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1 第 33 卷 第 5 期 2014 年 5 月 环 境 化 学 ENVIRONMENTAL CHEMISTRY Vol. 33, No. 5 May 2014 DOI: / j.issn 市 售 植 物 源 中 药 材 的 多 环 芳 烃 污 染 现 状 与 评 价 崔 宗 岩 葛 娜 曹 彦 忠 张 进 杰 刘 永 明 周 乐 ( 秦 皇 岛 出 入 境 检 验 检 疫 局 技 术 中 心, 秦 皇 岛, ) 摘 要 采 用 气 相 色 谱 串 联 质 谱 法 测 定 了 79 个 市 售 植 物 源 中 药 材 中 的 16 种 多 环 芳 烃 化 合 物. 所 有 样 品 均 检 出 多 环 芳 烃,16 种 多 环 芳 烃 之 和 ( PAH) 浓 度 范 围 为 μg kg -1. 检 出 单 体 以 2 4 环 PAH 为 主, 占 总 量 的 85%. 花 叶 根 和 茎 类 样 品 中 PAH 浓 度 明 显 高 于 果 实 和 种 子 类 样 品.24.1% 的 样 品 中 苯 并 [ a] 芘 含 量 超 过 5 μg kg -1 的 国 标 限 量 要 求, 说 明 其 对 人 体 存 在 健 康 风 险. 关 键 词 中 草 药, 多 环 芳 烃, 气 相 色 谱 串 联 质 谱. Investigation and assessment of polycyclic aromatic hydrocarbons contamination in Chinese herbal medicines CUI Zongyan GE Na CAO Yanzhong ZHANG Jinjie LIU Yongming ZHOU Le ( Qinhuangdao Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau, Qinhuangdao, , China) Abstract: Seventy nine Chinese herbal medicines were collected from several markets and 16 PAHs were detected by gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry. The total PAHs concentrations were in the range of μg kg -1. Among the 16 PAHs, the predominant species detected were 2 4 ring PAHs, accounting for 85% of the total. For different sample types, the PAHs levels of flowers, leaves, roots and stems were higher than that of fruits and seeds. 24.1% of the samples exceeds the maximum residue limit for benzo [a] pyrene (5 μg kg -1 ), indicating a potential health risk to human. Keywords:Chinese herbal medicine, PAHs, GC MS / MS. 植 物 源 中 药 材 ( 中 草 药,Chinese herbal medicine,chm) 是 传 统 中 药 的 重 要 组 成 部 分, 近 年 来 也 逐 渐 被 世 界 各 国 人 民 所 接 受, 在 疾 病 治 疗 控 制 以 及 保 健 等 方 面 发 挥 越 来 越 重 要 的 作 用 [1]. 然 而, 随 着 中 草 药 大 规 模 人 工 种 植 和 生 产 加 工, 以 及 出 口 贸 易 的 大 量 增 加, 一 系 列 质 量 及 安 全 性 问 题 引 起 了 人 们 的 关 注. 化 学 污 染 物 残 留 是 中 草 药 安 全 问 题 的 一 个 重 要 方 面, 主 要 包 括 农 药 残 留 重 金 属 超 标 以 及 其 他 化 学 污 染 物 污 染 等 [2 4]. 多 环 芳 烃 ( Polycyclic aromatic hydrocarbons,pahs) 是 一 类 重 要 的 持 久 性 有 机 污 染 物, 由 于 其 具 有 三 致 效 应 引 起 人 们 的 广 泛 关 注. 中 草 药 在 其 生 长 过 程 中 可 以 吸 收 或 吸 附 污 染 空 气 或 土 壤 中 的 PAHs, 并 且 在 其 体 内 不 断 富 集, 从 而 对 人 体 健 康 产 生 危 害 [5 6]. 中 草 药 在 其 生 产 加 工 过 程 中 会 引 入 一 些 热 加 工 工 艺, 包 括 炒 蒸 等, 在 这 些 高 温 条 件 下 也 可 能 会 导 致 多 环 芳 烃 化 合 物 的 生 成 [7]. 因 而, 研 究 中 草 药 中 的 多 环 芳 烃 含 量 水 平 对 于 规 范 中 草 药 种 植 和 生 产, 以 及 降 低 人 体 健 康 风 险, 具 有 重 要 的 意 义. 本 文 采 用 气 相 色 谱 串 联 质 谱 法 检 测 了 79 个 市 售 的 中 草 药 样 品 中 16 种 多 环 芳 烃 的 含 量, 对 其 含 量 水 平, 污 染 特 征 和 潜 在 的 人 体 健 康 风 险 进 行 了 研 究 年 8 月 29 日 收 稿. 河 北 省 科 技 计 划 项 目 ( D) 资 助. 通 讯 联 系 人,Tel: ;E mail:ciqqhd@ 126.com
2 5 期 崔 宗 岩 等 : 市 售 植 物 源 中 药 材 的 多 环 芳 烃 污 染 现 状 与 评 价 实 验 部 分 1.1 实 验 仪 器 和 试 剂 Quattro micro 型 气 相 色 谱 串 联 质 谱 ( 美 国,Waters 公 司 ), 配 Agilent 7890 气 相 色 谱, 使 用 Agilent DB 1701 色 谱 柱 (30 m 0.25 mm 0.25 μm). 升 温 程 序 :40 保 持 1 min, 以 30 min -1 升 温 至 130, 然 后 以 10 min -1 升 温 至 200, 接 着 以 20 min -1 升 温 至 260, 再 以 3 min -1 升 温 至 290, 保 持 6 min. 进 样 口 温 度 :290. 载 气 : 高 纯 He( 纯 度 >99.999%), 流 速 为 1.5 ml min -1. 进 样 量 :1 μl, 不 分 流. 质 谱 离 子 源 为 EI 源, 温 度 220,GC MS 接 口 温 度 280 ; 扫 描 方 式 为 多 通 道 反 应 监 测 模 式 (MRM). AccuPrep MPS 凝 胶 渗 透 色 谱 仪, 配 有 BIO Beads S X3,360 mm 25 mm 净 化 柱 ( 美 国 J2 Scientific 公 司 );EL131 型 旋 转 蒸 发 仪 ( 瑞 士 Büchi),SA300 型 振 荡 器 ( 日 本 Yamato 公 司 );KDC 40 型 低 速 离 心 机 ( 科 大 创 新 股 份 有 限 公 司 );N EVAPTM112 型 氮 吹 仪 ( 美 国 Organomation 公 司 );Mili-Q 高 纯 水 发 生 器 ( 美 国 Millipore 公 司 ). ProElut PSA 固 相 萃 取 柱 (500mg / 6mL,Dikma 公 司 ); 丙 酮 正 己 烷 环 己 烷 乙 酸 乙 酯 甲 苯 ( 均 为 HPLC 级,Dikma 公 司 );16 种 PAHs 标 准 品 ( 纯 度 均 96.0%, 美 国 Supelco 公 司 ), 包 括 萘 苊 烯 苊 芴 菲 蒽 荧 蒽 芘 苯 并 [a] 蒽 苯 并 [b] 荧 蒽 苯 并 [k] 荧 蒽 苯 并 [a] 芘, 茚 苯 并 [1,2,3 cd] 芘 二 苯 并 [a,h] 蒽 苯 并 [g,h,i] 苝. 准 确 称 取 各 标 准 品 适 量, 用 甲 苯 稀 释 成 单 标 储 备 液. 准 确 吸 取 适 量 各 标 准 储 备 液 于 10 ml 容 量 瓶 中, 用 甲 苯 定 容 至 刻 度 制 成 工 作 液 混 标, 其 中 各 PAH 浓 度 均 为 2.5 mg L -1, 置 于 冰 箱 4 保 存.16 种 PAHs 同 位 素 标 准 品 (PAHs D, 纯 度 均 98.0%, 美 国 Chem Service 公 司 ) 配 制 及 保 存 同 上, 工 作 液 中 各 PAHs D 浓 度 均 为 2.5 mg L 样 品 采 集 和 分 析 所 有 中 草 药 样 品 均 于 2012 年 6 12 月 间 购 于 秦 皇 岛 某 药 店. 共 采 集 了 市 场 上 常 见 的 79 个 样 品, 包 括 22 个 根 类 ( 板 兰 根 防 风 白 芷 桔 梗 黄 芪 等 ),9 个 茎 类 ( 升 麻 知 母 玉 竹 射 干 甘 草 等 ),8 个 叶 类 ( 艾 叶 大 青 叶 荷 叶 桑 叶 银 杏 叶 等 ),9 个 花 类 ( 菊 花 槐 花 茉 莉 花 蜜 旋 复 花 玫 瑰 花 等 ),8 个 果 实 类 ( 陈 皮 山 楂 路 路 通 连 翘 枸 杞 等 ),18 个 种 子 类 ( 决 明 子 白 芥 子 浮 小 麦 菟 丝 子 谷 芽 等 ),3 个 皮 类 ( 陈 皮 杜 仲 合 欢 皮 ) 和 2 个 全 草 类 ( 益 母 草 茵 陈 ) 样 品. 样 品 粉 碎 后 过 16 目 筛, 密 闭 遮 光 保 存. 样 品 分 析 方 法 采 用 本 研 究 组 先 前 建 立 和 报 道 的 研 究 方 法 [8]. 样 品 前 处 理 基 本 流 程 叙 述 如 下 : 准 确 称 取 1.0 g 粉 碎 的 样 品 于 离 心 管 中, 加 入 100 μl 的 PAHs D 混 标, 混 匀 后 加 入 20 ml 正 己 烷 丙 酮 (1 1, V / V) 混 合 溶 液, 振 荡 提 取 30 min 后 4200 r min -1 离 心 7 min, 上 层 清 液 过 无 水 硫 酸 钠 后 收 集 于 鸡 心 瓶 中, 样 品 中 再 次 加 入 20 ml 正 己 烷 丙 酮 提 取 10 min, 合 并 两 次 提 取 液, 旋 转 蒸 发 浓 缩 至 1 ml 左 右, 溶 剂 交 换 为 环 己 烷 乙 酸 乙 酯 (1 1, V / V), 过 凝 胶 渗 透 色 谱 (GPC) 柱 净 化, 收 集 min 的 馏 分. 馏 分 浓 缩 至 1 ml 左 右 过 N 丙 基 乙 二 胺 (PSA) 固 相 萃 取 柱. 收 集 洗 脱 液 浓 缩 至 1 ml 以 下 转 移 至 进 样 小 瓶 中, 定 容 至 1 ml, 待 气 相 色 谱 串 联 质 谱 (GC MS / MS) 测 定. 串 联 质 谱 条 件 参 考 文 献 [8], 该 方 法 对 于 16 种 PAHs 的 检 出 限 达 到 μg kg -1, 样 品 添 加 回 收 率 范 围 为 81.4% 108%, 相 对 标 准 偏 差 均 小 于 15%, 说 明 方 法 稳 定 可 靠. 采 用 串 联 质 谱 检 测, 大 大 降 低 了 复 杂 样 品 基 质 的 干 扰 ( 图 1). 2 结 果 与 讨 论 2.1 中 草 药 中 多 环 芳 烃 的 污 染 状 况 本 研 究 所 采 集 的 79 个 中 草 药 样 品, 均 检 出 多 环 芳 烃 化 合 物, 表 1 列 出 了 各 类 样 品 的 检 测 结 果 的 平 均 浓 度 和 浓 度 范 围. 总 体 上,PAH 单 体 浓 度 范 围 为 未 检 出 μg kg -1,16 种 PAHs 之 和, 即 PAHs 浓 度 范 围 为 μg kg -1 [3]. 该 结 果 比 Ishizaki 等 人 报 道 的 μg kg -1 的 结 果 稍 高. 由 于 不 同 PAH 单 体 化 合 物 毒 性 具 有 很 大 的 差 异, 采 用 PAHs 浓 度 和 并 不 能 全 面 反 映 多 环 芳 烃 化 合 物 的 污 染 状 况, 本 研 究 参 考 文 献 [9] 的 毒 性 当 量 因 子, 计 算 得 到 样 品 中 16 种 PAHs 的 总 毒 性 当 量 浓 度 (Toxic equivalent concentration, TEC), 即 相 当 于 苯 并 [a] 芘 的 浓 度, 用 于 中 草 药 样 品 中 多 环 芳 烃 的 风 险 评 价.
3 846 环 境 化 学 33 卷 图 1 GC MS MS 测定某中草药样品 板蓝根 中 16 种 PAHs 及同位素内标的总离子流色谱图 TIC 和 5 种目标物 萘 芴 菲 荧蒽和芘 的多通道反应监测 MRM 色谱图 Fig 1 The TIC chromatograph of 16 PAHs and the internal standards in a sample Banlangen and the MRM chromatographs of five select PAHs including naphthalene fluorene phenanthrene fluoranthene and pyrene 检测的 79 个中草药样品中 PAH 单体检出率最高的是菲 98 7 二苯并 a h 蒽检出率最低 6 3 典型致癌物质苯并 a 芘检出率达到 34 16 种 PAHs 按照分子量由小到大可以分为 3 环 萘 苊烯 苊 芴 菲 蒽 4 环 荧蒽 芘 苯并 a 蒽 5 6 环 苯并 b 荧蒽 苯并 k 荧蒽 苯 并 a 芘 茚苯并 1 3 cd 芘 二苯并 a h 蒽 苯并 g h i 苝 图 分别展示了按照浓度和毒性当量 浓度进行统计不同环数多环芳烃所占比例 对比发现 二者有明显差异 采用总浓度进行统计 3 环 PAHs 占主要形态 85 以上的样品中 3 环 PAHs 占 50 以上 所有样品中大分子 PAHs 5 6 环 均 在 5 以下 该结果与 Ishizaki 3 和 Kataoka 7 等人报道的结果一致 即中草药中检出多环芳烃以小分子 PAH 为主 而采用毒性当量浓度进行评价 图 B 所有样品明显分成两组 一组无大分子 PAHs 检出 即图中右侧轴线上部分 该部分样品 5 6 环 PAHs 占比为 0 另一组在图中左下角 该组大部分样品 90 以上 中 5 6 环 PAHs 占总毒性当量的 50 以上 也就是说 样品中一旦有 5 6 环 PAHs 检出 一 般其毒性贡献就占了主要部分 导致该现象的原因是大分子 PAHs 毒性远高于小分子 PAHs 多环芳烃的单体分布在一定程度上预示了其潜在来源 一般而言 3 环 PAHs 占优势 属于石油 源污染 而 4 环以上 PAHs 占优 说明其主要来源于高温燃烧 10 据此判断 本研究采集的中草药样品 中 PAHs 以石油源为主 此外 还可以根据 PAHs 的特征比值来定性判断其来源 蒽 蒽 菲 0 1 认为 是石油源 0 1 认为是燃烧源 11 79 个样品中 蒽 蒽 菲 0 1 的样品占 8 3 也说明本研究所采集 的中草药中 PAHs 主要来自于石油源 然而 由于中草药类型十分丰富 而且多环芳烃化合物不仅可以 通过植物体从环境中吸收和富集 还可以在植物体内传输和迁移转化 1 再加之生产加工过程中 PAHs 的生成 因而中草药中多环芳烃的来源仍有较强的不确定性 需要进一步深入研究 从各类型中草药样品检出总浓度 PAHs 来看 花类样品最高 根 茎 叶次之 果实和种子较低 毒 性当量浓度呈现类似趋势 可能原因是果实和种子发育较晚 受到多环芳烃环境暴露时间较短所致 中草药中多环芳烃的风险分析 市售中草药样品中普遍检出多环芳烃化合物 其潜在的人体健康风险不容忽视 目前我国尚无关于 中草药中多环芳烃的限量要求 由于苯并 a 芘具有很强的致癌效应 因而常以其含量作为多环芳烃污 染水平的标志 食品安全国家标准 GB 76 01 食品中污染物限量 中规定了食品中苯并 a 芘限量 指标 即谷物 肉类和水产品中限量为 5 μg kg 1 油脂类食品中限量为 10 μg kg 1 参考 5 μg kg 1 的限 量指标 对 79 个中草药样品中 PAHs 的超标情况进行统计 详见表
4 5 期 崔 宗 岩 等 : 市 售 植 物 源 中 药 材 的 多 环 芳 烃 污 染 现 状 与 评 价 847 根 (n = 22) 化 合 物 表 1 各 类 型 中 草 药 样 品 中 16 种 PAHs 平 均 浓 度 和 浓 度 范 围 (μg kg -1 ) Table 1 The average concentrations and concentration range of 16 PAHs in different types of Chinese herbal medicines(μg kg -1 ) 茎 (n = 9) 叶 (n = 8) 花 (n = 9) 果 实 (n = 8) 种 子 (n = 18) 其 他 (n = 5) 总 体 (n = 79) Naph 57.1 nd a nd nd nd nd nd nd nd Acy 24.3 nd nd nd nd nd nd Ace 6.5 nd nd nd nd nd nd nd nd Flu nd nd nd Phe nd nd Ant 29.3 nd nd nd nd nd nd nd Flt 68.0 nd nd nd nd Pyr nd nd nd nd BaA 35.3 nd nd nd nd nd nd nd nd Chry 41.6 nd nd nd nd nd nd BbF 42.0 nd nd nd nd nd nd nd nd BkF 17.4 nd nd nd nd nd nd nd nd BaP 19.1 nd nd nd nd nd nd nd nd 53.2 I( cd) P 16.8 nd nd nd nd nd nd 6.5 nd nd 2.4 nd 29.7 DBahA 9.9 nd nd nd 1.2 nd nd 3.6 nd 3.6 nd nd nd nd 0.4 nd 13.2 BghiP 36.8 nd nd nd nd nd nd nd nd 71.4 PAHs b TEC c nd nd 注 : a 未 检 出 ; b 16 种 PAH 的 浓 度 之 和 ; c 毒 性 当 量 浓 度.
5 848 环 境 化 学 33 卷 图 中草药样品中不同环数多环芳烃的分布 A 浓度占比 B 毒性当量浓度占比 Fig Distribution of different types of PAHs in Chinese herbal medicines 其中包含了苯并 a 芘 BaP 单体的统计和苯并 a 芘毒性当量浓度 TEC 的统计 结果表明 花类 和叶类中草药中多环芳烃的超标污染比较严重 这两类是植物体和大气接触较广泛的部分 据此推测大 气污染可能是中草药中多环芳烃污染的重要来源之一 表 中草药中 PAHs 检出含量与 GB 76 01 中最大残留限量的对比 Table Analytical results of PAHs in CHMs compared to the Maximum Reside Limit set by GB 76 01 样品类型 BaP 5 0 μg kg 1 超标样品数 根 n 6 叶 n 8 4 茎 n 9 花 n 9 果实 n 8 种子 n 18 其他 n 5 总计 n 79 3 1 1 19 注 各类型中草药超标样品占该类样品的比例 a TEC 5 0 μg kg 1 a 占比 超标样品数 7 3 7 50 0 4 33 3 1 5 11 1 0 0 4 1 7 占比 a 31 8 50 0 77 8 5 4 8 35 4 40 0 3 结论 1 采用气相色谱 串联质谱法测定了 79 个市售中草药中的 16 种多环芳烃化合物 所有样品均有 检出 16 种多环芳烃化合物总浓度范围为 1 1 856 0 μg kg 1 检出多环芳烃化合物以中小分子 4 环 PAH 为主 5 6 环 PAH 检出较少 然而样品中一旦 检出大分子 5 6 环 PAH 一般其毒性当量就会占主要部分 3 对不同类型样品 花 叶 根和茎类样品受到多环芳烃污染明显强于果实和种子 4 对比国标 GB 76 01 中苯并 a 芘 5 μg kg 1 的限量要求 检测样品超标率达到 4 1 其 中以叶和花类中草药超标最为严重
6 5 期 崔 宗 岩 等 : 市 售 植 物 源 中 药 材 的 多 环 芳 烃 污 染 现 状 与 评 价 849 参 考 文 献 [ 1 ] Jiang Y, David B, Tu P F, et al. Recent analytical approaches in quality control of traditional Chinese medicines A review[j]. Anal Chim Acta, 2010, 657(1): 9 18 [ 2 ] Harris E S J, Cao S G, Littlefield B A, et al. Heavy metal and pesticide content in commonly prescribed individual raw Chinese Herbal Medicines[ J]. Sci Total Environ, 2011, 409(20): [ 3 ] Ishizaki A, Sito K, Kataoka H. Analysis of contaminant polycyclic aromatic hydrocarbons in tea products and crude drugs [ J]. Anal Methods, 2011, 3(2): [ 4 ] Zhang J H, Wider B, Shang H C, et al. Quality of herbal medicines: Challenges and solutions[ J]. Complement Ther Med, 2012, 20(1 / 2): [ 5 ] Simonich S L, Hites R A. Vegetation atmosphere partitioning of polycyclic aromatic hydrocarbons[ J]. Environ Sci Technol, 1994, 28(5): [ 6 ] Zhan X H, Ma H L, Zhou L X, et al. Accumulation of phenanthrene by roots of intact wheat (Triticum acstivnm L.) seedlings: Passive or active uptake? [J]. BMC Plant Biol, 2010, 10(52): 1 8 [ 7 ] Kataoka H, Ishizaki A, Saito K, On line automated analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons Applications to herbal medicines[ J]. Chim Oggi Chem Today, 2010, 28(5): [ 8 ] Yu L, Cao Y, Zhang J, et al. Isotope dilution GC MS / MS analysis of 16 polycyclic aromatic hydrocarbons in selected medicinal herbs used as health food additives[j]. Food Addit Contam Part A Chem, 2012, 29(11): [ 9 ] Nisbet I C T, Lagoy P K. Toxic equivalency factors (TEFS) for polycyclic aromatic hydrocarbons[j]. Regul Toxicol Pharmacol, 1992, 16 (3): [10] 杨 敏, 倪 余 文, 苏 凡, 等. 辽 河 沉 积 物 中 多 环 芳 烃 的 污 染 水 平 与 特 征 [J]. 环 境 化 学,2007,26(2): [11] Budzinski H, Jones I, Bellocq J, et al. Evaluation of sediment contamination by polycyclic aromatic hydrocarbons in the Gironde estuary [J]. Mar Chem, 1997, 58(1 / 2): [12] Desalme D, Binet P, Chiapusio G. Challenges in tracing the fate and effects of atmospheric polycyclic aromatic hydrocarbon deposition in vascular plants[ J]. Environ Sci Technol, 2013, 47(9):
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