第 6 期 谢乐芳等 :6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 实验方法根据文献 [20] 适当改进牛津杯法测定 6 种化合物对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性 首先用生理盐水配制 ~ CFU/mL 的 4 种菌的菌悬液, 然后将其混匀到

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1 第 34 卷第 6 期 应用化学 Vol.34Is 年 6 月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY June 种多金属氧酸盐的抑菌作用 a 谢乐芳 邢 a 蕊 王 b 芳 王 a 力 ( a 集美大学食品与生物工程学院福建厦门 ; b 泉州师范学院海洋与食品学院福建泉州 ) 摘要合成了 5 种过渡金属取代的 Keggin 型多金属氧酸盐 (Na 7 PMo 11 M(Ⅱ)O 40 (M=Mn,Fe,Zn,Co,Ni) ( 简写为 PMo 11 M(Ⅱ)), 并通过紫外可见分光光度计和傅里叶变换红外光谱仪对其结构进行了表征 进而运用牛津杯法研究了这 5 种过渡金属取代的 Keggin 型多金属氧酸盐和母体 H 3 PMo 12 O 40 ( 简写为 PMo 12 ) 对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性, 并用微量肉汤二倍稀释法测得了这些 ( 共 6 种 ) 化合物对上述 4 种菌的最小抑菌浓度 (MIC 值 ) 和最小杀菌浓度 (MBC 值 ) 结果表明, 这 6 种化合物对 4 种菌均有不同程度的抑制作用, 并且对 2 种球菌的抑制效果优于对 2 种杆菌的抑制效果 其中 (Na 7 PMo 11 M(Ⅱ)O 40 (M=Ni,Mn,Zn) 对 4 种菌的抑制效果优于其它 3 种化合物 综合考虑, 本研究能够为多金属氧酸盐用于果蔬的防腐保鲜提供更多的理论和实验支持 关键词多金属氧酸盐 ; 抑菌活性 ; 牛津杯法中图分类号 :O614.6 文献标识码 :A 文章编号 : (2017) DOI: /j.isn 随着社会经济的发展, 人们的生活水平不断提高, 对生活的品质越来越重视, 其中很重要一方面就是食品的质量问题 而果蔬由于其含维生素 膳食纤维等人体所需的重要营养元素, 深受大众的欢迎, 成为人们生活中必不可少的一部分 但果蔬采摘后, 由于病原微生物的侵染, 导致其腐败, 不仅影响了果蔬的品质 安全, 更造成了巨大的经济损失 所以果蔬的防腐保鲜问题越来越受重视 [1 2] 多金属氧酸盐 (polyoxometalates,poms), 由于其无可比拟的结构特点, 使其在催化 材料 医药等诸多领域都有巨大的潜在应用价值 [3 5] 在医药应用上, 由于其低毒 低成本等特性 [6 8], 使其作为抑菌剂 抗癌剂和抗病毒剂的应用吸引了许多研究者的关注 [9 12] [9] Liu 等用多金属氧酸盐与钴 加替沙星 (cobalt gatifloxacin) 合成了化合物 [Co Ⅱ (C 19 FH 22 N 3 O 4 ) 3 ][C 19 FH 23 N 3 O 4 ][HSiW 12 O 40 ] 23H 2 O, 研究了其 [13] 对大肠杆菌和葡萄球菌的抑制作用 Daima 等的研究也表明, 多金属氧酸盐与金纳米粒能够协同抑 [14 17] 菌 我们课题组也对多种多金属氧酸盐进行了抑菌活性的研究 为了寻找更多更有效的抑菌剂, 本文研究了 6 种 Keggin 型多酸化合物 (Na 7 PMo 11 M(Ⅱ)O 40 ( 简写为 PMo 11 M,M=Mn,Fe,Zn,Co,Ni); H 3 PMo 12 O 40 简写为 PMo 12 ) 对报道较多的 4 种致病菌 ( 革兰氏阳性菌 : 藤黄八叠球菌 [17] 金黄色葡萄球菌 [9,13 14,17] 枯草芽孢杆菌 [15 17], 革兰氏阴性菌 : 大肠杆菌 [3,9,13 17] ) 的抑制作用, 为多金属氧酸盐用于果蔬的防腐保鲜提供更多的理论和实验支持 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 化合物 PMo 11 M(M=Mn,Fe,Zn,Co,Ni) 根据文献 [18 19] 方法合成, 并用 FT/IR 480 型红外光谱 ( 日本 Jasco 公司 ) 和 Cintra2020 型紫外分光光度计 ( 澳大利亚 GBC 公司 ) 进行表征 硫酸庆大霉素注射液 (4 万单位 /ml) 购于福州海王福药制药有限公司 营养琼脂和 MH 肉汤培养基均为生物试剂, 购于广东环凯微生物科技有限公司 藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌由中国福建省泉州师范学院提供 溴化钾 ( 光谱纯 ) 氯化三苯四氮唑 (MTT, 生物试剂 ) PMo 12 及其它试剂均为分析纯, 购自国药集团化学试剂有限公司 实验过程中所用的水均为二次去离子水 收稿, 修回, 接受国家自然科学基金资助项目 ( , ) 通讯联系人 : 王力, 教授 ;Tel/Fax: ;E mail:wanglimery@jmu.edu.cn; 研究方向 : 多酸化学

2 第 6 期 谢乐芳等 :6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 实验方法根据文献 [20] 适当改进牛津杯法测定 6 种化合物对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性 首先用生理盐水配制 ~ CFU/mL 的 4 种菌的菌悬液, 然后将其混匀到已高压灭菌的营养培养基 (ph7 3±0 1) 中, 摇匀并倒平板 待培养基凝固后放上 7 个内直径为 6mm 的牛津杯, 分别加入不同浓度的抑制剂溶液和阴性对照 ( 无菌水 ) 阳性对照 (10U/mL 硫酸庆大霉素 )200μL, 并作 3 组平行 做好标记, 置于 37 恒温箱中培养 24h 后, 测量抑菌圈直径 根据文献 [21] 方法改进, 用微量肉汤二倍稀释法测定了 6 种化合物对 4 种菌的最小抑菌浓度 (MIC 值 ) 和最小杀菌浓度 (MBC 值 ) 首先, 在已灭菌的 96 孔板中加入 100μL 含 0 5%TTC( 三苯基氯化四氮唑 ) 的 M H 肉汤, 然后在每排的第一孔中加入 100μL 多酸溶液对其进行二倍稀释, 之后吸取 100μL 第一孔混匀的混合液加入到第二孔进行二倍稀释, 依次进行到第 10 孔, 获得等倍稀释梯度的化合物浓度, 并保持等体积 最后在各孔中加入 100μL ~ CFU/mL 的菌悬液 每排设第 11 孔为无菌控制对照, 第 12 孔为细菌生长情况对照 将微孔板于 37 恒温培养 24h 微孔中以培养液显红色判定为有细菌生长, 将不出现红色的最低化合物浓度判定为 MIC 值 取 100μL 不出现红色的培养液, 分别涂布于营养琼脂培养基上, 于 37 下培养 24h, 以不长菌的最低化合物浓度作为 MBC 值 2 结果与讨论 2.1 化合物的结构表征图 1 为 6 种化合物的红外光谱图 从图 1 可以看出, 在 1100~700cm -1 范围内出现 4 个 Keggin 结构的特征峰, 分别对应于 P O a Mo O d Mo O b Mo O c 的振动峰, 与参考文献 [18] 的数据相符 图 2 为 6 种化合物的紫外光谱图,6 种化合物均在 210nm 和 230~240nm 处有吸收峰, 这是典型的 Keggin 型结构多金属氧酸盐的特征峰 [22] 图 1 6 种化合物的红外谱图 Fig.1 IRspectraofsixcompounds 图 2 6 种化合物的紫外谱图 Fig.2 UVspectraofsixcompounds 2.2 化合物的抑菌作用图 3 为 6 种化合物对 4 种菌的抑制效果图 从图 3 可以看出, 基本所有化合物对 4 种菌均有明显的抑制作用, 并且随着化合物浓度的升高, 抑菌圈直径不断增大, 即存在剂量效应 并且同种化合物对两种球菌的抑制效果强于对两种杆菌的抑制效果, 而不同化合物对同一种菌的抑制效果基本没有差别, 这可能与多金属氧酸盐中心原子氧化数有关, 由于中心原子氧化数的多少决定着多酸阴离子所带的电荷数的多少, 影响了其 ph 值, 但由于本文所用到的化合物的中心原子氧化数不变, 多酸阴离子所带电荷相同, 所以对同种菌的抑制效果基本没有差别 表 1 为不同浓度化合物对 4 种菌抑制作用的具体数据 从表 1 可看出,PMo 11 Mn PMo 11 Ni 和 PMo 11 Zn 对 4 种菌的抑制效果强于其它 3 种化合物对 4 种菌的抑制效果, 这 3 种化合物在高浓度 (30g/L) 下的抑菌水平达到了阳性对照的水平, 也能体现出化合物对球菌的抑制效果强于对杆菌的抑制效果 从表中 MIC 值可看出, 除 PMo 11 Mn PMo 11 Ni 和 PMo 11 Zn 对大肠杆菌的 MIC 值为 2 40g/L 外, 均为 1 20g/L;

3 应用化学 7 第3 卷 图 3 6种化合物的抑菌活性 F 3 A m f f x m d A PM B PM C PM D PM E PM PM M F Z C F N C f m d f d 5w 3 5 7 5 3 75 d 87 5 L y w w w U ml f my f f m ① S ② S y ③ B ④ E 而 MBC值除了 PM PM 和 PM PM C值为 L PM PM F N C 对大肠杆菌的 MB M Z 对两种杆菌的 MBC值为 L之外 均为 L 进一步说明 6种化合物对所研究的两种球菌的抑 制效果优于对两种杆菌的抑制效果 特别是对大肠杆菌的抑制效果不够明显 虽然 PM PM M N 和 PM 总体的抑菌效果优于其它 3种化合物 但其对大肠杆菌的 MI C值却大于其它化合物 不仅 Z 说明这些化合物对球菌的抑制效果优于对杆菌的抑制效果 更说明这3种化合物只有达到较高浓度时 才能起到较好的抑菌作用 另外 化合物对 种菌的抑制作用与所选菌种本身的细胞结构也存在一定 的关系 球菌表面无鞭毛等结构 而杆菌有 这可能影响了菌体对化合物的吸收 从而影响了化合物的抑 菌效果 而化合物对大肠杆菌的抑制效果不够理想 这可能还与大肠杆菌属于革兰氏阴性菌有关 革兰 氏阴性菌的细胞壁结构成分复杂 不易破坏 而革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖组成 结构简单易 破坏 这可能是化合物对大肠杆菌抑制效果不理想的另一原因 并且多酸化合物对不同菌的抑制作用 也可能存在选择性 由于多金属氧酸盐与细菌间的作用相当复杂 其抑菌作用机理还有待进一步研究 表 6种化合物的抗菌活性 T A m f x m d B PM M S S y B E C d x C L 87 5 3 75 7 5 5 3 L MI C MBC L

4 第 6 期 谢乐芳等 :6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 703 continuedfrompreviouspage Concentration/(g L -1 ) Bacteria a b MIC/(g L-1 ) MBC/(g L -1 ) PMo 11 Fe Sarcinalutea Bacilussubtilis Escherichiacoli PMo 11 Zn Sarcinalutea Bacilussubtilis Escherichiacoli PMo 11 Co Sarcinalutea Bacilussubtilis Escherichiacoli PMo 12 Sarcinalutea Staphylococusaureus Bacilussubtilis Escherichiacoli PMo 11 Ni Sarcinalutea Bacilussubtilis Escherichiacoli Note.a.Negativecontrolwithsterilewater;b.Positivecontrolwith10U/mLofgentamycinsulfateforbacterium;+++,antimicrobialzoneis above20mmindiameter;++,antimicrobialzoneisbetween12mmand20mm;+,antimicrobialzoneislesthan12mm;-,noinhibition. 3 结论 本文实验结果表明, 磷钼酸母体及其 5 种取代型多金属氧酸盐均对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌有明显的抑制作用, 有望将其应用于食品的防腐保鲜, 甚至作为广谱抗菌剂 参考文献 [1]YANGWeiwei.TheApplicationofPlantEsentialOilinFruitsandVegetablesPreservation[J].AcadPeriodFarmProd Proces,2013,(10):71 72(inChinese). 杨巍巍. 植物精油在果蔬保鲜中的应用 [J]. 农产品加工 : 学刊 ( 下 ),2013,(10): [2]QUANGuijing.StudyonScreeningofAntagonisticBacteriaforApplePostharvestDiseaseandBiocontrolEficacy[J]. NorthernHorticulture,2013,(11): (inChinese). 全桂静. 苹果采后病害拮抗细菌的筛选与防腐效果研究 [J]. 北方园艺,2013,(11): [3]FioraniG,SaoncelaO,KanerP,etal. Chitosan polyoxometalatenanocomposites:synthesis, Characterization and ApplicationasAntimicrobialAgents[J].JClustSci,2014,25(3): [4]GaoL,LuS,SuJ,etal.PreparationandPhotoelectrochemicalPropertiesofanElectrostaticalySelf asembledfilmbased on[bw 11 Zn(H 2 O)O 39 ] 7- andabipolarhemicyanine[j].jnanoscinanotechnol,2013,13(2): [5]MuA,LiJ,ChenW,etal.TheCompositeMaterialBasedonDawson typepolyoxometalateandactivatedcarbonasthe SupercapacitorElectrode[J].InorgChemCommun,2015,55(25): [6]ShigetaS,MoriS,KodamaE,etal.BroadSpectrum Anti RNA VirusActivitiesofTitanium andvanadium Substituted Polyoxotungstates[J].AntiviralRes,2003,58(3): [7]RazaR,MatinA,SarwarS,etal.PolyoxometalatesasPotentandSelectiveInhibitorsofAlkalinePhosphataseswith ProfoundAnticancerandAmoebicidalActivities[J].DaltonTrans,2012,41(47): [8]WitvrouwM,WeigoldH,PannecouqueC,etal.PotentAnti HIV(type1andtype2) ActivityofPolyoxometalates: Structure activityrelationshipandmechanismofaction[j].jmedchem,2000,43(5): [9]LiuH,ZouYL,ZhangL,etal.PolyoxometalateCobaltgatifloxacinComplexwithDNABindingandAntibacterialActivity [J].JCoordChem,2014,67(13): [10]WangJ,LiuY,XuK,etal.Broad Spectrum AntiviralPropertyofPolyoxometalateLocalizedonaCelSurface[J].ACS ApplMaterInterfaces,2014,6(12): [11]FuL,GaoH,YanM,etal.PolyoxometalateBasedOrganicInorganicHybridsasAntitumorDrugs[J].Smal,2015,11 (24): [12]QiY,XiangY,WangJ,etal.InhibitionofHepatitisCVirusInfectionbyPolyoxometalates[J].AntiviralRes,2013,100

5 704 应用化学第 34 卷 (2): [13]DaimaH K,SelvakannanPR,KandjaniA E,etal.SynergisticInfluenceofPolyoxometalateSurfaceCoronaTowards EnhancingtheAntibacterialPerformanceofTyrosine cappedagnanoparticles[j].nanoscale,2014,6(2): [14]WANGLi,WANGFang,CAIHuinong.InhibitoryEfectsofPhosphotungstateAgainstChineseYamPolyphenoloxidaseand SomeMicrobes[J].FoodSci,2009,30(3):51 53(inChinese). 王力, 王芳, 蔡慧农. 磷钨酸盐的抑酶及抗菌作用 [J]. 食品科学,2009,30(3): [15]FENGZhen ge,caihuinong,wang Li,etal.AntibacterialActivityofPolyoxometalatesContainingVanadium[J]. ChineseJApplChem,2010,27(8): (inChinese). 冯珍鸽, 蔡慧农, 王力, 等. 含钒多金属氧酸盐的抑菌活性 [J]. 应用化学,2010,27(8): [16]CHENBingnian,FENGZhen ge,wangli.antibacterialactivitiesofpolyoxometalatescontainingsilicon[j].chem J ChineseUniv,2011,32(5): (inChinese). 陈丙年, 冯珍鸽, 王力. 含硅多金属氧酸盐的抑菌作用 [J]. 高等学校化学学报,2011,32(5): [17]XingR,WangF,DongL,etal.InhibitoryEfectsofNa 7 PMo 11 CuO 40 onmushroomtyrosinaseandmelaninformationand ItsAntimicrobialActivities[J].FoodChem,2016,197: [18]MazariT,MarchalCR,HocineS,etal.OxidationofPropaneoverSubstitutedKegginPhosphomolybdateSalts[J].JNat GasChem,2009,18(3): [19]LapkowskiM,TurekW,BarthM,etal.ChangesinCatalyticPropertiesofSubstitutedandUnsubstitutedHeteropolyacidsin ConductivePolymerMatrix[J].SynthMet,1995,69(1): [20]ZhuYJ,ZhouHT,HuYH,etal.AntityrosinaseandAntimicrobialActivitiesof2 Phenylethanol,2 Phenylacetaldehyde and2 PhenylaceticAcid[J].FoodChem,2011,124(1): [21]FawoleOA,MakungaNP,OparaUL.Antibacterial,AntioxidantandTyrosinase inhibitionactivitiesofpomegranatefruit PeelMethanolicExtract[J].BMCComplemAlternMed,2012,12(1):1 11. [22]PopeM T.HeteropolyandIsopolyOxometalates[M].SpringerVerlag,1983. AntibacterialActivitiesofSixKindsofPolyoxometalates XIELefang a,xingrui a,wangfang b,wangli a ( a ColegeofFoodandBiologicalEnginering,JimeiUniversity,Xiamen,Fujian361021,China; b ColegeofOceanologyandFoodScience,QuanzhouNormalUniversity,Quanzhou,Fujian361000,China) Abstract Inthisstudy,wesynthesisedfivekindsofKeggin typetransitionmetalsubstitutedpolyoxometalates (Na 7 PMo 11 M(Ⅱ)O 40 (M=Mn,Fe,Zn,Co,Ni),abbreviatedasPMo 11 M(Ⅱ)(M=Mn,Fe,Zn,Co,Ni)). ThestructuresofthesecompoundswerecharacterizedbyUV visibleabsorptionspectrumandfouriertransform infraredspectrometer(ftir).andthentheantibacterialactivitiesofthefivekindsofkeggin typetransition metalsubstitutedpolyoxometalates(pmo 11 M(Ⅱ)(M =Mn,Fe,Zn,Co,Ni)andtheirparentH 3 PMo 12 O 40 (abbreviatedpmo 12 ) onsarcinalutea(s.lutea),staphylococusaureus(s.aureus),bacilussubtilis (B.subtilis)andEscherichiacoli(E.coli)wereinvestigatedbyOxfordplate.Also,theminimum inhibitory concentration(mic)andtheminimum bactericidalconcentration(mbc)weretestedbybrothmicrodilution methods.theresultsshowthatthesixkindsofpolyoxometalatescaninhibittheproliferationofthesefour diferentkindsofbacteriatodiferentextents,andtheantimicrobialactivitiesofalcompoundsons.luteaand S.aureusaremoreefectivethan thoseagainstb.subtilisand E.coli. Amongthesecompounds, the antibacterialactivitiesof(pmo 11 M(Ⅱ)(M=Ni,Mn,Zn))weresuperiortotheotherthreecompounds.This studywilprovidemoretheoreticalandexperimentalsupportsforpolyoxometalatesaspreservativeagentsin fruitandvegetables. Keywords polyoxometalates;antibacterialactivities;oxfordplate Received ;Revised ;Accepted SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(No ,No ) Corespondingauthor:WANGLi,profesor;Tel/Fax: ;E mail:wanglimery@jmu.edu.cn;researchinterests:polyoxometalic acidchemistry

第一章 图 1 1 传染病的特征 9 T h1 T h2 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 T N Fα 和 IFNγ 可抑制放线菌的生长而 IL 6 的作用则 反之 IL 1 2 和 GM CSF 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 IL 1ra 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与

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