OLP 患 者 的 病 变 面 积 及 病 程 与 念 珠 菌 感 染 存 在 相 关 性 ; 随 病 变 面 积 的 增 加,OLP 患 者 的 念 珠 菌 检 出 率 增 加 可 能 是 由 于 病 变 面 积 加 大, 为 念 珠 菌 黏 附 提 供 了 更 好 的 生 长 条 件, 使 念 珠 菌 感 染 概 率 增 加 但 念 珠 菌 感 染 是 致 病 因 素 还 是 继 发 于 OLP 的 感 染 目 前 尚 无 定 论, 不 能 排 除 OLP 伴 念 珠 菌 感 染 会 增 大 癌 变 概 率 由 于 OLP 常 会 迁 延 多 年 不 能 治 愈, 长 期 糜 烂 病 损 有 恶 变 现 象, 因 此 减 少 糜 烂 病 损 有 助 于 减 小 癌 变 的 可 能 性 念 珠 菌 参 与 了 糜 烂 型 OLP 的 发 生 发 展, 而 溶 菌 酶 能 有 效 地 抗 真 菌 感 染, 可 能 在 预 防 癌 变 中 起 到 一 定 作 用 李 瑛 等 对 68 例 OLP 患 者 应 用 生 物 溶 菌 酶 喷 雾 剂 ( 商 品 名 : 新 净 界 ) 并 配 以 中 药 治 疗 发 现, 中 西 药 结 合 治 疗 OLP 可 使 其 症 状 减 轻, 促 进 黏 膜 糜 烂 面 愈 合, 并 可 减 少 复 发 局 部 应 用 生 物 溶 菌 酶 配 合 中 药 治 疗 OLP, 具 有 较 好 的 临 床 疗 效
讨 论 综 上 所 述, 溶 菌 酶 作 为 口 腔 非 特 异 性 抗 菌 蛋 白 酶, 在 机 体 固 有 免 疫 中 发 挥 很 大 的 作 用 其 在 唾 液 中 的 含 量 及 活 性, 随 着 细 菌 真 菌 感 染 而 发 生 变 化 溶 菌 酶 对 牙 周 炎 患 者 病 理 状 态 下 的 弹 性 纤 维 蛋 白 有 一 定 的 保 护 作 用 理 论 上, 口 腔 中 溶 菌 酶 越 少 越 不 易 发 生 龋 坏 溶 菌 酶 对 口 腔 黏 膜 病 治 疗 有 一 定 作 用 参 考 文 献 [1] 金 丹. 口 腔 溃 疡 患 者 唾 液 溶 菌 酶 水 平 的 研 究 [J]. 湖 北 中 医 学 院 学 报,2009,11(2): 26-27. [2] 吴 慧 华, 王 燕 秋. ROU 患 者 唾 液 和 血 清 免 疫 球 蛋 白 变 化 的 观 察 临 床 [J]. 临 床 口 腔 医 学 杂 志,2005,21(5):308-309. [3] 许 凌 云, 吴 俊 丽. 中 西 医 结 合 治 疗 糜 烂 型 口 腔 扁 平 苔 藓 疗 效 评 价 [J]. 中 国 实 用 口 腔 科 杂 志,2011,4(2):103-104. [4] 曾 昕, 陈 谦 明, 聂 敏 海, 等. 口 腔 扁 平 苔 藓 患 者 白 色 念 珠 菌 分 离 株 的 颊 细 胞 粘 附 力 研 究 [J]. 华 西 口 腔 医 学 杂 志,2005,23(6):537-538. [5] 朱 建 华, 赵 雯 雯, 毕 庆 伟, 等. 口 腔 扁 平 苔 藓 与 念 珠 菌 感 染 相 关 性 研 究 [J]. 医 学 研 究 杂 志,2010,39(10):97-98. [6] 李 瑛, 马 华, 韩 剑 星. 生 物 溶 菌 酶 加 中 药 治 疗 OLP 68 例 疗 效 观 察 [J]. 临 床 口 腔 医 学 杂 志,2005,22(5):317-318. 2012-06 - 02 收 稿 2010-08 - 20 修 回 本 文 编 辑 : 赵 丽 颖