第 31 卷 第 1 期 2012 年 2 月 华 中 农 业 大 学 学 报 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Vol.31 No.1 Feb.2012,106~111 饲 料 中 添 加 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 表 观 消 化 率 及 消 化 酶 活 性 的 影 响 曲 艺 吴 志 新 杨 丽 彭 小 云 袁 娟 毕 鹏 刘 红 陈 孝 煊 华 中 农 业 大 学 水 产 学 院, 武 汉 430070 摘 要 在 草 鱼 (Ctenopharyngodonidelus) 饲 料 中 分 别 添 加 0(Ⅰ 组 ) 1 10 8 (Ⅱ 组 ) 3 10 8 (Ⅲ 组 ) 5 10 8 cfu/g(Ⅳ 组 ) 芽 孢 杆 菌 (Bacilusspp.) 持 续 投 喂 草 鱼, 收 集 粪 便 测 定 草 鱼 对 各 营 养 物 质 的 表 观 消 化 率 和 消 化 酶 活 性 结 果 表 明 : 投 喂 30d 后,Ⅱ Ⅲ 组 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 表 观 消 化 率 和 Ⅳ 组 粗 蛋 白 粗 脂 肪 表 观 消 化 率 均 显 著 高 于 Ⅰ 组 ( 对 照 组 ), 其 中 Ⅱ 组 的 表 观 消 化 率 最 高, 且 芽 孢 杆 菌 添 加 量 与 营 养 物 质 表 观 消 化 率 最 符 合 一 元 二 次 曲 线 方 程 Ⅱ 组 中 肠 和 Ⅱ Ⅲ 组 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 均 显 著 提 高 ;Ⅱ 组 的 前 肠 和 后 肠 淀 粉 酶 活 性 显 著 高 于 对 照 组 ; Ⅱ Ⅲ 组 后 肠 脂 肪 酶 活 性 均 显 著 高 于 对 照 组 投 喂 60d 后, 消 化 酶 活 性 也 有 相 似 的 结 果 双 因 子 方 差 分 析 表 明 : 芽 孢 杆 菌 的 添 加 量 对 中 肠 后 肠 和 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性, 前 肠 中 肠 和 后 肠 淀 粉 酶 活 性, 中 肠 和 后 肠 脂 肪 酶 活 性 均 有 显 著 影 响 ; 投 喂 时 间 对 肝 胰 脏 蛋 白 酶 淀 粉 酶 活 性 有 显 著 影 响 关 键 词 草 鱼 ; 芽 孢 杆 菌 ; 表 观 消 化 率 ; 蛋 白 酶 活 性 ; 淀 粉 酶 活 性 ; 脂 肪 酶 活 性 中 图 分 类 号 S963.73 + 9;Q959.46 + 8 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 1000-2421(2012)01-0106-06 芽 孢 杆 菌 为 革 兰 氏 阳 性 菌, 可 分 泌 多 种 胞 外 酶 [1-3] 和 抗 菌 化 合 物, 已 被 广 泛 使 用 于 水 产 养 殖 通 常 认 为, 芽 孢 杆 菌 可 增 强 动 物 对 营 养 物 质 的 消 化 吸 收 产 生 抑 制 性 化 合 物 竞 争 排 斥 致 病 菌 改 善 水 质 增 强 的 草 鱼 360 尾, 随 机 分 成 4 组, 其 中 Ⅰ 组 为 对 照 组, Ⅱ Ⅲ Ⅳ 组 为 试 验 组, 每 组 设 3 个 平 行 试 验 共 12 个 水 族 箱 (H60cm Φ80cm), 每 个 水 族 箱 放 养 30 尾 草 鱼, 个 体 初 始 质 量 (34.26±1.02)g [4] 动 物 的 免 疫 反 应 研 究 表 明, 芽 孢 杆 菌 能 显 著 促 进 凡 纳 滨 对 虾 (Litopenaeusvannamei) 异 育 银 鲫 1.2 试 验 菌 种 芽 孢 杆 菌 (Bacilusspp.) 分 离 自 草 鱼 肠 道, 由 (Carassiusauratusgibelio) 的 生 长 和 提 高 饲 料 干 物 质 粗 蛋 白 和 磷 的 表 观 消 化 率, 也 可 提 高 奥 尼 罗 非 鱼 笔 者 所 在 实 验 室 分 离 保 存, 经 液 体 发 酵 收 集 后 用 于 本 试 验 (Oreochromisniloticus O.aureus ) 异 育 银 [5-7] 鲫 肝 胰 脏 及 肠 道 消 化 酶 活 性 本 文 分 析 了 日 粮 1.3 试 验 日 粮 将 各 饲 料 原 料 粉 碎, 经 过 充 分 均 匀 混 合 后, 用 制 中 添 加 芽 孢 杆 菌 后 对 草 鱼 饲 料 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 粗 灰 分 表 观 消 化 率 的 影 响 和 草 鱼 肠 道 及 肝 胰 脏 消 化 酶 活 性 的 变 化, 以 探 讨 芽 孢 杆 菌 的 促 消 化 机 制, 并 为 芽 孢 杆 菌 在 草 鱼 饲 料 中 的 合 理 利 用 提 供 一 定 的 科 学 依 据 粒 机 挤 压 成 直 径 为 1.5mm 的 颗 粒 饲 料,40 烘 干 即 为 基 础 日 粮 (Ⅰ 组 ) 通 过 喷 涂 菌 悬 液 的 方 式, 使 饲 料 中 分 别 含 芽 孢 杆 菌 1 10 8 (Ⅱ 组 ) 3 10 8 (Ⅲ 组 ) 5 10 8 cfu/g(Ⅳ 组 ) 基 础 日 粮 配 方 及 营 养 水 平 见 表 1 配 方 中 维 生 素 预 混 剂 中 各 物 质 的 含 量 1 材 料 与 方 法 1.1 试 验 鱼 试 验 用 草 鱼 (Ctenopharyngodonidelus) 购 自 华 中 农 业 大 学 水 产 基 地 选 择 健 康 规 格 基 本 一 致 为 : 维 生 素 A3500000IU 维 生 素 D3500000IU, 维 生 素 B15000mg 维 生 素 B210000 mg 维 生 素 B65000 mg 维 生 素 B12 25 mg 维 生 素 C50000 mg 维 生 素 E35000mg 维 生 素 H300mg 维 生 素 K34000mg 尼 克 酸 50000mg 叶 酸 2000mg 泛 收 稿 日 期 :2011-04-28 基 金 : 国 家 科 技 支 撑 计 划 (2007BAD37B02) 湖 北 省 十 一 五 科 技 攻 关 (2006AA203A02 2007AA203A01) 曲 艺, 硕 士 研 究 生. 研 究 方 向 : 水 产 动 物 营 养 与 免 疫.E-mail:quyi8607@163.com 通 讯 作 者 : 吴 志 新, 副 教 授. 研 究 方 向 : 鱼 类 营 养 与 免 疫.E-mail:wuzhixin@mail.hzau.edu.cn
第 1 期 曲 艺 等 : 饲 料 中 添 加 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 表 观 消 化 率 及 消 化 酶 活 性 的 影 响 107 酸 20000mg 肌 醇 150000 mg, 水 10%, 载 体 为 米 糠 ; 无 机 盐 预 混 剂 中 各 物 质 的 含 量 为 (g/kg): 镁 22.0, 铜 1.0, 锰 5.0, 碘 0.06, 铁 32.0, 钴 0.06, 60 天 取 样, 取 样 于 投 喂 6h 后 进 行, 每 个 水 族 箱 中 锌 8.0, 硒 0.02, 水 10%, 载 体 为 沸 石 粉 ` 表 1 基 础 日 粮 组 成 及 营 养 水 平 Table1 Compositionandnutrientcontentsofthebasicdiet 成 分 Ingredients 豆 粕 Soybeanmeal 鱼 粉 Fishmeal α- 淀 粉 α-starch 小 麦 粉 Wheatflour 菜 粕 Rapeseedmeal 维 生 素 预 混 剂 Vitaminpremix 无 机 盐 预 混 剂 Mineralpremix 含 量 /% Content 10.0 18.0 10.0 22.0 34.0 1.0 1.0 玉 米 油 Cornoil 2.5 氯 化 胆 碱 Cholinechoride 1.0 三 氧 化 二 铬 Cr2O3 0.5 1.4 饲 养 管 理 营 养 物 质 Nutrition 粗 蛋 白 Crudeprotein 粗 脂 肪 Crudelipid 粗 灰 分 Crudeash 水 分 Moisture 含 量 /% Content 31.73 5.30 6.91 9.38 试 验 在 室 内 配 备 有 微 流 水 和 充 氧 设 备 的 养 殖 系 统 中 进 行 按 鱼 体 质 量 的 3%~5% 于 每 日 09:00 16:00 两 次 定 点 投 喂, 随 鱼 体 的 生 长 调 整 投 喂 量, 投 喂 后 1 h 吸 除 残 饵 试 验 期 间 溶 氧 水 平 6~8 mg/l, 水 温 25~28, 试 验 周 期 为 60d 1.5 表 观 消 化 率 测 定 投 喂 试 验 日 粮 30d 后, 开 始 在 每 天 投 喂 2h 后 收 集 粪 便, 收 集 时 用 捞 网 捞 起 条 状 粪 便, 用 镊 子 选 择 新 鲜 外 表 带 有 包 膜 尽 可 能 完 整 的 粪 便 放 入 干 净 培 养 皿 中,60 烘 干,4 保 存, 待 测 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 和 粗 灰 分 表 观 消 化 率 其 中, 水 分 采 用 直 接 干 燥 法 蛋 白 质 采 用 凯 氏 定 氮 法 粗 脂 肪 采 用 索 氏 抽 提 法 测 定, 粗 灰 分 采 用 马 福 炉 灼 烧 法 测 定,Cr2O3 含 量 采 用 原 子 吸 收 分 光 光 度 计 (TAS-986) 火 焰 分 析 法 测 定 某 营 养 物 质 的 表 观 消 化 率 = [1- (Fc/Sc) (Sn/ Fn)] 100%; 干 物 质 表 观 消 化 率 =[1-(Fc/Sc)] 100% Fc: 饲 料 中 Cr2O3 的 含 量 ;Sc: 粪 便 中 Cr2O3 的 含 量 ;Fn: 饲 料 中 营 养 成 分 的 含 量 ;Sn: 粪 便 中 营 养 成 分 的 含 量 1.6 消 化 酶 活 性 测 定 1) 采 集 样 品 分 别 于 试 验 开 始 后 第 30 天 和 第 各 取 3 尾 草 鱼, 于 冰 盘 上 解 剖, 快 速 分 离 前 中 后 肠 和 肝 胰 脏, 剔 除 脂 肪 组 织,4 去 离 子 水 冲 洗, 滤 纸 吸 干 水 分,-20 保 存, 用 于 测 定 消 化 酶 活 性 2) 制 备 酶 液 将 肠 道 及 肝 胰 脏 按 m/v 为 1 10 的 比 例 加 入 4 三 蒸 水 冰 浴 匀 浆, 在 4 冰 箱 中 放 置 匀 浆 液 2h 后,4 11000r/min 离 心 30min, 取 上 清 液 进 行 消 化 酶 活 性 测 定,24h 内 测 定 完 毕 3) 测 定 方 法 蛋 白 酶 活 性 采 用 福 林 酚 试 剂 法, 蛋 白 酶 活 性 单 位 (U) 定 义 :lg 新 鲜 组 织 样 品 在 ph 7.5 和 37 条 件 下,1 min 水 解 酪 蛋 白 所 产 生 的 酪 氨 酸 量 [ μ g/(g min)] 淀 粉 酶 活 性 采 用 淀 粉 酶 试 剂 盒 ( 购 于 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 ) 测 定, 淀 粉 酶 活 性 单 位 (U) 定 义 :lg 新 鲜 组 织 样 品 在 ph7.5 和 37 条 件 下,1min 水 解 淀 粉 的 量 [mg/(g min)] 脂 肪 酶 活 性 用 聚 乙 烯 醇 橄 榄 油 乳 化 液 水 解 法, 脂 肪 酶 活 性 单 位 (U) 定 义 :lg 新 鲜 组 织 样 品 在 ph 7.5 和 40 条 件 下,1min 水 解 脂 肪 所 产 生 的 脂 肪 酸 量 [ μ g/(g min)] 1.7 数 据 统 计 与 分 析 试 验 数 据 均 用 平 均 值 ± 标 准 误 (mean±se) 表 示, 采 用 SPSS16.0 统 计 软 件 对 表 观 消 化 率 和 消 化 酶 活 性 数 据 作 单 因 素 方 差 分 析 (one-way-ano- VA), 若 组 间 差 异 显 著, 则 做 Duncan s 多 重 比 较, 显 著 水 平 P 采 用 0.05 对 芽 孢 杆 菌 添 加 量 和 投 喂 时 间 的 交 互 作 用 作 双 因 素 方 差 分 析 (two-way- ANOVA), 对 芽 孢 杆 菌 的 添 加 量 和 表 观 消 化 率 的 各 项 指 标 进 行 回 归 分 析 2 结 果 与 分 析 2.1 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 营 养 物 质 表 观 消 化 率 的 影 响 芽 孢 杆 菌 可 以 明 显 提 高 草 鱼 对 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 粗 灰 分 的 表 观 消 化 率 与 对 照 组 比 较,Ⅱ 组 和 Ⅲ 组 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 表 观 消 化 率 均 达 显 著 差 异 (P<0.05), 分 别 提 高 了 19.44% 和 12.01% 7.06% 和 3.33% 12.18% 和 8.6%, 粗 灰 分 表 观 消 化 率 仅 Ⅱ 组 达 显 著 差 异 (P <0.05), 提 高 了 12.91% Ⅳ 组 粗 蛋 白 粗 脂 肪 表 观 消 化 率 均 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05), 分 别 提 高 了 2.78% 和 6.43%; 干 物 质 和 粗 灰 分 表 观 消 化 率 比 对 照 组 有 所 升 高, 但 差 异 不 显 著 通 过 拟 合, 芽 孢 杆 菌 添 加 量 与 表 观 消
108 华 中 农 业 大 学 学 报 第 31 卷 化 率 之 间 最 符 合 一 元 二 次 曲 线 方 程, 详 见 表 2 著 差 异 投 喂 60d 后,Ⅱ 组 中 肠 和 Ⅱ Ⅲ 组 肝 胰 脏 2.2 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 蛋 白 酶 活 性 的 影 响 草 鱼 投 喂 芽 孢 杆 菌 30d 后,Ⅳ 组 后 肠 蛋 白 酶 活 蛋 白 酶 活 性 与 对 照 组 相 比 均 显 著 升 高, 且 Ⅱ 组 中 肠 和 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 最 高,Ⅳ 组 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 性 与 对 照 组 相 比 显 著 降 低 ;Ⅱ Ⅲ Ⅳ 组 中 肠 和 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 均 显 著 升 高,Ⅱ Ⅲ Ⅳ 组 组 间 均 无 显 与 Ⅱ Ⅲ 组 相 比 显 著 降 低 ; 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 与 第 30 天 相 比 则 显 著 降 低 详 见 表 3 表 2 1) 不 同 芽 孢 杆 菌 添 加 水 平 下 草 鱼 的 表 观 消 化 率 Table2 EfectofBacilusspp.ontheapparentdigestibilitycoeficientsofgrascarp % 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 粗 灰 分 Drymater Crudeprotein Crudelipid Crudeash 组 Ⅰ Group Ⅰ 68.25±1.82c 84.61±0.04d 79.96±1.25c 74.13±0.96b 组 Ⅱ Group Ⅱ 81.52±1.07a 90.58±0.02a 89.70±1.18a 83.70±0.35a 组 Ⅲ Group Ⅲ 76.45±1.39b 87.43±0.05b 86.84±0.56ab 75.75±0.36b 组 Ⅳ Group Ⅳ 69.83±0.89c 86.96±0.09c 85.10±1.98b 75.59±0.71b 最 佳 拟 合 曲 线 方 程 Thebestgoodnessoffitcurveequation y=70.694+ 7.883x-1.648x 2 y=84.607+ 8.485x-2.515x 2 y=81.544+ 6.57x-1.382x 2 y=74.133+ 14.086x-4.516x 2 相 关 指 数 R 2 RelatedindexR 2 0.595 0.999 0.626 0.957 P 值 P value 0.017 0.000 0.032 0.000 1) 同 一 列 数 据 标 注 不 同 字 母 表 示 差 异 显 著 (P<0.05) 下 同 Thesamecolumndatawithdiferentletersaresignificantlydiferent (P<0.05).Thesameasbelow. 表 3 投 喂 芽 孢 杆 菌 后 草 鱼 蛋 白 酶 活 性 的 变 化 1) Table3 ChangeonproteaseactivityofgrascarpafteringestionofBacilusspp. μg/(g min) 前 肠 中 肠 后 肠 肝 胰 脏 Fore-gut Miḏgut Hinḏgut Hepatopancreas Ⅰ30 423.16±39.92a 265.18±8.76c 452.51±11.89ab 143.40±1.99d Ⅱ30 417.52±21.03a 308.36±7.47a 475.19± 6.60a 183.21±3.42ab Ⅲ30 429.06±14.26a 314.16±2.85a 454.55±11.85ab 187.73±2.51a 组 别 + 时 间 /d Groups+time Ⅳ30 421.92±11.09a 306.07±5.31ab 417.78± 6.82c 183.14±2.61ab Ⅰ60 442.76±37.69a 290.08±1.96b 416.57± 3.28c 142.74±4.59d Ⅱ60 448.43±30.22a 319.71±3.65a 442.70± 8.39abc 173.27±4.37bc Ⅲ60 436.45±33.17a 303.46±2.59ab 433.97±14.67bc 171.42±1.49c Ⅳ60 457.29± 7.39a 302.82±6.04ab 436.01±13.38bc 149.11±3.07d 双 因 子 分 析 (P 值 ) Two-wayanalysis(Pvalue) 芽 孢 杆 菌 添 加 量 DosagesofBacilusspp. 0.992 0.000 0.037 0.000 投 喂 时 间 Feedingtime 0.240 0.160 0.211 0.000 芽 孢 杆 菌 添 加 量 投 喂 时 间 DosagesofBacilusspp. feedingtime 0.955 0.020 0.067 0.001 1)Ⅰ: 对 照 组 ;Ⅱ Ⅲ Ⅳ: 芽 孢 杆 菌 添 加 量 分 别 为 1 10 8 3 10 8 5 10 8 cfu/g 的 试 验 组,30 60 为 投 喂 时 间 (d) 下 表 同 Ⅰ:Coṉ trol;Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ:treatmentssupplementedwith1 10 8,3 10 8,5 10 8 cfu/gbacilusspp.respectively.30,60werefeedingtime (d).thesameasfolowingtables. 双 因 子 分 析 结 果 表 明, 芽 孢 杆 菌 添 加 量 对 草 鱼 中 肠 后 肠 和 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 均 有 显 著 影 响, 投 喂 时 间 仅 对 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 有 显 著 影 响 两 者 的 交 互 作 用 对 中 肠 和 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 均 有 显 著 影 响 2.3 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 淀 粉 酶 活 性 的 影 响 草 鱼 投 喂 芽 孢 杆 菌 30d 后,Ⅱ Ⅲ 组 前 肠 和 Ⅱ 组 中 肠 及 后 肠 的 淀 粉 酶 活 性 与 对 照 组 相 比 显 著 升 高,Ⅱ Ⅲ Ⅳ 组 组 间 均 无 显 著 差 异 投 喂 芽 孢 杆 菌 60d 后,Ⅱ 组 前 肠 和 后 肠 的 淀 粉 酶 活 性 显 著 高 于 对 照 组, 且 Ⅱ 组 前 肠 后 肠 淀 粉 酶 活 性 均 为 最 高,Ⅳ 组 前 肠 后 肠 淀 粉 酶 活 性 与 Ⅱ 组 相 比 显 著 降 低 ;Ⅱ Ⅳ 组 第 60 天 肝 胰 脏 淀 粉 酶 活 性 与 第 30 天 相 比 显 著 降 低 详 见 表 4 芽 孢 杆 菌 添 加 量 对 草 鱼 前 肠 中 肠 和 后 肠 淀 粉 酶 活 性 均 有 显 著 影 响, 投 喂 时 间 仅 对 肝 胰 脏 淀 粉 酶 活 性 有 显 著 影 响 两 者 的 交 互 作 用 对 草 鱼 前 肠 中
第 1 期 曲 艺 等 : 饲 料 中 添 加 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 表 观 消 化 率 及 消 化 酶 活 性 的 影 响 109 肠 后 肠 和 肝 胰 脏 淀 粉 酶 活 性 均 无 显 著 影 响 (P>0.05) 投 喂 60d 后,Ⅲ 组 中 肠 和 Ⅱ Ⅲ 组 后 肠 2.4 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 脂 肪 酶 活 性 的 影 响 草 鱼 投 喂 芽 孢 杆 菌 30d 后, 后 肠 脂 肪 酶 活 性 与 脂 肪 酶 活 性 显 著 高 于 对 照 组, 其 中 Ⅲ 组 中 肠 和 Ⅱ 组 后 肠 脂 肪 酶 活 性 最 高,Ⅳ 组 后 肠 脂 肪 酶 活 性 与 Ⅱ 组 相 比 对 照 组 相 比 显 著 升 高, 其 中 Ⅱ 组 的 脂 肪 酶 活 性 最 高, Ⅲ Ⅳ 组 显 著 低 于 Ⅱ 组,Ⅲ Ⅳ 组 组 间 无 差 异 显 著 降 低 各 组 前 肠 中 肠 后 肠 和 肝 胰 脏 第 30 天 与 第 60 天 脂 肪 酶 活 性 均 无 显 著 性 差 异 详 见 表 5 表 4 投 喂 芽 抱 杆 菌 后 草 鱼 淀 粉 酶 活 性 的 变 化 Table4 ChangeonamylaseactivityofgrascarpafteringestionofBacilusspp. mg/(g min) 前 肠 中 肠 后 肠 肝 胰 脏 Fore-gut Miḏgut Hinḏgut Hepatopancreas Ⅰ30 144.86±1.38c 304.26±3.74b 454.26±1.92b 458.51±2.66abc Ⅱ30 149.29±0.99a 317.02±2.46a 468.62±2.32a 467.02±1.92a Ⅲ30 148.76±1.24ab 312.06±0.71ab 461.17±1.84ab 453.19±4.02bcd 组 别 + 时 间 /d Groups+time Ⅳ30 147.34±0.31abc 312.41±0.35ab 458.51±7.39ab 463.83±5.32ab Ⅰ60 143.79±1.16c 304.96±4.53b 452.13±1.06b 441.49±2.13d Ⅱ60 148.76±0.47ab 312.41±0.94ab 469.68±1.41a 448.40±4.22cd Ⅲ60 145.04±1.24bc 312.41±1.42ab 462.77±2.44ab 448.40±0.00cd Ⅳ60 144.33±1.75c 309.22±2.33ab 453.19±4.02b 451.60±5.60cd 双 因 子 分 析 (P 值 ) Two-wayanalysis(Pvalue) 芽 孢 杆 菌 添 加 量 DosagesofBacilusspp. 0.007 0.006 0.001 0.085 投 喂 时 间 Feedingtime 0.201 0.352 0.625 0.000 芽 孢 杆 菌 添 加 量 投 喂 时 间 DosagesofBacilusspp. feedingtime 0.475 0.650 0.724 0.275 表 5 投 喂 芽 抱 杆 菌 后 草 鱼 脂 肪 酶 活 性 的 变 化 Table5 ChangeonlipaseactivityofgrascarpafteringestionofBacilusspp. μg/(g min) 前 肠 中 肠 后 肠 肝 胰 脏 Fore-gut Miḏgut Hinḏgut Hepatopancreas Ⅰ30 235.42±3.92a 326.97±7.28ab 204.03± 2.27d 299.50±13.84ab Ⅱ30 252.42±4.72a 345.28±5.99a 270.73±14.15a 299.50± 6.92ab Ⅲ30 247.19±7.85a 343.97±9.16a 238.03± 4.72bc 312.58± 3.46ab 组 别 + 时 间 /d Groups+time Ⅳ30 240.65±2.62a 334.81±5.70a 241.96±10.21bc 300.81± 6.92ab Ⅰ60 238.03±5.70a 309.97±4.53b 210.57± 7.96d 303.43± 5.70ab Ⅱ60 251.11±3.92a 326.97±3.46ab 257.65± 3.46ab 320.43± 2.62a Ⅲ60 241.96±5.70a 337.43±8.17a 240.65± 7.28bc 303.43± 6.54ab Ⅳ60 239.34±9.87a 326.97±1.31ab 218.41± 6.92cd 282.50±16.34b 双 因 子 分 析 (P 值 ) Two-wayanalysis(Pvalue) 芽 孢 杆 菌 添 加 量 DosagesofBacilusspp. 0.107 0.014 0.000 0.211 投 喂 时 间 Feedingtime 0.760 0.053 0.241 0.919 芽 孢 杆 菌 添 加 量 投 喂 时 间 DosagesofBacilusspp. feedingtime 0.932 0.698 0.243 0.189 芽 孢 杆 菌 添 加 量 对 中 肠 和 后 肠 脂 肪 酶 活 性 均 有 粗 蛋 白 表 观 消 化 率 较 对 照 组 分 别 提 高 了 6.72% 和 显 著 影 响, 投 喂 时 间 及 两 者 的 交 互 作 用 对 前 肠 中 肠 后 肠 和 肝 胰 脏 脂 肪 酶 活 性 均 无 显 著 影 响 3 讨 论 3.1 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 营 养 物 质 表 观 消 化 率 的 影 响 [5] 刘 波 等 在 异 育 银 鲫 饲 料 中 添 加 200 和 300 mg/kg 地 衣 芽 孢 杆 菌 (B.licheniformis), 干 物 质 [6] 7.08% 5.61% 和 4.42% 付 天 玺 等 研 究 结 果 表 明, 饲 料 中 添 加 1.0 10 11 cfu/kg 的 凝 结 芽 孢 杆 菌 (B.coagulans) 能 显 著 促 进 奥 尼 罗 非 鱼 的 生 长 和 饲 [7] 料 营 养 物 质 的 利 用 Lin 等 在 凡 纳 滨 对 虾 日 粮 中 添 加 1 10 6 ~5 10 6 cfu/g 芽 孢 杆 菌, 显 著 提 高 了 干 物 质 粗 蛋 白 磷 氨 基 酸 及 脂 肪 酸 的 表 观 消 化 率 [8] 高 欣 等 在 配 合 饲 料 中 添 加 不 同 水 平 的 芽 孢 杆 菌 粉
110 华 中 农 业 大 学 学 报 第 31 卷 制 剂 投 喂 西 伯 利 亚 鲟 (Acipenserbaeri),0.2% 添 加 组 的 干 物 质 粗 蛋 白 粗 脂 肪 碳 水 化 合 物 粗 灰 分 能 量 的 表 观 消 化 率 均 达 最 大 值 本 试 验 草 鱼 日 粮 中 添 加 不 同 浓 度 的 芽 孢 杆 菌, 添 加 量 为 1 10 8 cfu/g 试 验 组 的 表 观 消 化 率 最 高 添 加 芽 孢 杆 菌 可 以 提 高 饲 料 的 消 化 吸 收 率, 一 方 面 是 该 菌 种 在 消 化 道 内 定 殖 生 长 繁 殖, 直 接 产 生 维 生 素 氨 基 酸 短 链 脂 肪 酸 等 多 种 营 养 物 质, 还 能 产 生 较 强 的 蛋 白 酶 淀 粉 酶 脂 肪 酶 和 动 物 体 本 身 不 具 有 的 植 酸 酶 果 胶 酶 等 [9-10], 从 而 促 进 机 体 消 化 系 统 对 营 养 成 分 的 消 化 和 吸 收, 提 高 消 化 效 率 ; 另 一 方 面 与 促 进 动 物 肠 道 的 生 长 发 育, 增 加 小 肠 蠕 动 的 速 度, 提 高 肠 壁 厚 度 肠 粘 膜 高 度 以 及 肠 绒 毛 密 度 有 关 [11-12] 3.2 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 消 化 酶 活 性 的 影 响 有 报 道 表 明, 芽 孢 杆 菌 可 以 提 高 水 产 动 物 消 化 [13] 酶 活 性,Yu 等 在 凡 纳 滨 对 虾 日 粮 中 添 加 0.3% 芽 孢 杆 菌, 在 试 验 第 42 天 和 第 56 天 时 可 显 著 提 高 虾 [14] 的 肝 胰 脏 淀 粉 酶 比 活 力 华 雪 铭 等 报 道, 日 粮 中 添 加 0.1% 益 生 菌 ( 由 枯 草 杆 菌 B.subtilis 地 衣 芽 孢 杆 菌 和 嗜 热 球 状 芽 孢 杆 菌 B.thermosphaericus 混 合 而 成 ) 使 暗 纹 东 方 鲀 (Fuguobscurus) 幼 鱼 肠 道 [15] 淀 粉 酶 活 性 显 著 增 强 Liu 等 在 凡 纳 滨 对 虾 日 粮 中 添 加 10 8 cfu/kg 枯 草 芽 孢 杆 菌 E20, 投 喂 7d 肠 道 蛋 白 酶 活 性 提 高 232.77% 本 试 验 结 果 表 明, 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 同 一 种 消 化 酶 活 性 影 响 在 前 中 后 肠 和 肝 胰 脏 不 同, 对 草 鱼 消 化 系 统 同 一 组 织 不 同 种 类 消 化 酶 活 性 影 响 也 不 同 与 对 照 相 比, 日 粮 中 添 加 一 定 量 的 芽 孢 杆 菌, 草 鱼 前 肠 淀 粉 酶 活 性 中 肠 3 种 消 化 酶 活 性 后 肠 淀 粉 酶 和 脂 肪 酶 及 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 均 显 著 提 高, 说 明 日 粮 中 添 加 芽 孢 杆 菌 后 对 草 鱼 中 肠 和 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性, 前 肠 中 肠 和 后 肠 淀 粉 酶 活 性, 中 肠 和 后 肠 脂 肪 酶 活 性 有 显 著 影 响 试 验 结 果 显 示, 添 加 1 10 8 ~3 10 8 cfu/g 芽 孢 杆 菌 草 鱼 肠 道 和 肝 胰 脏 消 化 酶 活 性 可 达 最 高, 而 添 加 5 10 8 cfu/g 芽 孢 杆 菌 草 鱼 肠 道 和 肝 胰 脏 消 化 [16] 酶 活 性 则 低 于 前 者, 但 仍 高 于 对 照 组 刘 小 刚 等 在 异 育 银 鲫 的 基 础 饲 料 中 分 别 添 加 0.1% 0.2% 0.4% 芽 孢 杆 菌, 投 喂 60d 后, 各 组 肠 道 肝 胰 脏 蛋 白 酶 活 性 和 肠 道 肝 胰 脏 淀 粉 酶 活 性 变 化 趋 势 与 本 试 验 结 果 类 似 消 化 酶 活 性 随 芽 孢 杆 菌 添 加 量 的 增 加 上 升 到 一 定 程 度 时, 便 维 持 在 一 定 水 平, 这 可 解 释 为 草 鱼 长 期 采 食 所 添 加 的 芽 孢 杆 菌 可 引 起 肠 道 和 肝 胰 脏 的 适 应 性 分 泌 继 续 增 大 添 加 量, 酶 活 性 反 而 下 降 推 测 其 原 因 是 由 于 添 加 过 多 的 芽 孢 杆 菌 而 破 坏 了 肠 道 微 生 态 平 衡, 导 致 肠 道 内 菌 群 比 例 失 调, 并 在 肠 道 积 累 过 量 胞 外 产 物, 有 可 能 影 响 草 鱼 机 体 内 [6] 源 酶 活 性 或 者 抑 制 内 源 酶 的 分 泌 随 着 添 加 时 间 的 延 长, 酶 的 活 性 也 开 始 呈 下 降 趋 势, 提 示 我 们 在 生 产 中 使 用 芽 孢 杆 菌 的 时 间 不 宜 过 长 参 考 文 献 [1] MORIARTY DJW.Microbialbiotechnology:akeyingredient forsustainableaquaculture[j].infofishint,1996,4:29-33. [2] TAMCHIRO N,OKAMOTO Y,OKAMOTOS,etal.Bacilysocin,anovelphospholipidantibioticproducedbyBacilussuḇ tilis168 [J].AntimicrobAgentsCh,2002,46:315-320. [3] 冯 雪, 吴 志 新, 陈 孝 煊, 等. 草 鱼 和 银 鲫 肠 道 产 消 化 酶 细 菌 的 研 究 [J]. 淡 水 渔 业,2008,38(13):51-57. [4] VERSCHUEREL,ROMBAUT G,SORGELOOSP,etal.Probioticbacteriaasbiologicalcontrolagentsinaquaculture[J].MicrobiolMolBiolRev,2000,64(4):655-671. [5] 刘 波, 刘 文 斌, 王 恬. 地 衣 芽 孢 杆 菌 对 异 育 银 鲫 消 化 机 能 和 生 长 的 影 响 [J]. 南 京 农 业 大 学 学 报,2005,28(4):80-84. [6] 付 天 玺, 许 国 焕, 吴 月 嫦, 等. 凝 结 芽 孢 杆 菌 对 奥 尼 罗 非 鱼 消 化 酶 活 性 消 化 率 及 生 长 性 能 的 影 响 [J]. 淡 水 渔 业,2008,38(4): 30-35. [7] LIN HZ,GUOZX,YANGYY,etal.Efectofdietaryprobioticsonapparentdigestibilitycoeficientsofnutrientsofwhite shrimplitopenaeusvannameiboone [J].AquRes,2004,35: 1441-1447. [8] 高 欣, 盖 力 强, 李 美 英, 等. 芽 孢 杆 菌 对 西 伯 利 亚 鲟 幼 鱼 摄 食 生 长 和 消 化 率 的 影 响 [J]. 河 北 师 范 大 学 学 报,2009,33(3):377-382. [9] SOGARRD D H,DENMARKTS.Microbialsforfeedbeyond lacticacidbacteria[j].feedinter,1990,11(4):32-38. [10]ROY T,MONDALS,RAY A K.Phytase-producingbacteria inthedigestivetractsofsomefreshwaterfish[j].aquacres, 2009,40:344-353. [11] 余 成 瑶, 郑 黎, 周 毅. 肉 鸡 饲 喂 益 生 素 后 小 肠 粘 膜 上 皮 细 胞 肝 细 胞 超 微 结 构 功 能 研 究 [J]. 四 川 农 业 大 学 学 报,1996,14(1): 61-66. [12]MONGKOLS,KOH-EN Y.HistologicalalterationsofintestinalviliinchickensfeddriedBacilussubtilisvar.nato[J]. CompBiocheandPhysiolMolIntegrPhysiol,2002,133(1): 95-104. [13]YU M C,LIZJ,LINH Z,etal.Efectsofdietary medicinal herbsandbacilusonsurvival,growth,bodycomposition,and digestiveenzymeactivityofthewhiteshrimplitopenaeusvaṉ namei[j].aquacultint,2009,17:377-384. [14] 华 雪 铭, 周 洪 琪, 张 宇 峰, 等. 饲 料 中 添 加 壳 聚 糖 和 益 生 菌 对 暗 纹 东 方 鲀 幼 鱼 生 长 及 部 分 消 化 酶 活 性 的 影 响 [J]. 水 生 生 物 学 报,2005,29(3):299-305.
第 1 期 曲 艺 等 : 饲 料 中 添 加 芽 孢 杆 菌 对 草 鱼 表 观 消 化 率 及 消 化 酶 活 性 的 影 响 111 [15] LIU C H,CHIU C S,HO P L,etal.Improvementinthe growthperformanceofwhiteshrimp,litopenaeusvannamei, byaprotease-producingprobiotic,bacilussubtilis E20,from nato[j].japplmicrobiol,2009,107:1031-1041. [16] 刘 小 刚, 周 洪 琪, 华 雪 铭, 等. 微 生 态 制 剂 对 异 育 银 鲫 消 化 酶 活 性 的 影 响 [J]. 水 产 学 报,2002,26(5):448-452. DietarysupplementofBacilusspp.affectedapparentdigestibility, digestiveenzymeactivityofctenopharyngodonidelus QU Yi WU Zhi-xin YANG Li PENG Xiao-yun YUANJuan BIPeng LIU Hong CHEN Xiao-xuan ColegeofFisheries,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,China Abstract Ctenopharyngodonidelus werefed withbasaldietsupplemented with0 (Ⅰ),1 10 8 (Ⅱ),3 10 8 (Ⅲ),5 10 8 cfu/g(Ⅳ)bacilusspp.respectivelyfor30days.feceswascolectedtodetect apparentdigestibilityoffeednutrients.theapparentdigestibilityofdrymater,crudeproteinandcrude lipidin Ⅰ groupwassignificantlylowerthantheothertreatmentgroups(p<0.05).quadraticcurveequationwasthebesttofittherelationshipbetweendosagesofbacilusspp.andapparentdigestibilityof nutrients.proteaseactivityofthemiḏgutin ⅡgroupandthehepatopancreasinⅡ,Ⅲ groupsincreased significantlycomparedwith Ⅰ group (P<0.05).Amylaseactivityofthefore-gutandhinḏgutin Ⅱ groupincreasedsignificantlycomparedwith Ⅰ group(p<0.05).lipaseactivityofthehinḏgutinⅡ,Ⅲ groupincreasedsignificantlycomparedwith Ⅰ group (P<0.05).Afterfeedingfor60days,thesimilar resultsappeared.two-wayanalysisofvarianceshowedthatproteaseactivityofthe miḏgut,hinḏgut andthehepatopancreas,amylaseactivityofthefore-gut,miḏgutandhinḏgut,lipaseactivityofthemiḏ gutandhinḏgutwerealsignificantlyafectedbytheadditionaldoseagesofbacilusspp.(p<0.05). Proteaseactivityandamylaseactivityofthehepatopancreasweresignificantlyafectedbyfeedingdays (P<0.05). Keywords Ctenopharyngodonidelus;Bacilusspp.;apparentdigestibility;proteaseactivity; amylaseactivity;lipaseactivity ( 责 任 编 辑 : 边 书 京 )