期 彭统全等 牛 干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定 干扰素 / %, 属于 型干扰素 是迄今发现的最大的一个干扰素基因家族 具有抑制病毒增殖 抗肿瘤以及加强, 细胞杀伤病原 感染细胞的能力 年 - $ 等从病毒感染的牛肠上皮细胞中克隆出 &2%, 牛 2%,&2%, 多基因家
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1 畜牧兽医学报 牛 干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定 彭统全 邵建伟 张润祥 曹 罛 马 波 高明春 王君伟 东北农业大学动物医学学院 哈尔滨 摘 要 克隆牛 干扰素 &2%, 成熟肽基因 使其在真核细胞中表达 并研究其表达蛋白质的活性 通过 -$3 方法扩增得到 &2%, 成熟肽基因 然后将其连接到含分泌信号肽序列的 )( ( 表达载体 -2$=" 上 构建重组质粒 -2$="&2%, 重组质粒经 $ 酶切线性化后电转化宿主菌! 转化子经 ( 7 *9 筛选和 -$3 鉴定 阳性重组菌经甲醇诱导后实现了 &2%, 在毕赤酵母系统中的分泌表达 结果表明!;!-" ' 和 6/ 1 ) / 结果显示表达产物相对分子质量约为 和 4 推测表达产物发生了一定程度的糖基化 细胞病变抑制试验结果表明 重组 &2%, 具有较高的抗病毒活性 达到 # < ( 这些研究结果为牛 2%, 的更深层次应用奠定了基础 关键词 牛 &2%, 亚型 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性中图分类号! 文献标志码 " 文章编号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收稿日期 基金项目 现代农业 奶牛 产业技术体系 $"3! # 国家科技支撑计划项目 &";& 国家科技支撑计划子课题 &";& 黑龙江省科技攻关项目 " & 作者简介 彭统全 # 男 河南商丘人 硕士生 主要从事兽医微生物与免疫学研究 '/E 通信作者 王君伟 教授 '( 高明春 ' ( (
2 期 彭统全等 牛 干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定 干扰素 / %, 属于 型干扰素 是迄今发现的最大的一个干扰素基因家族 具有抑制病毒增殖 抗肿瘤以及加强, 细胞杀伤病原 感染细胞的能力 年 - $ 等从病毒感染的牛肠上皮细胞中克隆出 &2%, 牛 2%,&2%, 多基因家族至少由 个亚型基因组成 亚型之间同源性很高 已报道的牛 2%, " & $ ; ' % + 八个亚型核苷酸相似性在 : #: 氨基酸相似性在 : : 核苷酸和氨基酸相似性均超过了 : 以上 牛 2%, 和人 2%, 鼠 2%, 氨基酸序列相似性分别为 : 和 #: 不同亚型可能是由不同细胞或同一细胞在不同时期分泌的 但由于缺乏系统的对比研究 其生物学活性是否有差异目前还不 清楚 作者根据牛 2%, 基因在牛 号染色体上的序列位置 命名本研究的干扰素 亚型为 2%, &4,9 # 牛 干扰素蛋白是由 # 个核苷酸编码一个开放阅读框 3% 其中 个氨基酸编码其信号肽 个氨基酸组成其成熟多肽 &2%, 核苷酸与已知的牛 干扰素亚型相似性均在 : 以上 最高为 : 最低为 :&2%, 成熟肽由 个氨基酸组成 >>(! 10 1 预测含有 个 糖基化位点 无, 糖基化位点 "1( * 1 为保守残基 为保守区域 $$ 和 $ $ 组成两个二硫键 二级结构主要由 "' 个 螺旋组成 毕赤酵母表达系统是最近二十年发展起来的一种成熟的真核表达系统 是高 效表达外源蛋白质的理想系统 研究表明 重组 &2%, 在体外具有抗多种病毒的作用和多种免疫 调节功能 本研究实现了重组牛 2%, 亚基因在毕赤酵母中的高效表达 并对其表达产物进行了抗病毒活性研究 本研究为新型抗病毒制剂的研制与临床应用准备了基础材料 材料与方法, 菌株 载体和试剂 酵母表达所用质粒 -2$=" 载体和菌株! 购自美国 2 0/1( 公司 大肠杆菌 ;+ 水泡性口炎病毒 8!8 为本实验室保存 蛋白质 购自 % 1 / 公司 限制性内切酶和 *;," 连接酶购自 * 3 公司 7 *9 为 2 0/1 ( 公司产品 生物素购自华美生物工程 公司 其他试剂均为国产或进口分析纯 牛肾细胞 9;& 由本实验室保存 ;9'9 培养基为 2 0/1( 公司产品 胎牛血清购自天津灏阳公司 毕赤酵母专用培养基 &99> &9 > >-; 等参考 2 0/1( 公司毕赤酵母培养基说明书配制, 重组质粒 '* < 3-73 的构建 -$3 扩增的牛 干扰素基因胶回收产物和表达载体 -2$=" 用 9 和 3 进行双酶切按 I 的摩尔比混匀 连接过夜 转化氯化钙法制备的 ;+ 感受态大肠杆菌 挑取低盐 & 平板上的 7 抗性菌落 提质粒 用 9 和 3 进行双酶切鉴定和测序验证 将获得的阳性重组质粒命名为 -2$="&2%,,/ 电转及筛选 将重组质粒 -2$="&2%, 以 $ 酶切线性化 按照毕赤酵母表达说明书制备! 感受态 取 与 #$ 单酶切线性化的重组质粒混匀 然后转移到冰预冷的 的电转化杯中 把电转化杯在冰上放置 后再在电穿孔仪上用脉冲电流电击一次 电击条件 电压 8 电容 % 电阻 ' 温度 电击结束 立即加入 冰预冷的 山梨醇 轻轻混匀 把电转化杯放入 温育 左右 加入 >-; 培养基至 '- 管中 1 取 菌液涂在含有 ( 7 抗生素的 >-;! 固体培养基平板上 置 恒温培养 挑取典型菌落 接种于 >-; 培养基中 1 振荡培养, 转化子的 * & 检测 按照文献 介绍的煮沸法提取酵母基因组 用醇氧化酶 "? 基因特异引物和目的片段的特异性引物鉴定牛 干扰素基因是否插入 "? 启动子部位 扩增程序 # 个循环 # 扩增结束 取 反应液做琼脂糖电泳观察 如果是阳性重组酵母菌株 通过上述引物对扩增的片段为 ) 左右 用目的片段的特异性引物鉴定 扩增的片段长度应为 ) 左右, 酵母重组子的诱导表达 挑取阳性转化子于 &9 > 培养基中培养至 ; 为 1 离心 加 &99> 培养基悬浮至 ; 为 转至挡板三角
3 畜 牧 兽 医 学 报 卷 摇瓶 1 培养 每隔 添加甲醇至终体积分数为 : 以保持诱导的持续表达, 表达产物的处理和 5 # 检测 将发酵液 1 离心 取上清经 : 硫酸铵浓缩 沉淀用 -&! 重悬 -&! 透析后经 &$" 蛋白检测试剂盒检测分泌蛋白质的蛋白质质量浓度 用 滤膜过滤上清 用于蛋白质抗病毒活性鉴定 参照分子克隆实验方法指南! 第 版 进行 6/ 1 ) / 检测 对表达的蛋白质按常规方法进行!;!-" ' 转印至醋酸纤维素膜上 ( 脱脂乳 封闭过夜 -&!* 洗膜 次 一抗为本实验室制备的兔源抗 &2%, 多抗血清 免疫原为本实验室表达纯化后的 &2%, " 亚型蛋白 #L$ 恒温摇床 1 作用 二抗为 +3- 标记羊抗兔 2(# 恒温摇床 1 作用 -&!* 洗膜 次 经 $, 显色出现反应条带后 去离子水冲洗终止反应 观察结果,6 表达产物的抗病毒活性测定 用 孔细胞培养板常规培养 9;& 细胞至单层后每孔加入 倍倍比稀释的 &2%, # 孵育 后用 *$2; 8!8 攻毒 后观察细胞病变的抑制结果 同时设细胞对照和病毒对照 以抑制 : 细胞病变 $-' 的最高干扰素稀释度为 个活性单位 < 结 果, 目的基因的扩增和重组质粒的构建扩增 &2%, 获得大小约为 ) 的目的片段 图 将 &2%, 基因克隆至载体 -2$=" 中 获得重组质粒 -2$="&2%, 并进行酶切和测序验证 酶切结果如图 &3 单酶切片段大小为 ) 左右 3 和 9 双酶切一条带大小 ) 另一条带大小 ) 左右 测序结果表明目的序列与 & /12%, $2%,"$ &4,9 # 相似性达到 : -2$="&2%, 构建正确, 含 -73 基因的重组酵母菌株的鉴定 通过 9 基因特异性引物对和目的片段特异性引物做 -$3 鉴定 以重组 &2%, 基因的酵母菌株染色体为模板 分别扩增出现 ) 图 " 的条带和 ) 图 & 左右的条带,/ 阳性重组酵母的诱导表达和 5 # 鉴定 通过不同时段取样的电泳分析 发现重组酵母 9*1 ;," 相对分子质量标准 &2%, 的 -$3 产物 9*1-;," 相对分子质量标准 -2$="&2%, 的 3 酶切产物 -2$=" &2%, 的 3 和 9 酶切产物 9*1 ;," 14 1-$3 1/.&2%, 9*1 - ;," $="&2%, (/ ) 3-2$="&2%,(/ ) 3 9 图 * & 扩增 及重组载体 '* < 3-73 的酶切鉴定 -, '!# # * &' % # ;($ # ( $ '* < 3-73 在诱导 时的表达量最高 表达产物相对分子质量约为 和 4 图 " 而根据 &2%, 成熟肽和 $ 端融合蛋白的编码基因推导的蛋白质大小为 4 其中一条表达蛋白质大小比其推导相对分子质量大 4 推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化 6/ 1 ) / 结果显示在 和 4 处可见特异性条带 图 & 证实均为 &2%, 基因表达产物 并且 &2%, 为可溶性分泌表达, 表达产物的抗病毒活性检测 经 : 饱和硫酸粗纯后的重组 &2%, 用于抗病毒活性鉴定 重组 &2%, 孵育 9;& 孔 后接毒 8!8*$2; 孔 后用显微镜观察细胞病变情况 显示高浓度的重组 &2%, 对病毒的抑制作用明显 对细胞的保护率达到 : 但随着稀释度的增加 重组 &2%, 对细胞的保护率下降 稀释度达到 # 时对细胞没有保护作用 图 结果表明 分泌型 &2%, 具有良好的抗病毒活性 经 3 9 法计算 重组 &2%, 在 9;& 8!8 系统中抗病毒活性为 # < ( / 讨 论 2%, 基因是一类无内含子的多基因家族 主要在病毒感染的外周血白细胞 淋巴瘤细胞或骨髓瘤细胞中表达 从动物体内纯化的 2%, 中发现
4 期 彭统全等 牛 干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定 # " 9 扩增 &&2%, 扩增 9*1 ;," 相对分子质量标准 选择的 株重组酵母的 -$3 产物 " 9./ &&2%,./ 9*1 ;," /.-$3.1/ 图 * & 鉴定酵母中 -73 基因 -,! 蛋白质分子质量标准 选择的 株重组酵母的表达产物 阳性重组菌的培养上清 # 阴性对照 9!/ 1 1/ 14 1'5 1 1/.1 / $/ 11//./0 /1#, ( /0 /1 图 / 表达产物的 + +3* 0 分析 和 5 # 检测 -,/+ +3* 0 (# # 5 # 1' # ' %# 横坐标 系 分别为 时的稀释度.5 5//F 图 重组 -73 的活性检测 -, ( # ( $-73 有多种序列和性质上存在差异的亚型 在人的基因组中克隆出了 种基因属于 2%, 家族 鼠体内 2%, 编码基因存在 种亚型 其中 2%,2%, 2%, 亚型比其他亚型有更高的活性 2%, # 与其他亚型比较活性较低?* 等克隆了大熊猫 2%, 的 个亚型 研究发现 2%, 三个亚型比其他亚型有更高的抗病毒活性 比 2%, 高出四倍 然而 2%,# 的活性比 2%, 更低 &2%, 由 # 个核苷酸编码 个开放阅读框 3% 其中包括 个氨基酸的信 号肽和 个氨基酸的成熟多肽 并且它们之间存在着不同的活性 但各个亚型之间差异性却鲜有报道 毕赤酵母是一种新型的外源基因表达系统 已有多种蛋白质在此系统中高效表达 它是一种甲基营养型酵母 在缺乏葡萄糖 甘油等碳源时 可利用甲醇作为唯一碳源而生长 其醇氧化酶 "? 启动子受甲醇的严格控制 可调控外源蛋白质的高效表达 其既具有原核表达系统的高表达量 可大规模培养和成品低廉的优点 又具有真核表达系统可进行蛋白翻译后修饰 加工和折叠等优 点 本研究获得的稳定分泌表达重组牛 干扰素的酵母菌株在 &99> 培养基中经甲醇诱导发酵 后 发酵上清经 : 饱和硫酸铵沉淀 -&! 透析后用 &$" 蛋白检测试剂盒测得其质量浓度为 # ( 比活为 # < ( 而崔子寅 李学仁利用毕赤酵母表达 &2%," 奶牛 干扰素在 9;& 8!8 系统抗病毒活性为 < ( 和 < ( 比较后发现 &2%, 抗病毒活性较 &2%," 低 略高于奶牛
5 畜 牧 兽 医 学 报 卷 干扰素 差异不明显 但高于原核表达的牛 干扰 素 倍以上 分析其原因 与原核表达系统相比 巴斯德毕赤酵母对分泌的目的蛋白可以进行类似高等真核生物的信号肽的剪切 二硫键形成 糖基化 磷酸化修饰等蛋白质加工过程 而且酵母表达的重组牛 干扰素不需要变性 复性等生产工艺 因此更易进行大规模的生产 本研究对发酵上清采用饱和硫酸铵沉淀蛋白质 离心浓缩 -&! 透析 尽可能排除培养基长时间发酵对蛋白质活性的影响 也利于蛋白质的保存 目前 2%, 的研究多以人 2%, 为主 人用重组 2%, 主要用于抗肿瘤和抗 # 病毒研究 已用于临床 市场上已有商品化的重组猪 2%, 和重组犬 2%,&2%, 研究相对 较少 而对 &2%, 各个亚型抗病毒活性差异的系统研究更少 本研究为以后研究 &2%, 各个亚型的生物活性差异奠定基础 并对未来研究高效 &2%, 抗病毒制剂提供物质和理论基础 参考文献 & # - "*2!;%!*'3 3+( 5 11.( 1/ 17 /.1 ) / / 1. 1 )1 (* )# ;2 &> 9 36',*+" 6$ ( 5 1./ 4 / 1. 1 ( "# 8/( $+"- 2, - ',*32$", ' ;'3 2 / $ () ( /0/. )0 / 1. 1 /.1 //. 1/ 01./."#8/( 史喜菊 汪 明 夏 春 牛干扰素研究进展 中国兽医杂志!+2? 6", 9?2"$ /*11 1 (1.)0 / 1. 1 ( # 1& $ 欧阳立明 张惠展 张嗣良 等 巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 生物化学与生物物理进展 # <>", 9=+", + ==+",!/ "0/ /.-/1/ 1 ((5 1 /(+ $( & + )((# $ 李学仁 重组奶牛 干扰素的研制及其抗病毒作用 ; 南京 南京农业大学 2?3* 0//01/0/.1 ) /)0 / 1. 1( ;,(,( "(1 / 1< 0 1 / $ # $+"3 '!*, &%3"> 9 ;&"2 ',*! / ' / )/.1//./ / / /) // /. 1 // 2 / 1. 1, # -'3 '3!$+6'2='3 9 <, 2* 6 /& ) /1 (.1 1 /1(( 1/)/ 1. 1 / //, # $+2,!", "3"9-2$$,' 9 ' 3<&9", 9 ") /..//01/.1 E/ 1 / / 1. ) // 1. 1 # '!-"3="2,='= $82J<' " ''./. / 1. 1 / 1. 1 ( / 1 1./1 " / 1 / 1 (, # 崔子寅 具抗病毒活性无冗余氨基酸牛 干扰素 " 亚型 表达策略研究 ; 哈尔滨 东北农业大学 $<2= >'5 1 /1 / (11./01 /0/ / 1 )0 / 1. 1 " ; + 1),1// "(1 / 1< 0 1 /$ 8", -'!$+ 8 ",">" +3',"< ; $ / $1/ 17 /./ 1 / 1. 1 (. # *",?*", >>", > /( E ( 5 1 ) ( /0/.(/ "1 / "$$ # 李学仁 曹瑞兵 李 斐 等 奶牛 干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定 中国生物工程杂志 2? 3$" 3& 2% /!1 /5 1.)0 / 1. 1 )( (/ /01/0// 1 / + $
6 期 彭统全等 牛 干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定 郭雨刚 毕赤酵母表达系统及其应用 ; 合肥 中国科学技术大学 < > " / )( ( 5 1 / ; +. < 0 1 /.! * (.$ 刘 颖 刘华兰 杨利国 等 奶牛 干扰素克隆表达和生物学活性分析 中国兽医学报 2< > 2< + >", /$ ( 5 1. / )0/ / 01/0/( # $ # 徐冬梅 干扰素 在治疗慢性乙型肝炎中的应用 中外医疗?< ; 9" /. / 1. 1 //1/ /.1// &' 1& 0$ $ 王 靖 张晓乐 阿德福韦酯和重组人干扰素 ) 治疗慢性乙型肝炎的药物经济学评价 中国医院药学杂志 6",=+",? -10 /.1//1/ /.1// &.. 01/ 1 1 ) / / 1. 1) ( # () $ $ 王延群 张 璐 李玉明 等 牛 干扰素在毕赤酵母中的高效分泌表达及活性鉴定 中国预防兽医学报 6", > =+", 2> 9 /+( 0 1 / )0 / 1. 1 )( (( #!! 1& $ 编辑 白永平
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
![150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as](/thumbs/88/114888322.jpg "150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as")
微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
期 江学斌等 猪源抗菌肽 在毕赤酵母中的表达及鉴定 剂来调节机体免疫系统 在抗感染中发挥重要作 用 抗菌肽成为新一代的抗菌 抗病毒 抗癌药物 但天然抗菌肽的来源少 成本高 无法满足临床试用和基础研究的需要 而人工合成成本高 所以 采用重组表达的方法可大量获得抗菌肽 以满足其抗菌作用机理研究及开发成一
中国畜牧兽医! " 猪源抗菌肽 / 2 在毕赤酵母中的表达及鉴定 江学斌 陈嘉蔚 杨 军 刘顺枝 肖安吉 卢志鹏 楚品品 黄朝远 蔡海明 马苗鹏 张玲华 广州大学生物工程研究所 广州 华南农业大学生命科学学院 广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室 广州 摘 要 本试验旨在实现猪 防御素 /&!!!1 在毕赤酵母中的表达 获得有抗菌活性的抗菌肽 1 根据 的氨基酸序列和酵母密码子偏好性 设计优化其核苷酸序列
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
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中华医学会肝病学分会中华医学会感染病学分会 Ó Ñ Ñ Ñ Ñ Ò Ò Ò Ó Ó Ò Ó Ñ Ò Ò Ó Ò Ò Ñ Ò Ñ Ñ Ò Ò Ñ Ñ Ñ Ò Ó Ò Ò Ñ Ó Ò Ò Ó Ó Ñ Ó Ó Ó Ò Ò Ó Ò Ó Ó Ò Ò Ò Ñ Ó Ò Ñ Ò Ò Ñ Ò Ò Ò Ó Ò Ô 中华医学会肝病学分会中华医学会感染病分会 慢性乙型肝炎防治指南 年更新版 中华实验和临床感染病杂志
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳
福建农业学报 赵 健 高晓丹 邱荣洲 翁启勇 材料与方法 种子罐的制备 发酵条件单因素试验 发酵最佳 值的确定 发酵最佳温度的确定 福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳 赵 健等 应用均匀设计优化生防细菌 发酵培养基组分及条件研究 最佳温度 碳源 最佳转速 氮源 福建农业学报 均匀设计 讨 论 赵
中 国 畜 牧 兽 医 卷 绵羊肺炎支原体 "#)/ 是引起绵羊和山羊呼吸道疾病的一种重要 病原菌 该病原菌感染动物机体后 还可引起其他病原菌的继发感染 给养羊业造成巨大的经济损 失 支原体是介于病毒与细菌之间的一种微生物 对培养条件要求严苛 目前 的培养仍是一大难题 严重影响了人们对其病原特性 致
中国畜牧兽医! " # 绵羊肺炎支原体 1 蛋白 端与 端的表达及其免疫学特性研究 麻昌姣 郑佳琪 黄海碧 王晓晖 白 帆 郝永清 内蒙古农业大学兽医学院微生物与免疫实验室 呼和浩特 摘 要 为分析绵羊肺炎支原体 "#) 膜表面脂蛋白 ( 的免疫学特性 本研究分别扩增 ( 蛋白 / 端与 端的基因 并通过重叠延伸 + 将 端基因序列中的 0 3B ( 定点突变为同义密码子 将扩增的基因片段分别插入到
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用!!!!!!!! 花茶冲泡方法 荧光扫描方法 # 稳定性试验方法 重复性试验方法
年 月 华南师范大学学报 自然科学版 年第 期 赵金莲 曾佑炜 李 宽 彭永宏 采用荧光光谱扫描法定性定量研究了 种花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用 结果表明 桂花茶 复合花茶 绿茶和芍药花茶的保护作用要优于红玫瑰花茶和金莲花茶 且各花茶的保护作用在 范围内均随质量浓度的增加而增强 该方法的稳定性和重复性都较好 花茶 氧化损伤 荧光光谱扫描 第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
福建农业学报 材料与方法 外植体无菌株系的建立 启动培养 增殖培养 继代培养 生根培养 瘤状苗的细胞学观察
福建农业学报 邓素芳 杨 旸 赖钟雄 福建农业学报 材料与方法 外植体无菌株系的建立 启动培养 增殖培养 继代培养 生根培养 瘤状苗的细胞学观察 邓素芳等 朱砂根成年茎段的离体培养研究 结果与分析 福建农业学报 第3期 邓素芳等: 朱砂根成年茎段的离体培养研究 带空洞, 无法观察 图1 朱砂根成年茎段的离体繁殖 Fig 1 I n vitro propagation of A crenata 图 2
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种
! " # +(!"# $%& (!"!#$%& (&%!)*) +,)) )!#$%&+!$%-./! $*0! +,)) 1*23!% %*2$*23 1!%%*$*2,2#%!,) )4542*$ *0!2$*1*#,$*&2!! 1!%%*$*2 $#!"!)!" "
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武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
自然科学版 预处理 视盘粗定位 视盘垂直坐标的粗定位 视盘水平坐标的粗定位
自然科学版 文章编号 视网膜图像中视盘的快速自动定位方法 赵晓芳 林土胜 李碧 摘 要 基于眼底视网膜血管的分布结构及视盘本身的特点 提出一种快速自动定位视盘的方法 首先根据视网膜血管的网络分布结构大致定位视盘的垂直坐标 然后根据视盘 的亮度信息及视盘与血管的关系来定位视盘的水平坐标 最后把视盘限定在以粗定位的视盘为中心的一个小窗口内 用 变换精确定位视盘中心 该方法不需要事先分割视网膜血管 也不需要对算法进行训练
<433A5C C F5C B746F705CC9F3BACBCDA8B9FDD2B35CBDCDC4B8B5B0B0D7B1EDB4EFB2BDD6E82DCAB5D1E9C1F7B3CC2E646F6378>
酵母蛋白表达步骤 / 实验流程 本文主要讲述了酵母蛋白表达步骤, 详细酵母表达流程 从感受态细胞制备, 转化方法选择及操作, 从化学试剂 PEG1000 转化, 电击转化, 原生质体法转化三个方法入手及转化子的筛选及最终的蛋白表达, 全套酵母蛋白表达 标准操作流程 质粒线性化 在酵母表达系统中已经介绍了酵母蛋白表达原理, 因此线性化是酵母转化的第一步, 采用不同的限制酶酶切可以得 到不同的表型 转化方法
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
中图分类号：；文献标识码： ；文章篇号: (2004)01-000#-0#
重组猪圆环病毒 2 型 Cap 蛋白在毕赤酵母中的优化表达及疫苗活性研究 王斌, 罗时渝, 谢景毅, 叶燕锐, 潘力 ( 华南理工大学生物科学与工程学院, 广东省发酵与酶工程重点实验室, 广东广州 510006) 摘要 : 猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 是引起断奶猪多系统衰竭综合症 (PMWS) 的主要致病原, 在全世界范围内对养猪业造成了巨大的经济损失 猪圆环病毒 2 型 Cap 蛋白 (PCV2-Cap)
4 生物技术通报 Biotechnology Bulletin 05,Vol.3,No.3 好改造鸡 nxph 基因, 在毕赤酵母 GS5 中表达该基因, 以期为后续研究 NXPH 蛋白的生物学功能奠定基础 材料与方法. 材料真核表达载体 ppiczαa 毕赤酵母 GS5 菌株为华中农业大学国家微生
研究报告 生物技术通报 BIOTECHNOLOGY BULLETIN 05, 3(3):3-7 鸡 neurexophilin 基因在毕赤酵母中的表达 陈美玲聂彬姜勋平刘桂琼 ( 华中农业大学动物科技学院, 武汉 430070) 摘要 : Neurexophilin 是母鸡子宫阴道结合部位的差异表达基因 根据鸡 nxph 的序列, 结合毕赤酵母密码子的偏好性, 合成 nxph 基因, 设计引物以合成基因为模板,
Microsoft Word gc100656王慧.doc
生物工程学报 Chin J Biotech 2011, July 25; 27(7): 983 989 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2011 CJB, All rights reserved. 基因工程 应用双质粒共表达体系提高融合蛋白 GGH 在毕赤酵母 GS115 中的表达量
! 王丁丁等 一种融合抗体 ()#( 通用表达载体的构建 酶均购自 + * 公司 + 一步法 * 提取试剂盒购自 -) 公司 *,* 购自 + * 公司 质粒提取试剂盒购自 公司 羊抗人 -.#9*, 购自北京鼎国试剂公司 人抗狂犬病毒抗体 - 检测试剂盒购自兰州生物制品研究所 抗 #9 抗体血清检
中国生物工程杂志!" 一种融合抗体 通用表达载体的构建 王丁丁 苏曼曼 胡丽莉 袁丽颖 孙 艳 汪 炬 颜炜群 广东药学院生命科学与生物制药学院 广州 $ 吉林大学药学院 长春 暨南大学生命科学技术学院 广州 $ 吉林大学附属第三幼儿园 长春 摘要 为了构建一个可供自由替换的 () 区 表达人小分子融合抗体 ()#( 的通用载体 利用 *+#,* 技术扩增人抗体 -. 的 ( 片段克隆至毕赤酵母表达载体
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
价样 品 川 振 荡汉 取 叮 盛极 曲 的 示差 溶 出脉 具 体 方 法 见 有 机质 含 量 用 丘 林 法 测 定 沉积 物 的 矿 物 组 成 由 本 所 地质 室 测 数 据 由厦 门 大 学 海 洋 系 洪 家 珍 同志 提 供 三 各站 位 于表 谱 分析仪 进行 微 米膜 滤 后 分 斯 其 酿 可溶 部 分 的 含 鼠 零 用 冲测定 卷 报 分析 三 定 学 洋 海 表示 结
贾 园等 甲型 /3 流感病毒 /0 基因在昆虫细胞中的截短表达 # 共编码至少 种蛋白 许多研究已经证实 血凝素 /0 是流感病毒最重要的表面抗原 /0 含有 ( 个结构域 信号肽 胞浆区 跨膜区和胞外区 本实验设计去掉 /0 信号肽 跨膜域和胞内域个结构域的基因序列 通过昆虫杆状病毒表达系统表达
中国生物工程杂志! 甲型 流感病毒 基因在昆虫 细胞中的截短表达 贾 园 沈 阳 邱亚峰 史子学 邵东华 王晓杜 邓绪芳 王皓婷 赵福广 马志永 中国农业科学院上海兽医研究所 上海 ( 吉林农业大学 长春 ) 摘要 目的 利用 "" * * +,-. 表达重组 /0 蛋白 1 及 0 方法鉴定其表达 方法 采用 方法扩增 0 2 ( #/3 /0 基因 将其克隆到 - /40 载体上 重组质粒 -
国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
( ) 表达载体 于外源 DNA 的表达 1 原核表达载体: 在原核细胞表达外源基因 (1) 启动 : 转录 mrna 必需元件 (2)SD 序列 : 提供核糖体结合位点 (3) 转录终 序列 : 有助于 效表达外源基因 2 真核表达载体: 在真核细胞表达外源基因 (1) 真核表达载体特点 : 1
二 重组 DNA 技术中常用的载体 ( ) 克隆载体 于外源 DNA 的克隆 1 克隆载体应具备的主要特点 2 常 克隆载体 (1) 质粒 (plasmid): 最常 的克隆载体 (2)λ 噬菌体克隆载体 (3) 其他克隆载体 : 增加载体容量 ( ) 表达载体 于外源 DNA 的表达 基本特性 : 克隆必需元件 : 复制 ; 多克隆酶切位点 ; 选择性标志转录必需元件 : 启动 和终 翻译必需元件
期罗洪林 等 罗非鱼! -! 蛋白的生物信息学分析 真核表达及质谱鉴定 ## %" 和蛋白的克隆 表达及鉴定开展相关研究 例如虹鳟 #! $%!$ & %' && "% 青 # %. & & " 斑马鱼 "' 红鳍东方 * ' ( ) & " 罗非鱼 *!! *! ' " 鲤 % &! & & &
第 卷第 期!" 年 月 # 水 # 产 # 学 # 报!"!" 文章编号 "!!! $!%"!"! $!%"' $"! #"!""%& $%&'!"&"!! 罗非鱼 4(. 4(. 蛋白的生物信息学分析 真核表达及质谱鉴定 罗洪林 " # 张瑶瑶 # 梁万文 " # 陈福艳 " # 李 # " " # 甘 # 西 " 广西水产科学研究院 广西南宁 #!! " 广西大学动物科学技术学院 广西南宁 #!!!
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生物工程 0, Vol., No.0 新型生物防腐剂 多聚阳离子抗菌肽在毕赤酵母中的表达 李青, 周晓宏 * ( 北京理工大学生命学院, 北京 0008) 摘要 : 在毕赤酵母 GS 中表达一种新型食品生物防腐剂 多聚阳离子抗菌肽 (poly-cationic antibacterial peptide,pcap) 根据毕赤酵母密码子的偏爱性, 人工合成编码多聚阳离子抗菌肽与多聚阴离子肽融合肽的 DNA
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药学 实践 杂志 药理 年第 卷第 期 生 物 技 术 药 品 近年 来 的 发 展 杨玉 龙 任海 祥 南 京军 区 南京 总 医 院 南京 本 文 概 述 了 近 年 来 国 内 外 生 物 技 术 药 品 与 生 化 药 品 的 研 究 与 发 展 论 述 了生 物 技 术与 生 物 药 品 摘要 间 的 关 系 介 绍 了 近 代 生物 技 术 在某 些 生 物 药 品 生 产 中 的应 用
流式细胞术临床应用的建议 作者 : 中华医学会检验医学分会, 卫生部临床检验中心, 中华检验医学杂志编辑委员会 作者单位 : 刊名 : 中华检验医学杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Laboratory Medicine 年, 卷 ( 期 ): 2013,36(12) 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/periodical_zhyxjy201312003.aspx
网址 : 电话 : 客服电话微信 : 邮箱 : 地址 : 烟台市开发区珠江路 32 号留创园 3 号楼 E 栋 247 室 Gel Free cl
Gel Free cloning TM 不跑胶载体构建试剂盒 Gel Free Cloning TM Kit Gel Free cloning 技术是一种简单 快速并且高效的载体构建技术, 可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点 该技术不受酶切位点限制, 也不需要线性化质粒, 只需要两步 PCR 即可将目的片段构建到载体的任意位点, 具有省时, 简便的特点 克隆阳性率可达 90% 以上 Gel Free
南通大学杂志社 南通大学学报 医学版. */(& 0 1&( () (' / ' '-& -' (- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志
.*/& 0 1&) '/' '-& -'- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志物在肝细胞肝癌 2&-*&/ -&/-'%&3 44 诊断中 的作用 方法 采用实时定量聚合酶链式反应 /&$'% 9*&'&' 2%/& -&' /&-'3
中国生物工程杂志!" 新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证 杜寿文 李 昌 王宇航 任大勇 刘存霞 孙丹丹 朱 娜 李 沂 秦艳青 金宁一 吉林大学畜牧兽医学院 长春 ' 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 长春 摘要 目的 构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体 )*+,
中国生物工程杂志!" 新型双基因表达盒真核载体的构建及功能验证 杜寿文 李 昌 王宇航 任大勇 刘存霞 孙丹丹 朱 娜 李 沂 秦艳青 金宁一 吉林大学畜牧兽医学院 长春 ' 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 长春 摘要 目的 构建含双基因表达盒的新型基因疫苗真核表达载体 )*+, 并对其功能进行验证 方法 设计一个包含人巨细胞病毒启动子 -*).(. % 启动子 信号肽基因 血凝素
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 )*8)$ 节 功能的影响 本课题组现有的蛋白激酶 如 酪蛋白激酶 蛋白激酶 等表达质粒都构建在 与 / 相同的载体 ) 质粒上 且携带相 同的 标签 这为利用表达标签的优势研究蛋 白激酶和 / 的相互作用带来了困难 因此 本研究将 / 构建到带 * 标签的 载
)*8)$ 中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 2- 论 著 -0. 融合蛋白对 外显子 * 可变剪接的影响 缪世琛 屈舒婷 陆 颖 唐 啸 任梁梁 顾建兰 南通大学医学院 南通 摘要 目的 构建带 * 标签的 / 及其截断体质粒 探讨 */ 融合蛋白对 外显子 可变剪接的影响 方法 采用 /) 法扩增 / 基因及其各截断体 将扩增产物和载体 双酶切后回收 连接载体和目的片段 获得重组质粒 在 +
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
2014 年度军队文职人员招聘信息
序号 1 军事交通学院讲师 研究生 : 新闻传播学本科 : 新闻传播学类 天津 022-84657561 2 军事交通学院讲师 研究生 : 俄语语言文学本科 : 俄语 天津 022-84657561 3 军事交通学院讲师 1 硕研以上音乐与舞蹈学天津 022-84657561 4 军事交通学院药师 研究生 : 药学本科 : 药学类 天津 022-84657561 5 军事交通学院护师 3 大专以上
标题
第 34 卷第 6 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2012 年 6 月 Vol.34 No.6 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Jun. 2012 文章编号 :1673 9868(2012)06 0041 04 乙型肝炎病毒外膜蛋白真核 1 表达质粒的构建和表达 王丹, 童师雯, 张红敏, 李宏, 胡鹏, 杨轶轩, 张大志,
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(8):18~22 β 2 肾上腺素受体基因在毕赤酵母中 的表达及活性测定 1 黄园园 沈 1 红 王 2 迪 2 于洪侠 2 孙丰梅 2 杨啸枫 (1 北京农学院北京 中国农业科学院饲料中心北京 )
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,008,8(8):18~ 肾上腺素受体基因在毕赤酵母中 的表达及活性测定 1 黄园园 沈 1 红 王 迪 于洪侠 孙丰梅 杨啸枫 (1 北京农学院北京 1006 中国农业科学院饲料中心北京 100081) 杨曙明 摘要为提高 肾上腺素受体 ( AR) 表达量, 满足生产需求, 使其应用到抗体技术上, 利用分子克隆技术将 肾上腺素受体基因 ( AR)
78 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No 材料与方法 1.1 材料 菌种和质粒酿酒酵母菌株 BJX12 由南京工业大学国家生化中心柏建新老师惠赠, 大肠杆菌 EscherichiacoliDH5α 为本室保藏, 质粒 pyx212
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(12):77~81 酿酒酵母中过表达 URA5 及 URA3 基因 催化合成 UMP 的初步研究 雷高新陈勇许琳 应汉杰 ( 南京工业大学制药与生命科学学院南京 210009) 摘要为提高乳清酸到尿嘧啶核苷酸 (UMP) 的转化效率, 利用 PCR 方法扩增酿酒酵母乳清酸磷酸核糖转移酶基因 URA5, 并将其连接到携带乳清苷酸脱羧酶基因
干细胞和再生医学 科学学位 免考 免考 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 85 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 69 非定向 护理学 科学学位 免考 免考 非定向 护理学 科学学位
2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
中国生物工程杂志! 公司 2;3 和 $ 购自 ',5 公司 92$' 底物显色液购自天根公司 92 标记的二抗山羊抗鼠 3 购自中杉生物有限公司 质粒抽提试剂盒 纯化试剂盒购自 '3 公司 引物合成和测序均在军事医学科学院生物工程研究所六室完成 个 1 单抗均为本课题组自制 & 包被液 ",<6.
中国生物工程杂志! "# 幽门螺杆菌 1 串联融合表位的表面呈现表达 封小燕 王艳春 李平超 陶好霞 王 秡 袁盛凌 王令春 王 普 刘纯杰 浙江工业大学药学院 杭州 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 北京 & 摘要 目的 应用表达载体. 表面呈现表达幽门螺杆菌 1 串联融合表位 方法 通过引入多克隆位点的方法改造表达呈现表达载体. 并用改造后的质粒表达幽门螺杆菌 1
卷 期 %"' "'" '# 草 业 科 学!! "#$"%" "& 植物生产层 林烟草 个防卫反应信号蛋白编码基因的 克隆及 植物表达载体的构建 路子峰 " 张超 " 李彦忠 草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院 甘肃兰州 " " 中国农业科学院生物技术研究所 北京 % 摘要 为
卷 期 %"' "'" '# 草 业 科 学 "#$"%" 植物生产层 林烟草 个防卫反应信号蛋白编码基因的 克隆及 植物表达载体的构建 路子峰 " 张超 " 李彦忠 草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院 甘肃兰州 " " 中国农业科学院生物技术研究所 北京 % 摘要 为了分析林烟草 基因对烟草花叶病毒 ()**+ ) *, -./ 产生抗性的信号途径 培育抗 / 植物新品种 选取!"#
标题
第 35 卷第 3 期 2014 年 9 月 FOREIGN MEDICALSCIENCESECTION OF MEDGEOGRAPHY Vol.35No.3 Sep.2014 189 基础医学 含 mir-497 野生及突变结合位点的胰岛素受体 mrna3 UTR 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 3 1,2 1,2 1,2 1,2, 王璇, 蓝茜, 李玥, 刘莉, 1,2 1,2 伊静, 李靖,
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
期王亚楠 等 半滑舌鳎生长因子 &!(" 的定点改造及原核表达 ""! 入手 研究其 基因是否存在同样的特殊功能活性 对于进一步研究 基因具有重要意义 本实验室从已经构建的半滑舌鳎 # 文库中筛选获得了 # 全长 发现其仅在成鱼的脑中表达 并参与胚胎的脑部发育过程 为进一步研究半滑舌鳎 基因的功能
第 卷第 期! 年 月 " 水 " 产 " 学 " 报!"! 文章编号! # $!%! # # #! $ %!!! &$& 半滑舌鳎生长因子 的定点改造及原核表达 王亚楠! " 刘旭东! " 穆琳琳! " 刘志鹏! " 李春梅! " 于海洋!! " 张全启! 中国海洋大学海洋生命学院 海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室 山东青岛 "$$ 青岛市海洋与渔业局 山东青岛 "$$! 国家海洋局北海环境监测中心
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pegfp-n/tnfr 载体的构建及鉴定 叶顺传, 曾秋棠, 吴辉文, 吕云波华中科技大学同济医学院协和医院心研所, 湖北武汉 (430022) E-mail:yeshunchuan@gmail.com 摘要 : 目的 : 本研究旨在构建人肿瘤坏死因子受体 (TNFR ) 绿色荧光蛋白表达载体 pegfp-n/tnfr, 为研究 TNFR 细胞内转位奠定实验基础 方法 : 培养 U937 细胞,
刘 * 448 汉语写作与百科知识 复核无误 丁 ** 448 汉语写作与百科知识 复核无误 王 * 448 汉语写作与百科知识 复核无误 郝 ** 448 汉语写作与百科
104238152310807 刘 * 211 翻译硕士英语 复核无误 104238371108608 李 * 211 翻译硕士英语 复核无误 104238371108608 李 * 211 翻译硕士英语 复核无误 104238372309201 王 * 211 翻译硕士英语 复核无误 104238375203857 高 ** 211 翻译硕士英语 复核无误 104238375203871 李 **
蛋白表达系统研究进展
蛋白表达系统研究进展 作者 : 李朋林 上海交通大学生命学院研究生 学号 :5050809406 上世纪 70 年代初, 在遗传学 分子生物学 生物化学 微生物学等学科发展的基础上, 出现基因工程, 后又被称为重组 DNA 技术 这项技术为任何一种生物接受另一种生物的遗传物质并在其细胞内表达功能和稳定遗传提供了可能性, 也为我们在试管内直接操作遗传物质改变基因功能 调节基因表达方式创造了条件 经过近
第 期 李 伟 等 用 方 法 对 中 国 历 史 气 温 数 据 插 值 可 行 性 讨 论
李 伟 李 庆 祥 江 志 红 使 用 插 值 方 法 对 已 经 过 质 量 控 制 和 均 一 化 的 年 月 年 月 中 国 全 部 基 本 基 准 站 气 温 资 料 逐 月 进 行 空 间 插 值 通 过 站 点 的 实 际 序 列 与 插 值 后 格 点 序 列 进 行 比 较 针 对 相 关 系 数 和 线 性 趋 势 等 多 个 量 来 检 验 方 法 对 气 候 资 料 插 值 的
专 业 最高分最低分一本线最高分最低分一本线最高分最低分一本线 临床医学 ( 5+3 一体化 ) 口腔医学 ( 5+3 一体化 )
目 录 安徽省 1 北京市 2 福建省 3 甘肃省 4 广西壮族自治区 5 贵州省 6 海南省 7 河北省 8 河南省 9 黑龙江省 10 湖北省 11 湖南省 12 吉林省 13 江苏省 14 江西省 15 辽宁省 16 内蒙古自治区 17 宁夏回族自治区 18 山东省 19 山西省 20 陕西省 21 四川省 22 天津市 23 新疆维吾尔自治区 24 云南省 25 浙江省 26 重庆市 27
H N H CH 2 要 C要 COOH NH 2 H HN CH 2 要 C要 COOH N NH 2 R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 OH+H 要 N 要 C 要 COOH -H 2O R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 N 要 C 要 COOH H H H 氨基酸 H 肽键 H H 氧分压高 Hb-Fe 2+ +O 2 Hb-Fe 2+ -O 2
本 文 从 贫 困 概 念 及 演 化 提 出 新 贫 困 人 口 的 定 义 和 类 型 认 为 新 贫 困 人 口 是 我 国 计 划 经 济 向 市 场 经 济 制 度 转 轨 过 程 中 的 利 益 受 损 者 解 决 新 贫 困 人 口 的 生 存 权 和 发 展 权 问 题 是 政 府 的 基 本 责 任 由 此 从 社 会 保 障 的 内 涵 功 能 和 价 值 基 础 等 角 度 阐
图 对片剂累积释放度的影响
岳红坤 常明 游雅 邱树虹 王婧 乔宇 石家庄学院化工学院 河北石家庄 为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性 根据辅料性质及制剂质量要求 通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数 确定了最优 处方 采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片 在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度 并用 紫外可见分光光度法检测其释药量 优选的处方为每片含 碳酸氢钠 羧甲基淀粉钠 聚乙二醇
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
研 究 对 象 研 究 角 度 研 究 工 具 数 据 收 集 和 预 处 理 网 络 密 度 与 平 均 距 离 分 析
基 于 社 会 网 络 分 析 法 的 我 国 网 上 书 店 研 究 余 菜 花 袁 勤 俭 采 用 社 会 网 络 分 析 方 法 从 网 络 密 度 平 均 距 离 中 心 性 凝 聚 子 群 以 及 核 心 边 缘 结 构 等 角 度 对 我 国 网 上 书 店 关 系 进 行 研 究 通 过 研 究 得 出 我 国 网 上 书 店 网 络 密 度 和 平 均 距 离 较 小 中 心 度 偏
陈鹭真 王文卿 林 鹏 模拟正规半日潮淹水的条件下 不同淹水时间对秋茄 幼苗生长的影响 应用沙和土两种培养基质 制备盐度为 的人工海水栽培幼苗培养时间为 不淹水 和长时间淹水 对秋茄幼苗的生长有一定的抑制作用 而短时间淹水 淹水 对 幼苗生长有所促进 较长时间的淹水可促进贮气根的数量增加和长度的增长 在当前培养条件下 秋茄幼苗生长的最佳淹水时间是每个潮水循环淹水 处理的沙培秋茄幼苗总生物量和成熟叶面积最大
中 国 畜 牧 兽 医 卷 E"'"%"01 +,"1""01""'''01'' 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种分布于世界各地的人畜共患的传染病 严重危害人类健康和 畜牧业生产 感染公畜表现为睾丸炎和附睾炎 母畜表现为流产 早产或产死胎 人感染布鲁氏菌后多表现为波状热 关节炎 脑膜炎和睾丸炎 且久
中国畜牧兽医 " 羊种布鲁氏菌 基因的克隆 原核表达及其蛋白的生物信息学分析 聂 鑫 赵天靖 曹瑞勇 彭冬梅 李国华 李亚颖 徐开莲 朱华培 庞 峰 王凤阳 杜 丽 海南大学农学院 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海口市动物基因工程重点实验室 海口 摘 要 试验旨在克隆羊种布鲁氏菌 1 基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析 以布鲁氏菌 株基因组为模板 参照 +" 中 株基因组 )- 序列
刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 芽孢杆分类系统的演变发展
福建农业学报 刘国红 刘 波 林乃铨 林营志 芽孢杆菌的分类简况 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 芽孢杆分类系统的演变发展 福建农业学报 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 福建农业学报 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 福建农业学报 芽孢杆菌属的分化的确立依据和属模式种特征 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 福建农业学报 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征
第 期 马 海 燕 等 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 材 料 与 方 法 臭 氧 水 的 制 取 臭 氧 水 处 理 超 声 波 处 理 超 声 波 和 臭 氧 水 协 同 处 理 对 照 处 理 邻 苯 二 胺 分 光 光 度 法 测
第 卷 第 期 年 月 食 品 与 生 物 技 术 学 报 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 马 海 燕 张 慜 孙 金 才 食 品 科 学 与 技 术 国 家 重 点 实 验 室 江 南 大 学 江 苏 无 锡 海 通 食 品 集 团 股 份 有 限 公 司 浙 江 慈 溪 由 于 速 冻 蔬 菜 加 工 过 程 中 的 热 烫 处 理 对