胃肠病学 205 年第 20 卷第 9 期 529 研究组织器官老化的特点和规律对于阐明老年病的发病机制和指导合理诊治具有重要意义 诸多研究表明, 衰老对胃泌酸功能的影响并不明显, 老年人仍有良好的泌酸功能 [ 5], 少数老年人存在低胃酸症 (ph>3.5), 主要是由慢性萎缩性胃体胃炎或严重幽门

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1 528 ChinJGastroenterol,205,Vol.20,No 9 比格犬胃底腺组织学和超微结构的增龄变化 # 李小雯 & 郑松柏 张晓莉 刘 菲 肖 立 俞 2 彰 复旦大学附属华东医院消化科 2 (200040) 复旦大学上海医学院 背景 : 研究发现老年人胃底腺泌酸功能相关结构无明显退化表现, 但人体标本易受环境因素影响, 因此需采用标准动物以尽量减少环境因素的影响, 对该结果作进一步验证 目的 : 研究比格犬胃底黏膜组织学和胃底腺超微结构的增龄变化 方法 :9 只健康比格犬分为中青年组 (~5 岁,n=8) 低龄老年组 (6~8 岁,n=5) 和高龄老年组 ( 9 岁,n=6), 取胃底组织标本, 光镜下观察胃底黏膜, 测定固有膜厚度 胃底腺体实质占固有膜面积的比率, 计数壁细胞 主细胞和内分泌细胞 ; 电镜下观察胃底腺细胞超微结构, 测定相关细胞器 结果 : 比格犬胃底固有膜厚度随增龄呈降低趋势, 但各年龄组间差异无统计学意义 (P>0.05), 高龄老年组腺体密度明显降低, 间质明显增加 三组间壁细胞数及其线粒体和微管泡系统无明显差异 (P>0.05), 高龄老年组主细胞数及其酶原颗粒 颈黏液细胞黏原颗粒显著减少 (P<0.05), 内分泌细胞数随增龄逐渐增多 (P< 0.05) 结论: 比格犬胃底黏膜与泌酸功能有关的壁细胞及其相应细胞器无明显增龄相关退化表现, 分泌组胺 胃泌素 生长抑素等以刺激胃酸分泌的内分泌细胞数量明显增多, 这可能是老年胃维持良好泌酸功能的代偿机制 关键词胃底腺 ; 壁细胞, 胃 ; 主细胞, 胃 ; 颈黏液细胞 ; 内分泌细胞 ; 超微结构 EfectofAgingonHistologyandUltrastructureofGastricFundicGlandinBeagleDogs LIXiaowen,ZHENG Songbai,ZHANGXiaoli,LIUFei,XIAOLi,YUZhang 2. DepartmentofGastroenterology,HuadongHospitalAfiliated tofudanuniversity,shanghai(200040); 2 ShanghaiMedicalColegeofFudanUniversity,Shanghai Correspondenceto:ZHENGSongbai, fdhuadong@63.com Background:Ithasbeendemonstratedthatacidsecretion relatedgastricfundicstructuresdonotdegeneratein elderlyindividuals.asspecimensobtainedfrom humanbodyaregreatlyinfluencedbyenvironmentalfactors,theresults needtobefurtherverifiedbystandardanimals.aims:toinvestigatetheaging relatedchangesofhistologyofgastric fundusandultrastructureoffundicglandinbeagledogs.methods:nineteenhealthybeagledogsweredividedintothree agegroups,8inyoungergroup(aged 5years),5injuniorelderlygroup(aged6 8years)and6inseniorelderlygroup (aged 9years).Gastricspecimensobtainedfromthefunduswereexaminedbylightmicroscope,thethicknesoflamina propriaandpercentageofparenchymalareaoffundicglandinlaminapropriaweremeasured,andtheparietalcels,chief celsandendocrinecelswerecounted.ultrastructureoffundicglandcelswereobservedbyelectronmicroscopy,andthe areapercentagesofrelatedorganeleswerecalculated.results:thethicknesoflaminapropriaingastricfundusofbeagle dogsshowedadeclinetendencywithaging,butnosignificantdiferenceswerefoundamongthethreeagegroups(p> 0.05);inseniorelderlygroup,amarkeddecreaseindensityoffundicglandwasobservedandwithanincreaseof interstitialtisues.theamountofparietalcelsandtheareapercentagesofmitochondriaandtubulovesicleinparietalcels showednoaging relatedreduction(p>0.05),whiletheamountofchiefcels,areapercentagesofzymogengranulein chiefcels,andmucousgranuleinmucousneckcelsweresignificantlydecreasedinseniorelderlygroup(p<0.05).the amountofendocrinecelsincreasedgradualywithaging(p<0.05).conclusions:aging relateddegenerationisnot existedinacidsecretion relatedparietalcelsandorganelesingastricfundusofbeagledogs.furthermore,endocrinecels whichsecrethistamine,gastrin,andsomatostatin,etc.forstimulatingacidsecretionevenincreased.thesechangesmight beacompensatorymechanismforacidsecretioninelderlyindividuals. Keywords FundicGland; ParietalCels,Gastric; ChiefCels,Gastric; MucousNeckCels; EndocrineCels; Ultrastructure DOI:0.3969/j.isn 基金项目 : 上海市科委科研计划项目 (2ZR409600) # muziyu3030@26.com & 本文通信作者, fdhuadong@63.com

2 胃肠病学 205 年第 20 卷第 9 期 529 研究组织器官老化的特点和规律对于阐明老年病的发病机制和指导合理诊治具有重要意义 诸多研究表明, 衰老对胃泌酸功能的影响并不明显, 老年人仍有良好的泌酸功能 [ 5], 少数老年人存在低胃酸症 (ph>3.5), 主要是由慢性萎缩性胃体胃炎或严重幽门螺杆菌 (Hp) 感染所致 [6] 应用人胃黏膜标本研究与泌酸功能有关的胃底腺和壁细胞形态学以及 H + K + ATP 酶表达, 亦未见老年人的上述结构有明显退化表现 [4] 然而, 人体标本虽可排除一些明显疾病因素, 但仍易受药物 Hp 感染等环境因素影响, 且标本获取受伦理学限制, 因此需采用标准动物以尽量减少环境因素的影响, 对该结果作进一步验证 实验用比格犬饲养于严格控制的环境中, 无 Hp 感染, 药物等环境因素均可控制, 因此本研究采用标准实验用比格犬, 研究胃底黏膜及其主要功能腺体 胃底腺的组织学和超微结构增龄变化, 以期进一步阐明增龄对胃底黏膜泌酸功能相关结构的影响 材料与方法一 实验动物 9 只国际标准实验用比格犬于 2003 年起陆续饲养于中国科学院上海药物研究所, 犬龄.33~ 0.58 岁, 每月常规进行体检, 血常规 血生化 心电图 脑电图等均在正常范围内 参考 htp://www. maxiebeagle.com/dogage.htm, 将动物分为中青年组 (~5 岁,n=8) 低龄老年组 (6~8 岁,n=5) 和高龄老年组 ( 9 岁,n=6) 二 方法. 标本采集 : 标本获取前 d20 00 后禁食 禁饮, 当日 9 00 麻醉 剖腹 游离胃, 于大弯侧距贲门 6~8cm 处切取胃底组织 2 块 ( 深达黏膜下层 ), 大小 0mm 2mm 2mm, 块用于组织学检查, 另 块用于超微结构检查 2. 光镜标本制作和观察 : 标本置于 4% 甲醛溶液中固定 8h, 梯度乙醇脱水, 石蜡包埋后冷却, 4μm 厚切片,HE 染色, 二甲苯脱蜡, 树脂封片,Zeis AxioScopeA 显微镜下观察胃底黏膜 测量指标 : 低倍视野 ( 00) 下采集图像, 以 i Solution 生物形态学测量分析系统测定固有膜厚度 ( 上皮至黏膜肌层上缘的距离, 每一标本测定 5 个不同部位, 结果 取均值 ) 和胃底腺体实质占固有膜面积的比率 ;2 高倍视野 ( 400) 下采集图像, 随机观察 5 个视野, 计数壁细胞和主细胞, 结果取均值 ;3 2μm 厚石蜡切片嗜银染色, 蒸馏水洗, 常规脱水 透明 封片, 高倍视野 ( 400) 下采集图像, 随机观察 5 个视野, 计数内分泌细胞, 结果取均值 3. 电镜标本制作和观察 : 标本置于 2.5% 戊二醛电镜固定液中 4 固定 2h,50nm 厚切片, 枸橼酸铅和乙酸双氧铀双染色,PHILIPSCM20 透射电镜下观察 每一标本随机取 5 个壁细胞 5 个主细胞和 5 个颈黏液细胞, 以 SigmaScanPro5.0 图像分析软件测定壁细胞细胞质及其胞质内线粒体和微管泡系统面积 ; 主细胞细胞质及其胞质内酶原颗粒面积 ; 颈黏液细胞细胞质及其胞质内黏原颗粒面积, 计算线粒体 微管泡系统 酶原颗粒和黏原颗粒, 结果取均值 三 统计学分析应用 SPSS20.0 统计软件, 计量资料以 x±s 珋表示, 正态分布资料多组间比较采用单因素方差分析, 非正态分布资料多组间比较采用 Kruskal Walis 秩和检验,P<0.05 为差异有统计学意义 结果一 胃底黏膜组织学的增龄变化光镜下各年龄组比格犬胃底腺体形态未见明显差异, 低倍视野下可见固有膜组织, 黏膜表面小凹长度均约为固有膜的 /4, 其下为紧密排列的胃底腺体, 腺体间为少量血管纤维间质, 高龄老年组间质明显增加, 腺体密度明显降低 ( 图 ) 嗜银染色显示内分泌细胞形态多样, 有圆形 柱状 锥体形 烧瓶形等, 可分辨闭合型和开放型, 内分泌颗粒呈棕褐色, 位于细胞基底部 ( 图 2) 固有膜厚度随增龄呈降低趋势, 但各年龄组间差异无统计学意义 (F=2.3,P=0.3), 胃底腺体实质比率随增龄逐渐减低 (F=30.839,P= 0.000); 各年龄组间壁细胞数差异无统计学意义 (F=0.687,P=0.57), 高龄老年组主细胞数显著减少 (F=3.647,P=0.000), 内分泌细胞数随增龄逐渐增多 (F=5.260,P=0.08)( 表 ) 二 胃底腺超微结构的增龄变化电镜观察显示, 比格犬胃底腺壁细胞体积大, 胞

3 Ch i njga s t o e n t e o l Vo l No 质内含有丰富的短杆状线粒体 线粒体嵴细密 核周 基体以及少量滑面内质网 粗面内质网较丰富 位于 可见分泌小管 静止期壁细胞分泌小管表面光滑 微 基部呈小池状 中青年组黏原颗粒致密度较大 老年 管泡系统发达 分泌期壁细胞分泌小管管腔相对狭 组黏原颗粒致密度降低 图 窄 微管泡系统管泡数减少 图 主细胞核周有大 各年龄组间壁细胞线粒体 F 量粗面内质网和发达的高尔基体 胞质内有许多圆形 P 和微管泡系统 F P 酶原颗粒 中青年组酶原颗粒形态较饱满 分布较密 差异无统计学意义 主细胞酶原颗粒面积分 集 高龄老年组酶原颗粒大小不一 分布稀疏 可见部 数 F P 和颈黏液细胞黏原颗粒 分融合现象 图 颈黏液细胞核上区胞质内有大 随增龄逐渐降低 F P 量致密的椭圆形黏原颗粒 核上位可见相当大的高尔 表 A 中青年组 腺体间可见少量纤维结缔组织 B 低龄老年组 腺体间可见中等量纤维结缔组织 C 高龄老年组 腺体间可见大量纤维结缔组织 图 各年龄组比格犬胃底腺 HE染色 A 中青年组 腺体中可见少量棕褐色内分泌细胞 B 低龄老年组 腺体中可见中等量棕褐色内分泌细胞 C 高龄老年组 腺体中可见较多 棕褐色内分泌细胞 图 各年龄组比格犬胃底黏膜嗜银染色 箭头所示为内分泌细胞 表 各年龄组比格犬胃底黏膜组织学参数比较 x 珋±s 组别 例数 固有膜厚度 μm 腺体实质比率 壁细胞数 主细胞数 内分泌细胞数 中青年组 ± ± ± ± ± 低龄老年组 ± ± ± ± ± 高龄老年组 ± ± ± ± ± P值 N 细胞核 M 线粒体 S C 分泌小管 TV 微管泡系统 标尺 μm A 中青年组 分泌期壁细胞 B 低龄老年组 静止期壁细胞 C 高龄老年组 分泌期壁细胞 图 各年龄组比格犬胃底腺壁细胞超微结构

4 胃肠病学 年第 卷第 期 N 细胞核 Zg 酶原颗粒 标尺 μm A 中青年组 主细胞胞质内可见大量酶原颗粒 形态较饱满 分布较密集 B 低龄老年组 主细胞胞质内酶原颗粒减少 形态较规则 C 高 龄老年组 主细胞胞质内酶原颗粒大小不一 分布稀疏 可见部分融合现象 图 各年龄组比格犬胃底腺主细胞超微结构 N 细胞核 Mg 黏原颗粒 标尺 μm 中青年组 颈黏液细胞胞质内有大量致密的椭圆形黏原颗粒 B 低龄老年组 颈黏液细胞胞质内黏原颗粒致密度稍降低 C 高龄老年 A 组 颈黏液细胞胞质内黏原颗粒致密度明显降低 图 各年龄组比格犬胃底腺颈黏液细胞超微结构 表 各年龄组比格犬胃底腺细胞超微结构比较 x 珋±s 组别 例数 壁细胞线粒体 壁细胞微管泡系统 主细胞酶原颗粒 颈黏液细胞黏原 颗粒 中青年组 ± ± ± ± 低龄老年组 ± ± ± ± 高龄老年组 ± ± ± ± P值 解为老化的胃为维持良好泌酸这一重要生理功能 讨 而发生的一种相关组织结构的代偿现象 本研究 论 比格犬胃底腺中的内分泌细胞数量随增龄逐渐增 本研究观察了不同年龄组国际标准实验用比 多 与 Wa ki等 对 大 鼠 胃 标 本 的 研 究 结 果 一 致 格犬的胃底黏膜组织学和胃底腺细胞超微结构 发 胃底腺中壁细胞附近的内分泌细胞如肠嗜铬细胞 现随着年龄的增长 胃底黏膜固有层厚度呈降低趋 G细胞 D细胞等能分泌并释放组胺 胃泌素 生长 势 固有层内胃底腺体实质比率显著减低 腺体密 抑素等以刺激胃酸分泌 支持胃底腺的上述变化是 度下降 间质明显增多 是典型的老化或退化表现 老年胃维持良好泌酸功能的代偿机制 的研究结 主细胞是胃底腺的另一重要功能细胞 通过胞 果类似 此外 本研究发现胃底腺中与泌酸直接相 吐作用分泌胃蛋白酶原 在胃酸作用下激活成为胃 关的壁细胞数量并未随增龄而减少 壁细胞内与泌 蛋白酶而发挥消化作用 本研究发现高龄老年组 酸功能关系密切的线粒体和微管泡系统 比格犬胃底腺中的主细胞数量显著减少 主细胞中 与本课题组前期研究 和 Ta n a ws ki等 甚至有研 的酶原颗粒随增龄逐渐降低 这显然将导 胃底腺壁细 致老年比格犬胃内胃蛋白酶浓度减低 可能是老年 亦无明显变化 与前期研究结果一致 究发现壁细胞数量随增龄而增加 胞此种不随增龄而发生退化的 反常 现象 可以理 人功能性消化不良高发的原因之一

5 532 ChinJGastroenterol,205,Vol.20,No 9 胃底腺中还有一种常见细胞, 即颈黏液细胞, 其不仅能分泌大量黏液, 而且是壁细胞 主细胞和内分泌细胞的干细胞 黏液是构成胃十二指肠黏液 碳酸氢盐屏障的物质基础, 因 HE 染色无法鉴别颈黏液细胞, 故本研究未行颈黏液细胞计数, 但电镜图像分析显示颈黏液细胞中的黏原颗粒随增龄逐渐降低, 这一改变可能会导致老年人胃黏液分泌减少 [5], 削弱黏液 碳酸氢盐屏障, 使胃黏膜对损伤因子的防御功能减弱 综上所述, 本研究发现比格犬胃底黏膜随增龄而出现一系列退化表现, 包括固有膜变薄 胃底腺体实质比率减低 主细胞数量及其酶原颗粒减少 颈黏液细胞中的黏原颗粒减少等, 这些变化将导致胃蛋白酶原分泌减少 胃底黏膜防御 修复机制减退, 但与泌酸功能有关的壁细胞及其相应细胞器无明显退化表现, 分泌组胺 胃泌素 生长抑素等以刺激胃酸分泌的内分泌细胞数量明显增多, 这些变化可能是老年胃维持良好泌酸功能的代偿机制 参考文献 HurwitzA,BradyDA,SchaalSE,etal.Gastricacidityin olderadults[j].jama,997,278(8): NakamuraK,OgoshiK,MakuuchiH.Influenceofaging, gastric mucosalatrophy and dietary habits on gastric secretion[j].hepatogastroenterology,2006,53(70): FeldmanM,CryerB,McArthurKE,etal.Efectsofaging and gastritis on gastric acid and pepsin secretion in humans:aprospectivestudy[j].gastroenterology,996, 0(4): ZhangW,ZhengSB,ZhuangY,etal.H+ /K+ATPase expresioninhumanparietalcelsandgastricacidsecretion inelderlyindividuals[j].jdigdis,203,4(7): 郑松柏, 项平, 徐富星, 等. 空腹胃液量及胃内酸度的增龄变化 [J]. 中华老年医学杂志,2008,27(4): AsakaM,SugiyamaT,NobutaA,etal.Atrophicgastritis andintestinalmetaplasia in Japan: resultsofa large multicenterstudy[j]. Helicobacter, 200, 6 (4): TarnawskiA,PaiR,DengX,etal.Aginggastropathy novelmechanisms:hypoxia,up regulationofmultifunc tionalphosphatasepten,andproapoptoticfactors[j]. Gastroenterology,2007,33(6): FarinatiF,FormentiniS,DelaLiberaG,etal.Changes inparietalandmucouscelmasinthegastricmucosaof normalsubjectswith age: a morphometric study[j]. Gerontology,993,39(3): WakiS,KinoshitaY,WangHY,etal.Efectofagingon gastrin receptorgene expresion in ratstomach[j]. Peptides,998,9(2): ( 收稿 ; 修回 ) 205 年京沪粤鲁罕见病 / 孤儿药学术交流会议暨上海市罕见病 / 孤儿药学术年会通知 简讯 205 年京沪粤鲁罕见病 / 孤儿药学术会议将于 205 年 2 月 4 5 日在上海召开 本次大会由上海市罕见病防治基金会主办, 上海市医学会罕见病专科分会 上海市食品药品安全研究会和上海市药学会药事专业委员会为支持单位 会议分为国家级继续教育项目学习班和大会报告两个部分 2 月 4 日下午举办 罕见病防治学习班, 参加者可获国家级继续医学教育 Ⅰ 类学分 0 分 2 月 5 日举行学术报告会, 邀请京沪粤鲁的专家学者 政策制定部门的相关负责人, 就各自领域的最新研究进展作专题学术报告, 以促进罕见病研究在我国的交流与合作 会议地点 : 上海交通大学医学院附属新华医院科教大楼, 地址 : 上海市杨浦区控江路 665 号 25 号楼一楼 会议费用 : 大会注册和学习班培训免费 参会者交通 食宿费用自理 会议报名 : 拟参会人员请登陆 shhjbjh205.3huiyi.com 报名 会务联系人 : 陈光榆, 电话 : , ; 李珍飞, 电话 : ,

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