林学园艺

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1 中国农学通报 2015,31(31):12-18 Chinese Agricultural Science Bulletin 桐花树根多糖的提取理化性质及其抗酪氨酸酶活性研究蔡建秀 1, 董文云 1 1,2, 黄晓冬, 葛清秀 1, 黄建新 3, 李元跃 2 1, 林彩春 ( 1 泉州师范学院近海资源生物技术福建省高校重点实验室, 福建泉州 ; 2 福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室, 福建集美 ; 3 福建医科大学附属第二医院, 福建泉州 ) 摘要 : 旨在探究桐花树根多糖的理化性质和抗酪氨酸酶活性以水提法酸提法碱提法连续提取桐花树根多糖, 经脱脂脱色脱蛋白透析等方法得到初步纯化的多糖, 紫外检测与显色反应分析其理化性质 ; 探究多糖对酪氨酸酶活性的影响结果表明 : 桐花树根水提物的多糖 ( 中性多糖 ) 含量为 34.02%, 酸提物多糖 ( 酸性多糖 ) 含量为 27.18%, 碱提物的多糖 ( 碱性多糖 ) 含量为 51.21% 在浓度 0.2~1.0 mg/ml 时, 桐花树根中性多糖碱性多糖对酪氨酸酶活性具有双向调节作用, 当浓度小于 0.4 mg/ml 时, 对酪氨酸酶活性具有抑制作用, 当浓度大于 0.6 mg/ml 时, 表现为激活作用 ; 但酸性多糖对酪氨酸酶活性仅表现为激活作用关键词 : 桐花树根 ; 多糖 ; 提取 ; 理化性质 ; 酪氨酸酶中图分类号 :Q 文献标志码 :A 论文编号 :casb Study on Extraction, Physicochemical Properties and Anti-tyrosinase Activity of Polysaccharides in Aegiceras corniculatum Root Cai Jianxiu 1, Dong Wenyun 1, Huang Xiaodong 1,2, Ge Qingxiu 1, Huang Jianxin 3, Li Yuanyue 2, Lin Caichun 1 ( 1 Fujian Advanced Education Key Laboratory of Inshore Resources Biotechnology, Quanzhou Normal University, Quanzhou Fujian ; 2 Fujian Provincial Key Laboratory of Marine Resources and Eco-environment, Jimei Fujian ; 3 The Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Quanzhou Fujian ) Abstract: To study the physicochemical properties and anti-tyrosinase activity of polysaccharide in Aegiceras corniculatum root, the crude polysaccharides were extracted from Aegiceras corniculatum roots by the sequential extraction methods of water extraction, acid extraction and alkaline extraction. The crude polysaccharides were depurated by degreasing, decoloration, deproteinization and dialysis, its physicochemical properties were examined by UV analysis and various chromogenic reactions, the effects on tyrosinase activity were also researched. The results were as follows: the polysaccharide (neutral polysaccharide) content of aqueous extract from Aegiceras corniculatum roots was 34.02%, acidic polysaccharose content of acid extract was 27.18%, and alkaline polysaccharide content of alkali extract was 51.21%. At the polysaccharose concentration of mg/ml, it was found that the neutral polysaccharide and acidic polysaccharose had dual-directional regulation effects on tyrosinase activity, which showed the inhibition effect under 0.4 mg/ml 基金项目 :2015 年福建省 ( 国家级 ) 大学生创新创业训练计划项目桐花树叶多酚提取纯化及抗衰老功能化妆品研制和成分分析 ( ); 福建省自然科学基金项目红树植物桐花树叶片抗炎镇痛有效部位的开发 (2015J01146); 福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室开放基金资助项目红树植物桐花树叶片抗炎镇痛活性部位及其化学成分研究 (fmfre ); 泉州市科技计划 B 类项目桐花树提取物防治骨性关节炎的药效学与机制研究 (Z ); 福建省生物学重点学科专项经费, 泉州师范学院海洋功能食品工程中心资助第一作者简介 : 蔡建秀, 女,1957 年出生, 福建莆田人, 教授, 本科, 主要从事食品营养食品保健与天然产物有机化学研究通信地址 : 福建泉州鲤城区新华北路 88 号 ( 省水利水电工程局宿舍 )6 号楼 407 室,Tel: , jxcqz57@163.com 通讯作者 : 葛清秀, 女,1961 年出生, 江西丰城人, 副教授, 本科, 学士, 主要从事生物化学研究通信地址 : 福建省泉州市丰泽区丰泽街东方金典 22 栋 301 室, gqxsn333666@sina.com 收稿日期 : , 修回日期 :

性以水提法酸提法碱提法连续提取桐花树根多糖, 经脱脂脱色脱蛋白透析等方法得到初步纯化的多糖, 紫外检测与显色反应分析其理化性质 ; 探究多糖对酪氨酸酶活性的影响结果表明 : 桐花树根水提物的多糖 ( 中性多糖 ) 含量为

2 蔡建秀等 : 桐花树根多糖的提取理化性质及其抗酪氨酸酶活性研究 13 and activation effect above 0.6 mg/ml, but acidic polysaccharose only showed activation effect. Key words: Aegiceras corniculatum root; polysaccharide; extraction; physicochemical properties; tyrosinase 0 引言桐花树 (Aegiceras corniculatum Blanco) 系紫金牛科 (Myrsinaceae) 桐花树属 (Aegiceras) 的常绿灌木或小乔木, 生于海边潮水涨落的淤泥滩上, 为红树林组成树种之一, 具有萜类化合物甾体黄酮多酚醌类化合 [1-2] 物等多种活性成分由于其生长环境的特殊性, 使 [1] 之具有特殊的化学成分与药理活性, 在东南亚沿海地区中, 红树林植物具有相当长的药用历史, 之前的疾病经常用红树植物药医治桐花树是传统的中药, 其树皮和树叶熬汁有治疗哮喘糖尿病和风湿等疾病的 [2] 作用, 现代药理研究还发现其有明显的抑制植物病原真菌的作用, 丹宁 (tanning, 来自水相提取物 ) 是抑制真菌的主要活性组分因此桐花树应该是具有不容忽视的潜在药用价值植物海洋生物及菌类等来源的多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现, 各种多糖所具有的抗肿瘤免疫抗凝血降血糖和抗病毒活性已相继被发现当前已经发现了 300 多种多糖类化合 [3] 物, 并且也发现了能增强 100 多种免疫的水溶性多 [4] 糖这类多糖已成为一个新的药物发展方向酪氨酸酶既是含铜的多酚氧化酶也是生物体黑色素合成的限速酶, 它决定了量和黑色素的合成率, 原因是它能催化酪氨酸为多巴, 多巴进一步氧化分解成多巴醌,5,6- 二羟基吲哚 (DHI) 也能被氧化分解成 5,6- 吲哚醌这几个环节若反应太强就会引起黑色素过多症, 如雀斑黄褐斑等 ; 若反应太弱或者缺乏反应, 就会引起白发和白癜风等因此要善于控制酪氨酸酶的活力, 就可以控制黑色素的生成量本研究以自然分布于太平洋最北界泉州湾河口湿地的桐花树为材料, 将桐花树根分别经水提法酸提法碱提法提取粗多糖, 并进行理化性质研究, 探究其抗酪氨酸酶的活性, 为红树植物药用资源的进一步开发利用提供理论基础 1 材料与方法 1.1 原料试剂和主要仪器桐花树根 2013 年 10 月采用泉州洛阳红树林, 洗净, 阴干后剪碎磨成粉末, 过 80 目 ( 孔径 mm) 筛, 密闭贮存备用 95% 乙醇乙醇氯仿丁醇异丙醇无水乙醚丙酮碳酸钡丙醇硫酸苯酚盐酸磷酸木瓜蛋白酶酪氨酸酶, 以上试剂均为分析纯 v-1200 型可见分光光度计 ( 上海美谱达仪器有限公司 ),SHB-Ⅲ 循环水式多用真空泵 ( 郑州长城科工贸有限公司 ),DK-S2 型电热恒温水浴锅 ( 上海精宏实验设备有限公司 ),MC 京制号电子天平 ( 北京赛多利斯仪器系统有限公司 ),DGG-9140 型电热恒温鼓风干燥箱 ( 上海森信实验仪器有限公司 ),TU-1950 型紫外扫描仪 1.2 多糖提取水提法称取桐花树根粉末 g, 加入 1000 ml 蒸馏水, 于 90~100 热水浸提 4 h/ 次, 提取 2 次 ; 抽滤后得滤液, 滤液合并用旋转蒸发仪浓缩, 加入 95% 乙醇使其乙醇终浓度为 76%, 于冰箱醇析 24 h, 置于 3000 r/min 的转速, 离心 5 min, 收集沉淀物, 加入适量无水乙醇置于干燥箱 (50 ) 中烘干, 随后用无水乙醇丙酮乙醚洗涤脱脂脱色, 再烘干, 得粗多糖粉末计算得率 [( 沉淀物重量 / 所用粉末重量 ) 100%] [5] 酸提法热水提取后的粉末残渣 50 烘干, 放于三角锥瓶 ( 装置为三角锥瓶上安冷凝管 ) 中继续 20 倍量 ( 即 1 g 加 20 ml)0.1 mol/l HCl 60,24 h/ 次,2 次, 抽滤后滤液合并, 用 5% NaOH 中和至 ph 7.0( 可酸度计测, 酸度计测定 ph 7.0), 减压浓缩, 浓缩液加 95% 乙醇使其乙醇体积分数为 76%, 置于冰箱中过夜醇沉, 于速度 3000 r/min, 离心 5 min, 取沉淀, 然后用乙醇丙酮乙醚涡流搅拌洗涤脱脂脱色, 粗多糖干燥后称重, 计算得率 ( 沉淀物重量 / 所用粉末重量 100%) [6] 碱提法酸提后的粉末残渣 50 烘干,20 倍量 5% NaOH 25 ( 室温 ),24 h/ 次,2 次, 抽滤后滤液合并, 滤液用醋酸中和, 减压浓缩, 浓缩液加 95% 乙醇使其乙醇体积分数为 76%, 置于冰箱中过夜醇沉, 再置于 3000 r/min 的转速, 离心 5 min, 收集沉淀物, 依次用无水乙醇丙酮乙醚旋涡搅拌洗涤脱脂脱色, 固体物干燥后即为粗多糖称重, 计算得率 [( 沉淀物重量 / 所用粉末重量 ) 100%] [7] 1.3 粗多糖的纯化采用苯酚硫酸法测定多糖含量 (1) 葡萄糖标准曲线的绘制以葡萄糖标准品用 1 mg/ml 浓度标准溶液储备移取标准储备液 ml 置比色管中, 补加双蒸水至 0.5 ml 先加 5% 苯酚溶液 0.5 ml, 接着快速加入浓硫酸 2.5mL, 混合均匀, 再静置 15 min, 然后置于沸水中煮 30 min, 用冷水使温度达到

绿灌木或小乔木, 生于海边潮水涨落的淤泥滩上, 为红树林组成树种之一, 具有萜类化合物甾体黄酮多酚醌类化合 [1-2] 物等多种活性成分由于其生长环境的特殊性, 使 [1] 之具有特殊的化学成分与药理活性, 在东南亚沿海地区中, 红

3 14 中国农学通报室温另用 0.5 ml 蒸馏水重复以上操作, 作为对照在 490 nm 波长下用紫外分光光度计测定吸光度 A, 以吸光度对浓度做图得校准曲线, 计算回归方程线性范围 0~0.055 mg (2) 多糖含量的测定将 3 种粗多糖浓度配成 1 mg/ml 水溶液, 以标准葡萄糖作为参照, 依照苯酚硫 [8] 酸法测定多糖含量将吸光度的值代入葡萄糖标准曲线方程中, 求出 C, 再计算出多糖的含量 [C/( )] 100% 蛋白质标准曲线 (1) 标准蛋白溶液的配制从牛血清蛋白质中称取 10 mg, 加蒸馏水溶解并定容到 100 ml 的刻度处, 配制成 0.1 mg/ml 的溶液 (2)kaumasG- 250(0.01% ) 染液的配制从 kaumasg-250 中称 0.01 g, 加 95% 乙醇 5 ml, 再加 10 ml 的 85%(m/v) 的磷酸, 最后用蒸馏水定容至 100 ml, 制成贮备液 (3) 蛋白质标准曲线的绘制取 6 支试管, 依次加入 ml 的标准蛋白质溶液, 然后每支试管依次补足到 1.00 ml, 各管中加入考马斯亮蓝试剂 5.00 ml, 摇均后放置 5 min 后于 595 nm 下测定吸光度, 实验重复 3 次以标准蛋白质含量 (mg) 为横坐标, 吸光度为纵坐标, 绘出工作曲线, 计算 [9] 回归方程 (4) 样品测定将 3 只带塞的试管, 正确无误的加入 1.0 ml 未知浓度溶液, 再加入 kaumasg-250 染液 15 ml, 震荡混合均匀, 放置 2 min, 参比用 1 号试管, 在 595 nm 处比色, 记录吸光度酶法脱蛋白 (1) 取上述脱脂粗多糖制成 5% 的多糖溶液 ;(2) 加入木瓜蛋白酶使溶液中的酶含量为 3%; (3)60 水浴, 进行 2 h 酶解, 再置于沸水浴中 5 min 使之消灭酶的活性 ;(4) 加无水乙醇至乙醇终体积分数 [10] 75%, 静置沉淀 ;(5) 去上清, 取沉淀, 烘干脱色将脱蛋白后的多糖制成 5% 的溶液, 加入 0.1% 活性炭, 在 40 水浴 40 min, 并且边搅拌溶液过滤后, 滤液加无水乙醇至乙醇终体积分数 75%, 静置 [11] 沉淀去上清, 取沉淀, 烘干透析脱脂脱蛋白脱色后将多糖制成 5% 的溶液装入透析袋中, 透析袋用前用 60 水浴 10 min, 用无菌蒸馏水透析 24 h 去盐, 透析液浓缩后用无水乙醇至乙醇终体积分数 75%, 静置沉淀, 去上清, 取沉淀, 烘 [12] 干, 得纯化后的多糖测纯化后多糖含量蛋白含量 (1) 多糖含量的测定将 3 种多糖浓度配成 1 mg/ml 水溶液, 以标准葡萄糖作为参照, 依照苯酚硫酸法测定多糖含量将吸光度的值代入葡萄糖标准曲线方程中, 求出 C, 再计算出多糖的含量 [C/( )] 100% (2) 样品蛋白含量的测定将 3 只带塞的试管, 正确无误的加入 1.0 ml 未知浓度溶液, 再加入 kaumasg- 250 染液 15 ml, 震荡混合均匀, 放置 2 min, 参比用 1 号试管, 在 595 nm 处比色, 记录吸光度代入蛋白质标准曲线方程 1.4 多糖样品基本理化性质分析紫外光谱分析取分离纯化后的多糖配成水溶液 mg/ml, 用 TU-1950 型紫外扫描仪扫描波长为 [13] 200~400 nm, 观测有没有吸收峰桐花树多糖的定性性质碘 - 碘化钾反应 : 把多糖样品配制成 1 mg/ml 的溶液, 分别取 1 ml 于试管中, 滴入碘 - 碘化钾试剂, 然后察看颜色是否发生变化用蒸馏水作阴性对比,1 mg/ml 淀粉溶液做阳性对比 [14-15] 若反应呈阳性则说明为淀粉茚三酮反应 : 把多糖样品配制成 1 mg/ml 的溶液, 分别取 1 ml 于试管中, 参入 0.5 ml 0.1% 茚三酮乙醇溶液, 混合摇匀, 放在沸水浴中煮 1~2 min, 冷却至室温, 观测颜色变化, 阳性的颜色由粉红变紫红变蓝阴性比照用蒸馏水, 阳性比照用 0.5% 甘氨酸试剂反应阳性说明是含蛋白肽或 AA Molish 反应 : 把多糖样品配制成 1 mg/ml 的溶液, 分别取 1 ml 于试管中, 接着滴 2 滴 α 萘酚试剂, 并加入浓硫酸慢慢沿试管壁看看有没有 2 ml, 是否呈现紫色环, 若有为阳性阴性比照用蒸馏水, 阳性比照用质量浓度为 1 mg/ml 的淀粉溶液 Fehling 试剂反应 : 在试管中分别加入 Fehling 试剂 A 液和 B 液, 摇匀后, 滴加 8 滴多糖溶液, 于沸水浴中加热 2~3 min, 放到冷却后察看溶液的颜色是否有变化, 如果有红色的沉淀物表明是阳性属于非还原性多糖, 经过酸解, 存在还原性糖类 1.5 桐花树根多糖对酪氨酸酶活性的影响测定在总体积为 4.2 ml 的测酶活反应体系中, 依次加入 1 ml 样液,0.4 ml 100 U/mL 酪氨酸酶溶液,2.8 ml 0.5 mmol/l L-DOPA 底物溶液, 充分混匀,37 水浴保温 10 min 后, 测波长 475 nm 处的吸光度值, 记为 A 3; 实验重复 3 次以 PBS 代替样液作为空白对照组, 测得吸光度值 A 1; 同时以 50 mmol/l ph 6.8 磷酸缓冲液 (PBS) 代替样液与酪氨酸酶溶液测空白对照组背景吸光度值 A 2,PBS 代替酪氨酸酶溶液测样液组背景吸光度值 A 4 提取物对酶的抑制率 (I) 按公式 (1) 计算 I=[1-(A 3-A 4)/(A 1-A 2)] 100% (1)

1 mg/ml 的溶液 (2)kaumasG- 250(0.01% ) 染液的配制从 kaumasg-250 中称 0.

4 蔡建秀等 : 桐花树根多糖的提取理化性质及其抗酪氨酸酶活性研究 15 式中 :A 1 A 2 A 3 A 4 分别是空白对照组吸光度值空白对照组背景吸光度值样液组吸光度值样液组背 [16-18] 景吸光度值 2 结果与分析 2.1 总糖含量测定葡萄糖标准曲线标准葡萄糖含量与吸光值的关系如表 1, 它的回归方程为 y=20.598x , 且相关系数 R 2 =0.9995, 说明线性关系很良好 ( 图 1) 样品多糖含量测定结果纯化前的多糖含量 : 按标准方法分别测定水提酸提碱提的多糖含量, 同时重复 3 次, 通过测定水提的吸光度值分别为 , 取平均值 0.663, 计算桐花树根提取物中表 1 葡萄糖浓度与吸光值的关系葡萄糖含量 0 mg mg mg mg mg mg mg 吸光度值吸光值葡萄糖含量图 1 葡萄糖标准曲线多糖含量为 %; 酸提的吸光度值分别为 , 取平均值 0.431, 计算提取物中多糖含量为 % ; 碱提的吸光度值分别为 , 取平均值 0.673, 计算提取物中多糖含量为 % 纯化后的多糖含量 : 按标准方法分别测定水提酸提碱提的多糖含量, 同时重复 3 次, 通过测定水提的吸光度值分别为 , 取平均值 0.694, 计算桐花树根提取物中多糖含量为 %; 酸提的吸光度值分别为 , 取平均值 0.553, 计算桐花树根提取物中多糖含量为 %; 碱提的吸光度值分别为 , 取平均值 1.048, 计算桐花树根提取物中多糖含量为 % 2.2 蛋白含量测定蛋白标准曲线标准蛋白质含量与吸光度值的关系见表 3, 它的回归方程为 y=5.9331x , 且相关系数 R 2 =0.9992, 说明线性关系很良好 ( 图 2) 样品蛋白含量测定结果纯化前的蛋白含量 : 按上述标准蛋白含量测定方法, 同时做 3 个重复, 通过测定水提的吸光度值平均为 0.498, 计算桐花树根多糖中蛋白含量为 8.201%; 酸提的吸光度值平均值为 0.159, 计算多糖中蛋白含量为 2.538%; 碱提的吸光度值平均值为 0.335, 计算多糖中蛋白含量为 5.505% 纯化后的蛋白含量 : 按标准方法分别测定水提酸提碱提的蛋白含量, 同时重复 3 次, 通过测定水提的吸光度平均值为 0.387, 计算桐花树根多糖中蛋白含量为 6.381%; 酸提的吸光度平均值为 0.105, 计算多糖中蛋白含量为 1.628%; 碱提的吸光度平均值为 0.199, 计算桐花树根多糖中蛋白含量为 3.212% 2.3 紫外光谱分析由桐花树根多糖的紫外光谱分析 ( 图 3 图 4 图 5) 表 2 纯化前后不同提取物的多糖含量 % 桐花树根多糖水提物桐花树根多糖酸提物桐花树根多糖碱提物纯化前 ± ± ±0.726 纯化后 ± ± ±3.236 表 3 牛血清蛋白标准溶液浓度与吸光值的关系标准蛋白 0 mg 0.02 mg 0.04 mg 0.06 mg 0.08 mg 0.10 mg 吸光度值

699 0.652, 取平均值 0.663, 计算桐花树根提取物中表 1 葡萄糖浓度与吸光值的关系葡萄糖含量 0 mg 0.005 mg 0.015 mg 0.025 mg 0.035 mg 0.045 mg 0.055 mg 吸光度值 0 0.091 0.310 0.493 0.721 0.913 1.

5 16 中国农学通报吸光值系列线性系列牛血清蛋白标准溶液含量图 2 牛血清蛋白标准曲线可以看出, 在 200~400 nm 处没有吸收峰, 由此说明多糖样本中可能含有极少或不含蛋白质和核酸 2.4 桐花树根多糖的定性分析多糖样品的碘 - 碘化钾反应茚三酮反应均为阴性反应, 由此表明多糖样本中没有淀粉氨基酸 ; 然而, Molish 是阳性, 这表明样本是含糖样本 ;Fehling 反应呈阴性, 说明桐花树根多糖是还原糖 2.5 对酪氨酸酶活性的影响分析测得水提样液对酪氨酸酶的活性影响较大, 样液浓度与酪氨酸酶活性的关系见下图 6, 其回归方程 y= x , 相关系数 R 2 =0.9863, 线性关系良好表 4 纯化前后不同提取物的蛋白含量 % 桐花树根多糖水提物桐花树根多糖酸提物桐花树根多糖碱提物纯化前 8.201± ± ±1.344 纯化后 6.381± ± ±0.864 图 3 桐花树根水提多糖的紫外光谱 3 结论与讨论在对桐花树根多糖的提取中可测得其碱提的多糖含量最高, 达到 51.21%, 水提 34.02%, 酸提 27.18% 在多次的去蛋白操作后, 还含有少量的蛋白质, 水提为 6.381%, 酸提 1.628%, 碱提 3.212% 多糖样本的碘 - 碘化钾反应茚三酮反应都为阴性反应, 由此可知多糖样本中没有存在淀粉氨基酸 ; 然而,Molish 是阳性, 这表明样本是含糖样本 ;Fehling 反应呈阴性, 说明桐花树根多糖是还原糖通过紫外光谱分析多糖, 处于 200~ 400 nm 处无吸收峰, 由此说明多糖样本中可能有极少或者不含蛋白质和核酸研究桐花树根多糖对酪氨酸酶活性的结果阐明, 桐花树根中性多糖碱性多糖对酪氨酸酶活性具有双向调节作用, 当浓度小于 0.4 mg/ml 时, 对酪氨酸酶活性具有抑制作用, 当浓度大于 0.6 mg/ml 时, 表现为激活作用 ; 并随着中性多糖碱性多糖浓度增大, 激活作用逐步增加但酸性多糖对酪氨酸酶活性仅表现为激活作用, 也是随着浓度增加激活作用逐渐增强

5 对酪氨酸酶活性的影响分析测得水提样液对酪氨酸酶的活性影响较大, 样液浓度与酪氨酸酶活性的关系见下图 6, 其回归方程 y=- 0.1348x + 0.0758, 相关系数 R 2 =0.

6 蔡建秀等 : 桐花树根多糖的提取理化性质及其抗酪氨酸酶活性研究 17 图 4 桐花树根酸提多糖的紫外光谱图 5 桐花树根碱提多糖的紫外光谱植物多糖作为一类重要的天然活性物质, 其最大优点是毒副作用小, 来源广泛其多糖的研究越来越受到人们的重视目前国内也有多种产品上市, 比如猪苓多糖注射液 ( 增强免疫功能, 同乙肝疫苗结合治疗慢性乙肝 ); 香菇多糖注射液 ( 治慢性肝炎及肿瘤治疗的辅助药 ); 灵芝多糖片灵芝复方糖浆等 ( 主要用于肿瘤辅助治疗慢性气管炎高血压神经衰弱糖尿病高 [19] 血脂等 ) 等桐花树生于海边潮水涨落的污泥滩上, 是红树林树种中的广布种之一, 由于其生长环境的特殊性, 使之具有特殊的化学成分与药理活性 [1] 目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法酸提法碱提法 [19] 酶解法超声法微波法超滤法超临界流体萃取法等本研究对桐花树根多糖采用的酸提法 ( 酸性多糖 ) 碱提取法 ( 碱性多糖 ) 水提取法 ( 中性多糖 ) 提取桐花树多糖, 且碱性多糖含量最高, 达到 51.21% 比其他被公认的抗氧化较好的如银杏叶多糖 5.869% [20],

慢性气管炎高血压神经衰弱糖尿病高 [19] 血脂等 ) 等桐花树生于海边潮水涨落的污泥滩上, 是红树林树种中的广布种之一, 由于其生长环境的特殊性, 使之具有特殊的化学成分与药理活性 [1] 目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法

7 18 中国农学通报抑制率浓度 a 为桐花树中性多糖对酪氨酸酶活性的抑制作用 ; b 为桐花树中性多糖对酪氨酸酶活性的激活作用 ; c 为桐花树中性多糖对酪氨酸酶活性的激活作用 ; d 为桐花树碱性多糖对酪氨酸酶活性的抑制作用 ; e 为桐花树碱性多糖对酪氨酸酶活性的激活作用图 6 酪氨酸酶活性的双向作用曲线黄芪超微粉多糖的提取率为 4.69% [21], 淫羊藿超微粉多糖提取率为 1.37% [21], 芦荟中的库拉索芦荟多糖提取率高达 8.74% [22] ; 真菌类如香菇菌柄浸提液中多糖的提取率为 5.68% [23], 灵芝孢子多糖的提取率酶法破壁为 2.14% [24] 都明显较高研究发现, 桐花树根多糖对酪氨酸酶活性中性多糖碱性多糖对酪氨酸酶活性具有双向调节作用, 当浓度小于 0.4 mg/ml 时, 对酪氨酸酶活性具有抑制作用, 当浓度大于 0.6 mg/ml 时, 表现为激活作用 ; 并随着中性多糖碱性多糖浓度增大, 激活作用逐步增加但酸性多糖对酪氨酸酶活性仅表现为激活作用, 也是随着浓度增加激活作用逐渐增强红树林植物桐花树是亚热带的海岸潮间带特有的一类木本植物, 因其特殊的生长环境, 其化学成分和生理活性方面都具有很多特殊性桐花树有治疗哮喘糖尿病风湿等疾病和明显的抑制植物病原菌的作用, 然而一直以来国内外学者对桐花树的研究只着重于植物学及生态系统方面, 对于该植物的化学成分及其生理活性研究还处在起步阶段, 当前开展中国红树林植物的化学成分及其生理活性研究的工作, 对中国桐花树资源的保护与合理开发利用具有十分重大的意义但本研究尚未涉及红树植物桐花树根多糖单一成分对酪氨酸酶抑制作用的研究, 也尚不清楚其活性物质的结构及抑制机理及桐花树根多糖的其他药效学作用等, 因此这些都还有待于进行进一步实验探讨激活率参考文献 [1] 覃亮, 路宽, 刘钊. 正交设计优化桐花树多糖提取工艺 [J]. 中成药, 2000,33(7): [2] 王友绍, 何磊, 王清吉, 等. 药用红树植物的化学成分及其药理研究进展 [J]. 中国海洋药物,2004,24(2):26. [3] Franz G. Polysaccharides in pharmacology. Current application and future concepts[j]. Planta,1998,55(6): [4] 田庚元, 冯宇澄, 林颖. 植物多糖的研究进展 [J]. 中国中药杂志,1995, 20(7): [5] 李艳红. 微波法与热水法提取山楂多糖的比较研究 [J]. 基层医学论坛,2009,13(4): [6] 杨泱. 茶多糖的提取分离纯化组成研究概况 [J]. 中国食物与营养,2009(5): [7] 李红民, 黄仁泉, 王亚洲. 提高黄芪多糖提取收率的工艺研究 [J]. 西北大学学报,2000,30(6): [8] Dubois M, Gilles K A, Hamilton J K. Colorimetric method for determination of sugars and related substances[j].anal Biochem, 1956,57: [9] 王为国, 吴强, 胡宝坤, 等. 几种测定灰树花多糖中蛋白质含量方法的比较研究 [J]. 中国食用菌,2003,22(1): [10] 葛炳艳, 杨波. 裙带菜多糖 3 种脱蛋白质方法的比较研究 [J]. 食品与药学,2010,12(3): [11] 张婧婧, 刘秋凤, 吴成业. 蜈蚣藻多糖纯化及抗氧化作用的研究 [J]. 福建水产,2013,35(5): [12] 田龙. 猕猴桃果碱溶性多糖的分离纯化及其结构分析 [J]. 华中农业大学学报,2007,26(3): [13] 刘轲. 海带硫酸多糖的提取纯化及其理化分析 [J]. 中国生化药物杂志,2002, 23(3):114. [14] 张亦忠. 海藻硫酸多糖的制备及其性质研究 [J]. 苏州大学学报 : 医学版,2003,24(4):391. [15] 李海棠. 玉足海参多糖的分离及理化性质研究 [J]. 中药材,1999,22 (7):328. [16] 刘之力, 徐跃飞, 涂彩霞, 等.56 味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性影响的研究 [J]. 大连医科大学学报,2000,22(10):6-10. [17] 周明眉, 杨奎, 姜远平, 等. 中药血清药理学的方法学研究 - 反应体系中含药血清加入量的研究 [J]. 中药药理与临床,1998,14(6): [18] 李仪奎. 中药血清药理学实验方法的若干问题 [J]. 中药新药与临床药理,1999,10(2): [19] 陶遵威, 郑夺, 邸明磊, 等. 植物多糖的研究进展 [J]. 药物评价研究, 2010,33(2): [20] 芦莲, 戴余军, 李长春. 银杏叶多糖提取工艺的研究 [J]. 中国酿造, 2012,31(10): [21] 刘迎, 史万玉, 杨明, 车淑芬, 等. 超微粉碎技术对黄芪多糖淫羊藿多糖溶出的影响 [J]. 中兽医医药杂志,2006,1: [22] 罗仓学, 张广栋, 王旭, 等. 外在因素对芦荟多糖提取率的影响 [J]. 食品与发酵工业,2005,31(3): [23] 胡国元, 李超影, 陈默, 等. 香菇多糖和金针菇多糖的提取及其抑菌活性 [J]. 武汉工程大学学报,35(6): [24] 倪江洪, 宋炳生, 李汉宝, 等. 灵芝孢子破壁对其多糖提取率的影响 [J]. 中草药,2002,33(5):422.

碱性多糖对酪氨酸酶活性的激活作用图 6 酪氨酸酶活性的双向作用曲线黄芪超微粉多糖的提取率为 4.69% [21], 淫羊藿超微粉多糖提取率为 1.37% [21], 芦荟中的库拉索芦荟多糖提取率高达 8.

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简报要点 ESI 共有 22 个学科门类, 江苏高校目前只有 16 个学科门类进入了世界 1%, 分别是一般社会科学临床医学农业科学分子生物学和遗传学动植物科学化学地球科学工程江苏高等院校 ESI 学科评估简讯 2016 年第 2 期 2016-03-17 ESI(Essential Science Indicators, 基本科学指标 ) 是基于 Web of Science 权威数据建立的分析型数据库, 将全球学科分成 22 个大学科, 来自于 Web of Science 的 10 年

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