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厄璩
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1 第 44 卷第 3 期 2018 年 9 月延边大学学报 ( 自然科学版 ) JournalofYanbianUniversity(NaturalScience) Vol.44No.3 Sep.2018 文章编号 : (2018) 循环通络乳膏剂制备及其抗类风湿性关节炎的考察尤钺 1, 许灵善 2, 郭建鹏 1,3* (1. 延边大学药学院, 吉林延吉 ;2. 龙井工业集中区管理委员会, 吉林龙井 ; 3. 长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室 ( 延边大学 ), 吉林延吉 ) 摘要 : 以综合评分为指标, 通过正交设计试验优选循环通络乳膏剂处方, 并采用单因素试验对其制备工艺参数进行了优化. 研究表明, 乳膏剂的最佳处方为浓缩药液 200g 凡士林 90g 羊毛脂 10g 液体石蜡 80g 单硬脂酸甘油酯 50g 硬脂酸 65g 丙三醇 150g 吐温 8040g 月桂氮艹卓酮 10g 尼泊金乙酯 0.5g, 用水加至 1000 g. 制备的最佳工艺为油水相分别加入乳化, 搅拌速度为 250r min -1, 乳化温度为 70, 乳化时间为 15 min. 抗类风湿性关节炎实验结果表明, 该乳膏能够改善大鼠的关节肿胀, 降低大鼠血清中炎症因子 (TNF-α, IL-1β, IL-6) 的含量和增加抗炎细胞因子 IL-10 的含量. 关键词 : 类风湿性关节炎 ; 朝药复方 ; 正交设计 ; 综合评分中图分类号 :R944.9 文献标识码 :A Preparationprocessandanti-rheumatoidarthritis investigationofxun HUANTONGLUOointments YOU Yue 1, XU Lingshan 2, GUOJianpeng 1,3* (1.ColegeofPharmacy,YanbianUniversity,Yanji133002,China;2.LongjingIndustrialConcentration DistrictManagementCommitee,Longjing133400,China;3.KeyLaboratoryof NaturalResourcesof ChangbaiMountain & Function Molecules(YanbianUniversity),MinistryofEducation,Yanji133002,China ) Abstract:Basedonthecomprehensivescoreastheindex,theorthogonaldesignexperimentwasusedtoselect theprescriptionofxun HUAN TONGLUOointments,andthesinglefactorexperimentalmethodwasused tooptimizetheprocessparameters.theoptimumprescriptionofointmentsisfinalyobtainedasaconcentraṯ edliquid200g,petrolatum 90g,lanolin10g,liquidparafin80g,glycerylmonostearate50g,stearicacid 65g,glycerol150g,Tweeṉ8040g,laurocapram 10g,ethylparaben0.5g,andadd waterto1000g.the optimumprocessimpliedthatemulsificationisatributedtoaddtwophasesofoilandwaterrespectively,the stirringspeedof250r min -1,theemulsificationtemperatureof70 andtheemulsificationtimeof15min. Antiṟheumatoidarthritisexperimentsshowedthattheointmentscanimprovejointswelinginrats,reducethe levelsofinflammatoryfactors(tnf-α,il-1βandil-6)intheserumofrats,increasethecontentofanti-iṉ flammatoryfactor(il-10). Keywords:rheumatoidarthritis;Koreanmedicinecompound;orthogonaldesign;comprehensivescore 循环通络筋骨止痛酊是在朝医理论指导下, 以朝鲜族祖传秘方为基础开发出来的具有省级保健用品批号 ( 吉卫健用字 [2014] 第 001 号 ) 的产品. 本品处方主要包含黄芩黄芪细辛当归防风等药味, 具有活血化瘀止痛改善微循环的功效, 适用于由痹证引起的疼痛肿胀僵直拘挛, 即适用于类风湿性收稿日期 : 基金项目 : 延边朝鲜族自治州科技发展计划项目 (2014AC17) * 通信作者 : 郭建鹏 (1971 ), 男, 教授, 研究方向为中药新剂型与新技术.

2 第 3 期尤钺, 等 : 循环通络乳膏剂制备及其抗类风湿性关节炎的考察 251 关节炎 (Rheumatoidarthritis) 的辅助医疗. 由于循环通络筋骨止痛酊存在携带运输不便, 患者顺应性差, 制剂稳定性差等缺点, 因此本文在保证其临床疗效的前提下, 通过优选制剂处方和工艺参数, 将原剂型改为乳膏剂, 以增加制剂的稳定性和患者顺应性, 并通过动物实验验证本文方法的有效性. 1 材料与仪器 1.1 药材与试剂循环通络酊剂药液, 延边山宝杜家源风湿骨病研究所提供, 批号 : 丙三醇硬脂酸硬脂醇单硬脂酸甘油酯液体石蜡吐温 80 三乙醇胺十八醇十二烷基硫酸钠为分析纯, 天津市科密欧化学试剂有限公司生产 ; 凡士林羊毛脂尼泊金乙酯为分析纯, 沈阳市华东试剂厂生产 ; 蜂蜡为化学纯, 北京索莱宝科技有限公司生产 ; 月桂氮艹卓酮司盘 80 为化学纯, 国药集团化学试剂有限公司生产 ; 冰乙酸二甲苯为化学纯, 成都化学试剂厂生产 ; 伊文斯兰,Sigma 公司生产 ; 肿瘤坏死因子 -α 白细胞介素 -1β IL-6 IL-10ELISA 试剂盒, 联科生物技术股份有限公司生产. 1.2 仪器主要仪器有 : 紫外分光光度计 (D-1900, 日本日立公司 ); 电子天平 (FA2004, 上海良平仪器仪表有限公司 ); 低温超速离心机 ( 美国 Thermo 公司 ); 超低温冰箱 ( 美国 NBS 公司 ); 高剪切分散乳化机 (DE- 100LB, 上海弗鲁克流体机械制造有限公司 );NikonFX-35A 光学显微镜 ( 日本 Nikon 公司 );YLS-Q4- 打耳器 ( 济南益延科技发展有限公司 );YLS-7B- 大鼠足跖容积测定仪 ( 济南益延科技发展有限公司 ); SYNERGY HTX 多功能酶标仪 ( 美国 BioTek 公司 ). 1.3 实验动物昆明种小鼠 (18~22g) 和 Wistar 雄性大鼠 (160~200g) 由延边大学实验动物中心提供 ( 实验动物生产许可 :SCXK( 吉 ) ). 2 处方研究 2.1 处方预试验制备 O/W 型乳膏剂 ; 循环通络主药液浓缩至相对密度为 1.15(22 ) 的浓缩药液 ; 基质与浓缩药液配比范围为 5 1~4 1( 体积比 ); 尼泊金乙酯的用量范围为 0.05%~0.1%; 月桂氮艹卓酮的用量范围为 1.0%~3.0% [1]. 2.2 基质组分的确定根据文献 [2-4] 和预试验, 以 4 组较为常用的 O/W 型乳膏剂的基质组成作为备选基质处方, 见表 1. 按表 1 制备 4 组乳膏剂, 以综合评分筛选最优备选处方. 处方编号浓缩药液硬脂酸硬脂醇单硬脂酸甘油酯蜂蜡表 1 乳膏基质组成及配比 g 液体石蜡凡士林羊毛脂 A B C D 成分三乙醇胺吐温 80 司盘 80 十二烷基硫酸钠丙三醇月桂氮艹卓酮尼泊金乙酯加水至

3 252 延边大学学报 ( 自然科学版 ) 第 44 卷乳膏剂制备方法取主药液浓缩至相对密度为 1.15(22 ), 按表 1 分别称量油相成分水相成分放置于不同容器中, 油相加热至 70~75, 水相加热至 80 ; 将浓缩药液与丙三醇研磨成糊状物, 混合均匀后再与水相混合 ; 各相混匀后将水相缓慢加入至油相中 (70 ), 以转速 250r min -1 搅拌 ; 乳化 20min 后停止加热, 继续搅拌冷却至室温, 即得乳膏剂样品. [5-7] 最优备选处方的确定以乳膏剂质量的综合评分评价各组备选处方, 综合评分采用的考察指标及 A B C D4 组处方的评分标准如图 1 所示. 其中粒径评分 =10-( 该组平均粒径 /60), 粒度分布评分 =10- 该组跨距值 10, 保湿性评分 =20- 失水率 20. 叠加分数各项指标分数即为考察总分, 评分越高说明质量越佳. 经计算, 各处方的得分 :A 为分,B 为分,C 为分,D 为分. 图 1 综合评分指标及评分标准 2.3 处方优化正交设计实验以处方 D 的基质组成为表 2 正交设计实验因素水平表基础, 结合文献 [8], 将吐温 80(A) 液体石蜡因素水平 (B) 单硬脂酸甘油酯 (C) 的处方用量作为影响因 A/g B/g C/g 素, 各取 3 个水平, 各因素水平见表 2. 考察指标及评分标准同进行, 选用 L9(3 3 ) 正交表进行试验, 实验安排及结果见表表 3 实验安排及结果试验号因素结果 A B C 外观形状物理稳定性乳滴粒度保湿性综合评分正交设计的结果分析以各实验组的综合评分值为指标进行方差分析, 结果见表 4. 由表 4 可以看出, 吐温 80 与液体石蜡的用量对实验结果无显著性影响, 单硬脂酸甘油酯的用量对乳膏的综合评分有显著性影响. 进行多水平均值检验显示,A 因素对结果的影响为 A3>A2>A1,A3 与 A1 间无显著性差异, 经综合考虑本文选择 A1;B 因素对结果的影响为 B1>B3>B2,B1 与 B2 间无显著性差异, 经综合考虑本文选择 B2;C 因素对结果的影响为 C2>C1>C3, 故本文选择 C2. 综上,3 种辅料的优选水平为

4 第 3 期尤钺, 等 : 循环通络乳膏剂制备及其抗类风湿性关节炎的考察 253 A1B2C2, 即吐温 8040g 液体石蜡 80g 单硬脂酸甘油酯 50g. 表 4 正交试验方差分析结果方差来源离差平方和自由度均方差 F P Ⅰ Ⅱ Ⅲ 误差制备工艺研究分别对不同搅拌速度 V (150,250,350,450r min -1 ) 乳化温度 T (60,70,80,90 ) 乳化时间 t [9] (5,10,15,20min) 和不同乳化剂加入方式 ( 水中加入法, 油中加入法, 油水分别加入法 )4 个影响因素进行单因素考察. 按中的方法制备乳膏剂, 按中的评分标准进行综合评分, 结果见表 5. 由表 5 可以看出, 当 V 为 250r min -1 T 为 70 t 为 15min 时, 使用油水分别加入法制备的乳膏剂的综合评分最高. 表 5 工艺参数综合评分结果 V/(r min -1 ) T/ t/min 乳化方法综合评分转相法转相法转相法转相法转相法转相法转相法转相法转相法转相法水中加入法油中加入法油水分别法 93.6 按最佳制备工艺制备 3 批次乳膏, 按中的方法对其质量进行考察, 综合评分结果分别为 93.2 分 93.1 分 93.4 分,RSD<2%, 该结果说明优选的制备工艺稳定可行. 4 抗类风湿性关节炎的研究 4.1 供试样品循环通络乳膏剂由延边医药健康产业中试基地按照中的方法制备 ( 批号 : ). 4.2 动物模型 [10] 模型采用佐剂性关节炎 (AdjuvantArthritis,AA) 大鼠模型 AA 诱导剂的制备将卡介苗冻干粉 (BCG) 及液体石蜡进行灭活处理, 在超净台中用无菌注射器抽取 10mL 液体石蜡倒入研钵中, 稍稍研磨滋润研钵壁后倒入 100mgBCG, 顺时针方向研磨至乳化, 即得浓度为 10mg ml -1 的完全弗式佐剂 CFA [11] AA 模型的建立酒精擦拭大鼠右后足趾部位 ( 消毒 ) 后, 肉垫处皮内注射 0.1mLCFA. 空白对照组大鼠用同样方式注射 0.9% 氯化钠注射液 0.1mL. 第 7d 同法再注射 1 次 CFA, 加强诱导. 第 14d [12] 筛选出左侧足趾明显肿胀的大鼠, 该大鼠即为 AA 大鼠模型.

5 254 延边大学学报 ( 自然科学版 ) 第 44 卷 4.3 分组与给药取造模成功的 32 只大鼠, 随机分为模型对照组和低中高剂量给药组. 大鼠背部脱毛后涂抹给药, 2 次 /d, 连续 20d. 空白对照组和模型对照组给予相同的剂量. 4.4 检测指标与结果体重变化注射造模剂当天记 0d, 定期称重, 记录并观察大鼠体重变化规律. 增重率的计算公式为 : 增重率 /%=( 第 n 天体重 - 第 1 天体重 )/ 第 1 天体重 100. 计算所得的增重率如图 2 所示. 由图 2 可以看出, 模型对照组和给药组均与空白对照组呈极显著差异 (P<0.01); 中高剂量组与模型对照组呈显著统计学差异 (P<0.05), 低剂量组与对照组无显著差异 (P>0.05), 但低剂量组的体重有所增加. 图 2 大鼠体重增重率四肢关节炎评分情况根据大鼠关节红肿程度和范围, 采用关节炎 5 级评分法对 AA 模型大鼠关节炎进展程度进行定期评分. 具体评分标准如下 :0 分为正常 ;1 分为足爪及足垫单个区域出现轻度肿胀 ;2 分为足爪和足垫或踝关节 2 个以上区域出现红斑和轻微肿胀 ;3 分为踝关节到跖关节或掌关节出现红斑和中度肿胀 ;4 分为踝关节僵硬畸形功能障碍和重度肿胀. 关节炎表现最高为 4 分, 总和累 [12] 计最高为 16 分. 由表 6 评分结果可以看出, 高中剂量组与模型对照组相比呈极显著性差异 (P<0. 01), 而低剂量组与模型对照组相比呈不显著差异. 以上结果表明, 循环通络乳膏对大鼠的关节炎症有改善作用. 组别表 6 乳膏剂对关节炎评分的影响췍 x ±SD,n=8 关节炎评分 4d 8d 12d 16d 20d 24d 28d 32d 模型对照组 ± ± ± ± ± ± ±1.03 高剂量组 ± ± ±0.67 ## 7.12±0.66 ## 6.8±0.54 ## 6.65±0.56 ## 6.50±0.45 ## 中剂量组 ± ± ±0.72 ## 7.99±0.78 ## 7.84±0.64 ## 7.12±0.65 ## 6.83±0.65 ## 低剂量组 ± ± ± ± ±0.92 # 7.98±0.87 ## 7.78±0.86 ## 注 : 与模型对照组比较,# 表示 P<0.05,## 表示 P< 继发侧足爪肿胀度致炎前用足爪测试仪测量每只大鼠右后足掌的体积 ( 测到踝关节以下部位, 并作标记 ), 定期测定记录, 并计算继发侧足爪肿胀率, 结果如表 7 所示. 表 7 显示, 低剂量组在给药初期, 大鼠的足爪肿胀无明显改善, 但在后期改善明显. 给药 20d 时, 高剂量组与模型对照组相比呈极显著性差异 (P<0.01). 这表明本品能明显抑制大鼠的关节局部早期炎症, 改善其关节肿胀. 表 7 乳膏剂对大鼠足爪肿胀程度的影响 x 췍±SD,n=8 组别不同给药时间大鼠右足的体积 1d 4d 8d 12d 16d 20d 24d 28d 32d 空白对照组 1.58± ± ± ± ± ± ± ± ±0.28 模型对照组 1.58± ± ± ±0.31 ** 2.32±0.32 ** 2.65±0.42 ** 2.98±0.44 ** 2.86±0.32 ** 2.79±0.33 ** 高剂量组 1.57± ± ± ± ±0.21 ## 2.57±0.21 ## 2.45±0.34 ## 2.41±0.26 ## 2.36±0.24 ## 中剂量组 1.57± ± ± ± ±0.27 # 2.59±0.25 ## 2.68±0.21 ## 2.53±0.31 ## 2.49±0.26 ## 低剂量组 1.54± ± ± ± ± ± ±0.43 # 2.64±0.36 # 2.59±0.31 # 注 : 与空白对照组比较,** 表示 P<0.01; 与模型对照组比较,# 表示 P<0.05,## 表示 P< 大鼠血清中的细胞因子含量于末次给药 2h 后, 对大鼠心脏穿刺取全血, 置低温离心机中高

6 第 3 期尤钺, 等 : 循环通络乳膏剂制备及其抗类风湿性关节炎的考察 255 速离心 20min, 吸取上层血清, 分装保存于 -80 冰箱中备用. 按照 ELISA 试剂盒说明书中的方法分别测定 TNF-α,IL-1β, IL-6,IL-10 [13], 结果见表 8. 表 8 显示, 在空白对照组中, 细胞因子 (TNF-α IL-1β IL-6 及 IL-10) 的表达处于正常水平 ; 模型对照组中 TNF-α IL-1β IL-6 的炎症因子水平均有显著升高, 且高于其余各组, 但抗炎因子 IL-10 水平均显著低于其他各组. 与模型对照组相比, 高剂量组可显著降低 TNF-α IL-1β IL-6 水平, 升高抗炎因子 IL-10 水平 ; 低剂量组可显著降低 TNF-α 水平, 升高 IL-10 水平 ; 中剂量组可显著降低 TNF-α IL-1β 水平, 升高 IL-10 水平. 这表明乳膏剂对炎症因子和抗炎因子的表达具有显著影响, 且呈现量效关系. 表 8 乳膏剂对大鼠血清细胞因子的影响 x 췍±SD,n=8 组别 TNF-α/(pg/mL) IL-1β /( pg/ml) IL-6/(pg/mL) IL-10/(pg/mL) 空白对照组 24.67± ± ± ±15.34 模型对照组 ±2.12 ** 53.67±1.11 ** ±1.74 ** ±18.37 ** 高剂量组 68.78±3.33 ## 26.78±1.28 ## ±2.23 ## ±16.24 ## 中剂量组 87.67±5.62 ## 34.54±1.44 ## ± ±23.98 ## 低剂量组 ± ± ± ±59.34 ## 注 : 与空白对照组比较,** 表示 P<0.01; 与模型对照组比较,## 表示 P< 结论本文以乳膏物理稳定性乳滴粒径及粒度分布保湿性为客观指标, 以乳膏的外观性状为主观指标, 制备了循环通络乳膏剂. 研究表明, 制剂的最佳处方为浓缩药液 200g 凡士林 90g 羊毛脂 10g 液体石蜡 80g 单硬脂酸甘油酯 50g 硬脂酸 65g 甘油 150g 吐温 8040g 月桂氮艹卓酮 10g 尼泊金乙酯 0.5g, 用水加至 1000g. 制备的最佳工艺为油水相分别加入乳化, 搅拌速度为 250r min -1, 乳化温度为 70, 乳化时间为 15min. 抗类风湿性关节炎实验结果表明, 本品对 AA 模型大鼠的关节炎外观症状有改善作用, 对炎症因子和抗炎因子表达具有显著影响, 且呈现量效关系. 综上表明, 本文制备的循环通络乳膏剂可以作为循环通络筋骨止痛酊的改剂型产品用于临床. 参考文献 : [1] 孙媛, 赵媛, 刘波. 皮肤维护乳膏剂的制备及质量研究 [J]. 中国医院用药评价与分析,2016,16(1): [2] IizharSyedAhmed,SyedIsmailAhmed,SatarRukhsana,etal.Invitroassessmentofpharmaceuticalpotentialof ethosomesentrappedwithterbinafinehydrochloride[j].journalofadvancedresearch,2016,7(3): [3] 王磊, 程岚, 杨跃辉. 正交试验优选五倍子软膏处方 [J]. 实用药物与临床,2013,16(4): [4] 余健华, 千永香. 正交设计优选复方曲安奈德乳膏剂的制备工艺 [J]. 中国医药指南,2009,7(9): [5] 仇有禄. 复方盐酸布替萘芬乳膏剂的制备与临床应用 [J]. 中国医院药学杂志,2013,33(19): [6] 梁晓阳, 庄忠宝, 张晓云, 等.O/W 型山金车软膏剂的制备及体外评价 [J]. 应用化工,2016,45(7): [7] 陆彬. 药物新剂型与新技术 [M].2 版. 北京 : 人民卫生出版社,2005: [8] 赵晓军, 赵文明. 吲哚美辛乳膏的制备及体外释放度考察 [J]. 中国现代应用药学,2014,31(11): [9] GroveG,ZerweckC.Anevaluationofthemoisturizingandanti-itchefectsofalacticacidandpramoxinehydrochloridecream[J].Cutis,2004,73(2): [10] 马玉琛, 段斐, 孟明, 等. 改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型 [J]. 现代预防医学,2008,35(10): [11] 蔡文虹, 孙保东, 张宝凤, 等. 类风湿性关节炎动物模型研究进展 [J]. 中国当代医药,2012,19(4): [12] 李培培, 解国雄, 宋珊珊, 等. 大鼠佐剂性关节炎模型表现特征及评价指标 [J]. 中国免疫学杂志,2012,28(5): [13] BarışS,Akyürek Ö,DursunA,etal.TheimpactoftheIL-1β, IL-1Ra,IL-2,IL-6andIL-10genepolymoṟ phismsonthedevelopmentofbehcet sdiseaseandtheirassociation withthephenotype[j].medicinaclinica, 2016,146(9):

图对片剂累积释放度的影响

图对片剂累积释放度的影响岳红坤常明游雅邱树虹王婧乔宇石家庄学院化工学院河北石家庄为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性根据辅料性质及制剂质量要求通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数确定了最优处方采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度并用紫外可见分光光度法检测其释药量优选的处方为每片含碳酸氢钠羧甲基淀粉钠聚乙二醇