28 第 27 卷 [1] 中 的 糖 蛋 白 亚 家 族 成 员, 可 以 加 快 卵 巢 的 血 液 循 环, 促 进 被 FSH 预 处 理 过 的 卵 泡 成 熟 并 诱 发 排 卵 尽 管 LH 对 卵 泡 发 育 和 排 卵 的 作 用 明 显, 但 这 种 影 响 往 往 与 其 和

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1 第 27 卷 第 2 期 2015 第 2 期 年 4 月 Journal of Heilongjiang Bayi Agricultural University 27(2):27~31 Apr doi: /j.issn 卵 巢 与 输 卵 管 FSHR 及 LHR 基 因 定 量 的 研 究 何 晶 1, 耿 仁 德 2, 计 红 3, 马 莉 3, 张 虹 亮 3, 孔 凡 志 3, 程 晓 旭 3, 杨 焕 民 3 (1. 黑 龙 江 省 农 垦 哈 尔 滨 管 理 局 动 物 卫 生 监 督 所, 哈 尔 滨 ;2. 黑 龙 江 省 农 垦 总 局 建 三 江 分 局 勤 得 力 农 场 第 六 管 理 区 ; 3. 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 动 物 科 技 学 院 ) 摘 要 : 为 了 研 究 鸡 卵 巢 输 卵 管 子 宫 部 输 卵 管 漏 斗 部 FSHR 及 LHR 基 因 表 达 水 平 差 异, 实 验 从 的 子 宫 部 卵 巢 漏 斗 部 中 提 取 总 RNA, 利 用 RT-PCR 技 术 获 得 FSHR LHR 目 的 基 因, 并 应 用 实 时 荧 光 定 量 PCR 进 行 定 量 检 测 结 果 显 示 卵 巢 组 织 FSHR mrna 表 达 水 平 显 著 高 于 子 宫 部 与 漏 斗 部 组 织 (P<0.01), 子 宫 部 与 漏 斗 部 组 织 FSHR mrna 表 达 水 平 没 有 显 著 性 差 异 ; 子 宫 部 组 织 LHR mrna 表 达 水 平 极 显 著 高 于 其 他 两 组 (P<0.01), 但 卵 巢 漏 斗 部 组 织 LHR mrna 表 达 水 平 没 有 显 著 性 差 异 实 验 通 过 研 究 鸡 卵 巢 输 卵 管 子 宫 部 输 卵 管 漏 斗 部 FSHR 及 LHR 基 因 表 达 水 平 差 异, 研 究 为 今 后 研 究 禽 类 生 殖 生 理 提 供 基 础 数 据 和 科 学 依 据 关 键 词 : 蛋 鸡 ; 促 卵 泡 激 素 受 体 ; 促 黄 体 生 成 素 受 体 ; 基 因 表 达 量 ; 荧 光 定 量 中 图 分 类 号 :S879.3 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2015) Genetic Quantitative Research of FSHR and LHR in Ovary and Oviduct of Hy-line Brown Laying Hens He Jing 1,Geng Rende 2,Ji Hong 3,Ma Li 3,Zhang Hongliang 3,Kong Fanzhi 3,Cheng Xiaoxu 3,Yang Huanmin 3 (1.Institute of Animal Health Supervision,Harbin Urban Administration of Land Reclamation Bureau in Heilongjiang Province, Harbin ;2.The Sixth District of Qindeli Farm of Jiansanjiang Land Reclamation Bureau,Heilongjiang Land Reclamation Bureau;3.College of Animal Science and Technology,Heilongjiang Bayi Agricultural University) Abstract: In order to study the expression level of FSHR and LHR in ovary,the tubal uterine department and fallopian tube funnel department,ovary,tubal uterine department and fallopian tube funnel department were obtained from Hy-line brown laying hens,and the total RNA was extracted. FSHR and LHR target genes were amplificatied by using qrt-pcr,and the amount of FSHR and LHR were detected by fluorescent quantitative PCR. The results showed that FSHR mrna expression level in ovarian tissue was extremely significantly higher than in the tubal uterine department and fallopian tube funnel department(p<0.01),and FSHR mrna expression level in the tubal uterine department and fallopian tube funnel department had no significant difference. LHR mrna expression level in tubal uterine department was extremely significantly higher than in ovary and fallopian tube funnel department (P<0.01),and LHR mrna expression level in ovary and fallopian tube funnel department had no significant difference. The study illustrated the expression of FSHR and LHR in ovary,tubal uterine department and fallopian tube funnel department,which provided the foundation for the study on reproductive physiology of poultry. Key words:hens;fshr;lhr;gene expression level;fluorescence quantitative 促 卵 泡 素 (FSH) 和 促 黄 体 素 (LH) 是 家 禽 生 殖 系 正 常 发 育 和 生 殖 功 能 的 重 要 激 素 它 的 生 理 作 用 是 统 的 主 要 调 控 激 素, 其 他 有 许 多 激 素 是 通 过 对 这 两 通 过 分 布 于 颗 粒 细 胞 的 特 异 性 受 体 FSH 受 体 种 激 素 分 泌 的 影 响 而 间 接 发 挥 调 节 作 用 的 FSH 是 (FSHR) 所 介 导 黄 体 生 成 素 受 体 (Luteinizing 垂 体 分 泌 的 一 种 糖 蛋 白 激 素, 是 促 进 和 维 持 性 腺 的 hormone receptor,lhr) 属 于 G 蛋 白 偶 联 受 体 超 家 族 收 稿 日 期 : 作 者 简 介 : 何 晶 (1965-), 女, 高 级 兽 医 师, 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 毕 业, 现 主 要 从 事 禽 类 生 殖 生 理 学 方 面 的 研 究 工 作 通 讯 作 者 : 杨 焕 民, 男, 教 授, 博 士 研 究 生 导 师, yanghuanmin@aliyun.com

2 28 第 27 卷 [1] 中 的 糖 蛋 白 亚 家 族 成 员, 可 以 加 快 卵 巢 的 血 液 循 环, 促 进 被 FSH 预 处 理 过 的 卵 泡 成 熟 并 诱 发 排 卵 尽 管 LH 对 卵 泡 发 育 和 排 卵 的 作 用 明 显, 但 这 种 影 响 往 往 与 其 和 FSH 的 协 同 是 分 不 开 的 禽 类 的 卵 巢 是 产 生 卵 细 胞 的 部 位 ; 输 卵 管 漏 斗 部, 即 输 卵 管 的 伞 状 部, 是 运 送 卵 细 胞 和 提 供 受 精 的 部 位, 也 是 卵 子 的 受 精 部 位 而 子 宫 部 ( 壳 腺 部 ) 主 要 是 形 成 石 灰 质 卵 壳, 防 止 细 菌 的 侵 入 目 前, 作 为 FSH 和 LH 两 种 生 殖 激 素 受 体 FSHR 与 LHR 在 上 述 部 位 的 表 达 水 平 少 有 研 究, 因 此 研 究 主 要 应 用 荧 光 定 量 PCR 法 检 测 输 卵 管 子 宫 部 卵 巢 输 卵 管 漏 斗 部 FSHR 及 LHR 受 体 基 因 表 达 水 平, 为 今 后 研 究 禽 类 生 殖 生 理 产 蛋 性 能 及 生 殖 激 素 与 抱 性 方 面 的 学 者 提 供 基 础 数 据 和 科 学 依 据 1 试 验 材 料 与 方 法 1.1 样 品 采 集 和 试 剂 选 取 实 验 室 饲 养 的 产 蛋 期 海 兰 褐 鸡 6 只, 通 过 科 学 饲 养 并 同 时 记 录 产 蛋 情 况, 可 提 前 预 测 排 卵 时 间 临 检 健 康 后, 取 的 卵 巢 输 卵 管 的 子 宫 部 和 漏 斗 部 样 品, 置 于 -80 保 存 实 验 中 采 用 的 试 剂 主 要 有 氯 仿, 异 丙 醇, 乙 醇, DEPC 处 理 水,TRIzol,M -MLV 反 转 录 酶,TaKaRa Taq, 反 转 录 试 剂 盒,DNA marker,dna 凝 胶 回 收 与 纯 化 试 剂 盒,6*loading Buffer, 培 养 液 (Hyclone M199), 琼 脂 糖,Tris,EDTA, 荧 光 染 料 等 1.2 提 取 颗 粒 细 胞 总 RNA 从 -80 冰 箱 中 取 出 装 有 卵 巢 输 卵 管 子 宫 部 和 漏 斗 部 样 品 各 0.2 g, 置 于 液 氮 预 冷 的 研 钵 中 用 石 英 砂 研 磨 至 无 可 见 颗 粒 参 考 Trizol 法 RNA 提 取 试 剂 盒 操 作 说 明 提 取 细 胞 总 RNA 1.3 总 RNA 质 量 的 检 测 采 用 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 与 核 酸 定 量 分 析 仪 鉴 定 RNA 质 量 和 浓 度 检 测 总 RNA 浓 度 及 其 纯 度 : 将 1 μl 总 RNA 溶 解 于 99 μl DEPC 处 理 水 中, 应 用 核 酸 定 量 分 析 仪 测 定 提 取 的 RNA 的 OD 值,OD260 与 OD280 之 间 的 比 值 应 在 1.6~2.0 之 间 检 测 总 RNA 完 整 性 以 及 有 无 严 重 的 污 染 现 象 : 取 1 μl 总 RNA,1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳, 检 测 5 S 18 S 和 28 S 三 条 带, 从 而 确 定 提 取 的 总 RNA 是 否 能 用 于 下 一 步 试 验 1.4 PCR 引 物 设 计 与 合 成 参 考 NCBI 上 注 册 发 表 的 FSHR LHR 以 及 GAPDH ( 内 参 ) 核 苷 酸 序 列, 利 用 Primer Primer5.0 引 物 设 计 软 件 设 计 扩 增 FSHR LHR 以 及 GAPDH 基 因 的 引 物, 以 上 引 物 均 由 上 海 生 工 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司 合 成, 引 物 如 下 表 1 所 示 表 1 目 的 基 因 引 物 与 PCR 扩 增 产 物 长 度 Table 1 Primers of purpose gene and product length of PCR amplification 目 的 基 因 GAPDH 引 物 序 列 (5 ~ 3 ) 5 -GCTGATGCTCCCATGTTCGTGAT-3 5 -GTGGTGCAAGAGGCATTGCTGAC-3 5 -GTAACACTGGAATAAGGGAAT-3 5 -GAAGGCTTGACTGTGGATA-3 5 -TCCTGTGCTAACCCTTTCCTCTA-3 5 -AACCAGTGAATAAATAGTCCCATC-3 扩 增 长 度 /bp 86 LHR 191 FSHR RT-PCR 反 应 分 别 加 入 1 μl 50 μm 的 Oligo (dt18),4 μl DEPC 处 理 水 到 各 样 品 提 取 的 1 μl 总 RNA 模 板 中, 总 体 积 为 6 μl 均 匀 混 合 后 70 水 浴 10 min, 取 出 后 迅 速 放 置 于 冰 上 2 min 离 心 使 混 合 液 沉 于 管 底 在 管 中 加 入 2 μl 的 5xM -MLV Buffer,0.5 μl 的 10 mm 的 dntp,0.25 μl 的 40 U μl -1 RNase Inhibitor,0.25~1 μl 的 DEPC 处 理 水, 使 总 体 积 为 10 μl 混 匀 后 42 水 浴 60 min 完 成 上 步 骤, 则 置 于 70 水 浴 15 min, 取 出 后 在 冰 上 急 冷 1 min, 离 心 使 溶 液 沉 于 管 底 将 获 得 的 cdna 用 于 下 步 PCR 扩 增 试 验

3 第 2 期 何 晶 等 : 卵 巢 与 输 卵 管 FSHR 及 LHR 基 因 定 量 的 研 究 PCR 反 应 体 系 将 反 转 录 cdna 作 为 模 板, 设 计 合 成 的 FSHR LHR 和 GAPDH 基 因 的 引 物 进 行 PCR 反 应, 扩 增 达 到 相 应 的 基 因 片 段 50 μl PCR 体 系 如 表 2:cDNA 模 板 1.0 μl;10 PCR Buffer 5.0 μl;p1(20 pmol μl -1 ) 1.0 μl;p2 (20 pmol μl -1 ) 1.0μL;dNTP Mixture (2.5 mmol L -1 each)8.0 μl;taq 酶 (5 U μl -1 )0.5 μl, 加 水 至 总 体 积 50 μl 扩 增 FSHR 基 因 的 PCR 反 应 参 数 为 :94 预 变 性 5 min;94 变 性 30 sec,56 退 火 30 sec,35 个 循 环 ; 最 后 72 延 伸 5 min 扩 增 LHR 基 因 的 PCR 反 应 参 数 为 :94 预 变 性 5 min;94 变 性 30 sec, 52 退 火 30 sec,35 个 循 环 ; 最 后 72 延 伸 5 min GAPDH 在 以 上 两 个 PCR 反 应 参 数 下 均 能 反 应 每 个 样 品 设 3 个 重 复 孔, 利 用 实 时 荧 光 PCR 仪 进 行 扩 增 PCR 反 应 后 吸 取 5 μl 反 应 产 物 进 行 凝 胶 检 测, 由 于 所 扩 增 的 基 因 片 段 都 小 于 400 bp, 故 选 用 2.0% 的 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 来 检 验 扩 增 的 结 果, 并 应 用 紫 外 灯 观 察 结 果 1.7 基 因 测 序 验 证 从 琼 脂 糖 胶 上 切 下 与 预 期 大 小 一 致 的 PCR 扩 增 产 物, 用 DNA 片 段 纯 化 试 剂 盒 进 行 纯 化, 将 其 与 PMD-18-T 载 体 进 行 连 接 反 应, 转 化 DH5α 感 受 态 细 胞, 均 匀 涂 布 与 氨 苄 抗 性 的 LB 固 体 培 养 基 平 板 上, 37 温 育 12 h, 挑 取 白 色 单 个 菌 落, 转 移 有 约 3~4 ml 氨 苄 抗 性 的 液 体 LB 培 养 基 中,37 过 夜 碱 裂 解 法 小 剂 量 制 备 质 粒, 酶 切 和 PCR 鉴 定, 将 鉴 定 为 阳 性 的 重 组 质 粒 送 上 海 生 工 生 物 工 程 公 司 进 行 测 序 测 定 结 果 应 用 生 物 信 息 学 软 件 DNAstar 与 引 物 设 计 所 参 考 的 DNA 序 列, 进 行 同 源 性 分 析, 从 而 验 证 PCR 产 物 的 准 确 性 1.8 荧 光 定 量 使 用 SYBR Premix Ex Taq Ⅱ ( 宝 生 物 染 料 法 荧 光 定 量 试 剂 盒 ) 进 行 荧 光 定 量 试 验, 反 应 体 系 与 1.6 一 致 2 结 果 2.1 总 RNA 电 泳 结 果 提 取 的 蛋 鸡 组 织 总 RNA, 在 1.0% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 后, 图 1 中 可 看 到 28 S 18 S 和 5 S 这 几 条 带 从 上 至 下 可 观 察 到,28 S 条 带 最 亮,18 S 条 带 略 暗,5 S 条 带 较 暗, 由 此 可 知, 提 取 的 RNA 较 为 完 整, 符 合 继 续 试 验 的 要 求 核 酸 蛋 白 测 定 仪 测 定 RNA 的 OD 260/280 值 在 1.80~2.00 之 间, 同 样 也 符 合 试 验 要 求 图 1 RNA 提 取 结 果 Fig.1 Agarose gel electrophoresis of total RNA 2.2 RT-PCR 扩 增 目 的 片 段 结 果 采 用 RT-PCR 扩 增 目 的 片 段 后,1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 将 凝 胶 置 于 紫 外 灯 下 观 察, 观 察 到 与 预 期 大 小 相 符 的 目 的 条 带 (86 bp 207 bp 191 bp), 且 PCR 扩 增 的 产 物 条 带 单 一, 证 明 引 物 序 列 设 计 特 异 性 较 高, 结 果 如 图 2 M.marker 2 000;1.GAPDH 86 bp;2.fshr 207 bp;3.lhr 191 bp 图 2 GAPDH,FSHR,LHR 目 的 基 因 PCR 产 物 Fig.2 Agarose gel electrophoresis of PCR product for GAPDH,FSHR and LHR 2.3 核 酸 序 列 测 定 结 果 与 序 列 分 析 利 用 DNAstar 等 软 件 分 别 对 GAPDH FSHR LHR 基 因 重 组 质 粒 核 酸 序 列, 将 其 与 参 考 序 列 进 行 同 源 性 分 析 ( 进 行 序 列 对 比 时, 上 排 序 列 为 了 试 验 扩 增 的 鸡 基 因, 下 排 为 NCBI 上 发 表 的 基 因 ), 结 果 如 下 GAPDH 核 酸 测 序 结 果 与 比 对 同 源 性 为 98.9%, 如 图 3:

4 30 第 27 卷 图 3 克 隆 蛋 鸡 GAPDH 基 因 片 段 与 NCBI 发 表 的 序 列 的 同 源 性 分 析 Fig.3 Homology analysis of the target gene segment of GAPDH clone and NCBI gallus FSHR 核 酸 测 序 结 果 与 比 对 同 源 性 为 96.2%, 如 图 4 图 4 克 隆 蛋 鸡 FSHR 基 因 片 段 与 NCBI 发 表 的 序 列 的 同 源 性 分 析 Fig.4 Homology analysis of the target gene segment of FSHR clone and NCBI gallus LHR 核 酸 测 序 结 果 与 比 对 同 源 性 为 98.95%, 如 图 5 图 5 克 隆 蛋 鸡 LHR 基 因 片 段 与 NCBI 发 表 的 序 列 的 同 源 性 分 析 Fig.5 Homology analysis of the target gene segment of LHR clone and NCBI gallus 2.4 荧 光 定 量 检 测 mrna 表 达 结 果 应 用 荧 光 定 量 仪 检 测 输 卵 管 子 宫 部 卵 巢 输 卵 管 漏 斗 部 三 组 中 FSHR 和 LHR 的 表 达 情 况 ( 见 图 6 和 图 7) 结 果 显 示 : 如 图 6 子 宫 部 与 漏 斗 部 FSHR 表 达 水 平 差 异 不 显 著, 卵 巢 组 织 FSHR mrna 表 达 水 平 与 其 他 两 组 存 在 极 显 著 性 差 异 (P<0.01); 图 7 卵 巢 与 漏 斗 部 LHR 表 达 水 平 差 异 不 显 著, 子 宫 部 LHR mrna 表 达 水 平 与 其 他 两 组 存 在 极 显 著 差 异 (P<0.01)

5 第 2 期 何 晶 等 : 卵 巢 与 输 卵 管 FSHR 及 LHR 基 因 定 量 的 研 究 31 注 :# 表 示 与 子 宫 部 组 和 漏 斗 部 相 比, 卵 巢 FSHR mrna 的 表 达 情 况 差 异 极 显 著 图 6 FSHR mrna 的 表 达 情 况 Fig.6 Gene expression quantities of FSHR mrna 注 :# 表 示 与 卵 巢 组 和 漏 斗 部 组 相 比,LHR mrna 的 表 达 情 况 差 异 极 显 著 图 7 LHR mrna 的 表 达 情 况 Fig.7 Gene expression quantities of LHR mrna 3 讨 论 与 哺 乳 动 物 一 样, 禽 类 生 殖 活 动 也 主 要 受 生 殖 轴 下 丘 脑 垂 体 性 腺 轴 的 激 素 调 节, 受 GnRH 对 促 性 腺 激 素 细 胞 的 刺 激, 垂 体 中 促 卵 泡 素 (FSH) 开 始 合 [2] 成 分 泌 转 运 并 最 终 作 用 于 卵 巢 和 睾 丸 的 FSHR, 合 成 并 分 泌 相 应 的 生 殖 腺 激 素 参 与 繁 殖 行 为 的 调 节, 诱 导 促 黄 体 素 (LH) 等 激 素 的 合 成 与 释 放, 从 而 促 进 卵 泡 的 发 育 和 成 熟, 对 动 物 繁 殖 性 状 的 调 控 起 着 重 要 作 用 在 过 去 的 十 多 年 里, 人 们 也 逐 渐 发 现 FSH 和 LH 除 了 影 响 传 统 的 性 腺 靶 位 点 ( 如 卵 巢 ) 外, 促 性 腺 激 素 受 体 还 存 在 于 整 个 生 殖 道 的 输 卵 管 子 宫 内 [3] 膜 子 宫 肌 层 子 宫 颈 和 子 宫 血 管 中 FSHR 与 LHR 分 别 是 FSH 与 LH 发 挥 作 用 的 结 合 位 点,FSH 和 LH 在 动 物 繁 殖 领 域 具 有 重 要 作 用, 即 能 够 调 节 性 腺 发 育, 调 控 性 激 素 的 分 泌, 维 持 动 物 第 二 性 征 和 性 行 为, 这 使 FSHR 和 LHR 成 为 提 高 禽 类 产 蛋 性 能 的 研 究 目 标 之 一 方 弟 安 等 研 究 发 现 皖 西 白 鹅 在 产 蛋 前 1 周 FSHβ mrna 表 达 维 持 较 高 水 平 直 至 产 蛋 10 天 达 最 高, 到 休 产 期 和 就 巢 前 期 迅 速 下 降, 进 入 就 巢 末 期,FSHβ mrna 水 平 在 此 上 升 达 [4-5] 到 较 高 水 平 FSHβ mrna 水 平 规 律 性 变 动 说 明 [7] FSH 与 皖 西 白 鹅 的 产 蛋 关 系 密 切 试 验 检 测 了 LHR 和 FSHR 在 蛋 鸡 的 子 宫 部 卵 巢 漏 斗 部 的 表 达 量 差 异, 结 果 显 示 子 宫 部 卵 巢 漏 斗 部 FSHR 存 在 显 著 差 异, 卵 巢 FSHR 极 显 著 高 于 其 他 两 个 部 位, 提 示 实 验 动 物 正 处 于 产 蛋 高 峰 期, 卵 巢 机 能 处 于 良 好 水 平 输 卵 管 漏 斗 部 的 FSHR 有 具 有 较 高 的 表 达 量, 因 为 漏 斗 部 是 禽 类 卵 泡 受 精 部 位, 提 示 FSH 与 FSHR 结 合 后 对 禽 类 的 受 精 有 重 要 作 用 黄 体 生 成 素 (LH) 是 由 垂 体 前 叶 促 黄 体 素 细 胞 ( 嗜 碱 性 细 胞 ) 产 生 的 一 种 糖 蛋 白 激 素, 在 FSH 的 协 同 作 用 下 促 使 排 卵, 形 成 黄 体 并 分 泌 孕 激 素 在 雌 禽 的 排 卵 周 期 内, 由 于 垂 体 不 断 释 放 FSH 和 LH, 刺 激 卵 泡 生 长 发 育, 不 断 生 长 的 卵 泡 合 成 孕 酮 逐 渐 增 加, 刺 激 垂 体 释 放 LH, 当 孕 酮 对 垂 体 的 刺 激 达 到 一 定 的 阐 值, 引 起 LH 的 大 量 释 放, 使 排 卵 前 的 LH 达 峰 值, [8] 高 水 平 的 LH 作 用 于 成 熟 的 卵 泡 促 发 排 卵 LH 是 潜 在 的 能 够 调 节 输 卵 管 功 能 的 循 环 激 素 中 的 一 种, 并 且 已 经 在 人 牛 猪 和 山 羊 的 输 卵 管 中 证 实 了 LHR [9-10] 的 存 在 但 是 在 研 究 中 发 现 子 宫 部 LHR mrna 显 著 高 于 其 他 两 组, 漏 斗 部 和 卵 巢 之 间 差 别 却 不 显 著, 提 示 LH 对 鸡 输 卵 管 子 宫 部 功 能 可 能 有 较 大 的 调 节 作 用 实 验 成 功 提 取 了 总 RNA, 反 转 了 cdna, 成 功 的 通 过 荧 光 定 量 PCR 的 技 术 检 测 LHR 和 FSHR 在 蛋 鸡 的 子 宫 部 卵 巢 漏 斗 部 的 表 达 量 差 异, 为 探 索 禽 类 产 蛋 性 能 机 制 奠 定 了 重 要 基 础 参 考 文 献 : [1] Menon K M,Munshi U M,Clouser C L,et al. Regulation of luteinizing hormone/human chor -ionic gonadotropin receptor expression:a perspective[j].biol Reprod,2004,70 (4): [2] 陈 永 华. 自 然 光 周 期 条 件 下 种 鹅 血 清 生 化 指 标 生 殖 激 素 水 平 和 组 织 中 GnRH FSH 基 因 表 达 量 的 研 究 [D]. 扬 州 : 扬 州 大 学,2012. [3] 申 颖, 侯 志 高, 王 树 迎. 促 性 腺 激 素 受 体 在 子 宫 和 输 卵 管 中 分 布 和 作 用 的 研 究 进 展 [J]. 动 物 医 学 进 展,2007,28 (6): [4] 方 弟 安, 耿 照 玉, 罗 朝 晖, 等. 皖 西 白 鹅 生 殖 周 期 中 PRL E2 LH 和 P4 变 化 规 律 的 研 究 [J]. 上 饶 师 范 学 院 学 报, 2009,29(3): [5] 姜 润 深, 杜 晓 东, 陈 兴 勇, 等. 皖 西 白 鹅 繁 殖 周 期 中 垂 体 FSHmRNA 的 表 达 规 律 [J]. 中 国 农 业 大 学 学 报,2010,15 (6): [6] 谢 佳, 陈 忠, 王 博, 等. 热 应 激 对 蛋 鸡 繁 殖 性 能 影 响 研 究 进 展 [J]. 动 物 医 学 进 展,2011,32(6): ( 下 转 第 45 页 )

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