李 蓓 佳 等 : 应 用 高 效 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 技 术 研 究 通 脉 颗 粒 的 指 纹 图 谱 1411 制 产 品 质 量 HPLC 指 纹 图 谱 可 较 全 面 地 反 映 中 药 复 方 的 化 学 组 成 及 其 相 对 含 量, LC-MS 技 术 可 以 进
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- 难 卓
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1 1410 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (11): 应 用 高 效 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 技 术 研 究 通 脉 颗 粒 的 指 纹 图 谱 1, 李 蓓 佳 2, 向 诚 1, 杨 秀 伟 1, 吴 立 军 2, 果 德 安 1, 叶 敏 1* (1. 北 京 大 学 药 学 院 天 然 药 物 与 仿 生 药 物 国 家 重 点 实 验 室, 北 京 ; 2. 沈 阳 药 科 大 学 中 药 学 院, 辽 宁 沈 阳 ) 摘 要 : 为 了 比 较 全 面 并 且 快 速 地 阐 明 中 药 复 方 通 脉 颗 粒 的 化 学 组 成, 本 文 建 立 了 通 脉 颗 粒 的 高 效 液 相 色 谱 (HPLC-UV) 指 纹 图 谱, 并 利 用 液 相 - 二 极 管 阵 列 - 质 谱 联 用 (LC-DAD-MS) 技 术, 从 通 脉 颗 粒 中 鉴 定 了 22 个 化 合 物, 并 归 属 了 各 化 合 物 的 单 味 药 来 源 结 果 显 示 通 脉 颗 粒 的 主 要 成 分 包 括 染 料 木 素 8-C- 葡 萄 糖 苷 葛 根 素 大 豆 素 8-C- 芹 糖 (1, 6)-O- 葡 萄 糖 苷 大 豆 苷 以 及 丹 酚 酸 B 又 对 10 批 来 自 不 同 生 产 厂 家 的 样 品 进 行 HPLC 分 析, 发 现 各 样 品 的 化 学 组 成 相 似, 但 主 要 色 谱 峰 的 面 积 差 异 显 著 该 研 究 比 较 全 面 地 阐 明 了 通 脉 颗 粒 的 化 学 组 成, 为 此 中 药 复 方 制 剂 的 质 量 控 制 奠 定 基 础 关 键 词 : 通 脉 颗 粒 ; 指 纹 图 谱 ; HPLC-DAD-MS 中 图 分 类 号 : R917 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : (2010) Fingerprints of Tongmai Keli by HPLC-DAD-MS LI Bei-jia 1, 2, XIANG Cheng 1, YANG Xiu-wei 1, WU Li-jun 2, GUO De-an 1, YE Min 1* (1. The State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University, Beijing , China; 2. College of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang , China) Abstract: In order to clarify the chemical composition of Tongmai Keli, a HPLC fingerprint was established, and the 22 peaks were characterized by LC-DAD-MS. The herbal sources of these peaks were assigned. The results implied that genistin 8-C-glucoside, puerarin, daidzein 8-C-apiosyl (1, 6)-O-glucoside, daidzin, and salvianolic acid B were the main constituents of in Tongmai Keli. Ten batches of Tongmai Keli produced by different pharmaceutical companies were analyzed. Although different batches contained similar compounds, the contents of major compounds were significantly different. The method established in this study could be used for the quality control of Tongmai Keli. Key words: Tongmai Keli; fingerprint; HPLC-DAD-MS 通 脉 颗 粒 是 中 药 保 护 品 种, 收 载 于 卫 生 部 药 品 标 准, 具 有 活 血 通 脉 的 功 效, 是 临 床 治 疗 动 脉 硬 化 脑 血 栓 冠 心 病 心 绞 痛 等 心 脑 血 管 疾 病 的 常 用 方 剂 该 复 方 由 丹 参 川 芎 葛 根 三 味 药 组 成 其 中 丹 参 含 有 水 溶 性 的 丹 参 酚 酸 类 ( 如 丹 酚 酸 B) 和 脂 溶 性 的 二 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 重 大 新 药 创 制 科 技 重 大 专 项 资 助 项 目 (2009ZX ); 北 京 大 学 医 学 部 985 项 目 ( ). * 通 讯 作 者 Tel / Fax: , yemin@bjmu.edu.cn 萜 类 成 分 ( 如 丹 参 酮 ⅡA) [1] ; 川 芎 含 有 生 物 碱 类 ( 如 川 芎 嗪 ) 酚 酸 类 ( 如 阿 魏 酸 ) 和 苯 酞 类 成 分 ( 如 藁 本 内 酯 ) [2] ; 葛 根 含 有 异 黄 酮 类 成 分 ( 如 葛 根 素 和 大 豆 苷 ) [3] 然 而, 通 脉 颗 粒 的 化 学 组 成 目 前 报 道 甚 少 此 外, 通 脉 颗 粒 在 国 内 有 40 余 家 企 业 生 产, 不 同 厂 家 产 品 的 质 量 能 否 保 证 一 致 性, 也 未 见 深 入 的 报 道 通 [4 6] 脉 颗 粒 质 量 标 准 方 面 的 研 究, 目 前 仅 见 数 篇 报 道 主 要 集 中 于 制 剂 中 丹 参 素 葛 根 素 阿 魏 酸 原 儿 茶 醛 丹 参 酮 IIA 等 少 数 几 个 指 标 性 成 分 的 含 量 测 定, 难 以 全 面 反 映 通 脉 颗 粒 的 化 学 组 成, 从 而 有 效 地 控
2 李 蓓 佳 等 : 应 用 高 效 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 技 术 研 究 通 脉 颗 粒 的 指 纹 图 谱 1411 制 产 品 质 量 HPLC 指 纹 图 谱 可 较 全 面 地 反 映 中 药 复 方 的 化 学 组 成 及 其 相 对 含 量, LC-MS 技 术 可 以 进 一 步 鉴 定 化 学 成 分 的 结 构 [7] 综 合 运 用 HPLC 及 LC-MS 技 术, 可 以 全 面 快 速 地 阐 明 中 药 及 其 复 方 的 化 学 物 质 基 础, 是 解 决 中 药 质 量 控 制 的 有 力 手 段 本 研 究 首 次 建 立 了 简 便 快 速 的 LC-DAD-MS 分 析 方 法, 鉴 定 了 通 脉 颗 粒 的 22 个 化 学 成 分, 其 中 7 个 成 分 经 与 对 照 品 对 照 予 以 确 认 在 此 基 础 上, 比 较 了 10 批 来 源 于 不 同 生 产 厂 家 的 通 脉 颗 粒 样 品 的 成 分 差 异 该 研 究 比 较 全 面 地 阐 明 了 通 脉 颗 粒 的 化 学 组 成, 为 此 中 药 复 方 制 剂 的 质 量 控 制 奠 定 基 础 材 料 与 方 法 仪 器 与 试 剂 Agilent 1100 型 高 效 液 相 色 谱 仪 (Agilent Technologies, Germany), 配 有 四 元 梯 度 泵 恒 温 箱 及 二 极 管 阵 列 检 测 器 该 仪 器 通 过 ESI 电 离 源 连 接 到 LCQ Advantage 型 离 子 阱 质 谱 仪 (ThermoFisher, San Jose, CA) 色 谱 纯 乙 腈 购 自 Merck 公 司, ACS 级 甲 酸 购 自 J.T. Baker 公 司, 超 纯 水 为 自 制, 其 他 试 剂 均 为 分 析 纯 ( 北 京 化 学 试 剂 公 司 ) 不 同 厂 家 的 通 脉 颗 粒 (TM01~TM09) 购 于 各 地 药 店, TM10 为 自 制, 所 用 药 材 饮 片 购 自 北 京 联 康 大 药 房 对 照 品 葛 根 素 (puerarin) 大 豆 苷 (daidzin) 藁 本 内 酯 (ligustilide) 盐 酸 川 芎 嗪 (ligustrazine) 购 自 南 京 泽 朗 公 司 ; 丹 参 素 (danshensu) 染 料 木 苷 (genistin) 迷 迭 香 酸 (rosmarinic acid) 紫 草 酸 (lithospermic acid) 丹 酚 酸 B (salvianolic acid B) 阿 魏 酸 (ferulic acid) 丹 参 酮 IIA (tanshinoneⅡa) 隐 丹 参 酮 (cryptotanshinone) 及 原 儿 茶 醛 (protocatechuic aldehyde) 为 本 实 验 室 自 制 并 鉴 定 结 构, 纯 度 均 大 于 95% 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Zorbax SB-C 18 ( 美 国 Agilent 公 司, 250 mm 4.6 mm, 5 μm) 流 动 相 为 乙 腈 (A) 0.1% (v/v) 甲 酸 水 溶 液 (B), 梯 度 洗 脱 : 0~ 5 min, 10%~12% A; 5~13 min, 12%~15% A; 13~ 15 min, 15%~17% A; 15~20 min, 17%~23% A; 20~30 min, 23%~30% A; 30~40 min, 30%~100% A; 40~45 min, 100% A 流 速 为 1.0 ml min 1 柱 温 : 30 检 测 波 长 : 260 nm 质 谱 条 件 ESI 源 ; 鞘 气 与 助 气 均 为 高 纯 氮 气, 碰 撞 气 为 高 纯 氦 气 ; 鞘 气 流 速 : 50 个 单 位 ; 助 气 流 速 : 10 个 单 位 ; 扫 描 范 围 : m/z 180~1 000; 源 电 压 : 4.5 kv; 毛 细 管 温 度 : 320 ; 负 离 子 模 式, 毛 细 管 电 压 : 20 V; 管 透 镜 补 偿 电 压 : 70 V; 正 离 子 模 式, 毛 细 管 电 压 : +20 V, 管 透 镜 补 偿 电 压 : +70 V 柱 后 分 流 比 : 5 1 对 照 品 溶 液 制 备 分 别 精 密 称 取 各 对 照 品 1 mg, 溶 于 1 ml 甲 醇 中, 备 用 供 试 品 溶 液 制 备 通 脉 颗 粒 TM01~TM09 每 份 各 称 取 10 g ( 相 当 于 每 味 药 材 各 5 g), 加 80 蒸 馏 水 搅 拌 溶 解, 转 移 至 100 ml 量 瓶 中, 加 水 至 刻 度, 摇 匀, 即 得 TM10 依 照 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 药 品 标 准 中 成 药 成 方 制 剂 ( 第 4 册 ) 自 制 : 取 葛 根 丹 参 川 芎 药 材 各 5 g, 加 水 煎 煮 两 次, 第 1 次 1.5 h, 第 2 次 1 h, 合 并 煎 液, 趁 热 过 滤 后 蒸 干, 以 80 蒸 馏 水 100 ml 溶 解, 摇 匀, 即 得 以 上 样 品 于 分 析 前 经 0.45 μm 微 孔 滤 膜 过 滤, 吸 取 续 滤 液 10 μl 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 检 测 结 果 1 方 法 学 考 察 采 用 优 化 的 实 验 方 法, 10 批 样 品 的 HPLC-UV 指 纹 图 谱 有 17 个 共 有 峰, 分 别 以 这 些 共 有 峰 的 保 留 时 间 和 峰 面 积 的 RSD 值 为 指 标 进 行 方 法 学 考 察 取 TM10 样 品 供 试 液, 在 上 述 HPLC 条 件 下, 连 续 进 样 5 次, 考 察 仪 器 精 密 度 ; 另 取 同 批 样 品 5 份, 分 别 制 备 供 试 品 溶 液 并 进 样 分 析, 考 察 实 验 重 现 性 ; 再 将 同 一 份 供 试 品 溶 液 分 别 于 样 品 制 备 后 和 48 h 进 样 分 析, 考 察 供 试 品 溶 液 的 稳 定 性 结 果 显 示, 各 峰 保 留 时 间 与 峰 面 积 的 RSD 值 均 小 于 5%, 表 明 实 验 方 法 稳 定 可 靠 2 通 脉 颗 粒 指 纹 图 谱 的 建 立 对 来 自 9 个 不 同 厂 家 的 产 品 以 及 自 制 样 品 分 别 作 HPLC 测 定, 以 通 脉 颗 粒 中 含 量 较 丰 富 且 稳 定 存 在 的 特 征 性 成 分 葛 根 素 ( 峰 6) 为 参 照 峰, 采 用 中 药 色 谱 指 纹 图 谱 相 似 度 评 价 系 统 (2004A) 软 件 生 成 模 式 指 纹 图 谱, 自 动 标 定 的 共 有 峰 为 峰 2~13 和 峰 18~21 ( 图 1), 并 进 行 相 似 度 分 析 10 个 样 品 与 模 式 指 纹 图 谱 比 较 的 相 似 度 均 大 于 0.95, 各 峰 的 相 对 峰 面 积 RSD 值 均 小 于 6% 3 指 纹 峰 的 LC-MS 结 构 鉴 定 为 了 全 面 阐 明 通 脉 颗 粒 的 化 学 组 成, 采 用 LC- MS/MS 技 术 对 HPLC 指 纹 图 谱 的 22 个 主 要 色 谱 峰 的 结 构 进 行 指 认 与 鉴 定, 选 用 TM01 ( 购 于 同 仁 堂 ) 和 TM10 ( 自 制 样 品 ) 进 行 LC-MS 检 测, 以 TM10 的 质 谱 数 据 进 行 分 析, 结 果 见 表 1 其 中 7 个 色 谱 峰 经 与 对 照 品 比 对, 保 留 时 间 紫 外 光 谱 质 谱 均 一 致, 分 别
3 1412 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (11): Figure 1 HPLC-UV chromatograms of different Tongmai Keli and their HPLC-UV fingerprints. Peaks 1: Danshensu; 2: Daidzein 7-O-glucoside-8-C-glucoside; 3: Daidzein 7, 4 -di-o-glucoside; 4: Genistein 8-C-glucoside; 5: Genistein 8-C-apiosyl-O-glucoside; 6: Puerarin; 7: Daidzein 8-C-apiosyl (1, 6)-O-glucoside; 8: Daidzin; 9: 3 -Methoxydaidzin; 10: Genistein 8-C-apiosyl-O-glucoside; 11: Daidzein C-glucoside; 12: Genistin; 13: Formononetin 8-C-apiosyl (1 6)-O-glucoside; 14: 4 -Methoxypurarin; 15: Salvianolic acid D; 16: Salvianolic acid E; 17: Rosmarinic acid; 18: Lithospermic acid; 19: 3 -Methoxypuerarin 8-C-apiosyl (1 6)-O-glucoside; 20: Formononetin; 21: Salvianolic acid B; 22: Coniferyl ferulate. * Common peak Table 1 Identification of chemical compounds in Tongmai Keli by LC-DAD-ESI/MS. * Confirmed by comparing with pure standards; n/a: Not available; P: From Puerariae Lobatae; S: From Salviae Miltiorrhizae; L: From Ligusticum chuanxiong No. Rt/min λ max /nm m/z [M H] ( )-MS/MS [M+H] + (+)-MS/MS 1 * 5.02 n/a 197 n/a n/a n/a Danshensu S , 306 (h) , 457, , 459, 297 Daidzein 7-O-glucoside-8-C-glucoside P , 298 (h) , 255 Daidzein 7, 4 -di-o-glucoside [3] P n/a , 311, , 397, 313 Genistein 8-C-glucoside [3] P n/a , 341, 311, , 415, 313 Genistein 8-C-apiosyl-O-glucoside [8] P 6 * , 308 (h) , 295, Puerarin P , 284 (h) ,295, 267, , 399, 29 Daidzein 8-C-apiosyl (1, 6)-O-glucoside [3] P 8 * , 296 (h) Daidzin P , 280 (h) , Methoxydaidzin P , 302 (h) , 341, 311, Genistein 8-C-apiosyl-O-glucoside P , 304 (h) , , 297 Daidzein C-glucoside P 12 * , 326 (h) Genistin P , 295 (h) , 309, ,413, 311 Formononetin 8-C-apiosyl (1-6)-O-glucoside P , 295 (h) , 395, Methoxypurarin P , , 197, 175, n/a n/a Salvianolic acid D [9] S , , 339, 321 n/a n/a Salvianolic acid E [9] S 17 * , , 179, 161 n/a n/a Rosmarinic acid S 18 * , n/a n/a n/a Lithospermic acid S , , 355, 325, , 429, Methoxypuerarin 8-C-apiosyl (1-6)-O-glucoside P , 304 (h) , 237 Formononetin [8] P 21 * , n/a n/a Salvianolic acid B S n/a 355 n/a n/a n/a Coniferyl ferulate [10] L Name Source 鉴 定 为 丹 参 素 (1) 葛 根 素 (6) 大 豆 苷 (8) 染 料 木 苷 (12) 迷 迭 香 酸 (17) 紫 草 酸 (18) 和 丹 酚 酸 B (21) 其 他 色 谱 峰 通 过 分 析 UV 光 谱 负 离 子 与 正 离 子 模 式 检 测 的 MS 及 MS/MS 谱 图 ( 图 2), 并 参 考 各 单 味 药 化 学 成 分 的 文 献 报 道, 以 及 文 献 对 同 类 型 化 合 物 质 谱 裂 解 规 律 的 研 究 结 果, 初 步 推 导 了 可 能 的
4 李 蓓 佳 等 : 应 用 高 效 液 相 色 谱 - 质 谱 联 用 技 术 研 究 通 脉 颗 粒 的 指 纹 图 谱 1413 Figure 2 HPLC-UV chromatogram of Tongmai Keli (A), its crude drugs (B D), TIC chromatogram in both negative (E) and positive (F) modes. A: Tongmai Keli; B: Puerariae Lobatae Radix; C: Chuanxiong Rhizoma; D: Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma; Peaks as shown in Figure 1; * Confirmed by comparing with pure standards 化 学 结 构 异 黄 酮 类 化 合 物 的 UV 图 谱 特 征 性 很 强, 均 在 240~265 nm 显 示 较 强 的 II 带 吸 收, 在 300 nm 附 近 显 示 I 带 肩 峰 此 外, 大 豆 素 糖 苷 的 I 带 大 多 出 现 在 250 nm 附 近 ( 如 化 合 物 2), 而 染 料 木 素 糖 苷 因 有 5-OH 取 代, 其 II 带 大 多 出 现 在 260 nm 附 近 ( 如 化 合 物 10), 由 此 可 辅 助 推 导 苷 元 结 构 [11] 所 有 异 黄 酮 类 化 合 物 均 显 示 [M H] 及 [M+H] + 峰, 可 准 确 地 判 断 其 相 对 分 子 质 量 苷 元 的 结 构 以 及 糖 基 取 代 根 据 MS/MS 数 据 推 导 葛 根 黄 酮 既 有 碳 苷 又 有 氧 苷, 其 多 级 质 谱 图 差 异 显 著 例 如, 化 合 物 2 与 3 为 同 分 异 构 体, 其 相 对 分 子 质 量 均 为 578 化 合 物 3 的 二 级 质 谱 显 示 依 次 失 去 162 的 碎 片 峰 ( 负 离 子 模 式, m/z , 正 离 子 模 式, m/z ), 是 氧 苷 的 典 型 裂 解 方 式 而 化 合 物 2 的 二 级 质 谱 中, 162 的 中 性 丢 失 不 太 明 显, 较 强 的 碎 片 峰 是 由 于 丢 失 90 或 120 ( 负 离 子 模 式, m/z , 487), 是 碳 苷 的 典 型 裂 解 特 征 [12] 由 此, 化 合 物 2 与 3 的 结 构 分 别 推 导 为 大 豆 素 7-O- 葡 萄 糖 苷 -8-C- 葡 萄 糖 苷 与 大 豆 素 7, 4 - 二 -O- 葡 萄 糖 苷 化 合 物 为 来 源 于 丹 参 的 成 分, 其 质 谱 数 [9] 据 与 文 献 报 道 基 本 一 致, 故 而 初 步 鉴 定 为 丹 酚 酸 D 和 丹 酚 酸 E 化 合 物 22 来 源 于 川 芎, 其 准 分 子 离 子 峰 与 文 [10] 献 报 道 一 致, 初 步 鉴 定 为 阿 魏 酸 柏 松 内 酯 (coniferyl ferulate) 4 通 脉 颗 粒 中 各 成 分 来 源 将 以 上 鉴 定 的 化 合 物 的 各 色 谱 峰 与 单 味 药 的 HPLC 图 谱 比 对, 分 别 归 属 其 来 源 在 22 个 主 要 色 谱 峰 中, 15 个 为 异 黄 酮 类 化 合 物 均 来 自 葛 根 ; 6 个 为 丹 酚 酸 类 成 分 来 自 丹 参 ; 尽 管 川 芎 作 为 活 血 行 血 的 药 味, 具 有 较 重 要 的 配 伍 意 义, 但 是 其 化 学 成 分 在 本 实 验 的 色 谱 图 中 并 未 有 较 突 出 的 体 现, 仅 化 合 物 22 来 自 川 芎 ( 图 2) 实 验 还 考 察 了 其 他 可 能 用 于 通 脉 颗 粒 质 量 控 制 的 指 标 性 成 分 : 丹 参 酮 IIA 隐 丹 参 酮 及 藁 本 内 酯, 这 3 种 对 照 品 的 出 峰 时 间 均 在 40 min 以 后, 而 原 药 材 及 制 剂 的 HPLC 色 谱 图 中, 并 未 有 上 述 色 谱 峰 的 出 现 虽 然 水 溶 性 成 分 阿 魏 酸 在 原 药 材 及 制 剂 的 HPLC 色 谱 图 中 的 出 峰 处 均 可 见 微 弱 紫 外 吸 收, 但 质 谱 正 负 离 子 模 式 下 却 未 检 测 到 其 准 分 子 离 子 峰 以 上 现 象 与 通 脉 颗 粒 的 提 取 方 法 密 切 相 关 部 颁 标 准 收 载 的 通 脉 颗 粒 为 水 煎 剂, 有 文 献 报 道 川 芎 水 提 液 中 阿 魏 酸 含 量 较 高, 但 随 着 加 热 浸 出 时 间 的 延 长 会 缓 慢 分 解 ; 其 次, 水 不 适 合 藁 本 内 酯 等 疏 水 性 成 分 的 提 取 [13] 这 可 能 是 本 实 验 中 川 芎 的 特 征 成 分 出 现 较 少 的 原 因 实 验 结 果 表 明 : 应 尽 量 选 用 水 溶 性 成 分 对 通 脉 颗 粒 进 行 质 量 控 制 5 不 同 批 次 通 脉 颗 粒 的 比 较 LC-MS 技 术 从 通 脉 颗 粒 中 检 测 到 22 个 化 合 物, 根 据 其 色 谱 峰 面 积 的 大 小, 主 要 成 分 包 括 染 料 木 素 8-C- 葡 萄 糖 苷 (4) 葛 根 素 (6) 大 豆 素 8-C- 芹 糖 (1, 6)-O- 葡 萄 糖 苷 (7) 大 豆 苷 (8) 以 及 丹 酚 酸 B (21) 相 似 度 分 析 表 明 10 个 样 品 相 似 度 均 大 于 0.95, 各 峰 的 相 对 峰 面 积 RSD 值 均 小 于 6%, 说 明 各 样 品 的 化 学 组 成 具 有 一 定 的 相 似 性 ( 图 1) 然 而, 各 样 品 中 化 合 物 的 含 量 差 异 显 著 例 如, 虽 然 TM01 和 TM05 的 相 似 度 分 别 为 和 0.996, 但 前 述 5 个 主 要 色 谱 峰 在 前 者 中 的 峰 面 积 均 分 别 相 当 于 后 者 的 4 倍 以 上 ( 表 2); 再 如, TM05 的 图 谱 中 10 min 以 前 明 显 有 很 多 色 谱 峰, 而 在 其 他 厂 家 样 品 中 均 很 弱 以 上 结 果 表 明, 不 同 厂 家 生 产 的 通 脉 颗 粒 的 质 量 存 在 着 比 较 显 著 的 差 异, 这 可 能 是 由 于 原 料 药 材 质 量 差 异, 以 及 各 厂 家 生 产 工 艺 不 统 一 所 致 为 了 有 效 地 控 制 此 中 药 复 方 制
5 1414 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (11): 剂 的 质 量, 有 必 要 对 多 个 主 要 成 分 进 行 定 量 分 析, 制 定 合 理 的 含 量 范 围 Table 2 Areas of common peaks 4, 6, 7, 8, 21 and index of similarity of TM01 and TM05 Sample Areas of peaks No.4 No.6 No.7 No.8 No.21 Index of similarity TM TM 讨 论 通 脉 颗 粒 的 化 学 成 分 主 要 为 酚 性 化 合 物, 把 流 动 相 调 整 为 弱 酸 性 有 利 于 改 善 峰 形, 提 高 分 离 度 作 者 尝 试 了 在 水 相 中 添 加 0.05% 和 0.1% 甲 酸, 其 中 0.1% 甲 酸 可 明 显 改 善 分 离 此 外, 对 色 谱 柱 柱 温 以 及 流 动 相 进 行 优 化 最 后 确 定 Zorbax SB-C 18 色 谱 柱 于 30 以 乙 腈 - 水 梯 度 洗 脱, 大 多 数 色 谱 峰 可 实 现 基 线 分 离, 而 且 分 离 时 间 仅 需 40 min 紫 外 检 测 波 长 设 为 260 nm 时, 色 谱 峰 数 最 多, 且 基 线 良 好, 可 较 全 面 地 反 映 样 品 的 化 学 组 成 对 样 品 的 提 取 方 法 进 行 了 优 化, 分 别 考 察 了 水 30% 甲 醇 50% 甲 醇 和 100% 甲 醇 溶 解 颗 粒, 结 果 表 明 以 10 倍 量 水 于 80 提 取 样 品, 色 谱 峰 数 最 多 且 吸 收 度 合 适, 故 直 接 采 用 水 提 取 样 品 即 可 结 论 本 文 从 中 药 复 方 通 脉 颗 粒 中 检 测 鉴 定 了 22 个 化 合 物, 并 归 属 了 各 化 合 物 的 单 味 药 来 源, 从 而 基 本 阐 明 了 该 复 方 制 剂 的 化 学 组 成 对 10 批 来 自 不 同 生 产 厂 家 的 样 品 进 行 HPLC 分 析, 发 现 各 样 品 的 化 学 组 成 相 似, 但 主 要 色 谱 峰 的 面 积 差 异 显 著 因 此, 还 需 要 建 立 定 量 分 析 方 法, 从 而 对 通 脉 颗 粒 的 质 量 进 行 全 面 的 控 制 References [1] Liu AH, Lin YH, Yang M, et al. Development of the fingerprints for the quality of the roots of Salvia miltiorrhiza and its related preparations by HPLC-DAD and LC-MSn [J]. J Chromatogr B, 2007, 846: [2] Li SL, Lin G, Zhong KS, et al. Study on fingerprint of Rhizoma Chuanxiong by HPLC-DAD-MS [J]. Acta Pharm Sin ( 药 学 学 报 ), 2004, 39: [3] Dong Y, XU B, Lin L, et al. Advances in studies on chemical components of Pueraria DC. [J]. Food and Mechinery ( 食 品 与 机 械 ), 2005, 21: [4] Lei JC, Yu JQ, Yao D. Determination of Tanshinone ⅡA in Tong Mai Granules by HPLC [J]. Chin J Mod Appl Pharm ( 中 国 现 代 应 用 药 学 杂 志 ), 2006, 23: [5] Guo YJ, Meng S, Xu H, et al. Qualitative and quantitative analysis of Tongmai Keli [J]. Chin J Exp Tradit Med Form ( 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志 ), 2008, 14: [6] Xiao XH, Liu XL, Suo ZR, et al. RP-HPLC-ECD determination of 3 compounds in Tongmai granules [J]. Chin J Pharm Anal ( 药 物 分 析 杂 志 ), 2007, 27: [7] Zhang M, Wang YM, Luo GA. Multi-dimensional fingerprints of Japan Jiuxin pill [J]. Acta Pharm Sin ( 药 学 学 报 ), 2006, 41: [8] Kinjo JE, Furasawa JI, Baba J, et al. Studies on the constituents of Pueraria lobata. Ⅲ. Isoflavonoids and related compounds in the roots and the voluble stems [J]. Chem Pharm Bull, 1987, 35: [9] Liu AH, Guo H, Ye M, et al. Detection, characterization and identification of phenolic acids in Danshen using highperformance liquid chromatography with diode array detection and electrospray ionization mass spectrometry [J]. J Chromatogr A, 2007, 1161: [10] Li SL, Chan SSK, Li G, et al. Simultaneous analysis of seventeen chemical ingredients of Ligusticum chuanxiong by on-line high performance liquid chromatography-diode array detector-mass spectrometry [J]. Planta Med, 2003, 69: [11] Liu GZ, Ma JY, Chen YZ, et al. Investigation of flavonoid profiles of Scutellaria baicalensis Georgi by high performance liquid chromatography with diode array detection and electrospray ion trap mass spectrometry [J]. J Chromatogr A, 2009, 1216: [12] March R, Brodbelt J. Analysis of flavonoids: tandem mass spectrometry, computational methods, and NMR [J]. J Mass Spectrom, 2008, 43: [13] Kong L, Yu ZY, Zou HF, et al. Determination of the active ingredients in Rhizoma Chuanxiong by high performance liquid chromatography-mass spectrometry [J]. Chin J Anal Chem ( 分 析 化 学 ), 2004, 11:
(2015-2016-2)-0004186-04205-1 140242 信 号 与 系 统 Ⅰ 学 科 基 础 必 修 课 37 37 1 教 203 17 周 2016 年 06 月 13 日 (08:00-09:35) (2015-2016-2)-0004186-04205-1 141011
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