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1 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB 食 品 安 全 国 家 标 准 食 品 中 硒 的 测 定 National food safety standard Determination of selenium in foods 发 布 实 施 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布

2 前 言 本 标 准 代 替 GB/T 食 品 中 硒 的 测 定 本 标 准 所 代 替 标 准 的 历 次 版 本 发 布 情 况 为 : GB/T ; GB/T ; GB I

3 食 品 安 全 国 家 标 准 食 品 中 硒 的 测 定 1 范 围 本 标 准 规 定 了 用 氢 化 物 原 子 荧 光 光 谱 法 和 荧 光 法 测 定 食 品 中 硒 的 方 法 本 标 准 适 用 于 食 品 中 硒 的 测 定 2 规 范 性 引 用 文 件 本 标 准 中 引 用 的 文 件 对 于 本 标 准 的 应 用 是 必 不 可 少 的 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件, 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 标 准 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件, 其 最 新 版 本 ( 包 括 所 有 的 修 改 单 ) 适 用 于 本 标 准 第 一 法 氢 化 物 原 子 荧 光 光 谱 法 3 原 理 试 样 经 酸 加 热 消 化 后, 在 6 mo1/l 盐 酸 介 质 中, 将 试 样 中 的 六 价 硒 还 原 成 四 价 硒, 用 硼 氢 化 钠 或 硼 氢 化 钾 作 还 原 剂, 将 四 价 硒 在 盐 酸 介 质 中 还 原 成 硒 化 氢 (H 2 Se), 由 载 气 ( 氩 气 ) 带 入 原 子 化 器 中 进 行 原 子 化, 在 硒 空 心 阴 极 灯 照 射 下, 基 态 硒 原 子 被 激 发 至 高 能 态, 在 去 活 化 回 到 基 态 时, 发 射 出 特 征 波 长 的 荧 光, 其 荧 光 强 度 与 硒 含 量 成 正 比 与 标 准 系 列 比 较 定 量 4 试 剂 和 材 料 除 非 另 有 规 定, 本 方 法 所 使 用 试 剂 均 为 分 析 纯, 水 为 GB/T 6682 规 定 的 三 级 水 4.1 硝 酸 : 优 级 纯 4.2 高 氯 酸 : 优 级 纯 4.3 盐 酸 : 优 级 纯 4.4 混 合 酸 : 将 硝 酸 与 高 氯 酸 按 9:1 体 积 混 合 4.5 氢 氧 化 钠 : 优 级 纯 4.6 硼 氢 化 钠 溶 液 (8 g/l): 称 取 8.0 g 硼 氢 化 钠 (NaBH 4 ), 溶 于 氢 氧 化 钠 溶 液 (5 g/l) 中, 然 后 定 容 至 1000 ml, 混 匀 4.7 铁 氰 化 钾 (100 g/l): 称 取 10.0 g 铁 氰 化 钾 [(K 3 Fe(CN) 6 )], 溶 于 100 ml 水 中, 混 匀 4.8 硒 标 准 储 备 液 : 精 确 称 取 mg 硒 ( 光 谱 纯 ), 溶 于 少 量 硝 酸 中, 加 2 ml 高 氯 酸, 置 沸 水 浴 中 加 热 3 h~4 h, 冷 却 后 再 加 8.4 ml 盐 酸, 再 置 沸 水 浴 中 煮 2 min, 准 确 稀 释 至 1000 ml, 其 盐 酸 浓 度 为 0.1 mo1/l, 此 储 备 液 浓 度 为 每 毫 升 相 当 于 100 μg 硒 1

4 4.9 硒 标 准 应 用 液 : 取 100μg/mL 硒 标 准 储 备 液 1.0 ml, 定 容 至 100 ml, 此 应 用 液 浓 度 为 1μg /ml 注 : 也 可 购 买 该 元 素 有 证 国 家 标 准 溶 液 4.10 盐 酸 (6 mol/l): 量 取 50 ml 盐 酸 (4.3) 缓 慢 加 入 40 ml 水 中, 冷 却 后 定 容 至 100 ml 4.11 过 氧 化 氢 (30 %) 5 仪 器 和 设 备 5.1 原 子 荧 光 光 谱 仪, 带 硒 空 心 阴 极 灯 5.2 电 热 板 5.3 微 波 消 解 系 统 5.4 天 平 : 感 量 为 1 mg 5.5 粉 碎 机 5.6 烘 箱 6 分 析 步 骤 6.1 试 样 制 备 粮 食 : 试 样 用 水 洗 三 次, 于 60 烘 干, 粉 碎, 储 于 塑 料 瓶 内, 备 用 蔬 菜 及 其 他 植 物 性 食 物 : 取 可 食 部 用 水 洗 净 后 用 纱 布 吸 去 水 滴, 打 成 匀 浆 后 备 用 其 它 固 体 试 样 : 粉 碎, 混 匀, 备 用 液 体 试 样 : 混 匀, 备 用 试 样 消 解 电 热 板 加 热 消 解 : 称 取 0.5 g~2 g( 精 确 至 0.001g) 试 样, 液 体 试 样 吸 取 1.00mL~10.00 ml, 置 于 消 化 瓶 中, 加 10.0 ml 混 合 酸 及 几 粒 玻 璃 珠, 盖 上 表 面 皿 冷 消 化 过 夜 次 日 于 电 热 板 上 加 热, 并 及 时 补 加 硝 酸 当 溶 液 变 为 清 亮 无 色 并 伴 有 白 烟 时, 再 继 续 加 热 至 剩 余 体 积 2 ml 左 右, 切 不 可 蒸 干 冷 却, 再 加 5.0 ml 盐 酸 (4.10), 继 续 加 热 至 溶 液 变 为 清 亮 无 色 并 伴 有 白 烟 出 现, 将 六 价 硒 还 原 成 四 价 硒 冷 却, 转 移 至 50 ml 容 量 瓶 中 定 容, 混 匀 备 用 同 时 做 空 白 试 验 微 波 消 解 : 称 取 0.5 g~2 g( 精 确 至 0.001g) 试 样 于 消 化 管 中, 加 10 ml 硝 酸 2 ml 过 氧 化 氢, 振 摇 混 合 均 匀, 于 微 波 消 化 仪 中 消 化, 其 消 化 推 荐 条 件 见 表 1( 可 根 据 不 同 的 仪 器 自 行 设 定 消 解 条 件 ): 表 1 微 波 消 化 推 荐 条 件 STAGE POWER RAMP HOLD W 100% 6: : W 100% 3: : W 100% 5: :00 冷 却 后 转 入 三 角 瓶 中, 加 几 粒 玻 璃 珠, 在 电 热 板 上 继 续 加 热 至 近 干, 切 不 可 蒸 干 再 加 5.0 ml 盐 酸 (4.10), 继 续 加 热 至 溶 液 变 为 清 亮 无 色 并 伴 有 白 烟 出 现, 将 六 价 硒 还 原 成 四 价 硒 冷 却, 转 移 试 样 2

5 消 化 液 于 25 ml 容 量 瓶 中 定 容, 混 匀 备 用 同 时 做 空 白 试 验 吸 取 10.0 ml 试 样 消 化 液 于 15 ml 离 心 管 中, 加 盐 酸 (4.3)2.0 ml, 铁 氰 化 钾 溶 液 (4.7)1.0 ml, 混 匀 待 测 6.2 标 准 曲 线 的 配 制 分 别 取 0.00 ml,0.10 ml,0.20 ml,0.30 ml,0.40 ml,0.50 ml 标 准 应 用 液 于 15 ml 离 心 管 中 用 去 离 子 水 定 容 至 10 ml, 再 分 别 加 盐 酸 (4.3)2 ml, 铁 氰 化 钾 溶 液 (4.7)1.0 ml, 混 匀, 制 成 标 准 工 作 曲 线 6.3 测 定 仪 器 参 考 条 件 : 负 高 压 :340 V; 灯 电 流 :100 ma; 原 子 化 温 度 :800 ; 炉 高 :8 mm; 载 气 流 速 :500 ml/min; 屏 蔽 气 流 速 :1000 ml/min; 测 量 方 式 : 标 准 曲 线 法 ; 读 数 方 式 : 峰 面 积 ; 延 迟 时 间 :1 s; 读 数 时 间 :15 s; 加 液 时 间 :8 s; 进 样 体 积 :2 ml 测 定 : 设 定 好 仪 器 最 佳 条 件, 逐 步 将 炉 温 升 至 所 需 温 度 后, 稳 定 10 min~20 min 后 开 始 测 量 连 续 用 标 准 系 列 的 零 管 进 样, 待 读 数 稳 定 之 后, 转 入 标 准 系 列 测 量, 绘 制 标 准 曲 线 转 入 试 样 测 量, 分 别 测 定 试 样 空 白 和 试 样 消 化 液, 每 测 不 同 的 试 样 前 都 应 清 洗 进 样 器 试 样 测 定 结 果 按 7 计 算 7 分 析 结 果 的 表 述 按 式 (1) 计 算 试 样 中 硒 的 含 量 : ( C C 0) V 1000 X =...(1) m 式 中 : X 试 样 中 硒 的 含 量, 单 位 为 毫 克 每 千 克 或 毫 克 每 升 (mg/kg 或 mg/l); C 试 样 消 化 液 测 定 浓 度, 单 位 为 纳 克 每 毫 升 (ng/ml); C 0 试 样 空 白 消 化 液 测 定 浓 度, 单 位 为 纳 克 每 毫 升 (ng/ml); m 试 样 质 量 ( 体 积 ), 单 位 为 克 或 毫 升 (g 或 ml); V 试 样 消 化 液 总 体 积, 单 位 为 毫 升 (ml) 以 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 算 术 平 均 值 表 示, 结 果 保 留 三 位 有 效 数 字 8 精 密 度 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 10 % 第 二 法 荧 光 法 9 原 理 将 试 样 用 混 合 酸 消 化, 使 硒 化 合 物 氧 化 为 无 机 硒 Se 4+, 在 酸 性 条 件 下 Se 4+ 与 2,3 二 氨 基 萘 (2,3 Diaminonaphthalene, 缩 写 为 DAN) 反 应 生 成 4,5 苯 并 苤 硒 脑 (4,5 Benzo piaselenol), 然 后 用 环 己 烷 萃 取 在 激 发 光 波 长 为 376 nm, 发 射 光 波 长 为 520 nm 条 件 下 测 定 荧 光 强 度, 从 而 计 算 出 试 样 中 硒 的 含 量 10 试 剂 和 材 料 3

6 除 非 另 有 规 定, 本 方 法 所 使 用 试 剂 均 为 分 析 纯, 水 为 GB/T 6682 规 定 的 三 级 水 10.1 硒 标 准 溶 液 : 准 确 称 取 元 素 硒 ( 光 谱 纯 )100.0 mg, 溶 于 少 量 浓 硝 酸 中, 加 入 2 ml 高 氯 酸 (70 %~72 %), 至 沸 水 浴 中 加 热 3 h~4 h, 冷 却 后 加 入 8.4 ml HCl( 盐 酸 浓 度 为 0.1 mol/l) 再 置 沸 水 浴 中 煮 2min 准 确 稀 释 至 1000 ml, 此 为 储 备 液 (Se 含 量 :100 μg/ml) 使 用 时 用 0.1 mol/l 盐 酸 将 储 备 液 稀 释 至 每 毫 升 含 0.05 μg 硒 于 冰 箱 内 保 存, 两 年 内 有 效 10.2 DAN 试 剂 (1.0g/L): 此 试 剂 在 暗 室 内 配 制 称 取 DAN( 纯 度 95%~98%)200 mg 于 一 带 盖 锥 形 瓶 中, 加 入 0.1 mol/l 盐 酸 200 ml, 振 摇 约 15 min 使 其 全 部 溶 解 加 入 约 40 ml 环 己 烷, 继 续 振 荡 5 min 将 此 液 倒 入 塞 有 玻 璃 棉 ( 或 脱 脂 棉 ) 的 分 液 漏 斗 中, 待 分 层 后 滤 去 环 己 烷 层, 收 集 DAN 溶 液 层, 反 复 用 环 己 烷 纯 化 直 至 环 己 烷 中 荧 光 降 至 最 低 时 为 止 ( 约 纯 化 5~6 次 ) 将 纯 化 后 的 DAN 溶 液 储 于 棕 色 瓶 中, 加 入 约 1 cm 厚 的 环 己 烷 覆 盖 表 层, 至 冰 箱 内 保 存 必 要 时 在 使 用 前 再 以 环 己 烷 纯 化 一 次 警 告 : 此 试 剂 有 一 定 毒 性, 使 用 本 试 剂 的 人 员 应 有 正 规 实 验 室 工 作 经 验 使 用 者 有 责 任 采 取 适 当 的 安 全 和 健 康 措 施, 并 保 证 符 合 国 家 有 关 规 定 的 条 例 10.3 混 合 酸 : 将 硝 酸 及 高 氯 酸 按 9+1 体 积 混 合 10.4 去 硒 硫 酸 : 取 浓 硫 酸 200 ml 缓 慢 倒 入 200 ml 水 中, 再 加 入 48 % 氢 溴 酸 30 ml, 混 匀, 至 沙 浴 上 加 热 至 出 现 白 浓 烟, 此 时 体 积 应 为 200 ml 10.5 EDTA 混 合 液 EDTA 溶 液 (0.2 mol/l): 称 取 EDTA 二 钠 盐 37 g, 加 水 并 加 热 至 完 全 溶 解, 冷 却 后 稀 释 至 500 ml; 盐 酸 羟 胺 溶 液 (100 g/l): 称 取 10 g 盐 酸 羟 胺 溶 于 水 中, 稀 释 至 100 ml; 甲 酚 红 指 示 剂 (0.2 g/l): 称 取 甲 酚 红 50 mg 溶 于 少 量 水 中, 加 氨 水 (1+1)1 滴, 待 完 全 溶 解 后 加 水 稀 释 至 250 ml 取 EDTA 溶 液 (10.5.1) 及 盐 酸 羟 胺 溶 液 (10.5.2) 各 50 ml, 加 甲 酚 红 指 示 剂 (10.5.3)5 ml, 用 水 稀 释 至 1 L, 混 匀 10.6 氨 水 (1+1) 10.7 盐 酸 10.8 环 己 烷 : 需 先 测 试 有 无 荧 光 杂 质, 否 则 重 蒸 后 使 用, 用 过 的 环 己 烷 可 回 收, 重 蒸 后 再 使 用 10.9 盐 酸 (1+9) 11 仪 器 和 设 备 11.1 荧 光 分 光 光 度 计 11.2 天 平 : 感 量 为 1mg 11.3 烘 箱 11.4 粉 碎 机 11.5 电 热 板 11.6 水 浴 锅 4

7 12 分 析 步 骤 12.1 试 样 处 理 粮 食 试 样 用 水 洗 三 次, 至 60 烤 箱 中 烘 去 表 面 水 分, 用 粉 碎 机 粉 碎, 储 于 塑 料 瓶 内, 放 一 小 包 樟 脑 精, 盖 紧 瓶 塞 保 存, 备 用 蔬 菜 及 其 他 植 物 性 食 物 取 可 食 部, 用 蒸 馏 水 冲 洗 三 次 后, 用 纱 布 吸 去 水 滴, 不 锈 钢 刀 切 碎, 取 一 定 量 试 样 在 烘 箱 中 于 60 烤 干, 称 重, 计 算 水 分 粉 碎, 备 用 计 算 时 应 折 合 成 鲜 样 重 其 它 固 体 试 样 粉 碎 混 匀 试 样, 备 用 液 体 试 样 混 匀 试 样, 备 用 12.2 试 样 的 消 化 称 含 硒 量 约 为 0.01 µg~0.5 µg 的 粮 食 或 蔬 菜 及 动 物 性 试 样 0.5 g~2 g( 精 确 至 0.001g), 液 体 试 样 吸 取 1.00mL~10.00 ml 于 磨 口 锥 形 瓶 内, 加 10 ml 5 % 去 硒 硫 酸, 待 试 样 湿 润 后, 再 加 20 ml 混 合 酸 液 放 置 过 夜, 次 日 置 电 热 板 上 逐 渐 加 热 当 剧 烈 反 应 发 生 后, 溶 液 呈 无 色, 继 续 加 热 至 白 烟 产 生, 此 时 溶 液 逐 渐 变 成 淡 黄 色, 即 达 终 点 某 些 蔬 菜 试 样 消 化 后 出 现 浑 浊, 以 致 难 以 确 定 终 点, 这 时 可 注 意 瓶 内 出 现 滚 滚 白 烟, 此 刻 立 即 取 下, 溶 液 冷 却 后 又 变 为 无 色 有 些 含 硒 较 高 的 蔬 菜 含 有 较 多 的 Se 6+, 需 要 在 消 化 完 成 后 再 加 10 ml 10% 盐 酸, 继 续 加 热, 使 再 回 终 点, 以 完 全 还 原 Se 6+ 为 Se 4+, 否 则 结 果 将 偏 低 12.3 测 定 上 述 消 化 后 的 试 样 溶 液 加 入 20.0 ml EDTA 混 合 液, 用 氨 水 (10.6) 及 盐 酸 (10.9) 调 至 淡 红 橙 色 (ph 1.5~2.0) 以 下 步 骤 在 暗 室 操 作 : 加 DAN 试 剂 (10.2)3.0 ml, 混 匀 后, 置 沸 水 浴 中 加 热 5 min, 取 出 冷 却 后, 加 环 己 烷 3.0 ml, 振 摇 4 min, 将 全 部 溶 液 移 入 分 液 漏 斗, 待 分 层 后 弃 去 水 层, 小 心 将 环 己 烷 层 由 分 液 漏 斗 上 口 倾 入 带 盖 试 管 中, 勿 使 环 己 烷 中 混 入 水 滴, 于 荧 光 分 光 光 度 计 上 用 激 发 光 波 长 376 nm 发 射 光 波 长 520 nm 测 定 4,5 苯 并 苤 硒 脑 的 荧 光 强 度 12.4 硒 标 准 曲 线 绘 制 准 确 量 取 标 准 硒 溶 液 (0.05 μg/ml)0.00 ml,0.20 ml,1.00 ml,2.00 ml 及 4.00 ml, 相 当 于 0.00 μg,0.01 μg,0.05 μg,0.10 μg 及 0.20 μg 硒, 加 水 至 5.0 ml 后, 按 试 样 测 定 步 骤 同 时 进 行 测 定 当 硒 含 量 在 0.5 µg 以 下 时 荧 光 强 度 与 硒 含 量 呈 线 性 关 系, 在 常 规 测 定 试 样 时, 每 次 只 需 做 试 剂 空 白 与 试 样 硒 含 量 相 近 的 标 准 管 ( 双 份 ) 即 可 12.5 分 析 结 果 的 表 述 试 样 中 硒 含 量 按 式 (2) 计 算 : m1 F2 F = (2) F F m X 式 中 : X 试 样 中 硒 含 量, 单 位 为 微 克 每 克 或 微 克 每 毫 升 (µg /g 或 µg /ml); 5

8 m 1 试 管 中 硒 的 质 量, 单 位 为 微 克 (µg); F 1 标 准 硒 荧 光 读 数 ; F 2 试 样 荧 光 读 数 ; F 0 空 白 管 荧 光 读 数 ; m 试 样 质 量, 单 位 为 克 或 毫 升 (g 或 ml) 以 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 算 术 平 均 值 表 示, 结 果 保 留 三 位 有 效 数 字 13 精 密 度 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 10 % 6

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