238 激光生物学报第 26 卷 0 引言 植物油是由不饱和脂肪酸和甘油化合而成的化合物, 主要成分是直链高级脂肪酸和甘油生成的酯, 含有维生素 E K 钙 铁 磷 钾等矿物质, 有助于维持人体内元素平衡 但食用植物油经过多次高温加热后会发生过热氧化现象, 植物油中的不饱和脂肪酸和维生素具有氧化不稳

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1 第 26 卷第 3 期 2017 年 6 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.26No.3 Jun.2017 doi: /j.isn 联合荧光光谱与寿命法检测多次高温加热油 陶建峰, 陈明惠, 田甜, 王成, 郑刚 ( 上海理工大学医学光学与视光学研究所, 教育部微创医疗器械工程中心, 上海 ) 摘要 : 三维荧光光谱法检测多次高温加热植物油, 该方法能快速 准确的获得待测样品的三维荧光光谱特征图, 但只是定性的分析 当荧光强度变化较小的时候, 容易出现误检 漏检的情况 先用三维荧光光谱技术分析植物油样品的光谱信息, 然后再通过荧光寿命法, 计算多次高温加热植物油中荧光光子的寿命, 通过与未加热油荧光寿命的对比, 检测多次高温加热植物油 二者联合, 进一步提高了检测的准确度, 有利于解决误检 漏检的问题, 从而为高温加热油的检测提供有力的参考 关键词 : 三维荧光光谱 ; 荧光寿命 ; 高温加热植物油中图分类号 :O433.4;O657.3 文献标识码 :A 文章编号 : (2017) DetectingMultipleTimesHeatedVegetableOilUsingThreeDimensional FluorescenceSpectroscopyandFluorescenceLifetimeAnalysis TAOJianfeng,CHENMinghui,TIANtian,WANGCheng,ZHENGGang (ShanghaiInstituteforMinimalyInvasiveTherapy,InstituteforMedicalOpticsandOptometry, UniversityofShanghaiforScienceandTechnology,Shanghai200093) Abstract:Vegetableoilheatedrepeatedlyatahightemperaturewasdetectedwiththree dimensionalfluorescencespec tra.themethodcanobtainthethree dimensionalfluorescencespectrumofthesamplequicklyandaccurately.however, itisjustaqualitativeanalysis.whenthefluorescenceintensitychangesalitle,itmayleadtoincorectormisingdis crimination.thespectralinformationofvegetableoilsampleswasanalyzedwiththree dimensionalfluorescencespectra, andthenlifetimeofthephotonsinitwascalculatedwithfluorescencelifetimeanalysis,itcouldbeidentifiedwhetherthe oilwasheatedrepeatedlyathightemperaturewiththefluorescencelifetimeofdiferentoilsamples.thecombinationof thetwomethodsimprovesthedetectionaccuracy,soitcanhelptosolvetheproblemsoffalsedetection,andmisingde tection,soastoprovideastrongreferenceforthedetectionofvegetableoilheatedatahightemperature. Keywords:threedimensionalfluorescence;fluorescencelife;heatedvegetableoil 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金 ( ); 上海市自然科学基金 (13ZR ); 上海市科委产学研医项目 ( 项目编号 15DZ ) 作者简介 : 陶建峰 (1990-), 男, 安徽宿州人, 硕士研究生, 主要从事生物医学光子学方面的研究 ( 电子邮箱 )tao jianfeng1314@sina.com 通讯作者 : 陈明惠 (1981-), 女, 福建漳州人, 硕士生导师, 主要从事生物医学光子学方面的研究 ( 电子邮箱 ) mchen@ust.edu.cn

2 238 激光生物学报第 26 卷 0 引言 植物油是由不饱和脂肪酸和甘油化合而成的化合物, 主要成分是直链高级脂肪酸和甘油生成的酯, 含有维生素 E K 钙 铁 磷 钾等矿物质, 有助于维持人体内元素平衡 但食用植物油经过多次高温加热后会发生过热氧化现象, 植物油中的不饱和脂肪酸和维生素具有氧化不稳定性 经过多次高温加热, 植物油中发生一系列化学反应 : 氧化作用 聚合作用 异构化作用 环化作用和水解反应等 而这些反应会破坏植物油中的不饱和脂肪酸和维生素等 不仅降低食用油的营养价值, 甚至可能产生致癌物质, 严重威胁消费者的身体健康 [1 3] 一些不法商贩为了减少成本, 将煎炸食物的植物油反复高温加热, 损害消费者健康 因此, 找到检测多次高温加热植物油且方便 快捷 绿色的方法具有十分重要的意义 目前国内外用荧光分析法和荧光寿命法对多次 [4] 高温加热植物油的检测研究工作不多, 赵守敬等利用同步荧光光谱法和 LED 固定波长激发的发射荧光光谱法研究五种植物油加热氧化规律, 发现随着加热时间的延长, 食用植物油的同步荧光光谱和荧光光谱都呈规律性变化, 加热后的分子同步荧光光谱在 430~490nm 波长区域都产生了新的荧光峰, 实验表明荧光分析法可作为研究食用植物油加热氧化过程的一种手段 [5] 黄秀丽等利用分子荧光光谱法, 对特级初榨橄榄油 芝麻油 花生油等 8 种植物油脂进行同步和三维荧光扫描, 发现特级初榨橄榄油的同步特征峰为 676nm; 芝麻油的同步特征峰为 525nm 和 676 nm; 花生油 葵花籽油 玉米油 大豆油和菜籽油的二维同步荧光图谱相似, 荧光强度存在差异, 同步特征峰为 370~468nm 并且结合同步荧光图谱和三维荧光图谱, 可以鉴别不同种类的植物油 实验首先通过稳态荧光光谱仪扫描了多次高温加热葵花籽油和未经加热葵花籽油的三维荧光光谱数据, 导入 Origin8.0 绘制三维荧光光谱, 通过荧光强度的变化检测多次高温加热植物油 然后通过瞬态荧光光谱仪扫描葵花籽油在不同加热状态下的时间分辨荧光光谱, 将数据导入 Origin8.0 分析, 并计算出其中荧光光子的荧光寿命, 通过荧光寿命的变化检测多次高温加热植物油 荧光光谱分析方法具有反映样品信息全面 良好的重现性 取样量少等优 点 [6], 但荧光光谱分析方法只是定性的分析, 当荧光强度变化较小的时候, 容易出现误检 漏检的情况 而荧光寿命分析法通过计算高温加热植物油中荧光光子的寿命, 并与未加热油的荧光寿命的对比来检测高温加热油, 属于定量分析, 检测结果更准确 [7 9], 将二者联合起来, 提高了实验的可信度, 使检测工作更加精确可靠, 从而为高温加热油的检测提供有力的参考 1 实验材料及方法三维荧光光谱是指荧光强度 (fluorescenceinten sity), 激发波长 (excitationwavelength,ex) 的荧光发射波长 (emisionwavelength,em) 的三个维度, 主要反映了荧光强度随激发波长和发射波长的变化而变化, 三维荧光所含信息内容丰富, 并具有良好的选择性和高灵敏度 [10,11] 植物油经过高温重复加热后, 三维荧光光谱会发生一定的变化, 其荧光强度或者特征峰位置可能会改变, 可以根据光谱信息的变化来检测多次高温加热植物油 植物油中能产生荧光的物质主要为维生素 E 叶绿素和其它不饱和脂肪酸基团, 这些物质的分子通过激发光激发后, 分子吸收能量跃迁状态不同, 激发光停止照射后, 电子从第一电子激发态跃迁到基态的时间不同, 即荧光寿命不同 通过 origin8.0 软件拟合实验得到的数据并计算多次高温加热植物油和未经加热植物油的荧光寿命, 以此为依据检测出多次高温加热植物油 荧光寿命测量法采用时间相关单光子计数法对样品数据进行采集, 它的基本原理是 : 用一个持续时间尽可能短的光脉冲来激发待测样品, 在满足单光子计数条件下, 在某一瞬时发射的光子在某一时间间隔内作为第一个光子到达检测器的几率正比于该瞬时光子发射强度 重复多次测量就可以得到荧光强度衰变曲线, 由此可计算出荧光寿命 [12] 1.1 样品制备实验将待检测的样品分为四组 :1 未加热植物油 ;295 高温循环加热 10 次植物油 ;395 高温循环加热 20 次植物油 ;495 高温循环加热 30 次植物油, 重复这样的实验 加热方法为 :95 加热 10min, 然后快速降至 20 冷却 5min, 继续再快速升至 95 加热 10min,20 冷却 5min, 按照此规律循环加热 10 次 20 次 30 次, 每一次循环需要 15min 左右, 即 95 持续加热 10min, 然后快速降至 20

3 第 3 期 陶建峰等 : 联合荧光光谱与寿命法检测多次高温加热油 239 并保持 5min, 循环加热由 PCR 扩增仪控制 1.2 实验仪器荧光光谱的检测采用 QuantMaster40 稳态荧光光谱仪及其配套软件 荧光寿命测量用 PhotonTech nologyinternational 光子技术国际公司提供的瞬态荧光光谱仪 TimeMaster3 该仪器对荧光寿命测量系统采用了先进的闪频分时测量技术和非线性时标据采集技术, 具有测量速度快 精度高 灵敏度高 实用方便 配制灵活等优点, 是目前测量速度最快 最先进的荧光寿命测量系统 该系统能够探测 7pM 荧光素的寿命, 最短测量寿命可达 100ps 实验参数设定 :QuantMaster40 荧光光谱仪, 激发波长范围为 310~420nm, 发射波长范围为 315~ 580nm, 激发狭缝为 1.6nm, 和发射狭缝为 2.0nm, 步长为 1nm, 扫描速率为 1200nm/min 瞬态荧光光谱仪 : 多次高温加热植物油 : 激发波长 337nm, 发射波长 380nm 未经加热植物油: 激发波长 337nm, 发射波长 430nm 系列复杂的化学反应, 氧化作用 聚合作用等, 使植物油中的荧光物质维生素等遭到破坏, 产生了荧光淬灭作用 图 1 未经加热植物油三维荧光光谱 Fig.1 Three dimensionalfluorescencespectraofun heatedvegetableoilsamples 2 数据处理与分析 2.1 数据处理用 QuantMaster40 荧光光谱仪检测四种不同加热状态的植物油, 激发波长范围为 310~420nm, 发射波长范围为 315~580nm, 参数设定好后将植物油样品放入荧光分光光度计检测, 并将得到的检测数据导入 Origin8.0 中转换成矩阵, 由矩阵数据绘制三维荧光光谱图 将三组不同加热状态的植物油放入设置好参数的瞬态荧光光谱仪中检测, 将检测数据导入 Origin 8.0 中进行数据处理, 绘制所有样品的荧光衰减曲线, 并在 Origin 中根据原始数据计算出每组植物油样品的荧光寿命 2.2 数据结果分析三维荧光光谱法图 1 为未经加热植物油的三维荧光光谱, 在激发波长为 355nm, 发射波长为 365nm 处荧光强度最强 图中只有一个荧光峰, 激发和发射波长均在 300 ~370nm 之间, 主要是维生素 E 的特征峰 图 2 为 95 条件下循环加热 10 次植物油样品的三维荧光光谱, 该植物油样品最大荧光峰出现在激发波长 357m, 发射波长 369nm 处 荧光峰的荧光强度相比于未加热植物油的荧光强度下降了 5% 这是因为加热的过程中, 植物油中的物质发生了一 图 2 95 高温加热 10 次植物油样品三维荧光光谱 Fig.2 Three dimensionalfluorescencespectraofvege tableoilsamplesheated10timesat95 图 3 为 95 循环加热 20 次葵花籽油三维荧光荧光光谱, 图中荧光峰位置出现在激发波长 357nm, 发射波长 369nm 处, 与未加热油样品荧光峰的位置相比较, 激发波长红移 2nm, 发射波长红移 4nm, 位置变化不大, 说明本实验条件下的循环加热没有改变植物油中的主要荧光物质 荧光强度相比于未加热植物油的荧光强度下降了 16%, 说明随着循环加热次数的增加, 植物油中的荧光物质还在减少

4 240 激光生物学报第 26 卷 次数的增加, 植物油样品荧光峰的荧光强度依次下降 图中没有新的荧光峰产生, 说明在本实验条件下的循环加热过程中, 植油没有产生新的荧光物质, 只有荧光强度的下降 由此通过三维荧光光谱的对比可以检测多次高温加热植物油 图 3 95 高温加热 20 次植物油样品三维荧光光谱 Fig.3 Three dimensionalfluorescencespectraofvege tableoilsamplesheated20timesat95 图 4 为 95 加热 30 次葵花籽油三维荧光荧光光谱, 图中荧光峰出现在激发波长 359nm, 发射波长 370nm 处, 荧光峰位置相比于未加热植物油, 激发波长红移 4nm, 发射波长红移 5nm 荧光强度相比未加热植物油的荧光强度下降了 27% 随着循环加热 图 4 95 加热 30 次植物油样品三维荧光光谱 Fig.4 Three dimensionalfluorescencespectraofveg etableoilsamplesheated30timesat95 表 1 荧光峰位置及相对荧光强度 Tab.1 Fluorescencepeakpositionandrelativefluorescenceintensity Ex/nm Em/nm 相对荧光强度 一 二 平均 一 二 平均 一 二 平均 未加热 归一化 归一化 归一化 加热 10 次 下降了 5% 下降了 14% 下降了 10% 加热 20 次 下降了 16% 下降了 18% 下降了 17% 加热 30 次 下降了 27% 下降了 23% 下降了 25% 表 1 列出了四组样品荧光峰位置及相对荧光强度信息, 设未加热样品的荧光强度为 1, 其他样品与未加热植物油样品荧光强度对比下降的百分比 相比于未加热植物油的特征峰, 加热 10 次 20 次 30 次样品荧光特征峰的激发波长平均红移了 2nm 2 nm 4nm, 发射波长平均红移了 4nm 4nm 5nm, 荧光峰位置基本没有变化 随着加热次数的增加, 四组样品 Λ 特征峰的荧光强度依次下降, 相比于未加热植物油平均下降了 10% 17% 25% 而其荧光特征峰对应的激发和发射波长只有较小幅度的红移, 原因可能是加热的温度不够高, 没有达到煎炸食物的温度 荧光强度的下降是因为多次加热破坏了植物油中的荧光物质维生素 E 等, 使植物油中的维生素 E 等发生了分解和氧化作用, 逐渐生成非刚性平面结构的物质, 其荧光很弱甚至不发荧光 ; 随着循环加热次数的增加, 此类物质逐渐增多, 导致荧光峰逐渐减弱 而荧光峰的位置基本没有变, 也没产生新的荧光峰, 说明 95 条件下的单纯加热没有改变植物油中的主要的荧光物质, 也没有产生新的荧光物质 荧光寿命法实验数据处理结果共分为 4 组, 如图 5 8 所示 : 在激发 337nm, 发射 430nm 条件下的未加热葵花籽油样品的时间分辨荧光光谱及拟合结果如图 5 采

5 第 3 期 陶建峰等 : 联合荧光光谱与寿命法检测多次高温加热油 241 公式 (1) 可得 :τ=2.62ns 图 5 未加热植物油样品时间分辨光谱和拟合结果 Fig.5 Timeresolvedspectroscopyandfitingresultof unheatedvegetableoilsample 用二指数衰减法拟合所获得的时间分辨荧光光谱数据, 拟合优度 R 2 为 0.989, 接近 1, 说明拟合结果良好 根据式 (1) 可以计算出荧光衰减物质的平均荧光寿命 τ (τ)= A 1 T2 +A 1 2 T2 2 (1) A 1 T 1 +A 2 T 2 从拟合方程中分别得到 A 1,A 2 和 t 1 分别代入公式 (1) 可得 :τ=3.75ns 图 7 加热 20 次植物油时间分辨光谱和拟合结果 Fig.7 Timeresolvedspectroscopyandfitingresultof vegetableoilsampleheatedfor20times 在激发 337nm, 发射 380nm 条件下的 95 循环加热 20 次葵花籽油样品的时间分辨荧光光谱及拟合结果如图 7 采用二指数衰减法拟合所获得的时间分辨荧光光谱数据, 拟合优度 R 2 为 0.986, 接近 1, 说明拟合效果良好 从拟合方程中分别得到 A 1, A 2, 和 t 1 分别代入公式 (1) 可得 :τ=2.64ns 图 6 加热 10 次植物油时间分辨光谱和拟合结果 Fig.6 Timeresolvedspectroscopyandfitingresultof vegetableoilsampleheatedfor10times 在激发 337nm, 发射 380nm 条件下的 95 循环加热 10 次葵花籽油样品的时间分辨荧光光谱及拟合结果如图 6 采用二指数衰减法拟合所获得的时间分辨荧光光谱数据, 拟合优度 R 2 为 0.993, 接近 1, 说明拟合效果良好 从拟合方程中分别得到 A 1,A 2 和 t 1 分别代入 图 8 加热 30 次植物油样品时间分辨光谱和拟合结果 Fig.8 Timeresolvedspectroscopyandfitingresultof vegetableoilsampleheatedfor30times 在激发 337nm, 发射 380nm 条件下的 95 循环加热 30 次葵花籽油样品的时间分辨荧光光谱及拟合结果如图 8 采用二指数衰减法拟合所获得的时间分辨荧光光谱数据, 拟合优度 R 2 为 0.993, 接近 1, 说明拟合结果良好

6 242 激光生物学报第 26 卷 从拟合方程中分别得到 A 1,A 2 和 t 1 分别代入公式 (1) 可得 :τ=2.98ns 实验数据分析 将以上四组样品的荧光寿命输出进行处理后, 四组样品经过三次的重复试验, 测得的平均寿命的结果整理成表格如表 2 所示 表 2 平均寿命计算结果 Tab.2 Thecalculationresultsoftheaveragelife Ex337nm/Em380nm 拟合优度 R 2 一 二 平均 一 二 未加热 3.75±0.02ns 3.13±0.02ns 3.44±0.02ns 加热 10 次 2.61±0.02ns 2.76±0.02ns 2.69±0.02ns 加热 20 次 2.64±0.02ns 2.66±0.02ns 2.65±0.02ns 加热 30 次 2.98±0.02ns 2.64±0.02ns 2.81±0.02ns 表 2 中, 所有样品的拟合优度 R 2 均在 0.98 左右, 说明拟合结果良好 从计算得出的荧光寿命结果可以看出, 未加热植物油的荧光寿命均大于 3ns, 而加热过的植物油样品的荧光寿命均低于 3ns, 大部分在 2.7ns 左右,95 循环加热过的植物油样品的荧光寿命均明显低于未加热植物油样品 其中, 加热 10 次和加热 20 次植物油样品的荧光寿命相差不多, 实验一中加热 30 次植物油样品的荧光寿命略大于加热 10 次和 20 次样品, 可能是由实验温度不够高或者实验中的误差造成的 实验结果表明多次高温加热以后, 植物油的荧光寿命会减小, 而加热 10 次 20 次 30 次植物油的荧光寿命不易区分 后续的工作是提高加热植物油的温度, 使其达到煎炸食物的温度, 重复同样的实验 荧光寿命法的灵敏度和准确度都高于荧光光谱法, 所需样品量较少, 在荧光强度变化不明显的情况下荧光寿命法的测试结果比三维荧光光谱法准确可靠 3 结论实验联合了两种方法检测多次高温加热植物油, 先用三维荧光光谱法检测 通过多次高温加热植物油与未加热油三维荧光光谱的对比, 检测高温加热植物油 随着加热次数的增多植物油的荧光强度逐渐下降 然后再通过荧光寿命法, 检测植物油样品中荧光光子的寿命, 通过高温加热前后荧光寿命的对比检测高温加热油 得出多次高温加热后植物油的荧光寿命缩短的结论 三维荧光光谱法直观全面地反映了高温加热前后植物油样品荧光强度的变化, 数据处理也相对简单, 对于加热前后荧光强度变化较大的植物油来说 是一种可靠的选择 但如果荧光强度变化不大, 则可能会出现误检 漏检的情况 荧光寿命法定量的分析高温加热前后植物油样品荧光寿命的变化, 精确度较高, 测试结果准确可靠 两种方法联合起来使高温加热植物油的检测结果更加准确可靠, 减少了漏检 误检的情况, 为多次高温加热植物油的检测工作提供了有力的参考 参考文献 [1] 冯山山, 王多娇, 孙昕祈, 等. 常规加热和微波加热对两种植物油维生素 E 含量的影响 [J]. 食品安全质量检测学报, 2013,4(2): FENGShanshan,WANGDuojiao,SUNXinqi,etal.Efectsof conventionalheatingandmicrowaveonthecontentofvitamine intwovegetableoils[j].journaloffoodsafetyandquality, 2013,4(2): [2] 张虹, 高霞. 高温加热对植物油脂品质的影响 [J]. 食品科技,1998,2(6):8 12. ZHANGHong,GAOXia.Greatheatingefectsonthequalityof plantoils[j].foodscienceandtechnology,1998,2(6): [3] 丁志群, 王金霞, 赵洪霞, 等. 基于三维荧光光谱技术的食用油快速分析研究 [J]. 光子学报,2015,44(6):1 4. DINGZhiqun,WANGJinxia,ZHAOHongxia,etal.Rapidana lysingedibleoilusingthreedimensionalfluorescencespectrosco py[j].actalaserbiologysinica,2015,44(6):1 4. [4] 赵守敬, 陈斌, 陆道礼. 基于荧光光谱法的植物油加热氧化规律 [J]. 中国粮油学报,2012,27(3): ZHAOShoujing,CHENBin,LUDaoli,etal.Oxidationregu larityofheatedvegetableoilbasedonfluorescencespectrometry [J].JournaloftheChineseCerealsandOils,2012,27(3): [5] 黄秀丽, 黄飞, 陈嘉聪, 等.8 种食用植物油的荧光光谱分析 [J]. 食品工业科技,2014,35(14):64 66.

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