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1 生 态 学 杂 志 Chinese Journal of Ecology 摇 2012,31(10): 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 * 盐 度 对 青 蛤 抗 氧 化 酶 活 性 及 生 长 的 影 响 ** 李 子 牛 摇 林 听 听 摇 么 宗 利 摇 来 琦 芳 摇 陆 建 学 摇 王 摇 慧 摇 周 摇 凯 ( 中 国 水 产 科 学 研 究 院 东 海 水 产 研 究 所, 盐 碱 地 渔 业 工 程 技 术 研 究 中 心, 上 海 ) 摘 摇 要 摇 为 了 弄 清 盐 度 对 青 蛤 ( Cyclina sinensis) 生 长 及 免 疫 相 关 酶 的 影 响, 以 期 探 讨 其 在 不 同 盐 度 环 境 下 养 殖 的 可 能 性, 本 文 研 究 了 青 蛤 在 盐 度 ( 对 照 ) 和 35 下, h 内 鳃 外 套 膜 和 肝 胰 腺 中 抗 氧 化 酶 ( 超 氧 化 物 歧 化 酶 ( SOD) 和 过 氧 化 氢 酶 (CAT)) 的 活 性 变 化 ; 同 时 研 究 了 不 同 盐 度 下 青 蛤 养 殖 2 个 月 的 月 增 长 率 和 增 重 率 变 化 结 果 表 明 : 青 蛤 不 同 组 织 中 SOD 和 CAT 活 性 以 肝 胰 腺 最 高, 外 套 膜 次 之, 鳃 最 低 盐 度 10 时, 鳃 中 的 SOD 活 性 于 3 h 显 著 高 于 对 照 盐 度 (P<0. 05); 外 套 膜 中 的 SOD 活 性 于 h,cat 活 性 于 6 12 h 与 对 照 有 显 著 差 异 (P<0. 05); 肝 胰 腺 中 的 SOD 活 性 于 h,cat 活 性 于 3 6 h 显 著 高 于 对 照 (P<0. 05) 盐 度 15 时, 仅 肝 胰 腺 中 的 SOD 和 CAT 活 性 于 3 h 显 著 高 于 对 照 (P<0. 05) 而 盐 度 35 时, 鳃 中 的 SOD 活 性 于 3 6 h,cat 活 性 于 3 h 显 著 高 于 对 照 (P<0. 05); 外 套 膜 中 的 SOD 和 CAT 活 性 于 h 与 对 照 有 显 著 差 异 (P<0. 05); 肝 胰 腺 中 的 SOD 和 CAT 活 性 几 乎 整 个 时 间 段 均 与 对 照 有 显 著 差 异 (P<0. 05) 此 外, 盐 度 35 时 的 SOD 和 CAT 活 性 波 动 幅 度 显 著 高 于 盐 度 10(P<0. 05) 月 增 长 率 和 增 重 率 方 面 : 盐 度 15 较 快, 与 对 照 无 显 著 差 异 (P>0. 05), 各 月 间 也 无 显 著 差 异 (P>0. 05); 盐 度 10 则 显 著 低 于 盐 度 15 和 对 照, 并 且 盐 度 10 第 2 月 份 显 著 高 于 第 1 月 份 (P<0. 05); 而 盐 度 35 则 极 缓 慢, 各 月 间 也 无 显 著 差 异 (P>0. 05) 研 究 表 明, 青 蛤 受 盐 度 胁 迫 时 其 抗 氧 化 酶 的 波 动 基 本 于 胁 迫 后 的 前 24 h 内 完 成, 青 蛤 对 低 盐 的 耐 受 性 强 于 高 盐, 盐 度 高 于 35 时 青 蛤 抗 氧 化 酶 波 动 剧 烈, 且 生 长 极 慢 关 键 词 摇 青 蛤 ; 盐 度 ; 生 长 ; 抗 氧 化 酶 中 图 分 类 号 摇 S 摇 文 献 标 识 码 摇 A 摇 文 章 编 号 摇 (2012) Effects of water salinity on the antioxidant enzyme activities and growth of clam Cyclina sinensis. LI Zi 鄄 niu, LIN Ting 鄄 ting, YAO Zong 鄄 li, LAI Qi 鄄 fang, LU Jian 鄄 xue, WANG Hui, ZHOU Kai ** ( Engineering Research Center for Saline 鄄 alkali Water Fisheries, East China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Shanghai , China). Chinese Journal of Ecology, 2012, 31(10): Abstract: In order to clarify the effects of water salinity on the growth and immune enzymes of clam Cyclina sinensis, and accordingly, to explore the possibility of breeding C. sinensis in differ 鄄 ent salinity environment, the individuals of the clam were undergone different salinity stress (10, 15, 25 (control), and 35), with the antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD) and cat 鄄 alase (CAT) in gill, mantle, and hepatopancreas at 0, 3, 6, 12, 24, 48, and 96 h of salinity stress measured respectively. The monthly length 鄄 and weight gain rates were also measured after the individuals cultured under different salinity stress for two months. In different tissues of the clam, hepatopancreas had the highest antioxidant enzyme activities, followed by mantle, and gill. For the individuals under salinity 10, the SOD activity in gill at 3 h and in mantle and hepa 鄄 topancreas at 3, 6, 12, and 24 h, as well as the CAT activity in mantle at 6 and 12 h and in hepatopancreas at 3 and 6 h, was significantly higher than that of the control (P <0. 05); for the individuals under salinity 15, only the SOD and CAT activities in hepatopancreas at 3 h were significantly higher than those of the control (P<0. 05); whereas for the individuals under salini 鄄 * 中 央 级 公 益 性 科 研 院 所 基 本 业 务 费 专 项 (2008T01) 和 上 海 市 科 委 技 术 标 准 专 项 (10DZ ) 资 助 ** 通 讯 作 者 E 鄄 mail: zhoukai69@ 126. com 收 稿 日 期 : 2012 鄄 06 鄄 10 摇 摇 接 受 日 期 : 2012 鄄 07 鄄 23

2 2626 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 杂 志 摇 第 31 卷 摇 第 10 期 摇 ty 35, the SOD activity in gill at 3 and 6 h, in mantle at 3, 6, 12, and 24 h, and in hepatopan 鄄 creas at 0, 3, 6, 12, 24, 48, and 96 h, as well as the CAT activity in gill at 3 h, in mantle at 3, 6, 12, and 24 h, and in hepatopancreas at 3, 6, 24, 48, and 96 h, was significantly higher than that of the control (P <0. 05). In addition, the variation extents of the SOD and CAT activ 鄄 ities under salinity 35 were significantly higher than those under salinity 10 ( P < 0. 05). The length 鄄 and weight gain rates of the individuals under salinity 15 were greater, but had no signifi 鄄 cant differences with the control, and also, had no differences between the first month and the second month (P>0. 05). Under salinity 10, the length 鄄 and weight gain rates were significantly lower than those under salinity 15 and of the control, and had significant differences between the first and second months (P<0. 05). Under salinity 35, both the length gain rate and the weight gain rate were the lowest, and had no significant differences between the first and second months. In conclusion, when stressed by salinity, the C. sinensis should take about 24 h for the restora 鄄 tion of its antioxidant enzyme activities. C. sinensis had a stronger tolerance against low salinity than against high salinity. When the salinity was at 35, the antioxidant enzyme activities of the clam varied greatly, and the growth was almost stopped. Key words: Cyclina sinensis; salinity; growth; antioxidant enzyme. 摇 摇 盐 度 作 为 水 环 境 的 一 个 重 要 理 化 因 子, 与 水 生 动 物 的 生 长 发 育 渗 透 调 节 繁 殖 孵 化 能 量 代 谢 免 疫 防 御 等 生 理 过 程 密 切 相 关 ( 王 桂 忠 和 林 淑 君, 2000; Pechenik et al., 2000; Talbot & Lawrence, 2002) 盐 度 骤 变 往 往 引 发 多 种 生 理 应 激 反 应 (Choi et al.,2008), 并 常 伴 随 着 活 性 氧 ROS(reactive oxy 鄄 gen species) 的 瞬 间 过 量 产 生 (Holmblad & S 觟 derh 覿 ll, ) 过 量 的 ROS 如 超 氧 自 由 基 ( O 2 ) 过 氧 化 氢 (H 2 O 2 ) 羟 自 由 基 ( OH) 单 线 态 氧 分 子 ( 1 O 2 ) 等 除 了 氧 化 杀 伤 (oxidative killing) 入 侵 的 病 原 外, 也 对 机 体 自 身 产 生 损 害, 如 可 使 类 脂 中 的 不 饱 和 脂 肪 酸 发 生 过 氧 化 反 应, 破 坏 细 胞 膜 的 结 构, 降 解 DNA 等 (Xing et al.,2008) 而 抗 氧 化 酶 系 统 ( 超 氧 化 物 歧 化 酶 (SOD) 过 氧 化 氢 酶 (CAT) 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 (GPX) 等 ) 在 清 除 过 量 ROS, 缓 解 自 身 损 害 方 面 发 挥 着 重 要 的 作 用 (Pipe et al.,1994) 因 此, 抗 氧 化 酶 系 统 是 水 生 动 物 应 对 盐 度 等 环 境 胁 迫 时 的 重 要 免 疫 反 应 系 统 青 蛤 ( Cyclina sinensis Gmelin,1791), 隶 属 于 瓣 鳃 纲 (Lamellibranchia), 帘 蛤 目 ( Veneroida), 帘 蛤 科 (Veneridae), 青 蛤 属 ( Cyclina), 是 中 国 南 北 沿 海 滩 涂 常 见 的 双 壳 贝 类 因 其 味 道 鲜 美, 营 养 价 值 高 生 长 快 速 ( Liu et al.,2002) 滤 水 效 果 好 ( 王 慧 等, 2008) 抗 逆 性 强 耐 盐 范 围 广 (8 ~ 37, 最 适 15 ~ 25) ( 王 如 才 等,1993) 耐 碱 能 力 强 (0 ~ 40 mmol L -1 ) ( 林 听 听 等,2012a) 等 特 点, 深 得 沿 海 贝 类 养 殖 户 的 青 睐 然 而, 近 年 来, 长 江 河 口 地 区 的 盐 度 常 因 暴 雨 或 浮 游 植 物 优 势 种 群 的 增 减 而 发 生 骤 变 ( 栾 青 杉 等,2007), 从 而 影 响 了 青 蛤 的 生 长 免 疫 性 腺 发 育 等 ( 李 晓 英 等,2010; 宋 欣 等,2010), 甚 至 死 亡 ( 孙 国 铭 等,2004) 为 了 解 青 蛤 在 不 同 盐 度 条 件 下 生 理 生 化 及 免 疫 防 御 的 响 应 状 况, 本 研 究 拟 从 生 长 生 理 免 疫 毒 性 繁 育 等 多 方 面 系 统 研 究 青 蛤 对 盐 度 的 响 应 机 制 本 文 就 免 疫 生 理 角 度 研 究 了 不 同 盐 度 对 青 蛤 生 长 及 对 鳃 外 套 膜 和 肝 胰 腺 中 抗 氧 化 酶 SOD 和 CAT 活 性 的 影 响 1 摇 材 料 与 方 法 1 郾 1 摇 实 验 材 料 养 殖 青 蛤 所 需 的 底 泥 取 自 自 然 海 区, 经 煮 沸 后 晒 干, 再 经 120 目 的 筛 绢 网 过 滤, 铺 于 暂 养 池 中, 厚 度 约 为 5 cm, 暂 养 池 中 注 入 曝 气 自 来 水 与 盐 卤 配 制 的 盐 度 为 25 的 人 工 海 水 ( 水 温 20 依 1 益 ), 静 置 过 夜 试 验 青 蛤 取 自 浙 江 省 温 岭 市 大 洋 渔 业 应 用 技 术 研 究 所 人 工 繁 育 的 2 龄 贝, 壳 长 20 郾 42 依 0 郾 25 mm, 体 质 量 2 郾 18 依 0 郾 14 g 暂 养 期 间, 持 续 微 充 气, 每 天 换 水 1 次, 换 水 量 为 1 / 2, 每 天 投 喂 牟 氏 角 毛 藻 ( Chaetoceros mueller) 和 微 绿 球 藻 ( Nannochloropsis oculata) 混 合 藻 液, 每 周 更 换 底 泥 一 次 暂 养 2 周 后, 选 择 健 康 活 性 强 规 格 基 本 一 致 的 个 体 进 行 盐 度 梯 度 试 验 1 郾 2 摇 实 验 设 计 预 实 验 结 果 表 明, 青 蛤 在 盐 度 <8 或 盐 度 >37 时 开 始 出 现 死 亡, 盐 度 为 8 ~ 37 时, 无 死 亡 个 体 出 现 本 试 验 设 置 4 个 盐 度 梯 度 ( 和 35), 试 验 用 水 用 曝 气 自 来 水 和 盐 卤 配 制 每 个 盐 度 梯 度 设 3 个

3 李 子 牛 等 : 盐 度 对 青 蛤 抗 氧 化 酶 活 性 及 生 长 的 影 响 平 行, 每 个 平 行 50 粒 青 蛤 试 验 于 70 cm 伊 50 cm 伊 20 cm 的 塑 料 槽 中 进 行, 塑 料 槽 预 先 铺 有 5 cm 厚 的 底 泥 青 蛤 暂 养 后 直 接 转 到 已 配 好 盐 度 的 塑 料 槽 中, 试 验 期 间 的 养 殖 管 理 条 件 于 暂 养 期 间 一 致 试 验 开 始 后 分 别 于 h 取 样, 每 槽 随 机 取 4 粒, 剩 余 的 青 蛤 继 续 养 殖 2 个 月, 每 月 测 量 青 蛤 的 壳 长 和 体 重 1 郾 3 摇 样 品 处 理 与 酶 活 性 测 定 取 样 的 青 蛤 去 壳 取 其 鳃 丝 外 套 膜 和 肝 胰 腺, 经 预 冷 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( PBS: 氯 化 钠 8 郾 0 g, 氯 化 钾 0 郾 2 g, 磷 酸 氢 二 钠 2 郾 9 g, 磷 酸 二 氢 钾 0 郾 2 g, 蒸 馏 水 1000 ml,ph 7 郾 2) 涮 洗 后, 于 -80 毅 C 冻 存 待 96 h 的 样 品 采 齐 后, 统 一 化 冻 用 于 酶 活 测 定 采 集 的 组 织 化 冻 后 剪 碎, 加 入 9 倍 于 其 组 织 重 量 的 PBS, 用 Kinematica 匀 浆 机 冰 浴 6000 r min -1 匀 浆 2 min 鳃 丝 和 外 套 膜 匀 浆 液 于 4 毅 C 3500 r min -1 离 心 10 min, 取 上 清 ; 肝 胰 腺 匀 浆 液 于 4 毅 C 3500 r min -1 离 心 10 min, 上 清 液 再 于 4 毅 C 8000 r min -1 离 心 10 min, 取 中 层 液 ( 上 层 为 油 脂, 下 层 为 组 织 碎 片 液 ); 用 于 抗 氧 化 酶 活 性 测 定 酶 活 性 测 定 均 采 用 南 京 建 成 试 剂 盒 检 测, 相 应 操 作 参 照 说 明 书 进 行 SOD 活 性 单 位 定 义 为 每 毫 克 组 织 蛋 白 在 1 ml 反 应 液 中 SOD 抑 制 率 达 50% 时 所 对 应 的 SOD 量 为 1 个 活 性 单 位 ;CAT 活 性 单 位 定 义 为 每 毫 克 组 织 蛋 白 每 秒 钟 分 解 1 滋 mol 的 H 2 O 2 的 量 为 一 个 活 性 单 位 组 织 蛋 白 含 量 的 测 定 采 用 考 马 斯 亮 蓝 G 鄄 250 法 (Bradford,1976), 以 牛 血 清 白 蛋 白 为 标 准 蛋 白 绘 制 标 准 曲 线, 根 据 组 织 蛋 白 的 OD 590nm 的 吸 光 值 和 标 准 曲 线, 计 算 出 组 织 蛋 白 的 含 量 (mg ml -1 ) 1 郾 4 摇 增 长 率 和 增 重 率 的 测 定 用 游 标 卡 尺 测 量 青 蛤 的 壳 长, 电 子 天 平 测 量 青 蛤 的 体 重 月 增 长 率 和 增 重 率 按 如 下 公 式 计 算 : 月 增 长 率 = ( L n -L n-1 ) / L n-1 伊 100% ; 月 增 重 率 = ( W n - W n-1 ) / W n-1 伊 100% 式 中,L n L n-1 分 别 为 第 n 个 月 和 第 n-1 月 的 壳 长 ;W n W n-1 分 别 为 第 n 个 月 和 第 n-1 月 的 湿 重 1 郾 5 摇 数 据 分 析 所 得 数 据 以 3 个 平 行 组 数 据 的 平 均 值 依 标 准 差 (mean 依 SD) 表 示, 采 用 SPSS 16 郾 0 统 计 软 件 进 行 数 据 处 理 和 分 析 利 用 单 因 素 方 差 分 析 ( one 鄄 way ANOVA) 结 合 Duncan 多 重 比 较, 来 分 析 同 一 取 样 时 间 点 不 同 盐 度 组 中 抗 氧 化 酶 活 性 的 差 异 同 一 月 份 不 同 盐 度 组 中 月 增 长 率 和 增 重 率 的 差 异 同 一 盐 度 不 同 月 份 间 月 增 长 率 和 增 重 率 的 差 异, 琢 = 0 郾 05 采 用 Origin 8 郾 0 软 件 制 图 2 摇 结 果 与 分 析 2 郾 1 摇 盐 度 对 青 蛤 不 同 组 织 中 SOD 活 性 的 影 响 鳃 ( 图 1A): 对 照 组 ( 盐 度 25) 中 的 SOD 活 性 96 h 内 基 本 保 持 稳 定, 其 均 值 为 14 郾 28 依 1 郾 08 U mg -1 prot; 盐 度 10 组 中 的 SOD 活 性 仅 于 3 h 显 著 高 于 对 照 组 (P<0 郾 05), 其 值 为 16 郾 81 依 2 郾 02 U mg -1 prot, 之 后 维 持 在 对 照 水 平 ; 盐 度 15 组 中 的 SOD 活 性 96 h 内 均 与 对 照 组 无 显 著 差 异 ( P >0 郾 05); 盐 度 35 组 中 的 SOD 活 性 则 于 3 6 h 显 著 高 于 对 照 组 ( P < 0 郾 05), 于 6 h 达 到 峰 值 ( 19 郾 74 依 2 郾 54 U mg -1 prot), 之 后 恢 复 到 对 照 组 水 平 2627 图 1 摇 不 同 盐 度 对 青 蛤 鳃 ( A) 外 套 膜 ( B) 和 肝 胰 腺 ( C) 中 SOD 活 性 的 影 响 Fig. 1 摇 Effects of different salinity on SOD activity in the gill (A), mantle (B) and hepatopancreas (C) of clam Cy 鄄 clina sinensis 小 写 字 母 a b c 冶 表 示 同 一 取 样 时 间 点 间 各 数 据 存 在 显 著 性 差 异 (P<0 郾 05)

4 2628 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 杂 志 摇 第 31 卷 摇 第 10 期 摇 摇 摇 外 套 膜 ( 图 1B): 对 照 组 中 的 SOD 活 性 96 h 内 也 基 本 保 持 稳 定, 其 均 值 为 37 郾 91 依 2 郾 69 U mg -1 prot; 盐 度 10 组 中 的 SOD 活 性 于 h 显 著 高 于 对 照 组 ( P < 0 郾 05 ), 其 中 于 12 h 达 到 峰 值 (52 郾 13 依 3 郾 52 U mg -1 prot),48 96 h 维 持 在 对 照 组 的 水 平 ; 盐 度 15 组 中 的 SOD 活 性 96 h 内 均 与 对 照 组 的 无 显 著 差 异 (P>0 郾 05); 盐 度 35 组 中 的 SOD 活 性 于 h 显 著 高 于 对 照 组 (P<0 郾 05), 其 中 于 3 h 达 到 峰 值 (58 郾 10 依 3 郾 56 U mg -1 prot),48 96 h 恢 复 到 对 照 组 水 平 此 外, 盐 度 35 组 3 6 h 的 SOD 活 性 显 著 高 于 盐 度 10 组 (P<0 郾 05) 肝 胰 腺 ( 图 1C): 对 照 组 中 的 SOD 活 性 96 h 内 同 样 趋 于 稳 定, 其 均 值 为 55 郾 76 依 0 郾 93 U mg -1 prot; 盐 度 10 组 中 的 SOD 活 性 于 h 显 著 高 于 对 照 组 ( P < 0 郾 05), 其 中 于 6 h 达 到 峰 值 (72 郾 42 依 5 郾 53 U mg -1 prot),48 96 h 维 持 在 对 照 组 的 水 平 ; 盐 度 15 组 中 的 SOD 活 性 仅 于 3 h 显 著 高 于 对 照 组 (P<0 郾 05), 之 后 维 持 在 对 照 组 的 水 平 盐 度 35 组 中 的 SOD 活 性 于 h 显 著 高 于 对 照 组 (P< 0 郾 05), 其 中 于 3 h 达 到 峰 值 (76 郾 33 依 4 郾 45 U mg -1 prot),48 96 h 恢 复 到 对 照 水 平 此 外, 盐 度 35 组 24 h 的 SOD 活 性 显 著 高 于 盐 度 10 组 (P<0 郾 05) 2 郾 2 摇 盐 度 对 青 蛤 不 同 组 织 中 CAT 活 性 的 影 响 鳃 ( 图 2A): 对 照 组 中 的 CAT 活 性 96 h 内 基 本 保 持 稳 定, 其 均 值 为 6 郾 06 依 0 郾 19 U mg -1 prot s -1 ; 盐 度 10 和 15 度 组 中 的 CAT 活 性 96 h 内 均 与 对 照 组 无 显 著 差 异 (P>0 郾 05); 盐 度 35 组 中 的 CAT 活 性 除 了 3 h 显 著 高 于 对 照 组 外 (P<0 郾 05), 其 他 时 间 点 也 均 与 对 照 组 无 显 著 差 异 (P>0 郾 05) 外 套 膜 ( 图 2B): 对 照 组 中 的 CAT 活 性 96 h 内 也 基 本 保 持 稳 定, 其 均 值 为 61 郾 54 依 3 郾 87 U mg -1 prot s -1 ; 盐 度 10 组 中 的 CAT 活 性 先 升 高 后 下 降, 于 6 h 显 著 高 于 对 照 组,12 h 显 著 低 于 对 照 组 ( P< 0 郾 05), 其 他 时 间 点 与 对 照 组 无 显 著 差 异 ( P > 0 郾 05); 盐 度 15 组 中 的 CAT 活 性 96 h 内 均 与 对 照 组 无 显 著 差 异 (P>0 郾 05); 盐 度 35 组 中 的 SOD 活 性 也 是 先 升 高 后 下 降, 于 3 6 h 显 著 高 于 对 照 组,12 24 h 显 著 低 于 对 照 组 (P<0 郾 05),48 96 h 恢 复 到 对 照 组 的 水 平 此 外, 盐 度 35 组 6 h 的 CAT 活 性 显 著 高 于 盐 度 10 组 (P<0 郾 05) 肝 胰 腺 ( 图 2C): 对 照 组 中 的 CAT 活 性 96 h 内 同 样 趋 于 稳 定, 其 均 值 为 127 郾 3 依 2 郾 8 U mg -1 prot s -1 ; 盐 度 10 组 中 的 CAT 活 性 于 3 6 h 显 著 高 于 对 照 组 (P < 0 郾 05 ), 其 中 于 3 h 达 到 峰 值 ( 150 郾 5 依 9 郾 3 U mg -1 prot s -1 ), 之 后 维 持 在 对 照 组 的 水 平 ; 盐 度 15 组 中 的 CAT 活 性 除 了 3 h 显 著 高 于 对 照 组 外 (P<0 郾 05), 其 他 时 间 点 均 与 对 照 组 无 显 著 差 异 (P> 0 郾 05); 盐 度 35 组 中 的 CAT 活 性 除 了 12 h 外, 其 他 时 间 点 均 与 对 照 组 存 在 显 著 差 异 (P<0 郾 05), 表 现 为 3 6 h 显 著 高 于 对 照 组, h 显 著 低 于 对 照 组 此 外, 盐 度 35 组 3 6 h 的 CAT 活 性 显 著 高 于 盐 度 10 组 (P<0 郾 05) 2 郾 3 摇 盐 度 对 青 蛤 生 长 的 影 响 月 增 长 率 和 增 重 率 方 面 : 盐 度 15 组 与 对 照 组 无 显 著 差 异 (P>0 郾 05), 而 盐 度 10 组 则 显 著 低 于 对 照 组 (P<0 郾 05), 而 盐 度 35 组 生 长 极 其 缓 慢 ( 表 1) 此 外, 对 照 组 盐 度 15 组 和 盐 度 35 组, 各 月 份 之 间 图 2 摇 不 同 盐 度 对 青 蛤 鳃 ( A) 外 套 膜 ( B) 和 肝 胰 腺 ( C) 中 CAT 活 性 的 影 响 Fig. 2 摇 Effects of different salinity on CAT activity in the gill (A), mantle (B) and hepatopancreas (C) of clam Cy 鄄 clina sinensis 小 写 字 母 a b c 冶 表 示 同 一 取 样 时 间 点 间 各 数 据 存 在 显 著 性 差 异 (P<0 郾 05)

5 李 子 牛 等 : 盐 度 对 青 蛤 抗 氧 化 酶 活 性 及 生 长 的 影 响 表 1 摇 不 同 盐 度 对 青 蛤 增 长 率 和 增 重 率 的 影 响 Table 1 摇 Effects of different salinity on length gain rate and weight gain rate of clam Cyclina sinensis 盐 度 壳 摇 长 第 1 月 增 长 率 第 2 月 增 长 率 体 摇 第 1 月 增 长 率 重 第 2 月 增 长 率 10 3 郾 43 依 0 郾 31 Ba 3 郾 81 依 0 郾 21 Bb 12 郾 73 依 2 郾 04 Ba 15 郾 84 依 3 郾 02 Bb 15 5 郾 01 依 0 郾 58 A 5 郾 07 依 0 郾 59 A 19 郾 87 依 2 郾 33 A 19 郾 69 依 3 郾 11 A 25 5 郾 28 依 0 郾 38 A 5 郾 19 依 0 郾 44 A 22 郾 39 依 2 郾 42 A 20 郾 50 依 3 郾 21 A 35 1 郾 19 依 0 郾 13 C 1 郾 22 依 0 郾 21 C 8 郾 87 依 1 郾 55 C 9 郾 02 依 1 郾 37 C 大 写 字 母 (A, B, C) 表 示 同 一 月 份 不 同 盐 度 组 之 间 经 多 重 比 较 分 析 后 结 果 为 显 著 差 异 (P<0 郾 05); 小 写 字 母 (a, b) 表 示 同 一 盐 度 组 不 同 月 份 之 间 经 多 重 比 较 分 析 后 结 果 为 显 著 差 异 (P<0 郾 05) 无 显 著 差 异 (P>0 郾 05), 而 盐 度 10 组 第 2 个 月 的 增 长 率 和 增 重 率 要 显 著 高 于 第 1 个 月 ( P <0 郾 05) ( 表 1) 3 摇 讨 摇 论 贝 类 的 免 疫 防 御 过 程 主 要 是 由 血 细 胞 介 导 的 细 胞 免 疫 和 由 活 性 免 疫 因 子 ( 免 疫 活 性 酶 化 学 趋 化 因 子 凝 集 素 抗 菌 肽 等 ) 介 导 的 体 液 免 疫 协 同 完 成 (Cheng,1984;Hine,1999) 大 量 研 究 表 明 : 贝 类 抵 御 病 原 侵 袭 和 环 境 胁 迫 时, 体 内 的 血 细 胞 总 数 血 细 胞 死 亡 率 及 抗 氧 化 酶 活 性 会 发 生 显 著 变 化 ( Pipe & Coles,1995; 马 洪 明 等,2006;Yu et al.,2009); 其 含 量 的 高 低 或 者 活 性 的 强 弱 直 接 反 映 贝 类 机 体 所 具 的 免 疫 能 力 和 所 处 的 生 理 体 质 状 态 ( Matozzo et al., 2008;Lin et al.,2011) 血 细 胞 和 肝 胰 腺 是 贝 类 免 疫 的 主 要 执 行 者 ; 此 外, 也 有 研 究 表 明, 外 套 膜 在 免 疫 防 御 过 程 中 也 发 挥 着 重 要 作 用 ; 其 中 外 套 膜 分 泌 的 粘 液 对 附 着 和 接 触 其 表 面 的 病 原 等 具 有 抑 制 和 杀 伤 作 用, 是 贝 类 免 疫 防 御 的 第 一 道 防 线 ( 任 素 莲 和 傅 郁,2006; 梁 建 光 等,2007); 而 鳃 则 是 贝 类 应 对 盐 度 胁 迫 的 重 要 调 节 器 官 本 文 故 选 择 鳃 外 套 膜 和 肝 胰 腺 等 3 个 组 织 来 研 究 人 工 配 制 的 海 水 对 青 蛤 抗 氧 化 酶 活 性 及 生 长 的 影 响, 以 期 了 解 青 蛤 在 盐 度 胁 迫 下 免 疫 体 质 的 响 应 状 况 至 于 盐 度 对 血 细 胞 参 数 ( 血 细 胞 总 数 吞 噬 率 死 亡 率 胞 内 酶 活 等 ) 的 影 响, 以 及 人 工 海 水 和 自 然 海 水 对 青 蛤 生 长 影 响 的 差 异 将 在 后 续 的 研 究 中 开 展 贝 类 作 为 典 型 的 渗 透 适 应 型 (osmo 鄄 conformer), 对 盐 度 变 化 的 响 应 十 分 敏 感 如 中 国 血 蛤 ( Hiatula chinensis) 受 低 盐 (30 寅 15) 胁 迫 时, 其 肝 脏 内 的 酸 性 磷 酸 酶 (ACP) 碱 性 磷 酸 酶 (AKP) 于 12 h 开 始 显 著 波 动,96 h 后 基 本 稳 定 ( 王 帅 等,2008); 同 样, 栉 孔 扇 贝 (Chlamys farreri) 受 低 盐 (31 寅 20) 刺 激 时, 其 血 2629 淋 巴 中 的 血 细 胞 总 数 蛋 白 含 量 SOD 和 ACP 活 性 于 6 h 开 始 显 著 波 动,72 h 后 基 本 稳 定 ( 马 洪 明 等, 2006) 鉴 于 这 些 研 究 结 果, 本 文 选 择 h 这 7 个 时 间 点 来 研 究 盐 度 变 化 对 青 蛤 抗 氧 化 酶 活 性 及 生 长 的 影 响 研 究 发 现, 盐 度 15 对 青 蛤 的 抗 氧 化 酶 活 性 生 长 基 本 几 乎 无 显 著 影 响, 而 盐 度 10 和 35 则 影 响 显 著, 其 中 盐 度 35 的 SOD 和 CAT 升 高 或 降 低 幅 度 显 著 高 于 盐 度 10, 并 且 盐 度 35 生 长 极 其 缓 慢, 表 明 青 蛤 耐 低 盐 ( 盐 度 10) 的 能 力 强 于 高 盐 ( 盐 度 35), 这 与 青 蛤 栖 居 于 有 淡 水 注 入 的 海 区 这 一 习 性 相 符 此 外, 本 研 究 也 发 现, 各 组 织 中 抗 氧 化 酶 的 活 性 依 次 为 肝 胰 腺 > 外 套 膜 > 鳃, 表 明 青 蛤 鳃 的 抗 氧 化 功 能 比 起 外 套 膜 和 肝 胰 腺 相 对 较 弱 李 晓 英 等 (2010) 也 得 出 了 一 致 的 结 果, 另 一 抗 氧 化 酶 ( 过 氧 化 物 酶 POD) 的 酶 活 在 青 蛤 组 织 中 也 以 肝 胰 腺 最 高, 其 次 是 外 套 膜 和 鳃 青 蛤 鳃 中 抗 氧 化 酶 酶 活 低, 而 Na + / K + 鄄 ATPase 等 离 子 转 运 酶 酶 活 高 ( 林 听 听 等,2012b), 表 明 鳃 主 要 以 离 子 转 运 渗 透 调 节 等 功 能 为 主 本 研 究 发 现, 抗 氧 化 酶 的 波 动 基 本 于 胁 迫 后 的 前 24 h 内 完 成,48 h 后 基 本 恢 复 到 对 照 值 抗 氧 化 酶 的 快 速 响 应 主 要 与 ROS 的 瞬 间 过 量 产 生 有 关 在 正 常 的 生 理 条 件 下, 机 体 内 的 抗 氧 化 酶 系 统 能 有 效 地 清 除 体 内 自 由 基 等 活 性 氧 物 质, 自 由 基 的 产 生 和 清 除 处 于 动 态 平 衡 (Pipe et al.,1994) 然 而 机 体 一 旦 遭 遇 盐 度 突 变, 会 瞬 间 引 发 一 系 列 的 生 理 应 激 反 应, 如 呼 吸 爆 发 ( respiratory burst) 等, 从 而 导 致 ROS 的 过 量 产 生, 诱 发 抗 氧 化 酶 含 量 的 增 加 以 及 酶 活 的 升 高 庄 平 等 (2011) 在 点 篮 子 鱼 (Siganus gut 鄄 tatus), 郑 萍 萍 等 (2010) 在 三 疣 梭 子 蟹 ( Portunus tri 鄄 tuberculatus) 中 也 分 别 发 现 盐 度 胁 迫 下, 抗 氧 化 酶 的 响 应 极 为 迅 速, 基 本 与 3 6 h 达 到 峰 值 此 外, 相 比 于 SOD,CAT 的 变 化 趋 势 相 对 复 杂 : 表 现 为 胁 迫 后 期 有 个 显 著 低 于 对 照 值 的 趋 势, 这 可 能 与 SOD 和 CAT 在 清 除 各 种 ROS 物 质 中 所 承 担 的 功 能 不 同 有 关 生 长 方 面, 盐 度 35 生 长 极 其 缓 慢, 这 可 能 是 因 为 盐 度 过 高 造 成 贝 类 耗 氧 率 摄 食 率 和 清 滤 率 下 降 ( 王 贵 宁 等,2010; 张 明 亮 等,2011) 渗 透 调 节 耗 能 增 加 (Lucu & Devescovi,1999), 严 重 时 甚 至 产 生 长 时 间 的 闭 壳 行 为, 从 而 影 响 生 长 至 于 盐 度 10 组 中, 第 2 个 月 的 生 长 快 于 第 1 个 月, 表 明 青 蛤 在 盐 度 可 耐 受 范 围 内 有 个 逐 渐 适 应 的 过 程

6 2630 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 杂 志 摇 第 31 卷 摇 第 10 期 摇 致 摇 谢 摇 感 谢 佛 罗 里 达 理 工 大 学 张 东 博 士 在 英 文 摘 要 撰 写 中 给 予 的 帮 助 参 考 文 献 李 晓 英, 董 志 国, 阎 斌 伦, 等 青 蛤 POD 组 织 差 异 及 温 度 骤 升 和 窒 息 胁 迫 对 青 蛤 POD 的 影 响. 海 洋 通 报, 29(5): 梁 建 光, 王 宜 艳, 孙 虎 山 栉 孔 扇 贝 外 套 膜 过 氧 化 物 酶 和 酚 氧 化 酶 的 电 镜 细 胞 化 学 研 究. 鲁 东 大 学 学 报, 23(1): 林 听 听, 来 琦 芳, 陆 建 学, 等. 2012a. 几 种 盐 碱 因 子 对 青 蛤 的 致 毒 效 应. 海 洋 渔 业, 34(2): 林 听 听, 来 琦 芳, 陆 建 学, 等. 2012b. 盐 度 突 变 对 青 蛤 (Cy 鄄 clina sinensis) 鳃 Na + / K + 鄄 ATPase 活 性 的 影 响. 广 东 海 洋 大 学 学 报, 32(1): 栾 青 杉, 孙 摇 军, 宋 书 群, 等 长 江 口 夏 季 浮 游 植 物 群 落 与 环 境 因 子 的 典 范 对 应 分 析. 植 物 生 态 学 报, 31(3): 马 洪 明, 刘 晓 伟, 麦 康 森, 等 盐 度 突 降 对 栉 孔 扇 贝 (Chlamys farreri) 抗 病 力 指 标 的 影 响. 高 技 术 通 讯, 16(7): 任 素 莲, 傅 摇 郁 海 湾 扇 贝 外 套 膜 的 组 织 结 构 与 粘 液 细 胞 的 类 型 与 分 布. 中 国 海 洋 大 学 学 报, 36(5): 宋 摇 欣, 张 丽 岩, 高 玮 玮, 等 鳗 弧 菌 ( Vibrio anguil 鄄 larum) 侵 染 对 青 蛤 ( Cyclina sinensis) 磷 酸 酶 活 性 的 影 响. 海 洋 与 湖 沼, 41(2): 孙 国 铭, 万 夕 和, 刘 培 庭, 等 通 州 海 区 滩 涂 青 蛤 死 亡 原 因 的 初 步 分 析. 水 产 养 殖, 25(2): 王 摇 慧, 房 摇 斌, 周 摇 凯, 等 不 同 藻 类 及 浓 度 对 青 蛤 滤 水 率 的 影 响. 海 洋 渔 业, 30(1): 王 摇 帅, 高 如 承, 温 扬 敏, 等 盐 度 突 变 对 中 国 血 蛤 非 特 异 性 免 疫 酶 活 性 的 影 响. 江 苏 农 业 科 学, (5): 王 贵 宁, 姜 令 绪, 王 韶 华, 等 盐 度 对 菲 律 宾 蛤 仔 摄 食 率 和 清 滤 率 的 影 响. 海 洋 科 学, 34(6): 6-8. 王 桂 忠, 林 淑 君 盐 度 对 锯 缘 青 蟹 幼 体 存 活 与 生 长 发 育 的 影 响. 水 产 学 报, 24(1): 王 如 才, 王 昭 萍, 张 建 中 海 水 贝 类 养 殖 学. 青 岛 : 青 岛 海 洋 大 学 出 版 社. 张 明 亮, 刘 学 光, 方 建 光, 等 盐 度 变 化 对 栉 孔 扇 贝 钙 化 与 呼 吸 的 影 响. 渔 业 现 代 化, 38(6): 1-6. 郑 萍 萍, 王 春 琳, 宋 微 微, 等 盐 度 胁 迫 对 三 疣 梭 子 蟹 血 清 非 特 异 性 免 疫 因 子 的 影 响. 水 产 科 学, 29(11): 庄 摇 平, 王 摇 妤, 章 龙 珍, 等 盐 度 骤 降 对 点 篮 子 鱼 存 活 率 及 肝 脏 抗 氧 化 酶 活 性 的 影 响. 复 旦 学 报, 50(3): Bradford M A rapid and sensitive method for the quanti 鄄 fication of micrograms quantities of proteins utilizing the principle of protein 鄄 dye building. Analytical Biochemistry, 72: Cheng TC A classification of molluscan hemocytes based on functional evidences. Comparative Pathobiology, 6: Choi CY, An KW, An MI Molecular characterization and mrna expression of glutathione peroxidase and gluta 鄄 thione S 鄄 transferase during osmotic stress in olive flounder ( Paralichthys olivaceus ). Comparative Biochemistry and Physiology: Part A, 149: Hine PM The inter 鄄 relationships of bivalve haemocytes. Fish and Shellfish Immunology, 9: Holmblad T, S 觟 derh 覿 ll K Cell adhesion molecules and antioxidative enzymes in a crustacean, possible role in immunity. Aquaculture, 172: Lin TT, Xing J, Jiang JW, et al 茁 鄄 glucan 鄄 stimulated activation of six enzymes in the haemocytes of the scallop Chlamys farreri at different water temperatures. Aquacul 鄄 ture, 315: Liu WS, Ma YH, Hu SY, et al Rearing Venus clam seeds, Cyclina sinensis ( Gmelin), on a commercial scale. Aquaculture, 211: Lucu 譎, Devescovi M Osmoregulation and branchial Na +,K + 鄄 ATPase in the lobster Homarus gammarus acclima 鄄 ted to dilute seawater. Journal of Experimental Marine Biol 鄄 ogy and Ecology, 234: Matozzo V, Marin MG, Cima F, et al First evidence of cell division in circulating haemocytes from the Manila clam Tapes philippinarum. Cell Biology International, 32: Pechenik JA, Berard R, Kerr L Effects of reduced salinity on survival, growth, reproductive success, and en 鄄 ergetics of the euryhaline polychaete Capitella sp. 玉. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 254: Pipe RK, Porter C, Livingstone DR Antioxidant enzymes associated with the blood cells and hemolymph of the mussel Mytilus edulis. Fish and Shellfish Immunology, 3: Pipe RK, Coles JA Environmental contaminants influen 鄄 cing immune function in marine bivalve molluscs. Fish Shellfish Immunology, 5: Talbot TD, Lawrence JM The effect of salinity on respi 鄄 ration, excretion, regeneration and production in Ophio 鄄 phragmus filograneus ( Echinodermata: Ophiuroidea ). Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 275: Xing J, Lin TT, Zhan WB Variations of enzyme activi 鄄 ties in the haemocytes of scallop Chlamys farreri after infec 鄄 tion with the acute virus necrobiotic virus ( AVNV). Fish Shellfish Immunology, 25: Yu JH, Song JH, Choi MC, et al Effects of water tem 鄄 perature change on immune function in surf clams, Mactra veneriformis ( Bivalvia: Mactridae). Journal of Invertebrate Pathology, 102: 作 者 简 介 摇 李 子 牛, 男,1985 年 生, 硕 士, 主 要 从 事 贝 类 养 殖 及 免 疫 学 研 究 E 鄄 mail: ironbull_an@ yahoo. com. cn 责 任 编 辑 摇 李 凤 芹

第 期 马 海 燕 等 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 材 料 与 方 法 臭 氧 水 的 制 取 臭 氧 水 处 理 超 声 波 处 理 超 声 波 和 臭 氧 水 协 同 处 理 对 照 处 理 邻 苯 二 胺 分 光 光 度 法 测

第 期 马 海 燕 等 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 材 料 与 方 法 臭 氧 水 的 制 取 臭 氧 水 处 理 超 声 波 处 理 超 声 波 和 臭 氧 水 协 同 处 理 对 照 处 理 邻 苯 二 胺 分 光 光 度 法 测 第 卷 第 期 年 月 食 品 与 生 物 技 术 学 报 臭 氧 水 和 超 声 波 协 同 作 用 在 速 冻 西 兰 花 中 的 应 用 研 究 马 海 燕 张 慜 孙 金 才 食 品 科 学 与 技 术 国 家 重 点 实 验 室 江 南 大 学 江 苏 无 锡 海 通 食 品 集 团 股 份 有 限 公 司 浙 江 慈 溪 由 于 速 冻 蔬 菜 加 工 过 程 中 的 热 烫 处 理 对

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