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1 指导原则编号 :007 水产养殖用药物环境安全性评价 研究技术指导原则 二零一一年五月 I

2 目录 一 概述... 1 ( 一 ) 评价研究目的... 错误! 未定义书签 ( 二 ) 评价研究方法... 错误! 未定义书签 ( 三 ) 适用范围... 1 二 试验设计原则... 1 三 基本内容... 2 ( 一 ) 效应评价... 错误! 未定义书签 1. 危害分析 ( 第一阶段 ) 评价指标的选择 试验设计 结果及评价... 5 ( 二 ) 暴露分析 试验设计 PEC 的确定... 6 ( 三 ) 风险描述... 6 四 其他需考虑的重要问题... 7 ( 一 ) 非生物因子的变化... 7 ( 二 ) 水解作用... 7 ( 三 ) 水体底泥的吸附作用... 7 五 试验报告... 8 II

3 一 概述 ( 一 ) 评价研究目的为了保障水产养殖用药物对水体环境安全及人类消费健康, 加强新兽药的审批管理, 根据农业部第 442 号公告 化学药品注册分类及注册资料要求 兽用消毒剂分类及注册资料要求 等文件的规定, 特制定本指导原则 ( 二 ) 评价研究方式水产养殖用药物对水环境的安全性评价分两个阶段进行 第一阶段应该评估药物及其代谢产物在水环境中暴露的可能性, 对于没有预期的显著暴露或不认为药物对环境具有潜在危害, 则只要对其特征进行描述或对药物在使用时不大可能导致显著的环境暴露进行评价, 不必采取特别预防措施, 也不需进一步的测试 否则, 应进入第二阶段进行评价研究, 初级水平的评价应采用生态毒理学试验说明对几种在生态功能上具重要性的生物可能产生的影响, 其目的是找出效应性质的证据和对产生效应的浓度范围给予初步评价, 研究拟选用藻 蚤 鱼急性毒性试验测试来作为药物对环境安全性评价的指标 根据研究结果, 划分受试药物的风险程度类别, 分别采取不同的预防措施 研究分析方法和风险管理策略 ( 三 ) 适用范围本指导原则适用于水产养殖用药物 ( 除转基因和免疫药物外 ) 对水环境安全性的评价研究, 旨在为水产养殖用药物研究者和药品注册申请人对药物进入水环境中的安全性评价提供技术指导和参考 二 试验设计原则 试验应遵循 兽药临床试验质量管理规范 (GCP) 的规定 试验设计要符合重复 随机 对照的原则 随机, 即按机遇原则进行分组 取样和进行试验 ; 对照可分为空白对照 阴性对照和阳性对照 ; 重复, 即试验结果要有重现性, 要有重复例数和一些重复的具体操作 水产养殖用药物的种类较多, 情况比较复杂, 本指导原则不能涵盖所有水产 1

4 养殖用药物的环境安全性评价研究的全部内容 在进行水产养殖用药环境安全性评价研究时, 应遵循具体问题具体分析的原则, 结合受试药物的自身特点, 充分考虑和结合药学 药理学及其毒理学 ( 急性毒性 慢性毒性 特殊毒性等 ) 及拟临床应用情况等信息, 体现整体性 综合性的原则, 在阐明其研究方法或手段科学 合理的前提下进行规范性试验, 对试验结果应进行全面分析和综合评价, 以达到环境安全性评价研究的目的 三 基本内容 环境安全性评价是以风险评价的基本方法作为评价手段进行的 风险评价是确定某种化学品对人体健康或生态环境产生有害影响可能性的过程, 可以对外源性化学物质 ( 如水产养殖用药物 ) 的安全性给予全面和客观的评价 风险评价的程序主要由四个步骤组成 :1. 危害鉴别 (hazard identification): 确定化学品对人体或其他生物的效应类型 ( 如是否有毒 有害 有致癌 致畸或致突变性等 ), 进行化学品的分类 2. 剂量 - 效应 (dose-response): 确定预期的无作用浓度 (PNEC) 3. 暴露分析 (exposure assessment): 确定暴露途径及暴露剂量 (PEC) 4. 风险描述 (risk characterisation): 综合分析, 确定风险程度 其中 1 和 2 步骤合在一起构成效应评价, 需有实验生物完成的测试数据 ( 一 ) 效应评价 1. 危害分析 ( 第一阶段 ) 满足以下条件的水产养殖用药物只需进行第一阶段评估 : (1) 生理调节剂, 如维生素 电解质和天然氨基酸等 ; (2) 中草药 ; (3) 用于防治观赏性水生动物的药物 ; (4) 用于少量水生动物个体治疗的药物 ; (5) 养殖水体中预测环境浓度 (PEC) 小于 0.1µg/kg 的内服药物 ; (6) 其它不认为对环境具有潜在危害的药物 然而, 如果预计使用这些药物有不利的环境作用, 就不能根据上述条件免检, 而要在第二阶段进一步评估环境暴露的可能性并提出危害控制程序 2

5 2. 评价指标的选择通常选用浮游植物 浮游动物 鱼急性毒性试验 ( 亦可用长期毒性试验 ) 测试来作为养殖水体环境安全性评价的指标, 因为浮游植物 浮游动物 鱼代表构成食物链关系的三个营养级, 同时也代表了水生生态系统对某一水产养殖用药物的反应 3. 试验设计 (1) 受试药物受试药物应与拟上市的制剂完全一致, 有相应的产品质量标准 受试药物应采用一定规模生产的一个批次样品, 产品处方 制备工艺 设备应与最终生产条件一致, 并在 GMP 车间生产 受试药物需注明其名称 生产厂家 生产批号 含量 ( 或规格 ) 保存条件及配制方法等, 并提供农业部认定的检验机构出具的产品检验合格报告 所用辅料 溶媒等都应注明批号 规格和生产厂家, 并符合试验要求 (2) 环境条件浮游植物 浮游动物的急性毒性试验在烧杯或口径较大的玻璃容器内进行, 鱼 ( 或底栖动物 甲壳动物 ) 的急性毒性试验在试验水池内进行 每个试验水体应能保持环境稳定 不受外界环境突然变化或污染影响, 相对独立 试验水体必须能满足水产动物的生理要求, 试验水产动物密度应控制在不影响其正常生理活动范围内 试验用水应符合 GB 渔业水质标准 要求, 自来水应曝气 48h 以上, 天然水应自然沉淀 24h 再过滤后使用 一般应在以下规定的条件下进行试验 : 水产动物 水温 ( ) 温水性 淡水种类 冷水性 溶解氧 (mg/l) ph 盐度 ( ) 海水种类 温水性 冷水性 必要时可采取充气 换水 控温等措施以满足受试动物必要的正常生 3

6 长条件, 试验期间应按要求定期测定并记录水温 ph 溶氧或盐度( 海水 ) 等参数 (3) 试验生物 1 试验生物的种属及品系选取的试验水生生物应尽可能具有代表性 浮游植物 浮游动物分别选取水体中量最多 且作用最重要的种类 ; 鱼类选取一种淡水鱼和 ( 或 ) 一种海水鱼 ; 必要时, 可把底栖动物 甲壳类 微生物作为评价指标生物之一 环境安全评价常用代表生物种类如下 : 浮游植物 : 小球藻 (Chlorella Vulgaris); 斜生栅藻 (Scenedesmus obliquus) 浮游动物 : 大型蚤 (Daphnia magna Straus); 蚤状溞 (Daphnia pulex Leydig); 隆线溞 (Daphnia Carinata King) 底栖动物 : 圆田螺 (Cipangopaludina); 无齿蚌 (Anodonta) 菲律宾蛤 (Ruditapes philippinarum) 三角帆蚌(Hyriopsis cumingii) 淡水鱼 : 鲢 (Hypophthalmichthys molitrix) 鲤(Cyprinus carpio) 斑马鱼 (Brachydanio rerio); 剑尾鱼 (Xiphophorus helleri) 海水鱼 : 大比目鱼 (Hippoglossoides platessoides) 牙鲆 (Paralichthys olivaceus) 甲壳类 : 青虾 (Macrobrachium nipponense) 糠虾(opossum shrimp) 微生物 : 细菌总数 2 试验生物质量的控制试验浮游植物 浮游动物要求在适宜的培养基内培养并传代若干次, 保持同步生长期 试验鱼 底栖动物 甲壳类一般要求健康无损伤, 摄食正常, 个体大小均匀, 相差不超过 20% 3 试验动物的性别及数量动物数应当符合统计学要求和最低动物学要求 一次试验中的每个试验组, 蚤 鱼不少于 30 只 ( 尾 ) 试验鱼一般要求雌 雄各半, 对残留影响不大的, 雌雄均有, 但不一定要求各半 在试验前应在室内环境暂养 7d~10d, 以适应环境 (4) 试验方法包括试验分组 给药途径 给药剂量 给药时间 观察时间和观察指标等 4

7 用于安全性评价的急性毒性试验一般均为浸泡或者其他体外给药途径, 在正式试验前, 首先用少量水生生物做预备试验, 确定受试生物的全部致死的最小剂量和全部不致死的最大剂量, 正式试验一般分为 5~7 个剂量组, 组间剂量呈等比级数 试验开始后连续观察和记录各组受试浮游植物 浮游动物 鱼的一般健康状况 中毒表现和死亡过程, 必要时对受试浮游生物进行镜检, 对水产动物进行剖检, 观察时间一般为 7d 具体要求参见 GB/T , 化学品藻类生长抑制试验 ;GB/T , 水质物质对蚤类 ( 大型蚤 ) 急性毒性测定方法 ;GB/T 13267, 水质物质对淡水鱼 ( 斑马鱼 ) 急性毒性测定方法 微生物安全性评价试验方法参见 水产养殖用消毒剂药效试验研究技术指导原则 中 养殖水体现场消毒试验, 试验设一个受试药物组和一个空白对照组, 给药浓度为受试药物在养殖水体中可能存在的最大环境浓度 (PEC) 4. 结果及评价 (1) 危害鉴定结果根据 24h 48h 72h 和 96h 观察数据, 计算急性毒性试验 LD 50 或 / 和 ED 50 LD 50 : 半数致死浓度, 引起受试对象 50% 个体死亡的药物浓度 ;ED 50 : 半数效应浓度, 引起受试对象 50% 个体产生一种特定效应的药物剂量 (2)PNEC 的确定作出剂量 - 效应回归曲线 剂量 - 效应研究是确定水产动物用药物对水体中生物的无影响浓度, 即安全浓度 (PNEC) 一般选用急性毒性试验的 LD 50 或 / 和 ED 50 ( 或者长期毒性试验的无可见效应浓度 (NOEC)), 通过水产动物用药物对单一水生生物的实验室数据外推确定水产动物用药对多物种的生态系统的 PNEC 推荐外推公式 :PNEC=48hLD (48hLD 50 /24hLD 50 ) ( 二 ) 暴露分析暴露分析是分析水产养殖用药物 ( 主要是口服和注射药 ) 在被分析生态环境中的暴露情况, 以该药物的环境浓度 (PEC) 表示 PEC 可以通过检测获得 1. 试验设计 5

8 (1) 受试药物 ( 参见相应药物的田间药效试验指导原则 ) (2) 给药方案 1 给药途径应与拟临床给药途径一致, 如不采用拟临床途径给药, 必须充分说明理由 经口给药时应禁食 2 给药剂量按照推荐剂量最高限给药 3 给药时间及频率根据推荐给药时间及频率进行 (3) 靶动物靶动物品质 数目等要求 ( 参见相应药物的田间药效试验指导原则 ) 靶动物的作用主要是在评价注射 口服等体内给药途径的水产养殖用药物的环境安全性时, 以便于测定并评价其代谢和排泄物对环境的影响 (4) 环境条件参照相应药物的田间药效试验指导原则要求 (5) 收集样品分若干个时间点 ( 不少于 5 个 ), 从试验水池中收集至少 4 个水样 要求从水池中不同位置收集 (6) 建立检测方法, 检测药物及主要代谢物浓度 2.PEC 的确定一般以试验水体中实际检测浓度为基础进行评价, 并根据 最坏情况 原则, 选取浓度最高的药物浓度作为暴露分析的 PEC ( 三 ) 风险描述在进行了效应评价和暴露分析后, 用 PEC/PNEC 的商值来评价该水产养殖用药物在水环境中的安全性, 称为风险描述或风险表征 风险表征有以下两种情况 : 1PEC/PNEC 的值不超过 1, 说明该药物对环境危害性较小, 目前不需要进一步的研究及新的风险降低措施 2PEC/PNEC 的值大于 1, 则应根据实际情况判断是否该药物需进行进一步 6

9 的研究和采取相关措施以降低风险 如对水生物种的其他急性毒性 慢性毒性研究, 对底栖生物 甲壳类的毒性研究, 对水体微生物变化规律的研究, 对 ( 有毒化学物质 ) 生物体内积累研究 经研究, 若受试药物没有或低环境风险, 不必采取特别预防措施 若怀疑受试药物有中度到高度的环境风险, 有必要进行深入研究, 进行利害关系分析后认为对环境危害较小, 可以接受, 需采取适当的风险管理策略减少使用该药物造成的危害 ; 对环境的潜在危害不可接受, 潜在风险不能通过一定措施改善, 进行风险管理, 完成评价 四 其他需考虑的重要问题 ( 一 ) 非生物因子的变化风险评价主要针对的是生物因子改变的问题 水产养殖用药物使用后, 也会引起水体非生物因子即理化因子的变化, 包括温度 溶氧 ph 无机物( 如 N O 2-N,NH 3 -N 等 ) 重金属等 水产养殖用药物环境安全性评价中非生物方面, 评价方法主要是比较用药前后, 水体理化因子的变化及其程度 若用药后理化因子没有发生变化, 或变化程度在安全范围内, 则其安全性较好 ; 若用药后理化因子发生较大变化, 如溶氧急剧降低 重金属含量过大等等, 则须考虑该渔药的环境安全性问题, 并采取相应措施 水体理化因子安全范围参考 GB 渔业水质标准 要求 ( 二 ) 水解作用水产养殖用药物进入水体后, 在水体物理 化学及微生物因子的作用下水解, 其水解速率通常用水解半衰期表示 水体是水产养殖用药物在环境中的主要储藏地和集散地, 它对整个水体中的药物残留状况有制约作用 若受试药物的水解速度较快, 在较短的时间内就可以完全水解, 对水体环境不构成危害 若受试药物的水解速度过慢, 则容易在水体生态系统中富集 ( 三 ) 水体底泥的吸附作用水体底泥的吸附作用对水产药物的移动性影响较大, 一些水溶性低, 分配系数大, 以及一些带正电荷的离子型药物, 在底泥中的吸附能力很强, 被底泥吸附 7

10 的药物, 不仅移动性能减弱, 而且其生物活性与水解性能都有降低现象 五 试验报告 为公正 科学地评价药物的临床疗效, 对试验报告内容做如下要求 : 1. 试验目的 ; 2. 试验时间与地点 ; 3. 试验设计者 负责人 参加者及联系电话 电子邮箱 ; 4. 受试药物需注明兽药名称 生产厂家 生产批号 含量 ( 或规格 ) 等 ; 5. 试验生物的种属及品系 质量控制 数量等 ; 6. 环境条件 试验分组 给药方案 观察时间 观察指标 数据处理 安全浓度的确定等 ; 7. 环境浓度 (PEC) 的测定 风险分析 ; 8. 参考文献 ; 9. 试验数据应有详细的试验原始记录, 原始资料应归档保存, 并注明保存地点 联系人及联系电话 10. 试验单位 ( 加盖公章 ) 8

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