幻灯片 1

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1 Sysmex XE-5000 血 细 胞 分 析 检 测 原 理 报 告 审 核 及 几 种 常 见 病 例 分 析 北 京 协 和 医 院 检 验 科 李 建 英

2 SE-5000 检 测 原 理 - 全 血 检 测 模 式 检 测 通 道 检 测 原 理 检 测 参 数 WBC/BASO DIFF NRBC RET/PLT-O RBC/PLT 半 导 体 激 光 的 流 式 细 胞 技 术 鞘 流 DC 测 定 法 WBC/BASO 散 射 图,WBC,BASO#,BASO%; WBC-B,NRBC+W DIFF 散 射 图,LYMPH%,LYMPH #,NEUT%, NEUT#, MONO %,MONO #,EO%, EO#, WBC-D,IG#,IG#,NEUT&%, NEUT&#, LYMPH&% LYMPH&# HFLC#,HFLC%, NEUT-X,NEUT-Y NRBC 散 射 图,NRBC%,NRBC# RET/PLT-O 散 射 图, RBC-O, PLT-O, RET%, RET-#,HFR,MFR, LFR,IRF,RET-He,RBC- He,Delta-He,RET-Y,RBC-Y,IRF-Y,FRC#, FRC%,RPI,HypoHe,HyprHe,,IPF,IPF#,H- IPF,PLT-X RBC/PLT 直 方 图,RBC,HCT, MCV,MCH, MCHC,RDW-SD,RDW-CV,PLT,PCT, PDW,MPV, P-LCR,MicroR, MacroR IMI RF/DC IMI 散 射 图,HPC%, HPC #,Area# Area%,IMI# 血 红 蛋 白 SLS 方 法 Hgb

3 SE-5000 检 测 原 理 - 体 液 检 测 模 式 检 测 通 道 检 测 原 理 检 测 参 数 DIFF 半 导 体 激 光 的 流 式 细 胞 技 术 WBC-BF,MN#,MN%,PMN#, PMN%,HF-BF#,HF-BF%, TC-BF#, EO-BF#,EO-BF% RBC/PLT 鞘 流 DC 测 定 法 RBC-BF

4 鞘 流 技 术

5 半 导 体 激 光 的 流 式 细 胞 术

6 RNA/DNA 染 色 细 胞 分 析 的 机 理 成 熟 白 细 胞 : 高 荧 光 特 性 网 织 红 细 胞 : 弱 荧 光 特 性 血 小 板 : 微 弱 荧 光 特 性 成 熟 红 细 胞 : 无 荧 光 特 性 原 始 细 胞 : 极 高 荧 光 特 性 幼 稚 细 胞 : 极 高 荧 光 特 性

7 DIFF 通 道 原 理

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11 IMI 检 测 原 理 采 用 阻 抗 与 射 频 技 术 联 合 检 测

12 IMI 检 测 原 理

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15 白 细 胞 分 类 技 术 及 异 常 细 胞 检 测 DIFF 通 道, 用 核 酸 荧 光 染 色 技 术 进 行 白 细 胞 分 类 和 原 始 或 幼 稚 细 胞 的 检 测 IMI 通 道, 用 射 频 和 电 阻 抗 技 术 进 行 HPC 和 原 始 及 幼 稚 细 胞 的 检 测

16 原 始 细 胞 幼 稚 淋 巴 幼 稚 单 核 异 型 淋 巴 细 胞 高 灵 敏 度 定 量 检 测 异 常 细 胞 通 过 荧 光 染 料 有 效 监 控 病 理 样 本 提 供 定 量 的 幼 稚 粒 细 胞 参 数 (IG) 提 供 定 量 原 始 细 胞 信 息 (other) 早 幼 粒 细 胞 中 幼 粒 细 胞 晚 幼 粒 细 胞

17 HFLC%(OTHER%): 高 荧 光 强 度 的 淋 巴 细 胞 百 分 比 HFLC#(OTHER#): 高 荧 光 强 度 的 淋 巴 细 胞 计 数 异 型 淋 巴 细 胞 : 病 毒 原 虫 等 刺 激 下, 胞 体 增 大 胞 质 增 多 嗜 碱 性 增 强, 细 胞 核 母 细 胞 化 DIFF 散 点 图 上 荧 光 强 度 最 强 注 : 五 种 白 细 胞 不 能 正 常 分 类 时,OTHER 区 域 一 般 为 原 始 细 胞 临 床 意 义 通 常 是 由 病 毒 或 者 药 物 刺 激 产 生, 新 生 儿 外 周 血 较 为 常 见 异 型 淋 巴 单 核 淋 巴 嗜 碱 幼 稚 粒 细 胞 中 性 嗜 酸

18 传 单?

19 异 型 淋 巴 细 胞 增 多

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21 淋 巴 瘤 细 胞?

22 慢 性 淋 巴 细 胞 白 血 病

23 浆 细 胞 白 血 病

24 原 始 细 胞 增 多

25 原 始 细 胞 增 多

26 早 幼 粒 细 胞 增 多

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28 原 始 及 幼 稚 单 核 细 胞 增 多

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30 NEUT-X NEUT-X: 中 性 粒 细 胞 颗 粒 指 数 原 理 DIFF 通 道 : 中 性 粒 细 胞 在 DIFF 散 点 图 X 轴 上 的 平 均 值 临 床 意 义 : 正 常 范 围 尚 未 建 立 NEUT-X 主 要 反 映 了 中 性 粒 细 胞 的 颗 粒 现 象, 中 性 粒 细 胞 颗 粒 减 少,SSC 减 弱, 中 性 粒 细 胞 群 左 移, NEUT-X 变 小, 多 见 于 骨 髓 增 生 异 常 综 合 症 等 等 ; 若 中 性 粒 细 胞 出 现 较 多 中 毒 颗 粒 时,NEUT-X 会 变 大 中 性 粒 细 胞 异 型 淋 巴 淋 巴 嗜 碱 单 核 单 核 细 胞 幼 稚 粒 细 胞 中 性 嗜 酸

31 NEUT&%: 成 熟 的 中 性 粒 细 胞 百 分 比 NEUT&#: 成 熟 的 中 性 粒 细 胞 绝 对 值 LYMPH&%: 成 熟 的 淋 巴 细 胞 百 分 比 LYMPH&#: 成 熟 的 淋 巴 细 胞 绝 对 值 原 理 异 型 淋 巴 幼 稚 粒 细 胞 NEUT&% = NEUT%-IG% NEUT&# = MEUT#-IG# LYMPH&% = LYMPH%-HFLC% 淋 巴 单 核 中 性 嗜 酸 LYMPH&# = LYMPH#-HFLC# 临 床 意 义 嗜 碱 参 考 范 围 同 NEUT%,NEUT#,LYMPH%,LYMPH# 对 于 白 血 病 患 者 疗 效 的 观 察 有 意 义 这 四 个 参 数 恢 复 正 常 表 明 骨 髓 造 血 恢 复 正 常

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33 Hematopoietic Progenitor Cell - 造 血 祖 细 胞 多 能 干 细 胞 ( CFU S ) 表 达 CD34,CD34 是 造 血 干 ( 祖 ) 细 胞 分 选 的 主 要 标 志, 主 要 分 布 在 骨 髓 肝 脾 外 周 血 及 脐 血, 外 周 血 和 脐 血 是 干 ( 祖 ) 细 胞 极 丰 富 的 来 源 CD34 + 细 胞 用 于 末 梢 血 干 细 胞 移 植 时 决 定 最 适 合 的 干 细 胞 采 集 时 间 的 指 标 测 定 上 目 前 有 许 多 方 法 可 以 检 测 外 周 血 干 细 胞 (PBSC), 最 常 用 的 是 采 用 流 式 细 胞 仪 测 定 外 周 血 CD34 + 标 记 的 细 胞 XE- 系 列 仪 器 设 定 了 一 个 HPC 程 序, 选 用 全 血 细 胞 + 分 类 模 式 由 IMI 通 道 即 可 获 得. 由 IMI 通 道 检 测 的 HPC, 与 实 行 外 周 血 干 细 胞 移 植 时 使 用 的 CD34 + 细 胞 有 良 好 的 相 关

34 HPC# 造 血 干 祖 细 胞 计 数 原 理 IMI 通 道 :RF+DC 越 幼 稚 的 细 胞, 密 度 越 低 临 床 意 义 1. 监 测 外 周 血 干 细 胞 水 平, 确 定 用 于 干 细 胞 移 植 的 外 周 血 干 细 胞 的 采 集 时 间 (PBSCT) 2. 监 控 化 疗 后 造 血 恢 复 的 状 况

35 正 常 嗜 酸 性 细 胞 增 多 与 疟 原 虫 感 染 引 起 的 假 性 嗜 酸 性 细 胞 增 多 的 散 点 图 差 异 当 疟 原 虫 裂 殖 体 破 裂, 疟 色 素 从 感 染 的 血 细 胞 中 释 放 出 来 时, 被 宿 主 白 细 胞 所 吞 噬, 因 此, 吞 噬 了 疟 色 素 的 部 分 NEG 的 侧 向 角 散 射 光 强 度 改 变, 而 被 显 示 在 EO 的 散 点 图 区 域 内

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41 一 般 的 血 液 分 析 仪 通 常 不 能 将 NRBC 与 WBC 区 分, 且 被 误 计 为 淋 巴 细 胞 与 WBC 计 数 互 为 干 扰 结 果 2100 通 过 荧 光 染 色 技 术 可 将 NRBC 从 WBC 中 准 确 区 分 出 来, 而 使 WBC 结 果 得 到 修 正 NRB C WB C 扣 除 Eo 修 正 WBC Mo Ba NRBC Ly 扣 除 NRBC Ne 修 正 分 类 扣 除

42 有 核 红 细 胞 增 多 NRBC

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46 有 核 红 细 胞 增 多

47 外 周 血 中 有 核 红 细 胞 出 现 的 原 因 贫 血 所 致 : 常 见 于 : 溶 血 性 贫 血 PNH 自 身 免 疫 性 贫 血 新 生 儿 溶 血 性 贫 血 ( Rh ABO 不 和 等 ) 婴 儿 假 白 血 病 性 贫 血 巨 幼 细 胞 性 贫 血 红 细 胞 酶 缺 乏 性 贫 血 ( PK G6PD ) Hb 病 不 稳 定 血 红 蛋 白 以 及 极 度 贫 血 等 急 慢 性 白 血 病 红 血 病 及 红 白 血 病 MDS 骨 髓 纤 维 化 以 及 其 他 一 些 骨 髓 增 殖 性 疾 病 和 真 红 血 小 板 增 多 症 晚 期 肿 瘤 反 应 及 临 床 危 象 反 应 造 成 白 细 胞 计 数 的 错 误

48 红 细 胞 溶 血 不 全 -- 原 因 : RBC 抗 溶 WBC-D 取 代 WBC-B 作 为 WBC 的 规 则 难 溶 红 细 胞? 胆 固 醇 (CH) 和 磷 脂 (PL) 是 RBC 膜 结 构 的 基 本 成 份,CH/PL 比 值 约 为 0.8~1.0 RBC 膜 是 由 二 者 组 成 非 对 称 性 双 分 子 层 结 构 当 病 人 红 细 胞 膜 CH 增 高, 使 膜 密 度 增 大, 流 动 性 减 少, 变 形 能 力 降 低, 而 红 细 胞 膜 上 PL 降 低, CH/PL 比 值 升 高, 又 使 得 膜 非 对 称 性 双 分 子 层 结 构 丧 失 被 破 坏 血 细 胞 分 析 仪 测 定 白 细 胞 时 所 用 溶 血 剂 对 这 种 红 细 胞 膜 密 度 增 大 非 对 称 性 双 分 子 层 结 构 丧 失 的 红 细 胞 破 坏 较 困 难, 易 发 生 溶 血 不 足 形 成 细 胞 碎 片, 造 成 WBC 计 数 假 性 增 高

49 红 细 胞 溶 血 不 全 -- 原 因 : 乳 糜 微 粒 Diff Channel WBC count is o.k.

50 RBC/PLT 通 道 原 理 为 了 提 高 测 定 精 度 和 分 辨 率 采 用 电 阻 法 与 鞘 流 法 相 结 合 进 行 测 定 浮 动 界 标 能 正 确 的 确 定 阈 值 的 位 置

51 电 阻 抗 原 理 ( 库 尔 特 原 理 ) 根 据 血 细 胞 具 有 相 对 非 导 电 的 性 质, 悬 浮 在 电 解 质 溶 液 中 的 血 细 胞 通 过 计 数 小 孔 时 可 引 起 电 阻 及 电 压 的 变 化, 出 现 脉 冲 信 号, 脉 冲 的 数 量 代 表 细 胞 的 数 量, 脉 冲 的 大 小 代 表 细 胞 的 大 小, 从 而 对 血 细 胞 进 行 计 数 和 体 积 测 定

52 LD HD RBC 红 细 胞 计 数 是 在 低 界 标 (LD) 和 高 界 标 (HD) 之 间 的 细 胞 计 数 LD: 设 置 在 25~75 fl HD:200 ~ 250 fl 之 间

53 RDW-SD 以 红 细 胞 分 布 的 峰 值 相 当 于 100% 时 20% 界 限 的 分 布 宽 度 即 为 RDW-SD 单 位 用 fl 表 示 RDW-SD 测 量 的 是 红 细 胞 体 积 分 布 曲 线 的 较 低 部 分, 对 少 量 大 细 胞 或 小 细 胞 的 存 在 较 灵 敏, 对 于 RET 数 量 的 增 加 也 较 灵 敏 RDW-CV 点 L1 和 L2 在 总 分 布 区 域 中 的 出 现 频 率 为 68.26%, 使 用 下 列 方 程 计 算 : RDW-CV=(L2-L1)/(L2+L1) RDW-CV 是 红 细 胞 分 布 曲 线 上 1 SD 的 分 布 宽 度 与 MCV 的 比 值, 易 受 MCV 大 小 的 影 响 RDW-SD RDW-CV

54 RDW-SD,RDW-CV 的 临 床 意 义 RDW-CV:11.0~14.1%,RDW-SD:37.0~54.0fl 利 用 MCV 与 RDW 进 行 贫 血 分 类 地 中 海 贫 血 的 特 征 MCV 小,RDW-SD 小,RDW-CV 正 常 MCV RDW 小 细 胞 均 一 性 贫 血 N 小 细 胞 不 均 一 性 贫 血 正 细 胞 均 一 性 贫 血 N N 正 细 胞 不 均 一 性 贫 血 N 大 细 胞 均 一 性 贫 血 N 大 细 胞 不 均 一 性 贫 血

55 常 见 异 常 直 方 图 及 报 警 信 号 RL RL: 低 鉴 别 线 与 红 细 胞 直 方 图 交 点 高, 提 示 存 在 电 子 噪 声 干 扰 破 碎 红 细 胞 大 血 小 板 增 多 血 小 板 聚 集 等 情 况

56 RU, DW RU: 高 鉴 别 线 与 红 细 胞 直 方 图 交 点 高, 提 示 存 在 红 细 胞 聚 集, 冷 聚 集 素 的 干 扰 或 有 白 细 胞 极 度 增 高 DW: 相 对 度 数 20% 处 的 高 度 线 与 红 细 胞 直 方 图 曲 线 交 点 增 高, 提 示 红 细 胞 明 显 大 小 不 均

57 MP MP: 红 细 胞 直 方 图 呈 双 峰 性 表 示 受 贫 血 治 疗 输 血 的 影 响, 出 现 多 种 大 小 的 红 细 胞 群

58 大 小 不 均 红 细 胞 RDW 明 显 增 高, 曲 线 跨 度 大 血 小 板 出 现 PL 和 DW 报 警 提 示, 也 可 能 存 在 小 红 细 胞 干 扰

59 缺 铁 性 贫 血 治 疗 后 治 疗 2 周 后 ( 输 血 铁 剂 ) 红 细 胞 直 方 图 治 疗 4 周 后, 双 峰 以 正 常 红 细 胞 为 主

60 血 小 板 直 方 图 定 义 仪 器 在 2~30fL 范 围 内 分 析 血 小 板 正 常 血 小 板 直 方 图 呈 左 偏 态 分 布, 血 小 板 主 要 集 中 在 2~15fL 内 LD:2~6fl UD:12~30fl 固 定 鉴 别 线 :12fl LD UD

61 PDW: 假 设 峰 值 高 度 为 100%, 在 20% 频 率 水 平 上 的 分 布 宽 度 即 为 PDW 单 位 用 fl 表 示 P-LCR: 由 12 fl 界 标 得 到 的 巨 型 血 小 板 的 比 值 计 算 时, 将 固 定 界 标 与 高 界 标 之 间 的 粒 子 数, 同 低 界 标 与 高 界 标 之 间 的 粒 子 数 相 比 而 得 到 一 个 比 值 PCT: 由 PLT 脉 冲 累 计 换 算 而 成 MPV:PCT/PLT

62 血 小 板 粒 度 异 常 标 记 PL PL: 低 鉴 别 线 (LD) 处 相 对 度 数 超 过 设 定 值, 提 示 存 在 电 子 噪 声 破 碎 红 细 胞 白 血 病 性 白 细 胞 碎 片 等 的 干 扰

63 PU DW PU: 高 鉴 别 线 (UD) 处 相 对 度 数 超 过 设 定 值 提 示 存 在 破 碎 红 细 胞 小 红 细 胞 大 血 小 板 血 小 板 聚 集 等 的 干 扰 DW: 设 峰 值 高 度 为 100% 时,20% 相 对 度 数 处 的 粒 度 分 布 宽 度 异 常 提 示 有 破 碎 红 细 胞 血 小 板 大 小 不 均 冷 凝 蛋 白 干 扰

64 RET/PLT-O 通 道

65 核 酸 荧 光 染 色 法 基 本 原 理 : FSC 血 小 板 内 的 α 颗 粒 含 有 微 量 核 酸, 而 成 熟 红 细 胞 无 核 酸 新 生 的 都 是 大 血 小 板 血 小 板 越 大, 核 酸 含 量 越 高 临 床 意 义 对 巨 大 血 小 板 的 检 测 具 有 特 异 性 能 有 效 排 除 异 常 标 本 中 的 小 RBC 细 胞 碎 片 的 干 扰 SFL

66 电 阻 抗 法 和 一 般 光 学 法 的 缺 陷 自 动 化 的 血 液 分 析 仪, 无 论 是 阻 抗 法 还 是 光 散 射 法, 对 于 血 小 板 数 及 形 态 正 常 的 标 本, 结 果 一 般 比 较 可 靠 对 于 血 小 板 明 显 减 少 和 / 或 形 态 异 常 者, 所 得 结 果 误 差 甚 大, 有 时 甚 至 难 以 计 数 其 原 因 是 : 这 些 方 法 基 本 上 都 是 依 据 细 胞 的 大 小 进 行 检 测, 近 似 血 小 板 的 所 谓 非 血 小 板 颗 粒 (nonplatelet particles, 简 称 NPPs), 如 小 红 细 胞 红 细 胞 碎 片 白 细 胞 碎 片 细 菌 和 真 菌 以 及 免 疫 复 合 物 等, 会 被 当 作 血 小 板 加 以 计 数, 从 而 使 血 小 板 数 假 性 增 多 在 病 理 情 况 下, 如 原 发 性 血 小 板 减 少 性 紫 癜 MDS 急 性 心 肌 梗 塞 糖 尿 病 等, 大 血 小 板 会 增 多 由 于 大 部 分 血 液 分 析 仪 不 能 将 大 血 小 板 与 小 红 细 胞 等 分 开 ( 只 能 提 示 可 能 有 大 血 小 板 存 在 ), 致 使 许 多 大 血 小 板 被 当 作 红 细 胞 而 未 计 入 血 小 板 总 数 中, 从 而 使 血 小 板 计 数 结 果 偏 低

67 血 小 板 检 测 技 术 -- 双 方 法 检 测 血 小 板 鞘 流 电 阻 法 精 度 高, 成 本 低, 适 用 于 绝 大 数 血 小 板 形 态 数 量 正 常 的 样 本 核 酸 荧 光 染 色 法 更 需 重 视 的 样 本 对 血 小 板 数 量 减 少, 形 态 异 常 或 小 红 细 胞 及 细 胞 碎 片 准 确 性 高

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69 PLT-I 转 换 为 PLT-O 报 告 PLT 的 9 条 规 则 规 则 启 用 前 提 : 没 有 PLT 散 点 图 异 常 (1) RL(%) > 10% (2) PL(%) > 9% (3) PU(%) > 39% (4) PU < 23fL and PU > 20% (5) 出 现 Fragments? 报 警 (6) 出 现 RBC Agglutination? 报 警 (7) PU% > 13% and PLT 35fL>45% and PLT-I# /L (8) PLT-I < /L (9) Fragments?(RET-CH) AND PLT-I/PLT-O > 115%

70 PLT-I 和 PLT-O 转 换 规 则 PLT 计 数 报 告 1.PLT-I 实 用 性 : 浮 动 界 标 判 断 2. 如 果 PLT-I 不 可 信, 转 为 PLT-O 报 告 3. 如 果 WBC 碎 片 在 PLT-O 计 数 中 出 现, PLT 计 数 无 效 : PLT ----

71 PLT-I 和 PLT-O 转 换 规 则 PLT-I 由 PLT-DC 直 方 图 获 得 PLT-O 由 RET (PLT-O) 散 点 图 获 得

72 PLT-I 和 PLT-O 转 换 规 则 引 发 条 件 PLT 异 常 分 布 报 警 或 碎 片? RBC 通 道 报 警

73 PLT-I 和 PLT-O 转 换 规 则 出 现 碎 片 和 大 血 小 板 的 标 本, 直 方 图 曲 线 发 生 变 化,PLT-UD 异 常 在 RET 散 点 图 中, RBC 和 PLT-O 散 点 图 上 区 分 清 楚

74 在 RBC 碎 片 病 例 中 : PLT-I>PLT-O 在 WBC 碎 片 或 大 血 小 板 病 例 中 : PLT-I<PLT-O PLT-O: 光 学 血 小 板 数 目 包 括 WBC 碎 片

75 双 方 法 血 小 板 检 测

76 Reticulated Platelets(RP): 网 织 血 小 板 RP 是 从 骨 髓 中 新 释 放 入 血 液 循 环 的 新 生 血 小 板, 被 认 为 是 最 年 轻 的 血 小 板 与 成 熟 血 小 板 相 比, 体 积 大, 蛋 白 质 合 成 能 力 强,RNA 含 量 多 用 新 亚 甲 蓝 染 料, 对 外 周 血 进 行 染 色, 发 现 血 小 板 内 有 一 种 网 状 结 构 物 ( 为 胞 浆 中 残 余 的 mrna), 故 将 这 一 部 分 血 小 板 命 名 为 网 织 血 小 板 RP 与 网 织 红 细 胞 类 似, 能 反 映 骨 髓 血 小 板 的 生 成 状 态

77 IPF: 幼 稚 血 小 板 比 率 原 理 RET 通 道 (SFL+FSC): 在 荧 光 强 度 较 强 的 区 域 里 出 现 的 血 小 板 数 与 血 小 板 总 数 的 比 例 新 生 的 幼 稚 血 小 板 较 大,RNA 含 量 较 成 熟 红 细 胞 多, 因 此 荧 光 强 度 强 于 成 熟 红 细 胞,IPF=IPF#/PLT-O 临 床 意 义 目 前 没 有 IPF# 的 参 考 范 围, 建 议 实 验 室 自 己 建 立 参 考 范 围 Forward scatter RBC RBC fragments Mature platelet IPF2 RET Unknown_area IPF1 Fluorescence IPF (%) Mean SD Median MALE FEMALE TOTAL

78 PLT-X: 血 小 板 平 均 荧 光 强 度 H-IPF: 高 荧 光 强 度 幼 稚 血 小 板 的 百 分 比 原 理 RET 通 道 :PLT-X 为 血 小 板 在 X 轴 的 平 均 值, 反 映 整 体 血 小 板 成 熟 度 的 指 数 H-IPF 是 指 在 IPF 中 荧 光 强 度 更 强 的 血 小 板 数 与 血 小 板 总 数 的 比 率 临 床 意 义 目 前 PLT-X 和 H-IPF 没 有 建 立 参 考 范 围 IPF 的 变 化 趋 势 与 PLT-X 相 同, 因 此 PLT-X 的 临 床 意 义 与 IPF 相 同 H-IPF 是 更 加 幼 稚 的 血 小 板 比 率, 因 此 它 比 IPF 更 敏 感 和 早 期 mature platelets PLT-X H-IPF IPF

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80 RET 散 点 图 浮 动 界 标 LFR 或 MFR 交 界 位 MFR 或 HFR 交 界 位 Corrected area for small RBC FRC Gate UPP 交 界 位 : 固 定

81 LScRBC%: 弱 前 向 散 射 光 的 红 细 胞 百 分 比 HScRBC%: 强 前 向 散 射 光 的 红 细 胞 百 分 比 原 理 RET 通 道 :SFL+FSC LScRBC%: 为 低 于 低 界 标 线 红 细 胞 的 百 分 比 HScRBC%: 为 高 于 高 界 标 线 红 细 胞 的 百 分 比 临 床 意 义 尚 未 建 立 正 常 参 考 范 围 用 于 贫 血 的 诊 断 和 治 疗 监 测

82 RET-Y: 网 织 红 细 胞 平 均 前 向 散 射 光 强 度 RBC-Y: 成 熟 红 细 胞 平 均 前 向 散 射 光 强 度 IRF-Y: 未 成 熟 网 织 红 细 胞 平 均 前 向 散 射 光 强 度 原 理 RBC-Y RET 通 道 : SFL+FSC RET-Y IRF-Y RET-Y 是 RET 在 RET 散 点 图 Y 轴 ( 前 向 散 射 光 强 度 ) 的 平 均 值, 反 映 RET 的 平 均 体 积 RBC-Y 是 成 熟 红 细 胞 在 RET 散 点 图 Y 轴 ( 前 向 散 射 光 强 度 ) 的 平 均 值, 与 MCH 高 度 相 关 IRF-Y 是 中 高 荧 光 强 度 RET 在 在 RET 散 点 图 Y 轴 ( 前 向 散 射 光 强 度 ) 的 平 均 值 RET RBC IRF

83 CHr RET-He: 网 织 红 细 胞 血 红 蛋 白 含 量 原 理 在 RET 通 道 中 使 用 RET-Y( 网 织 红 细 胞 平 均 前 向 散 射 光 强 度 ) 和 MCH 的 相 关 性, 将 RET-Y 转 换 成 (pg) 184.4(ch) RET-Y( ) 均 值 为 RET-Y 与 RET-He 成 一 定 的 线 性 关 系 RET-He = exp (0.001 x RET-Y) RET-He 与 CHr 有 很 好 的 相 关 性 RET-Y(pg, formel MCH) versus CHr y = x R²= RETy(pg)

84 RBC-He: 红 细 胞 血 红 蛋 白 含 量 原 理 在 RET 通 道 中 使 用 RBC-Y( 成 熟 红 细 胞 平 均 前 向 散 射 光 强 度 ) 和 MCH 的 相 关 性, 将 RBC-Y 转 换 成 (pg) RBC-Y 参 考 范 围 ( ) 均 值 为 175.6(ch) RBC-Y 与 RBC-He 成 一 定 的 线 性 关 系 %Hypo 和 RBC-Y 有 合 理 的 相 关 性 临 床 意 义 : 同 MCH

85 FRC#: 红 细 胞 碎 片 计 数 FRC%: 红 细 胞 碎 片 百 分 比 原 理 : RET 通 道 在 RET 散 点 图 上 设 定 了 FRC 门, 在 FRC 门 内 的 散 点 被 定 义 并 计 数 为 红 细 胞 碎 片 FRC 的 临 床 意 义 红 细 胞 碎 片 没 有 标 准, 因 此 无 法 建 立 参 考 范 围 主 要 见 于 DIC 微 血 管 病 性 溶 血 性 贫 血 心 源 性 溶 血 性 贫 血 化 学 中 毒 肾 功 能 不 全 Corrected area for small RBC FRC Gate

86 HGB SLS 方 法

87 细 胞 和 一 些 组 织 细 胞 ; 因 此 HF 可 以 用 来 筛 查 肿 瘤 细 胞 体 液 检 测 原 理 WBC-BF = MN# + PMN# + EO# RBC-BF: 电 阻 抗 法 MN%: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 MN#: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 PMN%: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 PMN#: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 HF-BF%: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 HF-BF#: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 EO EO-BF%: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 EO-BF#: DIFF 通 道, 核 酸 荧 光 染 色 流 式 细 胞 法 TC-BF = MN# + PMN# + EO# + HF-BF# 注 意 :MN 包 括 单 核 细 胞 和 淋 巴 细 胞 ;PMN 主 要 指 中 性 粒 细 胞 ;HF 主 要 包 括 肿 瘤

88 HF MN PMN EO WBC-BF: 体 液 分 析 模 式 的 WBC 计 数 RBC-BF: 体 液 分 析 模 式 的 RBC 计 数 MN%: 在 WBC-BF 中 的 单 个 核 细 胞 的 百 分 比 MN#: 在 WBC-BF 中 的 单 个 核 细 胞 数 PMN%: 在 WBC-BF 中 的 多 形 核 细 胞 的 百 分 比 PMN#: 在 WBC-BF 中 的 多 形 核 细 胞 数 TC-BF: 体 液 有 核 细 胞 数 HF-BF%: 体 液 高 荧 光 强 度 的 有 核 细 胞 百 分 比 HF-BF#: 体 液 高 荧 光 强 度 的 有 核 细 胞 绝 对 值 EO-BF%: 体 液 嗜 酸 性 粒 细 胞 百 分 比 EO-BF#: 体 液 嗜 酸 性 粒 细 胞 绝 对 值

89 红 细 胞 假 性 减 少 病 例 1: 冷 凝 集 素 的 干 扰

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91 红 细 胞 假 性 减 少 :37 水 浴 后 检 测 结 果

92 红 细 胞 假 性 减 少 病 例 2: 冷 凝 集 素 的 干 扰

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95 红 细 胞 假 性 减 少 :37 水 浴 后 检 测 结 果

96 红 细 胞 假 性 减 少 病 例 3: 冷 凝 集 素 的 干 扰

97 HGB 假 性 增 高 : 高 脂 血 症 高 胆 红 素 血 症

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99 等 量 替 换 血 浆 后

100 抽 错 病 人 血 的 检 测 结 果

101 HGB 测 定 错 误

102 标 本 量 少 造 成 错 误 的 检 测 结 果

103 标 本 量 少 造 成 错 误 的 检 测 结 果

104 M3 MONO 测 定 错 误

105 溶血标本对PLT检测结果的影响

106 溶 血 标 本 对 PLT 检 测 结 果 的 影 响

107 巨 大 PLT 致 PLT 计 数 假 性 减 低

108 大 PLT 对 检 测 结 果 的 影 响

109 冷 球 蛋 白 血 症 ( 病 例 1) 对 PLT 检 测 结 果 的 影 响

110 37 度 预 温 后 的 检 测 结 果

111 冷 球 蛋 白 血 症 ( 病 例 2) 对 PLT 检 测 结 果 的 影 响 预 温 后 的 检 测 结 果 流 式 细 胞 仪 检 测 结 果 为 /L

112 PLT 检 测 结 果 历 史 记 录 检 测 日 期 PLT 检 测 结 果 PLT 检 测 结 果 检 测 日 期

113 MDS- 浮 动 界 标

114 MDS- 浮 动 界 标

115 浮 动 界 标 -RBC 碎 片 干 扰

116 RBC 碎 片 干 扰 手 工 计 数 PLT: /L

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118 BASO 假 性 增 高 - 急 性 淋 巴 细 胞 白 细 胞

119 PLT 聚 集 引 起 的 假 性 血 小 板 减 少

120 PLT 聚 集 引 起 假 性 血 小 板 减 少

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122 EDTA 依 赖 性 假 性 血 小 板 减 少

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125 EDTA 依 赖 性 假 性 血 小 板 减 少 1969 年 Gowland 首 先 报 道 发 生 机 制 : 抗 原 - 自 身 抗 体 反 应 发 生 条 件 : 抗 血 小 板 自 身 抗 体 EDTA 抗 凝 剂 合 适 温 度, 在 体 外 抗 凝 血 中 发 生 率 :0.07%~0.11%

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127 枸 橼 酸 依 赖 性 假 性 血 小 板 减 少 10%~20% 的 假 性 血 小 板 减 少 病 例 可 以 发 生 在 枸 橼 酸 盐 抗 凝 血 中 引 起 血 小 板 凝 集 的 自 身 抗 体 几 乎 总 是 IgM 抗 体, 而 这 种 抗 体 很 可 能 引 起 37 时 EDTA 依 赖 性 血 小 板 凝 集

128 血 小 板 卫 星 现 象 引 起 的 假 性 血 小 板 减 少 血 小 板 卫 星 现 象 是 由 于 自 身 抗 体 引 起 的 一 种 免 疫 反 应 现 象 血 小 板 卫 星 现 象 可 出 现 在 EDTA 抗 凝 血 中, 但 不 同 于 血 小 板 凝 集, 抗 体 属 于 IgG 型, 在 37 灭 活, 在 枸 橼 酸 钠 抗 凝 血 中 不 发 生 反 应 抗 体 识 别 中 性 粒 细 胞 和 血 小 板 上 的 共 同 抗 原 结 构 抗 体 的 靶 抗 原 是 : 血 小 板 -GPIIb-IIIa, 中 性 粒 细 胞 -Fcγ RIII 其 它 细 胞 也 可 形 成 血 小 板 卫 星 现 象, 但 机 制 与 中 性 粒 细 胞 - 血 小 板 卫 星 现 象 不 同 血 小 板 卫 星 现 象 引 起 自 动 血 细 胞 分 析 仪 计 数 血 小 板 减 少 不 如

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130 单 核 细 胞 吞 噬 血 小 板 示 意 图

131 假 性 血 小 板 减 少 的 实 验 室 特 点 EDTA 抗 凝 血 引 起 时 间 依 赖 性 血 小 板 体 外 凝 集, 低 温 条 件 下 易 见 (IgG 抗 体 ),37 少 见 (IgM 抗 体 ) 血 小 板 凝 集 块 不 能 被 自 动 血 细 胞 分 析 仪 计 数 为 血 小 板, 导 致 假 性 血 小 板 减 少 大 多 数 情 况 下 仪 器 分 析 的 直 方 图 或 散 点 图 可 出 现 异 常, 仪 器 可 有 血 小 板 凝 集 报 警 提 示, 但 这 种 报 警 也 可 出 现 假 阴 性 或 假 阳 性 血 小 板 小 凝 集 块 可 被 仪 器 计 为 大 血 小 板 ; 凝 集 块 达 白 细 胞 大 小 时 可 被 仪 器 计 为 白 细 胞, 引 起 假 性 白 细 胞 增 多 ; 大 凝 集 块 时 则

132 假 性 血 小 板 减 少 的 实 验 诊 断 策 略 将 血 液 在 37 水 浴 预 温 5~10min 以 上, 并 放 置 在 水 浴 中 将 预 温 血 液 立 即 进 行 仪 器 计 数 血 小 板, 并 在 预 温 的 载 玻 片 上 推 制 血 涂 片 染 色 镜 检, 油 镜 观 察 血 涂 片, 计 数 血 涂 片 中 血 小 板 与 红 细 胞 的 比 值, 其 比 值 乘 以 仪 器 计 数 RBC, 无 假 性 血 小 板 减 少 者 的 结 果 应 与 仪 器 计 数 血 小 板 数 量 接 近 改 用 枸 橼 酸 钠 抗 凝 剂 (37 凝 集 者 例 外 ) 重 新 取 血, 仪 器 计 数 血 小 板, 计 数 结 果 乘 以 血 液 稀 释 倍 数 如 果 上 述 方 法 计 数 血 小 板 仍 然 减 少, 可 能 患 者 存 在 IgM 抗 体, 需 进 行 毛 细 血 管 采 血, 用 不 含 EDTA 抗 凝 剂 的 稀 释 液 ( 如 1% 草 酸 铵 2% 盐 酸 普 鲁 卡 因 )0.38ml 加 0.02ml 血 混 匀 后, 显 微 镜 下 计 数 血 小 板

133 假 性 血 小 板 减 少 的 实 验 诊 断 策 略 血 小 板 计 数 结 果 : 预 温 后 计 数 值 枸 橼 酸 钠 抗 凝 血 计 数 值 显 微 镜 计 数 值, 后 者 较 为 可 靠 为 患 者 提 供 今 后 计 数 血 小 板 的 建 议 毛 细 血 管 采 血 显 微 镜 计 数 血 小 板 EDTA 抗 凝 血 37 预 温 后 仪 器 立 即 计 数 血 小 板 枸 橼 酸 钠 抗 凝 血 仪 器 计 数 血 小 板 如 果 同 时 有 假 性 白 细 胞 增 多, 预 温 后 计 数 血 小 板 仍 减 少, 而 且 干 扰 白 细 胞 计 数, 应 用 显 微 镜 计 数 白 细 胞, 标 本 可 用 手 指 血 或 EDTA 抗 凝 血

134 引 起 假 性 血 小 板 减 少 抗 凝 剂 选 择 非 钙 离 子 络 合 剂 类 物 质 : 氟 化 钠 肝 素 钠 肝 素 锂 水 蛭 素 (hirudin) 等 含 氨 基 糖 苷 (aminoglycoside) 的 EDTA 抗 凝 剂 : 可 阻 止 血 小 板 凝 集, 但 引 起 细 胞 形 态 改 变 酸 性 枸 橼 酸 盐 - 右 旋 糖 苷 (acid-citrate-dextrose, ACD ) 枸 橼 酸 盐 - 茶 碱 - 腺 苷 - 潘 生 丁 (Citrate-theophyllineadenosine-dipyridamole,CTAD) 枸 橼 酸 盐 - 吡 哆 醛 磷 酸 盐 - 缓 血 酸 胺 (citratepyridoxalphosphate-tris,cpt): 准 确 的 全 血 细 胞 计 数, 不

135 检 验 报 告 的 审 核 1. 实 验 室 内 结 果 分 析 按 照 国 际 实 验 室 建 议 的 复 查 标 准, 根 据 本 实 验 室 设 定 的 规 则, 复 查 检 测 结 果 一 般 对 仪 器 设 定 以 外 的 异 常 检 测 结 果, 无 论 是 出 现 数 据 图 形 异 常 还 是 报 警, 都 不 能 立 即 发 出 报 告, 必 须 作 仪 器 复 检 和 ( 或 ) 人 工 复 核

136 检 验 报 告 的 审 核 (1) 分 析 有 密 切 关 联 的 检 测 参 数 之 间 的 关 系 如 RBC HGB HCT 与 MCV MCH MCHC 之 间 的 因 果 关 系, WBC 与 白 细 胞 分 类 各 亚 群 计 数 或 百 分 率 之 间 的 关 系,RDW 与 镜 检 涂 片 红 细 胞 形 态 一 致 性 的 关 系 等 分 析 仪 的 检 测 结 果 与 涂 片 细 胞 形 态 学 的 变 化 和 有 核 红 细 胞 分 布 情 况 相 结 合, 可 进 一 步 验 证 仪 器 运 转 是 否 正 常, 结 果 是 否 准 确 失 去 了 一 般 规 律, 可 提 示 仪 器 运 转 可 能 失 常

137 检 验 报 告 的 审 核 (2) 根 据 直 方 图 散 点 图 和 参 数 变 化 确 定 需 要 显 微 镜 血 涂 片 复 核 的 标 本 全 面 检 查 血 细 胞 形 态 ( 包 括 5 种 白 细 胞 红 细 胞 血 小 板 ), 还 要 注 意 可 能 存 在 的 异 常 细 胞 和 血 液 寄 生 虫 等 除 了 做 白 细 胞 分 类 计 数 外, 还 要 估 算 油 镜 下 ( 1000 倍 ) 细 胞 分 布 良 好 的 区 域 血 小 板 的 数 量 ( 正 常 标 本 血 小 板 约 为 8~15 个 / 油 镜 视 野 ), 有 助 于 对 仪 器 血 小 板 计 数 准 确 性 的 印 证

138 检 验 报 告 的 审 核 2. 结 合 临 床 情 况 作 相 关 分 析 检 测 结 果 出 现 异 常, 如 在 排 除 了 分 析 中 因 素 可 能 性 外, 则 可 结 合 患 者 临 床 资 料 予 以 合 理 解 释 例 如, 患 者 本 次 HCT 值 与 前 次 检 测 比 较 特 别 低, 应 怀 疑 是 否 因 采 血 时 标 本 来 自 输 液 溶 血 或 患 者 大 量 失 水 等 原 因 通 过 LIS 系 统 比 较 患 者 ( 特 别 是 血 液 病 或 化 疗 患 者 ) 前 后 每 次 检 测 结 果, 有 助 于 发 现 检 测 结 果 异 常 所 在 的 原 因

139 检 验 报 告 的 审 核 3. 回 顾 性 质 量 控 制 检 测 本 室 工 作 的 精 密 度, 日 间 批 间 检 测 的 一 致 性, 决 定 当 日 实 验 是 否 准 确, 及 时 报 告 x 图 质 量 控 制 法 : 能 发 现 超 过 2SD 的 数 值, 但 对 于 开 始 出 现 的 偏 高 或 偏 低 的 倾 向 显 示 不 灵 敏 是 衡 量 准 确 度 和 批 间 质 量 较 好 的 方 法 均 值 浮 动 法 (XB 分 析 ): 每 一 个 正 常 成 熟 红 细 胞 和 每 个 单 位 体 积 内 Hb 含 量 恒 定, 通 过 对 RBC 指 数 的 监 督, 实 现 对 仪 器 的 质 量 监 控 将 MCV MCH MCHC 作 为 监 控 数 据, 其 中 MCHC 可 作 为 仪 器 失 控 最 敏 感 的 指 标

140 浮 动 均 值

141 分 析 仪 白 细 胞 分 类 与 镜 检 的 关 系 血 细 胞 自 动 分 析 技 术 的 不 断 改 进, 提 高 了 检 测 结 果 的 精 密 度 和 检 测 速 度, 能 较 正 确 分 析 正 常 细 胞 形 态, 可 为 镜 检 提 供 筛 查 手 段, 提 高 效 率, 保 证 医 疗 质 量 血 细 胞 形 态 的 多 样 性 和 复 杂 性, 决 定 了 仅 靠 自 动 化 分 析 的 方 式 仍 无 法 保 证 检 测 结 果 的 可 靠 性 ( 特 别 是 在 病 理 情 况 下 ), 使 用 显 微 镜 对 细 胞 进 行 复 检 是 必 不 可 少 的 手 段 镜 检 可 直 观 地 评 估 和 验 证 自 动 化 分 析 结 果 的 可 靠 性, 弥 补 仪 器 形 态 学 鉴 别 能 力 的 不 足, 具 有 特 异 诊 断 意 义 的 形 态 变 化 必 须 镜 检

142 显 微 镜 复 检 的 方 法 血 片 浏 览 对 外 周 血 片 只 作 粗 略 的 检 查, 观 察 各 种 血 细 胞 形 态, 尤 其 是 CBC 自 动 计 数 的 报 警 阳 性 细 胞, 如 确 认 血 小 板 计 数 有 无 血 小 板 或 红 细 胞 聚 集, 尾 部 有 无 大 型 异 常 细 胞, 但 无 需 分 类 计 数 血 片 分 类 ( 人 工 分 类 计 数 白 细 胞 ) 对 血 涂 片 进 行 精 确 的 人 工 分 类, 计 数 一 定 数 量 的 有 核 细 胞, 并 计 算 各 类 有 核 细 胞 所 占 百 分 率 血 片 详 查 包 括 对 血 涂 片 的 全 片 浏 览 和 / 或 细 胞 分 类 计 数, 细 胞 形 态 的 详 细 观 察

143 复 检 步 骤 确 认 仪 器 的 正 常 工 作 状 态 复 检 标 本 的 筛 选 对 照 评 估 血 液 学 分 析 仪 所 给 出 的 血 液 学 有 关 参 数 的 可 靠 性, 必 要 时 加 以 纠 正, 验 证 直 方 图 和 散 点 图 上 的 发 现 在 细 胞 分 布 适 中 部 位 浏 览 血 片, 根 据 其 与 红 细 胞 的 比 例 估 计 白 细 胞 数 血 小 板 数, 然 后 观 察 红 白 细 胞 形 态, 如 未 发 现 异 常 或 虽 有 异 常, 但 与 仪 器 给 出 的 结 果 一 致, 即 可 按 仪 器 结 果 发 出 报 告

144 复 检 步 骤 如 发 现 镜 检 与 仪 器 报 告 不 符 或 有 新 的 发 现, 必 须 在 报 告 单 上 加 以 描 述, 供 临 床 参 考 如 发 现 幼 稚 异 常 形 态 的 白 血 病 或 镜 检 发 现 仪 器 报 告 的 白 细 胞 分 类 与 镜 下 观 察 到 的 不 符, 必 须 进 行 显 微 镜 下 白 细 胞 分 类, 并 以 显 微 镜 分 类 ( 纠 正 ) 的 结 果 报 告 异 常 形 态 的 红 细 胞 血 小 板 以 及 发 现 血 液 寄 生 虫 等 亦 应 加 以 描 述 和 报 告

145 血 液 细 胞 形 态 学 检 查 内 容 细 胞 数 量 的 验 证 白 细 胞 数 量 : 在 细 胞 分 布 适 中 部 位 浏 览 血 片, 根 据 其 与 红 细 胞 的 比 例 估 计 白 细 胞 数 血 小 板 数 白 细 胞 总 数 (10 9 /L) 每 高 倍 视 野 平 均 白 细 胞 数 白 细 胞 总 数 (10 9 /L) 每 高 倍 视 野 平 均 白 细 胞 数 4~7 2~4 10~12 6~10 7~9 4~6 13~18 10~12 血 小 板 数 量 : 正 常 情 况 下, 每 10~40 个 红 细 胞 会 见 到 一 个 血 小 板, 或 在 每 油 镜 视 野 中, 每 200 个 红 细 胞 可 见 到 5~20 个 血 小 板

146 血 液 细 胞 形 态 学 检 查 内 容 白 细 胞 分 类 计 数 和 形 态 观 察 白 细 胞 分 类 计 数 中 性 粒 细 胞 核 象 : 核 左 移 核 右 移 细 胞 浆 的 变 化 : 中 毒 颗 粒 空 泡 形 成 兰 斑 杜 勒 小 体 棒 状 小 体 细 胞 核 的 变 化 : 核 固 缩 核 溶 解 核 碎 裂 原 幼 细 胞 异 型 淋 巴 细 胞 有 无 肿 瘤 细 胞 等 意 义 感 染 性 疾 病 的 诊 断 与 鉴 别 诊 断, 了 解 感 染 的 程 度 及 疗 效 观 察 血 液 系 统 恶 性 疾 病 的 诊 断 及 疗 效 评 估 某 些 遗 传 性 疾 病 的 诊 断

147 血 液 细 胞 形 态 学 检 查 内 容 红 细 胞 形 态 大 小 形 状 血 红 蛋 白 含 量 细 胞 内 包 涵 体 红 细 胞 异 形 性 意 义 贫 血 的 鉴 别 诊 断 为 其 他 疾 病 诊 断 提 供 依 据, 例 MM DIC 骨 髓 纤 维 化 等 为 疟 疾 诊 断 提 供 重 要 依 据

148 血 液 细 胞 形 态 学 检 查 内 容 血 小 板 形 态 体 积 大 小 血 小 板 聚 集 血 小 板 数 量 评 估 意 义 血 小 板 疾 病 的 诊 断 验 证 血 小 板 计 数 的 准 确 程 度 其 他 病 理 成 分 寄 生 虫 真 菌

149 Thanks