期 陈付菊等 不同山羊小肠黏膜免疫相关细胞的数量变化 早在 年 ' 等已经系统地研究了猪在发 育过程中其结肠杯状细胞的黏液成分 高登慧等用组织学方法对山羊小肠肥大细胞的异质性进行了 详尽的描述 $ 等利用流式细胞仪对小鼠上皮内淋巴细胞的亚型进行了深入的分析 但到目前为止 对山羊小肠上皮内淋巴细胞 杯

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1 畜牧兽医学报 不同山羊小肠黏膜免疫相关细胞的数量变化 陈付菊 陈耀星 王子旭 刘云芳 谢 电 中国农业大学动物医学院 北京 摘 要 为揭示不同发育阶段山羊小肠黏膜免疫特点的内在规律 本试验采用组织学和组织化学方法 对 和 山羊小肠不同肠段的上皮内淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞的分布和数量变化进行了比较研究 结果显示 随着年龄增长 小肠各段上皮内淋巴细胞和肥大细胞的数量逐步增多 而杯状细胞却逐渐减少 上皮内淋巴细胞数从十二指肠至回肠逐渐减少 的回肠上皮内淋巴细胞数仅是十二指肠和空肠的 和 肥大细胞的分布规律与上皮内淋巴细胞相似 相反 杯状细胞数从十二指肠至回肠逐渐增多 以上结果提示 在山羊小肠的早期发育中 杯状细胞起着重要的黏膜屏障功能 随着肠道黏膜免疫系统的发育 上皮内淋巴细胞和肥大细胞的黏膜防御作用进一步增强 关键词 山羊 小肠 上皮内淋巴细胞 杯状细胞 肥大细胞中图分类号 文献标识码 文章编号!"#$ %&'!! %&!&'()#)&+!()+!(,#-&$. (0$&+,#.!$#! "#$$%&'!,"#%-3-4# 3%$.-"# $33$# "'-#$""$3%$.-#3#3 $34-$.3#.# "-3'3$4%3$3$73$-#"7 '#.-$3#$3$# %"-'%3!.-73'0#"#3'9$ 43$.#37%$3--.$'##$3-'"$'# "3-3-93#33"7-! # 9$.$$'#3%$'# 9$3#.9$3"7-0'# 73#3$# % 3-3#3$3$73$--!9#'#-"- "3-$"#3"7-!$-"#" 9## -$ "'3$4%#3 "-3-$3$73$-- 9#$"$#3-3#3-! "7-0-94$'#-" -"3-$"3..33#30 #%#''$# $47#$-$3#%-3#3# $-9$3'3-!# #''-'-"$3#39$3-3#3# 4-"3-3.3"'-#$""%3" -.#.-#3"# $33$$3#$3$# %"-'%3.-73'"#3' 黏膜免疫系统是机体抵抗病原微生物的第一道防线 广泛分布在呼吸道 消化道及泌尿生殖道 机 体 以上的免疫细胞集中于黏膜免疫系统 据 0#$ 等报道 小肠上皮内淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞作为肠道黏膜免疫相关细胞的重要组 成部分 构成肠道黏膜免疫系统的第一道防御屏障 在抗感染 调节上皮细胞的完整性和外来抗原的免疫应答等方面起重要作用 其数量的变化可以在一定程度上反映消化道的局部免疫状况 近年来 上述三种免疫相关细胞已经引起了许多学者的关注 收稿日期 基金项目 国家自然科学基金项目 作者简介 陈付菊 女 青海人 硕士生 主要从事动物黏膜免疫学研究 通讯作者 陈耀星 教授 博士生导师!"#$%&''#'

2 期 陈付菊等 不同山羊小肠黏膜免疫相关细胞的数量变化 早在 年 ' 等已经系统地研究了猪在发 育过程中其结肠杯状细胞的黏液成分 高登慧等用组织学方法对山羊小肠肥大细胞的异质性进行了 详尽的描述 $ 等利用流式细胞仪对小鼠上皮内淋巴细胞的亚型进行了深入的分析 但到目前为止 对山羊小肠上皮内淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞的发育学变化规律 在国内外尚未见报道 为此 笔者对 及 山羊小肠上皮内淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞的分布以及数量变化进行了研究 以期为消化道黏膜免疫发育规律的研究提供参考资料 材料与方法 实验动物和样品处理 雄性山羊 购自北京农业职业学院畜牧场 山羊经颈动脉放血处死后 迅速取出十二指肠 空肠和回肠各 '" 左右 用新配制的生理盐水冲洗干净 置 多聚甲醛磷酸缓冲液 "- 中固定 常规石蜡包埋 制备连续横断切片 厚 " 每隔 张取 张 检测指标和方法 经! 染色 高碘酸 '$ 氏剂 染色 及改良甲苯胺蓝 染色 光镜下详细观察上皮内淋巴细胞 杯状细胞及肥大细胞的形态分布 各段小肠取 张切片 每张切片中选取 根柱状细胞排列整齐且最长的肠绒毛 统计每 个柱状细胞中分布的上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量 肥大细胞的计数是各段小肠分别统计 张切片横断面全层的肥大细胞数 并用 -$3' 照相处理软件 计算单位面积内的肥大细胞数量 统计分析 数据处理采用 软件进行方差分析和统计 结果以 平均值 标准差 表示 结 果 各组山羊小肠上皮内淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞的形态与分布 经! 染色后在光镜下观察 可见上皮内淋巴细胞散在分布于肠绒毛柱状上皮细胞之间 多数位于上皮细胞核的下方 核区与核上方也偶有分布 该细胞以小型细胞为主 直径约 " 胞核大而圆 深染 胞浆较少 图 杯状细胞经 染色后呈红色 散在分布于柱状细胞之间 呈高脚杯状 其顶部胞质由大量糖原颗粒充满 膨隆 呈杯状 底部纤细 有小而深染的不规则核与少量嗜碱性胞质 图 经甲苯胺蓝 染色后 肥大细胞呈紫红色 多呈圆形 椭圆形或梭形 胞浆内颗粒丰富 部分细胞呈脱颗粒状 肥大细胞多分布于肠腺周围 小肠绒毛也有分布 但多位于固有层中 少量肥大细胞分布于肌层和浆膜层 且常见于小血管和小淋巴管周围 图 各组山羊小肠上皮内淋巴细胞的数量变化 由表 可知 小肠各段上皮内淋巴细胞数量都是随的增长而增加 在十二指肠和空肠段各年龄组间比较差异显著 如 组十二指肠段的上皮内淋巴细胞数比 组显著多 组又比 组显著多 但回肠段 组和 组间比较差异不显著 而 组的数量却显著多于这两组的数量 分别比 组和 组多 和 各组的各肠段中上皮内淋巴细胞均呈从十二指肠到回肠递减的趋势 其中 时十二指肠比空肠显著高 但空肠和回肠间差异不显著 时十二指肠和空肠差异不显著 但空肠比回肠显著高 时十二指肠比空肠显著高 空肠比回肠显著高 各组山羊小肠杯状细胞的数量变化 由表 可知 杯状细胞数量在十二指肠和回肠都是随的增长出现先显著降低 然后稍微增加 的趋势 如 组回肠的杯状细胞比 组显著降低 而 组比 组增加 但在空肠中杯状细胞数量是随着年龄的增长而降低 且 组比 组显著降低 组比 组降低 在 组和 组杯状细胞从十二指肠到回肠递增 其中 时回肠比空肠显著高 空肠比十二指肠显著高 时空肠和回肠间比较差异不显著 但 时出现先降低后增加的趋势 且十二指肠和回肠间差异不显著

3 !-+$ 畜!牧!兽!医!学!报 -( 卷!,% ]% >% O % 上皮内淋巴细胞"箭头示#' 3% A% H%?% 杯状细胞"箭头示#' K% _% `% J % 肥 大 细 胞 "箭 头 示#&,% 3% K %" %& 组']% A% H %' 组'>% H% `%!' 组' O%?% J 分 别 为 >% H% ` 的 放 大& 比 例 尺$,% ]% >% 3% A% H 中为!"""4' K% _% ` 中为 &""4' O%?% J 中为 '""4,!]!>!O %K T 97 S" EWS#'3!A!H!?% HEU 9 S" EWS#'K!_!`!J % V S 74TE 9 S" EWS#',!3!K %? M4E F E<T']!A!H %' 4E SF E<T'>!H!`%!' 4E SF E<T % O!?!J % VF M 9 EE M>!H!`%9 U $!"""4,!]!>!3!A!H'&""4 K!_!`''""4 O!?! J 图 &! 各组山羊十二指肠上皮内淋巴细胞$杯状细胞和肥大细胞 > > > +3 0, + ) -B. -, C. H G&!I) - + ) 7.%,,, C <3C) <! GJ! 各组山羊小肠肥大细胞的数量变化!! 由表 - 可知!小 肠 的 肥 大 细 胞 数 量 随 着 个 体 的 '+ %()!' 月 龄 组 比 " %& 月 龄 组 显 著 高 '-$$ %#!) &但在回肠中肥大细胞 数量 随月 龄 的 增 发育而增多&但 在 不 同 肠 段 其 变 化 趋 势 略 有 不 同& 长出现先 显 著 增 大 ".#" %"&#%然 后 稍 微 降 低 的 趋 在十二指肠和空肠肥大细胞数量都是随的增长 而增大!且各年龄组间比较 差 异 显 著".#" %"&#!如 势! ' 组 和!' 月 龄 组 间 比 较 差 异 不 显 著 ".$ # & 月 龄 组 回 肠 的 肥 大 细 胞 比 月 龄 组 显 " %"& ' " %&!' 组十二 指 肠 的 肥 大 细 胞 比 ' 月 龄 组 显 著 高 著增加!!'# %(') ".#" %"&#!而!' 组比 ' 月

4 期 陈付菊等 不同山羊小肠黏膜免疫相关细胞的数量变化 表 各组山羊小肠上皮内淋巴细胞的数量 "&!"##+&&&!+%!&##+ 年龄 小肠 十二指肠 空肠 回肠. ##"-3 "-3 "-3 "# $33$ -" " " ' ' ' # # # # 同一行和同一列肩标字母不同者差异显著 大写字母 代表相同不同肠段比较 小写字母 #7' 代表同一肠段不同比较 下同 #3#9$3$3'#$3# 39$3$3#"-9-'-"$$.$$'#3%'#$3# 3 3$3.3#39$3#"#.-9'##7'33#".3#39$3$3#.3#"# 7-9 表 各组山羊小肠杯状细胞的数量 "&!"#"&%&!&##+ 年龄 小肠 十二指肠 空肠 回肠. ##"-3 "-3 "-3 "# $33$ -" " " # # # # ' 7 龄组降低 在 组和 组肥大细胞数量从十二指肠到空肠减少 而从空肠到回肠增加 其中 时十二指肠比空肠显著高 空肠比回肠显著低 时 十二指肠比空肠显著高 空肠比回肠显著低 但 组肥大细胞从十二指肠到回肠递减 表 十二指肠比空肠显著高 空肠比回肠显著高 表 各组山羊小肠肥大细胞的数量 "&!"#!%&!&##+ 年龄 小肠 十二指肠 空肠 回肠. ##"-3 "-3 "-3 "# $33$ -" " " 7 ' ' 7 # 7 7 # # # # #

5 畜 牧 兽 医 学 报 卷 讨 论 肠道不仅是消化 吸收营养物质的场所 而且 具有重要的免疫屏障功能 肠道的免疫学屏障主要由肠相关淋巴组织和肠道黏膜免疫相关细胞构成 而后者包括淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞等 小肠上皮内淋巴细胞作为肠道相关淋巴组织中的一个特殊组分 是机体免疫系统中与外来抗原以及微生物最先接触的免疫细胞 同时也是最先发生免疫 反应的细胞 其通过分泌 )( 和 )( 等淋巴因子 诱导肠上皮细胞参与黏膜免疫应答 因此小肠上皮内淋巴细胞的数量可以反映小肠局部黏膜免疫屏障的完整及免疫防御功能的完善 程度 #73 等研究发现 在仔猪发育早期上皮内淋巴细胞随着年龄的增长而增多 本研究发现 山羊 时小肠上皮内淋巴细胞数量很少 每 个柱状细胞间的平均数为 个 时上皮内淋巴细胞数量显著增加 到 每 个柱状细胞间的平均数可达 个 是 的 倍多 该结果与张晗等和朱 清仙等人对仔猪和人胎儿的研究结果相一致 说明羔羊出生后的早期 其免疫功能尚不完善 故肠道表现为较低的免疫激活状态 随着食物抗原的刺激 到 山羊小肠黏膜免疫系统得到很好的发育 免疫屏障功能进一步完善 至成年 小肠黏膜免疫系统发育趋于平衡 此外 本研究还发现山羊小肠不同肠段上皮内淋巴细胞的数量分布也明显不同 从十二指肠至回肠依次递减 这可能与小肠不同部位所接触病原微生物及食物抗原的种类和数量不同有关 杯状细胞是一种典型的糖蛋白分泌细胞 其分泌的黏蛋白释入管腔内成为润滑性黏液涂布于上皮 表面 对上皮具有保护作用 7# 等认为 杯状细胞在尚未建立被动免疫的新生动物的肠道免疫中起重要的防御作用 本研究结果显示 时山羊小肠杯状细胞数量最多 时显著降低 至 时数量相对于 时有所增加 但仍低 于 时的水平 这与顾宪红等和 7# 等的研究结果相一致 提示杯状细胞可能在年龄较小的动物肠道免疫机能的调节中起重要作用 此外 本研究还发现山羊小肠从十二指肠至回肠 杯状细胞数量表现出增多趋势 笔者认为这可能与回肠的特殊解剖位置有关 回肠作为小肠和大肠的交 界 极易受微生物的侵袭 其免疫屏障相对较薄弱 因此 回肠比十二指肠有更多的杯状细胞分布 使得具有分泌功能的杯状细胞主要分布于回肠以弥补免疫屏障的不足 肥大细胞是天然免疫的效应细胞之一 不仅在天然免疫中发挥重要作用 是机体抗感染免疫的第一线细胞 而且能通过所分泌的细胞因子参与获得 性免疫 所以肥大细胞是重要的免疫活性细胞 有报道指出肠道中的肥大细胞对肠道疾病有一定的防御作用 肠道黏膜上皮首先对入侵的细菌发生反 应 从而激活邻近的肥大细胞产生放大效应 本研究结果显示 随着山羊年龄的增加 小肠中肥大细胞的数量显著增加 如 组的肥大细胞比 组显著增加 而 组比 组增加 且山羊小肠肥大细胞数量增加主 要表现在发育前期 这与其他学者的研究结果相一致 本试验还观察到 小肠结缔组织周围有些肥大细胞呈脱颗粒现象 提示肥大细胞可能对小肠壁内各种组织 细胞的发育起着一定的调节作用 此外 和 山羊小肠肥大细胞数量从十二指肠至回肠表现出先减少 后增多的趋势 到 肥大细胞数量表现出从十二指肠至回肠依次显著递减的趋势 肥大细胞这种分布特点的生理意义还有待进一步研究 本研究初步探讨了山羊小肠上皮内淋巴细胞 杯状细胞和肥大细胞数量随年龄的变化及其黏膜免疫的发育规律 表明山羊小肠杯状细胞主要在肠道免疫机能不完善的幼龄动物中起重要的免疫屏障作用 随着日龄的增加和食物抗原的不断刺激 上皮内淋巴细胞和肥大细胞逐渐起着主导的免疫保护作用 不同肠段的免疫相关细胞分布特点不同 上皮内淋巴细胞和肥大细胞主要分布于十二指肠 而杯状细胞则多分布于免疫屏障相对较薄弱的回肠 因此 种肠道黏膜免疫相关细胞共同作用 保持肠黏膜免疫系统的平衡 参考文献 成令忠 钟翠平 蔡文琴 现代组织学 上海 上海科学技术文献出版社 0#$ =$33$#$""%3"03 #'3$-#.-93-3$. -# -$"# '$' ')3$'$3.#$3#

6 期 陈付菊等 不同山羊小肠黏膜免疫相关细胞的数量变化 '33'-"-$3$---'$'--$' "'$ $#3$'=#' 高登慧 许乐仁 姚红艳 山羊肥大细胞组织化学及形态学研究 畜牧兽医学报 $-.<-$<.#3'#.$ 3.$-# 4#$#3$-$3"7#73- $3#$3$# %"-'%3$ "-"# $33$ 4-"3# # -"##3$4""--.% 易家农 组织学技术 湖南医学院 扬建平 甲苯胺蓝显示子宫内膜肥大细胞的改进染色法 生殖与避孕 <#.-!'-# $""--.%(9-3$ ""- -#% 顾宪红 张宏福 佘锐萍 等 断奶日龄对仔猪肠黏膜形态的影响 畜牧兽医学报 =-3#3# ##3#3$--3.#3-$33$# 3#'3$-#3# $.#-$7--"$7-.-93#'3- $43-' -'3$- '$' #73==-33-3#3# 4-"3- %"-'%373$$3'-"#3"3-3 "# $33$-$.3>3$#%""--.% #""-#3--.% 张 晗 王瑞玲 赵 琪 等 仔猪小肠母源抗体.0 的摄取与肠道淋巴组织发育的组织学研究 中国兽医杂志 朱清仙 邓 锋 江鹏飞 等 人胎大肠和小肠上皮内淋巴细胞的比较分析 中国体视学与图像分析 史玉兰 段相林 杯状细胞的研究进展 解剖科学进展 7#'-"$'-7$-3#-$33$# $" "%3"4-"3" $(3 顾宪红 张宏福 佘锐萍 等 断奶日龄对仔猪肠道黏膜水解酶及其上皮间淋巴细胞和杯状细胞数的影响 动物营养学报 33-0 =>$#.-3$=--$3 3$# "#3'$ "-#3$..#3-$33$# #3- %$--.%.% 3"#""--.% 陈 江 张振玉 王崇文 等 肥大细胞在炎症性肠病中致病作用的研究 江西医药 陈晓宇 贾友苏 王惠珠 人胎小肠 与肽能神经的分布和发育研究 安徽医科大学学报 塞浦路斯发生口蹄疫 动物疫情快递 年 月 日 塞浦路斯向! 报告了口蹄疫疫情 年 月 日 拉纳卡 -"-#&$# 村一养殖户带 只 岁母羊到当地兽医机构检查 该羊舌头发红 嘴唇损伤 并且跛行 开始时怀疑是蓝舌病 月 日自患畜所在农场动物采样送国家兽医实验室检查 结果呈阴性 随后对样品进行了口蹄疫检查 份样品中有 份 (! 检测呈阳性 这些样品和食管拭子样品一并送 $7$.3 的! 参考实验室检查 但首次怀疑的样品检测结果为阴性 对该农场周围 " 半径内的畜群再次取样 国家兽医实验室检查发现 个其他畜群 (! 结果呈阳性 这批样品 年 月 日再次送! 参考实验室检查 年 月 日! 参考实验室最终确认了 型口蹄疫病毒的存在 感染动物是绵羊和山羊 涉及 只易感动物 有 例病例 未出现死亡 销毁 例 感染来源尚不清楚 塞浦路斯采取的控制措施有国内限制移运 筛查 感染房舍 设施消毒 扑杀和区域化 禁止免疫 未对动物进行治疗 塞浦路斯上一次发生口蹄疫是 年 西班牙发生蓝舌病 年 月 日 西班牙向! 报告了蓝舌病疫情 疫情始于 年 月 日 并于 月 日确诊 属于临床病例 依靠实验室检测作出诊断 (!<!=?!( 地区实验室 的! 月 日 和 #7-#3-$-3# #$#$"#.3 国家实验室 的 = 月 日 结果均为阳性 病原是血清 型蓝舌病病毒 疫区位于巴斯克地区 =( 的一个农场 感染动物是绵羊 涉及 只易感羊 有 例病例 死亡 例 未予销毁和宰杀 感染来源尚不详 西班牙采取的控制措施有国内限制移运 区域化和控制节肢动物 未禁止免疫 也未对患病动物进行治疗 摘译自! 网站

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