动 物 学 杂 志 任 培 丽 张 迎 梅 耿 广 琴 漆 永 梅 兰 州 大 学 生 命 科 学 学 院 兰 州 为 探 讨 污 染 环 境 对 鱼 类 外 周 血 细 胞 形 态 及 数 量 的 影 响 本 研 究 选 择 相 对 无 污 染 的 刘 家 峡 水 库 和 污 染 较 严 重 的 黄 河 白 银 段 为 研 究 地 点 以 鲫 鱼 为 研 究 对 象 常 规 方 法 制 血 涂 片 染 色 统 计 红 细 胞 微 核 率 核 异 常 率 和 各 类 血 细 胞 数 量 并 用 带 有 数 码 采 集 头 的 显 微 镜 拍 照 各 类 细 胞 结 果 表 明 与 刘 家 峡 水 库 相 比 黄 河 白 银 段 鲫 鱼 红 细 胞 数 量 显 著 减 少 核 异 常 率 和 微 核 率 显 著 增 加 白 细 胞 总 数 和 淋 巴 细 胞 数 量 显 著 增 加 而 嗜 中 性 粒 细 胞 和 血 栓 细 胞 数 量 显 著 减 少 单 核 细 胞 数 量 虽 有 减 少 趋 势 但 两 地 差 异 不 显 著 表 明 黄 河 白 银 段 污 染 对 鲫 鱼 外 周 血 细 胞 数 量 及 红 细 胞 微 核 率 和 核 异 常 率 具 有 显 著 的 影 响 鲫 鱼 外 周 血 细 胞 红 细 胞 微 核 核 异 常 水 污 染 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 通 讯 作 者 任 培 丽 女 硕 士 研 究 方 向 环 境 毒 理 学 收 稿 日 期 修 回 日 期
动 物 学 杂 志 卷 外 源 化 合 物 进 入 高 等 动 物 体 后 通 过 血 液 参 与 机 体 循 环 输 送 到 靶 器 官 可 与 血 液 中 的 细 胞 功 能 蛋 白 等 发 生 作 用 因 此 血 液 指 标 被 广 泛 地 用 来 评 价 鱼 类 的 健 康 状 况 营 养 状 况 及 对 环 境 的 适 应 能 力 是 良 好 的 生 理 病 理 和 毒 理 学 指 标 鱼 类 外 周 血 细 胞 变 化 如 数 量 形 态 遗 传 特 性 等 是 机 体 在 环 境 胁 迫 下 敏 感 的 特 征 性 指 标 前 人 的 研 究 大 多 集 中 在 室 内 单 一 毒 物 如 铜 离 子 林 丹 等 对 鱼 类 血 液 的 影 响 然 而 污 染 物 多 以 低 浓 度 混 合 形 式 暴 露 于 水 体 之 中 对 生 物 机 体 及 环 境 带 来 潜 在 的 健 康 和 生 态 危 害 而 以 污 染 环 境 条 件 下 野 生 种 群 为 研 究 对 象 的 报 道 甚 少 本 研 究 选 择 相 对 无 污 染 的 刘 家 峡 水 库 和 污 染 较 严 重 的 黄 河 白 银 段 为 研 究 样 地 选 择 广 泛 分 布 的 鲫 鱼 为 研 究 对 象 比 较 两 地 鲫 鱼 外 周 血 细 胞 数 量 红 细 胞 微 核 和 核 异 常 等 指 标 的 变 化 旨 在 探 索 低 浓 度 污 染 条 件 下 鱼 类 外 周 血 细 胞 形 态 及 数 量 的 变 化 规 律 和 趋 势 为 鱼 类 血 液 学 和 遗 传 毒 理 学 研 究 以 及 水 污 染 的 生 物 监 测 提 供 参 考 依 据 材 料 与 方 法 选 择 位 于 黄 河 兰 州 段 上 游 偏 西 南 约 相 对 无 污 染 的 刘 家 峡 水 库 为 本 研 究 的 对 照 样 地 图 其 周 围 多 为 黄 河 沿 岸 滩 涂 草 地 无 工 矿 企 业 基 本 无 有 机 物 重 金 属 类 污 染 水 流 平 缓 水 质 透 明 度 大 于 水 质 为 Ò 类 选 择 位 于 黄 河 兰 州 段 下 游 东 北 约 污 染 较 严 重 的 黄 河 白 银 段 水 川 镇 位 于 白 银 市 城 区 南 黄 河 北 岸 为 研 究 样 地 图 近 年 来 由 于 工 农 业 的 发 展 来 自 上 游 兰 州 市 和 白 银 市 的 大 量 工 农 业 废 水 废 渣 和 生 活 污 水 得 不 到 有 效 控 制 及 处 理 而 直 接 排 入 黄 河 致 使 该 段 黄 河 水 质 污 染 加 重 主 要 污 染 物 为 总 大 肠 杆 菌 化 学 需 氧 量 和 总 磷 水 质 属 于 中 度 污 染 的 Ó 或 Ô 类 参 自 中 国 环 境 监 测 水 质 月 报 以 及 黄 河 流 域 省 界 水 体 及 重 点 河 段 水 质 质 量 状 况 通 报 定 期 公 布 的 两 地 黄 河 现 状 水 质 以 及 规 划 的 水 质 类 别 龄 以 下 鲫 鱼 于 年 月 分 别 采 自 刘 家 峡 水 库 和 位 于 水 川 镇 的 黄 河 白 银 段 其 中 刘 家 峡 水 库 尾 平 均 体 长 平 均 体 重 黄 河 白 银 段 尾 平 均 体 长 平 均 体 重 实 验 用 鱼 麻 醉 后 断 尾 取 血 将 血 液 滴 于 柠 檬 酸 钠 浸 润 的 洁 净 小 培 养 皿 中 待 用 细 胞 计 数 红 细 胞 计 数 用 红 细 胞 稀 释 液 加 蒸 馏 水 至 将 血 液 稀 释 倍 待 白 细 胞 完 全 溶 解 后 吸 取 红 细 胞 悬 液 用 计 数 板 在 显 微 镜 下 计 数 每 尾 鱼 做 个 平 行 白 细 胞 计 数 用 白 细 胞 稀 释 液 冰 醋 酸 龙 胆 紫 加 蒸 馏 水 至 将 血 液 稀 释 倍 待 红 细 胞 完 全 溶 解 后 吸 取 白 细 胞 悬 液 用 计 数 板 在 显 微 镜 下 计 数 每 尾 鱼 做 个 平 行 红 细 胞 微 核 核 异 常 统 计 用 消 毒 后 的 注 射 器 吸 取 少 许 血 液 在 用 酒 精 浸 泡 过 的 干 净 载 玻 片 上 均 匀 涂 制 单 细 胞 层 自 然 风 干 后 甲 醇 固 定 用 的 染 液 染 色 蒸 馏 水 流 水 冲 洗 自 然 晾 干 后 镜 检 每 尾 鱼 做 张 平 行 片 在 带 有 数 码 采 集 头 的 显 微 镜 麦 克 奥 迪 实 业 集 团 有 限 公 司 生 产 下 每 张 涂 片 随 机 拍 摄 个 视 野 统 计 每 个 视 野 内 的 红 细 胞 总 数 含 微 核 的 红 细 胞 数 及 核 异 常 情 况 白 细 胞 分 类 计 数 如 中 的 方 法 每 尾 鱼 制 张 平 行 涂 片 每 张 涂 片 油 镜 下 随 机 观 察 个 白 细 胞 记 录 淋 巴 细 胞 单 核 细 胞 嗜 中 性 粒 细 胞 和 血 栓 细 胞 数 量
期 任 培 丽 等 污 染 水 域 鲫 鱼 外 周 血 细 胞 形 态 和 数 量 的 变 化 示 采 样 点 利 用 分 析 软 件 进 行 检 验 分 析 两 样 地 各 指 标 间 的 差 异 性 差 异 显 著 差 异 极 显 著 结 果 形 态 正 常 成 熟 的 红 细 胞 多 呈 椭 圆 形 表 面 光 滑 核 椭 圆 形 或 圆 形 多 位 于 细 胞 中 央 图 染 色 后 细 胞 核 呈 蓝 紫 色 细 胞 质 呈 较 浅 的 橙 黄 色 统 计 中 还 发 现 了 大 量 正 在 进 行 正 常 有 丝 分 裂 的 红 细 胞 和 未 成 熟 的 幼 红 细 胞 前 者 分 裂 时 细 胞 拉 长 中 间 出 现 缢 痕 同 时 核 也 向 两 极 伸 展 呈 哑 铃 形 图 后 者 呈 圆 形 较 大 核 圆 形 图 微 核 图 的 染 色 特 点 与 主 核 一 致 直 径 约 为 主 核 的 在 细 胞 质 中 的 位 置 有 些 紧 靠 细 胞 核 有 些 位 于 细 胞 质 边 缘 有 些 甚 至 出 现 双 微 核 现 象 图 两 样 地 鲫 鱼 红 细 胞 的 其 他 核 异 常 情 况 如 图 所 示 数 量 微 核 率 及 核 异 常 率 与 对 照 样 地 相 比 鲫 鱼 红 细 胞 数 量 显 著 减 少 图 核 异 常 率 显 著 增 加 图 微 核 率 极 显 著 增 加 图 分 类 淋 巴 细 胞 是 白 细 胞 中 最 多 的 一 种 光 镜 下 可 以 分 为 小 淋 巴 细 胞 和 大 淋 巴 细 胞 以 小 淋 巴 细 胞 为 主 小 淋 巴 细 胞 为 圆 形 或 不 规 则 圆 形 有 明 显 的 伪 足 样 突 起 图 大 淋 巴 细 胞 圆 形 表 面 有 很 多 微 绒 毛 样 突 起 图 两 者 核 都 较 大 占 细 胞 的 以 上 有 时 可 见 胞 质 薄 薄 地 包 裹 在 核 的 外 面 染 色 后 细 胞 核 被 染 成 蓝 紫 色 细 胞 质 呈 浅 蓝 色 单 核 细 胞 在 外 周 血 中 数 量 极 少 细 胞 不 规 则 圆 形 边 缘 不 光 滑 核 肾 形 或 椭 圆 形 占 整 个 细 胞 的 偏 于 细 胞 一 侧 与 细 胞 膜 相 切 核 中 染 色 质 分 布 疏 松 胞 质 丰 富 其 中 有 大 小 不 等 的 空 泡 图 染 色 后 细 胞 核 被
动 物 学 杂 志 卷 成 熟 红 细 胞 均 等 缢 裂 幼 红 细 胞 微 核 双 微 核 核 质 内 凹 核 质 外 凸 分 叶 核 小 核 无 核 核 内 空 泡 化 核 碎 裂 核 固 缩 核 位 异 常 不 均 等 缢 裂 示 差 异 显 著 染 成 蓝 紫 色 细 胞 质 呈 浅 蓝 色 嗜 中 性 粒 细 胞 是 粒 细 胞 中 最 多 的 一 种 在 外 周 血 涂 片 中 很 容 易 找 到 细 胞 呈 圆 形 卵 圆 形 或 不 规 则 圆 形 边 缘 平 整 核 形 状 多 样 有 梭 形 图 圆 形 图 哑 铃 形 图 半 月 形 图 等 还 可 见 分 叶 核 图 核 多 偏 于 细 胞 一 侧 约 占 细 胞 的 染 色 后 核 被 染 成 蓝 紫 色 细 胞 质 几 乎 不 着 色 示 差 异 显 著 示 差 异 极 显 著 下 同 血 栓 细 胞 在 血 涂 片 上 往 往 可 见 几 个 聚 集 在 一 起 细 胞 多 呈 纺 锤 形 或 圆 形 图 有 些 呈 蝌 蚪 状 图 长 椭 圆 形 图 纺 锤 形 图 等 核 占 细 胞 的 绝 大 部 分 染 色 后 核 被 染 成 蓝 紫 色 细 胞 质 几 乎 不 着 色 或 呈 很
期 任 培 丽 等 污 染 水 域 鲫 鱼 外 周 血 细 胞 形 态 和 数 量 的 变 化 小 淋 巴 细 胞 示 伪 足 样 突 起 大 淋 巴 细 胞 示 微 绒 毛 样 突 起 单 核 细 胞 示 细 胞 质 空 泡 嗜 中 性 粒 细 胞 示 梭 形 核 嗜 中 性 粒 细 胞 示 圆 形 核 嗜 中 性 粒 细 胞 示 哑 铃 形 核 嗜 中 性 粒 细 胞 示 半 月 形 核 嗜 中 性 粒 细 胞 示 双 叶 核 成 堆 血 栓 细 胞 蝌 蚪 状 血 栓 细 胞 长 椭 圆 形 血 栓 细 胞 纺 锤 形 血 栓 细 胞 淡 的 蓝 色 数 量 统 计 过 程 中 将 大 淋 巴 细 胞 和 小 淋 巴 细 胞 合 计 为 淋 巴 细 胞 因 只 发 现 个 嗜 酸 性 粒 细 胞 未 发 现 嗜 碱 性 粒 细 胞 故 仅 对 淋 巴 细 胞 嗜 中 性 粒 细 胞 血 栓 细 胞 和 单 核 细 胞 种 类 型 的 白 细 胞 进 行 了 分 类 计 数 结 果 显 示 与 相 比 鲫 鱼 白 细 胞 总 数 显 著 增 加 图 但 是 除 淋 巴 细 胞 显 著 增 加 外 嗜 中 性 粒 细 胞 和 血 栓 细 胞 显 著 减 少 单 核 细 胞 虽 有 减 少 但 两 地 差 异 不 显 著 图 鲫 鱼 外 周 血 红 细 胞 形 态 及 其 核 形 态 比 较 规 则 所 以 对 红 细 胞 数 量 微 核 率 及 核 异 常 率 都 进 行 了 统 计 白 细 胞 形 态 多 样 核 形 状 亦 不 规 则 因 此 仅 对 白 细 胞 总 数 和 各 类 白 细 胞 的 数 量 进 行 了 分 类 计 数 未 对 其 形 态 变 化 进 行 分 类 统 计 讨 论 一 般 认 为 微 核 的 形 成 是 由 于 外 源 物 质 的 干 扰 染 色 体 断 裂 在 细 胞 分 裂 过 程 中 无 着 丝 点 的 染 色 体 断 片 无 法 进 入 到 子 细 胞 中 而 在 细 胞 核 外 产 生 微
动 物 学 杂 志 卷 小 的 核 也 有 人 认 为 微 核 是 主 核 外 凸 形 成 的 原 因 是 有 些 微 核 与 主 核 有 一 细 丝 相 连 我 们 在 阅 片 过 程 中 也 发 现 了 有 些 微 核 与 主 核 有 细 丝 相 连 推 测 可 能 是 水 质 对 细 胞 核 产 生 了 毒 性 引 起 核 外 凸 而 形 成 微 核 这 与 耿 德 贵 等 的 研 究 结 果 一 致 有 学 者 推 测 可 能 是 由 于 主 核 有 能 力 识 别 那 些 与 核 质 不 融 洽 的 异 常 的 导 致 核 质 外 凸 以 出 芽 的 形 式 形 成 微 核 而 消 失 两 样 地 的 核 异 常 现 象 中 图 双 微 核 分 叶 核 和 核 破 碎 仅 见 于 样 地 其 他 核 异 常 为 两 样 地 所 共 有 核 异 常 多 样 性 可 能 反 映 了 血 细 胞 对 环 境 变 化 的 敏 感 性 一 些 核 异 常 可 能 恰 恰 是 环 境 作 用 的 后 果 因 此 核 异 常 现 象 可 以 作 为 环 境 质 量 的 监 测 指 标 与 对 照 相 比 微 核 率 核 异 常 率 升 高 图 表 明 该 河 段 水 质 对 鱼 类 机 体 具 有 明 显 的 遗 传 毒 性 效 应 各 类 白 细 胞 数 量 变 化 被 认 为 是 对 环 境 胁 迫 最 敏 感 的 血 液 指 标 而 且 与 机 体 抵 抗 疾 病 有 必 然 的 联 系 所 以 白 细 胞 数 量 变 化 既 是 监 测 水 环 境 质 量 的 指 标 又 是 评 价 鱼 类 健 康 状 况 营 养 状 况 及 其 对 环 境 适 应 性 的 重 要 指 标 研 究 结 果 表 明 在 污 染 较 严 重 的 淋 巴 细 胞 明 显 增 多 可 能 是 由 于 有 毒 物 质 刺 激 鱼 类 免 疫 系 统 引 起 的 嗜 中 性 粒 细 胞 减 少 可 能 是 有 关 免 疫 器 官 生 理 活 动 增 强 的 结 果 血 栓 细 胞 有 类 似 于 人 类 血 小 板 的 凝 血 功 能 其 数 量 的 减 少 意 味 着 鲫 鱼 的 凝 血 功 能 受 到 影 响 由 于 白 细 胞 是 重 要 的 免 疫 相 关 细 胞 在 特 异 性 和 非 特 异 性 的 分 子 的 和 体 液 的 免 疫 应 答 中 有 重 要 作 用 故 污 染 已 对 鲫 鱼 的 免 疫 系 统 构 成 了 一 定 程 度 的 威 胁 研 究 证 明 水 环 境 污 染 对 鱼 类 外 周 血 细 胞 数 量 形 态 及 核 异 常 方 面 都 产 生 了 显 著 影 响 结 果 对 采 用 鱼 类 血 液 作 为 环 境 监 测 指 示 物 评 价 水 环 境 质 量 的 生 物 学 效 应 提 供 了 参 考 依 据 毒 性 的 体 外 研 究 环 境 化 学 周 玉 鱼 类 血 液 学 指 标 研 究 的 进 展 上 海 水 产 大 学 学 报 南 旭 阳 铜 离 子 对 鲫 鱼 红 细 胞 白 细 胞 和 血 红 蛋 白 的 影 响 江 西 科 学 朱 洪 文 王 浩 秦 国 强 鲫 鱼 外 周 血 细 胞 显 微 和 亚 显 微 结 构 的 观 察 动 物 学 研 究 周 玉 郭 文 场 杨 振 国 等 欧 洲 鳗 鲡 外 周 血 细 胞 的 显 微 和 超 微 结 构 动 物 学 报 楼 允 东 吴 萍 亚 硝 基 胍 对 泥 鳅 红 细 胞 微 核 及 核 异 常 的 诱 发 中 国 环 境 科 学 耿 德 贵 刘 文 韩 燕 等 除 草 剂 盖 草 能 对 黄 鳝 外 周 血 红 细 胞 微 核 和 核 异 常 的 影 响 徐 州 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 张 民 顾 宇 飞 顾 颖 等 低 浓 度 五 氯 酚 对 鲫 鱼 血 液 细 胞