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1 第 42 卷摇 2014 年 11 月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇分析化学 (FENXI HUAXUE) 摇研究报告摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 Chinese Journal of Analytical Chemistry 第 11 期 1611 ~ 1616 DOI: / j. issn 鄄免疫亲和柱净化鄄超高效亲水色谱鄄三重四极杆质谱联用法测定人尿液和血浆中河豚毒素张秀尧摇 * 蔡欣欣摇张晓艺摇李瑞芬 ( 温州市疾病预防控制中心, 温州 ) 摘摇要摇建立了测定人尿液和血浆中河豚毒素 (TTX) 的超高液相色谱鄄三重四极杆质谱联用分析方法尿液和血浆样品经免疫亲和柱净化, 以 0. 1% 甲酸鄄乙腈和 0. 1% 甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱, 在 UPLC BEH Amide 柱上实现分离, 正离子电喷雾多反应监测 (MRM) 模式检测, 溶剂标准外标法定量尿液和血浆中 TTX 的测量范围为 ~ 400 滋 g / L, 平均加标回收率分别为 92% ~ 95% 和 91% ~ 96%, 相对标准偏差在 3. 3% ~ 7. 2% 和 3. 9% ~ 7. 8% (n = 5) 之间, 样品中 TTX 的检出限 ( S / N = 3) 均为滋 g / L, 定量限 ( S / N = 10) 为滋 g / L 本方法适用于尿液和血浆中 TTX 的中毒检测和临床监测关键词摇河豚毒素 ; 免疫亲和柱净化 ; 超高效亲水色谱鄄串联质谱法 ; 尿液 ; 血浆 1 摇引摇言河豚毒素 (Tetrodotoxin, TTX) 是一种毒性很强的非蛋白神经毒素, 存在于河豚鱼和多种脊椎动物及无脊椎动物体内, 如织纹螺蝾螈蟾蜍和蟹类等 TTX 属氨基全氢化喹唑啉化合物, 为钠通道阻断剂, 可以抑制神经细胞膜对 Na + 的通透性, 阻断神经冲动的传导, 引起神经麻痹, 严重者呼吸抑制导致死亡 [1] 近年来, 我国已发生多起误食河豚鱼或织纹螺等引起的 TTX 中毒事件 [2,3], 尿液和血浆中 TTX 的浓度可以反映患者的中毒程度和预后情况, 因此建立一种高灵敏度准确测定尿液和血浆中 TTX 的检测方法, 对于中毒的诊断和临床治疗的监测具有重要意义目前, 生物样本中 TTX 的检测方法主要有 ELISA 法 [4] 液相色谱紫外检测法 [5,6] 液相色谱柱后衍生荧光法 [7,8] [9,10] [11 ~ 16] 气相色谱质谱联用法和液相色谱串联质谱联用法等文献报道以液相色谱鄄三重四极杆质谱联用方法最多, 方法检出限多在 0. 1 ~ 1. 0 滋 g / L 之间, 定量限为 1. 0 ~ 3. 0 滋 g / L [17,18], 由于缺少 TTX 专一性强的样品前处理方法, 质谱分析时基质抑制效应比较严重, 采用基质匹配外标法定量分析, 灵敏度受到限制, 定量分析的准确度和精密度均不理想, 同时受样品基质成分的影响,TTX 的保留时间不稳定易漂移 [11] 本研究通过对 TTX 超高效液相色谱和质谱条件的优化, 提高了检测灵敏度, 采用免疫亲和柱进行样品净化, 显著降低了基质效应, 建立了测定人尿液和血浆中 TTX 含量的高灵敏度确证检测方法采用溶剂标准外标法定量分析, 样品浓缩 5 倍, 检出限达滋 g / L, 定量限为滋 g / L, 已应用于实际样品的测定, 获得满意结果 2 摇实验部分 2. 1 摇仪器与试剂 Acquity UPLC 鄄 Quattro Premier XE 超高效液相色谱鄄串联质谱仪, 配有电喷雾源,Masslynx 4. 1 工作站 ( 美国 Waters 公司 ); N 鄄 EVAP 氮吹仪 (24 孔, 美国 Organomation 公司 ); MS3 旋涡混旋器 ( 德国 IKA 鄄 WERKE 公司 ); 3 鄄 30K 高速冷冻离心机 ( 德国 Sigma 公司 ); 3 鄄 Star 酸度计 ( 美国热电公司 ); 固相萃取装置 (24 孔, 美国安捷伦公司 ); Gradient A10 Mill 鄄 Q 超纯水器 ( 法国 Millipore 公司 ) 50 ml 和 15 ml 具塞塑料离心管 ( 美国 Labcon 公司 ) 摇 2014 鄄 07 鄄 01 收稿 ; 2014 鄄 09 鄄 10 接受 * E 鄄 mail: CXX5780@ 163. com

的超高液相色谱鄄三重四极杆质谱联用分析方法尿液和血浆样品经免疫亲和柱净化, 以 0. 1% 甲酸鄄乙腈和 0.

2 1 摇 612 摇分析化学第 42 卷 TTX 标准物质 ( 纯度逸 99%, 大连瑞芳生化物品有限公司 ), 用 0. 3% 乙酸液配制成 100 滋 g / ml 标准贮备溶液免疫亲和柱 (3 ml, 北京华安麦科生物技术有限公司 ); 乙腈 (HPLC 级, 德国 Merck 公司 ); 乙酸和甲酸 ( HPLC 级, 美国 Tedia 公司 ) 其它试剂均为国产分析纯试剂磷酸盐缓冲溶液 ( PBS, ph 7. 4) 血浆购自温州市中心血站 ; 尿液由健康人志愿者提供 2. 2 摇实验条件摇色谱条件摇 Acquity UPLC BEH Amide 色谱柱 (100 mm 伊 2. 1 mm,1. 7 滋 m, Waters 公司 ), 配在线过滤器 ; 流动相 A 为含 0. 1% 甲酸鄄乙腈溶液, 流动相 B 为 0. 1% 甲酸溶液, 梯度洗脱程序 :0 ~ 5. 0 min, 25% ~ 50% B; 5. 0 ~ 6. 0 min,50% B; 5. 0 ~ 5. 1 min, 50% ~ 25% B; 5. 1 ~ 6. 5 min, 25% B 流速 ml / min; 柱温 40 益 ; 进样体积 5 滋 L 摇质谱条件摇电喷雾离子源正离子多反应监测 (MRM) 模式 ESI 毛细管电压 3. 2 kv; 离子源温度 120 益, 脱溶剂温度 350 益, 脱溶剂气流量 600 L / h, 锥孔反吹气流量 50 L / h, 碰撞室氩气压力 Pa 定量离子对为 m / z / , 定性离子对为 m / z / , 锥孔电压均为 40 V, 碰撞能量分别为 25 和 35 ev 运行开始时, 色谱柱流出液经六通切换阀切换至废液中, 直到 2. 4 min, 质谱开始采集数据, 直到 3. 7 min 结束, 同时六通切换阀又将柱流出液切换至废液中 2. 3 摇样品前处理尿样和血浆采集后保存于具塞塑料离心管中, 加入乙酸使其最终浓度为 0. 3% 样品在 2 ~ 6 益冷藏 30 min 以上,6 益下 r / min 高速离心 5 min, 上清液转移入另一塑料离心管中吸取 ml 样品, 加入 ml PBS 溶液, 混匀, 以 1 滴 / 2 s 的速度过免疫亲和柱, 再分别用各 10 ml PBS 溶液和水淋洗, 抽干, 用 ml 2% 乙酸鄄甲醇溶液洗脱, 洗脱液于 50 益氮气吹干, 加入 200 滋 L 0. 2% 乙酸鄄 50% 乙腈溶液溶解残渣, 转移至塑料微量自动进样瓶中, 待测 3 摇结果与讨论 3. 1 摇质谱条件的优化在电喷雾正离子检测方式下对质谱测定条件进行优化,Q1 扫描时可见 [ M+H] + 峰 ; 对准分子离子峰进行碰撞, 通过子离子扫描得到碎片离子信息 ; 对锥孔电压碰撞能量等参数进行优化, 使得分子离子对的信号达到最佳遵循国际惯例 [19], 确证分析需要 4 个识别点, 故选择两对分子离子对, 同时设定合适的峰驻留时间 (Dwell time) 确保色谱峰的采样点数在 15 ~ 20 点, 从而得到较好的定量分析重复性优化后的测定条件见 2. 2 节 3. 2 摇色谱条件的优化 TTX 属强极性化合物, 在反相液相色谱柱上不保留, 除非在流动相中加入离子对试剂 [14], 由于是质谱分析, 加入的离子对试剂会使质谱信号受到强烈抑制, 还会污染质谱系统, 因此采用亲水色谱法 (HILIC) 进行分离实验表明,TTX 能被 Acquity UPLC BEH Amide 色谱柱保留, 以 0. 1% 甲酸乙腈鄄 0. 1% 甲酸溶液作为流动相时, 灵敏度最高优化了梯度洗脱程序,TTX 色谱峰保留时间为 min, 保留因子 k = 4. 3 本方法采用免疫亲和柱净化样品, 样品处理液较干净, 经测试,TTX 在此条件下的保留时间稳定运行梯度洗脱程序, 进样尿液和血浆空白样品处理液, 再以 30 滋 L / min 的速率柱后灌柱 20 滋 g / L TTX 标准溶液,TTX 色谱峰落在色谱基线的平稳区, 说明样品处理液不会引起明显的基质效应, 见图 1 采用流路切换技术将 TTX 色谱峰前后弱极性和强极性成分切换至废液中, 质谱只对 TTX 色谱峰流出部分进行检测, 避免质谱系统受到污染 3. 3 摇样品前处理方法的优化和基质效应的评估尿液和血浆中 TTX 的样品前处理方法有蛋白沉淀法 [6,11] 反相固相萃取结合超滤法 [9,10,15] MCX 固相萃取法 [7,12,20] [14] [8] C 18 和 Hilic 两次固相萃取法和免疫亲和柱净化法等, 除了免疫亲和柱专属性比较强, 其余方法均属非特异方法, 液相色谱鄄质谱测定时还存在一定的基质抑制效应, 使方法的灵敏度变差, 测量的准确度和精密度受到影响本实验采用商品化的免疫亲和柱进行净化, 样品与 PBS 混合后

PBS, ph 7. 4) 血浆购自温州市中心血站 ; 尿液由健康人志愿者提供 2. 2 摇实验条件 2. 2. 1 摇色谱条件摇 Acquity UPLC BEH Amide 色谱柱 (100 mm 伊 2. 1 mm,1. 7 滋 m, Waters 公司 ), 配在线过滤器 ; 流动相 A 为含 0.

3 第 11 期张秀尧等 : 免疫亲和柱净化鄄超高效亲水色谱鄄三重四极杆质谱联用法测定人尿液和血浆中河豚毒素摇摇 1613 图 1 摇进样尿液 (a) 和血浆 (b) 空白样品柱后灌注 TTX 的总离子流色谱图 Fig. 1 摇 Total ion chromatograms of post 鄄 column infusion of tetrodotoxin ( TTX) after injection of blank urine ( a) and plasma (b) on 鄄 column 上样, 上样液的 ph = 6 ~ 7, 符合免疫亲和柱上样液 ph 6 ~ 8 的要求上样后, 先用 PBS 溶液淋洗除去内源性杂质, 然后再用水淋洗除去 PBS 缓冲液, 避免 PBS 对质谱的不良影响免疫亲和柱具有很强的特异性, 只保留 TTX, 而其类似物 4 鄄表河豚毒素和 4,9 鄄脱水河豚毒素等均不被保留 ( 图 2) 即使样品浓缩了 5 倍, 与溶剂标准相比较, 尿液和血浆中基质效应 (ME) 分别为 104% ~ 108% 和 99% ~ 102% 按文献 [11] 方法测试尿液, 用 1% 醋酸的乙腈溶液稀释 3. 3 倍后进行测定, 基质效应为 15% ~ 20% ; 500 滋 L 血浆加入 3 倍量的 1% 醋酸的乙腈溶液沉淀蛋白氮气吹干复溶于 250 滋 L 流动相, 基质效应为 38% ~ 43% ; 文献 [20] 采用了 MCX 固相萃取法进行样品净化, 尿液和血浆中基质效应为 10. 5% ~ 27. 8% 以上数据说明免疫亲和柱净化效果好, 可有效降低基质效应, 而其它方法的基质抑制效应还比较严重本方法采用溶剂标准外标法定量 [21], 无需基质匹配, 方便操作, 提高了灵敏度, 并能得到准确结果图 2 摇 TTX 标准溶液 (a, 50 滋 g / L) 和尿液加标 TTX 经免疫亲和柱净化 (b, 10 滋 g / L) 的总离子流色谱图 Fig. 2 摇 Total ion chromatograms of TTX standard ( a, 50 滋 g / L) and TTX spiked in blank urine cleaned 鄄 up by immunoaffinity column (b, 10 滋 g / L) 3. 4 摇方法的线性范围和检出限免疫亲和柱最大容量为 400 ng TTX, 故将标准曲线的上限设为 2000 滋 g / L 将 TTX 标准溶液稀释制成分别含 TTX 0. 25, 1. 0, 10. 0, , 500 和 2000 滋 g / L 的系列标准溶液进行测定, 采用 Masslynx 4. 1 中 Targetlynx 组件以定量离子对的峰面积 (y) 对标准系列浓度 ( x, 滋 g / L) 进行回归 ( 权重取 1 / x), 在 ~ 2000 滋 g / L 的浓度范围内回归方程为 y = x+0. 3, 相关系数优于 , 符合线性关系的要求在空白样本中加入系列低浓度的 TTX 按本法测定, 以两对分子离子对的信噪比均逸 3 时对应的样品浓度作为检出限 (LOD), 以信噪比逸 10 时的样品浓度作为定量限 ( LOQ), 测得尿液和血浆的检出限均为滋 g / L, 定量限为滋 g / L 本方法检测尿液和血浆中 TTX 浓度的上限为 400 滋 g / L, 适合于大部分样品中 TTX 的浓度水平, 高浓度样品需稀释再经免疫亲和柱净化后重新测定

上样后, 先用 PBS 溶液淋洗除去内源性杂质, 然后再用水淋洗除去 PBS 缓冲液, 避免 PBS 对质谱的不良影响免疫亲和柱具有很强的特异性, 只保留 TTX, 而其类似物 4 鄄表河豚毒素和 4,9 鄄脱水河豚毒素等均不被保留 ( 图 2) 即使样品

4 1 摇 614 摇分析化学第 42 卷 3. 5 摇方法的回收率和精密度根据生物分析方法验证指南的要求 [22], 在空白尿液或血浆中分别加入适量的 TTX 制成 0. 05, 1. 0, 3. 0, 100 和 300 滋 g / L 的 5 个浓度水平的加标样品, 每个浓度平行测定 5 次, 结果见表 1, 符合生物样品痕量分析的要求表 1 摇空白尿液和血浆中河豚毒素的加标回收率和精密度实验 (n = 5) Table 1 摇 Recoveries of standard addition and RSDs of the TTX in blank urine and plasma (n = 5) 加标浓度 Added ( 滋 g / L) 尿液 Urine 回收率 Recovery 相对标准偏差 RSD 加标浓度 Added ( 滋 g / L) 血浆 Plasma 回收率 Recovery 相对标准偏差 RSD 摇样品稳定性的考察分别使用空白尿液和血浆加标配制成含 10 滋 g / L TTX 的质控样品, 进行 3 次冷冻和解冻循环 (-20 益至室温 ), 与新制备的样品进行测定比较, 相对偏差的绝对值均小于 8% ; 含 10 滋 g / L TTX 的尿液和血浆质控样品的处理液在自动进样瓶中置于样品室中, 室温放置 24 h 后, 与新处理的样品进行测定比较, 相对偏差的绝对值均小于 7%, 表明在上述条件下样品不会明显分解 3. 7 摇实际样品的分析采用本方法对 TTX 中毒患者的 8 份尿液和 7 份全血留样样品进行重新测定,8 份尿液中 TTX 的浓度在 1. 0 ~ 148 滋 g / L,7 份全血样本为血透后采样均未检出 TTX 本次尿液测定结果低于原有测定值 [2,23], 可能是样品没有加酸保存, 经过 2 年多的时间 TTX 会部分分解 [7] O 忆 Leary 等报道,TTX 中毒病人的尿中 TTX 浓度为 28 ~ 258 滋 g / L, 血中 TTX 浓度臆 5 滋 g / L; Tsai [15] [23] 等报道尿液和血中 TTX 的浓度分别为 15 ~ 110 滋 g / L 和 1. 4 ~ 13 滋 g / L; 文献介绍了 13 例中毒病人的尿和血中 TTX 分别为 ~ 650 滋 g / L 和 2. 5 ~ 320 滋 g / L, 并认为血中 TTX 浓度大于 100 滋 g / L 会引起死亡本研究组曾对两起 TTX 引起的中毒事件进行检测 [2,24], 第 1 起为误食河豚鱼干中毒事件, 尿中 TTX 的浓度为 6. 7 ~ 439 滋 g / L, 第 2 起为误食织纹螺的中毒事件, 尿中 TTX 的浓度为 5. 0 ~ 135 滋 g / L, 两起事件中 7 份全血样本均未检出 TTX( 检出限为 0. 3 滋 g / L), 究其原因是这些血液样本均 [25] 系血透后采样 Islam 等报道 2008 年斯里兰卡暴发的 3 起 TTX 中毒事件, 共有 141 人发病, 采用 ELISA 法测定了 37 份尿样和 38 份血样中 TTX 的浓度, 分别在 0. 4 ~ 滋 g / L 和 1. 6 ~ 14 滋 g / L 范围内, 认为血中 TTX 浓度大于 9 滋 g / L 会使呼吸停止, 导致死亡文献 [23] 和 [25] 关于血中 TTX 的死亡浓度冶相差 11 倍, 可能是文献 [23] 采用 GC 鄄 MS 法测定引起的, 因为从原理上分析其测定结果是包括在碱性条件下能够产生 C9 碱的 TTX 及其类似物的总和以上资料显示, 中毒时尿液中 TTX 的浓度比血液高, 提示尿液是更好的检材, 这也与文献 [26] 的实验数据一致同时尿液和血液中 TTX 浓度水平不仅取决于 TTX 的摄入量, 还与样品的采集时间及是否经过了清除毒物的血液透析等临床处理有关 4 摇结摇论本研究建立了测定尿液和血浆中 TTX 的超高液相色谱鄄三重四极杆质谱联用分析方法通过优化色谱分离和质谱检测等条件, 得到了较高的检测灵敏度 ; 通过对免疫亲和柱样品净化效果和基质效应的评估, 证明了样品前处理方法的有效性方法学验证结果表明, 本方法灵敏度高选择性好定量分析准确和精密度好, 应用于实际样品的检测取得满意结果本方法适合于尿液和血浆中 TTX 的中毒检测和临床监测

addition and RSDs of the TTX in blank urine and plasma (n = 5) 加标浓度 Added ( 滋 g / L) 尿液 Urine 回收率 Recovery 相对标准偏差 RSD 加标浓度 Added ( 滋 g / L) 血浆 Plasma 回收率 Recovery 相对标准偏差 RSD 0.

5 第 11 期张秀尧等 : 免疫亲和柱净化鄄超高效亲水色谱鄄三重四极杆质谱联用法测定人尿液和血浆中河豚毒素摇摇 1615 References 1 摇 WANG Jian 鄄 Wei, WANG De 鄄 Bin, LUO Xue 鄄 Yun, JI Rong, ZHANG Jing, CAO Ming 鄄 Hua. Journal of Hygiene Research, 1996, 25(5): 王健伟, 王德斌, 罗雪云, 计融, 张靖, 曹明华. 卫生研究, 1996, 25(5): 摇 ZHANG Xiu 鄄 Yao, CAI Xin 鄄 Xin, JIA Li 鄄 Ting. Zhejiang Journal of Preventive Medicine, 2014, 26(1): 86 张秀尧, 蔡欣欣, 贾俐挺. 浙江预防医学, 2014, 26(1): 86 3 摇 XU Jing 鄄 Ye, XU Guo 鄄 Zhang, YE Lu 鄄 Ming, QIN Pin 鄄 Zhang, HU Dan 鄄 Biao, YAN Peng, JIN Chun 鄄 Guang, YU Mei. Journal of Hygiene Research, 2010, 39(4): 徐景野, 许国章, 叶鹿鸣, 秦品章, 胡丹标, 闫鹏, 金春光, 于梅. 卫生研究, 2010, 39(4): 摇 Ngy L, Tada K, Yu C F, Takatani T, Arakawa O. Toxicon, 2008, 51(2): 摇 Yu C H, Yu C F, Tam S, Yu P H F. Food Addit. Contam., 2010, 27(1): 摇 ZHENG Yong 鄄 Yi, WANG Yan, ZHANG Ji, WANG Ren 鄄 Feng, YAN Chao. Chinese J. Anal. Chem., 2008, 36 (5): 郑雍怡, 王彦, 张计, 王刃锋, 阎超. 分析化学, 2008, 36(5): 摇 O 忆 Leary M A, Schneider J J, Isbister G K. Toxicon, 2004, 44(5): 摇 Kawatsu K, Shibata T, Hamano Y. Toxicon, 1999, 37(2): 摇 Noguchi T, Jeon J K, Arakawa O, Sugita H, Deguchi Y, Shida Y, Hashimoto K. J. Biochem., 1986, 99(2): 摇 Kurono S, Hattori H, Suzuki O, Yamada T, Seno H. Anal. Lett., 2001, 34(14) : 摇 ZHANG Xiu 鄄 Yao, CAI Xin 鄄 Xin. Chinese J. Anal. Chem., 2009, 37(12): 张秀尧, 蔡欣欣. 分析化学, 2009, 37(12): 摇 Cho H E, Ahn S Y, Son I S, In S, Hong R S, Kim D W, Woo S H, Moon D C, Kim S. Forensic Sci. Int., 2012, 217(1 鄄 3): 摇 Jena H C, Lin S J, Tsai Y H, Chen C H, Lin Z C, Hwang D F. J. Chromatogr. B, 2008, 871(1): 摇 Fong B M W, Tam S, Tsui S H, Leung K S Y. Talanta, 2011, 83(3): 摇 Tsai Y H, Hwang D F, Cheng C A, Hwang C C, Deng J F. J. Chromatogr. B, 2006, 832(1): 摇 LI Ai 鄄 Feng, YU Ren 鄄 Cheng, ZHOU Ming 鄄 Jiang. Chinese J. Anal. Chem., 2007, 35 (3 ): 李爱峰, 于仁成, 周名江. 分析化学, 2007, 35(3): 摇 Leung K Y, Fong B M W, Tsoi Y K. Marine Drugs, 2011, 9(11): 摇 Bane V, Lehane M, Dikshit M, O 忆 Riordan A, Furey A. Toxins, 2014, 6(2): 摇 Commission Decision 2002 / 657 / EC of 12 August Implementing Council Directive 96 / 23 / EC Concerning the Perform 鄄 ance of Analytical Methods and the Interpretation of Results (2002). Off. J. Eur. Comm., L221: 8 20 摇 DA Qing, LIU Wei, SHEN Bao 鄄 Hua, SHEN Min. Journal of Forensic Medicine, 2010, 26(6): 达情, 刘伟, 沈保华, 沈敏. 法医学杂志, 2010, 26(6): 摇 Matuszewski B K, Constanzer M L, Chavez 鄄 Eng C M. Anal. Chem., 2003, 75 (13): 摇 European Medicines Agency. Guideline on validation of bioanalytical methods. www. ema. europa. eu / pdfs / human / ewp / en. pdf 摇 Fukushima S, Ohtsuka Y. Drugs and Poisons in Humans. Heidelberg: Springer, 2005: 摇 ZHANG Xiu 鄄 Yao, CAI Xin 鄄 Xin. Chinese Journal of Preventive Medicine, 2013, 47(3): 张秀尧, 蔡欣欣. 中华预防医学杂志, 2013, 47(3): 摇 Islam Q T, Razzak M A, Islam M A, Bari M I, Basher A, Chowdhury F R, Sayeduzzaman A B M, Ahasan H A M N, Faiz M A, Arakawa O, Yotsu 鄄 Yamashita M, Kuch U, Mebs D. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., 2011, 105(2): 摇 LIU Wei, DA Qing, SHEN Min. Journal of Forensic Medicine, 2012, 28(3): 刘伟, 达情, 沈敏. 法医学杂志, 2012, 28(3):

Zhejiang Journal of Preventive Medicine, 2014, 26(1): 86 张秀尧, 蔡欣欣, 贾俐挺.

6 1 摇 616 摇分析化学第 42 卷 Determination of Tetrodotoxin in Human Urine and Plasma after Immunoaffinity Column Clean 鄄 up Using Ultra 鄄 Performanc Hydrophilic Interaction Chromatography Coupled with Triple Quadrupole Mass Spectrometry ZHANG Xiu 鄄 Yao, CAI Xin 鄄 Xin *, ZHANG Xiao 鄄 Yi, LI Rui 鄄 Fen ( Wenzhou Municipal Center for Disease Control and Prevention,Wenzhou , China) Abstract 摇 An ultra 鄄 performance hydrophilic interaction liquid chromatography 鄄 triple quadrupole mass spectrometric (UPLC 鄄 MS / MS) method was developed for the determination of tetrodotoxin (TTX) in human urine and plasma. After the sample was cleaned 鄄 up and concentrated by immunoaffinity column, the separation of the TTX was carried out on an Acquity UPLC BEH amide column (100 mm 伊 2. 1 mm, 1. 7 滋 m) with gradient elution using mobile phases of 0. 1% (V / V) formic acid in water and acetonitrile. The analyte was detected by positive electrospray ionization mass spectrometry in the multiple reaction monitoring ( MRM) mode, and quantified by external solvent standard calibration. The measuring ranges of TTX in urine and plasma were 滋 g / L. The average recoveries were 92% -95% and 91% -96% for TTX respectively spiked in urine and plasma with relative standard deviations of 3. 3% -7. 2% and 3. 9% -7. 8% (n = 5). The limits of detection (LOD, S / N = 3) and limits of quantitation (LOQ, S / N = 10) of TTX were 滋 g / L and 滋 g / L for urine and plasma, respectively. This method is suitable for the detection of TTX in urine and plasma for both forensic and clinical purposes. Keywords 摇 Tetrodotoxin; Immunoaffinity column clean 鄄 up; Ultra 鄄 performance hydrophilic interaction liquid chromatography 鄄 tandem mass spectrometry; Urine; Plasma ( Received 1 July 2014; accepted 10 September 2014) 柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿柿液质联用 ( 食品 ) 专题培训通知摇摇信立方培训中心与仪器信息网合作, 将于 2014 年 12 月 2 ~ 4 日在北京举办液质联用 ( 食品 ) 培训班, 培训的主要内容为食品中兽药残留生物毒素液质联用仪分析方法的建立及应用, 本次培训班除了以上两个方面的分析领域课程外, 还邀请中国农业大学李晓薇老师讲授实验室质量管理与液质仪器维护培训时间 :2014 年 12 月 2 ~ 4 日培训地点 : 北京培训内容 :(1) 食品中真菌毒素的液质联用仪分析方法的建立及应用 ; (2) 食品中兽药残留的液质联用仪分析方法的建立及应用 ; (3) 实验室质量管理与液质仪器维护授课专家 : (1) 张朝晖摇现任北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心食品实验室技术总监 ; 北京市食品安全专家委员会委员 (2) 彭摇涛摇中国检验检疫科学研究院, 副研究员, 现为全国进出口食品安全检测标准化技术委员会 ( SAC / TC445) 秘书长 (3) 李晓薇摇中国农业大学国家兽药安全基准实验室农业部兽药安全监督检验测试中心 ( 北京 ) 从事兽药残留及代谢物的分析方法开发与检测工作咨询热线 : 报名咨询 : 010 鄄鄄 8123 摇摇 job@ instrument. com. cn 其他咨询 : 网络讲堂官方微信北京信立方在线冶, 用户交流 QQ 群仪器信息网供稿

ultra 鄄 performance hydrophilic interaction liquid chromatography 鄄 triple quadrupole mass spectrometric (UPLC 鄄 MS / MS) method was developed for the determination of tetrodotoxin (TTX) in human

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基内部资料东北师范大教运行基本状态据报告 2015 年春季期教务处 2015 年 10 月 27 日说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度,