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1 出 國 報 告 ( 出 國 類 別 : 研 習 ) 研 習 雞 種 原 保 存 技 術 服 務 機 關 : 行 政 院 農 業 委 員 會 畜 產 試 驗 所 姓 名 職 稱 : 林 秀 蓮 助 理 研 究 員 派 赴 國 家 : 法 國 出 國 期 間 :102 年 7 月 14 日 至 102 年 7 月 27 日 報 告 日 期 :101 年 9 月 26 日 - 1 -

2 目 錄 壹 摘 要 頁 次 貳 目 的 參 過 程 肆 心 得 與 建 議 伍 附 錄

3 壹 摘 要 台 灣 擁 有 優 良 種 雞 品 種, 且 因 地 處 亞 熱 帶 地 區, 種 雞 長 期 於 此 環 境 下 已 發 展 出 耐 熱 特 性 之 競 爭 優 勢, 進 軍 亞 太 市 場 除 可 拓 展 活 體 外 銷 外, 推 廣 精 液 產 品 為 高 效 率 且 經 濟 之 方 式 然 國 內 對 於 精 液 低 溫 保 存 之 研 究, 包 括 軟 硬 體 設 備 在 內, 多 以 家 畜 作 為 主 要 使 用 對 象 作 設 計, 致 使 用 於 鳥 禽 類 精 液 凍 存 之 相 關 技 術 及 設 備 明 顯 不 足 而 亟 待 加 強 有 鑒 於 此, 本 出 國 計 畫 由 畜 產 試 驗 所 研 究 人 員 於 102 年 7 月 14 日 至 27 日 期 間 赴 法 國 研 習 種 雞 冷 凍 精 液 製 作 關 鍵 技 術, 並 參 觀 法 國 國 家 級 家 禽 種 原 庫 及 種 雞 保 種 場 研 習 地 點 包 括 法 國 卡 蘇 生 技 公 司 (I.M.V. Technologies France) 法 國 國 家 農 業 研 究 院 圖 爾 分 院 (INRA-Tours) 及 法 國 里 昂 大 學 幹 細 胞 與 大 腦 研 究 所 (Stem-cell and Brain Research Institute, SBRI), 因 而 有 機 會 了 解 目 前 法 國 在 冷 凍 生 物 學 領 域 的 各 項 發 展 及 近 期 主 要 執 行 中 的 任 務 計 畫, 如 母 雞 生 殖 道 構 造 組 成 與 其 受 精 持 續 力 長 或 短 之 關 聯 性 之 研 究 母 雞 生 殖 道 及 雞 精 液 蛋 白 質 體 之 研 究 家 禽 始 基 生 殖 細 胞 之 應 用 等 在 與 INRA-Tours 研 究 中 心 之 Dr. Pascal Mermillod Dr. Elisabeth Blesbois 與 Dr. Bertrand Pain 討 論 後, 三 位 專 家 以 自 身 經 驗 提 出 多 項 寶 貴 之 意 見 及 建 議, 並 達 成 雙 方 未 來 持 續 相 互 合 作 之 意 願 與 共 識 返 國 後 借 鏡 此 行 所 習 得 之 法 國 經 驗, 希 望 可 加 速 國 內 雞 精 液 凍 存 技 術 發 展, 提 升 國 內 種 雞 產 業 水 準, 同 時 提 高 雞 種 原 保 存 效 率 以 達 到 維 護 種 原 多 樣 性 之 目 的 - 3 -

4 貳 目 的 為 保 存 動 物 遺 傳 資 源, 除 可 藉 由 擴 大 動 物 族 群 數 目 達 成, 保 存 生 殖 細 胞 亦 為 有 效 且 經 濟 之 方 法 惟 母 禽 生 殖 細 胞 之 保 存 有 其 先 天 限 制, 無 法 似 哺 乳 類 般 取 其 卵 母 細 胞 或 胚 來 進 行 種 原 保 存, 故 自 雄 禽 取 其 精 細 胞 凍 存 仍 為 目 前 保 存 鳥 禽 類 遺 傳 資 源 最 有 效 之 方 法 然 而, 國 內 對 於 精 液 低 溫 保 存 之 研 究, 包 括 軟 硬 體 設 備 在 內, 多 以 家 畜 作 為 主 要 使 用 對 象 作 設 計, 致 使 用 於 鳥 禽 類 精 液 凍 存 之 相 關 技 術 及 設 備 明 顯 不 足 而 亟 待 加 強 台 灣 擁 有 優 良 種 雞, 且 因 地 處 亞 熱 帶 地 區, 種 雞 長 期 於 此 環 境 下 已 發 展 出 耐 熱 特 性 之 競 爭 優 勢, 倘 能 發 展 穩 定 種 雞 精 液 凍 存 技 術, 製 備 優 良 種 雞 之 冷 凍 精 液 輸 出 國 際 市 場, 將 可 提 升 我 國 種 雞 知 名 度 並 增 加 業 者 所 得, 為 實 現 我 國 成 為 亞 太 種 畜 禽 中 心 之 重 要 一 環 法 國 國 家 農 業 研 究 院 (INRA) 為 歐 陸 最 先 進 的 農 業 研 究 機 關, 其 圖 爾 (Tours) 分 院 研 究 團 隊 針 對 各 類 禽 畜 繁 殖 學 研 究 均 有 非 常 卓 越 之 成 果 此 外, 該 院 於 2003 年 在 法 國 農 業 部 指 導 下 成 立 國 家 級 種 原 中 心, 其 家 禽 種 原 庫 之 主 持 人 Dr. Elisabeth Blesbois 為 此 次 邀 訪 專 家 之 一 Dr. Elisabeth Blesbois 及 其 研 究 團 隊, 長 期 以 來 對 於 種 雞 精 液 凍 存 有 深 入 之 研 究, 該 實 驗 室 亦 具 備 完 善 的 儀 器 設 備 評 估 精 液 品 質 性 能, 對 於 國 內 種 雞 冷 凍 稀 釋 液 配 方 開 發 及 冷 凍 解 凍 流 程 建 立 所 需 之 各 項 技 術 必 能 給 予 有 效 建 議, 且 其 管 理 法 國 家 禽 種 原 庫 之 寶 貴 經 驗 必 可 做 為 台 灣 畜 產 種 原 庫 管 理 參 考 因 此, 本 出 國 研 習 計 畫 之 主 要 目 的 有 二, 其 一 為 加 強 台 法 合 作 關 係, 期 能 建 立 國 際 合 作 團 隊 ; 其 二 則 希 望 透 過 赴 法 研 習 及 邀 請 法 方 專 家 訪 台 針 對 雞 精 液 凍 存 技 術 及 家 禽 種 原 庫 建 置 與 管 理 作 深 入 探 討, 除 有 利 將 來 相 關 科 技 計 畫 執 行, 更 有 助 於 提 升 國 內 種 雞 產 業 水 平 - 4 -

5 參 過 程 赴 法 研 習 行 程 ( 一 ) 研 習 行 程 表 1. 林 秀 蓮 赴 法 研 習 行 程 月 日 期 日 星 期 地 點 內 容 接 待 專 家 14 日 台 北 搭 機 至 法 國 一 抵 達 法 國 戴 高 樂 機 場 巴 黎 (IMV 公 司 ) 16 二 參 觀 I.M.V. 技 術 部 門 及 生 產 線 Misha Savic 17 三 Slides 準 備 (Pascal s lab) 四 家 畜 生 殖 生 理 實 驗 室 7 19 五 家 畜 試 驗 場 20 六 圖 爾 (INRA) 參 訪 資 料 彙 整 21 日 Slides 準 備 (Elisabethe s lab) 22 一 國 家 家 禽 種 原 庫 23 二 家 禽 冷 凍 精 液 研 習 24 三 里 昂 ( 里 昂 大 學 ) 雌 禽 生 殖 細 胞 保 存 25 四 巴 黎 參 訪 資 料 彙 整 Pascal Mermillod Elisabeth Blesbois Bertrand Pain 26 五 巴 黎 搭 機 返 台 六 台 北 抵 達 桃 園 機 場 --- ( 二 ) 研 習 重 點 1. 法 國 卡 蘇 生 技 公 司 (I.M.V. Technologies France) 在 Dr. Misha Savic 安 排 之 下, 先 來 到 I.M.V. Technologies 之 一 子 公 司 Cryo Bio System(Groupe I.M.V. Technologies) 參 觀, 該 公 司 主 要 任 務 為 研 發 冷 凍 生 物 學 之 - 5 -

6 相 關 設 備 產 品, 包 括 各 式 冷 凍 麥 管 ( 圖 1) 及 自 動 充 填 設 備 (DIVA, 圖 2) 等 DIVA 具 有 全 自 動 化 品 質 管 控 生 物 安 全 樣 品 可 追 溯 及 錯 誤 管 理 系 統 等 各 項 優 點, 每 小 時 可 充 填 168 支 冷 凍 麥 管, 對 高 度 生 物 安 全 性 及 高 效 率 要 求 之 國 家 級 種 原 庫, 甚 至 是 全 球 種 原 庫 而 言, 實 是 品 質 控 管 上 一 大 利 器 圖 1. CBS 高 生 物 安 全 冷 凍 麥 管 圖 2. DIVA 麥 管 自 動 充 填 設 備 緊 接 著, 在 Dr. Misha Savic 帶 領 下, 繼 續 來 到 位 於 法 國 西 北 部 諾 曼 地 L agle 區 的 I.M.V. 本 部 參 觀 ( 圖 3 及 4) 抵 達 後 先 與 服 務 於 精 液 品 質 檢 測 技 術 研 發 部 門 的 Dr. Ludivine Chevrier 討 論 GUAVA Eascyte 用 以 檢 測 雞 精 液 品 質 上 所 面 臨 的 各 種 問 題 ( 附 錄 一 ), 期 藉 由 討 論 結 果 於 返 國 後 將 檢 測 條 件 設 定 稍 作 適 當 調 整, 使 各 項 精 液 檢 測 結 果 更 加 精 準 接 著 便 在 Dr. Misha Savic 引 導 下 參 觀 I.M.V. 各 項 產 品 生 產 線, 了 解 該 公 司 廠 區 如 何 運 作, 以 維 持 各 項 產 品 品 質 管 理 圖 3. 計 畫 執 行 人 與 Misha 合 影 於 I.M.V. 公 司 圖 4. 與 I.M.V 生 產 部 門 負 責 人 合 影 2. 法 國 國 家 農 業 研 究 院 家 畜 生 殖 生 理 中 心 及 家 畜 試 驗 場 來 到 INRA 位 於 圖 爾 的 Nouzilly 研 究 中 心, 首 先 由 Dr. Pascal Mermillod 引 導 - 6 -

7 參觀其研究團隊所屬實驗室 圖 5 該團隊擁有純熟的山羊腹腔鏡 授精 採胚及胚移置等人工生殖技 術 其在山羊卵子體外成熟與體外 受精等技術之發展領先全球 目前 致力於研究複製山羊懷孕期胚胎發 育與分子生物學的研究 希望有助 圖 5. Dr. Pascal Mermillod 引領參觀研究團隊及實驗室 於解決複製胚懷孕早期損失的問題 接著與研究人員 Dr. Nadime Gerard 討論執行 之研究計畫 自 2012 年起 Dr. Nadime Gerard 便開始著手進行研究母雞生殖道構造 組成與其受精持續力長或短之關聯性 研究重點主要分為二大主軸 附錄二 其 一為探討母雞生殖道組織學構造 如陰道壁上的精子貯存小管 sperm storage tubule, SST 數量或大小與精子間之交互作用 其二為蛋白質研究 藉由抽取 SST 內之 液體分析其蛋白質組成 希望可以找出和精子有關之蛋白質標的物質未來進一步 加以利用 討論結束後 緊接著來到中心內的家畜試驗場 其所飼養之動物包括 有馬 綿羊 山羊 豬及牛 馬主要用以研究超音波採卵 精液冷凍製備 胚體 外成熟與泠凍胚移置等 綿羊 山羊與豬則用以供卵或供胚 進行動物複製與基 因轉殖相關研究 而牛則因為考量研究成本 已不再執行動物複製與基因轉殖計 畫 但仍提供做為胚移置和冷凍 以及營養標準需求精準化研究之用 來此參觀 令我印象最深且感觸之處 是現場工作人員善待動物的方式 以山羊為例 畜舍 內提供了多樣化的玩具 包括滾動的刷子跟球 圖 6 讓羊群可以有足夠的運動 與休閒 而幫馬施行人工授精時 授精夾欄可以同時容納母馬與哺乳中的小馬 圖 圖 6. 飼養於 INRA-Tours 之試驗動物有玩具可供使用 -7-

8 7), 因 為 母 馬 唯 有 跟 小 馬 如 影 隨 形 才 可 以 安 心 重 視 動 物 福 祉, 除 了 是 人 道 管 理 所 必 須, 以 科 學 論 證 而 言, 動 物 擁 有 健 康 快 樂 的 身 心 靈, 所 獲 得 的 試 驗 結 果 才 是 準 確 可 靠 的 圖 7. 母 馬 在 小 馬 陪 伴 之 下 接 受 人 工 授 精 3. 法 國 國 家 農 業 研 究 院 家 禽 生 殖 生 理 中 心 及 家 禽 種 原 庫 Dr. Elisabeth Blesbois 為 法 國 國 家 級 家 禽 種 原 庫 主 持 人, 亦 為 歐 盟 鳥 類 生 物 多 樣 性 執 行 團 隊 一 員, 自 年 即 與 匈 牙 利 Dr. J ud it Bar na 共 同 主 導 Cryobirds-Develpment of avian reproductive biotechnologies for the management of genetic biodiversity 計 畫 ( 附 錄 三 ), 且 其 於 Nouzilly 研 究 中 心 之 研 究 團 隊 長 期 以 來 對 於 家 禽 精 液 凍 存 有 深 入 研 究, 所 屬 實 驗 室 亦 具 備 完 善 的 儀 器 設 備, 該 團 隊 於 全 球 家 禽 精 液 凍 存 領 域 具 有 前 導 地 位 與 Dr. Elisabeth Blesbois 會 面 後 ( 圖 8), 先 針 對 目 前 製 作 種 雞 冷 凍 精 液 以 及 人 工 授 精 所 面 臨 之 結 果 與 各 項 疑 問 作 一 簡 單 報 告 與 討 論 ( 附 錄 四 ), 她 給 了 如 下 的 建 議 :(1) 採 精 時 的 環 境 溫 度 影 響 甚 鉅, 溫 度 若 高 於 20 必 須 於 採 精 後 立 刻 作 稀 釋 (2) 施 行 人 工 授 精 時, 精 子 數 目 為 成 敗 關 鍵 必 須 精 準 控 制, 每 次 授 精 至 少 注 入 3X10 8 sperms (3) 確 認 母 雞 生 殖 道 已 準 備 好 接 受 授 精, 可 使 用 定 量 微 吸 管 確 保 注 入 精 液 完 全 進 入 生 殖 道 為 讓 我 了 解 其 實 驗 室 標 準 作 業 流 程, D r. 圖 8. 與 Dr. Elisabeth Blesbois 會 面 進 行 討 論 Elisabeth Blesbois 特 別 安 排 我 進 入 種 雞 舍, 從 採 精 稀 釋 精 液 品 質 分 析 一 直 到 凍 存 過 程, 逐 步 觀 摩 學 習 比 較 異 同, 以 作 為 返 國 後 參 考 依 據, 希 望 能 提 升 目 前 製 作 種 雞 凍 精 之 水 準 與 效 率 種 雞 舍 負 責 人 為 Mr. David Gourichon, 他 先 示 範 的 是 採 精 方 式 ( 圖 9), 與 國 內 傳 統 採 精 瓶 相 較, 其 所 使 用 的 分 吸 管 採 精 瓶 可 收 集 到 不 被 糞 便 污 染 的 精 液 ( 圖 10) 之 後 Mr. David Gourichon 示 範 了 人 工 授 精 的 方 法, 在 施 行 授 精 前 須 先 充 分 按 摩 母 雞 腹 部, 而 所 使 用 的 定 量 微 吸 管 可 準 確 控 制 進 入 母 雞 生 - 8 -

9 殖道精液量 圖 11 David 更細心地 提醒了注精時要注意授精管尖端 若有 刺傷母雞陰道之虞 務必想辦法改變注 精管末端形狀成平滑 完成示範操作 後 Mr.David Gourichon 引導參觀位於該 中心內之異地備份保種雞舍 該舍保存 了來自法國各地特色雞種 圖 12 附 圖 9. Mr. David Gourichon 示範雞採精 錄五 完成種雞舍及異地保種雞舍參 觀後隨即返回精液凍存實驗室 由 Miss Esabell 示範冷凍精液製作流程 並仔細 解說了各項檢測精液性狀品質的技術 與 設 備 包 括 精 子 活 力 Mass Motility 存活率 頭帽完整性及獲能 反應 種蛋受精率取決於精子活力 圖 10. 以分吸管採精瓶採得精液 Mass Motility 存活率 頭帽完整性 及獲能反應 種蛋受精率取決於精子活 力 特別是前進 progressive 游動精子 所占之比例為受精率重要參考依據 因 此 Miss Esabell 示範了如何操作 CASA Computer Assisted Semen Analysis 測 得各項活力數據 圖 13 並一一解說 各數據所代表之意涵 圖 14 圖 11. 以微量吸管施行雞人工授精 圖 12. INRA-Tours 研究中心 保種場之各地法國土雞 -9-

10 圖 13. Esabell 示 範 以 CASA 檢 測 雞 精 液 品 質 圖 14. CASA 所 得 之 精 液 活 力 各 項 性 狀 數 據 4. 法 國 里 昂 大 學 幹 細 胞 與 大 腦 研 究 所 Dr. Bertrand Pain 對 家 禽 幹 細 胞 之 研 究 獨 步 領 先 全 球, 其 早 在 1996 年 便 成 功 自 雞 胚 中 分 離 出 胚 葉 細 胞, 並 於 培 養 液 中 添 加 生 長 因 子 進 行 體 外 培 養, 而 後 將 培 養 七 天 之 胚 葉 細 胞 注 入 雞 胚 後, 成 功 得 到 嵌 合 體 雞 此 性 腺 嵌 合 雞 保 有 原 雞 胚 之 遺 傳 物 質, 是 雞 種 原 保 存 除 了 活 體 保 種 及 精 液 凍 存 外 之 另 一 種 新 方 式 Dr. Bertrand Pain 介 紹 了 其 研 究 團 隊 所 屬 成 員 及 實 驗 室, 並 表 示 高 度 意 願 未 來 可 透 過 台 法 跨 國 合 作 計 畫 取 得 進 一 步 合 作 的 機 會

11 肆 心 得 與 建 議 此 次 能 有 機 會 赴 法 國 觀 摩 研 習, 在 這 個 歐 陸 最 先 進 的 農 業 研 究 機 構 -INRA, 所 見 識 學 習 到 的 包 括 從 上, 政 府 部 門 願 意 大 量 投 入 研 究 經 費, 跟 隨 世 界 潮 流 科 技, 建 置 新 穎 儀 器 設 備, 提 昇 機 構 內 的 研 究 質 能, 讓 研 究 人 員 有 後 盾 可 以 充 分 發 揮 所 長 ; 從 中, 機 構 編 組 得 宜, 使 人 力 充 分 運 用 並 且 各 司 所 職, 技 術 人 員 各 有 專 精 ; 從 下, 在 重 視 動 物 福 祉 的 飼 養 下, 試 驗 動 物 擁 有 健 康 快 樂 的 身 心 靈, 使 得 科 技 計 畫 得 以 順 利 執 行, 並 且 獲 得 可 靠 的 試 驗 結 果 在 在 都 是 INRA 能 夠 產 出 兼 具 高 質 與 多 量 的 試 驗 成 果, 使 其 聞 名 全 球 的 要 素 本 出 國 計 畫 研 習 主 題 為 雞 種 原 保 存 技 術, 除 希 冀 有 機 會 得 以 參 訪 法 國 家 禽 種 原 異 地 備 份 保 種 場 以 作 為 回 國 後 將 來 思 考 保 種 策 略 之 參 考 依 據 外, 更 渴 知 的 部 分 為 法 國 對 於 家 禽 生 殖 細 胞 保 存 之 各 項 關 鍵 技 術 一 路 參 訪 研 習 下, 發 現 研 究 人 員 在 各 項 細 節 都 是 非 常 小 心 謹 慎 的, 包 括 提 供 給 動 物 的 飼 養 環 境 是 舒 適 的 採 集 精 液 的 方 式 則 是 盡 量 避 免 外 源 性 污 染, 以 求 獲 得 最 高 品 質 精 液, 盡 其 所 能 改 善 每 一 階 段 所 可 能 對 精 液 造 成 的 負 面 影 響 而 為 了 清 楚 透 視 精 子 各 項 性 能 表 現 所 建 置 的 試 驗 設 備, 特 別 是 與 受 精 率 緊 密 相 關 的 精 子 活 動 力 觀 察 系 統 -CASA, 是 本 次 最 希 望 帶 回 來 的 技 術, 也 期 望 未 來 透 過 科 技 計 畫 研 提 可 以 順 利 取 得 研 究 經 費, 在 本 實 驗 室 建 置 該 系 統 設 備 除 了 實 質 上 技 術 的 研 習 外, 在 研 究 精 神 態 度 上 的 學 習 亦 是 收 穫 良 多, 此 次 在 與 法 國 專 家 接 觸 的 過 程 中, 發 現 他 們 是 虛 心 的, 廣 泛 的 閱 讀 期 刊 以 作 為 試 驗 上 的 靈 感 來 源, 而 且 非 常 樂 意 分 享 研 究 成 果, 這 些 都 是 非 常 值 得 學 習 與 效 法 的 國 際 合 作 計 畫 就 像 是 蝴 蝶 效 應 一 樣, 在 與 國 外 專 家 討 論 過 程 當 中, 可 以 學 習 光 是 閱 讀 期 刊 所 學 習 不 來 的 部 分, 一 直 到 建 立 良 好 默 契, 互 相 交 換 彼 此 的 見 解 與 概 念, 刺 激 雙 方 的 試 驗 靈 感 故 建 議 國 際 合 作 計 畫 在 經 費 與 人 員 數 量 上 多 予 支 持, 除 可 開 闊 研 究 人 員 的 視 野, 刺 激 研 究 人 員 的 想 法, 更 能 在 國 外 專 家 的 帶 領 之 下, 迅 速 提 升 國 內 研 究 水 平 與 產 業 水 準

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所 3 學 分 課 程, 及 兩 門 跨 領 域 課 程 共 6 學 分 以 上 課 程 學 生 在 修 課 前, 必 須 填 寫 課 程 修 課 認 定 表, 經 班 主 任 或 指 導 教 授 簽 名 後 始 認 定 此 課 程 學 分 ) 10. 本 規 章 未 盡 事 宜, 悉 依 學 位

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