6 期李尚伟等 : 九香虫抗菌肽 CcAMP1 的分离纯化和抗菌活性检测 611 抗菌肽 (antimicrobialpeptides,amps) 是指存在于生物体内具有抵御外界微生物侵害, 清除体内突变细胞的一类小分子活性多肽 AMPs 是从细菌到昆虫再到高等哺乳动物体内普遍存在的一类防御性多肽,
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1 昆虫学报 ActaEntomologicaSinica,June2015,58(6): doi: /j kcxb 九香虫抗菌肽 CcAMP1 的分离纯化和抗菌活性检测 李尚伟 1,2,, 赵柏松 1,2 1,2, 杜娟 (1. 贵州大学昆虫研究所, 贵州山地农业病虫害点实验室, 贵阳 ; 2. 贵州大学, 昆虫资源开发利用特色重点实验室, 贵阳 ) 摘要 : 目的 从药用昆虫九香虫 Coridiuschinensis 中分离纯化抗菌肽, 为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础 方法 用大肠杆菌 Escherichiacoli 和金黄色葡萄球菌 Staphylococusaureus 混合物作诱导源刺激九香虫产生抗菌肽, 对血淋巴进行提取 凝胶过滤层析 固相萃取及反相色谱纯化, 活性组分经质谱测定 对分离得到的这种抗菌肽进行人工合成, 并进行抗菌活性检测 结果 本研究获得一种九香虫抗菌肽 CcAMP1, 由 17 个氨基酸残基组成, 分子量为 u, 带 1 个正电荷, 表面有 5 个疏水氨基酸 对人工合成的 CcAMP1 进行抗菌活性检测表明, 该抗菌肽与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性, 且对革兰氏阴性菌的抗菌活性更强 结论 从九香虫中分离得到具有较强抗菌活性的阳离子抗菌肽 CcAMP1, 有较大的开发利用价值 关键词 : 九香虫 ; 抗菌肽 ; 抗菌活性 ; 分离 ; 纯化 中图分类号 :Q966 文献标识码 :A 文章编号 : (2015) Isolation,purification,anddetectionoftheantimicrobialactivityofthe antimicrobialpeptide CcAMP1 from Coridiuschinensis(Hemiptera: Dinidoridae) LIShang Wei 1,2,,ZHAOBai Song 1,2,DUJuan 1,2 (1.ProvincialKeyLaboratoryforAgriculturalPest ManagementofMountainousRegion,InstituteofEntomology,GuizhouUniversity,Guiyang550025, China;2.SpecialKeyLaboratoryofInsectResourceDevelopmentandUtilization,GuizhouUniversity, Guiyang550025,China) Abstract: Aim Thisstudyaimstoisolateandpurifyantimicrobialpeptides(AMPs)fromanoficinal insectcoridiuschinensissoastolayafoundationforfurtherdevelopingampresourcesandmedicinal functionsofthisspecies. Methods C.chinensiswasinducedbyamixtureofEscherichiacoliand StaphylococusaureusasthesourceofstimulationtoproduceAMPs.ThehemolymphofC.chinensiswas extractedandpurifiedusinggelfiltrationchromatography,solid phaseextraction,andreversed phase highperformanceliquidchromatography(rp HPLC).Theactiveingredientwasdeterminedbymas spectrometrytoobtainanantimicrobialpeptide.thenthispeptidewasartificialysynthesizedandits antimicrobialactivitywasdetected. Results WeobtainedanantimicrobialpeptidenamedCcAMP1, whichconsistsof17aminoacidresidues,withamolecularweightof u,apositivecharge,and fivehydrophobicaminoacidsonitssurface.detectionofantimicrobialactivityshowedthatthesynthetic CcAMP1hadstrongantimicrobialactivityagainstbothGram positiveandgram negativebacteria,with strongerantimicrobialefectsongram negativebacteria,justlikethehemolymphofc.chinensis. Conclusion ThecationicantimicrobialpeptideCcAMP1 acquiredfrom C.chinensisshowsstrong antimicrobialactivityandhasagreatexploitationvalue. Keywords:Coridiuschinensis;antimicrobialpeptide;antimicrobialactivity;isolation;purification 基金项目 : 贵州省优秀科技教育人才省长基金 ( 黔省专合字 ) 作者简介 : 李尚伟, 男,1965 年 10 月生, 四川通江人, 博士, 副教授, 研究方向为昆虫分子生物学,E mail:swli@163.com 通讯作者 Corespondingauthor,E mail:swli@163.com 收稿日期 Received: ; 接受日期 Accepted:
2 6 期李尚伟等 : 九香虫抗菌肽 CcAMP1 的分离纯化和抗菌活性检测 611 抗菌肽 (antimicrobialpeptides,amps) 是指存在于生物体内具有抵御外界微生物侵害, 清除体内突变细胞的一类小分子活性多肽 AMPs 是从细菌到昆虫再到高等哺乳动物体内普遍存在的一类防御性多肽, 是生物先天免疫防卫系统的一个重要组成部分 抗菌肽分子量相对较小, 一般小于 u, 其理化性质稳定 水溶性好 热稳定 广谱抗菌 抗病毒 抗肿瘤 抗原虫, 并具有活性浓度低 无致畸变作用 无蓄积毒性 不易引起病原产生耐药性等优点, 是极具希望开发成为新型抗生素的候选药物 (Reddyetal.,2004;Wang,2010) 截至 2014 年底, 美国内布拉斯加大学医学中心的抗菌肽数据库 APD(htp://aps.unmc.edu/AP) 收录了 2517 种抗菌肽, 平均长度约 32 个氨基酸残基, 平均净电荷是 3.2 昆虫抗菌肽(insectantimicrobialpeptides) 是昆虫在受到微生物侵害或意外伤害时, 主要由脂肪体或血细胞合成, 然后分泌进入血淋巴中的一类活性肽 大多数昆虫抗菌肽少于 100 个氨基酸残基, 带正电荷, 具有疏水性 瑞典斯德哥尔摩大学 Boman 等 (1974) 首先观察到天蚕蛾 Samiacynthia 的蛹血淋巴具有抗菌活性, 第 1 个昆虫抗菌肽天蚕素 (cecropins) 在 1980 年从惜古比天蚕蛾 Hyalophora cecropia 的蛹中纯化和测序 (Hultmarketal.,1980; Steineretal.,1981) 从此以后, 抗菌肽成为人们研究的热点 据初步统计, 目前已发现了 200 多种昆虫抗菌肽 (APD 收录了 230 种昆虫抗菌肽 ), 不同昆虫中存在的抗菌物质有所不同 根据分子结构特征, 昆虫抗菌肽主要包括 4 类 : 线型两亲性 α 螺旋结构类 分子内含二硫键的肽类 富含脯氨酸肽类及富含甘氨酸抗菌肽类 (BuletandStocklin, 2005) 半翅目是昆虫纲中一个比较大的类群, 其中作为药用的椿象主要属于蝽科 (Pentatomidae) 和兜蝽科 (Dinidoridae) Fehlbaum 等 (1996) 从刺肩蝽 Podisusmaculiventris 中分离到一种叫死亡素 (thanatin) 的抗菌肽, 此肽有 21 个氨基酸, 第 11 和 18 位的 2 个半胱氨酸通过二硫键键合形成一个环, 环内含有 6 个氨基酸, 强碱性 Thanatin 具有大量阳离子, 可耐受 ph 值变化 死亡素与已经分离纯化的所有昆虫抗菌肽均不同源, 而与从各种青蛙皮肤中分离的 Brevinins 具有 40% 的同源性 Thanatin 具有广谱抗菌活性, 在微摩尔浓度水平就能抑制革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌和真菌和生长, 且没有溶血活性 用不同浓度的死亡素作用于细菌, 检测不到细胞内 K + 的外流, 证明细胞膜不是死亡素的作用靶点 用死亡素处理细菌后,1h 细胞呼吸减弱, 6h 后呼吸完全停止, 表明死亡素可能是通过抑制细菌的呼吸作用来杀菌 Thanatin 是一个优良的新型抗菌药物模板, 因为它具有这样一些优点 : 对真核生物细胞无毒性 ; 抗菌活性强, 尤其是对许多临床耐药菌有活性 ; 作用机制多样, 对不同微生物有不同作用方式 ; 分子小, 便于构效关系研究 Chernysh 等 (1996) 从经细菌诱导的红尾碧蝽 Palomenaprasina 中分离到 1 种碧蝽防卫素和 4 种梅氏抗菌肽 (metalnikowins) 碧蝽防卫素由 43 个氨基酸残基组成, 含有 6 个半胱氨酸, 形成 3 个分子内二硫键, 它具有抑制革兰氏阴性和阳性菌的活性 根据分离顺序, 梅氏抗菌肽分别称为 Metalnikowins Ⅰ,ⅡA,ⅡB 和 Ⅲ, 前两种由 15 个氨基酸组成, 后两种由 16 个氨基酸组成 这 4 种抗菌肽高度同源, 差异主要表现在 C 端 抗菌活性测定显示 MetalnikowinⅠ 对所有测定的细菌活性均较低, 它是抑菌剂而不是杀菌剂 杨泽宏 (2001) 从经细菌诱导的小皱蝽中分离出一种分子量为 u 的抗菌肽, 此肽热稳定性好, 在近中性 ph 时抗菌活性强, 抗菌谱广 九香虫 Coridiuschinensis 属于昆虫纲半翅目 (Hemiptera) 兜蝽科 (Dinidoridae) 兜蝽属 Coridius, 又称黑兜虫 瓜黑蝽 屁巴虫等 九香虫是被中国药典 (2010 年版 ) 收录的药用昆虫, 具有理气止痛 温中助阳之功能, 主产于贵州 四川 云南 福建和两广等地 九香虫含脂肪 蛋白质 甲壳质, 维生素 尿嘧啶 黄嘌呤 次黄嘌呤, 以及 Fe,Cu 和 Zn 等微量元素, 其散发的臭气主要源于醛或酮类物质 ( 张颖等, 2009) 九香虫具有较高的药用和营养价值, 近年来其价格直线攀升, 市场前景广阔 九香虫可治疗血管瘤, 与其他中药配合的复方具有抗癌作用 ( 刘庆芳,2002) 九香虫食用在我国已有悠久历史, 谚云 一碟九香屁巴虫, 胜过佳肴满蒸笼 在九香虫产区如贵州的道真 剑河等地有食用九香虫的习惯 九香虫在贵州分布广泛, 在药用 食用领域很有开发价值 ( 姚银花,2006) 九香虫具有很强的抗菌作用, 体外实验表明九香虫对金黄色葡萄球菌 伤寒杆菌 甲型副伤寒杆菌及福氏痢疾杆菌有较强的抑制作用 ( 中华本草编委会,1999) 吴玛莉和金道超等 (2005) 以及赵柏松等 (2011) 的研究也证明九香虫血淋巴具有广谱抗菌作用, 本研究从九香虫血淋巴中纯化得到一种分子量为 u 的抗菌肽, 命名为 CcAMP1, 为深入挖掘九香虫的药用功能及昆虫抗菌肽的抗菌机理研究奠定基础
3 612 昆虫学报 ActaEntomologicaSinica 58 卷 1 材料与方法 1.1 试虫 九香虫采自贵州赤水, 在贵州大学昆虫研究所的人工气候室内饲养, 温度 25±1, 相对湿度为 70%, 光周期 14L 10D, 饲养一代后的成虫用于实验研究 1.2 菌株 革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌 Staphylococusaureus(ATCC25923) 枯草芽孢杆菌 Bacilussubtilis (CMCC 63501) 藤黄微球菌 Micrococusluteus(CMCC 28001) 和肺炎链球菌 Streptococuspneumoniae(ATCC49619); 革兰氏阴性菌包括大肠杆菌 Escherichiacoli(ATCC25922) 青枯假单胞菌 Pseudomonassolanacearum (ATCC 33192) 伤寒沙门氏菌 Salmonela typhi(cmcc 50071) 和痢疾志贺氏菌 Shigeladysenteriae(CMCC 51252) 所有菌株均为本实验室保存 1.3 主要仪器和试剂 LC/MSDTrapVL 液质联用仪 ( 美国 Agilent 公司 ),Agilent1200 高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent 公司 ),ALPHA1 2LDplus 冷冻干燥机 ( 德国 Christ), 基质辅助激光解吸电离 / 串联飞行时间质谱仪 TOF/ TOF5800System( 美国 ABSCIEX 公司 ) 色谱柱 : 葡聚糖凝胶层析柱 SephadexG 75; 氨基柱 LunaNH 2 100A( 美国 Phenomenex 公司 );LichrospherC 18 柱 ( 美国 Agilent 公司 ) 蛋白酶抑制剂 PMSF( 索莱宝公司 ) 抑肽酶 Aprotinin; 黑化抑制剂苯基硫脲 ( 美国 Sigma 公司 ); 乙腈 ACN(Fisher 公司 ); 三氟乙酸 TFA( 阿拉丁公司 ) 其他试剂为国产分析纯 1.4 细菌诱导处理 将大肠杆菌 E.coli 和金黄色葡萄球菌 S. aureus 在 LB 液体培养基中过夜培养, 各取等体积的菌液混合,5000r/min 离心 5min 收集菌体, 用灭菌生理盐水重悬沉淀, 浓度调至 CFU/mL, 作为诱导源 用接种针蘸取混合菌液, 轻刺入九香虫成虫腹部, 继续饲养 24h 后提取其血淋巴 1.5 血淋巴提取 取免疫诱导 24h 后存活的九香虫个体, 去除头 足和翅, 把虫体剪成两半, 再用镊子将每一半撕开 每次处理 5 头, 共处理 50~100 头 取一个 6mL 的小离心管, 外面套上一个 10mL 的大离心管 在这个 6mL 离心管下方钻孔, 内垫一层纱布 ; 10mL 离心管中含有苯基硫脲 ( 终浓度 0.1mg/mL 血淋巴 ) 10μmol/LPMSF 和 10μg/mL 抑肽酶, 用来收集血淋巴 把撕开的九香虫放入小离心管中, 在 10000r/min 离心 20min, 大离心管中的淡黄色液体即为九香虫血淋巴 1.6 抗菌肽的分离纯化 凝胶过滤层析 : 将九香虫血淋巴上 Sephadex G 75 凝胶柱, 磷酸盐缓冲液 (ph7.0) 洗脱, 流速 1.0 ml/min 每次上样量为 100μL,280nm 波长检测, 按峰收集, 真空冷冻干燥, 用无菌超纯水溶解, 进行抗菌活性检测 ( 以 E.coli 和 S.aureus 的混合菌作为指示菌, 下同 ) 固相萃取 : 将氨基柱 LunaNH 2 100A( mm) 用乙腈 (ACN) 活化, 再用 0.05% 三氟乙酸 (TFA) 溶液平衡 将凝胶过滤层析得到的活性组分上柱, 每次上 60μL 样品,80%ACN( 含 0.05%TFA) 洗脱, 流速为 0.5mL/min,280nm 波长检测, 收集各组分, 真空冷冻干燥, 无菌超纯水溶解, 抗菌活性检测 第 1 次反相高效液相色谱 (RP HPLC): 用 0.05%TFA 将 LichrospherC18 柱平衡后, 取 100μL 固相萃取的活性组分上柱, 用 80%ACN( 含 0.05% TFA) 溶液洗脱, 流速为 0.5mL/min, 波长 225nm 紫外检测, 收集各色谱峰, 真空冷冻干燥, 无菌超纯水溶解, 抗菌活性测定 第 2 次 RP HPLC: 为进一步纯化抗菌肽, 对反相纯化的活性组分, 再次进行反相色谱纯化 取 50μL 样品上柱, 用 65%ACN( 含 0.05%TFA) 溶液洗脱, 流速 0.5mL/min,225nm 波长检测, 收集各组分, 冻干浓缩, 超纯水溶解, 测定抗菌活性 1.7 质谱测定对最后反相色谱纯化的活性组分, 酶解, 肽提取,1μL 样品与 1μL 基质 α 氰基 4 羟基肉桂酸混合, 取 1μL 点靶, 在质谱仪 AB SCIEX TOF/TOF 5800System 上进行二级质谱分析 用 Mascot2.2 软件检索鉴定出肽段序列, 然后将这些序列与蛋白质数据库 NCBINr SwisProt 及抗菌肽数据库 APD 进行比对 1.8 抗菌肽 CcAMP1 合成九香虫抗菌肽 CcAMP1 由上海肽仕生物公司采用 Fmoc 固相合成法进行合成, 且 C 末端酰胺化 1.9 抗菌活性检测在抗菌肽的纯化过程中, 以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌, 采用纸片扩散法进行测定, 参照
4 ６期 李尚伟等 九香虫抗菌肽 Ｃ ＡＭＰ１的分离纯化和抗菌活性检测 ６１３ 叶应妩等 ２０ ０６ 的方法并略加改进 将供试菌株 ＴＴＣ 继续培养 １ ３ 观察实验结果 每个浓度进 从平 板 上 挑 取 单 菌 落 接 种 于 ＬＢ液 体 培 养 基 中 行 ３次重复 取平均值 ８ ３ ７ 过夜摇培 调整浓度为 １ １０ ＣＦＵ ｍｌ 各取 ３ ００μＬ加入直径为 ９ ｍ的 ＬＢ平板中 用涂布器涂 ２ 结果 布均匀 贴入灭菌的滤纸片 每纸片上加 ５μＬ分离 组分溶液 ３ ７ 倒置培养 １ ８ ２４ 检查其是否具有 抗菌活性 测量抑菌圈的直径 实验设 ３次重复 １ １０ 最小抑菌浓度测定 ２ １ 九香虫抗菌肽的分离纯化 九香虫血淋巴经 Ｓ ｄ ｘｇ ７５凝胶过滤层析 出现 ３个峰 抗菌活性检测表明第 ２个峰为活性组 采用 ＴＴＣ 氯化三苯四氮唑 微量稀释法对大 分 图 １ Ａ 该组分进一步用氨基柱固相萃取 得 肠杆菌和金黄色葡萄球菌等 ８种菌进行最小抑菌浓 到 ４个色谱峰 活性检测表明第 ３个峰为活性组分 度 ｍ ｍ ｂ ＭＩ Ｃ 测定 在 图 １ Ｂ 该组分 通 过 反 相 高 效 液 相 色 谱 纯 化 ４ ９ ６孔板中分别加入 １０ ０μＬ浓度为 １ １ ０ＣＦＵ ｍｌ 出现 ６个峰 经测定第 ２个峰具有抗菌活性 图 １ 的 ８种细菌 将 Ｃ ＡＭＰ１进行 ２倍稀释 ２ ５ ０ １ ９ ５ Ｃ 改变 条 件 对 活 性 峰 再 进 行 一 次 ＲＰ ＨＰＬＣ纯 Ｌ 每孔加 １０μＬ 以不含药物的培养基为空 μｍ 白对照 在生化培养箱中 ３７ 孵育至空白孔明显 化 又出现 ６个峰 活性测定表明第 ３个峰是活性 有肉 眼 可 见 细 菌 生 长 时 每 孔 加 入 １０ μｌ０ ５ 纯品 峰 图 １ Ｄ 该 组 分 即 为 九 香 虫 抗 菌 肽 的 色 谱 图 １ 九香虫抗菌肽经层析柱纯化的洗脱曲线 Ｆ ｇ １ Ｐｕ ｆ ｆ ｍ ｂ ｄ ｆ ｍｃ ｄ ｕ ｂ ｍ ｇ Ａ 凝胶过虑层析 Ｇ ｆ ｍ ｇ Ｂ 氨基柱固相萃取 Ｓ ｄ ｘ ｂ ｍ ｕ ｍ Ｃ 第 １次反相高效液相色谱 Ｔ ｆ ＲＰ ＨＰＬＣ Ｄ 第 ２次反相高效液相色谱 Ｔ ｄｒｐ ＨＰＬＣ 箭头示活性峰 Ｔ ｗ ｋｗ ｍ ｂ ｖ ２ ２ 九香虫抗菌肽的质谱分析 将纯化的九香虫抗菌肽进行 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ Ｏ ｕ ｍ ｋ 抗菌肽 Ｏ Ｉ有 ３６ ８ 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 与 大 黄 蜂 Ｍ ｇｂ ｍｂ ｕ 质谱检测 质谱数据经生物软件检索鉴定出肽段序 ｖ ｕ 抗菌肽 Ｂ ｍｂ 有 ３ ３ ３ 的氨基酸 列 这些序列在抗菌肽数据库 ＡＰＤ 中经比对与预 序列一致 性 把 它 命 名 为 九 香 虫 抗 菌 肽 Ｃ ＡＭＰ１ 测后筛选 出 １０条 可 能 具 有 抗 菌 活 性 的 肽 段 序 列 ７个氨基酸组成 分子量为 １９９ ７ ３７ｕ 疏 该肽由 １ 表 １ 如表 １所示 第 ５条肽属于富含脯氨酸的 水氨基酸占 ５ ８ 甘氨酸占 １１ 带 １个正电荷 表 抗菌肽 第 ６条肽是一条完整的抗菌肽 它与虹鳟 面有 ５个疏水氨基酸
5 614 昆虫学报 ActaEntomologicaSinica 58 卷 表 1 质谱测定九香虫抗菌肽片段的氨基酸序列 Table1 AminoacidsequencesofantimicrobialpeptidefragmentsmeasuredbymasspectrometryinCordiuschinensis 序号 No. 肽段序列 Sequencesofpeptidefragments 净电荷 Netcharge 表面疏水氨基酸 Totalhydrophobicresidues onthesamesurface 比对到抗菌肽数据库的编号 APDID 1 ALLAAFNFPFR +1 4 AP00862,AP00073,AP GAAQNIPAATGAAK +1 3 AP00829,AP01331,AP KDLITSLQNVIPK +1 3 AP01681,AP01680,AP LNNMQWVLVNVK +1 5 AP00434,AP01728,AP LPLSAAKIVQPK +2 - AP00136,AP01899,AP MWITNGGVANWYFVLAR +1 5 AP01326,AP01959,AP QGISAVVLSR +1 3 AP01900,AP01480,AP QWTALLKK +2 3 AP01923,AP01455,AP SILQLK +1 3 AP01714,AP00876,AP VQQLGILRYAR +2 3 AP01900,AP00136,AP CcAMP1 的抗菌活性为了测定 CcAMP1 的抗菌活性, 人工合成了该肽, 纯度为 95.43%, 并在 C 末端进行酰胺化 采用 TTC 微量稀释法对不同浓度抗菌肽 CcAMP1 进行抗菌活性检测, 判断细菌生长抑制标准为肉眼观察未见培养液浑浊成红色或者没有红色颗粒出现于培养液中 结果表明,CcAMP1 与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性, 且对革兰氏阴性菌有更强的杀灭活性 ( 表 2) 表 2 合成抗菌肽 CcAMP1 的最小抑菌浓度 (MIC) Table2 Minimalinhibitoryconcentration(MIC) ofthesyntheticccamp1againstbacteria 细菌名称 Bacteria MIC(μmol/L) 革兰氏阳性菌 Gram positivebacteria 金黄色葡萄球菌 Staphylococusaureus 12.5 枯草芽孢杆菌 Bacilussubtilis 6.26 藤黄微球菌 Micrococusluteus 12.5 肺炎链球菌 Streptococuspneumoniae 6.26 革兰氏阴性菌 Gram negativebacteria 大肠杆菌 Escherichiacoli 6.26 青枯假单胞菌 Pseudomonassolanacearum 6.26 伤寒沙门氏菌 Salmonelatyphi 3.13 痢疾志贺氏菌 Shigeladysenteriae 讨论 昆虫体液免疫依赖血淋巴中的抗菌肽和蛋白 非诱导状态下, 昆虫有基础水平表达的抗菌肽 ; 在诱导状态 ( 外界刺激或感染 ) 下, 抗菌肽在昆虫体内呈现高水平表达 因此, 在提取抗菌肽时, 一般都要先对昆虫进行诱导, 常用的诱导方法是用微生物感染 研究表明, 昆虫免疫抗菌肽具有特异性, 不同的诱导源刺激后, 昆虫机体会产生不同的抗菌肽, 同时产生的抗菌肽的水平也不相同 ( 刘建涛等,2006; 孙龙等,2012) 昆虫抗菌肽的获得主要通过天然提取 化学合成和基因工程这 3 种途径, 从昆虫中提取的天然抗菌肽是化学合成或基因工程抗菌肽的基础, 因此天然昆虫抗菌肽的分离纯化仍然是发现新抗菌肽的一个重要手段 用第二代测序技术对昆虫全虫体或血淋巴进行转录组测序, 可能会发现更多的抗菌肽基因 不同种昆虫的直系同源抗菌肽基因可以通过分析基因组序列来鉴定, 但是全基因组分析不能鉴定小分子抗菌肽, 特别是一些来自前体蛋白水解形成的小肽, 因为这些抗菌肽的前体在不同种类的昆虫之间可能没有较高的相似性 因此, 在昆虫血淋巴中, 可能还有大量的抗菌肽没有被发现 (Yiet al.,2014) 本研究也显示九香虫体内可能含有多种不同的抗菌肽, 需要将它们分离纯化出来, 再进一步研究它们的抗菌 抗病毒等生物学功能 经质谱测定和数据库搜索, 我们得到 10 条可能是抗菌肽的片段序列 ( 表 1), 可进一步根据这些片段设计简并引物, 用 cdna 末端快速扩增技术 (RACE) 获得这些抗菌肽的全长基因序列, 从而得到完整的全长抗菌肽序列 表 1 中的第 6 条序列与大黄蜂抗菌肽 Bombolitin 序列 (SKITDILAKLGKVLAHV) 具有相似性, 两者都由 17 个氨基酸残基组成, 这表明第 6 条序列是一条完整的抗菌肽 因此, 本研究就重点研究该抗菌肽, 之所以把它命名为 CcAMP1, 是因为它是从九香虫中发现的第一条抗菌肽, 九香虫中有多种抗菌肽, 今后可根据发现顺序依次命名为 CcAMP2 和 CcAMP3 等等 九香虫血淋巴中含有多
6 6 期李尚伟等 : 九香虫抗菌肽 CcAMP1 的分离纯化和抗菌活性检测 615 种抗菌肽, 因此血淋巴的抗菌活性是多种抗菌肽抗菌的综合效应, 表现出对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性 CcAMP1 与来自海南臭蛙 Odoranahainanensis 抗菌肽 Temporin HN1 鸭嘴兽 Ornithorhynchusanatinus 抗菌肽 PAM2 分别都有 35% 的氨基酸序列一致性, 而它们都具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌的活性 (Wangetal.,2011;Wanget al.,2012) CcAMP1 中有 58% 的疏水氨基酸, 经预测, 它在同一表面有 5 个疏水氨基酸 (VAWVL); 它可能形成 α 螺旋, 能与细胞膜相互作用, 破坏细菌胞膜完整性而对革兰氏阳性和阴性菌发挥杀菌作用 (Nguyenetal.,2011) 该肽可能靶标革兰氏阴性菌的细胞壁或外膜成分 (Junkesetal.,2011), 或者封阻极性分子通过外膜的通道, 或者促使阴离子脂质聚集 (Epandetal.,2010), 从而对革兰氏阴性菌具有较强的抗菌活性 当然, 我们需要进一步研究 CcAMP1, 以明确它真正的抗菌机理 从已发现的半翅目昆虫抗菌肽来看, 它们的相似性较低, 结构变化大, 抗菌机制多样 研究九香虫抗菌肽可能发现新型的理想的抗菌肽, 为人类提供新的抗菌药物模板, 为人类战胜病菌提供新的武器 昆虫抗菌肽具有很大开发潜力, 已成为人们应对日趋严重的耐药性细菌的新型生物制剂的主要生物资源 人类一直在寻找新型 高效 低毒 广谱的抗菌肽 九香虫抗菌肽开发出来后, 可应用于医药卫生 食品防腐 生物饲料添加剂 生物农药 动植物抗病基因工程 (JansenandKogel,2011) 等领域, 将会为人类创造巨大的价值 参考文献 (References) BomanHG,Nilson FayeI,PaulK, Rasmuson TJr,1974. Insect immunity.i.characteristicsofaninduciblecel freeantibacterial reactionin hemolymph ofsamia cynthia pupae. Infection and Immunity,10(1): BuletP,StocklinR,2005.Insectantimicrobialpeptides:structures, propertiesandgeneregulation.protein& PeptideLeters,12(1): ChernyshS,CociancichS,BriandJP,HetruC,BuletP,1996.The inducibleantibacterialpeptidesofthehemipteran insectpalomena prasina:identificationofauniquefamilyofprolinerichpeptidesandof anovelinsectdefensin.journalofinsectphysiology,42(1): ChineseMateriaMedicaEditorialBoardoftheStateAdministrationof TCM,1999.ChineseMateriaMedica,Vol.9.ShanghaiScientific andtechnicalpublishers,shanghai [ 国家中医药管理局中华本草编委会,1999. 中华本草 ( 第 9 册 ). 上海 : 上海科学技术出版社 ] EpandRF,MaloyL,RamamoorthyA,EpandRM,2010.Amphipathic helicalcationicantimicrobialpeptidespromoterapidformationof crystalinestatesin the presence ofphosphatidylglycerol: lipid clusteringinanionicmembranes.biophysicaljournal,98(11): FehlbaumP,BuletP,ChernyshS,BriandJP,RouselJP,LetelierL, Hetru C, Hofmann JA, Structure activity analysis of thanatin,a21 resideinducibleinsectdefensepeptidewithsequence homologytofrogskinantibacterialpeptides. Procedingsofthe NationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,93 (3): Hultmark D, SteinerH, Rasmuson T, Boman HG, Insect immunity.purificationandpropertiesofthreeinduciblebactericidal proteinsfrom hemolymph ofimmunized pupae ofhyalophora cecropia.europeanjournalofbiochemistry,106(1):7-16. JansenC, KogelKH, Insectantimicrobialpeptidesasnew weaponsagainstplantpathogens. In: VilcinskasA ed. Insect Biotechnology.Biologicaly InspiredSystems,Vol.2.Springer, Dordrecht JunkesC,HarveyRD,BruceKD,DolingR,BagheriM,DatheM, 2011.CyclicantimicrobialR,W richpeptides:theroleofpeptide structureande.coliouterandinnermembranesinactivityandthe modeofaction.europeanbiophysicsjournal,40(4): LiuJT,SuZJ,WangFH,LiGH,SongSY,2006.Progresesoninsect antimicrobialpeptides.naturalenemiesofinsects,28(1):36-43.[ 刘建涛, 苏志坚, 王方海, 李广宏, 宋少云,2006. 昆虫抗菌肽的研究进展. 昆虫天敌,28(1):36-43] LiuQF,2002.ModernclinicalresearchandapplicationsofCoridius chinensis(hemiptera:dinidoridae).journalofhenanuniversity (MedicalSciences),21(4):66-67.[ 刘庆芳,2002. 九香虫现代临床研究与应用. 河南大学学报 ( 医学科学版 ),21(4):66-67] NguyenLT, HaneyEF, VogelHJ,2011. Theexpandingscopeof antimicrobialpeptidesstructuresandtheirmodesofaction.trends inbiotechnology,29(9): ReddyKVR,YederyRD,AranhaC,2004.Antimicrobialpeptides: premisesand promises. InternationalJournalofAntimicrobial Agents,24(6): SteinerH,HultmarkD,Engstrom A,BennichH,BomanHG,1981. Sequenceandspecificityoftwoantibacterialproteinsinvolvedin insectimmunity.nature,292: SunL, FengY, HeZ, Chen ZY, ZhaoM,2012. Isolation and purificationofsmalantimicrobialpeptidefromlarvaeofmealworm, Tenebriomolitor.ChineseJournalofAppliedEntomology,49(3): [ 孙龙, 冯颖, 何钊, 陈智勇, 赵敏,2012. 黄粉虫幼虫小分子量抗菌肽的分离纯化. 应用昆虫学报,49(3): ] WangG,2010.AntimicrobialPeptides:Discovery,DesignandNovel TherapeuticStrategies.CABI,Walingford.220pp. WangH,YuZ,HuY,LiF,ZhengH,MengH,YangS,YangX,Liu J,2012. Novelantimicrobialpeptidesisolated from the skin secretionsofhainanodorousfrog,odoranahainanensis.peptides, 35(2): WangJ,WongESW,WhitleyJC,LiJ,StringerJM,ShortKR,Renfree MB,BelovK,CocksBG,2011.Ancientantimicrobialpeptideskil antibiotic resistantpathogens: Australian mammals provide new
7 616 昆虫学报 ActaEntomologicaSinica 58 卷 options.plosone,6(8):e WuML,JinDC,2005.Theantibacterialactivityofthehaemolymphand purifiedprotein from Aspongopuschinensis. ChineseBuletin of Entomology,42(3): [ 吴玛莉, 金道超,2005. 九香虫血淋巴及其纯化蛋白抑菌活性的研究. 昆虫知识,42(3): ] YangZH,2001.IsolationandPurificationoftheAntimicrobialPeptide AMPofCyclopltaparvaDistantandAnalysisofProperties.MSc Thesis,SouthwestAgriculturalUniversity,Chongqing.[ 杨泽宏, 小皱蝽抗菌肽 AMP 的分离纯化和性质分析. 重庆 : 西南农业大学硕士学位论文 ] YaoYH,2006.BiologicalcharacteristicsandapplicationsofCoridius chinensis(hemiptera:dinidoridae).journalofsoutheastguizhou NationalTeacher scolege,24(6):48-49.[ 姚银花,2006. 九香虫的生物学特性及其应用价值. 黔东南民族师范高等专科学校学报,24(6):48-49] YeYW, Wang YS, Shen ZY, NationalGuide to Clinical Laboratory Procedures. 3rd ed. Southeast University Pres, Nanjing [ 叶应妩, 王毓三, 申子瑜,2006. 全国临床检验操作规程 ( 第 3 版 ). 南京 : 东南大学出版社 ] YiHY,ChowdhuryM,HuangYD,YuXQ,2014.Insectantimicrobial peptides and their applications. Applied Microbiology and Biotechnology,98(13): ZhangY,ChenJW,GaoY,2009.Researchprogresontheresource identification,chemistry,pharmacologyandapplicationofmedicine andfoodofaspongopuschinensisdalas.asia PacificTraditional Medicine,5(9):44-47.[ 张颖, 陈建伟, 高源,2009. 九香虫资源鉴定 化学 药理与药食应用研究. 亚太传统医药,5(9): 44-47] ZhaoBS, Du J, WangJG, LiSW, Preliminary study on antimicrobialactivityofhaemolymph from Aspongopuschinensis. GuizhouAgriculturalSciences,39(6):85-89.[ 赵柏松, 杜娟, 王金固, 李尚伟,2011. 九香虫血淋巴的抗菌活性初步研究. 贵州农业科学,39(6):85-89] ( 责任编辑 : 赵利辉 )
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
微生物学通报 Microbiology China 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍
微生物学通报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): 1628 1633 2010 by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍 谢晶 ( 201306) 摘要 : 以革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性的铜绿假单胞菌为试验菌,
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严
卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严重 时 区 腹 部 皮 肤 软 化 溃 烂 穿 孔 脏 露 出 的 粘稠 状 液 体 肾脏 部 位和
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
7 北京大学学报 医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0
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中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
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刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种
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件内酸 胺 酶 抑制剂 的 研 究 进 展 胡 宗礼 朱铃 英 第 二 军 医 大 学 基 础 部药 理 教研 室 当 今 在 国 内 外 临 床 细 菌 的 耐 药性 普 遍 上海 困 扰着 医 生 与 患 者 对 感染 性疾 病 特 别是 危 重 感 染构成 威 肋 内酞 胺类 抗生 素 甲 氧 苯青 霉素 金 葡 菌 尤 其是 耐 产生 耐 药性 的 重 要机 制 之 卜 内 酞胺 酶 抑 制
应 用 与环 境 生 物 学 报 升 访 人 川 在 生 物 医 学 中的 应 用 研 究进 展 赵树杰 许开 天 中 国 科 学 院 成 都 生物 研 究所 摘 本 文 综 述 了 新 型 生 物 可 降解材 料 聚 材料 方 面 的 应 用 研 究进 展 和 发 展 趋势 关键 词 成都 幻 要 压轻 基 丁 酸 酷 在 用 作 药 物 缓 释 载 体 材 料 以 及 其 它 生 物 医 学 聚
杨锐 方文雅 单媛媛 陈海敏 孙雪 叶央芳 为研究藻际微生物多样性与紫菜健康养殖的关系 从江苏南通 养殖 山东青岛 野生 浙江温州 养殖 三地的条斑紫菜叶状体和江苏东台条斑紫菜贝壳丝状体及其周围的海水样品中分离 了条斑紫菜外生细菌 根据菌落特征和菌体形态将获得的 株细菌分为 种表型 片段 分析结合序列测序比对结果表明 这些菌株与假交替单孢菌 嗜冷单胞菌 和芽孢杆菌 等 属相应菌株具有较高的同源性 通过对条斑紫菜外生细菌区系多样性分析得出
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
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实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
生 物 技 术 通 报 相 关 载 体 及 试 剂 动 物 组 织 及 细 胞 培 养 总 的 提 取 及 反 转 录 内 蒙 古 白 绒 山 羊 基 因 的 分 子 克 隆 生 物 信 息 学 分 析
生 物 技 术 通 报 鲍 文 蕾 杨 娇 馥 李 彬 刘 俊 娥 王 潇 郭 旭 东 王 志 钢 侯 鑫 刘 东 军 旨 在 克 隆 内 蒙 古 白 绒 山 羊 血 管 内 皮 生 长 因 子 基 因 并 分 析 其 基 本 表 达 模 式 采 用 技 术 克 隆 基 因 将 得 到 的 基 因 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 进 行 生 物 信 息 学 分 析 利 用 半 定 量
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苏州大学硕士学位论文干红葡萄酒营养质量指标研究姓名 : 杨晶申请学位级别 : 硕士专业 : 营养与食品卫生指导教师 : 朱圣陶 20090501 干红葡萄酒营养质量指标研究 作者 : 杨晶 学位授予单位 : 苏州大学 相似文献 (0 条 ) 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/thesis_y1468051.aspx
期 周 凯等 欧 洲 鳗 鲡 红 头 病 病 原 的研 究 酒 精 棉 球 将 尾 部 反 复 擦 洗 消 毒 然 后 用 灭 菌 剪 刀 剪 断 尾 巴 将 血 液滴 加 在 营 养 琼 脂 或 琼脂 平板 上作 划线 分 离 在 获 得 纯 培 养 后 移 人 斜 面 保存备 用 培养 后 取
期 周 凯等 欧 洲 鳗 鲡 红 头 病 病 原 的研 究 酒 精 棉 球 将 尾 部 反 复 擦 洗 消 毒 然 后 用 灭 菌 剪 刀 剪 断 尾 巴 将 血 液滴 加 在 营 养 琼 脂 或 琼脂 平板 上作 划线 分 离 在 获 得 纯 培 养 后 移 人 斜 面 保存备 用 培养 后 取 形 态 致 的 单 个 菌 落 进 步 划 线 纯化 人 工 感 染试 验 肌 注 感染是 将 斜 面
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
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药学 实践 杂志 药理 年第 卷第 期 生 物 技 术 药 品 近年 来 的 发 展 杨玉 龙 任海 祥 南 京军 区 南京 总 医 院 南京 本 文 概 述 了 近 年 来 国 内 外 生 物 技 术 药 品 与 生 化 药 品 的 研 究 与 发 展 论 述 了生 物 技 术与 生 物 药 品 摘要 间 的 关 系 介 绍 了 近 代 生物 技 术 在某 些 生 物 药 品 生 产 中 的应 用
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 40 94 88 82 77 72 67 62 57 53 48 44 40 37 33 29 26 23 20 17 14 11 8 39 94 88 82 77 71 66 61 57 52 48 44 40 36 32 28 25 22 18 15 12 9 7 38 94 88
卫生检验学实习指导.doc
2007.3 1 ... 1 V B2... 4... 7... 9... 12... 14... 17... 19... 25... 29... 31... 34 2 1. 2. 3. ph= 3-9( ph=5-6) Fe 2+ lgk =21.3 510nm, 1.1 10 4 Fe 2+ Fe 3+ Fe 2+ Fe 2+ 1. 1 cm l ml2m15ml 25ml 2. 1. 000
g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min
25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
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结果与讨论
金青哲 谢 峰 丁志华 施峰华 王兴国 利用碳同位素比值法进行花生油和玉米油掺合物的检测研究 用气相色谱仪获得 转化途径 的玉米油和 转化途径的花生油的脂肪酸组成 再用气相色谱 燃烧 同位素比值质谱仪确定三种主要脂肪 酸 的 值 利用所测得的数据 构建了玉米油与花生油混合油中主要脂肪酸的 值 混合比例的标准曲线 结果表明 玉米油与花生油的 值差异很大 应用试验中将花生油与一种未知的其他植物油进行掺和
中图分类号：；文献标识码： ；文章篇号: (2004)01-000#-0#
黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究 张建新, 孙长江 ( 西北农林科技大学食品科学与工程学院, 陕西杨凌 712100) 摘要 : 本研究以黄粉虫为试材, 采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽, 并对其进行分离纯化, 比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性 热稳定性及分子量 结果表明 : 大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到 5 个组分, 抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
干细胞和再生医学 科学学位 免考 免考 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 85 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 69 非定向 护理学 科学学位 免考 免考 非定向 护理学 科学学位
2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
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中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 8 期 2013 年 4 月 989 养 阴 清 肺 糖 浆 指 纹 图 谱 研 究 1, 姜 姗 2, 冯 丽 君 2, 孔 慧 2, 曲 昌 海 2, 尹 兴 斌 2, 倪 健 1. 北 京 中 医 药 大 学 教 务 处, 北 京 100029 2. 北 京 中 医 药 大 学 中 药 学
第 6 期 谢乐芳等 :6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 实验方法根据文献 [20] 适当改进牛津杯法测定 6 种化合物对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性 首先用生理盐水配制 ~ CFU/mL 的 4 种菌的菌悬液, 然后将其混匀到
![第 6 期 谢乐芳等 :6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 实验方法根据文献 [20] 适当改进牛津杯法测定 6 种化合物对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性 首先用生理盐水配制 ~ CFU/mL 的 4 种菌的菌悬液, 然后将其混匀到](/thumbs/91/105798870.jpg "第 6 期 谢乐芳等 :6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 实验方法根据文献 [20] 适当改进牛津杯法测定 6 种化合物对藤黄八叠球菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性 首先用生理盐水配制 ~ CFU/mL 的 4 种菌的菌悬液, 然后将其混匀到")
第 34 卷第 6 期 应用化学 Vol.34Is.6 2017 年 6 月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY June2017 6 种多金属氧酸盐的抑菌作用 a 谢乐芳 邢 a 蕊 王 b 芳 王 a 力 ( a 集美大学食品与生物工程学院福建厦门 361021; b 泉州师范学院海洋与食品学院福建泉州 361000) 摘要合成了 5 种过渡金属取代的 Keggin
武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高
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第 第 卷 海 欺 环 洋 科 境 学 月 年 铜 锌 镐 汞 锰 铬 对 斑 节 对 虾仔虾 急性 致毒 的研 究 高淑 英 邹栋梁 厦 门 大学 海洋 系 厦 门 摘 仔虾 的 急 性 致 毒 效 应 土 本文在恒温 要 结果 表 明 值 分别 为 充 气条 件下 研 究 了 值分 别为 十 对斑节对虾 对 斑 节对 虾 仔 虾 值分 别 为 值 分别 为 六 种重 金 属 的 毒性 顺 序 为
第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序
河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪
Microsoft Word - 陈威_new_.doc
Research Paper 研究报告 Acta Microbiologica Sinica 48(2) 164~168; 4 February 2008 ISSN 0001-6209; CN11-1995/Q http://journals.im.ac.cn 壳聚糖抑菌机制的初步研究 1, 2, 陈威 3, 吴清平 2*, 张菊梅 2, 吴慧清 ( 1, 430071) ( 2, 510070)
不同基源石斛属 植物 不同来源商品石斛
徐蓓 杨莉 陈崇崇 王峥涛 徐珞珊 建立黄草类石斛的薄层色谱 定性鉴别方法 采用薄层色谱法 考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素 石斛酚 杓唇石斛素 和 三羟基 甲氧基联苄 的薄层色谱行为 对石斛药材进行定性鉴别 通过 种不同基源的石斛及 批商品石斛的薄层色谱鉴别 证明此方法专属性强 操作简单 重复性好 为石斛的鉴别提供了一种准确 有效的新方法 本方法可用于黄草类石斛的鉴别 为中药石斛的质量标准研究提供科学依据
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生入学考成绩 准考证号 报考专业 外语政治业务 1 业务 2 总成绩 备注 病理学与病理生理学 病理学与病理生理学
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生入学考成绩 准考证号 报考专业 外语政治业务 1 业务 2 总成绩 备注 103357000912484 病理学与病理生理学 72 72 242 0 386 103357000912003 病理学与病理生理学 71 72 242 0 385 103357000911503 病理学与病理生理学 77 73 234 0 384 103357000911098
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
臧晓南 张学成 王高歌 刘金姐 张晓辉 刘 滨 对两种丝状蓝藻 钝顶节旋藻和盐泽螺旋藻 在基因工程中常用作选择试剂的 种抗生素 氯霉素 氨苄青霉素 红霉素 链霉素 卡那霉素 庆大霉素和新霉素 的敏感性作比较实验 结果表明 两种蓝藻对抗生素的敏感性既有共同的特点 也有 明显的差异 它们对红霉素 氯霉素和链霉素最敏感 致死浓度分别为 和 两种蓝藻对氨苄青霉素比较敏感 的氨苄青霉素即可抑制 和 的生长 但
为 了 改 进 SEC 色 谱 柱 的 分 离 表 现 - 色 谱 填 料 - 1. 更 小 的 粒 径 更 高 的 理 论 塔 板 数 更 高 的 反 压, 更 小 的 孔 隙 容 量. 更 大 的 孔 隙 容 量 ( 校 准 曲 线 的 斜 率 更 为 平 缓 ) 分 离 系 数 ; 需 要 被
新 款 适 用 于 UHPLC/HPLC 的 SEC 色 谱 柱 的 介 绍 东 曹 ( 上 海 ) 生 物 科 技 有 限 公 司 Jan, 015 为 了 改 进 SEC 色 谱 柱 的 分 离 表 现 - 色 谱 填 料 - 1. 更 小 的 粒 径 更 高 的 理 论 塔 板 数 更 高 的 反 压, 更 小 的 孔 隙 容 量. 更 大 的 孔 隙 容 量 ( 校 准 曲 线 的 斜 率
李 栋 陈 德 元 国 防 将 性 能 测 量 与 层 次 化 动 态 雷 达 图 可 视 化 方 法 相 结 合 提 出 了 一 种 空 间 通 信 网 性 能 仿 真 新 方 法 构 建 了 仿 真 系 统 平 台 同 时 在 分 析 空 间 通 信 网 性 能 参 数 的 基 础 上 提 出 了 一 种 改 进 的 双 分 组 对 路 径 带 宽 测 量 方 法 并 利 用 空 间 通 信 网
福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳
福建农业学报 赵 健 高晓丹 邱荣洲 翁启勇 材料与方法 种子罐的制备 发酵条件单因素试验 发酵最佳 值的确定 发酵最佳温度的确定 福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳 赵 健等 应用均匀设计优化生防细菌 发酵培养基组分及条件研究 最佳温度 碳源 最佳转速 氮源 福建农业学报 均匀设计 讨 论 赵
南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版!"# " < ABC DE c AB ^ " M F GE PQ M ""# = 摘要! "#$ %&' (!)*+,!-*.# /.01 # $ 89 :; /.012 # ' $ <= ABCD E /.01 F
南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版 " < ABC DE c AB ^ " M F GE PQ M ""# = 摘要! "#$ %&' (!)*+,!-*.# /.01 # 234 567$ 89 :; /.012 # ' $ ?@ ABCD E /.01 F >GH >? I'J K ABCD > LMNO > > 0PQ RI'7 > S. KTUVW XY EN
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
Caco-2, :WatersAcquityUPLC, Wa- 24.5% Rim ters Nasri [5] :Waters2545, Waters α- :WatersAcquity [6] Dybowskin-2CDYa UPLC-Waters MALDI Synapt Q-T
![Caco-2, :WatersAcquityUPLC, Wa- 24.5% Rim ters Nasri [5] :Waters2545, Waters α- :WatersAcquity [6] Dybowskin-2CDYa UPLC-Waters MALDI Synapt Q-T](/thumbs/91/105226205.jpg "Caco-2, :WatersAcquityUPLC, Wa- 24.5% Rim ters Nasri [5] :Waters2545, Waters α- :WatersAcquity [6] Dybowskin-2CDYa UPLC-Waters MALDI Synapt Q-T")
33 6 2017 6 Vol.33,No.6 Jun.2017 DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2017.06.030 Preparation,separationandaminoacidsequenceanalysisofcorn peptideswithhypoglycemicactivity 1,2 1 1 1 3 3 HU Yu-hang 1,2 DAI Jun
目录 附录 A 实验室结果统计汇总和评价... 1 附录 A1 菌落总数项目结果汇总和统计评价... 1 附录 A2 大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 5 附录 A3 粪大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 9 附录 A4 大肠杆菌项目结果汇总和统计评价 附录 A5 沙门氏菌项目结果
中国检验检疫科学研究院测试评价中心 CNAS PT0026 ACAS-PT030 食品微生物学能力验证计划 中期报告 2014 年 10 月 13 日 本报告是中国检科院测试评价中心 (ACAS) 组织的 ACAS-PT030 食品微生物能力验证计划的中期报告 该中期报告供实验室参考, 结果以最终的结果报告单和技术报告为准 本能力验证计划中定量检测项目按照 ISO13528 标准, 采用稳健统计技术,
价样 品 川 振 荡汉 取 叮 盛极 曲 的 示差 溶 出脉 具 体 方 法 见 有 机质 含 量 用 丘 林 法 测 定 沉积 物 的 矿 物 组 成 由 本 所 地质 室 测 数 据 由厦 门 大 学 海 洋 系 洪 家 珍 同志 提 供 三 各站 位 于表 谱 分析仪 进行 微 米膜 滤 后 分 斯 其 酿 可溶 部 分 的 含 鼠 零 用 冲测定 卷 报 分析 三 定 学 洋 海 表示 结
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Chinese Journal of Applied Entomology 2015, 52(3): 712 720. DOI: 10.7679/j.issn.2095 1353.2015.083 * 黄粉虫抗菌肽的提取及其生化特性的研究 ** 朱小奇 谢彩云聂荷敏赵肖陈小娜何晓辉 *** 宋欢王俊刚申红 832003 摘要 目的 Tenebrio molitor Linnaeus 方法 1 10
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版 3 9 S ^ 9 F = S ]( ^ >? 67 = D ^ E Y GH I 摘要!"#$%&' ()*+,-./* :; 1 < #D.E? FGAH!" BI7JK LM.NO F
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南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版 3 9 S ^ 9 F = S ]( ^ >? 67 = D ^ E Y GH I 摘要!"#$%&' ()*+,-./*+01. 23456789:;1 < =>?
福建农业学报 材料与方法 外植体无菌株系的建立 启动培养 增殖培养 继代培养 生根培养 瘤状苗的细胞学观察
福建农业学报 邓素芳 杨 旸 赖钟雄 福建农业学报 材料与方法 外植体无菌株系的建立 启动培养 增殖培养 继代培养 生根培养 瘤状苗的细胞学观察 邓素芳等 朱砂根成年茎段的离体培养研究 结果与分析 福建农业学报 第3期 邓素芳等: 朱砂根成年茎段的离体培养研究 带空洞, 无法观察 图1 朱砂根成年茎段的离体繁殖 Fig 1 I n vitro propagation of A crenata 图 2
兽医临床诊断学实验指导
兽 医 临 床 诊 断 学 实 验 指 导 河 北 科 技 师 范 学 院 动 物 科 学 系 临 床 兽 医 学 实 验 室 2009 年 2 月 目 录 学 生 实 验 守 则... 3 实 习 一 动 物 的 接 近 保 定 和 基 本 检 查 法...4 实 习 二 临 床 基 本 检 查 法 及 一 般 检 查...10 实 习 三 循 环 系 统 的 临 床 检 查...15 实 习 四
刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 芽孢杆分类系统的演变发展
福建农业学报 刘国红 刘 波 林乃铨 林营志 芽孢杆菌的分类简况 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 芽孢杆分类系统的演变发展 福建农业学报 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 福建农业学报 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 福建农业学报 芽孢杆菌属的分化的确立依据和属模式种特征 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征 福建农业学报 刘国红等 芽孢杆菌的系统进化及其属分类学特征
微生物学通报 JUN 20, 2008, 35(6): 913~917 Microbiology 2008 by Institute of Microbiology, CAS 研究报告 紫甘薯花色苷色素的抑菌作用研究 1 韩永斌 2 朱洪梅 1* 顾振新 1 范龚健
微生物学通报 JUN 20, 2008, 35(6): 913~917 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2008 by Institute of Microbiology, CAS 研究报告 紫甘薯花色苷色素的抑菌作用研究 1 韩永斌 2 朱洪梅 1* 顾振新 1 范龚健 (1. 210095) ( 2. 041004) 摘要 : 本文研究了紫甘薯花色苷色素抑制大肠杆菌
流式细胞术临床应用的建议 作者 : 中华医学会检验医学分会, 卫生部临床检验中心, 中华检验医学杂志编辑委员会 作者单位 : 刊名 : 中华检验医学杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Laboratory Medicine 年, 卷 ( 期 ): 2013,36(12) 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/periodical_zhyxjy201312003.aspx
GBZ －2004.doc
C 52 GBZ GBZ/T 160.30 2004 Methods for determination of inorganic phosphorus compounds in the air of workplace 2004 5 21 2004 12 1 GBZ/T 160.30-2004 GBZ 1 GBZ 2 [ Phosphorus pentoxide Phosphorus pentasulfide
生 物 技 术 通 报 材 料 方 法 导 致 的 重 复 序 列 不 稳 定 性
生 物 技 术 通 报 赵 宏 宇 蔡 禄 赵 秀 娟 王 晶 妍 陈 元 秀 刘 水 峰 重 复 序 列 异 常 扩 增 或 删 除 会 引 起 多 种 人 类 遗 传 疾 病 目 前 其 不 稳 定 性 机 制 还 不 清 楚 为 了 探 索 化 学 药 物 对 重 复 序 列 的 作 用 采 用 甲 基 磺 酸 乙 酯 和 丝 裂 霉 素 连 续 多 次 处 理 含 重 复 序 列 质 粒 的
全国主要流域重点断面水质自动监测周报
全 国 主 要 流 域 重 点 断 面 水 质 自 动 监 测 周 报 2016 年 第 16 期 中 国 环 境 监 测 总 站 2016 年 04 月 20 日 2016 年 第 16 周 (04 月 11 日 ~04 月 17 日 ), 全 国 主 要 水 系 148 个 水 质 自 动 监 测 断 面 中, 共 监 测 了 143 个, 其 中 Ⅰ 类 水 质 断 面 为 17 个, 占 12%;Ⅱ
沈阳药科大学硕士学位论文新型抗心绞痛药物雷诺嗪的合成工艺研究及其衍生物的合成姓名 : 陆文超申请学位级别 : 硕士专业 : 药物化学指导教师 : 郭春 ; 方林 2003.6.1 新型抗心绞痛药物雷诺嗪的合成工艺研究及其衍生物的合成 作者 : 陆文超 学位授予单位 : 沈阳药科大学 被引用次数 :
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33 3 OOD & MACHINERY 217 3 食品与机械 Vol.33No.3 Mar.217 DOI:1.13652/j.issn.13-5788.217.3.29 Extractionprocessoptimizationandanticanceractivityofmaizeyelowpigment YU Hui LIU Mei-jia LIU Jian-li CAO Xiang-yu
化学实验基本操作-加热、干燥和冷却.doc
1 [ ] [ ] 1 2 1 2 3 4 5 6 [ ] 7 2 [ ] [ ] 8 9 10 [ ] 3 [ ] [ ] 1 2-2 11 12 13 14 15 16 17 [ ] g) = 100% 5.0g 18 19 4 [ ] [ ] 20 21 [ ] 22 23 24 25 5 [ ] [ ] 26 27 [ ] - 28 6 [ ] [ ] 29 30 31 32 33 34 2-31
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
编号：
编 号 : 企 业 内 高 技 能 人 才 培 养 评 价 实 施 方 案 ( 仅 适 用 于 企 业 特 有 行 业 特 有 工 种 ) 实 施 单 位 ( 公 章 ) 申 报 日 期 年 _ 月 日 1 企 业 内 高 技 能 人 才 培 养 评 价 项 目 实 施 方 案 申 报 表 项 目 名 称 等 级 项 目 性 质 课 时 申 报 单 位 联 系 人 通 讯 地 址 电 话 手 机 电
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
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微生物学通报 MAR 20, 2009, 36(3): 416~426 Microbiology tongbao@im.ac.cn 研究快报 2009 by Institute of Microbiology, CAS MALDI-TOF 质谱技术分析与鉴定病原细菌研究 1,2 其布勒哈斯 2* 田世民 2 邹明强 1 贺银凤 2 陈艳 2 赵贵明 (1. 010018) (2. 100123) 摘要
张 琳 段 紫 英 耿 欣 李 克 刚 魏 宗 胡 颂 平 从 蛇 足 石 杉 的 培 养 组 织 中 分 离 内 生 真 菌 利 用 传 统 方 法 观 察 菌 落 的 外 观 形 态 对 照 真 菌 鉴 定 手 册 对 其 进 行 鉴 定 通 过 马 铃 薯 培 养 基 培 养 菌 体 通 过 三 点 接 种 分 区 划 线 的 方 法 进 行 分 离 纯 化 利 用 显 微 摄 影 的 技 术
苏州大学硕士学位论文叶酸靶向紫杉醇纳米脂质体的制备及其生物学效应的研究姓名 : 汪梅花申请学位级别 : 硕士专业 : 放射医学指导教师 : 许玉杰 20080501 叶酸靶向紫杉醇纳米脂质体的制备及其生物学效应的研究 作者 : 汪梅花 学位授予单位 : 苏州大学 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/thesis_y1296729.aspx
