提纲 认识 为什么 思路 做什么 做法 怎么做

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1 科研课题的设计与申报 陕西中医学院附属医院王梅陕西中医学院附属医院王梅

2 提纲 认识 为什么 思路 做什么 做法 怎么做

3 一 认识 ---- 从需求出发 病人需要 医生需要 自身发展 病人需要以人为本 以疗效为核心 健康需要 产业需要 保障需要

4 一 认识 科学研究的分类 基础研究 : 探索未知 认识自然现象 揭示客观规律为主要目的, 是新技术新发明的源泉和先导, 对科学有带动作用 应用基础研究 : 围绕重大或广泛的应用目标, 探索新原理新方法, 开拓新领域的定向性研究, 是对基本科学数据的系统考察 采集 评价 鉴定, 并进行综合 分析 探索基本规律的研究, 它可以帮助人们改造世界 应用研究 : 有明确的目的 为进一步发展某门技术 提高生产率 拓宽应用领域 开辟新的生产方向的研究活动 开发研究 : 从事生产的技术改造 工艺革新 产品更新等科学活动, 是科学知识转化为生产力的主要环节

5 二 思路 ---- 标书设计中的组织问题 诺贝尔奖获得者说 : 伴随他的一辈子科研生涯中, 痛苦的事情是写申请书 重点体现 : 表达通俗而科学, 告诉阅者你是如何思考问题的 ; 通过归纳从新的角度和高度对所研究的问题提出新的观点 ; 问题主次区分清楚 ; 研究所需技术掌握准确 ; 对研究内容准确而令人信服的阐述

6 二 思路 ---- 选题方法 结合自身优势选择研究领域或方向 利用自己的长处, 确立合理的研究方向 决不可不顾自己的研究基础, 盲目追赶潮流 拓宽思路, 既熟悉本研究领域又熟悉邻近研究领域的进展 重 专 轻 博 限制思考范围, 难以超常, 多谋求领域内或与其他领域间的交叉, 学科必须彼此渗透 启发, 当前大学科群的发展模式也因于此 加强合作, 利用别人的优势充实和发展自己 个人之间 实验室之间 部门之间 团队之间要加强合作 关键在于具有创新的思想和解决问题的思维 丰富思维方法 类比法 比较法 假说法 联想法 反向思维等

7 二 思路 ---- 研究方案的撰写 常出现的问题 : 不合理 不可行 不具体 非最佳注意的要点 : 1 新思路与方法的使用要清楚而具体, 写出理由和优势, 不能使审议人去揣摸你的意图或对你应用这些知识的能力产生怀疑 2 研究方案紧扣研究目的, 提出可能遇到的困难和解决的方案, 不可存在侥幸心理掩饰困难 3 不可无重点地罗列出全部方法和研究内容而叙述不清 太轻易将审议人的注意点从主题上引到烦琐的细节上来, 影响项目的审议

8 二 思路 ---- 确立研究内容 围绕研究目标而分解, 以解决目标中的上下游问题为主线, 分层布局研究内容中的每一层次设计要体现出解决目标中的什么问题分清主次研究内容, 突出重点攻破的内容

9 二 思路 ---- 方法 技术路线和方 案 对象选择要根据研究内容的需求而定实验方法或技术要稳定, 经典与前沿结合, 以解决问题为目的指标选择要切中研究过程的关键环节, 指标所针对的问题明确, 少而精实验 ( 或分析 ) 单元简明, 相互之间联系紧密, 环环相扣

10 二 思路 ---- 拟解决的关键问题 研究领域的理论问题 : 由于该问题没有解决使理论或其应用停滞不前, 该问题的解决对基础理论的发展或应用产生重大思路或技术的影响, 或诱生出新的学科分支 研究领域的技术问题 : 该技术的应用方法 适应范围或组合条件等问题的解决, 将推动应用科学的跨越式发展等

11 二 思路 ---- 凝练特色与创新 着重于与他人的主要不同之处和本项目自身的特点 ; 创新并非一定无人问津, 也可能是老问题从新的角度产生的新观念初级创新 ( 原始性创新 ), 其根本在于所研究领域中基本概念上的建立或突破 ( 新的学术观点 ) 新方法的建立( 新的研究手段 ) 或在新的领域内的拓展 ( 包括交叉学科新的生长点等 ) 这是基础研究的灵魂 次级创新 ( 跟踪性 改良性创新 ), 主要表现在对现有概念 方法等的补充和改良 应用基础研究 部分应用研究的工作多属于此

12 二 思路 ---- 预期研究成果 在理论上提出什么问题 深化什么问题在技术上发展什么 解决什么问题在指导应用上找到什么切入点 建立什么样的方案或规范等如 : 研究领域的理论问题 由于该问题没有解决使理论或其应用停滞不前, 该问题的解决对基础理论的发展或应用产生重大思路或技术的影响, 或诱生出新的学科分支 研究领域的技术问题 该技术的应用方法 适应范围或组合条件等问题的解决, 将推动应用科学的跨越式发展等

13 三 做法 范例解读 十八反 理论 十九畏 理论 中药配伍禁忌理论研究进展? 配伍禁忌的现代证实结果?

14 中药配伍禁忌临床应用 甘遂半夏汤骨碎补丸海藻玉壶汤

15 中药配伍禁忌临床应用 甘遂半夏汤 胎产丸 木香分气丸

16 中药配伍禁忌临床应用 摩革丸 丁香丸 化徽回生丹 胜金金延丹

17 中药配伍禁忌的创新 中药 十八反 配伍 安全性评价 1. 单次不同剂量给药毒性评价 2. 多次不同剂量给药毒性评价 3. 安全药理评价 相互验证 互为补充 快速筛查毒性评价 1. 高内涵评价 2. 高通量筛选 3. 模式生物评价 反与不反? 物质基础 1. 化学组学 2. 药物代谢组学 量 - 毒 - 效关系 1. 量 - 毒关系 2. 量 - 效关系 毒效机制 1. 体内相互作用 2. 生物学机制 为什么反? 配伍减效 反药配伍减效 反药配伍宜忌转化 宜忌转化 1 妨害治疗药效学评价 1 临床文献回顾性调查 2 化学实质研究 3 生物学基础研究 2 适宜病证效应评价 3 宜忌条件与配伍关系 17 阐释科学内涵 提供临床指导

18 课题设置 课题一 基于 十八反 的中药配伍禁忌数据挖掘与知识发现研究 中药 十八反 反药配伍 彼我交雠 致毒增毒 课题二 半蒌贝蔹及攻乌 配伍关系与毒效表征 课题三 藻戟遂芫俱战草 配伍关系与毒效表征 课题四 诸参辛芍叛藜芦 配伍关系与毒效表征 课题六 基于临床应用的中药 十八反 宜忌条件及配伍关系研究 反药配伍相反相制 配伍减效 课题五 基于妨害治疗的中药 十八反 配伍基础研究 反药配伍 相激相成 宜忌转化 18

19 研究目标 1 客观界定 十八反 中药反与不反 ; 2 阐明 十八反 致毒 / 增毒特点和机理 ; 3 揭示 十八反 药对配伍前后的物质基础, 建立化学物质库 ; 4 客观表征 十八反 量 - 毒 - 效关系 ; 5 阐明反药同方配伍的宜忌转化条件; 6 创建客观表征中药配伍禁忌的研究模式 方法和技术体系 19

20 拟解决关键科学问题 1 客观界定和明确回答中药 十八反 各反药组合 反 与 不反 2 系统揭示中药 十八反 各反药组合 反 的化学物质与生物学基础 3 科学阐明中药 十八反 代表性反药组合同方配伍妨害治疗与宜忌转化 4 阐明以 十八反 为代表的中药配伍禁忌理论的科学内涵 20

21 研究内容 1. 基于 十八反 的中药配伍禁忌数据挖掘与知识发现研究 主要对 十 八反 中药古今文献信息进行收集与考证 ; 2. 启动建立融数据存贮 展示 汇交 共享 分析 管理等功能为一体的管理平台 ; 3. 建立中药 十八反 毒性评价体系, 开展乌头组 甘草组 藜芦组各反药配伍组合的毒性评价研究 ; 4. 初步建立中药 十八反 药味与反药配伍组合样品制备及化学物质库 ; 5. 启动中药 十八反 代表性反药配伍组合及方剂妨害治疗效应基础研究 ; 6. 从临床文献分析角度, 考察分析中药十八反配伍应用的宜忌条件

22 ( 一 ) 中药 十八反 配伍禁忌数据挖掘与知识发现研究 1. 深入挖掘考证了以十八反为核心的中药配伍禁忌的衍化过程和特征 理论发展和医家临床实践经验 2. 构建了含反药本草文献库 十八反化学物质库 方剂数据库 中药数据库 中药配伍禁忌相关资源的中药配伍禁忌数据库 3. 通过适宜的数据挖掘方法, 挖掘发现了十八反区别于常用药对的药性特点 历史分布 ; 以及反药同方的病证特点和配伍必要环境 4. 通过数据挖掘研究配伍禁忌的年代分布和相反特点 ; 建立了项目专属网站, 实现了统一的项目管理 数据汇交和数据挖掘研究等功能 22

23 1. 文献数据的收集考证及数据库建立 收集整理古今文献 汉代至清本草书籍 78 部 十八反衍化相关记载 704 条 历代方剂 首 古代临证书籍 281 部 十八反配伍方剂占总方 1.46% 60 年来十八反文献报道 4500 余篇 30 位国医大师经验报道 3871 余篇 12 家医院处方 首含反药组对专利 135 项 反映了十八反现代研究现状和特点 三甲医院十八反同方配伍有 0.263% 县乡医院基层医院十八反同方配伍占 0.347% 探讨其来源 范围 现状和有争议的问题 23

24 2. 十八反 药性特点 数据挖掘 通过关联分析表明中药配伍禁忌药组的药性组合与常用药对具有明显差异 毒性 性 甘遂 大戟 芫花 海藻 ; 藜芦 ; 川乌 草乌 附子提示应区分药物本身的毒性与配伍之后的毒性 非寒即热, 禀性偏颇 味苦 辛居多, 均可开泄 祛邪, 提示此类药物大多以攻逐祛邪为能 ; 归经功能.5 乌头药对宋金元附子药对 明 以归脾 肝 肾经者居多祛寒 攻逐痰饮水湿等病邪 川乌药对草乌药对 藜芦药对 清 隋唐 隋唐以前 -1.0 甘草药对 药对 配伍禁忌组合 Dimension 年代 Dimension 1 24

25 ( 二 ) 中药 十八反 配伍禁忌基础研究 1 明确回答中药 十八反 反 与 不反 2 中药 十八反 反 的共性规律及其特征 25

26 1. 明确回答 十八反 反 与 不反 基于经典毒理学与毒性快速筛查试验 配伍前后毒效物质比较 降效减效等研究 : 中药 十八反 所含 18 对反药组合中 17 对为相反, 基本阐明其禁忌特征及其物质基础 总结形成中药 十八反 配伍禁忌共有特征与共性规律 26

27 中药 十八反 研究的三个统一 十八反 涉及药材均统一基源 / 产地 / 饮片等, 质量符合 2010 版 中国药典 项下标准 中药饮片 / 药对 遵从汤剂 / 散剂不同应用方式设计供试样品的制备方案 毒效评价引导下的逐级分离 / 分析 水提取物 醇提取物 统一样品制备方法 初生代谢产物多糖 蛋白 核酸 脂类等 十八反 中药饮片毒 - 效部位 ( 群 ); 毒 - 效成分群 建立化学物质库 27 次生代谢产物萜类 黄酮类 生物碱类等 十八反 药对配伍前后毒 - 效成分变化分析 阐明中药 十八反 配伍致毒 / 增毒的物质基础

28 统一药材 十八反 涉及中药品种 基源 产地 饮片及用量标准 序号 1 中药品种 乌头附子 基源植物及药用部位 为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaeli 的干燥母根及子根 18 白芍 为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora 的干燥根 安徽亳州 藜芦 28 为百合科藜芦 Veratrum nigrum 的干燥根及根茎 吉林辽源 产地 四川江油 药典用量 (g) 2 半夏为天南星科植物半夏 Pinellia ternata 的干燥块茎江苏泰州 瓜蒌为葫芦科植物栝楼 Trichosanthes kirilowii 的成熟果实江苏洪泽 川贝母浙贝母 为百合科植物川贝母 Fritillaria cirrhosa 的干燥鳞茎为百合科植物浙贝母 F. thunbergii 的干燥鳞茎 四川康定浙江磐安 5 白蔹为葡萄科植物白蔹 Ampelopsis japonica 的干燥块根安徽六安 白及为兰科植物白及 Bletilla striata 的干燥块茎贵州凯里 甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis 的干燥根及根茎宁夏盐池 海藻为马尾藻科植物海蒿子 Sargassum pallidum 的干燥燥体山东烟台 大戟为大戟科植物大戟 Euphorbia pekinensis 的干燥根江苏南京 芫花为瑞香科植物芫花 Daphne genkwa 的干燥花蕾安徽铜陵 甘遂为大戟科植物甘遂 Euphorbia kansui 的干燥块根山西新锋 人参为五加科植物人参 Panax ginseng 的干燥根及根茎吉林通化 北沙参为伞形科植物珊瑚菜 Glehnia littoralis 的干燥根山东莱阳 丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorriza 的干燥根及根茎江苏洪泽 苦参为豆科植物苦参 Sophora flavescens 的干燥根陕西延安 玄参为玄参科植物玄参 Scrophularia ningpoensis 的干燥根浙江磐安 细辛为马兜铃科植物北细辛 Asarum heterotropoides 的根及根茎辽宁本溪

29 统一毒效评价研究方法并制定 SOP 单味药评价 反药组合评价 快速毒性筛查 单药单次给药 单次给药 多次给药 安全性评价 特定部位毒理 特殊毒性 按 2 因素 2 水平析因设计验证 按 2 因素 7 水平均匀设计药组配伍

30 标准操作规程 (SOP) 的制定 1 单次给药毒性试验的标准操作规程 2 蓄积毒性试验的标准操作规程 3 特定部位毒性试验的标准操作规程 4 安全药理试验的标准操作规程 5 多次给药毒性试验的标准操作规程 6 特殊毒性试验的标准操作规程 7 供试品管理 8 实验用品管理 9 归档资料管理 10 毒性评价供试样品制备标准操作规程 化学成分提取 分离标准操作规程 12 化学成分定性与定量分析标准操作规程

31 十八反 各反药组合阶段性评价结果 反药组合 配伍毒效表现 结论 致毒增毒降效减效反 / 不反 毒性暴露 1. 半夏 - 川乌??? 2. 瓜蒌 - 川乌 + +?? 反 3. 贝母 - 川乌 +? 反 4. 白蔹 - 川乌 反 5. 白及 - 川乌 +? 反 6. 芫花 - 甘草 ? 反 明显降低川乌的急性毒性, 延迟川乌镇痛和强心药效 影响川乌急性毒性, 对川乌药效无明显影响 明显降低川乌的急性毒性, 对其镇痛和强心药效仅表现为延迟其起效时间 影响川乌急性毒性, 降低川乌镇痛药效强度, 对抗心衰药效仅表现为延迟其起效时间 对川乌镇痛 抗心衰药效表现为延迟其起效时间 泌尿系统 消化系统 生殖系统 中枢神经系统 7. 大戟 - 甘草 ? 反泌尿系统 消化系统 心血管系统 8. 甘遂 - 甘草 ? 反消化系统 泌尿系统 心血管系统 9. 海藻 - 甘草 + ++?? 反 中枢神经系统 消化系统 心血管系统 31

32 反药组合 配伍毒效表现结论中药 十八反 各反药组合阶段性评价结果 致毒增毒降效减效反 / 不反 10. 藜芦 - 人参 ? 反 11. 藜芦 - 丹参 ++ ++?? 反 毒性暴露 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 12. 藜芦 - 白芍 13. 藜芦 - 苦参 ++ ++?? 反 ++ +?? 反 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 14. 藜芦 - 北沙参 + +?? 反 15. 藜芦 - 南沙参 + +?? 反 16. 藜芦 - 玄参 + +?? 反 17. 藜芦 - 细辛 + -?? 反 18. 藜芦 - 党参 + -?? 反 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 中枢神经系统 心肌 中枢神经系统 心肌 肝脏 脾脏 肾脏和造血组织 32

33 2. 中药 十八反 反 的共性规律及其特征 共性规律及其特征之一 致毒 / 增毒配伍禁忌共性规律及其特征 具体表现在 1. 药物相互作用促进毒性物质的溶出释放而增毒 2. 化学成分间相互转化致使毒性成分含量增加而增毒 3. 药物相互作用产生新的毒性成分而致毒 4. 药物体内代谢产生毒性产物而致毒 33

34 共性规律及其特征之二 降效 / 减效配伍禁忌共性规律及其特征 具体表现在 5. 药物相互作用抑制有效物质的溶出释放而降效 6. 药物相互作用导致某有效物质的破坏或失活而减效 34

35 共性规律及其特征之三 毒 - 效复合作用禁忌共有规律及其特征 具体表现在 7. 药物相互作用对药物体内过程产生不利影响 8. 药物与机体相互作用对药物代谢酶活性及其调控产生不利影响 35

36 ( 五 ) 中药配伍禁忌研究方法与技术体系 围绕 十八反 中药配伍禁忌的科学表征, 探索 性地建立了客观适宜的中药反药组合致毒 增毒 减效 降效的毒 - 效 - 物质 - 剂量系统性功能技术平台, 形成了中药配伍禁忌研究方法学及其技术体系 36

37 课题的设计与申报的体会 明确招标目的与领域 梳理自身基础与优势 突出问题关键与意义 凝练理论假说与目标 把握核心内容与手段 表达语言通俗与科学

38 近几年论文的变化 评价方法 : 正交设计法 多指标综合加权评分法 一测 多评法 星点设计效应面法 聚类分析 实验方向 : 药剂学 物理药剂学 ( 理化性质 热力学 ) 生 物药剂学 ( 药动学 药效学 ) 研究内容 : 含量测定 质量标准制定 物质基础研究 释药 特征 分子机理研究 剂型 : 胶囊 颗粒等传统剂型 纳米粒凝胶 生物粘附 胶囊 微乳等新型制剂 测定方法 : 紫外 高相液相 指纹图谱 质谱法等

39 近几年论文的变化 时珍国医国药 不同盐浓度影响中药外洗方中小檗碱透皮吸收的体外实验研究黄芪等中药总黄酮与金属元素含量测定及聚类分析红参膨化炮制实验研究基于主成分及相关性分析的益母草综合质量评价均匀设计法优化珍珠草中总多酚超声波提取工艺研究利用沉淀聚合法制备胡黄连苷 _ 分子印迹聚合物的研究麻黄汤超微饮片与传统饮片药效学剂量对比研究三叶青藤抗炎活性部位研究木聚糖酶法提取温莪术挥发油关键因子研究山楂叶提取物微球制备工艺及释药机理的研究芍药苷的水解动力学研究四物汤补血调经作用的物质基础及分子机理的研究进展天然中草药防晒作用的筛选研究无机陶瓷膜超滤精制连花清瘟颗粒的工艺研究星点设计 _ 效应面法及正交实验设计优化淫羊藿提取工艺的比较研究中草药清除超氧自由基的极谱法研究中草药中微量钼的离子液体增敏水杨基荧光酮测定中药膨化技术用于生脉胶囊的可行性研究中药有效成分的酶法生物转化

40 近几年课题的变化 查询国家自然科学基金医学科学部项目成果的名称 年度 共有 中药类相关 关键词 药材质量控制, 有效成分 活性成分, 药动学, 活性成分的物质基础研究,

41 衷心感谢各位的聆听! 敬请批评指正! 谢谢!

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