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奋英戴
7 years ago
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1 中国中西医结合杂志年月第卷第期! 甘草次酸对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞内质网的影响杨贵军席克虎陈小婉桂岩王有虎张福宏马春霞洪浩刘翔毅马毅江英董明张小兵摘要目的探讨! 甘草次酸.*//01* *% 对变应性鼻炎 /.* /01 模型大鼠鼻黏膜上皮细胞内质网变化的影响方法 $" 只 1/ 大鼠随机分为空白组模型组氯雷他定组甘草次酸组每组 # 只腹腔注射卵清蛋白致敏建立大鼠模型评定动物形态学评分造模后给予甘草次酸 ".-. 灌胃干预后第 #" 周取鼻黏膜组织送电镜检查结果空白组叠加评分 # 分氯雷他定组为 " 分模型组为 " 分甘草次酸组为! 分各组分别与空白组比较差异有统计学意义 2 3 透射电镜见模型组内质网较空白组增多明显囊样扩张大量空泡形成脱颗粒胞质内可见大量的游离核糖体在变应原持续作用下模型组鼻黏膜上皮细胞内质网的上述变化呈进行性加重而甘草次酸干预组内质网扩张空泡化脱颗粒均较模型组缓解并随观察周期延长逐渐接近空白对照组结论! 甘草次酸可改善变应性鼻炎模型大鼠鼻黏膜上皮细胞内质网的扩张空泡化及脱颗粒关键词! 甘草次酸上皮细胞内质网变应性鼻炎 44*1 4!%*//01* * 10 5* 1* /.* % % : 9; % 7 % 7606 ': % :, % : 9. 7 % 7. +, %. ': % 9. +5/11 4,1/.. : * &6/./ /1 : </ /11 4,1/.. : * &6/./ 441 :51 %6. 4 /1 0 * 06 0 =&,8*1< 5/ 10 44*1 4!.*//01* * % 10 5* /1* * /.* /01 / $" 1/ /1 ;/ / < 1 10./65 10./65 10 /1./65 10 %./65 # *0./65 ;/ 10 5/1 8*1. <6, /50.* * /. ; 5/4/ % 1 ".-. ; 1/.1/* 1/ 1 /1 10 %./65 6* 16 ;/ 1 4/ *1/ */*5* * 46/ ; 41/ /6. 1/< </55. */ ; # 10./65 " 10 /1./65 " 10./65! 10 %./65 0;. 111* 44/* ;0 *5/ ;10 10./ / 1/ *1/ */*5 0; / * /1*66 */ 10./65 ;10 <6 *1* <*6 4/1./61 /. 6/ 4 4/ / *6 * /11 /. 56/ *0. 1 < ; 5/./<../<1 10 5* /1*66 4 6* /65 = * /1*66 <*6 4/1./61 ;/ /< 10 基金项目国家自然科学基金资助项目!"##$ 甘肃省卫生厅行业科技计划项目 %&& " 甘肃省中医药科学技术研究课题 %' 作者单位兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科兰州甘肃中医学院附属医院耳鼻咽喉头颈科兰州通讯作者张小兵 $!"$"$#())* +, ""-!

2 中国中西医结合杂志年月第卷第期 %./65.1 * /65 *6!% *6 5/< 10 5 <*61./ * /1* * /1 7,+&!.*//01* * 510 * 5* /1*66 /.* /01 变应性鼻炎是由. 介导的鼻黏膜的变态反应性疾病发病机制属于型超敏反应与细胞因子细胞间黏附分子及部分神经肽密切相关其过程涉及 = 等淋巴细胞的激活及白介素肿瘤坏死因子等细胞因子的合成及相关炎症介质的释放与线粒体一样内质网被认为在细胞生命活动中起着中枢性的作用其形态结构变化反映着细胞的功能变化甘草次酸是甘草提取物甘草甜素的代谢产物现有研究表明其具有免疫调节抗炎及类激素样作用本研究通过! 甘草次酸灌胃变应性鼻炎模型大鼠透射电镜观察不同时间点大鼠鼻黏膜上皮细胞内质网的形态变化客观反应其对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞内质网的影响材料与方法动物 &2 级 1/ 大鼠 $" 只 # > " 周龄雌雄各半体重! >. 甘肃中医学院 &2 级动物实验室提供注册号 &9 甘甘肃中医学院 &2 级动物实验室饲养试剂与仪器卵清蛋白 <6,.- 瓶级美国 &. 公司批号 ##$ 氢氧化铝,:.- 瓶级天津市致远化学试剂有限公司氯雷他定.- 片四川奥邦药业有限公司生产批号 $ 甘草次酸.- 袋级甘肃泛植生物科技有限公司生产批号!" 透射电镜型日本电子株式会社广州事务所分组及模型的建立采用随机数字表法将 $" 只 1/ 大鼠分成空白组氯雷他定组甘草次酸组模型组 # 组每组各 # 只造模方法参照参考文献将., 和.,: 加生理盐水配成混悬液模型组氯雷他定组和甘草次酸组大鼠行腹腔注射基础致敏空白组以等量生理盐水替代隔日次进行次共 # 天自第天开始鼻腔激发?, 滴鼻 - 侧侧鼻腔空白组以等量生理盐水替代每日次共天末次鼻腔激发后每只动物观察其鼻部喷嚏流涕表现和挠鼻动作的出现时间及严重程度计数 0 内喷 # 嚏及挠鼻次数根据动物形态学评分标准评分鼻痒轻度轻擦鼻数次为分重度抓挠鼻面不止动作快而反复为分喷嚏个为分 # 个为分个以上为分清涕流至前鼻孔为分超过前鼻孔为分流涕满面为分叠加量化评分超过分者视为造模成功 # 药物干预按照体表面积法计算给药剂量给予灌胃本实验中所用大鼠的平均体重为. 计算可得大鼠的体表面积约为氯雷他定组参照氯雷他定胶囊计算得出大鼠的氯雷他定给药量为 $.-. 灌胃每日次甘草次酸组给予甘草酸苷片计算得出给药量为 ".-. 灌胃每日次空白组模型组给予等剂量的 $? 的氯化钠溶液灌胃每周称量各组大鼠体重并以各组大鼠体重的平均值为标准计算给药量动物体表面积转换计算公式如下人的给药量.- 大鼠的体重. 大鼠的体表面积大鼠鼻黏膜电镜观察各组动物均在治疗 #" 周末次给药 # 0 后给予? 水合氯醛 -. 腹腔注射麻醉剪毛打开胸腔心脏放血后立即以 #? 多聚甲醛快速心脏灌注断头迅速打开鼻背取双侧鼻中隔黏膜每组随机选只大鼠取鼻黏膜做电镜双侧鼻中隔黏膜用 2=& 漂洗后放入? 戊二醛溶液 # 固定 # 0 制备透射电镜标本透射电镜标本经? 戊二醛固定? 锇酸固定丙酮脱水和浸透包埋光镜下定位后 # 超薄切片型透射电镜观察 " 统计学方法应用 &2&& $ 软件包进行统计分析计量资料用表示组间比较采用单因素方差分析检验 2 3 为差异有统计学意义结果各组大鼠一般情况比较模型组氯雷他定组和甘草次酸组每只大鼠均出现明显外鼻红肿反复抓鼻喷嚏和流涕症状空白组叠加评分 # 分氯雷他定组为 " 分模型组为 " 分甘草次酸组为! 分各组分别与空白组比较差异有统计学意义 2 3

3 !!# $ (! 中国中西医结合杂志!"#$ 年 $ 月第 %$ 卷第 $ 期 &'()*+"+,-!"#$"./01 %$" 2/!$! $各组鼻黏膜电镜结果比较 $ 图 # % $ 空白组! 周时粗( 滑面内质网数量无明显增多" 无扩张" 无脱颗粒&5 (4 (#" 周分别较! 周时内质网无明显变化' LN 模型组维持激发! 周时内质网数量较空白组增多" 可网较空白组明显增多" 明显扩张" 大量囊样扩张" 有空泡形成"大量脱颗粒' 5 周时内质网较! 周时减少"较空白组增多"轻度扩张"! 周时的空泡消失" 囊样扩张( 见囊样扩张"空泡形成及脱颗粒"胞质内可见游离核糖脱颗粒缓解' 4 周后内质网扩张程度较 5 周及! 周时缓解"少量囊样扩张" 无明显脱颗粒' #" 周时内质网体&维持激发 5 (4 (#" 周内质网的囊样扩张( 空泡形成与空白组相比数量无明显增多(轻度扩张(无空泡形成及脱颗粒程度呈进行性加重"#" 周时可见内质网数量及脱颗粒' 较空白组明显增多" 大量囊样扩张( 空泡形成" 胞质内讨$$论可见大量游离核糖体' 氯雷他定组干预! 周时内质网数量较空白组增多" 明显囊样扩张" 较多空泡形成" 大甘草为多年生草本植物"是一味重要的中药"在临量脱颗粒&5 周时内质网数量较! 周时减少" 仍较空白床应用已有两千年的历史' 中药医学认为具有补脾益组多"扩张程度较! 周时缓解" 轻度囊样扩张" 无明显气 (清热解毒 ( 润肺止咳 ( 缓急止痛 ( 调和诸药之功空泡化"少量脱颗粒&4 周时内质网数量较空白组仅略能 )4* "用于脾胃虚弱( 倦怠乏力( 心悸气短( 咳嗽痰多( 有增多"囊样扩张较 5 周时明显改善" 脱颗粒现象消脘腹及四肢挛急疼痛(痈肿疮毒"并可缓解药物毒性和失' #" 周时内质网与空白组比较已无明显增多( 扩张"无空泡化及脱颗粒' 甘草次酸组干预! 周时内质烈性 );* "内质网是由蛋白质与脂类构成的细胞内最大的膜网络系统"附有的多种酶"为生命活动的各种化学 $$注#L 为空白组&a 为 LN 模型组&& 为氯雷他定组&C 为甘草次酸组&# b 5 分别表示治疗!(5(4(#" 周&L# 放大倍数 $ """"L!( L%(a#(a! 及 &% 放大倍数 #" """" L5(a%(a5(&#(&!(&5(C# b C5 放大倍数为!" """&红三角所示为正常内质网形态结构&蓝三角所示为囊样扩张的内质网&黄三角所示为空泡样内质网&黄箭头所示为游离核糖体图 #$各实验组不同时间点内质网变化图

4 中国中西医结合杂志年月第卷第期反应的正常进行创造有利条件内质网和线粒体共同调控细胞 A 紊乱在细胞凋亡信号通路等方面起着中枢作用! 内质网形态功能的正常对于细胞组织的正常功能具有重要意义其形态变化主要包括数量的增多扩张脱颗粒等.1 : $ 报道在过敏性鼻炎患者鼻黏膜细胞内可见内质网扩张囊泡样变化吉晓宾等报道电镜下豚鼠模型内质网扩张可见小泡形成本实验中模型组氯雷他定组及甘草次酸组电镜下均可见内质网囊样扩张小泡形成明显脱颗粒与先前报道的模型内质网变化相符关于引起内质网扩张小泡形成及脱颗粒的原因目前认识尚未统一李源等认为过程中各化学介质和胆碱能神经活动增强导致腺体的分泌功能增强从而表现为内质网数量的增多 =/8 等认为炎性介质介导内质网应激及神经肽分泌增强造成血管通透性增强鼻黏膜细胞胞质增多细胞器水肿从而出现内质网的扩张小泡形成及脱颗粒等通过对离体的肝癌细胞的研究认为内质网应激可表现为内质网的扩张本实验中随着持续的过敏原维持激发模型组内质网扩张及脱颗粒程度逐渐加重是特异性个体接触致敏原后导致包含. 介导的与 = 等淋巴细胞的激活白介素肿瘤坏死因子等细胞因子的合成及相关炎症介质的释放密切相关的鼻腔慢性炎症性疾病疾病过程中由于分泌功能旺盛相关蛋白等物质的合成增强从而在超微结构上表现出内质网的扩张小泡形成等 # 然而已有实验证明甘草次酸具有抑制炎症介质细胞质因子的释放增加巨噬细胞等非特异性免疫 # 的能力的作用如 70; 等甘草甜素可选择性地增强辅助淋巴细胞的增殖能力和活性抑制细胞毒性细胞对肝细胞的损害 50 等报道给小鼠腹腔注射甘草酸能显著抑制迟发性超敏 " 反应 16 & 等报道甘草酸和其衍生物有降低炎症活化因子! 和嗜酸细胞活化趋化因子的作用 =1 等报道甘草的提取物可抑制 2& 诱导的巨噬细胞产生 "! 和及炎性细胞因子分泌大鼠给予甘草次酸干预后 #" 周鼻黏膜上皮细胞电镜结果示内质网扩张及脱颗粒程度较模型组明显减轻且在不同时间点上显示随着干预时间的延长内质网的形态与结构接近于空白对照组但略逊于氯雷他定组内质网的这种形态学的改变可能与甘草次酸通过抑制相关炎性介质的活性缓解过程中的炎性反应减少腺体的分泌减轻细胞水肿有关本实验通过观察变应性鼻炎大鼠模型及! 甘草次酸灌胃变应性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞内质网超微结构在时间和空间上的变化过程了解内质网这个细胞内决定细胞代谢的重要结构对变应性鼻炎病理反应的影响同时发现! 甘草次酸可改善变应性鼻炎模型大鼠鼻黏膜细胞内质网的扩张空泡化及脱颗粒为进一步探讨! 甘草次酸对过敏性鼻炎抗炎抗水肿抗变态反应作用途径和机制奠定了基础参考文献 =6)61 &*0 : & = 1 /.* /01 1 5*1 10 *0<1 / 4616/ /. 6 #$ " 张明发沈雅琴甘草酸及其衍生物的抗炎和抗变态反应研究进展现代药物与临床 " $ "# 赵字 < :1 吴港生等卵自蛋白经鼻致敏建立变应性鼻炎动物模型中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 # "! # 赵秀杰董震杨占泉等鼻超敏反应实验模型的建立中华耳鼻咽喉科杂志 $$!! 徐平主编实验动物管理与使用操作技术规程上海上海科学技术出版社 # " 丛雅琴孔令嘉樊友平甘草研究新进展日本医学介绍 $$"!"!! 高鸿霞韶世和王国庆中药甘草研究进展井冈山医报 #!!=/*/. +% %/ * /1*66 510;,*.!"!!"! $.1 : 16. : & 1 0* 1 4 6*/*5* * /. * ;10 5/ /.,1 0 /. " # 吉晓滨谢景华柳息洪等豚鼠变应性鼻炎模型鼻黏膜超微结构的改变中国临床医学! # #$ 李源许庚刘贤常年性变应性鼻炎鼻黏膜的透射电镜观察临床耳鼻咽喉科杂志 $$ =/8.. & 1 '<6 ' 051* 5 **661 5* < 5* /1*66 1/ 1/ 2&

5 中国中西医结合杂志年月第卷第期,! "! 77 '06 1 0* 6150.* 46 5* /1*66 1/ *6/ */* * *1/ * 4 * <1,* 5 # ## #70; 16 7 ;1 : 1 44*1 4.*//0 61 *1 1**1 %1/1/ :51 $$ # #! % 44*1 4 16/ **6//. 1/1/5 6/* *.*//0* * 10 *1 6 / * 16//. 650/* 61*! # "16 & 161 : & 7 1 %*/ /0 /1 *56 ;/.61 5/ 6*1 4 41/ *0! /1 * 1 650/* # # " "## =1 + %4/ & 1 */* 1/*1 /6* 55**0/6* 5/ 41/ *1 */1 */50. ;0 2/1! $ $ " 收稿 # " 修稿! 中国中西医结合杂志第八届编委会名单总编辑陈可冀副总编辑王文健史大卓吕爱平肖培根吴伟康沈自尹雷燕顾问王永炎邓铁涛吴咸中辛育龄张伯礼陈香美陈凯先陈维养侯灿唐由之曹洪欣编辑委员于德泉马必生王一涛王卫霞王宁生王伟王阶王拥军上海王拥军北京王昌恩王学美王硕仁王舒车镇涛卞兆祥方邦江尹光耀邓跃毅叶文才史载祥白彦萍吕志平吕维柏朱元杰朱兵朱明军危北海庄曾渊刘干中刘平刘良刘建平刘建勋刘保延刘鲁明齐清会阮新民孙汉董孙燕苏励杨任民杨宇飞杨秀伟李乃卿李大金李玉光李廷谦李军祥李连达李国栋李国勤李顺成李恩李涛李焕荣连方吴大嵘吴万垠吴泰相吴根诚吴烈时毓民邱峰张大钊张永贤张永祥张荣华张亭栋张家庆张敏州张敏建陆付耳陈士奎陈小野陈冬燕范吉平范维琥林志彬林求诚林瑞超郁仁存果德安季光周俊周霭祥郑国庆赵一鸣赵伟康赵健雄胡义扬胡镜清侯凡凡饶向荣洪传岳顾振纶栗原博日本徐凤芹徐治鸿徐浩殷惠军郭军郭赛珊唐旭东凌昌全黄光英黄晓愚黄熙黄璐琦梅之南曹小定崔红麻柔梁晓春梁繁荣葛秦生董竞成董福慧韩济生谢竹藩谢明村谢恬蔡定芳裴正学廖福龙衡先培戴瑞鸿 76.*0 : % 美国 &0.. 美国 B60 ': % 美国以上名单按姓氏笔画为序

中国中西医结合杂志年月第卷第期!"# $! 灯盏细辛注射液是从灯盏细辛!0 /+/ 中提取咖啡酸酯类及野黄芩苷类成分制取而成具有活血瘀通络止痛功效的中药注射剂广泛应用于临床治疗脑梗死冠心病等心脑血管疾病随着用药人群的扩大其安全性也更加受到关注既往有报道出现急性肾功能的损害的不

中国中西医结合杂志年月第卷第期!# $! 灯盏细辛注射液是从灯盏细辛!0 /+/ 中提取咖啡酸酯类及野黄芩苷类成分制取而成具有活血瘀通络止痛功效的中药注射剂广泛应用于临床治疗脑梗死冠心病等心脑血管疾病随着用药人群的扩大其安全性也更加受到关注既往有报道出现急性肾功能的损害的不中国中西医结合杂志年月第卷第期!"# $! 运用倾向性评分法探讨灯盏细辛注射液使用剂量对肾功能的影响黎元元唐浩李霖谢雁鸣摘要目的分析灯盏细辛注射液临床用药剂量与肾功能指标肌酐 /+ )00 1 尿素氮 "!! + 0)!0 $ 变化的关系探讨用药剂量对肾功能的影响方法选择全国家三甲医院信息系统!/)" 02!)!0 /3/)41 数据库中灯盏细辛注射液 '& 例用药患者信息

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中国中西医结合杂志年月第卷第期 %./65.1 * /65 6!% 6 5/< 10 5 <61./ /1* * /1 7,+&!.//01 * 510 * 5* /166 /. /01 变应性鼻炎是由. 介导的鼻黏膜的变