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- 态想 宣
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1 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No 绝 经 后 股 骨 颈 骨 折 股 骨 头 骨 铁 含 量 血 清 铁 蛋 白 与 骨 密 度 相 关 性 研 究 骨 密 度 研 究 张 伟 王 兵 张 林 林 赵 环 董 启 榕 艾 红 珍 钱 志 远 黄 曦 徐 又 佳 摘 要 目 的 探 讨 女 性 绝 经 后 股 骨 颈 骨 折 股 骨 头 骨 铁 含 量 血 清 铁 蛋 白 与 髋 部 骨 密 度 的 相 关 性 方 法 2010 年 6 月 至 2013 年 3 月, 收 集 156 例 股 骨 颈 骨 折 行 髋 关 节 置 换 的 绝 经 后 女 性 患 者 资 料, 年 龄 56~92 岁, 平 均 (72.40±8.97) 岁 ; 按 每 10 岁 年 龄 段 分 组, 共 分 5 组, 即 60 岁 组 61~70 岁 组 71~80 岁 组 81~90 岁 组 91 岁 组 患 者 入 院 后 第 2 天 留 空 腹 血 清 标 本 测 定 血 清 铁 蛋 白 和 骨 代 谢 指 标 ; 对 髋 关 节 置 换 术 后 留 取 的 股 骨 头 组 织 行 骨 铁 含 量 检 测 和 骨 铁 染 色, 术 后 第 10 天 行 髋 部 和 腰 椎 骨 密 度 (DXA) 检 测 结 果 5 组 之 间 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 髋 部 和 L 1~4 骨 密 度 存 在 组 间 差 异 髋 部 和 L 1~4 骨 密 度 随 年 龄 增 加 而 下 降, 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 随 年 龄 增 加 而 升 高, 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 检 测 值 均 在 81~90 岁 达 到 峰 值,156 例 患 者 的 平 均 骨 铁 量 为 μg/g, 平 均 血 清 铁 蛋 白 为 μg/l 156 例 患 者 中, 血 清 铁 蛋 白 >200 μg/l 的 患 者 为 100 例 (100/156,64.1%) 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 年 龄 体 重 指 数 可 进 入 髋 部 骨 密 度 回 归 模 型, 股 骨 颈 R 2 =0.443,Wards 三 角 R 2 =0.397, 大 转 子 R 2 =0.322, 全 股 骨 R 2 =0.379; 控 制 年 龄 体 重 体 重 指 数 等 因 素, 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 与 髋 部 骨 密 度 呈 负 相 关, 与 腰 椎 骨 密 度 无 明 显 相 关 性 结 论 发 生 股 骨 颈 脆 性 骨 折 的 绝 经 后 女 性 患 者 体 内 存 在 铁 蓄 积, 股 骨 头 骨 铁 含 量 随 年 龄 增 加 而 升 高, 骨 铁 增 加 和 血 清 铁 蛋 白 升 高 可 能 是 髋 部 骨 密 度 下 降 的 独 立 危 险 因 素, 铁 蓄 积 与 绝 经 后 骨 质 疏 松 症 存 在 相 关 性 关 键 词 骨 质 疏 松, 绝 经 后 ; 股 骨 头 ; 铁 蛋 白 质 类 ; 骨 密 度 Correlation between femoral head bone iron content, serum ferritin and bone mineral density of postmenopausal wom en with femoral neck fragility fracture Zhang Wei *, Wang Bing, Zhang Linlin, Zhao Huan, Dong Qirong, Ai Hongzhen, Qian Zhiyuan, Huang Xi, Xu Youjia. * Department of Orthopaedics, the Second Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou , China Abstract Objective To explore the correlation between femoral head bone iron content, serum ferritin (SF) and bone mineral density of postmenopausal women with femoral neck fragility fracture. Methods From June 2010 to March 2013, 156 postmenopausal women with femoral neck fragility fractures aged from 56 to 92 years old, with an average age of 72.40±8.97 years, were divided into 5 groups based upon the stratification of 10 year age intervals ( 60, 6170, 7180, 8190 and 91). Blood sam ples were collected to determine iron metabolism and bone metabolic markers after overnight fasting. Bone specimens were ob tained for detecting bone iron contents and performing iron stain respectively after hip arthroplasty surgery. BMD was measured by dual energy X ray absorptiometry(dxa)at hip and lumbar spine from L 1 to L 4 ten days after surgery. Results There were signifi cant differences in the values of bone iron content, SF, transferrin, total iron binding capacity, serum procollagen type I N terminal propeptide, β carboxy terminal telopeptide of collagen type I and BMD at hip and L 1 to L 4 in all groups. BMD at hip and L 1 to L 4 de creased while bone iron content and SF increased with age; the peaks of bone iron content and SF were both in 8190 years group; the average of bone iron content and SF was μg/g and μg/l respectively. There were 100 patients (100/156, 64.1%) whose SF was over 200 μg/l. Bone iron content combined with SF, age and BMI could be put into the regression models of BMD at various proximal femur sites(femoral neck R 2 =0.443, Wards triangle R 2 =0.397, greater trochanter R 2 =0.322 and total femur R 2 = 0.379). After adjustment of age, weight, BMI and other factors, we found that bone iron content and SF were negatively correlated with BMD at proximal femur, but had no significant correlation with BMD at lumbar spine. Conclusion Iron accumulation is prevalent in postmenopausal women with hip fragility fractures. High bone iron content and SF are independent risk factors for low BMD at proximal femur. These results provide clinical evidences that iron accumulation is associated with postmenopausal osteoporosis. Key words Osteoporosis, postmenopausal; Femur head; Ferritins; Bone density DOI: /cma.j.issn 基 金 项 目 : 国 家 自 然 基 金 ( ); 江 苏 省 自 然 科 学 基 金 (BK ); 苏 州 重 点 实 验 室 基 金 (SZS201208); 苏 州 市 临 床 重 点 病 种 专 项 (LCZX201305) 作 者 单 位 : 苏 州 大 学 附 属 第 二 医 院 骨 科 ( 张 伟 王 兵 张 林 林 董 启 榕 艾 红 珍 徐 又 佳 ), 预 防 保 健 处 ( 钱 志 远 ); 苏 州 大 学 骨 科 研 究 所 ( 赵 环 ); 美 国 纽 约 大 学 医 学 院 ( 黄 曦 ) 通 信 作 者 : 徐 又 佳,E mail:xuyoujia@medmail.com.cn
2 40 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No 年, 国 际 骨 质 疏 松 基 金 会 (IOF) 提 出 : 全 世 界 每 3 秒 会 发 生 1 例 骨 质 疏 松 骨 折,20% 髋 部 骨 折 患 者 在 骨 折 后 6 个 月 内 可 能 死 亡,50 岁 以 上 骨 质 疏 松 性 骨 折 患 者 中 女 性 发 生 率 为 50% 男 性 为 20% [12] 骨 代 谢 异 常 主 要 为 骨 质 疏 松 症, 临 床 表 现 为 无 症 状 骨 痛 或 发 生 脆 性 骨 折 动 物 实 验 离 体 细 胞 研 究 提 示 铁 代 谢 与 骨 代 谢 有 关 [34] 近 年 来, 临 床 研 究 同 样 发 现 铁 代 谢 与 骨 代 谢 关 系 密 切 2011 年, 徐 [5] 又 佳 和 林 华 提 出 需 重 视 铁 代 谢 在 骨 质 疏 松 症 特 别 是 绝 经 后 骨 质 疏 松 症 诊 治 中 的 意 义 2012 年,Kim [6] 等 对 名 健 康 人 群 进 行 为 期 3 年 的 研 究, 结 果 显 示 血 清 铁 蛋 白 升 高 是 加 速 骨 量 丢 失 的 独 立 危 险 [7] 因 素 ;2013 年,Kim 等 再 次 指 出 年 龄 超 过 45 岁 女 性 高 血 清 铁 蛋 白 骨 量 减 少 与 骨 质 疏 松 性 骨 折 风 险 增 加 密 切 相 关 另 外, 多 数 学 者 提 出 铁 稳 态 与 骨 质 疏 松 症 关 系 密 切, 降 低 铁 过 载 可 能 是 防 治 绝 经 后 骨 质 疏 松 症 的 新 方 法 [810] 结 合 这 些 研 究 观 点, 本 研 究 对 156 例 年 龄 超 过 56 岁 的 髋 部 骨 质 疏 松 性 骨 折 女 性 绝 经 患 者 的 股 骨 头 进 行 骨 铁 检 测, 并 按 年 龄 分 组, 将 骨 铁 指 标 血 清 铁 蛋 白 血 清 骨 代 谢 指 标 骨 密 度 进 行 统 计 学 分 析, 目 的 是 :(1) 探 讨 绝 经 后 髋 部 脆 性 骨 折 患 者 股 骨 头 骨 铁 含 量 血 清 铁 蛋 白 与 骨 质 疏 松 指 标 的 相 关 意 义 ;(2) 分 析 铁 代 谢 与 骨 代 谢 的 临 床 相 关 性 一 一 般 资 料 资 料 与 方 法 回 顾 性 分 析 2010 年 6 月 至 2013 年 3 月,156 例 股 骨 颈 骨 折 行 髋 关 节 置 换 术 的 女 性 绝 经 患 者 资 料, 年 龄 56~92 岁, 平 均 (72.40±8.97) 岁 ; 身 高 145~170 cm, 平 均 ( ± 4.74)cm; 体 重 41~76 kg, 平 均 (56.67±7.19)kg 按 每 10 岁 年 龄 段 分 组, 共 分 5 组, 即 60 岁 组 (11 例 ) 61~70 岁 组 (57 例 ) 71~80 岁 组 (57 例 ) 81~90 岁 组 (26 例 ) 91 岁 组 (5 例 ) 入 选 标 准 :(1) 骨 折 类 型 为 单 发 股 骨 颈 骨 折 ; (2) 损 伤 机 制 为 脆 性 骨 折 ( 行 走 时 摔 倒 滑 倒 扭 伤 等 );(3) 骨 密 度 T 值 均 <1.0, 即 符 合 骨 量 减 少 或 骨 质 疏 松 症 的 条 件 排 除 标 准 :(1) 多 发 骨 折 开 放 性 骨 折 暴 力 性 骨 折 ( 交 通 伤 坠 落 伤 等 );(2) 合 并 慢 性 肝 肾 疾 病 代 谢 性 疾 病 肿 瘤 血 液 系 统 疾 病 ;(3)40 岁 前 行 卵 巢 切 除 术 ;(4) 长 期 接 受 糖 皮 质 激 素 雌 激 素 降 钙 素 以 及 双 膦 酸 盐 等 治 疗 [11] 收 集 本 组 患 者 行 髋 关 节 置 换 术 后 留 下 的 股 骨 头 骨 组 织 进 行 研 究 患 者 均 知 情 同 意, 且 本 研 究 获 得 本 院 伦 理 委 员 会 批 准 二 检 测 指 标 ( 一 ) 血 清 相 关 指 标 测 定 入 院 第 2 天 留 取 空 腹 血 清 标 本 采 用 电 化 学 发 光 法 检 测 血 清 铁 蛋 白 (SF,13.00~ μg/l), 仪 器 型 号 :Cobas 600(ROCHE, 日 本 ) 采 用 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 (ELISA) 检 测 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 (PⅠ NP,16~55 μg/l) Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 (β CTX,100~650 ng/l), 仪 器 型 号 :Elecsys 2010 (ROCHE, 日 本 ) 采 用 免 疫 散 射 比 浊 法 检 测 转 铁 蛋 白 (Tf,2.0~3.6 g/l) 总 铁 结 合 力 (TIBC,54.0~77.0 μmol/l), 仪 器 型 号 :BN Prospec(SIEMENS, 德 国 ) 采 用 酶 动 力 法 检 测 C 反 应 蛋 白 (CRP,0~10 mg/l) 肌 酐 (Cr,45~84 μmol/l) 三 酰 甘 油 (TG,0.30~1.70 mmol/l) 总 胆 固 醇 (TC,0~5.69 mmol/l) 谷 草 转 氨 酶 (AST,7~38 U/L) 谷 丙 转 氨 酶 (ALT,4~43 U/L)) 空 腹 血 糖 (GLU,3.89~6.11 mmol/l), 仪 器 型 号 :AU 5400(OLYMPUS, 日 本 ) ( 二 ) 骨 密 度 检 测 术 后 第 10 天, 采 用 美 国 Lunar 公 司 DPXNP 双 能 X 线 骨 密 度 仪 检 测 髋 部 和 腰 椎 (L 1~4) 骨 密 度, 自 动 生 成 T 值 ; 其 中 T 1.0 为 正 常,T 值 位 于 1.0~2.5 [2] 为 骨 量 减 低,T 2.5 为 骨 质 疏 松 症 ( 三 ) 骨 铁 含 量 及 染 色 1. 骨 组 织 取 材 和 保 存 取 髋 关 节 置 换 术 后 留 取 的 股 骨 头 颈 交 界 处 中 心 区 域 松 质 骨 组 织 两 块, 重 约 0.5~1 g, 放 入 80 冰 箱 保 存, 分 别 行 骨 铁 含 量 检 测 和 骨 铁 染 色 2. 骨 铁 含 量 测 定 (1) 松 质 骨 超 纯 水 浸 泡 15 min, 连 续 3 次 后 浸 入 体 积 分 数 为 5% 的 乙 酸 15 min, 再 用 超 纯 水 浸 泡 过 夜, 除 去 浅 层 金 属 离 子 (2) 将 松 质 骨 浸 泡 于 体 积 分 数 为 10% 的 20 ml 过 氧 化 氢 溶 液 中 4 h, 超 纯 水 洗 净 后, 无 水 乙 醇 浸 泡 15 min, 除 去 软 组 织 及 油 脂 (3) 将 松 质 骨 转 移 至 干 净 锥 形 瓶 中, 置 入 85 烘 箱 烘 干 至 衡 重 (4) 准 确 称 量 后, 溶 于 浓 硝 酸 并 微 波 消 解, 消 解 完 全 后 转 移 稀 释 定 容 使 用 电 感 耦 合 等 离 子 体 [12] 质 谱 分 析 仪 (ICP MS,PE, 美 国 ) 测 定 骨 铁 含 量 3. 骨 组 织 切 片 及 骨 铁 染 色
3 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No 将 骨 组 织 修 剪 成 2 mm 2 mm 2 mm 大 小, 用 体 积 分 数 为 10% 的 甲 醛 溶 液 固 定, 乙 醇 梯 度 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 甲 基 丙 烯 酸 甲 酯 包 埋, 硬 组 织 切 片 机 (SM2500,LEICA, 德 国 ) 切 成 5 μm 不 脱 钙 骨 组 织 切 [13] 片, 行 普 鲁 士 蓝 铁 染 色 和 HE 染 色 为 了 对 照, 选 取 部 分 年 轻 女 性 股 骨 颈 骨 折 空 心 钉 固 定 病 例 骨 组 织 ( 年 龄 <45 岁, 行 空 心 钉 固 定 时, 用 空 心 套 筒 在 C 型 臂 X 线 机 透 视 定 位 过 程 中 取 出 [14] 骨 组 织 ) 三 统 计 学 分 析 采 用 SPSS 19.0 统 计 软 件 (IBM 公 司, 美 国 ) 进 行 统 计 学 分 析 各 组 间 体 重 体 重 指 数 空 腹 血 糖 肌 酐 三 酰 甘 油 总 胆 固 醇 谷 草 转 氨 酶 谷 丙 转 氨 酶 C 反 应 蛋 白 骨 铁 含 量 血 清 铁 蛋 白 转 铁 蛋 白 总 铁 蛋 白 结 合 力 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 髋 部 和 L 1~4 骨 密 度 等 比 较 采 用 方 差 分 析 ; 上 述 与 年 龄 各 部 位 骨 密 度 行 Pear son 相 关 性 分 析 ; 将 Pearson 相 关 分 析 中 P< 0.2 的 变 量 作 为 自, 骨 密 度 作 为 因 行 多 元 回 归 分 析 以 及 偏 相 关 分 析 检 验 水 准 α 值 取 双 侧 0.05 结 果 一 各 患 者 生 化 指 标 铁 代 谢 指 标 骨 代 谢 指 标 比 较 各 生 化 指 标 铁 代 谢 指 标 以 及 骨 代 谢 指 标 检 测 结 果 显 示 空 腹 血 糖 谷 草 转 氨 酶 谷 丙 转 氨 酶 C 反 应 蛋 白 肌 酐 三 酰 甘 油 5 个 患 者 比 较, 差 异 无 统 计 学 意 义 ( 均 P >0.05, 表 1); 体 重 体 重 指 数 总 胆 固 醇 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 髋 部 以 及 L 1~4 骨 密 度 比 较, 差 异 有 统 计 学 意 义 ( 均 P< 0.05, 表 1) 二 骨 密 度 骨 代 谢 指 标 及 铁 代 谢 指 标 随 年 龄 变 化 趋 势 5 个 患 者 骨 密 度 检 测 示 髋 部 ( 股 骨 颈 ) 骨 密 度 随 年 龄 直 线 下 降 ; 而 L 1~4 骨 密 度 在 80 岁 之 前 下 降 快, 之 后 变 缓 ;80 岁 之 前 L 1~4 骨 密 度 低 于 髋 部 ( 股 骨 颈 ) 骨 密 度 ( 图 1) 骨 代 谢 指 标 检 测 显 示 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 随 年 龄 增 加 而 升 高 ( 图 2) 骨 铁 在 60 岁 组 处 于 低 水 平, 之 后 迅 速 上 升, 在 81~90 岁 组 达 到 峰 值, 之 后 进 入 平 台 期 ( 图 3); 血 清 铁 蛋 白 在 60 岁 组 已 超 过 正 常 上 限, 同 样 在 81~ 90 岁 组 达 到 峰 值, 之 后 进 入 平 台 期 ( 图 4) 156 例 患 者 中,100 例 (64.1%,100/156) 患 者 的 血 清 铁 蛋 白 > 200 μg/l;29 例 (18.6%,29/156) 患 者 的 血 清 铁 蛋 白 >300 μg/l 血 清 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 随 年 龄 组 年 龄 增 加 而 下 降 ( 图 5,6) 各 与 年 龄 Pearson 相 关 分 析 显 示 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 与 年 龄 呈 正 相 关, 身 高 体 重 体 重 指 数 总 胆 固 醇 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 与 年 龄 呈 负 相 关 ( 表 2) 三 各 与 骨 密 度 Pearson 相 关 分 析 多 元 回 归 分 析 偏 相 关 分 析 结 果 ( 一 )Pearson 相 关 分 析 各 与 骨 密 度 Pearson 相 关 分 析 显 示 年 龄 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 谷 丙 转 氨 酶 谷 草 转 氨 酶 肌 酐 三 酰 甘 油 与 髋 部 和 L 1~4 骨 密 度 呈 负 相 关, 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 空 腹 血 糖 C 反 应 蛋 白 总 胆 固 醇 与 部 分 骨 密 度 呈 正 相 关 ( 表 3) 其 中 P< 0.2 的 进 [6] 入 多 元 逐 步 回 归 分 析 0 60 岁 组 61~70 岁 组 71~80 岁 组 81~90 岁 组 91 岁 组 骨 密 度 T 值 髋 部 ( 股 骨 颈 ) 腰 椎 L14 4 图 1 髋 部 ( 股 骨 颈 ) L1~4 骨 密 度 随 变 化 趋 势 图 示 髋 部 ( 股 骨 颈 ) 骨 密 度 随 年 龄 直 线 下 降 ; 而 L1~4 骨 密 度 在 80 岁 之 前 下 降 快, 之 后 变 缓 ;80 岁 之 前 L1~4 骨 密 度 低 于 髋 部 ( 股 骨 颈 ) 骨 密 度
4 42 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No. 1 表 1 5 个 患 者 基 本 资 料 生 化 指 标 铁 代 谢 指 标 骨 代 谢 指 标 比 较 (x±s) 类 别 60 组 (11 例 ) 61~70 组 (57 例 ) 71~80 组 (57 例 ) 81~90 组 (26 例 ) 91 组 (5 例 ) F 值 基 本 资 料 身 高 (cm) ± ± ± ± ± 体 重 (kg) 61.90± ± ± ± ± 体 重 指 数 (kg/m 2 ) 24.23± ± ± ± ± 生 化 指 标 空 腹 血 糖 (mmol/l) 4.78± ± ± ± ± 谷 丙 转 氨 酶 (U/L) 21.36± ± ± ± ± 谷 草 转 氨 酶 (U/L) 22.27± ± ± ± ± C 反 应 蛋 白 (mg/l) 8.04± ± ± ± ± 肌 酐 (μmol/l) 49.82± ± ± ± ± 三 酰 甘 油 (mmol/l) 1.55± ± ± ± ± 总 胆 固 醇 (mmol/l) 4.55± ± ± ± ± 铁 代 谢 指 标 骨 铁 (μg/g) 58.89± ± ± ± ± 血 清 铁 蛋 白 (μg/l) ± ± ± ± ± 转 铁 蛋 白 (g/l) 2.12± ± ± ± ± 总 铁 结 合 力 (μmol/l) 51.44± ± ± ± ± 骨 代 谢 指 标 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 (μg/l) 42.11± ± ± ± ± Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 (ng/l) ± ± ± ± ± 股 骨 颈 骨 密 度 (g/cm 2 ) 0.84± ± ± ± ± 股 骨 颈 T 值 0.80± ± ± ± ± Wards 三 角 骨 密 度 (g/cm 2 ) 0.68± ± ± ± ± Wards 三 角 T 值 1.32± ± ± ± ± 大 转 子 骨 密 度 (g/cm 2 ) 0.71± ± ± ± ± 大 转 子 T 值 0.55± ± ± ± ± 全 股 骨 骨 密 度 (g/cm 2 ) 0.86± ± ± ± ± 全 股 骨 T 值 0.94± ± ± ± ± L1~4 骨 密 度 (g/cm 2 ) 0.93± ± ± ± ± L1~4 T 值 1.3± ± ± ± ± Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 (μg/l) a Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 (ng/l) b 图 2 骨 转 换 指 标 随 变 化 趋 势 a Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 随 年 龄 增 加 而 升 高 b Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 随 年 龄 增 加 而 升 高
5 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No 身 高 体 重 体 重 指 数 总 胆 固 醇 骨 铁 表 2 各 与 年 龄 Pearson 相 关 性 分 析 结 果 r 值 年 龄 < < < < ( 二 ) 多 元 线 性 逐 步 回 归 分 析 将 上 述 Pearson 分 析 结 果 中,P< 0.2 的 与 骨 密 度 ( 因 ) 行 多 元 线 性 逐 步 回 归 分 析 年 龄 能 进 入 髋 部 和 腰 椎 骨 密 度 回 归 模 型, 骨 铁 能 进 入 髋 部 骨 密 度 回 归 模 型, 血 清 铁 蛋 白 能 进 入 股 骨 颈 骨 密 度 回 归 模 型, 体 重 指 数 能 进 入 大 转 子 全 股 骨 和 腰 椎 骨 密 度 回 归 模 型, 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 均 不 能 进 入 腰 椎 骨 密 度 回 归 模 型 ( 表 4) 血 清 铁 蛋 白 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 r 值 年 龄 ( 三 ) 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 与 骨 密 度 偏 相 关 分 析 < < < < < 控 制 年 龄 身 高 体 重 等 其 他 影 响 因 素, 骨 铁 与 髋 部 各 部 位 骨 密 度 呈 负 相 关, 血 清 铁 蛋 白 与 股 骨 颈 大 转 子 全 股 骨 骨 密 度 呈 负 相 关 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 与 腰 椎 骨 密 度 无 明 显 相 关 性 ( 表 5) 四 骨 组 织 骨 铁 染 色 用 硬 组 织 切 片 机 制 作 不 脱 钙 骨 组 织 切 片, 先 后 进 行 HE 特 异 性 普 鲁 士 蓝 染 色, 结 果 显 示 高 龄 女 性 骨 小 梁 边 缘 和 表 面 均 有 蓝 色 铁 沉 积 表 现 ( 图 7a); 年 轻 女 性, 骨 小 梁 并 没 有 明 显 的 铁 沉 积 ( 图 7b) 讨 论 一 本 组 资 料 的 临 床 特 点 本 组 患 者 平 均 年 龄 (72.40±8.97) 岁, 均 属 于 绝 经 后 女 性 ; 年 龄 范 围 从 56~92 岁, 按 10 岁 一 年 龄 段 分 组 共 分 5 组 ; 骨 折 原 因 均 符 合 脆 性 骨 折 发 生 机 制, 无 多 发 骨 折 交 通 伤 高 处 坠 落 伤 ; 每 例 患 者 均 有 检 测 条 件 相 同 的 骨 密 度 指 标 血 清 指 标 股 骨 头 骨 组 织 铁 含 量 指 标 因 此, 本 研 究 各 个 指 标 和 统 计 分 析 结 果 可 以 提 示 绝 经 后 女 性 脆 性 骨 折 这 一 人 群 铁 代 骨 铁 (μg/g) 血 清 铁 蛋 白 (μg/l) 图 3 骨 铁 随 变 化 趋 势 图 示 骨 铁 在 60 岁 组 处 于 低 水 图 4 血 清 铁 蛋 白 随 变 化 趋 势 图 示 血 清 铁 蛋 白 在 60 岁 组 平, 之 后 迅 速 上 升, 在 81~90 岁 组 达 到 峰 值, 之 后 进 入 平 台 期 已 超 过 正 常 上 限, 同 样 在 81~90 岁 组 达 到 峰 值, 之 后 进 入 平 台 期 转 铁 蛋 白 (g/l) 总 铁 结 合 力 (μmol/l) 岁 组 61~70 岁 组 71~80 岁 组 81~90 岁 组 91 岁 组 图 5 转 铁 蛋 白 随 变 化 趋 势 图 示 转 铁 蛋 白 随 年 龄 增 加 而 下 降 图 6 总 铁 结 合 力 随 变 化 趋 势 图 示 总 铁 结 合 力 随 年 龄 增 加 而 下 降
6 44 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No. 1 表 3 各 与 股 骨 颈 Wards 三 角 大 转 子 全 股 骨 L 1~4 骨 密 度 Pearson 相 关 分 析 结 果 股 骨 颈 Wards 三 角 大 转 子 全 股 骨 r 值 L1~4 基 本 资 料 年 龄 身 高 体 重 体 重 指 数 铁 代 谢 指 标 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 转 铁 蛋 白 总 铁 结 合 力 骨 代 谢 指 标 Ⅰ 型 原 胶 原 氨 基 端 延 长 肽 Ⅰ 型 胶 原 C 端 肽 β 降 解 产 物 生 化 指 标 空 腹 血 糖 谷 丙 转 氨 酶 谷 草 转 氨 酶 C 反 应 蛋 白 肌 酐 三 酰 甘 油 总 胆 固 醇 谢 骨 代 谢 的 临 床 特 点 二 骨 密 度 随 年 龄 的 变 化 趋 势 [2] 骨 密 度 (DXA) 是 诊 断 骨 质 疏 松 症 的 金 标 准, 检 测 结 果 是 骨 的 密 度 单 位 (g/cm 2 ), 通 过 换 算 可 以 提 供 临 床 医 生 Z 值 T 值 两 种 诊 断 参 考 值 T 值 在 临 床 诊 断 评 估 中 简 单 直 观 对 比 方 便, 容 易 进 行 医 学 沟 通 解 释, 目 前 骨 密 度 T 值 是 临 床 医 生 最 为 常 用 的 骨 [15] 质 疏 松 症 诊 断 指 标 本 组 患 者 髋 部 骨 密 度 T 值 平 均 为 腰 椎 平 均 为 2.133; 其 骨 密 度 T 值 结 果 有 几 个 特 点 :(1) 本 组 患 者 符 合 骨 量 减 少 或 骨 质 疏 松 症 诊 断, 结 合 骨 折 原 因 和 其 他 检 测 指 标 可 以 反 映 一 部 分 骨 质 疏 松 表 4 与 骨 密 度 多 元 线 性 逐 步 回 归 分 析 结 果 (P< 0.2) 股 骨 颈 (R 2 =0.443) β 值 SE 值 Wards 三 角 (R 2 =0.397) β 值 SE 值 大 转 子 (R 2 =0.322) β 值 SE 值 全 股 骨 (R 2 =0.379) β 值 SE 值 L1~4(R 2 =0.123) β 值 SE 值 年 龄 血 清 铁 蛋 白 骨 铁 体 重 指 数 表 5 校 正 年 龄 身 高 体 重 等 因 素 后 的 骨 铁 血 清 铁 蛋 白 与 骨 密 度 偏 相 关 分 析 结 果 股 骨 颈 Wards 三 角 大 转 子 全 股 骨 r 值 L1~4 骨 铁 血 清 铁 蛋 白
7 中华骨科杂志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No 图 7 绝经前 后女性股骨头骨铁染色对比 普鲁士蓝染色 100 a 高龄女性 骨铁含量高 骨小梁边缘 红色虚线 有蓝色铁 沉积 红色箭头 骨小梁表面散在铁染色 红色三角 b 年轻女性 骨铁含量低 骨小梁边缘 黄色虚线 无蓝色铁沉积 骨折患者情况 2 本组髋部 腰椎骨密度 T 值均随 年龄增加呈下降趋势 这提示未进行骨质疏松防治 的女性髋部骨折 年龄越大骨密度越低 符合骨质 疏松症的发病特点 3 本组髋部与腰椎骨密度 T 值 曲线在 81~90 岁年龄组有交叉 说明 80 岁前腰椎骨 密度比髋部低 80 岁后相反 这个现象符合 2013 年 刘信等 16 的报告 这可能与腰椎松质骨含量比髋部 松质骨含量多 松质骨代谢转换率高 绝经后女性 腰椎骨量丢失较多有关 三 骨转换指标随年龄的变化趋势 Ⅰ型原胶原氨基端延长肽和Ⅰ型胶原 C 端肽β 降解产物是国际骨质疏松基金会推荐的骨形成和 骨吸收标志物 17 骨转换指标可动态反映骨代谢活 动 绝经后骨质疏松症患者骨形成和骨吸收指标 升高 具有高转换特点 骨转换标志物随年龄变化 的研究结果并不一致 有研究表明 18 绝经早期与 绝经前相比骨转化标志物可升高 50%~100% 而后 进入稳定期 骨转换标志物不随绝经年龄增加而升 高 但最近一项关于澳大利亚人群Ⅰ型原胶原氨 基端延长肽和Ⅰ型胶原 C 端肽β降解产物年龄相关 性研究发现 即使在年龄超过 70 岁的老年女性中 Ⅰ型原胶原氨基端延长肽和Ⅰ型胶原 C 端肽β降解 产物仍持续升高 19 本组患者中Ⅰ型原胶原氨基端延长肽平均为 μg/l 高于 Martínez 等 20 报告的 47.7 μg/l Ⅰ 型胶原 C 端肽β降解产物平均为 ng/l 高于 Martínez 等 20 报告的 387 ng/l 本组年龄超过 75 岁 的老年女性中 Ⅰ型原胶原氨基端延长肽 Ⅰ型胶 原 C 端肽β降解产物高达 μg/l 和 ng/l 高于同龄健康人群 分别为 39~49 μg/l 和 387~520 ng/l 2122 本组患者均无慢性肾病史 肌酐均在正 常范围 可排除由肾功能不全 骨转换标志物清除 率下降而导致的骨转换指标上升的可能 结合本 组骨密度变化 年龄增加 骨转换指标升高 骨密度 下降 说明高转换水平是绝经后女性骨质疏松症的 特点 可能是髋部骨折的危险因素 这与 Strickland 等 23 的研究结果一致 四 血清铁蛋白与年龄 骨密度的关系 临床上用血清铁蛋白表示体内铁储存状态 正 常男性 30~400 μg/l 女性为 12~150 μg/l 铁过多 能催化活性氧生成 使细胞膜发生质脂过氧化反 应 造成组织损伤 通常血清铁蛋白 >1 000 μg/l 被 认为病理性铁过载 需要进行临床干预 当其超过 正常值但低于 μg/l 时 常被认为铁过多 铁蓄 积 研究认为 女性血清铁蛋白 >200 μg/l 24 男性 和绝经后女性血清铁蛋白>300 μg/l 为铁蓄积 25 然而这部分人群常没有典型症状 是在体检或其他 检查中被发现 2012 年 Kim 等 6 分析比较健康人 血清铁蛋白与骨密度关系后提出铁蓄积与骨量下 降相关 本 组 患 者 中 血 清 铁 蛋 白 平 均 为 μg/l 88.24~770.1 μg/l 随年龄增加血清铁蛋白水平升 高 60 岁组血清铁蛋白平均值已超过正常范围 81~90 岁组达到峰值 按铁蓄积标准血清铁蛋白 > 200 μg/l 24 本组 64.1% 100/156 的患者为铁蓄积 特别在 81~90 岁组高达 92.3% 显著高于 81~90 岁健 康人群铁蓄积比例 12.2%~16.6% 26 按铁蓄积标 准血清铁蛋白 >300 μg/l 25 本组 18.6% 29/156 的 患者为铁蓄积 同样高于同龄健康人群铁蓄积比例 3.7%~6.0% 26 结合骨密度变化 本组各年龄组 的血清铁蛋白随年龄增加 骨密度降低而呈逐渐升 高的趋势
8 46 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No. 1 五 骨 组 织 铁 含 量 与 年 龄 及 骨 密 度 的 关 系 骨 铁 指 铁 元 素 在 骨 组 织 沉 积 量, 与 血 清 铁 蛋 白 不 同, 骨 铁 需 经 长 期 生 物 化 学 变 化 而 形 成, 比 较 稳 定, 更 能 直 接 反 映 骨 组 织 的 铁 状 态 [27] 因 此, 了 解 骨 铁 含 量 对 分 析 铁 代 谢 与 骨 代 谢 关 系 非 常 有 益 铁 在 骨 组 织 沉 积 主 要 发 生 在 矿 化 骨 和 类 骨 质 之 间, 属 于 矿 化 前 沿 [28] 骨 组 织 铁 测 定 铁 染 色 通 常 使 用 松 质 骨 骨 组 织 处 理 方 法 有 干 法 灰 化 湿 法 消 解 微 波 消 解 等 干 法 灰 化 存 在 研 磨 高 温 灰 化 过 程 中 微 量 元 素 丢 失 的 不 足, 湿 法 消 解 存 在 消 解 不 完 全 的 缺 陷, 微 波 消 解 具 有 消 解 能 力 强 溶 样 时 间 短 分 析 准 确 度 和 精 确 度 高 不 损 失 挥 发 元 素 等 优 点 [29] 本 组 采 用 微 波 消 解 的 方 法 处 理 骨 组 织, 测 量 过 程 未 见 骨 样 沉 淀 本 组 骨 铁 含 量 平 均 为 96.8 μg/g(20.5~ μg/g), 高 于 健 康 人 群 67.3 μg/g [30], 且 检 测 结 果 显 示 骨 铁 含 量 随 年 龄 增 加 而 升 高, 在 81~90 岁 组 达 到 峰 值 关 于 骨 铁 升 高, 有 研 究 证 实 : 骨 折 组 骨 铁 含 量 高 于 对 照 组, 骨 钙 与 骨 铁 含 量 呈 负 相 关, 说 明 在 高 含 量 骨 铁 下, 铁 可 能 通 过 交 换 羟 基 磷 灰 石 晶 体 钙 而 加 快 骨 量 丢 失 [3132] 本 研 究 结 果 显 示, 随 年 龄 增 加, 骨 密 度 逐 渐 降 低, 血 清 铁 蛋 白 逐 渐 升 高, 骨 铁 含 量 逐 渐 增 加 六 骨 铁 组 织 形 态 学 表 现 骨 铁 形 态 学 变 化 可 以 直 观 说 明 铁 在 骨 组 织 中 沉 积 的 区 域, 对 了 解 铁 增 加 与 骨 组 织 骨 矿 化 结 构 关 系 ( 矿 化 骨 质 与 未 矿 化 类 骨 质 关 系 ) 非 常 有 益 张 [10] 林 林 等 认 为 铁 主 要 沉 积 在 成 骨 细 胞 和 骨 细 胞 中, 而 Miller [28] 则 认 为 铁 沉 积 在 矿 化 骨 小 梁 和 类 骨 质 交 界 区 的 矿 化 前 沿 本 研 究 采 用 不 脱 钙 骨 组 织 切 片 普 鲁 士 蓝 铁 染 色 来 反 映 骨 铁 沉 积 范 围, 研 究 显 示 : 铁 主 要 沉 积 在 矿 化 骨 小 梁 和 类 骨 质 之 间, 骨 小 梁 表 面 散 在 的 铁 染 色 可 能 与 骨 细 胞 内 铁 沉 积 有 关, 两 者 均 说 明 铁 在 骨 组 织 过 度 沉 积, 造 成 骨 代 谢 异 常 七 统 计 学 分 析 结 果 导 致 绝 经 后 女 性 骨 质 疏 松 的 相 关 因 素 较 多, Pearson 相 关 性 分 析 发 现, 本 组 资 料 中 年 龄 与 体 重 体 重 指 数 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 等 指 标 存 在 相 关 性 ; 同 样, 髋 部 及 腰 椎 骨 密 度 与 年 龄 体 重 体 重 指 数 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 等 指 标 也 存 在 相 关 性 为 进 一 步 了 解 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 在 骨 密 度 各 个 影 响 因 素 中 的 作 用 作 用 的 独 立 程 度, 本 研 究 采 用 多 元 线 性 逐 步 回 归 分 析 和 偏 相 关 分 析 进 行 研 究, 结 果 显 示 骨 铁 能 进 入 髋 部 骨 密 度 回 归 模 型, 血 清 铁 蛋 白 能 进 入 股 骨 颈 骨 密 度 回 归 模 型, 两 者 均 不 能 进 入 腰 椎 骨 密 度 回 归 模 型 在 控 制 年 龄 体 重 和 体 重 指 数 等 指 标 后, 骨 铁 与 血 清 铁 蛋 白 仍 与 髋 部 骨 密 度 相 关, 这 说 明 骨 铁 和 血 清 铁 蛋 白 均 是 影 响 骨 密 度 的 独 立 危 险 因 素 同 时 结 果 还 提 示, 骨 铁 变 化 与 髋 部 骨 密 度 变 化 更 加 密 切 综 上 所 述, 本 组 156 例 患 者 的 检 测 结 果 可 以 分 成 三 个 部 分, 第 一 部 分 是 骨 质 疏 松 相 关 指 标, 结 果 提 示 : 本 组 属 于 骨 质 疏 松 人 群 属 于 骨 质 疏 松 性 骨 折 类 型, 而 且 骨 密 度 随 年 龄 增 加 而 降 低 ; 第 二 部 分 是 铁 代 谢 指 标, 结 果 提 示 : 本 组 血 清 铁 蛋 白 比 正 常 值 高 且 随 骨 密 度 下 降 而 增 加, 骨 铁 含 量 同 样 随 骨 密 度 下 降 而 增 加 ; 第 三 部 分 是 对 检 测 指 标 进 行 相 关 性 分 析, 结 果 提 示 : 血 清 铁 蛋 白 和 股 骨 头 骨 铁 含 量 与 髋 部 骨 密 度 有 关 ; 同 时, 血 清 铁 蛋 白 骨 铁 统 计 结 果 提 示 两 者 均 是 骨 密 度 变 化 的 独 立 因 素 本 组 女 性 骨 质 疏 松 髋 部 骨 折 临 床 资 料 结 果 提 示 : 骨 质 疏 松 性 骨 折 患 者 应 关 注 铁 代 谢 指 标 变 化, 铁 蓄 积 与 骨 质 疏 松 症 存 在 一 定 关 系, 未 来 如 果 采 用 降 低 铁 蓄 积 的 干 预 方 法 防 治 骨 质 疏 松 症, 可 能 是 另 一 个 新 方 向 参 考 文 献 [1]Akesson K, Marsh D, Mitchell PJ, et al. Capture the Fracture: a Best Practice Framework and global campaign to break the fragili ty fracture cycle[j]. Osteoporos Int, 2013, 24(8): [2]Kanis JA, McCloskey EV, Johansson H, et al. European guidance for the diagnosis and management of osteoporosis in postmeno pausal women[j]. Osteoporos Int, 2013, 24(1): [3] 贾 鹏, 何 银 峰, 高 超, 等. 铁 离 子 对 破 骨 细 胞 分 化 及 骨 吸 收 的 影 响 [J]. 中 华 医 学 杂 志, 2012, 92(31): [4]Jia P, Xu YJ, Zhang ZL, et al. Ferric ion could facilitate osteoclast differentiation and bone resorption through the production of reac tive oxygen species[j]. J Orthop Res, 2012, 30(11): [5] 徐 又 佳, 林 华. 重 视 铁 代 谢 在 骨 质 疏 松 症 诊 治 中 的 意 义 [J]. 中 华 医 学 杂 志, 2011, 91(31): [6]Kim BJ, Ahn SH, Bae SJ, et al. Iron overload accelerates bone loss in healthy postmenopausal women and middle aged men: a 3 year retrospective longitudinal study [J]. J Bone Miner Res, 2012, 27(11): [7]Kim BJ, Lee SH, Koh JM, et al. The association between higher serum ferritin level and lower bone mineral density is prominent in women 45 years of age(knhanes )[J]. Osteo poros Int, 2013, 24(10): [8] 徐 又 佳. 降 低 铁 过 载 : 一 个 防 治 绝 经 后 骨 质 疏 松 的 新 方 案 [J]. 中 华 骨 质 疏 松 和 骨 矿 盐 疾 病 杂 志, 2012, 5(1): 1 6.
9 中 华 骨 科 杂 志 2014 年 1 月 第 34 卷 第 1 期 Chin J Orthop, January 2014, Vol. 34, No [9]Li GF, Pan YZ, Sirois P, et al. Iron homeostasis in osteoporosis and its clinical implications[j]. Osteoporos Int, 2012, 23(10): [10] 张 林 林, 姜 习 凤, 艾 红 珍, 等. 绝 经 后 髋 部 脆 性 骨 折 中 铁 过 载 指 标 与 骨 密 度 骨 转 换 指 标 关 系 的 研 究 [J]. 中 华 外 科 杂 志, 2013, 51(6): [11]Wood JC. Cardiac iron across different transfusion dependent dis eases[j]. Blood Rev, 2008, 22 Suppl 2: S [12]Lanocha N, Kalisinska E, Kosik Bogacka DI, et al. Concentra tions of trace elements in bones of the hip joint from patients after hip replacement surgery[j]. J Trace Elem Med Biol, 2012, 26(1): [13]Mandalunis P, Ubios A. Experimental renal failure and iron over load: a histomorphometric study in rat tibia[j]. Toxicol Pathol, 2005, 33(3): [14] 王 兵, 赵 环, 姜 习 凤, 等. 绝 经 后 女 性 股 骨 头 铁 含 量 与 骨 密 度 的 相 关 性 [J]. 中 华 骨 质 疏 松 和 骨 矿 盐 疾 病 杂 志, 2013, 6(1):9 14. [15] 中 华 医 学 会 骨 质 疏 松 和 骨 矿 盐 疾 病 分 会. 原 发 性 骨 质 疏 松 症 诊 治 指 南 (2011 年 )[J]. 中 华 骨 质 疏 松 和 骨 矿 盐 疾 病 杂 志, 2011, 4(1): [16] 刘 信, 钱 志 远, 冯 玉 爽, 等 例 骨 密 度 检 测 资 料 中 髋 部 腰 椎 T 值 差 异 的 比 较 [J]. 中 华 医 学 杂 志, 2013, 93(3): [17]Vasikaran S, Cooper C, Eastell R, et al. International Osteoporo sis Foundation and International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine position on bone marker standards in os teoporosis[j]. Clin Chem Lab Med, 2011, 49(8): [18]Naylor K, Eastell R. Bone turnover markers: use in osteoporosis [J]. Nat Rev Rheumatol, 2012, 8(7): [19]Jenkins N, Black M, Paul E, et al. Age related reference intervals for bone turnover markers from an Australian reference population [J]. Bone, 2013, 55(2): [20]Martínez J, Olmos JM, Hernández JL, et al. Bone turnover mark ers in Spanish postmenopausal women: the Camargo cohort study [J]. Clin Chim Acta, 2009, 409(1 2): [21]Vasikaran SD. The role of the laboratory in investigation and man agement of bone disease[j]. Clin Biochem, 2012, 45(12): [22]Gkouvatsos K, Papanikolaou G, Pantopoulos K. Regulation of iron transport and the role of transferrin[j]. Biochim Biophys Acta, 2012, 1820(3): [23]Strickland NJ, Matsha T, Erasmus RT, et al. Molecular analysis of ceruloplasmin in a South African cohort presenting with oesopha geal cancer[j]. Int J Cancer, 2012, 131(3): [24]Goot K, Hazeldine S, Bentley P, et al. Elevated serum ferritin what should GPs know[j]? Aust Fam Physician, 2012, 41(12): [25]Cals MJ, Bories PN, Devanlay M, et al. Extensive laboratory as sessment of nutritional status in fit, health conscious, elderly peo ple living in the Paris area. Research Group on Aging[J]. J Am Coll Nutr, 1994, 13(6): [26]Fleming DJ, Jacques PF, Tucker KL, et al. Iron status of the free living, elderly Framingham Heart Study cohort: an iron replete population with a high prevalence of elevated iron stores[j]. Am J Clin Nutr, 2001, 73(3): [27]Schnitzler CM, Schnaid E, MacPhail AP, et al. Ascorbic acid defi ciency, iron overload and alcohol abuse underlie the severe osteo porosis in black African patients with hip fracturesa bone histo morphometric study[j]. Calcif Tissue Int, 2005, 76(2): [28]Miller PD. The role of bone biopsy in patients with chronic renal failure[j]. Clin J Am Soc Nephrol, 2008, 3 Suppl 3: S [29]Altundag H, Tuzen M. Comparison of dry, wet and microwave di gestion methods for the multi element determination in some dried fruit samples by ICP OES[J]. Food Chem Toxicol, 2011, 49 (11): [30]Wiechuła D, Jurkiewicz A, Loska K. An assessment of natural concentrations of selected metals in the bone tissues of the femur head[j]. Sci Total Environ, 2008, 406(1 2): [31]Brodziak Dopierała B, Kwapuliński J, Sobczyk K, et al. The occur rence of nickel and other elements in tissues of the hip joint[j]. Ecotoxicol Environ Saf, 2011, 74(4): [32]Brodziak Dopierała B, Kwapuliński J, Sobczyk K, et al. The con tent of manganese and iron in hip joint tissue[j]. J Trace Elem Med Biol, 2013, 27(3): ( 收 稿 日 期 : ) ( 本 文 编 辑 : 闫 富 宏 )
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