一、显微镜基础知识

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1 一 显 微 镜 基 础 知 识 第 一 章 : 显 微 镜 简 史 随 着 科 学 技 术 的 进 步, 人 们 越 来 越 需 要 观 察 微 观 世 界, 显 微 镜 正 是 这 样 的 设 备, 它 突 破 了 人 类 的 视 觉 极 限, 使 之 延 伸 到 肉 眼 无 法 看 清 的 细 微 结 构 显 微 镜 是 从 十 五 世 纪 开 始 发 展 起 来 从 简 单 的 放 大 镜 的 基 础 上 设 计 出 来 的 单 透 镜 显 微 镜, 到 结 构 复 杂 的 复 式 显 微 镜, 以 及 相 差, 荧 光, 偏 光, 显 微 观 察 方 式 的 出 现, 使 之 更 广 范 地 应 用 于 医 学, 生 物 学, 金 属 材 料, 化 工 等 领 域 第 二 章 显 微 镜 的 基 本 光 学 原 理 一. 折 射 和 折 射 率 光 线 在 均 匀 的 各 向 同 性 介 质 中, 两 点 之 间 以 直 线 传 播, 当 通 过 不 同 密 度 介 质 的 透 明 物 体 时, 则 发 生 折 射 现 象, 这 是 由 于 光 在 不 同 介 质 的 传 播 速 度 不 同 造 成 的 当 与 透 明 物 面 不 垂 直 的 光 线 由 空 气 射 入 透 明 物 体 ( 如 玻 璃 ) 时, 光 线 在 其 介 面 改 变 了 方 向, 并 和 法 线 构 成 折 射 角 二. 透 镜 的 性 能 透 镜 是 组 成 显 微 镜 光 学 系 统 的 最 基 本 的 光 学 元 件, 物 镜 目 镜 及 聚 光 镜 等 部 件 均 由 单 个 和 多 个 透 镜 组 成 依 其 外 形 的 不 同, 可 分 为 凸 透 镜 ( 正 透 镜 ) 和 凹 透 镜 ( 负 透 镜 ) 两 大 类 当 一 束 平 行 于 光 轴 的 光 线 通 过 凸 透 镜 后 相 交 于 一 点, 这 个 点 称 " 焦 点 ", 通 过 交 点 并 垂 直 光 轴 的 平 面, 称 " 焦 平 面 " 焦 点 有 两 个, 在 物 方 空 间 的 焦 点, 称 " 物 方 焦 点 ", 该 处 的 焦 平 面, 称 " 物 方 焦 平 面 "; 反 之, 在 象 方 空 间 的 焦 点, 称 " 象 方 焦 点 ", 该 处 的 焦 平 面, 称 " 象 方 焦 平 面 " 光 线 通 过 凹 透 镜 后, 成 正 立 虚 像, 而 凸 透 镜 则 成 正 立 实 像 实 像 可 在 屏 幕 上 显 现 出 来, 而 虚 像 不 能 三. 影 响 成 像 的 关 键 因 素 相 差 由 于 客 观 条 件, 任 何 光 学 系 统 都 不 能 生 成 理 论 上 理 想 的 象, 各 种 象 差 的 存 在 影 响 了 成 像 质 量 下 面 分 别 简 要 介 绍 各 种 相 差 1. 色 差 (Chromatic aberration) 色 差 是 透 镜 成 像 的 一 个 严 重 缺 陷, 发 生 在 多 色 光 为 光 源 的 情 况 下, 单 色 光 不 产 生 色 差 白 光 由 红 橙 黄 绿 青 蓝 紫 七 种 组 成, 各 种 光 的 波 长 不 同, 所 以 在 通 过 透 镜 时 的 折 射 率 也 不 同, 这 样 物 方 一 个 点, 在 象 方 则 可 能 形 成 一 个 色 斑 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 1 of 4

2 色 差 一 般 有 位 置 色 差, 放 大 率 色 差 位 置 色 差 使 像 在 任 何 位 置 观 察, 都 带 有 色 斑 或 晕 环, 使 像 模 糊 不 清 而 放 大 率 色 差 使 像 带 有 彩 色 边 缘 2. 球 差 (Spherical aberration) 球 差 是 轴 上 点 的 单 色 相 差, 是 由 于 透 镜 的 球 形 表 面 造 成 的 球 差 造 成 的 结 果 是, 一 个 点 成 像 后, 不 在 是 个 亮 点, 而 是 一 个 中 间 亮 边 缘 逐 渐 模 糊 的 亮 斑 从 而 影 响 成 像 质 量 球 差 的 矫 正 常 利 用 透 镜 组 合 来 消 除, 由 于 凸 凹 透 镜 的 球 差 是 相 反 的, 可 选 配 不 同 材 料 的 凸 凹 透 镜 胶 合 起 来 给 予 消 除 旧 型 号 显 微 镜, 物 镜 的 球 差 没 有 完 全 矫 正, 应 与 相 应 的 补 偿 目 镜 配 合, 才 能 达 到 纠 正 效 果 一 般 新 型 显 微 镜 的 球 差 完 全 由 物 镜 消 除 3. 慧 差 (Coma) 慧 差 属 轴 外 点 的 单 色 相 差 轴 外 物 点 以 大 孔 径 光 束 成 象 时, 发 出 的 光 束 通 过 透 镜 后, 不 再 相 交 一 点, 则 一 光 点 的 象 便 会 得 到 一 逗 点 壮, 型 如 慧 星, 故 称 " 慧 差 " 4. 象 散 (Astigmatism) 象 散 也 是 影 响 清 晰 度 的 轴 外 点 单 色 相 差 当 视 场 很 大 时, 边 缘 上 的 物 点 离 光 轴 远, 光 束 倾 斜 大, 经 透 镜 后 则 引 起 象 散 象 散 使 原 来 的 物 点 在 成 象 后 变 成 两 个 分 离 并 且 相 互 垂 直 的 短 线, 在 理 想 象 平 面 上 综 合 后, 形 成 一 个 椭 圆 形 的 斑 点 象 散 是 通 过 复 杂 的 透 镜 组 合 来 消 除 5. 场 曲 (Curvature of field) 场 曲 又 称 " 象 场 弯 曲 " 当 透 镜 存 在 场 曲 时, 整 个 光 束 的 交 点 不 与 理 想 象 点 重 合, 虽 然 在 每 个 特 定 点 都 能 得 到 清 晰 的 象 点, 但 整 个 象 平 面 则 是 一 个 曲 面 这 样 在 镜 检 时 不 能 同 时 看 清 整 个 相 面, 给 观 察 和 照 相 造 成 困 难 因 此 研 究 用 显 微 镜 的 物 镜 一 般 都 是 平 场 物 镜, 这 种 物 镜 已 经 矫 正 了 场 曲 ; 6. 畸 变 (Distortion) 前 面 所 说 各 种 相 差 除 场 曲 外, 都 影 响 象 的 清 晰 度 畸 变 是 另 一 种 性 质 的 相 差, 光 束 的 同 心 性 不 受 到 破 坏 因 此, 不 影 响 象 的 清 晰 度, 但 使 象 与 原 物 体 比, 在 形 状 上 造 成 失 真 四. 显 微 镜 的 成 象 ( 几 何 成 象 ) 原 理 显 微 镜 之 所 以 能 将 被 检 物 体 进 行 放 大, 是 通 过 透 镜 来 实 现 的 单 透 镜 成 象 具 有 象 差, 严 重 影 响 成 象 质 量 因 此 显 微 镜 的 主 要 光 学 部 件 都 由 透 镜 组 合 而 成 从 透 镜 的 性 能 可 知, 只 有 凸 透 镜 才 能 起 放 大 作 用, 而 凹 透 镜 不 行 显 微 镜 的 物 镜 与 目 镜 虽 都 由 透 镜 组 合 而 成, 但 相 当 于 一 个 凸 透 镜 为 便 于 了 解 显 微 镜 的 放 大 原 理, 简 要 说 明 一 下 凸 透 镜 的 5 种 成 象 规 律 : (1) 当 物 体 位 于 透 镜 物 方 二 倍 焦 距 以 外 时, 则 在 象 方 二 倍 焦 距 以 内 焦 点 以 外 形 成 缩 小 的 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 2 of 4

3 倒 立 实 象 ; (2) 当 物 体 位 于 透 镜 物 方 二 倍 焦 距 上 时, 则 在 象 方 二 倍 焦 距 上 形 成 同 样 大 小 的 倒 立 实 象 ; (3) 当 物 体 位 于 透 镜 物 方 二 倍 焦 距 以 内, 焦 点 以 外 时, 则 在 象 方 二 倍 焦 距 以 外 形 成 放 大 的 倒 立 实 象 ; (4) 当 物 体 位 于 透 镜 物 方 焦 点 上 时, 则 象 方 不 能 成 象 ; (5) 当 物 体 位 于 透 镜 物 方 焦 点 以 内 时, 则 象 方 也 无 象 的 形 成, 而 在 透 镜 物 方 的 同 侧 比 物 体 远 的 位 置 形 成 放 大 的 直 立 虚 象 显 微 镜 的 成 象 原 理 就 是 利 用 上 述 (3) 和 (5) 的 规 律 把 物 体 放 大 的 当 物 体 处 在 物 镜 前 F 2F (F 为 物 方 焦 距 ) 之 间, 则 在 物 镜 象 方 的 二 倍 焦 距 以 外 形 成 放 大 的 倒 立 实 象 在 显 微 镜 的 设 计 上, 将 此 象 落 在 目 镜 的 一 倍 焦 距 F1 之 内, 使 物 镜 所 放 大 的 第 一 次 象 ( 中 间 象 ), 又 被 目 镜 再 一 次 放 大, 最 终 在 目 镜 的 物 方 ( 中 间 象 的 同 侧 ) 人 眼 的 明 视 距 离 (250mm) 处 形 成 放 大 的 直 立 ( 相 对 中 间 象 而 言 ) 虚 象 因 此, 当 我 们 在 镜 检 时, 通 过 目 镜 ( 不 另 加 转 换 棱 镜 ) 看 到 的 象 于 原 物 体 的 象, 方 向 相 反 五. 显 微 镜 光 学 系 统 简 介 显 微 镜 光 学 系 统 的 设 计 有 三 种 光 学 系 统 1 长 筒 光 学 系 统 2 万 能 无 限 远 校 正 光 学 系 统 : 是 目 前 最 先 进 的 光 路 设 计, 它 分 体 现 了 无 限 远 校 正 方 式 的 优 越 性 光 线 通 过 物 镜 后 成 为 平 行 光 束 通 过 镜 筒, 并 在 结 象 透 镜 处 折 射 或 完 成 无 相 差 的 中 间 象 物 镜 与 观 察 筒 内 结 象 透 镜 之 间 可 添 加 光 学 附 件, 而 不 影 响 总 放 大 倍 数 另 外 这 种 光 学 系 统 不 需 要 安 装 附 加 校 正 透 镜, 都 能 得 到 最 佳 的 显 微 图 象 第 三 章 显 微 镜 的 重 要 光 学 技 术 参 数 在 镜 检 时, 人 们 总 是 希 望 能 清 晰 而 明 亮 的 理 想 图 象, 这 就 需 要 显 微 镜 的 各 项 光 学 技 术 参 数 达 到 一 定 的 标 准, 并 且 要 求 在 使 用 时, 必 须 根 据 镜 检 的 目 的 和 实 际 情 况 来 协 调 各 参 数 的 关 系 只 有 这 样, 才 能 充 分 发 挥 显 微 镜 应 有 的 性 能, 得 到 满 意 的 镜 检 效 果 显 微 镜 的 光 学 技 术 参 数 包 括 : 数 值 孔 径 分 辨 率 放 大 率 焦 深 视 场 宽 度 覆 盖 差 工 作 距 离 等 等 这 些 参 数 并 不 都 是 越 高 越 好, 它 们 之 间 是 相 互 联 系 又 相 互 制 约 的, 在 使 用 时, 应 根 据 镜 检 的 目 的 和 实 际 情 况 来 协 调 参 数 间 的 关 系, 但 应 以 保 证 分 辨 率 为 准 一. 数 值 孔 径 数 值 孔 径 简 写 NA, 数 值 孔 径 是 物 镜 和 聚 光 镜 的 主 要 技 术 参 数, 是 判 断 两 者 ( 尤 其 对 物 镜 而 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 3 of 4

4 言 ) 性 能 高 低 的 重 要 标 志 其 数 值 的 大 小, 分 别 标 科 在 物 镜 和 聚 光 镜 的 外 壳 上 数 值 孔 径 (NA) 是 物 镜 前 透 镜 与 被 检 物 体 之 间 介 质 的 折 射 率 (h) 和 孔 径 角 (u) 半 数 的 正 玄 之 乘 积 用 公 式 表 示 如 下 : NA=hsinu/2 孔 径 角 又 称 " 镜 口 角 ", 是 物 镜 光 轴 上 的 物 体 点 与 物 镜 前 透 镜 的 有 效 直 径 所 形 成 的 角 度 孔 径 角 越 大, 进 入 物 镜 的 光 通 亮 就 越 大, 它 与 物 镜 的 有 效 直 径 成 正 比, 与 焦 点 的 距 离 成 反 比 显 微 镜 观 察 时, 若 想 增 大 NA 值, 孔 径 角 是 无 法 增 大 的, 唯 一 的 办 法 是 增 大 介 质 的 折 射 率 h 值 基 于 这 一 原 理, 就 产 生 了 水 浸 系 物 镜 和 油 浸 物 镜, 因 介 质 的 折 射 率 h 值 大 于 一, NA 值 就 能 大 于 一 数 值 孔 径 最 大 值 为 1.4, 这 个 数 值 在 理 论 上 和 技 术 上 都 达 到 了 极 限 目 前, 有 用 折 射 率 高 的 溴 萘 作 介 质, 溴 萘 的 折 射 率 为 1.66, 所 以 NA 值 可 大 于 1.4 这 里 必 须 指 出, 为 了 充 分 发 挥 物 镜 数 值 孔 径 的 作 用, 在 观 察 时, 聚 光 镜 的 NA 值 应 等 于 或 略 大 于 物 镜 的 NA 值, 数 值 孔 径 与 其 他 技 术 参 数 有 着 密 切 的 关 系, 它 几 乎 决 定 和 影 响 着 其 他 各 项 技 术 参 数 它 与 分 辨 率 成 正 比, 与 放 大 率 成 正 比, 与 焦 深 成 反 比,NA 值 增 大, 视 场 宽 度 与 工 作 距 离 都 会 相 应 地 变 小 二. 分 辨 率 分 辨 率 又 称 " 鉴 别 率 "," 解 像 力 " 是 衡 量 显 微 镜 性 能 的 又 一 个 重 要 技 术 参 数 显 微 镜 的 分 辨 率 用 公 式 表 示 为 :d=l/na 式 中 d 为 最 小 分 辨 距 离 ;l 为 光 线 的 波 长 ;NA 为 物 镜 的 数 值 孔 径 可 见 物 镜 的 分 辨 率 是 由 物 镜 的 NA 值 与 照 明 光 源 的 波 长 两 个 因 素 决 定 NA 值 越 大, 照 明 光 线 波 长 越 短, 则 d 值 越 小, 分 辨 率 就 越 高 要 提 高 分 辨 率, 即 减 小 d 值, 可 采 取 以 下 措 施 : 1. 降 低 波 长 l 值, 使 用 短 波 长 光 源 2. 曾 大 介 质 h 值 和 提 高 NA 值 (NA=hsinu/2) 3. 增 大 孔 径 角 4. 增 加 明 暗 反 差 三. 放 大 率 放 大 率 就 是 放 大 倍 数, 是 指 被 检 验 物 体 经 物 镜 放 大 再 经 目 镜 放 大 后, 人 眼 所 看 到 的 最 终 图 象 的 大 小 对 原 物 体 大 小 的 比 值, 是 物 镜 和 目 镜 放 大 倍 数 的 乘 积 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 4 of 4

5 放 大 率 也 是 显 微 镜 的 重 要 参 数, 但 也 不 能 盲 目 相 信 放 大 率 越 高 越 好, 在 选 择 时 应 首 先 考 虑 物 镜 的 数 值 孔 径 四. 焦 深 焦 深 为 焦 点 深 度 的 简 称, 即 在 使 用 显 微 镜 时, 当 焦 点 对 准 某 一 物 体 时, 不 仅 位 于 该 点 平 面 上 的 各 点 都 可 以 看 清 楚, 而 且 在 此 平 面 的 上 下 一 定 厚 度 内, 也 能 看 得 清 楚, 这 个 清 楚 部 分 的 厚 度 就 是 焦 深 焦 深 大, 可 以 看 到 被 检 物 体 的 全 层, 而 焦 深 小, 则 只 能 看 到 被 检 物 体 的 一 薄 层, 焦 深 与 其 他 技 术 参 数 有 以 下 关 系 : 1. 焦 深 与 总 放 大 倍 数 及 物 镜 的 数 值 孔 镜 成 反 比 2. 焦 深 大, 分 辨 率 降 低 由 于 低 倍 物 镜 的 景 深 较 大, 所 以 在 低 倍 物 镜 照 相 时 造 成 困 难 在 显 微 照 相 时 将 详 细 介 绍 五. 视 场 直 径 (Field of view) 观 察 显 微 镜 时, 所 看 到 的 明 亮 的 原 形 范 围 叫 视 场, 它 的 大 小, 是 由 目 镜 里 的 视 场 光 阑 决 定 的 视 场 直 径 也 称 视 场 宽 度, 是 指 在 显 微 镜 下 看 到 的 圆 形 视 场 内 所 能 容 纳 被 检 物 体 的 实 际 范 围 视 场 直 径 愈 大, 愈 便 于 观 察 F=FN/Mob F: 视 场 直 径,FN: 视 场 数,Mob: 物 镜 放 大 率 视 场 数 (Field Number, 简 写 为 FN), 标 刻 在 目 镜 的 镜 筒 外 侧 由 公 式 可 看 出 : 1. 视 场 直 径 与 视 场 数 成 正 比 2. 增 大 物 镜 的 倍 数, 则 视 场 直 径 减 小 因 此, 若 在 低 倍 镜 下 可 以 看 到 被 检 物 体 的 全 貌, 而 换 成 高 倍 物 镜, 就 只 能 看 到 被 检 物 体 的 很 小 一 部 份 六. 覆 盖 差 显 微 镜 的 光 学 系 统 也 包 括 盖 玻 片 在 内 由 于 盖 玻 片 的 厚 度 不 标 准, 光 线 从 盖 玻 片 进 入 空 气 产 生 折 射 后 的 光 路 发 生 了 改 变, 从 而 产 生 了 相 差, 这 就 是 覆 盖 差 覆 盖 差 的 产 生 影 响 了 显 微 镜 的 成 响 质 量 国 际 上 规 定, 盖 玻 片 的 标 准 厚 度 为 0.17mm, 许 可 范 围 在 mm., 在 物 镜 的 制 造 上 已 将 此 厚 度 范 围 的 相 差 计 算 在 内 物 镜 外 壳 上 标 科 的 确 0.17, 即 表 明 该 物 镜 要 求 盖 玻 片 的 厚 度 七. 工 作 距 离 工 作 距 离 也 叫 物 距, 即 指 物 镜 前 透 镜 的 表 面 到 被 检 物 体 之 间 的 距 离 镜 检 时, 被 检 物 体 应 处 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 5 of 5

6 在 物 镜 的 一 倍 至 二 倍 焦 距 之 间 因 此, 它 与 焦 距 是 两 个 概 念, 平 时 习 惯 所 说 的 调 焦, 实 际 上 是 调 节 工 作 距 离 在 物 镜 数 值 孔 径 一 定 的 情 况 下, 工 作 距 离 短 孔 径 角 则 大 数 值 孔 径 大 的 高 倍 物 镜, 其 工 作 距 离 小 第 四 章 显 微 镜 的 光 学 附 件 显 微 镜 得 不 偿 失 光 学 部 件 包 括 物 镜, 目 镜, 聚 光 镜 及 照 明 装 置 几 个 部 分 各 光 学 部 件 都 直 接 决 定 和 影 响 光 学 性 能 的 优 劣, 现 分 述 如 下 : 一. 物 镜 物 镜 是 显 微 镜 最 重 要 的 光 学 部 件, 利 用 光 线 使 被 检 物 体 第 一 次 成 象, 因 而 直 接 关 系 和 影 响 成 象 的 质 量 和 各 项 光 学 技 术 参 数, 是 衡 量 一 台 显 微 镜 质 量 的 首 要 标 准 物 镜 的 结 构 复 杂, 制 作 精 密, 由 于 对 象 差 的 校 正, 金 属 的 物 镜 筒 内 由 相 隔 一 定 距 离 并 被 固 定 的 透 镜 组 组 合 而 成 物 镜 有 许 多 具 体 的 要 求, 如 合 轴, 齐 焦 齐 焦 既 是 在 镜 检 时, 当 用 某 一 倍 率 的 物 镜 观 察 图 象 清 晰 后, 在 转 换 另 一 倍 率 的 物 镜 时, 其 成 象 亦 应 基 本 清 晰, 而 且 象 的 中 心 偏 离 也 应 该 在 一 定 的 范 围 内, 也 就 是 合 轴 程 度 齐 焦 性 能 的 优 劣 和 合 轴 程 度 的 高 低 是 显 微 镜 质 量 的 一 个 重 要 标 志, 它 是 与 物 镜 的 本 身 质 量 和 物 镜 转 换 器 的 精 度 有 关 物 镜 的 种 类 很 多, 可 从 不 同 的 角 度 分 类, 现 分 类 介 绍 根 据 物 镜 相 差 校 正 的 程 度 进 行 分 类, 可 分 为 : 1. 消 色 差 物 镜 (Achromatic objective): 这 是 常 见 的 物 镜, 外 壳 上 常 有 "Ach" 字 样 这 类 物 镜 仅 能 校 正 轴 上 点 的 位 置 色 差 ( 红, 蓝 二 色 ) 和 球 差 ( 黄 绿 光 ) 以 及 消 除 近 轴 点 慧 差 不 能 校 正 其 它 色 光 的 色 差 和 球 差, 且 场 曲 很 大 2. 复 消 色 差 物 镜 (Apochromatic objective): 复 消 色 差 物 镜 的 结 构 复 杂, 透 镜 采 用 了 特 种 玻 璃 或 萤 石 等 材 料 制 作 而 成, 物 镜 的 外 壳 上 标 有 "Apo" 字 样, 这 种 物 镜 不 仅 能 校 正 红 绿 蓝 三 色 光 的 色 差, 同 时 能 校 正 红, 蓝 二 色 光 的 球 差 由 于 对 各 种 相 差 的 校 正 极 为 完 善, 比 响 应 倍 率 的 消 色 差 物 镜 有 更 大 的 数 值 孔 径, 这 样 不 仅 分 辨 率 高, 象 质 量 优 而 且 也 有 更 高 的 有 效 放 大 率 因 此, 复 消 色 差 物 镜 的 性 能 很 高, 适 用 于 高 级 研 究 镜 检 和 显 微 照 相. 3. 半 复 消 色 差 物 镜 ( Semi apochromatic objedtive): 半 复 消 色 差 物 镜 又 称 氟 石 物 镜, 物 镜, 物 镜 的 外 壳 上 标 有 "FL" 字 样, 在 结 构 上 透 镜 的 数 目 比 消 色 差 物 镜 多, 比 负 消 色 差 物 镜 少, 成 象 质 量 上, 远 较 消 色 差 物 镜 为 好, 接 近 于 复 消 色 差 物 镜 平 场 物 镜 是 在 物 镜 的 透 镜 系 统 中 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 6 of 6

7 增 加 一 快 半 月 形 的 厚 透 镜, 以 达 到 校 正 场 曲 的 缺 陷 平 场 物 镜 的 视 场 平 坦, 更 适 用 于 镜 检 和 显 微 照 象 4. 特 种 物 镜 : 所 谓 " 特 种 物 镜 " 是 在 上 述 物 镜 的 基 础 上, 专 门 为 达 到 某 些 特 定 的 观 察 效 果 而 设 计 制 造 的 主 要 有 以 下 几 种 : (1) 带 校 正 环 物 镜 (Correction collar objective): 在 物 镜 的 中 部 装 有 环 装 的 调 节 环, 当 转 动 调 节 环 时, 可 调 节 物 镜 内 透 镜 组 之 间 的 距 离, 从 而 校 正 由 盖 玻 片 厚 度 不 标 准 引 起 的 覆 盖 差 调 节 环 上 的 刻 度 可 从 , 在 物 镜 的 外 壳 上 也 标 科 有 此 数 字, 表 明 可 校 正 盖 玻 片 从 mm 厚 度 之 间 的 误 差 (2) 带 虹 彩 光 阑 的 物 镜 (Iris diaphragm objective ): 在 物 镜 镜 筒 内 的 上 部 装 有 虹 彩 光 阑, 外 方 也 可 以 旋 转 的 调 节 环, 转 动 时 可 调 节 光 阑 孔 径 的 大 小, 这 种 结 构 的 物 镜 是 高 级 的 油 浸 物 镜, 它 的 作 用 是 在 暗 视 场 镜 检 时, 往 往 由 于 某 些 原 因 而 使 照 明 光 线 进 入 物 镜, 使 视 场 背 景 不 够 黑 暗, 造 成 镜 检 质 量 的 下 降 这 时 调 节 光 阑 的 大 小, 使 背 景 变 黑, 使 被 检 物 体 更 明 亮, 增 强 镜 检 效 果 (3) 相 衬 物 镜 (Phase contrast objective ): 这 种 物 镜 是 由 于 相 衬 镜 检 术 的 专 用 物 镜, 其 特 点 是 在 物 镜 的 后 焦 平 面 处 装 有 相 板 (4) 无 罩 物 镜 (No cover objective ): 有 些 被 检 物 体, 如 涂 抹 制 片 等, 上 面 不 能 加 用 盖 玻 片, 这 样 在 镜 检 时 应 使 用 无 罩 物 镜, 否 则 图 象 质 量 将 明 显 下 降, 特 别 是 在 高 倍 镜 检 时 更 为 明 显 这 种 物 镜 的 外 壳 上 常 标 刻 NC, 同 时 在 盖 玻 片 厚 度 的 位 置 上 没 有 0.17 的 字 样, 而 标 刻 着 "0" (5) 长 工 作 距 离 物 镜 : 这 种 物 镜 是 倒 置 显 微 镜 的 专 用 物 镜, 它 是 为 了 满 足 组 织 培 养, 悬 浮 液 等 材 料 的 镜 检 而 设 计 二. 目 镜 目 镜 的 作 用 是 把 物 镜 放 大 的 实 象 ( 中 间 象 ) 再 放 大 一 便, 并 把 物 象 映 入 观 察 者 的 眼 中, 实 质 上 目 镜 就 是 一 个 放 大 镜 已 知 显 微 镜 的 分 辨 率 能 力 是 由 物 镜 的 数 值 孔 径 所 决 定 的, 而 目 镜 只 是 起 放 大 作 用 因 此, 对 于 物 镜 不 能 分 辨 出 的 结 构, 目 镜 放 的 再 大, 也 仍 然 不 能 分 辨 出 由 于 不 同 系 列 目 镜 光 学 设 计 不 同, 所 以 不 能 混 用 三. 聚 光 镜 聚 光 镜 又 名 聚 光 器, 装 在 载 物 台 的 下 方 小 型 的 显 微 镜 往 往 无 聚 光 镜, 在 使 用 数 值 孔 径 0.40 以 上 的 物 镜 时, 则 必 须 具 有 聚 光 镜 聚 光 镜 不 仅 可 以 弥 补 光 量 的 不 足 和 适 当 改 变 从 光 源 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 7 of 7

8 射 来 的 光 的 性 质, 而 且 将 光 线 聚 焦 于 被 检 物 体 上, 以 得 到 最 好 的 照 明 效 果 聚 光 镜 的 的 结 构 有 多 种, 同 时 根 据 物 镜 数 值 孔 径 的 大 小, 相 应 地 对 聚 光 镜 的 要 求 也 不 同 1. 阿 贝 聚 光 镜 (Abbe condenser) 这 是 由 德 国 光 学 大 学 大 师 恩 斯 特 阿 贝.(Ernst Abbe) 设 计 阿 贝 聚 光 镜 由 两 片 透 镜 组 成, 有 较 好 的 聚 光 能 力, 但 是 在 物 镜 数 值 孔 径 高 于 0.60 时, 则 色 差, 球 差 就 显 示 出 来 因 此, 多 用 于 普 通 显 微 镜 上 2. 消 色 差 聚 光 镜 (Achromatic aplanatic condenser ) 这 种 聚 光 镜 又 名 " 消 色 差 消 球 差 聚 光 镜 " 和 " 齐 明 聚 光 镜 " 它 由 一 系 列 透 镜 组 成, 它 对 色 差 球 差 的 校 正 程 度 很 高, 能 得 到 理 想 的 图 象, 是 明 场 镜 检 中 质 量 最 高 的 一 种 聚 光 镜, 其 NA 值 达 1.4 因 此, 在 高 级 研 究 显 微 镜 常 配 有 此 种 聚 光 镜 它 不 适 用 于 4 X 以 下 的 低 倍 物 镜, 否 则 照 明 光 源 不 能 充 满 整 个 视 场 3. 摇 出 式 聚 光 镜 ( Swing out condenser) 在 使 用 低 倍 物 镜 时 ( 如 4X), 由 于 视 场 大, 光 源 所 形 成 的 光 锥 不 能 充 满 真 整 个 视 场, 造 成 视 场 边 缘 部 分 黑 暗, 只 中 央 部 分 被 照 亮 要 使 视 场 充 满 照 明, 就 需 将 聚 光 镜 的 上 透 镜 从 光 路 中 摇 出 4. 其 它 聚 光 镜 : 聚 光 镜 除 上 述 明 场 使 用 的 类 型 外, 还 有 作 特 殊 用 途 的 聚 光 镜 如 暗 视 野 聚 光 镜, 相 衬 聚 光 镜, 偏 光 聚 光 镜, 微 分 干 涉 聚 光 镜 等, 以 上 聚 光 镜 分 别 适 用 于 相 应 的 观 察 方 式 四. 显 微 镜 的 照 明 装 置 显 微 镜 的 照 明 方 法 按 其 照 明 光 束 的 形 成, 可 分 为 " 透 射 式 照 明 ", 和 " 落 射 式 照 明 " 两 大 类 前 者 适 用 于 透 明 或 半 透 明 的 被 检 物 体, 绝 大 数 生 物 显 微 镜 属 于 此 类 照 明 法 ; 后 者 则 适 用 于 非 透 明 的 被 检 物 体, 光 源 来 自 上 方, 又 称 " 反 射 式 或 落 射 式 照 明 " 主 要 应 用 与 金 相 显 微 镜 或 荧 光 镜 检 法 1. 透 射 式 照 明 透 射 式 照 明 法 分 中 心 照 明 和 斜 射 照 明 两 种 形 式 : (1) 中 心 照 明 : 这 是 最 常 用 的 透 射 式 照 明 法, 其 特 点 是 照 明 光 束 的 中 轴 与 显 微 镜 的 光 轴 同 在 一 条 直 线 上 它 又 分 为 " 临 界 照 明 " 和 " 柯 勒 照 明 " 两 种 A. 临 界 照 明 (Critical illumination): 这 是 普 通 的 照 明 法 这 种 照 明 的 特 点 是 光 源 经 聚 光 镜 后 成 象 在 被 检 物 体 上, 光 束 狭 而 强, 这 是 它 的 优 点 但 是 光 源 的 灯 丝 象 与 被 检 物 体 的 平 面 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 8 of 8

9 重 合, 这 样 就 造 成 被 检 物 体 的 照 明 呈 现 出 不 均 匀 性, 在 有 灯 丝 的 部 分 则 明 亮 ; 无 灯 丝 的 部 分 则 暗 淡, 不 仅 影 响 成 象 的 质 量, 更 不 适 合 显 微 照 相, 这 是 临 界 照 明 的 主 要 缺 陷 其 补 救 的 方 法 是 在 光 源 的 前 方 放 置 乳 白 和 吸 热 滤 色 片, 使 照 明 变 得 较 为 均 匀 和 避 免 光 源 的 长 时 间 的 照 射 而 损 伤 被 检 物 体 B. 柯 勒 照 明 : 柯 勒 照 明 克 服 了 临 界 照 明 的 缺 点, 是 研 究 用 显 微 镜 中 的 理 想 照 明 法 这 中 照 明 法 不 仅 观 察 效 果 佳, 而 且 是 成 功 地 进 行 显 微 照 相 所 必 须 的 一 种 照 明 法 光 源 的 灯 丝 经 聚 光 镜 及 可 变 视 场 光 阑 后, 灯 丝 象 第 一 次 落 在 聚 光 镜 孔 径 的 平 面 处, 聚 光 镜 又 将 该 处 的 后 焦 点 平 面 处 形 成 第 二 次 的 灯 丝 象 这 样 在 被 检 物 体 的 平 面 处 没 有 灯 丝 象 的 形 成, 不 影 响 观 察 此 外 照 明 变 得 均 匀 观 察 时, 可 改 变 聚 光 镜 孔 径 光 阑 的 大 小, 使 光 源 充 满 不 同 物 镜 的 入 射 光 瞳, 而 使 聚 光 镜 的 数 值 孔 径 与 物 镜 的 数 值 孔 径 匹 配 同 时 聚 光 镜 又 将 视 场 光 阑 成 象 在 被 检 物 体 的 平 面 处, 改 变 视 场 光 阑 的 大 小 可 控 制 照 明 范 围 此 外, 这 种 照 明 的 热 焦 点 不 在 被 检 物 体 的 平 面 处, 即 使 长 时 间 的 照 明, 也 不 致 损 伤 被 检 物 体 (2) 斜 射 照 明 : 这 种 照 明 光 束 的 中 轴 与 显 微 镜 的 光 轴 不 在 一 直 线 上, 而 是 与 光 轴 形 成 一 定 的 角 度 斜 照 在 物 体 上, 因 此 成 斜 射 照 明 相 衬 显 微 术 和 暗 视 野 显 微 术 就 是 斜 射 照 明 2. 落 射 式 照 明 这 种 照 明 的 光 束 来 自 物 体 的 上 方 通 过 物 镜 后 射 到 被 检 物 体 上, 这 样 物 镜 又 起 着 聚 光 镜 的 作 用 这 种 照 明 法 是 适 用 于 非 透 明 物 体, 如 金 属, 矿 物 等 四. 显 微 镜 的 光 轴 调 节 在 显 微 镜 的 光 学 系 统 中, 光 源 聚 光 镜 物 镜 和 目 镜 的 光 轴 以 及 光 阑 的 中 心 必 须 与 显 微 镜 的 光 轴 同 在 一 直 线 上, 所 以 在 镜 检 前 必 须 进 行 显 微 镜 光 轴 的 调 节, 否 则 不 能 达 到 最 佳 观 察 效 果 1. 光 源 灯 丝 调 节 : 旧 式 显 微 镜 需 要 调 节 灯 泡 的 位 置 目 前 的 新 型 显 微 镜 的 光 源 已 经 进 行 了 予 定 心 设 置, 所 以 不 需 要 调 整 2. 聚 光 镜 的 中 心 调 整 : 实 际 上 显 微 镜 光 轴 的 调 整 的 重 点 即 是 聚 光 镜 的 位 置 调 整 首 先 将 视 场 光 阑 缩 小, 用 10X 物 镜 观 察, 在 视 场 内 可 见 到 视 场 光 阑 的 轮 廓, 如 果 不 在 中 央, 则 利 用 聚 光 镜 外 侧 的 两 个 调 整 螺 钉 将 其 调 至 中 央 部 分, 当 缓 慢 地 增 大 视 场 光 阑 时, 能 看 到 光 束 向 视 场 周 缘 均 匀 展 开 直 至 视 场 光 阑 的 轮 廓 象 完 全 与 视 场 边 缘 内 接, 说 明 已 经 和 轴 和 轴 后 再 略 为 增 大 视 场 光 阑, 使 轮 廓 象 刚 好 处 于 视 场 外 切 或 略 大 3. 孔 径 光 阑 的 调 节 : 孔 径 光 阑 安 装 在 聚 光 镜 内, 研 究 用 显 微 镜 的 聚 光 镜 的 外 侧 边 缘 上 都 有 科 数 及 定 位 记 号, 这 样 便 于 调 节 聚 光 镜 与 物 镜 的 数 值 孔 径 相 匹 配, 原 则 上 说 更 换 物 镜 时 需 调 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 9 of 9

10 整 聚 光 镜 的 数 值 孔 径, 一 般 物 镜 的 数 值 孔 径 乘 0.6 或 0.8 就 是 聚 光 镜 的 数 值 孔 径 第 五 章 各 种 显 微 镜 检 术 介 绍 前 面 讲 述 了 显 微 镜 的 光 学 原 理 以 及 附 件, 下 面 将 分 类 介 绍 一 下 各 类 研 究 用 镜 检 术 在 生 物 研 究 领 域, 透 射 式 明 场 显 微 镜 得 到 广 泛 应 用, 在 此 基 础 上 各 种 特 殊 的 镜 检 方 法 也 得 到 应 用, 如 相 衬, 荧 光, 干 涉, 暗 场, 这 些 镜 检 方 法 在 高 档 显 微 镜 上 均 能 同 时 实 现 第 一 节 正 立 式 显 微 镜 一. 明 视 野 观 察 (Bright field) 明 视 野 镜 检 是 大 家 比 较 熟 悉 的 一 种 镜 检 方 式, 广 泛 应 用 于 病 理 检 验, 用 于 观 察 被 染 色 的 切 片, 所 有 显 微 镜 均 能 完 成 此 功 能 在 此 不 再 赘 述 二. 暗 视 野 观 察 (Dark field) 暗 视 野 实 际 是 暗 场 照 明 发 它 的 特 点 和 明 视 野 不 同, 不 直 接 观 察 到 照 明 的 光 线, 而 观 察 到 的 是 被 检 物 体 反 射 或 衍 射 的 光 线 因 此, 视 场 成 为 黑 暗 的 背 景, 而 被 检 物 体 则 呈 现 明 亮 的 象 暗 视 野 的 原 理 是 根 据 光 学 上 的 丁 道 尔 现 象, 微 尘 在 强 光 直 射 通 过 的 情 况 下, 人 眼 不 能 观 察, 这 是 因 为 强 光 绕 射 造 成 的 若 把 光 线 斜 射 它, 由 于 光 的 反 射, 微 粒 似 乎 增 大 了 体 积, 为 人 眼 可 见 暗 视 野 观 察 所 需 要 的 特 殊 附 件 是 暗 视 野 聚 光 镜 它 的 特 点 是 不 让 光 束 由 下 至 上 的 通 过 被 检 物 体, 而 是 将 光 线 改 变 途 径, 使 其 斜 射 向 被 检 物 体, 使 照 明 光 线 不 直 接 进 入 物 镜, 利 用 被 检 物 体 表 面 反 射 或 衍 射 光 形 成 的 明 亮 图 象 暗 视 野 观 察 的 分 辨 率 远 高 于 明 视 野 观 察, 最 高 达 mm.. 三. 相 衬 镜 检 法 (Phase contrast) 在 光 学 显 微 镜 的 发 展 过 程 中, 相 衬 镜 检 术 的 发 明 成 功, 是 近 代 显 微 镜 技 术 中 的 重 要 成 就 我 们 知 道, 人 眼 只 能 区 分 光 波 的 波 长 ( 颜 色 ) 和 振 幅 ( 亮 度 ), 对 于 无 色 通 明 的 生 物 标 本, 当 光 线 通 过 时, 波 长 和 振 幅 变 化 不 大, 在 明 场 观 察 时 很 难 观 察 到 标 本. 相 衬 显 微 镜 利 用 被 检 物 体 的 光 程 之 差 进 行 镜 检, 也 就 是 有 效 地 利 用 光 的 干 涉 现 象, 将 人 眼 不 可 分 辨 的 相 位 差 变 为 可 分 辨 的 振 幅 差, 即 使 是 无 色 透 明 的 物 质 也 可 成 为 清 晰 可 见 这 大 大 便 利 了 活 体 细 胞 的 观 察, 因 此 相 衬 镜 检 法 广 泛 应 用 于 倒 置 显 微 镜 相 衬 镜 检 法 在 装 置 上 与 明 场 不 同, 有 一 些 特 殊 要 求 : 1. 环 状 光 阑 (Ring slit): 装 在 聚 光 镜 的 下 方, 而 与 聚 光 镜 组 合 为 一 体 相 衬 聚 光 镜 它 是 由 大 小 不 同 的 环 形 光 阑 装 在 一 圆 盘 内, 外 面 标 有 10X 20X 40X 100X 等 字 样, 与 相 对 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 10 of 10

11 应 倍 数 的 物 镜 配 合 使 用 2. 相 板 (Phase plate): 装 在 物 镜 的 后 焦 平 面 处, 它 分 为 两 部 分, 一 是 通 过 直 射 光 的 部 分, 为 半 透 明 的 环 状, 叫 共 轭 面 ; 另 一 是 通 过 衍 射 光 的 部 分, 叫 " 补 偿 面 " 有 相 板 的 物 镜 称 " 相 衬 物 镜 ", 外 壳 上 常 有 "Ph" 字 样 相 衬 镜 检 法 是 一 种 比 较 复 杂 的 镜 检 方 法, 想 要 得 到 好 的 观 察 效 果, 显 微 镜 的 调 试 非 常 重 要 除 此 之 外 还 应 注 意 以 下 几 个 方 面 1. 光 源 要 强, 全 部 开 启 孔 径 光 阑 ; 2. 使 用 滤 色 片, 使 光 波 近 于 单 色 ; 四. 微 分 干 涉 称 镜 检 术 (Differential interference contrast DIC) 微 分 干 涉 镜 检 术 出 现 于 60 年 代, 它 不 仅 能 观 察 无 色 透 明 的 物 体, 而 且 图 象 呈 现 出 浮 雕 壮 的 立 体 感, 并 具 有 相 衬 镜 检 术 所 不 能 达 到 的 某 些 优 点, 观 察 效 果 更 为 逼 真 1. 原 理 微 分 干 涉 称 镜 检 术 是 利 用 特 制 的 渥 拉 斯 顿 棱 镜 来 分 解 光 束 分 裂 出 来 的 光 束 的 振 动 方 向 相 互 垂 直 且 强 度 相 等, 光 束 分 别 在 距 离 很 近 的 两 点 上 通 过 被 检 物 体, 在 相 位 上 略 有 差 别 由 于 两 光 束 的 裂 距 极 小, 而 不 出 现 重 影 现 象, 使 图 象 呈 现 出 立 体 的 三 维 感 觉 2. 微 分 干 涉 称 镜 检 术 所 需 的 特 殊 部 件 : (1) 起 偏 镜 (2) 检 偏 镜 (3) 渥 拉 斯 顿 棱 镜 2 块 3. 微 分 干 涉 称 镜 检 时 的 注 意 事 项 (1) 因 微 分 干 涉 衬 灵 敏 度 高, 制 片 表 面 不 能 有 污 物 和 灰 尘 (2) 具 有 双 折 射 性 的 物 质, 不 能 达 到 微 分 干 涉 衬 镜 检 镜 检 的 效 果 (3) 倒 置 显 微 镜 应 用 微 分 干 涉 衬 时, 不 能 用 塑 料 培 养 皿 五 荧 光 镜 检 术 荧 光 镜 检 术 是 用 短 波 长 的 光 线 照 射 用 荧 光 素 染 色 过 的 被 检 物 体, 使 之 受 激 发 后 而 产 生 长 波 长 的 荧 光, 然 后 观 察 荧 光 镜 检 术 广 泛 应 用 于 生 物, 医 学 等 领 域 1. 荧 光 镜 检 术 一 般 分 为 透 射 和 落 射 式 两 种 类 型 (1) 透 射 式 : 激 发 光 来 自 被 检 物 体 的 下 方, 聚 光 镜 为 暗 视 野 聚 光 镜, 使 激 发 光 不 进 入 物 镜, 而 使 荧 光 进 入 物 镜 它 在 低 倍 情 况 下 明 亮, 而 高 倍 则 暗, 在 油 浸 和 调 中 时, 较 难 操 作, 尤 以 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 11 of 11

12 低 倍 的 照 明 范 围 难 于 确 定, 但 能 得 到 很 暗 的 视 野 背 景 透 射 式 不 使 用 于 非 透 明 的 被 检 物 体 (2) 落 射 式 : 透 射 式 目 前 几 乎 被 淘 汰, 新 型 的 荧 光 显 微 镜 多 为 落 射 式, 光 源 来 自 被 检 物 体 的 上 方, 在 光 路 中 具 有 分 光 镜, 所 以 对 透 明 和 不 透 明 的 被 检 物 体 都 适 用 由 于 物 镜 起 了 聚 光 镜 的 作 用, 不 仅 便 于 操 作, 而 且 从 低 倍 到 高 倍, 可 以 实 现 整 个 视 场 的 均 匀 照 明 2. 荧 光 镜 检 术 的 注 意 事 项 (1) 激 发 光 长 时 间 的 照 射, 会 发 生 荧 光 的 衰 减 和 淬 灭 现 象, 因 此 尽 可 能 缩 短 观 察 时 间, 暂 时 不 观 察 时, 应 用 挡 板 遮 盖 激 发 光 (2) 作 油 镜 观 察 时, 应 用 " 无 荧 光 油 " (3) 荧 光 几 乎 都 较 弱, 应 在 较 暗 的 室 内 进 行 (4) 电 源 最 好 装 稳 压 器, 否 则 电 压 不 稳 不 仅 会 降 低 汞 灯 的 寿 命, 也 会 影 响 镜 检 的 效 果 目 前 许 多 新 兴 生 物 研 究 领 域 应 用 到 荧 光 显 微 镜, 如 基 因 原 位 杂 交 (FISH) 等 等 第 二 节 偏 光 显 微 镜 (Polarizing microscope ) 一. 偏 光 显 微 镜 的 特 点 偏 光 显 微 镜 是 鉴 定 物 质 细 微 结 构 光 学 性 质 的 一 种 显 微 镜 凡 具 有 双 折 射 的 物 质, 在 偏 光 显 微 镜 下 就 能 分 辨 的 清 楚, 当 然 这 些 物 质 也 可 用 染 色 发 来 进 行 观 察, 但 有 些 则 不 可 能, 而 必 须 利 用 偏 光 显 微 镜 偏 光 显 微 镜 的 特 点, 就 是 将 普 通 改 变 为 偏 光 进 行 镜 检 的 方 法, 以 鉴 别 某 一 物 质 是 单 折 射 ( 各 向 同 行 ) 或 双 折 射 性 ( 各 向 异 性 ) 双 折 射 性 是 晶 体 的 基 本 特 性 因 此, 偏 光 显 微 镜 被 广 泛 地 应 用 在 矿 物, 化 学 等 领 域 在 生 物 学 和 植 物 学 也 有 应 用 二. 偏 光 显 微 镜 的 基 本 原 理 偏 光 显 微 镜 的 原 理 比 较 复 杂, 在 此 不 作 过 多 介 绍, 偏 光 显 微 镜 必 须 具 备 以 下 附 件 (a) 起 偏 镜 (b) 检 偏 镜 (c) 专 用 无 应 力 物 镜 (d) 旋 转 载 物 台 三. 偏 光 镜 检 术 的 方 式 ( 一 ) 正 相 镜 检 (Orthscope): 又 称 无 畸 变 镜 检, 其 特 点 是 使 用 低 倍 物 镜, 不 用 伯 特 兰 透 镜 (Bertrand Lens), 同 时 为 使 照 明 孔 径 变 小, 推 开 聚 光 镜 的 上 透 镜 正 相 镜 检 用 于 检 查 物 体 的 双 折 射 性 ( 二 ) 锥 光 镜 检 (Conoscope): 又 称 干 涉 镜 检, 这 种 方 法 用 于 观 察 物 体 的 单 轴 或 双 轴 性 三. 偏 光 显 微 镜 在 装 置 上 的 要 求 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 12 of 12

13 ( 一 ) 光 源 : 最 好 采 用 单 色 光, 因 为 光 的 速 度, 折 射 率, 和 干 涉 现 象 由 于 波 长 的 不 同 而 有 差 异 一 般 镜 检 可 使 用 普 通 光 ( 二 ) 目 镜 : 要 带 有 十 字 线 的 目 镜 ( 三 ) 聚 光 镜 : 为 了 取 得 平 行 偏 光, 应 使 用 能 推 出 上 透 镜 的 摇 出 式 聚 光 镜 ( 四 ) 伯 特 兰 透 镜 : 这 是 把 物 体 所 有 造 成 的 初 级 相 放 大 为 次 级 相 的 辅 助 透 镜 四. 偏 光 镜 检 术 的 要 求 ( 一 ) 载 物 台 的 中 心 与 光 轴 同 轴 ( 二 ) 起 偏 镜 和 检 偏 镜 应 处 于 正 交 位 置 ( 三 ) 制 片 不 宜 过 薄 第 三 节 倒 置 显 微 镜 (Inverted microscope) 前 面 讲 的 是 正 立 式 显 微 镜 的 镜 检 方 式, 主 要 用 于 切 片 的 观 察 而 倒 置 显 微 镜 是 为 了 适 应 生 物 学 医 学 等 领 域 中 的 组 织 培 养 细 胞 离 体 培 养 浮 游 生 物 环 境 保 护 食 品 检 验 等 显 微 观 察 由 于 上 述 样 品 特 点 的 限 制, 被 检 物 体 均 放 置 在 培 养 皿 ( 或 培 养 瓶 ) 中, 这 样 就 要 求 倒 置 显 微 镜 的 物 镜 和 聚 光 镜 的 工 作 距 离 很 长, 能 直 接 对 培 养 皿 中 的 被 检 物 体 进 行 显 微 观 察 和 研 究 因 此, 物 镜 聚 光 镜 和 光 源 的 位 置 都 颠 倒 过 来, 故 称 为 " 倒 置 显 微 镜 " 由 于 工 作 距 离 的 限 制, 倒 置 显 微 镜 物 镜 的 最 大 放 大 率 为 60X 一 般 研 究 用 倒 置 显 微 镜 都 配 置 有 4X 10X 20X 及 40X 相 差 物 镜, 因 为 倒 置 显 微 镜 多 用 于 无 色 透 明 的 活 体 观 察 如 果 用 户 有 特 殊 需 要, 也 可 以 选 配 其 它 附 件, 用 来 完 成 微 分 干 涉 荧 光 及 简 易 偏 光 等 观 察 目 前 倒 置 显 微 镜 广 泛 应 用 于 patch clamp,transgene ICSI 等 领 域 第 四 节 体 视 显 微 镜 (Stereo microscope) 体 视 显 微 镜 又 称 " 实 体 显 微 镜 " 或 " 解 剖 镜 ", 是 一 种 具 有 正 象 立 体 感 地 目 视 仪 器, 被 广 泛 地 应 用 于 生 物 学 医 学 农 林 工 业 及 海 洋 生 物 各 部 门 它 具 有 如 下 地 特 点 : 1. 双 目 镜 筒 中 的 左 右 两 光 束 不 是 平 行, 而 是 具 有 一 定 的 夹 角 体 视 角 ( 一 般 为 12 度 15 度 ), 因 此 成 象 具 有 三 维 立 体 感 ; 2. 象 是 直 立 的, 便 于 操 作 和 解 剖, 这 是 由 于 在 目 镜 下 方 的 棱 镜 把 象 倒 转 过 来 的 缘 故 ; 3. 虽 然 放 大 率 不 如 常 规 显 微 镜, 但 其 工 作 距 离 很 长 4. 焦 深 大, 便 于 观 察 被 检 物 体 的 全 层 5. 视 场 直 径 大 目 前 体 视 镜 的 光 学 结 构 是 : 由 一 个 共 用 的 初 级 物 镜, 对 物 体 成 象 后 的 两 光 束 被 两 组 中 间 物 镜 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 13 of 13

14 变 焦 镜 分 开, 并 成 一 体 视 角 再 经 各 自 的 目 镜 成 象, 它 的 倍 率 变 化 是 由 改 变 中 间 镜 组 之 间 的 距 离 而 获 得 的, 因 此 又 称 为 " 连 续 变 倍 体 视 显 微 镜 "(Zoom stereo microscope) 随 着 应 用 的 要 求, 目 前 体 视 镜 可 选 配 丰 富 的 选 购 附 件, 如 荧 光, 照 相, 摄 象, 冷 光 源 等 等 二 双 目 显 微 镜 的 维 护 和 维 修 双 目 电 光 显 微 镜 通 常 用 于 科 研 教 学 医 疗 卫 生 等, 是 工 作 中 必 不 可 少 的 精 密 仪 器 不 管 它 的 型 号 与 产 地 有 何 不 同, 但 整 体 结 构 都 是 相 同 的 使 用 中 经 常 出 现 故 障 而 影 响 工 作 进 行, 就 这 一 问 题 谈 谈 自 己 在 工 作 中 针 对 性 的 维 修 经 验 (1) 光 学 结 构 原 理 从 显 微 镜 所 看 到 物 象 系, 经 过 两 次 放 大, 显 微 镜 的 光 程 及 放 大 作 用, 光 源 的 平 衡 光 到 达 反 光 镜, 由 反 光 镜 反 射 进 入 聚 光 器, 经 聚 光 镜 聚 焦 照 明 标 本, 这 股 光 线 经 物 镜 前 焦 点 进 入 物 镜, 再 经 后 焦 点, 向 上 散 开 构 成 第 一 次 放 大 的 倒 立 实 象 投 落 在 目 镜 前 焦 平 面, 进 入 目 镜 后 再 构 成 第 二 次 放 大 的 正 立 虚 象 落 在 显 微 镜 前 面 视 距 的 地 方 人 眼 所 看 到 的 就 是 第 二 次 放 大 的 物 象 物 镜 的 放 大 倍 数 为 物 镜 的 焦 距 除 光 学 筒 长, 目 镜 的 放 大 倍 数 为 目 镜 的 焦 距 除 视 距 点 倍 数 为 两 者 的 积 公 式 : 物 镜 的 倍 数 目 镜 的 倍 数 = 放 大 倍 数 (2) 故 障 现 象 使 用 显 微 镜 过 程 中 遇 到 的 问 题 : 成 家 模 糊 乃 至 看 不 到 标 本 上 的 任 何 物 体 故 障 排 除 首 先 检 查 光 视 是 否 达 到 按 要 求 的 光 度, 光 度 较 差 同 样 会 造 成 图 象 不 清, 其 次 物 镜 可 能 被 香 柏 油 糊 死 把 物 镜 卸 下 用 85% 乙 醚,15% 无 水 乙 醇 混 合 液 装 入 小 瓶, 用 甲 级 脱 脂 棉 配 小 木 扦 子 进 行 清 擦, 直 到 干 净 为 止 如 仍 观 察 不 到 任 何 成 象, 应 送 专 业 人 员 对 镜 头 进 行 拆 擦 校 正 故 障 现 象 发 生 偏 光 现 象, 一 是 定 位 器 变 动 无 法 进 入 正 常 状 态, 二 是 棱 镜 部 件 松 落 引 起 变 位 三 是 聚 光 器 按 装 不 在 中 心 故 障 排 除 先 把 转 换 器 拆 下 检 查 定 位 器 是 否 损 坏 或 变 位, 让 定 位 器 入 槽 进 行 紧 固, 如 坏 更 新 二 是 把 棱 镜 外 壳 拆 下 来 对 棱 镜 进 行 校 正 直 到 满 意 为 止, 三 是 把 聚 光 器 紧 固 螺 丝 松 开, 让 聚 光 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 14 of 14

15 器 进 入 中 心 然 后 固 紧 螺 丝 (3) 光 源 故 障 现 象 电 光 显 微 镜 使 用 中 常 发 生 的 故 障, 灯 光 不 亮, 或 亮 度 不 变 化 始 终 处 于 最 亮 度 和 最 暗 状 态 故 障 分 析 一 是 光 路 接 触 不 良 二 是 灯 泡 击 坏 三 是 二 极 管 击 穿 根 据 以 上 情 况 进 行 顺 序 检 查, 系 统 解 决 问 题 故 障 排 除 首 先 检 查 灯 泡 是 否 击 穿, 如 果 灯 泡 坏 了 进 行 更 新 假 如 灯 泡 没 有 问 题, 用 万 用 表 测 二 极 管 是 否 击 穿, 测 量 不 通 路 按 二 极 管 型 号 更 换 新 的 灯 光 仍 不 亮 的 话, 就 要 细 心 查 找 每 个 部 位 电 路 接 触 是 否 良 好, 焊 接 点 不 实 的 地 方 进 行 重 新 焊 按 故 障 排 除 电 源 光 度 始 终 处 于 一 种 状 态, 是 因 为 发 生 调 节 电 位 器 亮 度 不 变 化, 此 故 降 是 可 控 硅 态 流 滤 波 电 容 击 穿 所 致 卸 掉 底 座 拆 下 可 控 硅 电 容 识 别 型 号 进 行 更 新 为 延 长 仪 器 的 使 用 寿 命, 对 显 微 镜 应 进 行 不 断 维 修 保 养 三 显 微 镜 的 各 部 件 说 明 显 微 镜 是 一 种 精 密 的 光 学 仪 器, 已 有 300 多 年 的 发 展 史 自 从 有 了 显 微 镜, 人 们 看 到 了 过 去 看 不 到 的 许 多 微 小 生 物 和 构 成 生 物 的 基 本 单 元 细 胞 目 前, 不 仅 有 能 放 大 千 余 倍 的 光 学 显 微 镜, 而 且 有 放 大 几 十 万 倍 的 电 子 显 微 镜, 使 我 们 对 生 物 体 的 生 命 活 动 规 律 有 了 更 进 一 步 的 认 识 在 普 通 中 学 生 物 教 学 大 纲 中 规 定 的 实 验 中, 大 部 分 要 通 过 显 微 镜 来 完 成, 因 此, 显 微 镜 性 能 的 好 坏 是 做 好 观 察 实 验 的 关 键 一 显 微 镜 的 光 学 系 统 显 微 镜 的 光 学 系 统 主 要 包 括 物 镜 目 镜 反 光 镜 和 聚 光 器 四 个 部 件 广 义 的 说 也 包 括 照 明 光 源 滤 光 器 盖 玻 片 和 载 玻 片 等 ( 一 ) 物 镜 物 镜 是 决 定 显 微 镜 性 能 的 最 重 要 部 件, 安 装 在 物 镜 转 换 器 上, 接 近 被 观 察 的 物 体, 故 叫 做 物 镜 或 接 物 镜 1 物 镜 的 分 类 物 镜 根 据 使 用 条 件 的 不 同 可 分 为 干 燥 物 镜 和 浸 液 物 镜 ; 其 中 浸 液 物 镜 又 可 分 为 水 浸 物 镜 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 15 of 15

16 和 油 浸 物 镜 ( 常 用 放 大 倍 数 为 倍 ) 根 据 放 大 倍 数 的 不 同 可 分 为 低 倍 物 镜 (10 倍 以 下 ) 中 倍 物 镜 (20 倍 左 右 ) 高 倍 物 镜 (40 65 倍 ) 根 据 像 差 矫 正 情 况, 分 为 消 色 差 物 镜 ( 常 用, 能 矫 正 光 谱 中 两 种 色 光 的 色 差 的 物 镜 ) 和 复 色 差 物 镜 ( 能 矫 正 光 谱 中 三 种 色 光 的 色 差 的 物 镜, 价 格 贵, 使 用 少 ) 2 物 镜 的 主 要 参 数 : 物 镜 主 要 参 数 包 括 : 放 大 倍 数 数 值 孔 径 和 工 作 距 离 1 放 大 倍 数 是 指 眼 睛 看 到 像 的 大 小 与 对 应 标 本 大 小 的 比 值 它 指 的 是 长 度 的 比 值 而 不 是 面 积 的 比 值 例 : 放 大 倍 数 为 100, 指 的 是 长 度 是 1μm 的 标 本, 放 大 后 像 的 长 度 是 100μm, 要 是 以 面 积 计 算, 则 放 大 了 10,000 倍 显 微 镜 的 总 放 大 倍 数 等 于 物 镜 和 目 镜 放 大 倍 数 的 乘 积 2 数 值 孔 径 也 叫 镜 口 率, 简 写 NA 或 A, 是 物 镜 和 聚 光 器 的 主 要 参 数, 与 显 微 镜 的 分 辨 力 成 正 比 干 燥 物 镜 的 数 值 孔 径 为 , 油 浸 物 镜 ( 香 柏 油 ) 的 数 值 孔 径 为 工 作 距 离 是 指 当 所 观 察 的 标 本 最 清 楚 时 物 镜 的 前 端 透 镜 下 面 到 标 本 的 盖 玻 片 上 面 的 距 离 物 镜 的 工 作 距 离 与 物 镜 的 焦 距 有 关, 物 镜 的 焦 距 越 长, 放 大 倍 数 越 低, 其 工 作 距 离 越 长 例 :10 倍 物 镜 上 标 有 10/0.25 和 160/0.17, 其 中 10 为 物 镜 的 放 大 倍 数 ;0.25 为 数 值 孔 径 ; 160 为 镜 筒 长 度 ( 单 位 mm);0.17 为 盖 玻 片 的 标 准 厚 度 ( 单 位 mm) 10 倍 物 镜 有 效 工 作 距 离 为 6.5mm,40 倍 物 镜 有 效 工 作 距 离 为 0.48mm 3 物 镜 的 作 用 是 将 标 本 作 第 一 次 放 大, 它 是 决 定 显 微 镜 性 能 的 最 重 要 的 部 件 分 辨 力 的 高 低 分 辨 力 也 叫 分 辨 率 或 分 辨 本 领 分 辨 力 的 大 小 是 用 分 辨 距 离 ( 所 能 分 辨 开 的 两 个 物 点 间 的 最 小 距 离 ) 的 数 值 来 表 示 的 在 明 视 距 离 (25cm) 之 处, 正 常 人 眼 所 能 看 清 相 距 0.073mm 的 两 个 物 点, 这 个 0.073mm 的 数 值, 即 为 正 常 人 眼 的 分 辨 距 离 显 微 镜 的 分 辨 距 离 越 小, 即 表 示 它 的 分 辨 力 越 高, 也 就 是 表 示 它 的 性 能 越 好 显 微 镜 的 分 辨 力 的 大 小 由 物 镜 的 分 辨 力 来 决 定 的, 而 物 镜 的 分 辨 力 又 是 由 它 的 数 值 孔 径 和 照 明 光 线 的 波 长 决 定 的 当 用 普 通 的 中 央 照 明 法 ( 使 光 线 均 匀 地 透 过 标 本 的 明 视 照 明 法 ) 时, 显 微 镜 的 分 辨 距 离 为 d=0.61λ/na 式 中 d 物 镜 的 分 辨 距 离, 单 位 nm linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 16 of 16

17 λ 照 明 光 线 波 长, 单 位 nm NA 物 镜 的 数 值 孔 径 例 如 油 浸 物 镜 的 数 值 孔 径 为 1.25, 可 见 光 波 长 范 围 为 nm, 取 其 平 均 波 长 550 nm, 则 d=270 nm, 约 等 于 照 明 光 线 波 长 一 半 一 般 地, 用 可 见 光 照 明 的 显 微 镜 分 辨 力 的 极 限 是 0.2μm ( 二 ) 目 镜 因 为 它 靠 近 观 察 者 的 眼 睛, 因 此 也 叫 接 目 镜 安 装 在 镜 筒 的 上 端 1 目 镜 的 结 构 通 常 目 镜 由 上 下 两 组 透 镜 组 成, 上 面 的 透 镜 叫 做 接 目 透 镜, 下 面 的 透 镜 叫 做 会 聚 透 镜 或 场 镜 上 下 透 镜 之 间 或 场 镜 下 面 装 有 一 个 光 阑 ( 它 的 大 小 决 定 了 视 场 的 大 小 ), 因 为 标 本 正 好 在 光 阑 面 上 成 像, 可 在 这 个 光 阑 上 粘 一 小 段 毛 发 作 为 指 针, 用 来 指 示 某 个 特 点 的 目 标 也 可 在 其 上 面 放 置 目 镜 测 微 尺, 用 来 测 量 所 观 察 标 本 的 大 小 目 镜 的 长 度 越 短, 放 大 倍 数 越 大 ( 因 目 镜 的 放 大 倍 数 与 目 镜 的 焦 距 成 反 比 ) 2 目 镜 的 作 用 是 将 已 被 物 镜 放 大 的, 分 辨 清 晰 的 实 像 进 一 步 放 大, 达 到 人 眼 能 容 易 分 辨 清 楚 的 程 度 常 用 目 镜 的 放 大 倍 数 为 5 16 倍 3 目 镜 与 物 镜 的 关 系 物 镜 已 经 分 辨 清 楚 的 细 微 结 构, 假 如 没 有 经 过 目 镜 的 再 放 大, 达 不 到 人 眼 所 能 分 辨 的 大 小, 那 就 看 不 清 楚 ; 但 物 镜 所 不 能 分 辨 的 细 微 结 构, 虽 然 经 过 高 倍 目 镜 的 再 放 大, 也 还 是 看 不 清 楚, 所 以 目 镜 只 能 起 放 大 作 用, 不 会 提 高 显 微 镜 的 分 辨 率 有 时 虽 然 物 镜 能 分 辨 开 两 个 靠 得 很 近 的 物 点, 但 由 于 这 两 个 物 点 的 像 的 距 离 小 于 眼 睛 的 分 辨 距 离, 还 是 无 法 看 清 所 以, 目 镜 和 物 镜 即 相 互 联 系, 又 彼 此 制 约 ( 三 ) 聚 光 器 聚 光 器 也 叫 集 光 器 位 于 标 本 下 方 的 聚 光 器 支 架 上 它 主 要 由 聚 光 镜 和 可 变 光 阑 组 成 其 中, 聚 光 镜 可 分 为 明 视 场 聚 光 镜 ( 普 通 显 微 镜 配 置 ) 和 暗 视 场 聚 光 镜 1 聚 光 镜 的 主 要 参 数 数 值 孔 径 (NA ) 是 聚 光 镜 的 主 要 参 数, 最 大 数 值 孔 径 一 般 是 , 数 值 孔 径 有 一 定 的 可 变 范 围, 通 常 刻 在 上 方 透 镜 边 框 上 的 数 字 是 代 表 最 大 的 数 值 孔 径, 通 过 调 节 下 部 可 变 光 阑 的 开 放 程 度, 可 得 到 此 数 字 以 下 的 各 种 不 同 的 数 值 孔 径, 以 适 应 不 同 物 镜 的 需 要 有 的 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 17 of 17

18 聚 光 镜 由 几 组 透 镜 组 成, 最 上 面 的 一 组 透 镜 可 以 卸 掉 或 移 出 光 路, 使 聚 光 镜 的 数 值 孔 径 变 小, 以 适 应 低 倍 物 镜 观 察 时 的 照 明 2 聚 光 镜 的 作 用 聚 光 镜 的 作 用 相 当 于 凸 透 镜, 起 会 聚 光 线 的 作 用, 以 增 强 标 本 的 照 明 一 般 地 把 聚 光 镜 的 聚 光 焦 点 设 计 在 它 上 端 透 镜 平 面 上 方 约 1.25mm 处 ( 聚 光 焦 点 正 在 所 要 观 察 的 标 本 上, 载 玻 片 的 厚 度 为 1.1mm 左 右 ) 3 可 变 光 阑 可 变 光 阑 也 叫 光 圈, 位 于 聚 光 镜 的 下 方, 由 十 几 张 金 属 薄 片 组 成, 中 心 部 分 形 成 圆 孔 其 作 用 是 调 节 光 强 度 和 使 聚 光 镜 的 数 值 孔 径 与 物 镜 的 数 值 孔 径 相 适 应 可 变 光 阑 开 得 越 大, 数 值 孔 径 越 大 ( 观 察 完 毕 后, 应 将 光 圈 调 至 最 大 ) 在 可 变 光 阑 下 面, 还 有 一 个 圆 形 的 滤 光 片 托 架 说 明 : 在 中 学 实 验 室 只 有 教 师 用 显 微 镜 (1600 或 1500 ) 才 配 有 聚 光 器, 学 生 用 显 微 镜 (640 或 500 ) 配 的 是 旋 转 光 栏 紧 贴 在 载 物 台 下, 能 做 圆 周 转 动 的 圆 盘, 旋 转 光 栏 ( 也 称 为 遮 光 器 ), 光 栏 上 有 大 小 不 等 的 圆 孔, 叫 光 圈 直 径 分 别 为 mm, 转 动 旋 转 光 栏, 光 栏 上 每 个 光 圈 都 可 以 对 正 通 光 孔, 通 过 大 小 不 等 的 光 圈 来 调 节 光 线 的 强 弱 ( 四 ) 反 光 镜 反 光 镜 是 一 个 可 以 随 意 转 动 的 双 面 镜, 直 径 为 50mm, 一 面 为 平 面, 一 面 为 凹 面, 其 作 用 是 将 从 任 何 方 向 射 来 的 光 线 经 通 光 孔 反 射 上 来 平 面 镜 反 射 光 线 的 能 力 较 弱, 是 在 光 线 较 强 时 使 用, 凹 面 镜 反 射 光 线 的 能 力 较 强, 是 在 光 线 较 弱 时 使 用 反 光 镜 通 常 一 面 是 平 面 镜, 另 一 面 是 凹 面 镜, 装 在 聚 光 器 下 面, 可 以 在 水 平 与 垂 直 两 个 方 向 上 任 意 旋 转 反 光 镜 的 作 用 是 使 由 光 源 发 出 的 光 线 或 天 然 光 射 向 聚 光 器 当 用 聚 光 器 时 一 般 用 平 面 镜, 不 用 时 用 凹 面 镜 ; 当 光 线 强 时 用 平 面 镜, 弱 时 用 凹 面 镜 观 察 完 毕 后, 应 将 反 光 镜 垂 直 放 置 ( 五 ) 照 明 光 源 显 微 镜 的 照 明 可 以 用 天 然 光 源 或 人 工 光 源 1 天 然 光 源 光 线 来 自 天 空, 最 好 是 由 白 云 反 射 来 的 不 可 利 用 直 接 照 来 的 太 阳 光 2 人 工 光 源 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 18 of 18

19 1 对 人 工 光 源 的 基 本 要 求 : 有 足 够 的 发 光 强 度 ; 光 源 发 热 不 能 过 多 2 常 用 的 人 工 光 源 : 显 微 镜 灯 ; 日 光 灯 ( 六 ) 滤 光 器 安 装 在 光 源 和 聚 光 器 之 间 作 用 是 让 所 选 择 的 某 一 波 段 的 光 线 通 过, 而 吸 收 掉 其 他 的 光 线, 即 为 了 改 变 光 线 的 光 谱 成 分 或 削 弱 光 的 强 度 分 为 两 大 类 : 滤 光 片 和 液 体 滤 光 器 ( 七 ) 盖 玻 片 和 载 玻 片 盖 玻 片 和 载 玻 片 的 表 面 应 相 当 平 坦, 无 气 泡, 无 划 痕 最 好 选 用 无 色, 透 明 度 好 的, 使 用 前 应 洗 净 盖 玻 片 的 标 准 厚 度 是 0.17±0.02mm, 如 不 用 盖 玻 片 或 盖 玻 片 厚 度 不 合 适, 都 回 影 响 成 像 质 量 载 玻 片 的 标 准 厚 度 是 1.1±0.04mm, 一 般 可 用 范 围 是 1 1.2mm, 若 太 厚 会 影 响 聚 光 器 效 能, 太 薄 则 容 易 破 裂 二 显 微 镜 的 机 械 装 置 显 微 镜 的 机 械 装 置 是 显 微 镜 的 重 要 组 成 部 分 其 作 用 是 固 定 与 调 节 光 学 镜 头, 固 定 与 移 动 标 本 等 主 要 有 镜 座 镜 臂 载 物 台 镜 筒 物 镜 转 换 器 与 调 焦 装 置 组 成 ( 一 ) 镜 座 和 镜 臂 1 镜 座 作 用 是 支 撑 整 个 显 微 镜, 装 有 反 光 镜, 有 的 还 装 有 照 明 光 源 2 镜 臂 作 用 是 支 撑 镜 筒 和 载 物 台 分 固 定 可 倾 斜 两 种 ( 二 ) 载 物 台 ( 又 称 工 作 台 镜 台 ) 载 物 台 作 用 是 安 放 载 玻 片, 形 状 有 圆 形 和 方 形 两 种, 其 中 方 形 的 面 积 为 120mm 110mm 中 心 有 一 个 通 光 孔, 通 光 孔 后 方 左 右 两 侧 各 有 一 个 安 装 压 片 夹 用 的 小 孔 分 为 固 定 式 与 移 动 式 两 种 有 的 载 物 台 的 纵 横 坐 标 上 都 装 有 游 标 尺, 一 般 读 数 为 0.1mm, 游 标 尺 可 用 来 测 定 标 本 的 大 小, 也 可 用 来 对 被 检 部 分 做 标 记 ( 三 ) 镜 筒 镜 筒 上 端 放 置 目 镜, 下 端 连 接 物 镜 转 换 器 分 为 固 定 式 和 可 调 节 式 两 种 机 械 筒 长 ( 从 目 镜 管 上 缘 到 物 镜 转 换 器 螺 旋 口 下 端 的 距 离 称 为 镜 筒 长 度 或 机 械 筒 长 ) 不 能 变 更 的 叫 做 固 定 式 镜 筒, 能 变 更 的 叫 做 调 节 式 镜 筒, 新 式 显 微 镜 大 多 采 用 固 定 式 镜 筒, 国 产 显 微 镜 也 大 多 采 用 固 定 式 镜 筒, 国 产 显 微 镜 的 机 械 筒 长 通 常 是 160mm 安 装 目 镜 的 镜 筒, 有 单 筒 和 双 筒 两 种 单 筒 又 可 分 为 直 立 式 和 倾 斜 式 两 种, 双 筒 则 都 是 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 19 of 19

20 倾 斜 式 的 其 中 双 筒 显 微 镜, 两 眼 可 同 时 观 察 以 减 轻 眼 睛 的 疲 劳 双 筒 之 间 的 距 离 可 以 调 节, 而 且 其 中 有 一 个 目 镜 有 屈 光 度 调 节 ( 即 视 力 调 节 ) 装 置, 便 于 两 眼 视 力 不 同 的 观 察 者 使 用 ( 四 ) 物 镜 转 换 器 物 镜 转 换 器 固 定 在 镜 筒 下 端, 有 3 4 个 物 镜 螺 旋 口, 物 镜 应 按 放 大 倍 数 高 低 顺 序 排 列 旋 转 物 镜 转 换 器 时, 应 用 手 指 捏 住 旋 转 碟 旋 转, 不 要 用 手 指 推 动 物 镜, 因 时 间 长 容 易 使 光 轴 歪 斜, 使 成 像 质 量 边 坏 ( 五 ) 调 焦 装 置 显 微 镜 上 装 有 粗 准 焦 螺 旋 和 细 准 焦 螺 旋 有 的 显 微 镜 粗 准 焦 螺 旋 与 装 在 同 一 轴 上, 大 螺 旋 为 粗 准 焦 螺 旋, 小 螺 旋 为 细 准 焦 螺 旋 ; 有 的 则 分 开 安 置, 位 于 镜 臂 的 上 端 较 大 的 一 对 螺 旋 为 是 粗 准 焦 螺 旋, 其 转 动 一 周, 镜 筒 上 升 或 下 降 10mm 位 于 粗 准 焦 螺 旋 下 方 较 小 的 一 对 螺 旋 为 细 准 焦 螺 旋, 其 转 动 一 周, 镜 筒 升 降 值 为 0.1mm, 细 准 焦 螺 旋 调 焦 范 围 不 小 于 1.8mm 三 显 微 镜 及 其 部 件 的 使 用 1 使 用 单 筒 显 微 镜 时, 要 养 成 用 左 眼 观 察 的 习 惯 ( 因 一 般 用 右 手 画 图 ), 观 察 时 要 两 眼 同 时 睁 开, 不 要 睁 一 只 闭 一 只, 因 为 这 样 易 于 疲 劳 为 了 训 练 学 生 习 惯 于 两 眼 同 时 睁 开 观 察, 可 剪 一 块 长 约 14cm, 宽 约 6cm 的 长 方 形 硬 纸 片, 在 靠 近 左 端 处 挖 一 个 直 径 比 镜 筒 上 端 外 径 略 小 的 圆 孔, 把 圆 孔 套 在 镜 筒 上 段, 观 察 时 两 眼 同 时 睁 开, 利 用 纸 片 的 右 端 挡 住 右 眼 的 视 线, 这 样 训 练 一 段 时 间 后, 就 能 习 惯 于 两 眼 同 时 睁 开, 然 后 把 纸 片 去 掉 2 直 筒 显 微 镜 的 镜 臂 与 镜 座 连 接 处, 是 一 个 机 械 关 节, 可 用 于 调 节 镜 筒 的 倾 斜 度, 便 于 观 察, 镜 臂 不 能 过 于 后 倾, 一 般 不 超 过 40 但 是 在 使 用 临 时 装 片 观 察 时, 禁 止 使 用 倾 斜 关 节 ( 当 镜 筒 倾 斜 时, 载 物 台 也 随 之 倾 斜, 载 玻 片 上 的 液 体 易 流 出 ), 尤 其 是 装 片 内 含 酸 性 试 剂 时 严 禁 使 用, 以 免 污 损 镜 体 3 目 镜 和 物 镜 的 使 用 一 般 都 是 用 一 个 放 大 倍 数 适 中 的 目 镜 (10 ) 和 最 低 倍 的 物 镜 开 始 观 察, 逐 步 改 用 倍 数 较 高 的 物 镜, 从 中 找 到 符 合 实 验 要 求 的 放 大 倍 数 转 换 物 镜 时, 先 用 低 倍 镜 观 察, 调 节 到 正 确 的 工 作 距 离 ( 成 像 最 清 晰 ) 如 果 进 一 步 使 用 高 倍 物 镜 观 察, 应 在 转 换 高 倍 物 镜 之 前, 把 物 像 中 需 要 放 大 观 察 的 部 分 移 至 视 野 中 央 ( 将 低 倍 物 镜 转 换 成 高 倍 物 镜 观 察 时, 视 野 中 的 物 像 范 围 缩 小 了 很 多 ) 低 倍 物 镜 和 高 倍 物 镜 基 本 齐 焦 ( 同 高 调 焦 ), 在 用 低 倍 物 镜 观 察 清 晰 时, 换 高 倍 物 镜 应 可 以 见 到 物 像, 但 物 像 不 一 定 很 清 晰, 可 以 转 动 细 准 焦 螺 旋 进 行 调 节 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 20 of 20

21 通 常 认 为, 使 用 任 何 一 个 物 镜 时, 有 效 放 大 倍 数 的 上 限 是 1,000 乘 它 的 数 值 孔 径, 下 限 是 250 乘 它 的 数 值 孔 径 如 40 物 镜 的 数 值 孔 径 是 0.65, 则 上 下 限 分 别 为 : =650 倍 和 倍, 超 过 有 效 放 大 倍 数 上 限 的 叫 做 无 效 放 大, 不 能 提 高 观 察 效 果 低 于 下 限 的 放 大 倍 数 则 人 眼 无 法 分 辨, 不 利 于 观 察 一 般 最 实 用 的 放 大 倍 数 范 围 是 乘 数 值 孔 径 之 间 的 数 字 4 油 浸 物 镜 的 使 用 使 用 油 浸 物 镜 时, 一 般 不 要 使 用 同 高 调 焦 同 高 调 焦 只 适 用 于 每 台 显 微 镜 的 原 配 物 镜, 在 使 用 低 倍 和 高 倍 物 镜 时, 是 一 个 极 有 利 的 方 便 条 件, 但 在 使 用 油 浸 物 镜 时, 则 受 到 一 定 限 制, 一 般 地 说, 用 油 镜 观 察 未 加 盖 玻 片 的 标 本 片 ( 载 玻 片 ) 时, 利 用 同 高 调 焦 的 安 全 度 较 大, 而 对 于 有 盖 玻 片 的 标 本 片, 要 小 心 使 用, 因 为 油 浸 物 镜 的 工 作 距 离 很 短, 在 设 计 和 装 配 时 所 考 虑 的 同 高 是 对 标 准 厚 度 盖 玻 片 的 用 油 浸 物 镜 时, 只 在 标 本 片 上 滴 香 柏 油 观 察 完 毕 后, 要 及 时 进 行 清 洁 工 作, 如 不 及 时 进 行, 香 柏 油 粘 上 灰 尘, 擦 拭 时 灰 尘 粒 子 可 能 磨 损 透 镜, 香 柏 油 在 空 气 中 暴 露 时 间 长, 还 会 变 稠 变 干, 擦 拭 很 困 难, 对 仪 器 很 不 利 擦 拭 要 细 心, 动 作 要 轻 油 浸 物 镜 前 端 先 用 干 的 擦 镜 纸 擦 一 两 次, 把 大 部 分 油 去 掉, 再 用 二 甲 苯 滴 湿 的 擦 镜 纸 擦 两 次, 最 后 再 用 干 的 擦 镜 纸 擦 一 次 标 本 片 上 的 香 柏 油 可 用 拉 纸 法 ( 即 把 一 小 张 擦 镜 纸 盖 在 香 柏 油 上, 然 后 在 纸 上 滴 一 些 二 甲 苯, 趁 湿 把 纸 往 外 拉, 这 样 连 续 三 四 次, 即 可 干 净, 一 般 不 会 损 坏 未 加 盖 玻 片 的 涂 片 标 本 ) 擦 净 擦 镜 纸 也 要 防 尘, 一 般 在 使 用 前, 将 每 页 剪 成 8 小 块, 贮 存 在 一 个 干 净 的 小 培 养 皿 中, 用 起 来 既 节 省 又 方 便 5 聚 光 器 的 使 用 方 法 1 使 用 聚 光 器 的 原 因 当 放 大 倍 数 增 加 时, 一 方 面 由 于 放 大 倍 数 越 高, 透 镜 数 目 越 多, 被 透 镜 吸 收 的 光 线 也 越 多 ; 另 一 方 面 由 于 视 场 ( 指 的 是 所 能 看 到 被 检 标 本 的 范 围 ) 的 亮 度 与 放 大 倍 数 的 平 方 成 反 比, 即 放 大 倍 数 越 高, 视 场 越 暗 为 了 得 到 足 够 的 亮 度, 必 须 安 装 聚 光 器, 把 光 线 集 中 到 所 要 观 察 的 标 本 上 2 观 察 时 聚 光 器 应 处 的 高 度 观 察 时, 要 保 证 得 到 最 好 的 观 察 效 果, 聚 光 器 的 聚 光 焦 点 应 正 好 落 在 标 本 上 要 实 现 这 个 条 件, 就 必 须 调 节 聚 光 器 的 高 度 当 用 平 行 光 照 明 时, 聚 光 器 的 聚 光 焦 点 是 在 它 上 端 透 镜 平 面 中 心 上 方 约 1.25mm 之 处, 因 此, 人 们 常 常 要 求 在 观 察 时 将 聚 光 器 上 升 到 它 上 端 透 镜 平 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 21 of 21

22 面 仅 稍 稍 低 于 载 物 台 平 面 的 高 度, 这 样 聚 光 焦 点 就 可 能 落 到 位 于 标 准 厚 度 载 玻 片 上 的 标 本 上 当 使 用 比 标 准 厚 度 薄 的 载 玻 片 来 承 放 标 本 时, 聚 光 器 的 位 置 要 相 应 地 降 低 一 些, 而 当 使 用 过 厚 地 载 玻 片 时, 聚 光 焦 点 只 能 落 在 标 本 下 方, 不 利 于 精 细 的 观 察 3 聚 光 器 与 物 镜 的 配 合 这 里 所 谓 的 配 合, 就 是 使 聚 光 器 和 物 镜 这 两 者 的 数 值 孔 径 取 得 一 致, 以 更 好 的 进 行 较 为 精 细 的 观 察 假 如 聚 光 器 的 数 值 孔 径 低 于 物 镜, 那 物 镜 的 部 分 数 值 孔 径 就 浪 费 了, 从 而 达 不 到 它 的 最 高 分 辨 力 假 如 把 聚 光 器 的 数 值 孔 径 大 于 物 镜 的 数 值 孔 径, 则 一 方 面 不 能 提 高 物 镜 的 规 定 分 辨 力, 另 一 方 面 反 会 由 于 照 明 光 束 过 宽, 使 物 象 的 清 晰 度 下 降 聚 光 器 与 物 镜 配 合 的 操 作 方 法 是 : 在 完 成 照 明 调 焦 操 作 后, 取 下 目 镜 直 接 向 镜 筒 中 看, 把 聚 光 器 下 的 可 变 光 阑 关 到 最 小, 再 慢 慢 地 开 大 开 到 它 的 口 径 与 所 见 视 场 的 直 径 恰 好 一 样 大, 然 后 按 上 目 镜, 即 可 进 行 观 察 每 转 换 一 次 物 镜, 都 要 随 着 进 行 依 次 这 样 的 配 合 操 作 有 的 聚 光 器 可 变 光 阑 的 边 框 上 刻 有 表 示 开 启 口 径 的 尺 度, 可 以 根 据 刻 度 来 进 行 配 合 历 史 上 显 微 镜 的 发 明 和 显 微 镜 的 每 一 次 创 新 都 给 人 类 的 认 知 带 来 了 飞 跃 式 的 发 展 ; 给 人 类 的 生 活 带 来 了 空 前 的 拓 展 在 提 倡 科 技 创 新 的 今 天, 显 微 镜 的 使 用 已 经 成 为 中 学 生 的 一 项 基 本 技 能, 掌 握 结 构, 科 学 使 用, 良 好 维 护, 使 之 成 为 广 大 青 少 年 探 索 未 来 世 界 的 一 个 窗 口 四 与 显 向 镜 相 关 的 数 码 基 础 术 语 解 释 1 Zeiss 镜 头 ( 蔡 司 镜 头 )(Carl zeiss 人 名 ) 致 力 於 应 用 研 究, 对 於 光 学 玻 璃 技 术 精 密 技 术 以 及 电 子 等 高 品 质 的 产 品 开 发 制 造 销 售 有 贡 献 的 德 国 企 业, 从 1846 年 开 始,Carl Zeiss 已 开 设 生 产 显 微 镜 的 工 作 坊 Zeiss 镜 头 作 为 专 业 的 摄 像 摄 影 镜 头, 在 全 球 享 有 极 高 的 声 誉, 目 前 SONY 的 部 分 数 码 相 机 摄 像 机 产 品 已 经 采 用 Zeiss 镜 头 2 USB(Universal Serial Bus) USB 端 口 作 为 接 驳 在 电 脑 中 的 端 子 有 别 于 以 往 的 " 根 据 不 同 机 器 装 置, 分 别 连 接 至 相 应 的 端 子 " 的 做 法 而 是 " 把 各 种 机 器 接 驳 到 一 种 端 子 上 ", 这 样 就 可 以 更 快 速 地 接 收 发 送 数 据, 并 且 在 电 脑 通 电 状 态 下 可 以 拔 下 电 缆 目 前 得 到 广 泛 应 用 的 是 采 用 USB1.1 标 准 的 USB 端 口, 传 输 速 率 为 12M/S; 新 一 代 USB2.0 标 准 传 输 速 率 高 达 400M/S, 预 计 在 今 后 几 年 可 以 普 及 3 i.link 数 码 输 入 / 输 出 端 子 (IEEE1394 标 准 ) i.link 数 码 输 入 / 输 出 端 子 是 一 种 国 际 标 准 接 口 (IEEE1394 标 准 ), 只 需 使 用 一 条 数 码 连 接 线, 经 i.link 端 子 与 数 码 摄 录 放 一 体 机 等 数 码 影 视 器 材 或 个 人 电 脑 ( 须 配 备 i.link 端 子 ), 以 数 码 对 数 码 的 方 式 连 接, 建 立 一 个 数 码 影 视 器 材 及 电 脑 互 相 连 接 的 资 讯 网 络 透 过 i.link, 可 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 22 of 22

23 以 高 保 真 及 高 速 率 (400M/S) 地 传 送 视 频 及 声 频 信 号, 令 资 料 的 复 制 和 翻 录 更 得 心 应 手, 图 象 效 果 原 汁 原 味 这 种 在 线 的 联 系, 使 不 同 器 材 互 相 配 合 更 为 紧 密, 编 辑 影 像 数 据 更 为 方 便 目 前, 这 一 国 际 标 准 接 口, 已 广 泛 应 用 在 索 尼 数 码 摄 录 放 一 体 机 以 及 其 他 品 牌 的 数 码 影 像 产 品 上 4 白 平 衡 (W e Balance) 在 不 同 光 源 下, 因 色 温 不 同, 拍 摄 出 来 的 相 片 会 偏 色 如 色 温 低 时 光 线 中 的 红, 黄 色 光 含 量 较 多, 所 拍 的 照 片 色 调 会 偏 红, 黄 色 调, 色 文 高 时 光 线 中 的 蓝 绿 色 较 多, 照 片 会 偏 蓝 绿 色 调 此 时 便 需 要 利 用 白 平 衡 功 能 来 作 修 正, 其 原 理 是 控 制 光 线 中 红, 绿 及 蓝 三 元 色 的 明 亮 度, 使 影 像 中 最 大 光 位 达 到 纯 白, 便 能 令 其 它 色 彩 准 确 5 像 素 (Pixel) 是 由 Picture 和 Element 这 两 个 字 母 所 组 成 的, 是 用 来 计 算 数 码 影 像 的 一 种 单 位, 如 同 摄 影 的 相 片 一 样, 数 码 影 像 也 具 有 连 续 性 的 浓 淡 阶 调, 我 们 若 把 影 像 放 大 数 倍, 会 发 现 这 些 连 续 色 调 其 实 是 由 许 多 色 彩 相 近 的 小 方 点 所 组 成, 这 些 小 方 点 就 是 构 成 影 像 的 最 小 单 位 " 像 素 " (Pixel) 6 光 圈 优 先 (aperture priority) 在 自 动 曝 光 照 相 机 上, 优 先 决 定 光 圈 的 刻 度 快 门 速 度 由 电 子 快 门 控 制, 从 而 获 得 适 度 曝 光 的 方 式 7 图 像 分 辨 率 (Image resolution) 用 于 衡 量 图 像 内 数 据 量 多 少 的 一 个 参 数 通 常 表 示 成 ppi( 每 英 寸 像 素 ) 包 含 的 数 据 越 多, 图 形 文 件 的 长 度 就 越 大, 也 能 表 现 更 丰 富 的 细 节 8 曝 光 值 (Exposure value,ev) 光 圈 值 (F 值 ) 和 快 门 速 度 相 配 合, 用 来 表 示 曝 光 量 的 数 值 9 曝 光 补 偿 (E compensation) 拍 摄 者 手 工 对 相 机 的 测 光 值 进 行 调 节 当 相 机 自 动 测 光 值 不 能 准 确 表 现 拍 摄 者 的 意 图 时, 就 需 要 用 曝 光 补 偿 对 曝 光 时 间 ; 反 之 则 减 少 曝 光 时 间 快 门 优 先 改 变 EV 值 会 延 长 曝 光 时 间 ; 反 之 则 减 少 曝 光 时 间 快 门 优 先 改 变 EV 值 不 会 对 快 门 速 度 进 行 改 变, 改 变 的 是 光 圈 的 大 小 程 式 自 动 档 要 看 相 机 制 造 商 的 设 计 和 当 时 具 体 拍 摄 的 参 数 如 果 光 圈 已 经 开 到 最 大, 增 加 EV 值 只 能 放 慢 快 门 10 AWB Automatic W e Balance( 自 动 色 彩 调 整 ) 根 据 拍 摄 场 所 的 光 源, 自 动 感 应 从 而 调 整 色 彩 温 度 的 功 能 色 彩 温 度 是 指 因 光 源 种 类 不 同 造 成 被 拍 摄 物 之 颜 色 的 差 异 尺 度 如 色 彩 温 度 低, 影 像 的 颜 色 就 会 偏 蓝 11 广 角 镜 (Wide Angle) 又 叫 短 焦 镜 头 广 角 镜 因 焦 距 非 常 短, 所 以 投 射 到 底 片 上 的 景 物 就 变 小 了 扩 阔 镜 头 拍 摄 角 度, linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 23 of 23

24 除 可 拍 摄 更 多 景 物, 更 能 在 狭 窄 的 环 境 下 拍 摄 出 宽 阔 角 度 的 影 像 12 信 号 转 换 功 能 利 用 DV 摄 录 放 一 体 内 置 的 信 号 转 换 索 尼 电 子, 可 以 把 传 统 以 模 拟 格 式 储 存 的 影 像 信 号 转 化 为 数 码 信 号 模 拟 信 号 以 视 频 / 声 频 连 接 线 输 入, 同 时 以 i. LINK 数 码 端 子 接 驳 作 为 数 码 信 号 输 出, 影 像 信 号 便 可 以 下 载 到 个 人 电 脑 或 其 他 数 码 器 材, 进 行 多 元 化 数 码 录 像 编 辑 13 相 当 于 35mm 相 机 的 目 前 的 数 码 相 机 的 成 像 器 件 面 积 都 小 于 普 通 的 135 胶 卷 的 面 积, 所 以 其 镜 头 焦 距 很 短, 说 到 其 镜 头 焦 距 时 常 不 说 其 实 际 的 物 理 焦 距, 而 说 与 其 视 角 相 当 的 35mm( 国 内 的 135) 相 机 的 镜 头 焦 距, 也 就 是 说, 其 " 镜 头 的 视 角 相 当 于 xx" 14 红 眼 指 在 用 闪 光 灯 拍 摄 人 像 时, 由 于 被 摄 者 眼 底 血 管 的 反 光, 使 拍 出 照 片 上 人 的 眼 睛 中 有 一 个 红 点 的 现 象 15 AE(Auto Expose) 自 动 曝 光 自 动 曝 光 就 是 相 机 根 据 光 线 条 件 自 动 确 定 曝 光 量 从 根 本 测 光 原 理 上 分 可 分 两 种 : 入 射 式 和 反 射 式 入 射 式 就 是 测 量 照 射 到 相 机 上 的 光 线 的 亮 度 来 确 定 曝 光 组 合, 这 是 一 种 简 单 粗 略 的 控 制, 多 用 于 低 档 相 机 反 射 式 是 测 量 被 摄 体 的 实 际 亮 度, 也 就 是 成 像 的 亮 度 来 确 定 曝 光 组 合, 这 是 比 较 理 想 的 一 种 方 式 从 测 光 计 量 方 式 上 分, 可 以 分 点 测 光 自 动 曝 光 中 央 重 点 自 动 曝 光 多 点 平 衡 自 动 曝 光 等, 各 有 优 缺 点, 分 别 适 应 于 不 同 的 光 线 条 件 或 拍 摄 目 的 从 控 制 过 程 上 分, 可 分 为 光 圈 优 先 快 门 优 先 混 合 优 先 程 序 控 制 预 定 模 式 几 种 顾 名 思 义, 光 圈 优 先 就 是, 先 确 定 使 用 的 光 圈, 相 机 根 据 计 算 出 的 曝 光 量 确 定 合 适 的 快 门 速 度, 这 种 方 式 适 用 于 需 要 预 定 景 深 或 者 配 合 闪 光 灯 调 配 光 比 的 场 合 ; 速 度 优 先 就 是 先 确 定 快 门 速 度, 让 相 机 选 择 合 适 的 光 圈 大 小, 适 用 于 拍 摄 动 体 ; 混 合 优 先 是 弥 补 单 一 优 先 的 不 足 而 先 确 定 光 圈 或 快 门 的 范 围, 再 由 相 机 确 定 曝 光 组 合 ; 程 序 控 制 是 让 相 机 按 照 预 先 编 定 的 控 制 程 序 曝 光 ; 预 定 模 式, 是 生 产 厂 家 根 据 几 种 常 见 的 光 线 条 件, 预 设 了 比 较 合 理 的 曝 光 参 数 供 拍 摄 时 选 择, 一 般 有 : 夜 景 风 光 人 像 运 动 等 几 种 16 AF(Auto Focus) 自 动 对 焦 动 对 焦 有 几 种 方 式, 根 据 控 制 原 理 分 为 主 动 式 和 被 动 式 两 种 主 动 式 自 动 对 焦 通 过 相 机 发 射 一 种 射 线 ( 一 般 是 红 外 线 ), 根 据 反 射 回 来 的 射 线 信 号 确 定 被 摄 体 的 距 离, 再 自 动 调 节 镜 头, 实 现 自 动 对 焦 这 是 最 早 开 发 的 自 动 对 焦 方 式, 比 较 容 易 实 现, 反 应 速 度 快, 成 本 低, 多 用 于 中 档 傻 瓜 相 机 这 种 方 式 精 确 度 有 限, 且 容 易 产 生 误 对 焦, 例 如 当 被 摄 体 前 有 玻 璃 等 反 射 体 时, 相 机 不 能 正 确 分 辨 被 动 式 对 焦 有 一 点 仿 生 学 的 味 道, 是 分 析 物 体 的 成 像 判 断 是 否 已 经 聚 焦, 比 较 精 确, 但 技 术 复 杂, 成 本 高, 而 且 在 低 照 度 条 件 下 难 以 准 确 聚 焦, 多 用 于 高 档 专 业 相 机 一 些 高 智 能 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 24 of 24

25 相 机 还 可 以 锁 定 运 动 的 被 摄 体 甚 至 眼 控 对 焦 17 DV 端 子 [Digital Video Interface 是 DV 规 格 中 接 驳 摄 录 放 一 体 机 与 外 部 装 置 端 子 的 规 格 通 过 以 IEEE1394 为 基 准 端 子 相 互 连 接 DV 装 置 则 可 以 连 接 摄 录 放 一 体 机 与 电 脑 将 映 像 传 送, 同 时 可 以 通 过 电 脑 控 制 DV 装 置 18 解 像 度 用 来 表 示 显 示 印 字 读 取 数 据 的 细 微 程 度 液 晶 显 示 屏 幕 是 通 过 画 面 显 示 的 网 点 构 成 数 值 表 示 解 像 度 的 高 低, 而 印 刷 机 或 扫 描 机 则 通 过 每 一 英 寸 的 网 点 数 值 来 表 示 ( 单 位 :dpi ) 19 相 当 感 光 度 传 统 照 相 机 本 身 无 感 光 度 高 低 可 言, 因 为 感 光 度 只 是 感 光 材 料 的 感 光 速 度 感 光 灵 敏 度 的 度 量 在 传 统 摄 影 中 只 考 虑 胶 卷 的 感 光 度, 但 是 数 字 照 相 机 和 传 统 照 相 机 不 同, 他 本 身 与 用 于 接 受 光 线 信 号 的 CCD 芯 片 构 成 了 一 个 整 体, 对 曝 光 多 少 也 就 有 了 相 应 要 求, 也 就 有 感 光 灵 敏 度 高 低 的 问 题, 这 也 就 相 当 与 胶 卷 具 有 一 定 的 感 光 度 一 样, 因 而 数 字 照 相 机 也 就 有 了 " 相 当 感 光 度 " 说 法 用 通 常 衡 量 胶 卷 感 光 度 高 低 的 眼 光 来 看, 目 前 数 字 照 相 机 感 光 度 分 布 在 中 高 速 的 范 围, 最 低 的 为 ISO50, 最 高 的 为 ISO6400, 多 数 数 字 照 相 机 在 ISO100 左 右 对 一 指 定 数 字 照 相 机 来 说, 感 光 度 一 般 是 单 一 的, 也 有 极 少 数 数 字 照 相 机 给 出 了 一 个 感 光 度 范 围 20 CCD(Charge Coupling Device 电 荷 耦 合 器 件 ) 家 用 摄 录 机 的 摄 录 部 件 都 是 CCD 片, 也 就 是 一 般 说 的 CCD 影 像 感 应 器 镜 头 和 CCD 的 质 量 是 影 响 小 型 摄 录 机 图 像 的 极 为 重 要 的 因 素 采 用 多 少 片 CCD, 尺 寸 是 多 少, 像 素 是 多 少, 都 直 接 影 响 着 图 像 的 质 量 SONY 的 DCR VX2000E 及 DCR TRV900E 内 设 三 菱 镜 把 光 源 分 为 三 原 色 光 ( 红 绿 与 蓝 色 ), 分 别 经 过 三 块 独 立 CCD 影 像 感 应 器 ( 每 块 高 达 450,000 像 素 ) 处 理, 确 保 达 到 高 解 像 度 及 精 确 的 色 彩 重 现 效 果, 因 为 数 码 摄 录 机 内 设 有 三 棱 镜, 此 三 棱 镜 把 光 源 分 为 三 原 色 光 ( 红 色 绿 色 与 蓝 色 ), 三 原 色 光 分 别 经 过 三 块 独 立 CCD 影 像 感 应 器 处 理, 颜 色 的 准 确 程 度 及 影 像 质 量 比 使 用 一 块 CCD 影 像 感 应 器 有 很 大 改 善 另 外,CCD 影 像 感 应 器 的 每 一 个 像 素 都 有 一 个 很 大 的 光 线 采 集 区 域, 因 此 使 摄 录 机 具 有 很 高 的 信 噪 比, 极 好 的 敏 感 度 以 及 很 宽 的 动 态 范 围 而 且, 倍 密 度 的 像 素 分 布 和 无 缝 的 双 色 棱 镜 可 以 获 得 极 为 锐 利 的 图 像 和 非 常 逼 真 的 色 彩, 即 使 是 在 细 微 的? 差 别 处, 例 如 在 鲜 红 色 及 更 深 一 点 的 红 色 之 间, 能 够 清 楚 地 分 辨 出 来 比 特 DXP 数 码 处 理 有 更 佳 的 讯 号 传 送 功 能, 较 传 统 的 10 比 特 模 拟 / 数 码 转 换 器 的 数 码 噪 音 降 低 了 16 倍, 有 效 平 衡 相 片 的 光 暗 度, 令 画 面 更 清 晰 自 然 22 清 晰 度 & 分 解 力 清 晰 度, 一 般 是 从 录 像 机 角 度 出 发, 通 过 看 重 放 图 像 的 清 晰 程 度 来 比 较 图 像 质 量, 所 以 常 用 清 晰 度 一 词 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 25 of 25

26 而 摄 像 机 一 般 使 用 分 解 力 一 词 来 衡 量 它 " 分 解 被 摄 景 物 细 节 " 的 能 力 单 位 是 " 电 视 行 (TVLine)" 也 称 线 意 思 是 从 水 平 方 向 上 看, 相 当 于 将 每 行 扫 描 线 竖 立 起 来, 然 后 乘 上 4/3( 宽 高 比 ), 构 成 水 平 方 向 的 总 线, 称 水 平 分 解 力 它 会 随 CCD 象 素 数 的 多 少 和 视 频 带 宽 而 变 化, 象 素 愈 多 带 宽 愈 宽, 分 解 力 就 愈 高 PAL 制 电 视 机 625 行 是 标 称 垂 直 分 解 力, 除 去 逆 程 的 50 行 外, 实 际 的 有 效 垂 直 分 解 力 为 575 线 水 平 分 解 力 最 高 可 达 575x4/3=766 线 但 是 限 制 线 数 的 主 要 因 素 之 一 还 有 带 宽 经 验 数 据 表 明 可 用 80 线 /MHz 来 计 算 能 再 现 的 电 视 行 ( 线 数 ) 如 6MHz 带 宽 可 通 过 水 平 分 解 力 为 480 线 的 图 像 质 量 低 档 家 用 录 像 机, 如 VHS, 最 多 能 有 240 线 的 清 晰 度, 高 档 家 用 摄 录 机, 如 S V 而 数 码 摄 录 机 的 记 录 方 式 是 数 码 信 号 的 格 式, 清 晰 度 在 500 线 以 上 ( 普 通 电 视 的 清 晰 度 大 约 280 线,VCD 的 清 晰 度 是 230 线 ) 23 光 学 防 抖 系 统 和 电 子 防 抖 系 统 光 学 防 抖 系 统 是 通 过 改 变 镜 片 组 的 位 置 来 达 到 减 震 防 抖 功 能, 根 据 摄 录 放 一 体 机 摇 晃 的 情 况, 调 整 在 镜 头 前 面 三 棱 镜 的 角 度 ( 另 外 镜 头 亦 可 通 过 自 行 转 动 进 行 调 整 ), 在 影 像 的 光 影 到 达 CCD 影 像 感 应 器 之 前, 便 可 以 自 行 调 整, 因 此 拍 摄 出 来 的 影 像 便 不 会 模 糊 不 清 了 电 子 防 抖 系 统 是 指 通 过 电 路 增 加 象 素 来 实 现 防 抖 功 能, 通 过 内 置 的 感 应 器 进 行 调 整 总 之 不 管 上 下 左 右 的 抖 动 都 可 以 通 过 总 像 素 修 正 而 微 型 摄 录 放 一 体 则 普 遍 采 用 电 子 防 抖 系 统 五 相 关 术 语 解 释 1. 图 像 分 辨 率 (Image resolution) [/COLOR] 用 于 量 度 位 图 图 像 内 数 据 量 多 少 的 一 个 参 数 通 常 表 示 成 ppi( 每 英 寸 像 素 ) 包 含 的 数 据 越 多, 图 形 文 件 的 长 度 就 越 大, 也 能 表 现 更 丰 富 的 细 节 但 更 大 的 文 件 也 需 要 耗 用 更 多 的 计 算 机 资 源, 更 多 的 RAM, 更 大 的 硬 盘 空 间 等 等 在 另 一 方 面, 假 如 图 像 包 含 的 数 据 不 够 充 分 ( 图 形 分 辨 率 较 低 ), 就 会 显 得 相 当 粗 糙, 特 别 是 把 图 像 放 大 为 一 个 较 大 尺 寸 观 看 的 时 候 所 以 在 图 片 创 建 期 间, 我 们 必 须 根 据 图 像 最 终 的 用 途 决 定 正 确 的 分 辨 率 这 里 的 技 巧 是 要 首 先 保 证 图 像 包 含 足 够 多 的 数 据, 能 满 足 最 终 输 出 的 需 要 同 时 也 要 适 量, 尽 量 少 占 用 一 些 计 算 机 的 资 源 通 常, 分 辨 率 被 表 示 成 每 一 个 方 向 上 的 像 素 数 量, 比 如 640X480 等 而 在 某 些 情 况 下, 它 也 可 以 同 时 表 示 成 每 英 寸 像 素 (ppi) 以 及 图 形 的 长 度 和 宽 度 比 如 72ppi, 和 8X6 英 寸 Ppi 和 dpi( 每 英 寸 点 数 ) 经 常 都 会 出 现 混 用 现 象 从 技 术 角 度 说, 像 素 (P) 只 存 在 于 计 算 机 显 示 领 域, 而 点 (d) 只 出 现 于 打 印 或 印 刷 领 域 请 注 意 分 辨 2. 插 值 (Interpolation)[/COLOR] 插 值, 有 时 也 称 为 重 置 样 本, 是 在 不 生 成 像 素 的 情 况 下 增 加 图 像 像 素 大 小 的 一 种 方 法, 在 周 围 像 素 色 彩 的 基 础 上 用 数 学 公 式 计 算 丢 失 像 素 的 色 彩 有 些 相 机 使 用 插 值, 人 为 地 增 加 图 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 26 of 26

27 像 的 分 辨 率 3.CCD (CCD)[/COLOR] 电 子 耦 合 设 备 (Charge Coupled Device) 的 缩 写 一 种 感 光 半 导 体 芯 片, 用 于 捕 捉 图 形, 广 泛 运 用 于 扫 描 仪, 复 印 机 以 及 无 胶 片 相 机 等 设 备 与 胶 卷 的 原 理 相 似, 光 线 将 穿 过 一 个 镜 头, 将 图 形 信 息 投 射 到 CCD 上 但 和 胶 卷 不 同 的 是,CCD 既 没 有 能 力 记 录 图 形 数 据, 也 没 有 能 力 永 久 保 存 下 来, 甚 至 不 具 备 曝 光 能 力 所 有 图 形 数 据 都 会 不 停 留 地 送 入 一 个 模 数 转 换 器, 一 个 信 号 处 理 器 以 及 一 个 存 储 设 备 ( 比 如 内 存 芯 片 或 内 存 卡 ) CCD 有 各 式 各 样 的 尺 寸 和 形 状, 最 大 的 有 2 2 平 方 英 寸 通 常,CCD 的 尺 寸 越 大, 集 成 密 度 越 高, 捕 捉 下 来 的 图 形 质 量 就 越 好, 当 然, 生 成 的 数 据 文 件 也 越 长 4. 焦 距 (Focal Length)[/COLOR] 由 镜 片 的 中 心 到 焦 点 的 距 离, 叫 焦 距 焦 距 的 长 短, 决 定 影 像 在 底 片 上 的 大 小 长 焦 镜 头 又 叫 望 远 镜 头, 望 远 镜 头 拍 出 来 的 影 像 比 短 焦 镜 头 更 大 短 焦 镜 头 又 叫 广 角 镜, 广 角 镜 因 焦 距 非 常 短, 所 以 投 射 到 底 片 上 的 景 物 就 变 小 了 事 实 上, 各 种 镜 头 最 大 的 差 别 是 焦 距 不 同 焦 距 基 本 上 决 定 了 影 像 的 大 小 焦 距 大 小 与 视 角 大 小 成 反 比 焦 距 越 大, 视 角 越 小 ; 焦 距 越 小, 视 角 越 大 短 焦 距 称 为 广 角 镜, 视 角 大, 它 的 特 性 是 强 调 近 景, 压 缩 远 景, 透 视 感 很 好, 使 用 时 对 焦 容 易 可 将 靠 近 镜 头 的 景 物 夸 张 性 放 大, 较 远 的 景 物 则 被 压 缩 变 小, 善 用 时 主 题 突 出, 背 景 完 整 使 用 不 良 则 会 造 成 景 物 杂 乱 标 准 镜 头 因 与 人 的 视 角 接 近, 所 以 比 较 没 有 影 像 变 形 扭 曲 的 失 真 现 象 因 它 的 流 通 性 大, 所 以 相 对 的 价 格 因 产 量 多 而 便 宜 它 的 另 一 个 特 色 是 光 圈 通 常 比 较 大 望 远 镜 头 因 焦 距 长, 且 大 而 笨 重, 加 上 视 角 较 小, 像 差 扩 大, 所 以 不 易 制 造 品 质 优 良 的 望 远 镜 头, 价 格 上 难 便 宜 它 的 好 处 是 拉 长 了 摄 影 者 与 被 摄 景 物 的 距 离, 适 合 于 抢 拍 人 物 照 片 或 野 生 动 物, 但 前 景 中 景 远 景 黏 合 在 一 起, 没 有 透 视 感, 但 影 像 结 构 很 扎 实, 不 易 显 的 空 空 荡 荡 5. 光 学 变 焦 (Optical Zoom)[/COLOR] 相 机 在 变 焦 时 是 透 过 镜 片 的 移 动 做 成 的 变 焦 6. 数 码 变 焦 (Digital Zoom)[/COLOR] 数 码 变 焦 是 利 用 内 置 的 程 序 做 出 来 的, 它 不 象 光 学 变 焦 利 用 镜 片 移 动 来 达 到, 影 像 质 素 也 比 光 学 变 焦 差 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 27 of 27

28 7. 光 圈 (Aperture)[/COLOR] 定 义 : 光 圈 是 一 个 用 来 控 制 光 线 透 过 镜 头, 进 入 机 身 内 感 光 面 的 光 量 的 装 置, 它 通 常 是 在 镜 头 内 表 达 光 圈 大 小 我 们 是 用 F 值 光 圈 F 值 = 镜 头 的 焦 距 / 镜 头 口 径 的 直 径 [/COLOR] 从 以 上 的 公 式 可 知 要 达 到 相 同 的 光 圈 F 值, 长 焦 距 镜 头 的 口 径 要 比 短 焦 距 镜 头 的 口 径 大 完 整 的 光 圈 值 系 列 如 下 :F1,F1.4,F2,F2.8,F4,F5.6,F8,F11,F16,F22,F32,F44, F64[/COLOR] 这 里 值 得 一 题 的 是 光 圈 F 值 愈 小, 在 同 一 单 位 时 间 内 的 进 光 量 便 愈 多, 而 且 上 一 级 的 进 光 量 刚 是 下 一 级 的 一 倍, 例 如 光 圈 从 F8 调 整 到 F5.6, 进 光 量 便 多 一 倍, 我 们 也 说 光 圈 开 大 了 一 级 对 于 消 费 型 数 码 相 机 而 言, 光 圈 F 值 常 常 介 于 F2.8 F16, 此 外 许 多 数 码 相 机 在 调 整 光 圈 时, 可 以 做 1/3 级 的 调 整 大 光 圈 值 的 好 处 相 机 的 光 圈 值 范 围 愈 大, 这 样 我 们 可 以 在 不 同 光 线 强 弱 的 地 方 拍 照, 但 通 常 我 们 都 比 较 注 意 最 大 光 圈, 小 光 圈 的 部 份 较 少 注 意, 因 如 拍 摄 环 境 光 线 太 强, 除 了 收 小 光 圈 外, 我 们 也 可 以 把 快 门 速 度 加 快, 但 当 拍 摄 环 境 光 线 太 弱 的 时 候, 我 们 不 能 够 把 快 门 速 度 随 意 减 慢 ( 慢 于 安 全 快 门 ), 这 样 很 容 易 因 手 震 而 做 成 影 像 模 糊, 故 这 时 候 大 光 圈 显 得 特 别 重 要, 但 通 常 有 大 光 圈 的 镜 头, 售 价 会 特 别 贵 不 同 的 光 圈 值 也 可 用 来 控 制 景 深 ( 主 体 前 后 的 清 晰 范 围 ), 光 圈 愈 大, 景 深 愈 短, 光 圈 愈 小, 景 深 愈 长 另 外 在 规 格 表 上, 我 们 看 见 F2.8 F16( 广 角 ) 及 F3.9 F22( 望 远 ), 这 代 表 光 圈 范 围 会 因 变 焦 相 机 的 焦 距 而 改 变, 其 实 是 有 所 谓 恒 光 圈 镜 头, 即 焦 距 变 动 时, 光 圈 范 围 不 会 跟 随 变 动, 但 因 价 钱 贵 很 少 用 于 消 费 型 相 机 六 荧 光 显 微 镜 成 像 原 理 一 荧 光 显 微 镜 荧 光 显 微 镜 是 免 疫 荧 光 细 胞 化 学 的 基 本 工 具 它 是 由 光 源 滤 板 系 统 和 光 学 系 统 等 主 要 部 件 组 成 是 利 用 一 定 波 长 的 光 激 发 标 本 发 射 荧 光, 通 过 物 镜 和 目 镜 系 统 放 大 以 观 察 标 本 的 荧 光 图 像 ( 图 3 15) linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 28 of 28

29 图 3 15 荧 光 显 微 镜 的 结 构 和 主 要 部 件 ( 一 ) 光 源 现 在 多 采 用 200W 的 超 高 压 汞 灯 作 光 源, 它 是 用 石 英 玻 璃 制 作, 中 间 呈 球 形, 内 充 一 定 数 量 的 汞, 工 作 时 由 两 个 电 极 间 放 电, 引 起 水 银 蒸 发, 球 内 气 压 迅 速 升 高, 当 水 银 完 全 蒸 发 时, 可 达 50~70 个 标 准 大 气 压 力, 这 一 过 程 一 般 约 需 5~15min 超 高 压 汞 灯 的 发 光 是 电 极 间 放 电 使 水 银 分 子 不 断 解 离 和 还 原 过 程 中 发 射 光 量 子 的 结 果 它 发 射 很 强 的 紫 外 和 蓝 紫 光, 足 以 激 发 各 类 荧 光 物 质, 因 此, 为 荧 光 显 微 镜 普 遍 采 用 超 高 压 汞 灯 也 散 发 大 量 热 能 因 此, 灯 室 必 须 有 良 好 的 散 热 条 件, 工 作 环 境 温 度 不 宜 太 高 新 型 超 高 压 汞 灯 在 使 用 初 期 不 需 高 电 压 即 可 引 燃, 使 用 一 些 时 间 后, 则 需 要 高 压 启 动 ( 约 为 15000V), 启 动 后, 维 持 工 作 电 压 一 般 为 50~60V, 工 作 电 流 约 4A 左 右 200W 超 高 压 汞 灯 的 平 均 寿 命, 在 每 次 使 用 2h 的 情 况 下 约 为 200h, 开 动 一 次 工 作 时 间 愈 短, 则 寿 命 愈 短, 如 开 一 次 只 工 作 20min, 则 寿 命 降 低 50% 因 此, 使 用 时 尽 量 减 少 启 动 次 数 灯 泡 在 使 用 过 程 中, 其 光 效 是 逐 渐 降 低 的 灯 熄 灭 后 要 等 待 冷 却 才 能 重 新 启 动 点 燃 灯 泡 后 不 可 立 即 关 闭, linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 29 of 29

30 以 免 水 银 蒸 发 不 完 全 而 损 坏 电 极, 一 般 需 要 等 15min 由 于 超 高 压 汞 灯 压 力 很 高, 紫 外 线 强 烈, 因 此 灯 泡 必 须 置 灯 室 中 方 可 点 燃, 以 免 伤 害 眼 睛 和 操 作 时 造 成 发 生 爆 炸 超 高 压 汞 灯 (100W 或 200W) 光 源 的 电 路 和 包 括 变 压 镇 流 启 动 几 个 部 分 在 灯 室 上 有 调 节 灯 泡 发 光 中 心 的 系 统, 灯 泡 球 部 后 面 安 装 有 镀 铝 的 凹 面 反 射 镜, 前 面 安 装 有 集 光 透 镜 国 产 超 高 压 汞 灯 GCQ 200 型 性 能 良 好, 可 以 代 替 HBO 200 等 型 的 进 口 灯 泡, 平 均 寿 命 在 200h 以 上, 价 格 也 比 较 低 我 国 研 制 的 一 种 简 易 轻 便 型 高 色 温 溴 钨 荧 光 光 源 装 置, 体 积 小, 重 量 轻, 功 率 小, 交 直 流 两 用 ( 自 带 直 流 电 源 ), 易 于 携 带, 使 用 方 便, 已 推 广 应 用 ( 二 ) 滤 色 系 统 滤 色 系 统 是 荧 光 显 微 镜 的 重 要 部 位, 由 激 发 滤 板 和 压 制 滤 板 组 成 滤 板 型 号, 各 厂 家 名 称 常 不 统 一 滤 板 一 般 都 以 基 本 色 调 命 名, 前 面 字 母 代 表 色 调, 后 面 字 母 代 表 玻 璃, 数 字 代 表 型 号 特 点 如 德 国 产 品 (Schott)BG12, 就 是 种 蓝 色 玻 璃,B 是 蓝 色 的 第 一 个 字 母,G 是 玻 璃 的 第 一 个 字 母 ; 我 国 产 品 的 名 称 已 统 一 用 拼 音 字 母 表 示, 如 相 当 于 BG12 的 蓝 色 滤 板 名 为 QB24,Q 是 青 色 ( 蓝 色 ) 拼 音 的 第 一 个 字 母,B 是 玻 璃 拼 音 的 第 一 个 字 母 不 过 有 的 滤 板 也 可 以 透 光 分 界 滤 长 命 名, 如 K530, 就 是 表 示 压 制 滤 长 530nm 以 下 的 光 而 透 过 530nm 以 上 的 光 还 有 的 厂 家 的 滤 板 完 全 以 数 字 命 名, 如 美 国 Corning 厂 的 NO:5 58, 即 相 当 于 BG12 用 于 荧 光 显 微 镜 的 主 要 滤 板 如 表 3 1 表 3 1 荧 光 显 微 镜 常 用 滤 板 型 号 和 透 光 特 点 调 基 本 色 件 厂 相 应 名 称 上 海 电 器 元 德 国 (Schott) 苏 联 日 本 2mm 厚 透 光 范 围 ( 峰 值 )nm 黑 紫 ZWB 1 UG 1 yφc 2 DV 1 黑 紫 ZWB 2 UG 5 yφc 1 靛 蓝 ZB 2 BG 1 ΦC 1 BG 1 靛 蓝 ZB 3 BG 3 CC 4 BG 3 300~ 400(365) 280~ 240(360) 300~ 500(380) 260~ 520(400) 310~ 靛 蓝 QB 24 BG 12 CC 8 BG (420) linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 30 of 30

31 淡 蓝 QB 10 BG 38 C3C 5 310~ 720(460) QB 橙 黄 CB 3 OG 1(K530) OC 11 OG 以 上 橙 黄 JB 8 OG 4(K510) ЖC 18 FY 以 上 绿 橙 JB 7 GG 11(K490) ЖC 17 FY 以 上 FY 4 淡 绿 JB 4 GG 3(K430) жc 11 US 以 上 引 自 : 五 九 一 节 五 部 队 编 : 荧 光 显 微 术, 见 参 考 资 料 ) 1. 激 发 滤 板 根 据 光 源 和 荧 光 色 素 的 特 点, 可 选 用 以 下 三 类 激 发 滤 板, 提 供 一 定 波 长 范 围 的 激 发 光 紫 外 光 激 发 滤 板 : 此 滤 板 可 使 400nm 以 下 的 紫 外 光 透 过, 阻 挡 400nm 以 上 的 可 见 光 通 过 常 用 型 号 为 UG 1 或 UG 5, 外 加 一 块 BG 38, 以 除 去 红 色 尾 波 紫 外 蓝 光 激 发 滤 板 : 此 滤 板 可 使 300~450nm 范 围 内 的 光 通 过 常 用 型 号 为 ZB 2 或 ZB 3, 外 加 BG 38 紫 蓝 光 激 发 滤 板 : 它 可 使 350~490nm 的 光 通 过 常 用 型 号 为 QB24(BG12) 最 大 吸 收 峰 在 500nm 以 上 者 的 荧 光 素 ( 如 罗 达 明 色 素 ) 可 用 蓝 绿 滤 板 ( 如 B 7) 激 发 近 年 开 始 采 用 金 属 膜 干 涉 滤 板, 由 于 针 对 性 强, 波 长 适 当, 因 而 激 发 效 果 比 较 玻 璃 滤 更 好 如 西 德 Leitz 厂 的 FITC 专 用 KP490 滤 板 和 罗 达 明 的 S546 绿 色 滤 板, 均 远 比 玻 璃 滤 板 效 果 好 激 发 滤 板 分 薄 厚 两 种, 一 般 暗 视 野 选 用 薄 滤 板, 亮 视 野 荧 光 显 微 镜 可 选 用 厚 一 些 基 本 要 求 是 以 获 得 最 明 亮 的 荧 光 和 最 好 的 背 景 为 准 2. 压 制 滤 板 压 制 滤 板 的 作 用 是 完 全 阻 挡 激 发 光 通 过, 提 供 相 应 滤 长 范 围 的 荧 光 与 激 发 滤 板 相 对 应, 常 用 以 下 3 种 压 制 滤 板 : 紫 外 光 压 制 滤 板 : 可 通 过 可 见 光 阻 挡 紫 外 光 通 过 能 与 UG 1 或 UG 5 组 合 常 用 GG 3K430 或 GG 6K460 紫 蓝 光 压 制 滤 板 : 能 通 过 510nm 以 上 滤 长 的 荧 光 ( 绿 到 红 ), 能 与 BG 12 组 合 通 常 用 OG 4K510 或 OG 1K530 linggo2008@163.com 网 络 资 料 整 理, 学 习 自 用, 请 勿 商 用 Page 31 of 31