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1 第 29 卷第 10 期 N.10V.29 JOURNALOFNEIJIANG NORMALUNIVERSITY 49 黄河裸裂尻鱼垂体显微结构詹素平 1, 王永明 1, 李斌 1, 吴英 2, 谢碧文 1* * (1. 内江师范学院生命科学学院, 四川内江 ;2. 内江市第六中学, 四川内江 64100) 摘要 : 运用组织学组织化学和显微技术对黄河裸裂尻鱼 (Schizpygpsispyzvi) 垂体的组织结构进行了研究. 结果表明 : 黄河裸裂尻鱼垂体为心形, 背腹型垂体, 由神经垂体和腺垂体两部分组成. 腺垂体分为前外侧部 (RPD) 中外侧部 (PPD) 和中间部 (PI). 神经垂体由神经分泌纤维和垂体细胞组成, 垂体细胞分为纤维垂体细胞和颗粒垂体细胞, 神经垂体中微血管发达. 腺垂体可区分 7 种分泌细胞类型, 即位于 RPD 的 ACTH 细胞和 PRL 细胞,PPD 的 GTH 细胞 GH 细胞和 TSH 细胞,PI 的 SL 细胞和 MSH 细胞. 关键词 : 黄河裸裂尻鱼 ; 垂体 ; 显微结构 DOI: /j.cnki /z 中图分类号 :Q 文献标志码 :A 文章编号 : (2014) 引言黄河裸裂尻鱼 (Schizpygpsispyzvi), 隶属鲤形目 (Cypinifmes) 鲤科 (Cypinidae) 裂腹鱼亚科 (Schizthacinae) 裸裂尻鱼属 (Schizpygpsis), 地方名小嘴湟鱼小嘴巴鱼. 分布于高原地区的黄河干支流及其附属水体和柴达木水系, 是一种典型的季节性冷适应鱼类, 在青藏高原淡水生态系统的食物链中具有重要的地位. 对其生长抑制素基因的克隆和表达 [1] 遗传多样性和种群结构 [2], 以及 [3] 消化酶的分布与特性已有报道. 鱼类垂体激素种类繁多, 直接参与鱼类生长体色适应等生命活动的调控, 并调节性腺甲状腺和肾上腺的活动. 本文对黄河裸裂尻鱼垂体的组织结构进行研究, 丰富了鱼类基础生物学繁殖生物学资料, 为人工催产时机的选择奠定基础. 1 材料与方法黄河裸裂尻鱼 9 尾 ( 雌 5, 雄 4), 体长 560~608mm, 体重 1435~1995g,2013 年 4 月下旬采自青海省大通县宝库河. 活体断头开颅摘取垂体,Buin s 液固定, 常规石蜡切片, 切片厚 5μm,H.E 武兆发改良 [4] May 三色法染色. 带 Mticam2506 数码成像系统的 MticSMZ-168 型数码显微镜观察拍照, MticImagesPus2.0 显微图像分析软件测量, MicsftExce2003 软件分析数据,AdbePhtshpCS4 软件处理图片. 2 结果 2.1 黄河裸裂尻鱼垂体的解剖结构黄河裸裂尻鱼垂体位于间脑腹面, 视交叉后腹面正中线上, 嵌在蝶骨的凹窝里, 通过垂体柄与下丘脑相连, 是心形的实心腺体. 分为神经垂体 (neuhypphysis,nh) 和腺垂体 (adenhypphysis, AH) 两部分. 矢状切面上, 神经垂体位于垂体中央, 有神经分支伸入腺垂体各部. 腺垂体分前外侧部 (stapasdistais,rpd) 中外侧部 (pxima pasdistais,ppd) 和垂体中间部 (pasintemedia, PI) 三部分,RPD 位于垂体背部外侧,PPD 位于垂体收稿日期 : 基金项目 : 内江师范学院校级科研重点项目 (13ZA02) 作者简介 : 詹素平 (1991-), 女, 四川达州人, 内江师范学院 2010 级学生. * 通讯作者 : 谢碧文 (1968-), 女, 四川资中人, 内江师范学院教授, 博士. 研究方向 : 渔业生物学.

2 50 第 29 卷第 10 期背部 RPD 的下方和垂体腹面前部,PI 占据垂体腹面后部的大片区域. 正中矢状切面上神经垂体 RPD PPD 和 PI 面积分别约占切面面积的 14% 11% 36% 和 39% ( 图版 Ⅰ-1).RPD PPD 和 PI 分界明显,RPD 中神经垂体分支较发达, 细胞排列呈索状,PPD 中神经分支不发达, 细胞排列紧密,PI 中神经垂体分支十分发达, 细胞被神经分支分隔成小岛状细胞群 ( 图版 Ⅰ-2). 2.2 神经垂体的组织结构神经垂体由来自下丘脑的神经分泌纤维和其间的垂体细胞组成. 神经分泌纤维 H.E 染色呈蓝色和浅紫色, 武兆发改良 May 三色法染色呈蓝色. 与神经分泌纤维相伴的垂体细胞有两种类型, 即纤维垂体细胞和颗粒垂体细胞. 纤维垂体细胞纺锤形, 长径为 (14.77±2.18) μ m, 短径为 (2.67±1.55) μ m, 核梭形, 长径为 (7.0±0.85) μ m, 短径为 (2.62±0.44) μ m; 颗粒垂体细胞圆形或椭圆形, 直径为 (6.51±1.03) μm, 核圆形或椭圆形, 核径 (3.80±0.54μm); 垂体细胞 H.E 染色呈蓝色, 武兆发改良 May 三色法染色呈浅红色, 细胞内无明显分泌颗粒. 神经垂体中有丰富的微血管分布 ( 图版 Ⅰ-1,3). 2.3 腺垂体的组织结构前外侧部 (RPD) RPD 由多数嗜酸性细胞和少量嗜碱性细胞组成. 嗜碱性细胞与神经分泌纤维邻近,H.E 染色细胞质蓝紫色, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质蓝色, 细胞椭圆形或不规则形, 长径 (9.79±1.42) μ m, 短径 (6.55±0.93) μ m, 核圆形或椭圆形, 核径 (4.05±0.56) μ m, 可能为促肾上腺皮质激素 (adenctictpichmne,acth) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ-4,5). 嗜酸性细胞 H.E 染色细胞质呈浅红色, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质呈深红色, 细胞椭圆形或不规则形, 长径 (10.63±1.34) μ m, 短径 (6.57±0.77) μ m, 核圆形或椭圆形, 核径 (4.15±0.61) μm, 可能为催乳素 (pactin,prl) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ-4,5).RPD 的神经分支间和细胞群间微血管丰富 ( 图版 Ⅰ-4) 中外侧部 (PPD) PPD 中神经垂体的分支少, 细胞排列紧密, 与 RPD 和 PI 易于区分.PPD 由一种嗜酸性细胞两种嗜碱性细胞和少数嫌色细胞组成.PPD 中微血管亦十分丰富 ( 图版 Ⅰ-6). 嗜碱性细胞 H.E 染色细胞质紫色, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质蓝色. 根据其细胞大小和染色深浅的不同分为两种类型. 一类嗜碱性细胞大, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质呈深蓝色, 细胞核浅红色 ; 细胞圆形椭圆形或不规则形, 长径 (17.13±2.46) μ m, 短径 (9.26±1.32) μ m, 核圆形或椭圆形, 核径 (3.75±0.55) μm, 核仁鲜红色, 核 / 质小, 细胞核位于细胞的一侧边缘 ; 该类细胞在 PPD 中成团分布, 是 PPD 的主要细胞类群 ; 少数该类型细胞边缘因激素分泌颗粒的释放而留下空泡 ; 可能为促性腺激素 (gnadtpins,gth) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ-6). 另一类嗜碱性细胞小, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质呈浅蓝色, 核浅红色, 细胞圆形椭圆形或不规则形, 长径 (9.69±1.57) μ m, 短径 (6.28±0.86) μ m, 核圆形或椭圆形, 核径 (3.81±0.35) μ m, 核仁鲜红色, 核 / 质大, 细胞核位于细胞的中央或稍偏位 ; 在 PPD 中该类细胞亦常聚集成团, 并与 GTH 细胞团相间分布, 该类细胞可能为促甲状腺激素 (thyidstimuating hmne,tsh) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ-6). 嗜酸性细胞 H.E 染色细胞质浅红色, 武兆发改良 May 三色法细胞质紫红色, 核浅红色 ; 细胞圆形椭圆形或不规则形, 直径 (8.54±1.57) μ m, 细胞核圆形或椭圆形, 核径 3.65±0.64μm, 核偏位 ; 嗜酸性细胞呈索状分布于 PPD 中神经分支的周围, 或呈团状索状弥散状与嗜碱性细胞与嗜碱细胞相间分布 ; 该类细胞可能为生长激素 (gwthhmne,gh) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ-6) 垂体中间部 (PI) PI 细胞排列疏松, 神经垂体的分支和微血管十分丰富, 神经分支将 PI 中细胞分隔成岛状细胞群. PI 由嗜酸性和嗜碱性两种细胞组成. 嗜酸性细胞数量少, 位于岛状细胞群的外缘, 邻近神经分泌纤维 ; 嗜酸性强,H.E 染色细胞质红色, 核蓝色, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质深红色, 细胞核浅红色 ; 细胞椭圆形或不规则形, 长径 (12.84±1.68) μ m, 短径 (6.77±1.66) μ m, 核圆形, 核径 (4.41±0.89) μ m, 居中或稍偏位 ; 该类细胞可能为生长乳素 (smatactin,sl) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ- 7,8). 嗜碱性细胞是 PI 的主要组成细胞.H.E 染色细胞质浅蓝紫色, 武兆发改良 May 三色法染色细胞质浅紫色, 细胞核浅红色 ; 细胞椭圆形或不规则形, 长径 (9.36±1.55) μ m, 短径为 (5.76±0.83) μm, 核圆形, 核径 (4.46±0.66) μ m, 居中或稍偏位 ; 该类细胞可能为黑色素细胞刺激激素 (mean-

3 2014 年 10 月詹素平, 王永明, 李斌, 等 : 黄河裸裂尻鱼垂体显微结构 51 cytestimuatinghmne,msh) 分泌细胞 ( 图版 Ⅰ-7,8). 3 讨论 3.1 黄河裸裂尻鱼垂体类型硬骨鱼类的垂体形状不一, 按其形态构造可分 [5] 成前后型和背腹型两种类型. 在前后型垂体中, 神经垂体占据腺垂体后区背面, 呈扁平状并占据 1/2 腺垂体的背部位置, 其分支可伸入腺体每一部分, 如乌鳢 (Ophicephausagus) [6]. 背腹型垂体其神经垂体一般形成中央轴而腺垂体围绕在此轴周围, 且神经垂体具有发达的漏斗柄, 垂体外部形态呈心形或卵圆形, 腺垂体 3 个部分按照背腹方向依次相连接, 如驼背鲈 (Cmieptesativeis) [7] 条斑星鲽 (Veaspemsei) [8] 和大鳍鳠 (Mystusmacpteus) [9]. 黄河裸裂尻鱼垂体具有发达的由神经分泌纤维组成的垂体柄, 神经垂体形成垂体的中央轴, 腺垂体围绕在神经垂体的周围, 神经垂体的分支伸入腺垂体各部分, 属于背腹型垂体. 3.2 黄河裸裂尻鱼垂体激素分泌细胞的类型与分布鱼类垂体由促肾上腺皮质激素 (ACTH) 分泌细胞催乳素 (PRL) 分泌细胞生长激素 (GH) 分泌细胞黄体生成素 (uteinizinghmne,lh) 分泌细胞卵泡刺激素 (Fice-stimuating hmne, FSH) 分泌细胞促甲状腺激素 (TSH) 分泌细胞生长乳素 (SL) 分泌细胞和黑色素细胞刺激激素 [10] (MSH) 分泌细胞组成. 黄河裸裂尻鱼 RPD 的嗜碱细胞位于前外侧部与神经垂体交界处, 武兆发改良 May 三色法染成蓝紫色, 嗜酸性细胞遍布 RPD 各处, 武兆发改良 May 三色法染成浅红色, 分别与南方鲇 (Siuus meidinais) 垂体 RPD 的 ACTH 阳性细胞和 PRL 阳性细胞的形态染色性质和位置一致, 因此认为黄河裸裂尻鱼 RPD 的嗜碱性细胞为 ACTH 细胞, 嗜酸性细胞为 PRL 细胞. 黄河裸裂尻鱼垂体 PPD 中嗜酸性细胞与稀有鮈鲫 (Gbicypisaus) [12] GH 阳性细胞一样, 成团分散在 PPD, 武兆发改良 May 三色法染成红色, 故认为黄河裸裂尻鱼 PPD 中嗜酸性细胞为 GH 细胞. 但与稀有鮈鲫 GH 细胞在 RPD 中亦有少量分布不同, 黄河裸裂尻 GH 细胞仅分布于 PPD. 黄河裸裂尻鱼垂体 PPD 中两种嗜碱性细胞的分布与染色性质与牙鲆 (Paaichthysivcaceus) [13] 垂体 PPD 中两种嗜碱性细胞相似, 牙鲆 PPD 中小型嗜碱性细胞与 TSH 抗体发生特异性免疫组化反应, 为 TSH 细胞, 大型嗜碱性细胞繁殖季节因分泌颗粒的释放, 胞质中出现大小不一的空泡, 与 GTH 抗体发生特异性免疫组化反应, 为 GTH 细胞, 因此, 认为黄河裸裂尻鱼垂体 PPD 中小型嗜碱细胞为 TSH 细胞, 大型嗜碱性细胞为 GTH 细胞.GTH 细胞中出现空泡在繁殖季节保安湖鳜鱼 (Sinipecachuatsi) [14] 鲻鱼 (Mugicephaus) [15] 等均有报道. 本研究观察到黄河裸裂尻鱼的部分 GTH 细胞胞质中出现空泡, 可能与 4 月底为黄河裸裂尻鱼的繁殖季节,GTH 细胞分泌 GTH, 促进性腺发育成熟有关. 同时, 也进一步证明 PPD 中该类细胞为 GTH 细胞. 黄河裸裂尻鱼垂体 PI 中嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的分布染色性质分别与南方鲇 PI 中 SL 阿黑皮素原 (ppimeanctin, POMC) 阳性细胞相似.POMC 是 ACTH MSH 等动物脑和垂体中多种活性肽类的共同前体,MSH 在垂体 PI 的 POMC 阳性细胞中选择性表达. 因此, 认为黄河裸裂尻鱼垂体 PI 中嗜酸性细胞为 SL 细胞, 嗜碱性细胞为 MSH 细胞. 同时, 这两种细胞也与石鲽 (Kaeiusbicatus) [16] 大眼鳜 (Sinipecaknei) [17] PI 中 SL 细胞和 MSH 细胞分布相同. 综上所述, 黄河裸裂尻鱼腺垂体共有 ACTH 细胞 PRL 细胞 GH 细胞 GTH 细胞 TSH 细胞 SL 细胞 MSH 细胞 7 种细胞类型, 而 GTH 细胞是否分为 LH 细胞和 FSH 细胞还有待免疫组织化学或原位杂交进一步确定. 参考文献 : [1] 晁燕, 赵兰英, 李长忠, 等. 黄河裸裂尻鱼肌肉生长抑制素基因克隆及表达分析 [J]. 动物学研究,2012,33(5): [2]QiDL,GuSC,ZhaXQ,eta1.Geneticdivesityand histicappuatinstuctuefschizpygpsispyzvi (Teestei:Cypinidae)intheQinghai-TibetanPateau [J]. FeshwateBigy,2007,52(6): [3] 蒋涛, 申志新, 王国杰, 等. 黄河裸裂尻鱼消化道与肝胰脏淀粉酶的分布与特性研究 [J], 安徽农业科学,2011, 39(19): [4] 杜卓民. 实用组织学技术 [M].2 版. 北京 : 人民卫生出版社,1998:101. [5] 楼允东. 组织胚胎学 [M].2 版. 北京 : 中国农业出版社,1996:139. [6] 曾敏超, 辜清, 吴娣, 等. 乌鳢草鱼鲫鱼垂体的组织学和体视学观察 [J]. 南昌大学学报 ( 理科版 ),2008,32

4 52 第 29 卷第 10 期 (3): ,273. [7] 王静香, 李加儿, 区又君, 等. 驼背鲈垂体显微和超微结构的观察 [J]. 中国水产科学,2011,18(5): [8] 倪娜, 柳学周, 徐永江, 等. 雌性条斑星鲽垂体组织学观察 [J]. 热带海洋学报,2012,31(6): [9] 赵芙蓉, 王芳, 张叶萍, 等. 性成熟大鳍鳠垂体的组织结构 [J].,2010,25(2): [10] 魏华, 吴垠. 鱼类生理学 [M].2 版. 北京 : 中国农业出版社,2011: 谢碧文. 南方鲇 POMC TSHβ 亚基和 SLcDNA 克隆及垂体激素基因的时空表达 [D]. 重庆 : 西南大学, [12] 刘小红, 张耀光, 谢碧文, 等. 稀有鮈鲫表达 8 种垂体激素基因的细胞在垂体中的定位 [J]. 水生生物学报, 2011,35 (6): [13] 宋海霞, 温海深, 翁幼竹. 养殖牙鲆垂体的显微和超微结构观察 [J]. 台湾海峡,2007,26(3): [14] 汪小东, 严安生, 秦玉丽, 等. 保安湖鳜鱼垂体周年变化的组织学观察 [J]. 华中农业大学学报,1996,15(5): [15] 翁幼竹, 林君卓, 洪万树, 等. 鲻鱼垂体组织生理学的研究 [J]. 台湾海峡,2000,19(2): [16] 温海深, 高玲. 石鲽垂体组织生理学研究 [J]. 海洋水产研究,2007,28(5):1-6. [17] 谢碧文, 黄琪, 蒲德永, 等. 大眼鳜垂体组织学和组织化学研究 [J]. 安徽农业科学,2009,37(22): MicstuctueObsevatinfPituitayGandin Schizpygpsispyzvi ZHANSu-ping 1,WANGYnḡming 1,LIBin 2,WUYing 2,XIEBi-wen 1 (1.CegefLifeScience,NeijiangNmaUnivesity,Neijiang,Sichuan641199,China; 2.NeijiangN.6 MiddeSch,Neijiang,Sichuan641000,China) Abstact: ThemicstuctuefthepituitaygandfSchizpygpsispyzviwasstudiedbymeansfhistgy,histchemistyandmicscpytechniques.Theesutshwsthat:thepituitayfSchizpygpsispyzviisheaṯshapedand bengstthetypefdsaḻventa.itiscmpsedfneuhypphysisandadenhypphysis,fwhichtheateisdividediṉ tstapasdistais(rpd),pximapasdistais (PPD)andpasintemedia (PI).Theneuhypphysis,cmpsedf neusecetyfibesandpituitayces,hasanadvancedsystem fmicvesses.theganuecescnsistftwkindsf ces:fibeandpaticepituicyte.theadenhypphysiscandistinguish7typesfsecetyces,whichincudepactin (PRL)cesandadenctictpichmne(ATCH)cesfundinstapasdistais(RPD),thegwthhmne(GH) ces,gnadtpin (GTH)cesandthyidstimuatinghmne(TSH)cesfundinpxmiapasdistais(PPD),andmeḻ ancytestmiuatinghmne(msh)cesandsmatactin (SL)cesfundinpasintemedia(PI). Keywds: Schizpygpsispyzvi ;pituitaygand;micstuctue ( 责任编辑 : 胡蓉 )

5 2014 年 10 月詹素平,王永明,李图版 Ⅰ 斌,等:黄河裸裂尻鱼垂体显微结构黄河裸裂尻鱼垂体显微结构图版及说明: 1. 垂体正中矢状切面,示神经垂体 ( NH) 前外侧部 ( RPD) 中外侧部 ( PPD) 中间部( PI)和微血管( )(武兆发改良 Ma 2.垂体矢状切面,示前外侧部 ( RPD) y 三色法); 中外侧部( PPD) 中间部( PI)(H.E 染色); 3.神经垂体,示纤维垂体细胞( 1)颗粒垂体细胞细胞( 2)和微血管( 3)(H.E 染色); 4.前外侧部,示微血管 ( 1)ACTH 细胞 ( 2)和 PRL 细胞 ( 3) (武兆发改良 Ma 5.前外侧部,示 ACTH 细胞( 1) PRL 细胞( 2)(H.E 染色); 6. y 三色法); 中外侧部,示 GH 细胞( 1) TSH 细胞( 2)微血管( 3)和 GTH 细胞( 4)(武兆发改良 Ma y 三色法); 7.中间部,示 SL 细胞( 1)MSH 细胞( 2)(武兆发改良 Ma 8.中间部,示 SL y 三色法); 细胞( 1)MSH 细胞( 2)(H.E 染色) 53

方展强等罗非鱼脑垂体结构研究期结腺垂体前叶的超微结构果脑垂体的般结构性成熟的尼罗非卿脑垂体呈鸡心形实心腺体图版和腺垂体两部分构成和脑垂体细胞维叶形成树根状结构分布到

方展强等罗非鱼脑垂体结构研究期结腺垂体前叶的超微结构果脑垂体的般结构性成熟的尼罗非卿脑垂体呈鸡心形实心腺体图版和腺垂体两部分构成和脑垂体细胞维叶形成树根状结构分布到方展强等罗非鱼脑垂体结构研究期结腺垂体前叶的超微结构果脑垂体的般结构性成熟的尼罗非卿脑垂体呈鸡心形实心腺体图版和腺垂体两部分构成和脑垂体细胞维叶形成树根状结构分布到腺垂体各腺垂体由前叶由神经垂体神经垂体由不同类型的神经分