应 对 当 今 食 品 分 析 挑 战 的 创 新 方 法 安 捷 伦 固 相 萃 取 食 品 安 全 应 用 文 集 第 一 卷 产 品 应 用 软 件 服 务
目 录 页 食 品 安 全 概 述............................................................................................................3 什 么 是 固 相 萃 取 (SPE)?....................................................................................................4 方 法 开 发 表..............................................................................................................5 农 药 和 污 染 物 引 言....................................................................................................................6 SampliQ Polymer SCX 固 相 萃 取 结 合 高 效 液 相 色 谱 测 定 苹 果 汁 中 苯 并 咪 唑 抗 真 菌 剂 ( 出 版 号 5990-3235CHCN).......................7 用 新 的 Aglient J&W DB-5ms 超 高 惰 性 色 谱 柱 和 SampliQ SCX 小 柱 在 Agilent 7890A/5975 GC/MSD 上 分 析 奶 制 品 中 的 痕 量 三 聚 氰 胺 ( 出 版 号 5990-3282EN)...........................................................................................9 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 技 术 快 速 筛 选 和 确 认 牛 奶 及 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 残 留 物 ( 出 版 号 5989-9950EN)....................................11 用 Agilent SampliQ 聚 合 物 SCX 固 相 萃 取 技 术 与 Agilent 1200 系 列 HPLC/UV 测 定 奶 粉 和 鸡 蛋 中 三 聚 氰 胺 残 留 物 ( 出 版 号 5990-3365EN)...................................................................................................13 用 Agilent 1120 一 体 式 液 相 色 谱 仪 和 1200 高 分 离 度 快 速 液 相 色 谱 系 统 以 及 SampliQ SCX 固 相 萃 取 小 柱 定 量 分 析 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 ( 出 版 号 5989-9949EN)...................................................................................................15 药 物 和 抗 生 素 引 言...................................................................................................................17 用 SampliQ OPT 固 相 萃 取 - 液 相 色 谱 法 测 定 鱼 类 ( 鲫 鱼 ) 中 的 激 素 ( 出 版 号 5990-3845EN).........................................18 固 相 萃 取 和 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 鸡 肉 中 的 四 环 素 (5989-9735EN)..............................................................20 用 固 相 萃 取 和 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 测 定 牛 奶 中 的 磺 胺 药 物 ( 出 版 号 5990-3713CHCN)............................................22 用 安 捷 伦 SampliQ OPT 固 相 萃 取 和 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 测 定 蜂 蜜 中 的 氯 霉 素 氟 苯 考 尼 和 甲 砜 霉 素 ( 出 版 号 5990-3615CHCN).......24 高 效 液 相 色 谱 法 (HPLC/UV 法 ) 和 HPLC/MS/MS 法 测 定 肉 类 中 的 青 霉 素 ( 出 版 号 5990-3364EN)..................................26 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 联 用 技 术 用 于 牛 奶 中 多 残 留 四 环 素 及 其 代 谢 物 的 检 测 ( 出 版 号 5990-3816CHCN)................................28 利 用 安 捷 伦 SampliQ SCX 固 相 萃 取 柱 和 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 联 用 以 检 测 猪 肉 中 的 b2- 激 动 剂 ( 出 版 号 5990-4180CHCN)...............30 2
可 靠 的 食 品 检 测 基 于 可 靠 的 固 相 萃 取 尊 敬 的 客 户 : 您 承 诺 生 产 优 质 且 绝 对 安 全 的 食 品 和 饮 料 消 费 者 的 期 望 也 同 样 如 此 现 在, 安 捷 伦 能 帮 你 履 行 这 项 承 诺 安 捷 伦 的 仪 器 系 统 色 谱 柱 和 消 耗 品, 可 以 全 方 位 地 帮 助 您 的 实 验 室 满 足 这 些 从 检 验 产 品 开 发 到 质 量 保 证 和 包 装 的 最 严 格 的 标 准 不 仅 如 此, 安 捷 伦 还 具 备 丰 富 的 经 验 广 博 的 知 识 和 富 有 创 造 力 的 人 才, 加 上 我 们 对 行 业 发 展 趋 势 和 全 球 法 规 所 具 有 的 敏 锐 的 洞 察 力, 这 些 都 可 帮 助 您 应 对 分 析 和 商 业 挑 战 最 新 的 Agilent SampliQ SPE 产 品 : 食 品 安 全 分 析 方 法 的 第 一 步 高 质 量 的 Agilent SampliQ SPE 产 品 能 够 帮 助 您 从 复 杂 的 基 质 中 高 效 地 提 取 和 浓 缩 样 品, 从 分 析 的 第 一 步 开 始 就 能 确 保 您 快 速 精 确 和 可 重 复 的 获 得 结 果 我 们 SPE 系 列 产 品 包 括 : Agilent SampliQ QuEChERS 试 剂 盒 仅 需 几 步 简 单 的 操 作 就 可 以 让 您 对 食 物 样 品 中 的 多 种 残 留 物 和 多 类 别 农 药 进 行 分 析 Agilent SampliQ 聚 合 物 可 以 保 留 很 宽 范 围 的 pka 目 标 分 子 SampliQ 聚 合 物 与 硅 胶 基 质 固 定 相 不 同, 即 使 在 操 作 过 程 中 不 小 心 变 干, 也 可 以 得 到 相 同 的 提 取 结 果 下 面 的 内 容 中, 您 将 发 现 最 先 进 的 技 术 和 样 品 制 备 方 法 可 以 极 大 地 提 高 可 靠 性 和 食 品 安 全 分 析 的 通 量 Ronald E. Majors, 博 士, 资 深 化 学 家 3
什 么 是 固 相 萃 取 (SPE)? 因 为 色 谱 分 析 使 用 高 特 异 性 检 测 器 和 快 速 高 分 离 度 的 色 谱 柱, 所 以 样 品 制 备 是 进 行 成 功 色 谱 分 析 的 重 要 部 分 然 而, 如 果 样 品 中 含 有 一 些 您 不 感 兴 趣 的 化 合 物, 它 们 所 产 生 的 干 扰 会 影 响 样 品 的 分 离 检 测 和 定 量 结 果 这 个 问 题 可 以 通 过 快 速 经 济 纯 化 提 取 物 并 确 保 准 确 结 果 的 固 相 萃 取 (SPE) 技 术 解 决 SPE 可 以 降 低 样 品 的 复 杂 性, 简 单 易 行 利 用 HPLC 的 原 理,SPE 可 以 选 择 性 地 从 复 杂 的 基 质, 如 食 品 环 境 样 品 和 生 物 样 品 中 除 去 干 扰 物 和 / 或 提 取 被 测 物 SPE 也 能 替 代 液 / 液 萃 取, 极 大 地 减 少 溶 剂 消 耗 简 言 之, 固 相 萃 取 对 于 获 得 检 测 结 果 的 好 坏 关 系 重 大 随 着 SampliQ 系 列 产 品 的 出 现, 安 捷 伦 加 强 了 对 固 相 萃 取 作 为 您 整 个 工 作 流 程 中 的 重 要 组 成 部 分 的 承 诺 我 们 很 高 兴 能 为 您 提 供 各 种 不 同 配 置 的 聚 合 物 硅 胶 和 其 它 吸 附 剂 来 满 足 您 不 同 的 样 品 萃 取 需 求 4
方 法 开 发 Agilent SampliQ A/N/B pka <1 pka 2-10 pka 3-10 pka 2-8 pka >10 Log P < 1.5 : SampliQ WAX : SampliQ SCX Log P > 1.3 : SampliQ OPT Log P < 1.5 : SampliQ SAX : SampliQ WCX SPE 0.1% 2% 2% 5% - 10% 5% NH 4 OH 1 100% 0.1% 100% 2 5% NH4OH 0.2% 5
农 药 和 污 染 物 快 速 准 确 的 农 药 检 测 和 定 量 食 品 中 存 在 的 一 些 农 药 和 污 染 物 ( 如 草 甘 膦 苯 并 咪 唑 杀 真 菌 剂 真 菌 毒 素 和 三 聚 氰 胺 ) 会 严 重 危 害 身 体 健 康 因 此, 痕 量 分 析 正 迅 速 成 为 法 规 对 所 有 食 品 公 司 的 检 测 要 求 安 捷 伦 的 科 学 家 们 与 主 要 检 测 实 验 室 以 及 法 规 机 构 紧 密 合 作 开 发 各 种 策 略, 帮 助 您 实 现 : 可 靠 检 测 超 微 量 水 平 的 目 标 和 非 目 标 化 合 物 用 质 谱 的 多 残 留 检 测 方 法 分 析 各 种 食 品 基 质 样 品, 检 测 限 和 定 量 限 显 著 降 低 一 次 分 析 完 成 数 百 种 化 合 物 的 常 规 筛 查 显 著 缩 短 分 析 时 间, 提 高 实 验 室 的 效 率, 并 且 减 少 每 个 样 品 的 分 析 费 用 满 足 客 户 和 不 同 部 门 和 纯 度 的 法 规 要 求 6
SampliQ Polymer SCX 固 相 萃 取 结 合 高 效 液 相 色 谱 测 定 苹 果 汁 中 苯 并 咪 唑 抗 真 菌 剂 ( 出 版 号 5990-3235CHCN) 引 言 杀 真 菌 剂 约 占 现 在 农 业 中 所 使 用 农 药 的 25-30% 苯 并 咪 唑 抗 真 菌 剂 作 为 一 类 杀 真 菌 剂, 广 泛 用 于 收 获 前 和 收 获 后 控 制 一 系 列 病 原 体 苯 并 咪 唑 抗 真 菌 剂 家 族 的 两 个 主 要 成 份 是 多 菌 灵 和 涕 必 灵 优 化 的 固 相 萃 取 和 HPLC 法 用 于 苹 果 汁 中 的 这 类 杀 真 菌 剂 的 提 取 和 定 量 样 品 准 备 称 量 10 g 苹 果 汁, 用 水 稀 释 至 100 ml, 用 玻 璃 棒 搅 动 混 合 1 分 钟 将 稀 释 后 的 样 品 转 移 到 250 ml 锥 形 烧 瓶 中, 用 2 mol/l 氢 氧 化 钠 溶 液 将 ph 调 为 10 将 样 品 分 成 2 或 3 份 置 于 50 ml 聚 丙 烯 离 心 管 中, 于 4000 rpm 离 心 10 分 钟 将 上 清 液 合 并 到 一 个 玻 璃 烧 杯 中 SPE 程 序 预 处 理 :3 ml 甲 醇 用 3 ml 0.15 mol/l 氨 水 溶 液 冲 洗 上 样 : 10 ml < 1.0 ml/min 冲 洗 #1: 2 ml 0.15 mol/l 氨 水 溶 液 冲 洗 #2: 2 ml 甲 醇 /0.15 mol/l 氨 水 溶 液 (3:7) 冲 洗 #3: 2 ml 0.1 mol/l 盐 酸 溶 液 仪 器 条 件 HPLC 条 件 色 谱 柱 : 流 速 : 进 样 量 : 20 µl 检 测 波 长 : ZORBAX Eclipse Plus C18 100 mm 4.6 mm 3.5 µm ( 部 件 号 959793-902) 1.0 ml/min 288 nm 流 动 相 : 磷 酸 盐 缓 冲 液 - 乙 腈 (73:27) 冲 洗 #4: 3 ml 甲 醇 小 柱 真 空 抽 干 1 分 钟 洗 脱 : 5 ml 0.5 mol/l 氨 水 溶 液 蒸 干, 复 溶 图 1. 苹 果 汁 中 抗 真 菌 剂 的 SPE 步 骤 7
结 果 图 2. 100 µg/kg 加 标 苹 果 汁 提 取 物 的 色 谱 图 (1. 多 菌 灵 ;2. 噻 菌 灵 ) 化 合 物 加 标 浓 度 回 收 率 % RSD (µg/kg) (%) (n = 6) 多 菌 灵 25 98.6 3.99 50 99.4 3.24 100 95.9 3.27 噻 菌 灵 25 99.0 2.38 50 92.1 4.90 100 93.0 3.79 表 1. 苹 果 汁 中 抗 真 菌 剂 SPE 提 取 的 回 收 率 和 相 对 标 准 偏 差 (RSD) 订 购 信 息 Agilent SampliQ SCX, 3 ml, 60 mg. 部 件 号 5982-3236. Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 LC 色 谱 柱, 100 mm x 2.1 mm, 3.5 µm. 部 件 号 959793-902. Agilent 0.45 µm 滤 膜, 部 件 号 5185-5836. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3235CHCN 8
用 Agilent 7890A/5975 GC/MSD 和 新 的 Aglient J&W DB-5ms 超 高 惰 性 色 谱 柱 SampliQ SCX 小 柱 分 析 奶 制 品 中 的 痕 量 三 聚 氰 胺 ( 出 版 号 5990-3282EN) 引 言 建 立 了 用 于 定 量 测 定 和 确 认 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 残 留 的 GC/MS 法 衍 生 化 前, 先 将 牛 奶 样 品 经 过 SampliQ SCX SPE 小 柱 纯 化 提 取 物 得 到 衍 生 化 后, 使 用 新 的 Aglient J&W DB-5ms 超 高 惰 性 色 谱 柱, 用 带 EI 源 的 GC/MS, 以 选 择 离 子 检 测 / 全 扫 描 (SIM/scan) 数 据 采 集 模 式 进 行 分 析 仪 器 条 件 气 相 色 谱 仪 条 件 仪 器 : Agilent 7890A/5975C 气 相 色 谱 质 / 谱 仪 Agilent 7683 自 动 液 体 进 样 器 色 谱 柱 : Agilent J&W DB-5ms 超 高 惰 性 气 相 色 谱 柱, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm ( 部 件 号 122-5532UI) 进 样 口 温 度 : EPC, 分 流 / 不 分 流 进 口 :250 C 进 样 量 : 1 µl, 分 流 比 3:1 载 气 : 升 温 程 序 : 传 输 线 温 度 : 290 C 氦 气, 恒 流 模 式,1.3 ml/min 75 C (1 min); 以 30 C/min 升 温 至 300 C (2 min) 质 谱 条 件 质 谱 : EI, SIM/scan 溶 剂 延 迟 : 4.2 min MS 温 度 : 离 子 源 230 ºC, 四 极 杆 :150 ºC 扫 描 模 式 : 分 子 量 范 围 (40-450 amu) SIM 模 式 : 离 子 (342, 327*, 171, 99) * 定 量 离 子 样 品 制 备 样 品 预 处 理 提 取 : 用 40 ml 1%TAA 提 取 5g 奶 粉 涡 旋 混 合, 超 声 15 分 钟 加 入 2mL 22 g/l 的 乙 酸 铅, 补 加 1% TAA 到 50 ml 4000 rpm 离 心 1 分 钟 固 相 萃 取 程 序 预 处 理 / 平 衡 : 3 ml 甲 醇 /5 ml 水 上 样 : 5 ml 牛 奶 上 清 液 清 洗 : 3 ml 水 /3 ml 甲 醇 洗 脱 : 3 ml 含 5% 氨 水 的 甲 醇 溶 液 蒸 发 : 50 C N 2 吹 干 衍 生 化 : 加 600 µl 吡 啶,200 µl BSTFA,70 C 恒 温 30 分 钟 图 1. 样 品 制 备 过 程 示 意 图 9
结 果 Abundance 1000000 800000 600000 400000 200000 0 Abundance 1000000 800000 600000 400000 200000 0 Abundance 1000000 800000 600000 400000 200000 0 3A 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 Time 3B 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 Time 3C 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 图 2. 三 聚 氰 胺 的 GC/MS SIM 谱 图 (3A: 未 经 SPE 处 理 ;3B, 经 过 SPE 处 理,3C, 标 准 品 ) Response 1.00e+006 加 标 浓 度 回 收 率 RSD (%) 化 合 物 (mg/g) (%) (n = 6) 三 聚 氰 胺 0.080 82.1 2.04 tri-tms 0.800 82.8 4.88 1.600 80.8 3.58 5.00e+005 表 1. 加 标 样 品 的 回 收 率 和 重 现 性 订 购 信 息 0 0 图 3. 三 聚 氰 胺 标 准 曲 线 1 Concentration 2 Agilent SampliQ SCX SPE 小 柱, 60 mg, 3 ml. 部 件 号 5982-3236. Agilent J&W DB-5ms 超 高 惰 性 气 相 色 谱 柱, 30 m x 0.25 mm, 0.25 µm. 部 件 号 122-5532UI. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3282EN 10
液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 技 术 快 速 筛 选 和 确 认 牛 奶 及 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 残 留 物 ( 出 版 号 5989-9950EN) 引 言 用 阳 离 子 交 换 柱 和 Agilent 6410 三 重 串 联 四 极 杆 LC/MS 系 统 建 立 了 测 定 乳 制 品 中 三 聚 氰 胺 的 快 速 方 法 牛 奶 及 奶 制 品 只 需 用 安 捷 伦 新 产 品 SampliQ SCX 小 柱 进 行 简 单 的 固 相 萃 取 (SPE) 即 可 完 成 样 品 制 备 SPE 程 序 预 处 理 : 依 次 用 5 ml 甲 醇 和 6 ml 水 SampliQ SCX 小 柱 上 样 : 样 品 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 色 谱 柱 : 进 样 量 : 10 µl 流 速 : 柱 温 : 40 ºC Agilent ZORBAX 300-SCX 色 谱 柱, 2.1 mm x 150 mm, 5 µm ( 部 件 号 883700-704) 0.2 ml/min 流 动 相 : 10 mm 醋 酸 铵 / 乙 酸 ph 3.0,B: 乙 腈,A:B = 20:80 停 止 时 间 : 质 谱 仪 条 件 10 min Agilent 6410A 三 重 串 联 四 极 杆 LC/MS 离 子 源 : 极 性 : 雾 化 气 : 离 子 喷 雾 电 压 : 电 喷 雾 正 离 子 模 式 氮 气 4,000 V 干 燥 气 温 度 : 350 ºC 干 燥 气 流 速 : 喷 雾 压 力 : 分 辨 率 : 9 L/min 40 psi Q1 (unit) Q3 (unit) 图 1. 样 品 制 备 过 程 示 意 图 清 洗 : 5 ml 水 洗, 后 用 5 ml 甲 醇 洗, 真 空 干 燥 洗 脱 : 用 5 ml 5% 氨 水 / 甲 醇 溶 液 蒸 发 : 干 燥 后 用 1 ml 流 动 相 复 溶 11
结 果 10 2 1.5 1 0.5 0 5 1 1 10 1 = 5.00; SNR (7.087min) = 16.2 1 7.087 1 0 10 2 = 5.00; SNR (7.119min) = 23.6 1 1 7.119 1 0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 9 9.5 10 Vs (min) 图 2. 牛 奶 样 品 基 质 中 加 标 1ppb 三 聚 氰 胺 标 准 品 的 响 应 浓 度 = 50 ppb 浓 度 = 80 ppb (n = 3) (n = 3) 回 收 率 (%) 83.4 62.5 相 对 标 准 偏 差 (%) 2.78 1.02 表 1. 奶 粉 中 三 聚 氰 胺 标 准 品 的 回 收 率 奶 粉 中 添 加 50 ppb 和 80 ppb 三 聚 氰 胺 标 准 品 的 回 收 率, 外 标 法 计 算 的 回 收 率 分 别 为 83.4% 和 62.5% RSD 小 于 3%. 订 购 信 息 Agilent SampliQ SCX 聚 合 物 固 相 萃 取 小 柱, 150 mg, 6 ml. 部 件 号 5982-3267. 安 捷 伦 再 生 纤 维 滤 膜, 0.2 µm. 部 件 号 5064-8222. Agilent ZORBAX 300-SCX 色 谱 柱, 2.1 mm x 150 mm, 5 µm. 部 件 号 883700-704. 如 需 这 个 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3282EN 12
用 Agilent SampliQ 聚 合 物 SCX 固 相 萃 取 和 Agilent 1200 系 列 HPLC/UV 法 测 定 奶 粉 和 鸡 蛋 中 的 三 聚 氰 胺 残 留 物 ( 出 版 号 5990-3365EN) 引 言 建 立 了 检 测 奶 粉 和 鸡 蛋 中 三 聚 氰 胺 的 方 法 采 用 中 国 法 规 要 求 的 固 相 萃 取 和 HPLC/UV 法 样 品 制 备 采 用 聚 合 物 混 合 模 式 阳 离 子 交 换 树 脂 用 HPLC/UV 进 行 分 离 和 检 测 固 相 萃 取 程 序 预 处 理 : 3 ml 甲 醇 和 5 ml 水 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 用 Agilent 1200 系 列 液 相 色 谱 仪 和 二 极 管 阵 列 检 测 器 分 析 样 品 色 谱 柱 : Agilent ZORBAX SB-C8 液 相 色 谱 柱 250 mm x 4.6 mm, 5 µm 部 件 号 880975-906) 流 速 : 柱 温 : 40 C 检 测 器 波 长 : 1.0 ml/min 240 nm 进 样 量 : 20 µl 流 动 相 : 乙 腈 - 缓 冲 液 (15:85) 缓 冲 液 : 10 mmol/l 柠 檬 酸,10 mmol 辛 烷 磺 酸 钠 溶 液, ph 3.0 色 谱 分 离 : 等 度 上 样 : 10 ml 样 品 溶 液 清 洗 1: 3 ml 水 清 洗 2: 3 ml 甲 醇 真 空 干 燥 3 min 洗 脱 : 6 ml 含 5% 氨 水 的 甲 醇 溶 液 氮 气 吹 干 后 用 流 动 相 复 溶 图 1. 奶 和 鸡 蛋 中 三 聚 氰 胺 固 相 萃 取 示 意 图 13
结 果 图 2. 加 标 2 mg/kg 的 奶 粉 基 质 的 色 谱 图 图 3. 2 mg/kg 加 标 的 鸡 蛋 样 品 色 谱 图 检 出 限 化 合 物 回 归 方 程 式 相 关 系 数 (µg/kg) 三 聚 氰 胺 Y = 77.4698x + 0.2117 0.9999 10 表 1. 三 聚 氰 胺 的 检 出 限 和 线 性 关 系 加 标 水 平 回 收 率 RSD 化 合 物 样 品 (mg/kg) (%) (%) 三 聚 氰 胺 奶 粉 2 84.5 2.83 5 85.3 2.56 10 86.7 1.18 鸡 蛋 2 95.2 3.00 5 93.0 2.01 10 95.7 2.89 订 购 信 息 Agilent SampliQ SCX 聚 合 物 SPE 小 柱,, 60 mg, 3 ml. 部 件 号 5982-3236. Agilent ZORBAX SB-C8 液 相 色 谱 柱, 250 mm x 4.6 mm, 5 µm. 部 件 号 880975-906. 表 2. 用 Agilent SampliQ SCX 固 相 萃 取 后 奶 粉 和 鸡 蛋 样 品 中 三 聚 氰 胺 的 回 收 率 和 相 对 标 准 偏 差 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3365EN 14
用 Agilent 1120 一 体 式 液 相 色 谱 仪 和 1200 高 分 离 度 分 离 快 速 液 相 色 谱 系 统 以 及 SampliQ SCX 固 相 萃 取 小 柱 定 量 分 析 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 ( 出 版 号 5989-9949EN) 引 言 三 聚 氰 胺 最 初 作 为 工 业 用 化 学 品, 目 前 已 经 以 一 种 牛 奶 和 奶 制 品 中 的 非 法 掺 杂 物 方 式 进 入 食 物 链 随 着 全 球 对 三 聚 氰 胺 关 注 度 的 提 高, 对 三 聚 氰 胺 的 检 测 已 经 很 普 遍 下 面 的 方 法 说 明, 在 用 液 相 色 谱 分 析 乳 制 品 中 的 三 聚 氰 胺 时, 可 以 成 功 地 去 除 复 杂 基 质 的 干 扰 ( 蛋 白 质, 糖 类 和 脂 肪 ) 仪 器 条 件 用 1120 一 体 式 或 1200 液 相 色 谱 仪 进 行 常 规 的 高 效 液 相 色 谱 分 析 : 带 梯 度 泵 的 Agilent 1120 一 体 式 液 相 色 谱 系 统 ( 内 置 脱 气 机 ), 自 动 进 样 器, 柱 温 箱 和 可 变 波 长 检 测 器 (VWD) 或 等 同 于 1200 系 列 的 仪 器 组 成 部 分 EZChrom Elite Compact 软 件 或 ChemStation 软 件 (B.04.01 版 或 更 新 版 本 ) 色 谱 柱 : Agilent ZORBAX SB-C8 液 相 色 谱 柱 ( 即 Agilent ZORBAX Rx-C8),4.6 mm x 250 mm, 5 µm ( 部 件 号. 880975-906) 缓 冲 液 : 10 mm 柠 檬 酸,10 mm 辛 烷 磺 酸 钠,pH 3.0 流 动 相 : 流 速 : 进 样 量 : 20 µl 柱 温 : 30 C 检 测 波 长 : 运 行 时 间 : 92:8 缓 冲 液 : 乙 腈 1.5 ml/min 240 nm 20 min 对 于 奶 酪 奶 油 和 巧 克 力 样 品 : 称 取 2 ± 0.01 g 样 品, 和 8~12g 海 砂 在 研 磨 器 内 一 起 研 磨, 然 后 转 移 到 50 ml 离 心 管 中 用 5 ml 三 氯 乙 酸 水 溶 液 清 洗 研 磨 器 3 次, 清 洗 液 转 移 到 50 ml 离 心 管 中, 然 后 加 入 5 ml 乙 腈 继 续 超 声, 其 它 步 骤 同 前 如 果 样 品 含 有 较 多 脂 肪, 要 在 固 相 萃 取 之 前, 用 含 5% 三 氯 乙 酸 水 溶 液 用 正 乙 烷 饱 和 的 溶 液 进 行 液 - 液 萃 取 对 提 取 物 脱 脂 SPE 程 序 先 用 5 ml 甲 醇, 然 后 用 6 ml 水 预 处 理 固 相 萃 取 小 柱 将 上 述 样 品 上 样 到 经 预 处 理 的 小 柱,5 ml 水 洗 后 5 ml 甲 醇 洗 真 空 干 燥 小 柱, 然 后 用 5mL 含 5% 氨 水 的 甲 醇 溶 液 洗 脱 样 品 制 备 对 于 液 态 奶 奶 粉 奶 酪 冰 淇 淋 和 奶 糖 样 品 : 称 取 2 ± 0.01 g 样 品 加 到 50 ml 离 心 管 中, 加 入 15 ml 含 5% 三 氯 乙 酸 的 水 溶 液 和 5 ml 乙 腈, 盖 上 盖 超 声 10 min, 然 后 把 样 品 在 垂 直 混 合 器 上 混 合 10 min 4000 rpm, 离 心 10 min 在 含 5% 三 氯 乙 酸 的 水 溶 液 中 润 湿 滤 纸, 然 后 将 上 清 液 过 滤 到 一 个 25 ml 容 量 瓶 中, 用 5% 三 氯 乙 酸 定 容 到 25 ml 50 ºC 氮 气 吹 干 用 1.0 ml 流 动 相 复 溶, 涡 旋 1 min,0.2 µm 纤 维 素 滤 膜 ( 部 件 号 5064-8222) 过 滤 到 一 个 玻 璃 液 相 色 谱 样 品 瓶 中 图 1. 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 固 相 萃 取 示 意 图 将 5 ml 提 取 液 转 移 到 一 个 玻 璃 试 管 中, 然 后 加 入 5.0 ml 纯 水 涡 旋 彻 底 混 匀 15
结 果 mau 17.5 15 12.5 10 7.5 5 2.5 0 _ 2.5 mau 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0.5 1 A 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min B 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 图 2. A:20 µg/ml 三 聚 氰 胺 标 准 品,B:SampliQ SCX 固 相 萃 取 的 阳 性 酸 奶 样 品 的 分 离 图 三 聚 氰 胺 保 留 时 间 14.2 min 订 购 信 息 Agilent SampliQ SCX 固 相 萃 取 小 柱, 3 ml, 60 mg. 部 件 号 5982-3236. Agilent SampliQ SCX 固 相 萃 取 小 柱, 6 ml, 150 mg. 部 件 号 5982-3267. Agilent ZORBAX SB-C8 液 相 色 谱 柱 ( 即 Agilent ZORBAX Rx-C8), 4.6 mm x 250 mm, 5 µm. 部 件 号 880975-906. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5989-9949EN 16
让 抗 生 素 激 素 和 其 他 化 学 品 远 离 食 品 药 物 / 抗 生 素 抗 生 素 能 成 功 预 防 和 治 疗 由 病 毒 细 菌 原 生 生 物 和 真 菌 引 起 的 动 物 疾 病 然 而, 当 痕 量 的 抗 生 素 ( 或 其 它 药 物 如 生 长 激 素 ) 渗 透 进 入 牛 奶 肉 鸡 蛋 鱼 和 蜂 蜜 中 时, 就 会 产 生 严 重 的 长 期 影 响 包 括 引 发 一 度 被 认 为 完 全 根 除 的 耐 抗 生 素 类 疾 病 17
用 SampliQ OPT 固 相 萃 取 - 液 相 色 谱 法 测 定 鱼 类 ( 鲫 鱼 ) 中 的 激 素 ( 出 版 号 5990-3845CHCN) 引 言 激 素 是 一 种 常 见 的 食 品 添 加 剂, 如 果 长 期 食 用 可 能 会 导 致 人 类 健 康 隐 患 许 多 国 家 的 法 规 对 食 品 中 这 类 化 合 物 都 明 确 规 定 了 最 大 残 留 限 量 本 文 优 化 了 固 相 萃 取 和 高 效 液 相 技 术, 用 于 提 取 和 测 定 鲫 鱼 / 鲤 鱼 中 的 16 种 激 素 固 相 萃 取 程 序 预 处 理 :3 ml 甲 醇 用 5 ml 水 平 衡 加 载 5 ml 提 取 物 ( 相 当 于 0.6 g 鱼 肉 ) 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 色 谱 柱 : 安 捷 伦 ZORBAX Eclipse Plus C18 LC 色 谱 柱, 250 mm x 4.6 mm, 5 µm, ( 部 件 号. 959990-902) 流 速 : 进 样 量 : 5 µl 柱 温 : 18 C 检 测 波 长 : 流 动 相 : 1.0 ml/min 230 nm 水 - 乙 腈 梯 度 洗 脱 时 间 ( 分 钟 ) % 水 % 乙 腈 0 70 30 10 65 35 23 50 50 30 20 80 用 5 ml 含 30% 甲 醇 的 水 冲 洗 真 空 干 燥 3 分 钟 用 6 ml 甲 醇 洗 脱 干 燥, 用 甲 醇 复 溶 过 滤 图 1. 鱼 肉 中 激 素 的 SPE 提 取 过 程 样 品 制 备 1. 称 取 200 克 鲫 鱼 肉, 匀 浆, 并 置 洁 净 密 封 容 器 中 18 C 下 保 存 2. 取 1 g 均 质 样 品 ( 精 确 到 0.01 g), 置 10 ml 聚 丙 烯 离 心 中, 加 入 5 ml 甲 醇 3. 涡 旋 1 分 钟 4. 冰 浴 下 超 声 提 取 10 分 钟 5. 4000 r/min 转 速 下 离 心 5 分 钟, 取 3 ml 上 清 液 6. 置 于 洁 净 试 管 中,40 C 以 下 用 氮 气 吹 干 7. 用 5 ml 含 5% 甲 醇 的 水 复 溶 18
结 果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 图 2. 添 加 2 mg/kg 激 素 标 样 的 鱼 肉 样 品 的 色 谱 图 化 合 物 加 标 浓 度 (mg/kg) 回 收 率 (%) RSD (n = 6, %) 雌 三 醇 2 100.4 2.2 氢 化 泼 尼 松 2 89.4 3.8 氢 化 可 的 松 2 85.3 6.7 强 的 松 2 82.5 7.2 甲 基 氢 化 泼 尼 2 83.2 8.3 倍 他 米 松 2 88.3 8.9 地 塞 米 松 2 79.1 4.3 醋 酸 曲 安 奈 德 2 86.7 8.4 孕 三 烯 酮 2 78.0 6.6 醋 酸 氢 化 泼 尼 松 2 86.9 7.3 醋 酸 氢 化 可 的 松 2 87.3 6.8 醋 酸 强 的 松 2 76.7 7.7 雌 二 醇 2 78.7 4.2 醋 酸 可 的 松 2 82.8 6.9 甲 基 睾 酮 2 82.9 3.4 雌 酮 2 76.2 6.4 表 1. 鲫 鱼 肉 中 激 素 固 相 萃 取 的 回 收 率 和 相 对 标 准 偏 差 订 购 信 息 Agilent OPT Polymer Box, 30 x 6 ml 萃 取 管, 150 mg. 部 件 号 5982-3067. Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 LC 色 谱 柱, 250 mm x 4.6 mm, 5 µm. 部 件 号 95990-902. Agilent PTFE 0.45 µm 优 级 注 射 式 过 滤 器, 部 件 号 5185-5836. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3845CHCN 19
固 相 萃 取 和 高 效 液 相 法 测 定 鸡 肉 中 的 四 环 素 ( 出 版 号 5989-9735EN) 引 言 开 发 了 一 种 可 以 同 时 测 定 鸡 肉 中 的 7 种 抗 生 素 残 留 物 ( 二 甲 胺 四 环 素 土 霉 素 四 环 素 去 甲 基 金 霉 素 金 霉 素 甲 烯 土 霉 素 和 强 力 霉 素 ) 的 方 法 在 这 种 方 法 中 使 用 固 相 萃 取 和 HPLC/UV 法, 与 中 国 的 法 规 要 求 方 法 相 一 致 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 色 谱 柱 : Agilent ZORBAX SB-C8 液 相 色 谱 柱, 250 mm x 4.6 mm, 5 µm, ( 部 件 号 :880975-906) 流 速 : 柱 温 : 30 C 1.5 ml/min 进 样 量 : 100 µl 检 测 波 长 : 350 nm 流 动 相 : 甲 醇 - 乙 腈 -10 mm TFA 溶 液, 梯 度 洗 脱 时 间 ( 分 钟 ) % 甲 醇 % 乙 腈 % 10 mm TFA 0 1 4 95 7.5 6 24 70 13.5 7 28 65 15 1 4 95 真 空 干 燥 3 min 固 相 固 相 萃 取 程 序 预 处 理 : 5 ml 甲 醇 润 洗 : 5 ml 10 mm TFA (ph = 2.16) 上 样 : 10 ml 样 品, 速 度 1 ml/min 清 洗 : 3 ml TFA 溶 液 (ph = 4.5) 洗 脱 : 8 ml 10 mm 草 酸 的 甲 醇 溶 液 N 2 干 燥, 复 溶 图 1. 四 环 素 固 相 萃 取 程 序 20
结 果 1 二 甲 胺 四 环 素 2 土 霉 素 3 四 环 素 4 去 甲 基 金 霉 素 5 金 霉 素 6 甲 烯 土 霉 素 7 强 力 霉 素 图 2. 50 µg/kg 加 标 鸡 肉 样 品 色 谱 图 化 合 物 加 标 浓 度 回 收 率 RSD (µg/kg) (%) (%) 二 甲 胺 四 环 素 50 87.6 4.13 100 80.8 5.68 200 81.3 4.19 土 霉 素 50 68.8 6.49 100 63.0 4.87 200 59.4 4.35 四 环 素 50 81.0 4.46 100 70.0 3.47 200 72.3 4.38 去 甲 基 金 霉 素 50 92.0 2.06 100 94.8 3.78 200 92.9 1.92 金 霉 素 50 93.3 3.16 100 92.4 4.01 200 87.7 2.54 甲 烯 土 霉 素 50 93.3 2.89 100 91.9 2.51 200 86.6 3.39 强 力 霉 素 50 95.6 4.38 100 96.4 1.00 200 92.0 3.02 表 1. 固 相 萃 取 鸡 肉 样 品 的 回 收 率 和 相 对 标 准 偏 差 订 购 信 息 Agilent SampliQ OPT 固 相 萃 取 小 柱, 60 mg 3 ml. 部 件 号 5982-30360. Agilent ZORBAX SB-C8 液 相 色 谱 柱, 250 mm x 4.6 mm, 5 µm. 部 件 号 880975-906. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5989-9735EN 21
用 固 相 萃 取 和 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 测 定 牛 奶 中 的 磺 胺 药 物 ( 出 版 号 5990-3713CHCN) 引 言 用 Agilent SampliQ 聚 合 型 强 阳 离 子 交 换 (SCX) 小 柱 固 相 萃 取, 对 牛 奶 样 品 中 9 种 痕 量 含 氮 磺 胺 药 物 ( 磺 胺 甲 恶 唑 磺 胺 嘧 啶 磺 胺 噻 唑, 磺 胺 甲 基 嘧 啶 磺 胺 甲 二 唑 磺 胺 二 甲 基 嘧 啶 磺 胺 甲 氧 哒 嗪 磺 胺 氯 哒 嗪 和 磺 胺 二 甲 氧 嘧 啶 ) 进 行 提 取 用 Agilent 6410 三 重 串 联 四 极 杆 LC/MS-MS 系 统 对 磺 胺 药 物 进 行 了 分 离 和 测 定 反 相 色 谱 分 离 采 用 Agilent ZORBAX Eclipse Plus 色 谱 柱 (C18, 3.0 mm 50 mm, 1.8 µm), 用 0.1% 甲 酸 / 乙 腈 梯 度 洗 脱 样 品 制 备 每 1 ml 全 脂 牛 奶 中 加 入 20 µl 45% 甲 酸 水 溶 液 ( 通 过 将 10 ml 90% 甲 酸 和 10 ml 水 混 合 而 配 制 ), 沉 淀 蛋 白 和 脂 质 然 后 将 牛 奶 样 品 在 8000 rpm 离 心 10 分 钟 (Eppendorf 5810R 15 amp, Westbury, NY) 也 可 以 在 3500 rpm 离 心 20 分 钟 取 出 一 定 量 上 清 ( 制 备 的 全 脂 牛 奶 提 取 物 ), 加 载 到 SampliQ SCX 小 柱 上 固 体 萃 取 步 骤 预 处 理 : 2 ml 含 0.1% 甲 酸 的 甲 醇 溶 液 5 ml 全 脂 牛 奶, 用 45% 甲 酸 沉 淀 蛋 白 / 脂 质 ; 离 心, 并 进 一 步 处 理 上 清 ( 制 备 的 全 脂 牛 奶 提 取 物 ) 平 衡 : 2 ml 含 2% 甲 酸 的 水 溶 液 上 样 : 将 5 ml 制 备 的 全 脂 牛 奶 提 取 物 加 载 到 SPE 小 柱 上 真 空 下 干 燥 1 分 钟 冲 洗 1: 2 ml 含 5% 甲 醇 的 水 溶 液 冲 洗 2: 1 ml 0.5 M HCl 冲 洗 3: 2 ml 含 20% 甲 醇 的 水 溶 液 真 空 下 干 燥 3 分 钟 洗 脱 : 2.5 ml 含 5% 氨 水 的 甲 醇 溶 液 图 1. SPE 流 程 图 22
仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 设 置 色 谱 柱 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, 3.0 50 mm, 1.8 µm ( 部 件 号 959941-302) 流 速 : 0.42 ml/min 柱 温 : 35 C 进 样 量 : 1.7 µl 用 针 头 冲 洗, 用 甲 醇 / 水 (5:1) 在 进 样 针 清 洗 站 清 洗 30 秒 流 动 相 : A: 水 / 乙 腈 (9:1) 含 0.1% 甲 酸 B: 乙 腈 w/ 0.1% 甲 酸 分 析 时 间 : 8 分 钟 后 运 行 时 间 : 3 分 钟 梯 度 : 时 间 0 3.5 8 %B 0 0 65 电 喷 雾 离 子 源 条 件 气 体 温 度 : 350 C 气 体 流 速 : 喷 雾 器 : 毛 细 管 : 12 L/min 40 psi 4,000 V 结 果 牛 奶 中 加 标 浓 度 RSD 化 合 物 (ng/ml) 回 收 率 (%) 磺 胺 嘧 啶 5 74.2 8.3 10 99.7 5.7 磺 胺 噻 唑 5 76.8 4.4 10 83.2 4.7 磺 胺 噻 唑 5 73.2 6.3 10 84.8 0.6 磺 胺 二 甲 基 嘧 啶 5 78.3 7.5 10 89.0 3.1 磺 胺 二 甲 基 嘧 啶 5 78.4 7.0 10 94.5 5.3 磺 胺 甲 氧 哒 嗪 5 76.3 6.2 10 86.9 2.2 磺 胺 氯 哒 嗪 5 78.3 9.4 10 84.3 6.0 磺 胺 甲 恶 唑 5 74.0 4.3 10 87.7 6.4 磺 胺 二 甲 氧 嘧 啶 5 75.4 3.1 10 82.5 5.4 图 1. 本 研 究 中 所 用 9 种 磺 胺 药 物 的 回 收 率 和 精 密 度 3a: 5 ng/ml 标 样 3b: 5 ng/ml 牛 奶 图 2. 通 过 提 取 和 净 化, 并 添 加 磺 胺 药 物 得 到 的 牛 奶 样 品 总 离 子 流 图 (3a);(3b) 牛 奶 中 添 加 5 ng/ml, 然 后 经 过 提 取 和 SPE 净 化 ;(3c) 牛 奶 空 白 订 购 信 息 Agilent SampliQ SCX 聚 合 物 SPE 小 柱, 60 mg, 3 ml. 部 件 号 5982-3236. Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 液 相 色 谱 柱, 3.0 mm x 50 mm, 1.8 µm. 部 件 号 959941-302. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3713CHCN 23
用 安 捷 伦 SampliQ OPT 固 相 萃 取 和 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 测 定 蜂 蜜 中 的 氯 霉 素 氟 苯 考 尼 和 甲 砜 霉 素 ( 出 版 号 5990-3615CHCN) 引 言 建 立 了 一 种 同 时 测 定 蜂 蜜 中 抗 菌 素 氯 霉 素 (CAP) 氟 苯 考 尼 (FF) 和 甲 砜 霉 素 (TAP) 残 留 的 方 法 并 进 行 了 方 法 学 考 察 待 测 物 用 液 / 液 萃 取 和 固 相 萃 取 (SPE) 纯 化, 用 液 相 色 谱 - 电 喷 雾 电 离 串 联 质 谱 (LC-ESI-MS/MS) 负 离 子 多 反 应 检 测 (MRM) 模 式 定 量 用 氯 霉 素 -D5 作 为 内 标 该 方 法 经 验 证, 可 获 得 可 重 复 的 满 意 的 定 量 结 果 样 品 制 备 固 相 萃 取 程 序 精 密 称 取 5 g 蜂 蜜 (±0.05 g), 置 于 50 ml 离 心 管 中 3 ml 甲 醇 活 化 加 入 0.5 ml 内 标 溶 液 (50 ng/ml 氯 霉 素 -D5 水 溶 液 ), 涡 旋 混 合 1 分 钟 5 ml Milli-Q 水 平 衡 加 入 5 ml 水, 涡 旋 混 合 3 分 钟 上 样 5 ml 提 取 液 ( 来 自 前 面 的 样 品 制 备,2.5 ml 2), 让 样 品 靠 重 力 慢 慢 通 过 小 柱 加 入 5 ml 乙 酸 乙 酯, 振 摇 5 分 钟 用 5 ml 2 水 淋 洗 样 品 管 和 小 柱 3200 rpm 离 心 5 分 钟, 将 上 层 有 机 相 转 移 至 另 一 个 试 管 中 依 次 重 复 2 次 抽 真 空 3 分 钟, 吹 干 针 头, 将 收 集 管 放 在 下 面 合 并 所 有 转 移 的 有 机 相 ( 约 14 ml),50 ºC 下 用 氮 气 吹 干 用 5 ml 2:8 乙 酸 乙 酯 / 甲 醇 (2.5 ml 2) 洗 脱 5 ml 水 溶 解, 涡 旋 混 合 3 分 钟, 超 声 2 分 钟 50 C 下 吹 干, 用 0.5 ml 20:80 乙 腈 / 水 复 溶, 涡 旋 混 合 3 分 钟, 超 声 2 分 钟 准 备 进 行 SPE 3200 rpm 离 心 2 分 钟, 转 移 至 2 ml 自 动 进 样 器 样 品 管 中 待 测 图 1. 样 品 制 备 蜂 蜜 中 氯 霉 素 类 化 合 物 的 液 / 液 萃 取 图 2. 样 品 净 化 安 捷 伦 SampliQ 固 相 萃 取 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 色 谱 柱 : 流 速 : 柱 温 : 30 ºC 进 样 量 : 20 µl 流 动 相 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus 150 mm 2.1 mm, 5 µm ( 部 件 号 :959701-906) 0.3 ml/min ph 8.5 水 (A), 乙 腈 (B) 梯 度 : 时 间 % 乙 腈 流 速 (ml/min) 0 20 0.3 0.5 20 0.3 6.0 80 0.3 6.01 100 0.5 6.50 100 0.5 6.51 20 0.3 7.00 停 止 24
结 果 MRM (355.8 & 185.0) Florfenicol MRM (354.0 & 184.9) Thiamphenicol MRM (325.9 & 156.8) Chloramphenicol-D 5 MRM (320.9 & 152.0) Chloramphenicol 图 3. 0.2 ng/g 加 标 蜂 蜜 提 取 物 的 色 谱 图 加 标 浓 度 回 收 率 RSD (%) 被 分 析 物 (ng/g 蜂 蜜 ) (%) n = 6 氯 霉 素 0.10 96.94 3.51 5.00 98.88 0.87 20.00 107.32 0.46 氟 苯 考 尼 0.10 100.67 9.77 5.00 100.28 2.84 20.00 107.49 2.55 甲 砜 霉 素 1.00 76.00 4.39* 5.00 74.89 2.34 20.00 89.81 3.83 * 实 验 重 复 了 4 次 订 购 信 息 Agilent SampliQ OPT 聚 合 物 SPE 小 柱, 60 mg, 3 ml. 部 件 号 5982-3036. Agilent ZORBAX Eclipse Plus 液 相 色 谱 柱, 150 mm x 2.1 mm, 5 µm. 部 件 号 959701-906. 表 2. 加 标 蜂 蜜 中 氯 霉 素 类 化 合 物 的 回 收 率 和 重 现 性 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3615CHCN 25
高 效 液 相 色 谱 (HPLC/UV) 和 高 效 液 相 色 谱 - 电 喷 雾 串 联 质 谱 法 测 定 肉 中 青 霉 素 含 量 ( 出 版 号 5990-3364EN) 引 言 青 霉 素 是 广 泛 应 用 于 治 疗 动 物 疾 病 的 抗 生 素 类 药 品 本 文 给 出 了 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (100 mm x 2.1 mm, 3.5 µm) 反 相 液 相 色 谱 柱 和 安 捷 伦 混 合 模 式 SPE 小 柱 (Agilent SampliQ OPT) 用 于 青 霉 素 残 留 的 解 决 方 案 痕 量 残 留 的 SPE 效 果 用 HPLC/MS/MS 进 行 了 评 价 固 相 萃 取 程 序 3 ml 甲 醇 预 处 理 3 ml 含 0.1% 甲 酸 的 水 溶 液 平 衡 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 色 谱 柱 : Agilent ZORBAX Eclipse Plus 液 相 色 谱 柱, 2.1 mm x 100 mm, 3.5 µm( 部 件 号 959793-902) 流 速 : 0.6 ml/min 流 动 相 : 运 行 时 间 : 后 运 行 : A: 水 /10 mm 醋 酸 铵 B: 乙 腈 12 min 3 min 柱 温 : 30 C 进 样 量 : 10 µl 梯 度 : 时 间 % B 0 2 1.2 2 2.0 10 6.0 30 8.0 40 8.5 80 11.9 80 12.0 2 上 样 10 ml(5 g 提 取 样 品 )( 终 体 积 20 ml) 干 燥 30 秒 2 ml 含 0.1% 甲 酸 的 水 溶 液 清 洗 2 ml ph 8.5 磷 酸 缓 冲 液 清 洗 干 燥 3 min 3 ml 乙 腈 洗 脱 干 燥, 流 动 相 复 溶, 涡 旋 图 1. Agilent SampliQ OPT 固 相 萃 取 猪 肉 中 的 青 霉 素 26
结 果 1 2 3 4 5 6 2a: 1 ng/g 1. 4. 2. 5. 3. 6. 5 2b: 1 ng/g 1 2 3 4 6 1. 4. 2. 5. 3. 6. 图 2. 1 ng/g 加 标 肉 类 样 品 经 过 提 取 和 固 相 萃 取 净 化 (2a), 肉 类 样 品 经 提 取 和 固 相 萃 取 后 添 加 1 ng/g 标 准 品 的 色 谱 图 110.0 90.0 % 70.0 50.0 30.0 10.0 1 ng/g 20 ng/g 图 3. 肉 类 提 取 物 中 含 1.0 ng 和 20 ng 青 霉 素 的 回 收 率 数 据 图 订 购 信 息 Agilent SampliQ OPT 聚 合 物 固 相 萃 取 试 剂, 150 mg, 6 ml. 部 件 号 5982-3067. 安 捷 伦 注 射 式 过 滤 器, 13 mm, 45 µm PTFE. 部 件 号 5185-5836. Agilent ZORBAX Eclipse Plus LC 色 谱 柱, 2.1 mm x 100 mm, 3.5 µm. 部 件 号 959793-902. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3364EN 27
液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 联 用 技 术 用 于 牛 奶 中 多 残 留 四 环 素 及 其 代 谢 物 的 检 测 ( 出 版 号 5990-3816CHCN) 摘 要 高 性 能 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 联 用 技 术 同 时 检 测 牛 奶 和 动 物 组 织 中 的 10 种 抗 生 素 残 留, 包 括 二 甲 胺 四 环 素 差 向 土 霉 素 差 向 四 环 素 四 环 素 差 向 金 霉 素 去 甲 基 金 霉 素 金 霉 素 甲 烯 土 霉 素 多 西 环 素 和 土 霉 素 安 捷 伦 固 相 萃 取 柱 和 反 相 Agilent ZORBAX RX C8 column (5 µm, 150 mm 2.1 mm) 色 谱 柱 在 此 方 法 中 被 用 于 样 品 的 纯 化 和 分 离 各 组 分 的 检 测 限 介 于 0.5 至 10.0 µg/kg 之 间, 定 量 限 (LOQ) 小 于 50 µg/kg 线 性 校 正 曲 线 的 范 围 是 5 至 1000 µg/kg 总 回 收 率 在 76.4% 至 101% 之 间, 相 对 标 准 偏 差 (RSD, n = 6) 小 于 8.4% 仪 器 条 件 HPLC 色 谱 柱 : ZORBAX RX-C8, 2.1 mm 150 mm, 5 µm ( 部 件 号 883700-906) 流 速 : 0.3 ml/min 流 动 相 : A: 水 /0.1% 甲 酸 B: 甲 醇 梯 度 : 0-10 min, B 从 5% 到 30% 10-12 min, B 从 30% 到 40% 12.5-18 min, B 65% 18.5-25 min, B 95% 25.5 min, B 5.0% 总 运 行 时 间 : 28 min 后 运 行 时 间 : 5 min 柱 温 : 30 C 进 样 量 : 5 µl 质 谱 参 数 离 子 源 电 喷 雾 离 子 化 模 式 正 离 子 模 式 干 燥 气 温 度 350 C 干 燥 气 流 速 雾 化 器 压 力 毛 细 管 电 压 10 L/min 45 psi 4000 V 化 合 物 名 称 碰 撞 诱 导 母 离 子 子 离 子 碰 撞 能 量 保 留 时 间 解 离 电 压 (V) (min) 二 甲 胺 四 环 素 120 458 352 35 441 20 8.58 差 向 土 霉 素 120 445 410 20 427 10 8.60 差 向 四 环 素 120 461 426 20 444 15 9.47 四 环 素 120 445 410 20 427 15 9.90 土 霉 素 120 461 426 20 443 10 9.95 去 甲 基 金 霉 素 120 465 430 25 448 15 11.25 差 向 金 霉 素 120 479 444 22 462 15 11.59 金 霉 素 120 479 444 22 462 15 12.95 甲 烯 土 霉 素 120 443 381 25 426 15 13.98 多 西 环 素 120 445 154 30 428 15 14.08 固 相 萃 取 程 序 提 取 步 骤 : 称 5 克 牛 奶 样 品 ( 精 确 至 0.01 g) 于 50 毫 升 比 色 管 中, 溶 于 0.1 M/L Na 2 EDTA-Mcllvaine 缓 冲 液, 定 容 至 50 毫 升 涡 旋 震 荡 1 分 钟, 提 取 液 在 冰 水 混 合 液 中 超 声 10 分 钟 将 样 品 转 移 至 50 毫 升 聚 丙 烯 离 心 管 中 并 冷 却 至 0 C ~ 4 C 样 品 在 15 C 下,5000 r/min 离 心 10 分 钟 用 快 速 滤 纸 过 滤 净 化 : 取 10 毫 升 提 取 液 ( 相 当 于 1g 样 品 ), 注 入 安 捷 伦 SampliQ OPT 型 固 相 萃 取 柱 ( 部 件 号 5982-3036), 速 度 为 每 秒 一 滴 当 它 完 全 洗 脱 后, 用 三 氟 乙 酸 调 节 3 ml 水 至 ph 4.5 清 洗 固 相 萃 取 柱, 然 后 丢 弃 所 有 流 出 物 在 2.0 kpa 的 负 压 下, 抽 固 相 萃 取 柱 5 分 钟 用 10 ml 的 10 mmol 乙 二 酸 的 甲 醇 溶 液 洗 脱 收 集 洗 脱 液, 在 40 C 下 氮 气 吹 至 干 用 1 ml 的 初 始 流 动 相 溶 解 残 留 物 用 0.45 µm 的 滤 膜 过 滤, 然 后 进 样 图 1. 使 用 安 捷 伦 SampliQ OPT 固 相 萃 取 从 猪 肉 中 提 取 青 霉 素 28
结 果 10 5 2.4 2.2 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 + TIC MRM (** & **) chaxiangsihuansu_01.d 1 1 A 4-10 5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 + TIC MRM (** & **) sihuansu_01.d 1 1 B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Counts vs. acquisition time (min) 图 1. 四 环 素 和 它 的 降 解 产 物 差 向 四 环 素 的 分 离 色 谱 图 牛 奶 中 回 收 率 RSD % RSD % 牛 奶 中 回 收 率 RSD % RSD % 名 称 ( 浓 度 50 ppb n=6) ( 信 号 响 应 n=6) ( 离 子 比 n=6) ( 浓 度. 100 ppb n=6) ( 信 号 响 应 n=6) ( 离 子 比 n=6) 二 甲 胺 四 环 素 96.5 4.9 2.1 101.4 1.6 1.0 差 向 四 环 素 89.2 3.8 1.5 96.3 1.6 0.9 差 向 土 霉 素 84.4 5.4 1.3 88.2 0.9 0.6 四 环 素 86.1 2.5 1.2 90.7 1.1 1.2 土 霉 素 77.6 3.8 1.6 82.5 1.2 0.9 去 甲 基 金 霉 素 79.2 2.0 3.1 84.7 0.9 0.6 差 相 金 霉 素 76.4 5.5 5.4 84.3 1.1 0.5 金 霉 素 94.3 4.5 1.5 100.9 1.8 1.1 甲 烯 土 霉 素 86.3 1.0 1.9 91.2 1.2 0.8 强 力 霉 素 78.7 3.6 6.7 82.4 1.0 0.8 表 3. 牛 奶 基 质 中 四 环 素 的 定 量 结 果 订 购 信 息 Agilent SampliQ OPT 聚 合 物 固 相 萃 取 小 柱, 60 mg, 3 ml. 部 件 号 5982-3036. Agilent ZORBAX Rx-C8 LC 色 谱 柱, 2.1 mm x 150 mm, 5 µm. 部 件 号 883700-906. 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-3816CHCN 29
利 用 安 捷 伦 SampliQ SCX 固 相 萃 取 柱 和 液 相 色 谱 / 串 联 质 谱 联 用 检 测 猪 肉 中 的 b2- 激 动 剂 ( 出 版 号 5990-4180CHCN) 前 言 b2- 激 动 剂 是 广 泛 应 用 于 猪 肉 生 产 中 的 一 种 非 法 生 长 促 进 剂 最 近 发 生 的 中 毒 事 件 都 是 因 为 猪 肉 中 含 有 高 浓 度 的 β- 激 动 剂 ( 克 仑 特 罗 ) 本 应 用 报 告 采 用 了 安 捷 伦 公 司 新 推 出 的 固 相 萃 取 (SPE) 产 品 来 提 取 和 浓 缩 猪 肉 中 的 β- 激 动 剂, 并 采 用 LC-MS/MS 进 行 分 析 固 相 萃 取 程 序 预 处 理 : 3 ml 甲 醇 平 衡 : 3 ml 水 仪 器 条 件 液 相 色 谱 仪 条 件 色 谱 柱 : 安 捷 伦 ZORBAX Eclipse Plus C18 色 谱 柱, 50 2.1 mm, 1.8 µm ( 部 件 号 : 959741-906) 流 速 : 柱 温 : 40 C 进 样 量 : 5 µl 0.4 ml/min 流 动 相 : 水 (0.1% 甲 酸 溶 液 +2mM 乙 酸 铵,A), 乙 腈 (0.1% 甲 酸, B) 梯 度 : 时 间 ( 分 钟 ) %A %B 0 90 10 0.5 90 10 1.8 20 80 2 90 10 3.5 90 10 上 样 : 5 ml 猪 肉 提 取 物 清 洗 A: 2 ml 水 清 洗 B: 2 ml 2% 甲 酸 水 溶 液 洗 脱 : 5 ml 5% 氨 的 甲 醇 溶 液 40 C 氮 气 吹 干 复 溶 于 1 ml 0.1% 甲 酸 的 水 / 乙 腈 (90:10) 溶 液 图 1. 猪 肉 的 清 理 和 浓 缩 - 固 相 萃 取 过 程 30
结 果 图 2. 加 标 1.0 ng/g 的 猪 肉 样 品 萃 取 物 的 色 谱 图 加 标 浓 度 回 收 率 RSD 化 合 物 (ng/g 猪 肉 ) (%) (n=6) 特 布 他 林 0.5 88.7 5.4 1 98.0 7.2 2 100.8 5.9 沙 丁 胺 醇 0.5 100.6 1.8 1 92.9 2.1 2 97.4 3.9 克 仑 特 罗 0.5 82.3 5.0 1 91.5 6.3 2 90.6 4.3 福 莫 特 罗 0.5 85.1 1.9 1 83.0 4.0 2 77.9 2.5 订 购 信 息 Agilent SamliQ SCX 聚 合 物 小 柱, 50 x 3 ml 萃 取 管, 60 mg. 部 件 号 5982-3236. Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 LC 色 谱 柱, 50 mm x 2.1 mm, 1.8 µm. 部 件 号 959741-906. 表 1. 采 用 安 捷 伦 SampliQ SCX 进 行 固 相 萃 取 猪 肉 中 b2- 激 动 剂 的 回 收 率 和 重 现 性 ; ( 部 件 号 : 5982-3236), 平 均 回 收 率 90%, 平 均 相 对 标 准 偏 差 4.4% 如 需 查 看 这 篇 完 整 的 应 用 报 告, 请 登 录 www.agilent.com/chem/cn 网 站 查 找 5990-4180CHCN 31
使 用 Agilent SampliQ QuEChERS 试 剂 盒 简 化 样 品 制 备 过 程 并 确 保 优 质 结 果 Agilent SampliQ QuEChERS 试 剂 盒 采 用 QuEChERS 方 法, 简 化 过 程, 节 省 时 间 并 提 高 效 率 与 其 它 QuEChERS 提 取 试 剂 盒 不 同,SampliQ 的 无 机 盐 和 缓 冲 盐 预 装 在 脱 水 包 装 中, 您 可 以 按 照 标 准 QuEChERS 程 序, 溶 解 后 就 可 以 直 接 将 它 们 添 加 到 您 的 样 品 中 另 外, 所 有 的 QuEChERS 试 剂 盒 都 是 Agilent SampliQ 系 列 SPE 产 品 的 成 员 SampliQ SPE 产 品 在 美 国 生 产 制 造 并 严 格 遵 守 ISO-9001 标 准, 具 有 您 所 期 待 的 来 自 行 业 领 先 的 色 谱 仪 色 谱 柱 和 消 耗 品 的 制 造 商 所 能 提 供 的 高 质 量 与 优 异 性 能 如 需 获 取 更 多 信 息, 请 访 问 : www.agilent.com/chem/sampliq:cn 如 需 观 看 QuEChERS 标 准 操 作 程 序 直 播 视 频, 请 访 问 : www.agilent.com/chem/quechersdemo 获 悉 如 何 使 您 的 食 品 安 全 分 析 水 平 更 上 层 楼 Agilent SampliQ SPE 产 品 : www.agilent.com/chem/sampliq:cn 安 捷 伦 食 品 安 全 检 测 解 决 方 案 : www.agilent.com/chem/foodsafety:cn 查 找 当 地 的 安 捷 伦 客 户 中 心 : www.agilent.com/chem/contactus:cn 安 捷 伦 客 户 服 务 中 心 : 免 费 专 线 :800-820-3278 400-820-3278( 手 机 用 户 ) 联 系 我 们 : customer-cn@agilent.com 在 线 购 买 : www.agilent.com/chem/store 安 捷 伦 科 技 大 学 : http://www.lsca-china.com.cn/university 本 资 料 中 涉 及 的 信 息 说 明 和 指 标, 如 有 变 更, 恕 不 另 行 通 知 安 捷 伦 科 技 ( 中 国 ) 有 限 公 司,2009 2009 年 11 月 中 国 印 刷 5990-4917CHCN 色 谱 柱 与 消 耗 品 直 销 电 话 : 010-64397370 010-64397504 010-64397385