目 录 第 一 节 在 食 品 分 析 中 的 应 用 1. 黄 曲 霉 毒 素 1 号 的 测 定 (1) 2. 香 料 中 黄 曲 霉 毒 素 的 分 析 (3) 3. 阿 斯 巴 甜 的 测 定 (5) 4. 用 普 鲁 兰 多 糖 1 号 测 量 标 样 分 子 量 (7) 5. 异 黄 酮

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2 目 录 第 一 节 在 食 品 分 析 中 的 应 用 1. 黄 曲 霉 毒 素 1 号 的 测 定 (1) 2. 香 料 中 黄 曲 霉 毒 素 的 分 析 (3) 3. 阿 斯 巴 甜 的 测 定 (5) 4. 用 普 鲁 兰 多 糖 1 号 测 量 标 样 分 子 量 (7) 5. 异 黄 酮 的 测 定 (9) 6. DAD 检 测 12 种 人 工 合 成 色 素 (12) 7. 维 生 素 C 的 测 定 (18) 8. 抗 坏 血 酸 的 测 定 (20) 9. 抗 坏 血 酸 的 测 定 (UV) (23) 10. 迷 迭 香 酸 标 样 分 析 (25) 11. 紫 苏 汁 中 迷 迭 香 酸 分 析 (27) 12. 棒 曲 霉 素 标 样 测 定 (29) 13. 苹 果 汁 中 加 入 的 棒 曲 霉 素 分 析 (31) 14. 螺 旋 霉 素 和 新 螺 旋 霉 素 测 定 (34) 15. 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 辣 椒 粉 中 的 苏 丹 红 含 量 (36) 16. 标 准 有 机 酸 的 分 析 (39) 17. 酱 油 中 有 机 酸 分 析 (42) 18. 白 酒 中 有 机 酸 分 析 (43) 19. 功 能 饮 料 中 有 机 酸 分 析 (44) 20. 磷 酸 苯 肼 柱 后 衍 生 法 分 析 糖 (45) 21. 磷 酸 苯 肼 柱 后 衍 生 法 分 析 草 莓 中 糖 (47) 第 二 节 在 医 药 研 究 中 的 应 用 22. 氧 四 环 素 和 四 环 素 测 定 (49) 23. 氯 四 环 素 测 定 (51) 24. 阿 替 洛 尔 测 定 (53) 25. 阿 昔 洛 韦 测 定 (54) 26. 丹 参 测 定 (55) 27. 对 乙 酰 基 酚 测 定 (56) 28. 法 莫 替 丁 测 定 (57) 29. 葛 根 素 测 定 (58) 30. 灰 黄 霉 素 测 定 (59) 31. 克 拉 霉 素 测 定 (60) 32. 尼 莫 地 平 测 定 (61) 33. 头 孢 拉 定 测 定 (62) 34. 头 孢 曲 松 纳 测 定 (63) 35. 盐 酸 氟 桂 利 嗪 测 定 (64) I

3 36. 盐 酸 克 林 霉 素 测 定 (65) 37. 盐 酸 纳 络 酮 测 定 (66) 38. 高 效 液 相 色 谱 测 定 醋 氯 芬 酸 (67) 39. 柱 后 衍 生 法 分 析 伏 格 列 波 糖 (69) 40. ABD F 前 标 法 测 定 高 半 胱 氨 酸 (71) 41. 生 理 体 液 分 析 法 测 定 S 羧 甲 基 L 半 胱 氨 酸 (73) 第 三 节 在 生 物 化 学 和 生 物 工 程 中 的 应 用 42. 胰 岛 素 分 析 (76) 43. 牛 血 清 蛋 白 和 胰 蛋 白 消 化 液 分 析 (77) 44.ADAM 衍 生 脂 肪 酸 分 析 (78) 45. 水 溶 性 维 生 素 标 样 测 定 (81) 46. 尿 中 添 加 苦 杏 仁 酸 与 邻 间 对 甲 基 马 尿 酸 的 测 定 (83) 第 四 节 在 环 境 污 染 分 析 中 的 应 用 47. 氰 化 物 及 卤 代 氰 化 物 分 析 (84) 48. 二 硝 基 苯 腙 醛 8 种 化 合 物 测 定 (87) 49. 杀 草 快 分 析 (90) 50. 双 胍 辛 胺 醋 酸 盐 分 析 (91) 51. 氨 基 甲 酸 盐 分 析 (93) 52. 草 甘 膦 分 析 (97) 53. 甲 醛 的 分 析 (101) 54. 高 尔 夫 球 场 13 种 农 药 标 准 样 品 的 检 测 (104) 第 五 节 在 精 细 化 工 分 析 中 的 应 用 55. 阴 离 子 表 面 活 性 剂 分 析 (110) 56. 酒 精 和 有 机 酸 标 样 的 测 定 (111) 57. 示 差 检 测 器 测 定 糖 糖 酒 精 15 种 标 准 品 (112) 热 点 分 析 58. 三 聚 氰 胺 标 样 的 测 定 (113) 59. 牛 奶 脱 脂 奶 中 三 聚 氰 胺 的 测 定 (116) 60. 奶 粉 饼 干 中 三 聚 氰 胺 的 测 定 (119) 61. 超 高 速 液 相 色 谱 快 速 测 定 奶 粉 中 的 三 聚 氰 胺 (122) II

4 LC 黄 曲 霉 毒 素 1 号 的 测 定 黄 曲 霉 毒 素 是 生 长 在 食 物 及 饲 料 上 的 黄 曲 霉 菌 和 寄 生 曲 霉 菌 的 代 谢 产 物 几 乎 每 一 种 食 物 或 食 物 制 品, 在 一 定 的 温 度 和 湿 度 下, 都 可 能 生 长 黄 曲 霉 素 最 主 要 的 是 黄 曲 霉 毒 素 的 载 体 是 花 生 及 一 系 列 别 的 坚 果 子 仁 以 及 玉 米 大 米 大 豆 谷 物 制 品 食 用 受 黄 曲 霉 毒 素 污 染 的 食 品, 会 出 现 急 性 中 毒 试 验 证 明, 黄 曲 霉 素 可 引 起 肝 细 胞 变 性 坏 死, 损 害 肝 脏 国 标 规 定 需 对 相 关 食 品 必 须 进 行 黄 曲 霉 素 的 检 测 1 仪 器 (1) Hitachi L-2130 输 液 泵 (2) Hitachi L-2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L-2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L-2485 荧 光 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi-Inertsil ODS-3 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 检 测 器 : 激 发 波 长 :365nm, 发 射 波 长 :450 nm 流 动 相 :CH 3 CN:CH 3 OH:H 2 O=1:3:6 3 样 品 制 备 取 1mg/L 样, 用 甲 苯 / 乙 腈 =9/1 的 溶 液 定 容 到 50mL, 该 溶 液 为 标 样 1(20μg/mL) 标 样 1 取 0.25mL 用 甲 苯 / 乙 腈 =9/1 的 溶 液 定 容 到 100mL, 该 溶 液 为 标 样 2(50ng/mL) 标 样 2 每 个 取 0.5mL 混 合 用 甲 苯 / 乙 腈 =9/1 的 溶 液 定 容 到 10mL, 该 溶 液 作 为 混 标 (2.5ng/mL) 根 据 混 标 浓 度 配 成 ng/ml 的 浓 度 分 别 取 0.25mL 混 标 于 进 样 小 瓶 中, 用 氮 气 吹 干, 加 0.1mL 三 氟 乙 酸 到 小 瓶, 拧 紧, 震 荡, 室 温, 黑 暗 处 放 置 15min, 加 0.4mL 甲 苯 / 水 =9/1 的 溶 液, 得 标 样 溶 液 4 实 验 结 果 4.1 色 谱 图 图 1 10μL 标 准 溶 液 ( 每 种 2.5ng/mL) 色 谱 图 1

5 LC 标 准 曲 线 图 图 2 10μL 标 准 溶 液 ( 每 种 0.25ng/mL) 色 谱 图 图 3 黄 曲 霉 毒 素 G1 标 准 曲 线 图 4 黄 曲 霉 毒 素 G2 标 准 曲 线 图 5 黄 曲 霉 毒 素 B1 标 准 曲 线 图 6 黄 曲 霉 毒 素 B2 标 准 曲 线 2 2

6 LC 香 料 中 黄 曲 霉 毒 素 的 分 析 黄 曲 霉 素 毒 B1 是 毒 枝 菌 素 之 一, 其 结 构 如 图 1, 在 花 生 谷 物 香 料 及 其 他 农 产 品 中 有 检 测 出, 据 说 它 的 毒 性 是 二 恶 英 的 十 倍, 根 据 食 品 法, 其 在 食 品 中 的 含 量 不 能 超 过 10ng/g 卫 生 检 验 中 写 了 两 种 定 量 分 析 黄 曲 霉 素 B1 的 标 准 方 法, 一 是 通 过 薄 层 色 谱 定 量 分 析, 一 是 用 反 相 ODS 柱 通 过 三 氟 乙 酸 衍 生 后 分 离 定 量 ODS 柱 法 在 分 离 和 稳 定 性 上 都 很 优 越, 但 是 衍 生 方 法 操 作 复 杂, 其 可 能 影 响 到 定 量 结 果 本 文 使 用 通 常 的 硅 胶 柱, 不 需 要 衍 生 直 接 分 析 测 定 了 据 说 含 有 大 量 黄 曲 霉 素 B1 的 香 料 图 1 黄 曲 霉 素 毒 B1 分 子 结 构 1. 仪 器 (1)Hitachi L-2130 输 液 泵 (2)Hitachi L-2200 自 动 进 样 器 (3)Hitachi L-2300 柱 温 箱 (4)Hitachi L-2485 荧 光 检 测 器 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2. 分 析 条 件 柱 : ZORBAX SIL 4.6mm I.D. 250mm 柱 温 :40 C 流 动 相 : 乙 酸 甲 酯 / 甲 酸 / 甲 醇 / 甲 苯 =7.5/2.9/3.0/87.5 流 速 :1.0mL/min 检 测 器 :FL Ex = 365nm Em = 425nm 进 样 量 :20μL 3. 测 定 结 果 Signal intensity (mv) Aflatoxin B1 Aflatoxin B2 Aflatoxin G1 Aflatoxin G2 Retention time (min) 图 2 黄 曲 霉 素 毒 标 样 色 谱 图 3

7 LC 图 2 中 除 了 黄 曲 霉 素 毒 B1 外, 还 存 在 分 子 结 构 差 异 很 小 的 B2 G1 G2 对 动 物 来 说, B1 是 毒 性 最 大 的, 接 着 是 G1,B2,G2 在 这 B1 B2 G1 G2 一 起 分 析 图 2 中 黄 曲 霉 素 毒 B1 B2 G1 G2 分 别 为 2μg/L 其 浓 度 在 规 定 的 值 以 下 也 可 以 定 量 用 乙 腈 作 为 计 算 其 信 噪 比, 最 终 求 出 检 出 限 (S/N=3) 结 果 如 表 1 表 1 黄 曲 霉 素 毒 检 出 限 成 分 检 出 限 (µg/l) B B G G 图 3 是 香 辛 料 ( 红 胡 椒 粉 ) 分 析 的 一 个 实 样, 测 出 含 有 黄 曲 霉 素 毒 B1 和 G2, 浓 度 分 别 为 ng/g ng/g, 低 于 规 定 值, 所 以 是 安 全 的 Signal intensity (mv) Aflatoxin B1 Aflatoxin G2 Enlarged view Retention time (min) 图 3 香 辛 料 色 谱 图 4

8 LC 阿 斯 巴 甜 的 测 定 阿 斯 巴 甜 (Aspartame, 又 称 甜 味 素 ), 它 是 由 L- 苯 丙 氨 酸 和 天 门 冬 氨 酸 所 合 成 的 白 色 粉 状 物 其 给 人 的 甜 味 感 良 好, 味 道 接 近 蔗 糖, 甜 度 约 为 蔗 糖 的 150~200 倍 阿 斯 巴 甜 在 体 内 降 解 过 程 中, 还 生 成 甲 醇, 因 此 这 种 甜 味 剂 的 安 全 性 受 到 质 疑 自 20 世 纪 70 年 代 始, 陆 续 有 试 验 结 果 指 出 其 动 物 毒 性 作 用 并 有 个 体 不 良 反 应 报 告, 如 可 引 起 头 痛 乏 力 性 格 改 变 恶 心 呕 吐 关 节 疼 痛 视 力 减 退 和 内 分 泌 失 调 等, 也 可 使 某 些 肿 瘤 的 发 病 率 升 高 我 国 规 定 (GB ) 阿 斯 巴 甜 可 用 于 除 罐 头 食 品 外 的 各 类 食 品 并 规 定 应 用 阿 斯 巴 甜 的 食 品 应 标 明 " 甜 味 素 或 阿 斯 巴 甜 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 波 长 :210nm 流 动 相 :CH 3 CN:10mmol/L KH 2 PO4=15:85 3 实 验 结 果 图 1 20μL 阿 斯 巴 甜 标 样 色 谱 图 (20mg/L) 5

9 LC 图 2 20μL 糖 果 中 阿 斯 巴 甜 测 定 色 谱 图 ( 说 明 : 样 品 用 水 稀 释 10 倍 ) 图 3 20μL 常 饮 可 乐 中 阿 斯 巴 甜 测 定 色 谱 图 ( 说 明 : 样 品 用 水 稀 释 10 倍 ) 图 4 20μL 黑 醋 中 阿 斯 巴 甜 测 定 色 谱 图 ( 说 明 : 样 品 用 水 稀 释 10 倍 ) 6

10 LC 用 普 鲁 兰 多 糖 1 号 测 量 标 样 分 子 量 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2350 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2490 示 差 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :GL W560+GL W mm I.D.*300mm( 每 根 ) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 流 动 相 :1/15mol/L 磷 酸 缓 冲 液 (ph=6.8) 3 标 样 溶 液 1) 普 鲁 多 糖 P mg/mL 2) 普 鲁 多 糖 P mg/mL 3) 普 鲁 多 糖 P mg/mL 4) 异 麦 芽 六 糖 2.0mg/mL 5) 麦 芽 糖 6.0mg/mL 4 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 7

11 LC 图 2 20μL 标 样 色 谱 图 ( 说 明 : 用 普 鲁 兰 多 糖 2 号 测 量 标 样 分 子 量 ) 图 3 标 准 曲 线 图 8

12 LC 异 黄 酮 的 测 定 (HPLC,DAD 检 测 ) 异 黄 酮 是 黄 酮 类 化 合 物 中 的 一 种, 主 要 存 在 于 豆 科 植 物 中, 大 豆 异 黄 酮 是 大 豆 生 长 中 形 成 的 一 类 次 级 代 谢 产 物 由 于 是 从 植 物 中 提 取, 与 雌 激 素 有 相 似 结 构, 因 此 称 为 植 物 雌 激 素 大 豆 异 黄 酮 的 雌 激 素 作 用 影 响 到 激 素 分 泌 代 谢 生 物 学 活 性 蛋 白 质 合 成 生 长 因 子 活 性, 是 天 然 的 癌 症 化 学 预 防 剂 大 豆 异 黄 酮 苷 元 广 泛 用 于 保 健 品 食 品 和 化 妆 品 等, 正 受 到 广 泛 的 关 注, 因 此 建 立 一 个 稳 定 准 确 的 含 量 检 测 方 法 有 重 要 的 应 用 价 值 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2455 二 极 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*150mm(3μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :45 波 长 :254nm 流 动 相 :(A)CH 3 CN/H2O/CH3COOH=15 / 85 / 0.1 (B)CH 3 CN/H2O/CH3COOH=35 / 65 / 0.1 时 间 (min) A(%) B(%) 标 准 溶 液 7) 异 黄 酮 苷 C 21 H 20 O 9 = ) 黄 豆 黄 苷 C 22 H 22 O 10 = ) 染 料 木 苷 C 22 H 22 O 10 = ) 乙 酰 大 豆 黄 苷 C 23 H 22 O 10 = ) 乙 酰 黄 豆 黄 苷 C 24 H 24 O 11 = ) 丙 二 酰 基 大 豆 苷 C 24 H 22 O 12 = ) 丙 二 酰 基 黄 豆 苷 C 24 H 24 O 13 = ) 大 豆 黄 酮 C 15 H 10 O 4 = ) 黄 豆 黄 素 C 16 H 12 O 5 = ) 乙 酰 染 料 木 苷 C 23 H 22 O 11 = ) 丙 二 酰 基 染 料 木 苷 C 24 H 22 O 13 = ) 染 料 木 黄 酮 C 15 H 10 O 5 = 实 验 结 果 4.1 色 谱 图 9

13 LC 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 (10mg/L) 4.2 标 准 曲 线 图 2 等 高 线 图 图 3 异 黄 酮 苷 标 准 曲 线 图 4 乙 酰 大 豆 黄 苷 图 5 黄 豆 黄 苷 标 准 曲 线 图 图 6 乙 酰 黄 豆 黄 苷 标 准 曲 线 图 10

14 LC 图 7 染 料 木 苷 标 准 曲 线 图 图 8 丙 二 酰 基 大 豆 苷 标 准 曲 线 图 图 9 丙 二 酰 基 黄 豆 苷 标 准 曲 线 图 图 10 乙 酰 染 料 木 苷 标 准 曲 线 图 图 11 大 豆 黄 酮 标 准 曲 线 图 图 12 丙 二 酰 基 染 料 木 苷 标 准 曲 线 图 图 13 黄 豆 黄 素 标 准 曲 线 图 图 14 染 料 木 黄 酮 标 准 曲 线 图 说 明 : 异 黄 酮 标 线 浓 度 范 围 为 1 50mg/L 11

15 LC DAD 检 测 12 种 人 工 合 成 色 素 人 工 合 成 色 素 是 用 人 工 化 学 合 成 方 法 所 制 得 的 有 机 色 素, 主 要 是 以 煤 焦 油 中 分 离 出 来 的 苯 胺 染 料 为 原 料 制 成 的 合 成 色 素 与 天 然 色 素 相 比 较, 具 有 价 格 便 宜 色 泽 鲜 艳 着 色 力 强 性 质 稳 定 等 特 点, 当 今 食 品 加 工 行 业 和 化 妆 品 行 业 普 遍 使 用 合 成 色 素 大 量 的 研 究 证 明, 几 乎 所 有 的 合 成 色 素 都 不 能 向 人 体 提 供 营 养 物 质 部 分 合 成 色 素 还 会 损 害 人 体 健 康 有 研 究 人 员 对 苋 菜 红 这 种 食 用 色 素 进 行 了 长 期 动 物 试 验, 结 果 发 现 致 癌 率 高 达 22% 目 前, 我 国 批 准 使 用 的 食 用 合 成 色 素 都 有 最 大 使 用 限 量 1 仪 器 (1)Hitachi L 2160U 输 液 泵 (2)Hitachi L 2200U 自 动 进 样 器 (3)Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2455U 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 分 析 条 件 柱 : HITACHI LaChrom Ultra C18 4.6mm I.D. 150mm (5μm) 柱 温 :40 C 流 速 :1.0mL/min 进 样 量 :1μL 检 测 器 波 长 : 254nm 450nm 530nm 620nm 流 动 相 : (A) CH 3 CN / 20mmol/LNH 4 Ac=5 / 95 (B) CH 3 CN / 20mmol/LNH 4 Ac=1 / 1 时 间 (min) A(%) B(%) 着 色 剂 分 子 结 构 Y4 食 用 黄 4 号 R2 食 用 红 2 号 酒 磺 C 16 H 9 N 4 Na 3 O 9 S 2 = 苋 菜 红 C 20 H 11 N 2 Na 3 O 10 S 3 12

16 LC B2 食 用 蓝 2 号 R102 食 用 红 102 号 靛 蓝 胭 脂 红 C 16 H 8 N 2 Na 2 O 8 S 2 = 胭 脂 红 C 20 H 11 N 2 Na 3 O 10 S 3 = Y5 食 用 黄 5 号 R40 食 用 红 晚 霞 黄 FCF C 16 H 10 N 2 Na 2 O 7 S 2 = 诱 惑 红 C 18 H 14 N 2 Na 2 O 8 S 2 = G3 食 用 绿 3 号 B1 食 用 绿 1 号 固 绿 C 37 H 34 N 2 Na 2 O 10 S 3 = 亮 蓝 C 37 H 34 N 2 Na 2 O 9 S 3 = R3 食 用 红 3 号 R106 食 用 红 106 号 赤 藓 红 C 20 H 6 I 4 Na 2 O 5 H 2 O= 酸 性 红 C 27 H 29 N 2 NaO 7 S 2 =

17 LC R104 食 用 红 104 号 R105 食 用 红 105 号 荧 光 桃 红 C 20 H 2 Br 4 Cl 4 Na 2 O 5 = 虎 红 C 20 H 2 Cl 4 I 4 Na 2 O 5 = 实 验 结 果 4.1 色 谱 图 图 1 1μL 标 样 色 谱 图 ( 每 种 50mg/L) ( 说 明 : 样 品 用 纯 水 溶 解 稀 释 ) 图 2 等 高 线 图 14

18 LC 合 成 色 素 标 准 曲 线 图 合 成 色 素 标 准 曲 线 浓 度 范 围 为 :0.5 50mg/L 15

19 LC 合 成 色 素 光 谱 图 16

20 LC

21 LC 维 生 素 C 的 测 定 (40μg/mL) 维 生 素 C 又 称 抗 坏 血 酸, 是 水 溶 性 维 生 素, 是 知 名 度 最 高 的 营 养 素, 不 但 是 美 容 灵 药, 更 是 抗 氧 化, 保 护 细 胞, 甚 至 有 效 抗 癌 的 维 生 素, 它 普 遍 存 在 于 蔬 菜 水 果 中, 但 容 易 因 外 在 环 境 改 变 而 遭 到 破 坏, 人 体 自 身 无 法 合 成 维 生 素 C, 必 须 额 外 从 食 物 中 获 取 我 国 规 定 (GB ) 稳 定 性 维 生 素 C 可 以 作 为 一 种 营 养 强 化 剂 添 加 入 食 品 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi # mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :50 波 长 :250nm 流 动 相 :3mMHClO 4 进 样 量 :5μL 3 实 验 结 果 图 1 5μL 标 准 溶 液 (40μg/mL) 色 谱 图 ( 说 明 :Vc 用 0.1% 偏 磷 酸 溶 解, 下 同 ) 图 2 5μL 标 准 溶 液 (100μg/mL) 色 谱 图 18

22 LC 图 3 5μL 标 准 溶 液 (200μg/mL) 色 谱 图 图 4 5μL 标 准 溶 液 (500μg/mL) 色 谱 图 图 5 标 准 曲 线 说 明 : 工 作 曲 线 浓 度 范 围 μg/mL 19

23 LC 抗 坏 血 酸 的 测 定 (DAD 检 测 器 ) 抗 坏 血 酸 有 L 型 与 D 型 两 种 异 构 体 L- 抗 坏 血 酸 对 动 物 有 生 理 意 义,D- 异 抗 坏 血 酸 均 为 食 品 行 业 中 重 要 的 抗 氧 保 鲜 剂, 可 保 持 食 品 的 色 泽, 自 然 风 味, 延 长 保 质 期 本 文 建 立 了 一 种 分 离 两 种 异 构 体 的 方 法, 并 采 用 DAD 检 测 器 检 测 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2455 二 极 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Asahipak NH2P 50 4E 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :30 波 长 :245nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 :(A):(B)=80/20 (A) 乙 腈 (B)25.0mM 磷 酸 25.0mM 磷 酸 二 氢 钠 0.006%(w/v) 高 半 胱 氨 酸 混 合 液 3 抗 坏 血 酸 分 子 结 构 抗 坏 血 酸 C 6 H 8 O 6 =176.3 异 抗 坏 血 酸 C 6 H 8 O 6 = 实 验 结 果 4.1 实 验 色 谱 图 20

24 LC 异 抗 坏 血 酸 抗 坏 血 酸 图 1 5μL 标 样 (10mg/L)( 标 样 用 2% 偏 磷 酸 稀 释 ) 4.2 标 准 曲 线 图 图 2 等 高 线 图 图 3 抗 坏 血 酸 标 准 曲 线 图 21

25 LC 图 4 异 抗 坏 血 酸 标 准 曲 线 图 说 明 : 抗 坏 血 酸 标 准 曲 线 浓 度 范 围 为 1 20mg/L ( 当 柱 有 吸 附 时, 标 线 不 过 0 点 ) 4.3 光 谱 图 图 4 抗 坏 血 酸 光 谱 图 图 5 异 抗 坏 血 酸 光 谱 图 22

26 LC 抗 坏 血 酸 的 测 定 ( 紫 外 检 测 ) 抗 坏 血 酸 有 L 型 与 D 型 两 种 异 构 体 L- 抗 坏 血 酸 对 动 物 有 生 理 意 义,D- 异 抗 坏 血 酸 均 为 食 品 行 业 中 重 要 的 抗 氧 保 鲜 剂, 可 保 持 食 品 的 色 泽, 自 然 风 味, 延 长 保 质 期 本 文 建 立 了 一 种 分 离 两 种 异 构 体 的 方 法, 采 用 紫 外 检 测 器 检 测 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Asahipak NH2P 50 4E 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :30 波 长 :245nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 : (A) 乙 腈 (B)25.0mM 磷 酸 25.0mM 磷 酸 二 氢 钠 0.006%(w/v) 高 半 胱 氨 酸 混 合 液 (A):(B)=80/20 3 实 验 结 果 3.1 实 验 色 谱 图 异 抗 坏 血 酸 抗 坏 血 酸 图 1 5μL 标 样 (10mg/L)( 标 样 用 2% 偏 磷 酸 稀 释 ) 23

27 LC 标 准 曲 线 图 2 抗 坏 血 酸 标 准 曲 线 图 图 3 异 抗 坏 血 酸 标 准 曲 线 图 说 明 : 抗 坏 血 酸 与 异 抗 坏 血 酸 标 准 曲 线 浓 度 范 围 为 1 100mg/L( 由 于 柱 吸 附, 标 线 不 过 0 点 ) 24

28 LC 迷 迭 香 酸 标 样 分 析 迷 迭 香 酸 有 很 强 的 抗 氧 化 性, 其 抗 氧 化 活 力 强 于 维 生 素 E 迷 迭 香 酸 有 助 于 防 止 自 由 基 造 成 的 细 胞 受 损, 因 此 降 低 了 癌 症 和 动 脉 硬 化 的 风 险 它 也 被 用 于 食 品 防 腐 在 日 本, 富 含 迷 迭 香 酸 的 紫 苏 提 取 物 被 当 作 装 饰 物 来 改 善 新 鲜 海 产 品 的 保 质 期 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :30 波 长 : nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : (A)CH3OH:H2O:HCOOH=70:426:4 (B)CH3OH:H2O =65:35 时 间 (min) A(%) B(%) 实 验 结 果 迷 迭 香 酸 图 1 0.1mg/L 迷 迭 香 酸 标 样 色 谱 图 (λ:330nm) 25

29 LC 图 2 0.1mg/L 迷 迭 香 酸 标 样 等 高 线 图 (λ:330nm) 图 3 DAD 光 谱 图 26

30 LC 紫 苏 汁 中 迷 迭 香 酸 分 析 迷 迭 香 酸 有 很 强 的 抗 氧 化 性, 其 抗 氧 化 活 力 强 于 维 生 素 E 迷 迭 香 酸 有 助 于 防 止 自 由 基 造 成 的 细 胞 受 损, 因 此 降 低 了 癌 症 和 动 脉 硬 化 的 风 险 它 也 被 用 于 食 品 防 腐 在 日 本, 富 含 迷 迭 香 酸 的 紫 苏 提 取 物 被 当 作 装 饰 物 来 改 善 新 鲜 海 产 品 的 保 质 期 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :30 波 长 : nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 :(A)CH3OH:H2O:HCOOH=70:426:4 (B)CH3OH:H2O =65:35 时 间 (min) A(%) B(%) 样 品 处 理 紫 苏 汁 用 纯 水 稀 释 10 倍, 过 0.45μm 滤 膜, 上 机 进 样 4 实 验 结 果 27

31 LC 迷 迭 香 酸 图 1 紫 苏 汁 色 谱 图 (λ:330nm) 迷 迭 香 酸 图 2 紫 苏 汁 等 高 线 图 (λ:330nm) 紫 苏 汁 迷 迭 香 酸 标 样 图 3 DAD 光 谱 图 28

32 LC 棒 曲 霉 素 标 样 测 定 棒 曲 霉 素 是 一 种 毒 枝 菌 素, 污 染 果 汁, 其 在 水 果 发 霉 或 虫 蛀 水 果 时 产 生 2004 年 3 月 12 日, 欧 盟 公 布 了 第 455/2004 号 指 令, 以 限 制 含 棒 曲 霉 素 的 食 品 的 进 口 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 波 长 :UV:276nm,DAD: nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : (A)CH3CN:H2O( 含 0.095% 60%HClO 4 )=4:96 (B)CH3CN:H2O =80:20 时 间 (min) A(%) B(%) 实 验 结 果 图 mg/L 棒 曲 霉 素 标 样 色 谱 图 (UV:276nm) 29

33 LC 图 mg/L 棒 曲 霉 素 标 样 色 谱 图 (DAD:276nm) 图 3 棒 曲 霉 素 0.25mg/L 棒 曲 霉 素 标 样 等 高 线 图 (DAD:276nm) 棒 曲 霉 素 图 4 棒 曲 霉 素 光 谱 图 30

34 LC 苹 果 汁 中 加 入 的 棒 曲 霉 素 分 析 棒 曲 霉 素 是 聚 酮 内 酯, 由 某 些 生 长 在 水 果, 包 括 苹 果, 梨 子 和 葡 萄 上 的 真 菌 ( 如 : 青 霉 菌, 曲 霉 菌 和 丝 衣 霉 菌 ) 所 产 生 的 霉 菌 毒 素 1940 年, 棒 曲 霉 素 首 次 被 分 离 出 来, 但 直 到 现 在 人 们 才 知 道 棒 曲 霉 素 是 一 个 全 球 性 存 在 于 苹 果 和 苹 果 产 品 中 的 真 菌 毒 素 苹 果 汁 中 棒 曲 霉 素 限 量 标 准 是 不 超 过 0.050mg/L 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 波 长 :UV:276nm,DAD: nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : (A)CH 3 CN:H2O( 含 0.095% 60%HClO 4 )=4:96 (B)CH 3 CN:H2O =80:20 时 间 (min) A(%) B(%) 样 品 制 备 (5 倍 浓 缩 ) 称 苹 果 汁 5 克, 加 入 乙 酸 乙 酯 10mL, 剧 烈 搅 拌 1min, 收 集 乙 酸 乙 酯 提 取 液, 余 下 水 层 再 加 入 10mL 乙 酸 乙 酯 剧 烈 搅 拌 1min, 用 0.1% 乙 酸 乙 酯 5mL 洗, 收 集 乙 酸 乙 酯 提 取 液, 加 入 1.5% 碳 酸 钠 溶 液 2mL, 剧 烈 搅 拌 30s, 收 集 乙 酸 乙 酯 层, 乙 酸 乙 酯 过 5g 碳 酸 钠,40 以 下 旋 转 蒸 发 至 近 干, 少 量 乙 酸 乙 酯 洗, 用 氮 气 低 压 干 燥, 用 1mL 乙 酸 (ph=4) 溶 解, 过 0.45 μm 滤 膜, 进 样 20μL 31

35 LC 实 验 结 果 图 1 苹 果 汁 中 加 入 0.005mg/L 标 样 ( 原 标 样 的 1/10) 图 2 苹 果 汁 中 加 入 0.05mg/L 标 样 图 3 苹 果 汁 中 加 入 0.05mg/L 标 样 (DAD:276nm) 32

36 LC 棒 曲 霉 素 图 4 苹 果 汁 中 加 入 0.05mg/L 标 样 等 高 线 (DAD:276nm) 苹 果 中 加 入 棒 曲 霉 素 棒 曲 霉 素 标 样 图 5 棒 曲 霉 素 光 谱 图 33

37 LC 螺 旋 霉 素 和 新 螺 旋 霉 素 测 定 螺 旋 霉 素 I,C 43 H 74 N 2 O 14 是 一 种 大 环 内 酯 抗 生 素, 用 于 牲 畜 和 海 鲜, 其 随 着 新 螺 旋 霉 素 在 体 内 代 谢 变 化 螺 旋 霉 素 和 新 螺 旋 霉 素 总 量 残 余 限 鸡 肉 牛 肉 牛 奶 海 鲜 为 0.2ppm, 活 牛 鸡 为 0.6ppm, 牛 鸡 脂 肪 和 腰 为 0.3ppm 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器, 配 冷 却 单 元, 冷 却 架 设 定 温 度 为 10 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*150mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 波 长 :UV:235nm,DAD:235nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : CH 3 CN:0.05mol/LNaH 2 PO 4 ( 用 磷 酸 调 ph 为 2.5)=25:75 3 样 品 制 备 (5 倍 浓 度 ) 称 样 品 5 克, 加 入 甲 醇 /1.2% 偏 磷 酸 =1/1 的 溶 液 35mL, 均 质,3000rpm 离 心 10min, 上 层 清 夜 用 棉 花 团 过 滤, 分 别 用 甲 醇 /0.05mol/L 磷 酸 缓 冲 液 (ph=3)=9/1 的 溶 液 10mL 水 5mL 0.1mol/ L 磷 酸 氢 二 钾 3mL 过 棉 花 团 后 的 样 品 液 过 强 酸 阳 离 子 交 换 小 柱, 再 加 10mL 乙 腈 /0.1mol/L 磷 酸 氢 二 钾 =3/7 的 洗 液 洗, 滤 液 低 压 干 燥 ( 低 于 40 ) 然 后 用 1mL 乙 腈 /0.05mol/L 磷 酸 氢 二 钾 =3/7 的 溶 液 溶 解 样 品, 进 10μL 样 到 液 相 色 谱 仪 4 实 验 结 果 新 螺 旋 霉 素 螺 旋 霉 素 图 1 10μL0.05mg/L 标 样 色 谱 图 (UV:235nm) 说 明 : 标 样 的 1/20 S/N=7~8 34

38 LC 新 螺 旋 霉 素 螺 旋 霉 素 图 2 10μL0.05mg/L 标 样 色 谱 图 (DAD:235nm) 说 明 : 标 样 的 1/20 S/N=6~7 图 3 新 螺 旋 霉 素 螺 旋 霉 素 1mg/L 标 样 等 高 线 图 (DAD:235nm) 新 螺 旋 霉 素 螺 旋 霉 素 图 4 标 样 光 谱 图 35

39 LC 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 辣 椒 粉 中 苏 丹 红 含 量 苏 丹 红 是 一 种 偶 氮 化 合 物 类 合 成 色 素, 包 括 苏 丹 红 Ⅰ 苏 丹 红 Ⅱ 苏 丹 红 Ⅲ 和 苏 丹 红 Ⅳ 由 于 苏 丹 红 通 过 食 品 进 入 人 体 后, 会 大 量 消 耗 体 内 解 毒 物 质, 干 扰 人 体 正 常 代 谢 功 能, 严 重 者 可 能 致 畸 致 癌 2005 年 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 颁 布 了 GB/T 食 品 中 苏 丹 红 染 料 的 检 测 方 法 - 高 效 液 相 色 谱 法 实 验 中 采 用 氧 化 铝 层 析 柱 进 行 固 相 萃 取 净 化, 选 择 Alltima HP C18 色 谱 柱 检 测 样 品 中 苏 丹 红 Ⅰ 苏 丹 红 Ⅱ 苏 丹 红 Ⅲ 和 苏 丹 红 Ⅳ 试 验 部 分 1 仪 器 (1) Hitachi L-2130 输 液 泵 (2)Hitachi L-2300 柱 温 箱 (3) Hitachi L-2450 二 极 管 阵 列 检 测 器 (4) 组 织 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 (6) 层 析 柱 管 :1cm( 内 径 ) 5cm( 高 ) 的 注 射 器 管 (7) 层 析 用 氧 化 铝 ( 中 性 100 目 -200 目 ):105 干 燥 2h, 于 干 燥 器 中 冷 至 室 温, 每 100g 中 加 入 2ml 水 降 活, 混 匀 后 密 封, 放 置 12h 后 使 用 2 色 谱 条 件 色 谱 柱 :Alltima HP C18 柱,5µm,4.6mm 150mm 流 速 :1ml/min; 柱 温 :30 ; 检 测 波 长 :478nm; 进 样 量 :10µl; 流 动 相 :(A):0.1% 甲 酸 的 水 溶 液 : 乙 腈 =85:15; (B):0.1% 甲 酸 的 乙 腈 溶 液 : 丙 酮 =80:20; 表 1 流 动 相 梯 度 时 间 (min) 流 动 相 A% 流 动 相 B% 样 品 制 备 3.1 标 准 品 制 备 苏 丹 红 标 准 贮 备 液 : 分 别 称 取 苏 丹 红 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 标 准 品 各 10mg( 按 实 际 含 量 折 算 ), 用 丙 酮 溶 解 后 乙 腈 定 容 至 250ml 3.2 红 辣 椒 粉 等 粉 状 样 品 制 备 称 取 1g-5g( 准 确 至 0.001g) 样 品 于 三 角 瓶 中, 加 入 10ml-30ml 正 己 烷, 超 声 5min, 过 滤, 用 10ml 正 己 烷 洗 涤 残 渣 数 次, 至 洗 出 液 无 色, 合 并 正 己 烷 液, 用 旋 转 蒸 发 仪 浓 缩 至 5ml 以 下, 慢 慢 加 入 氧 化 铝 层 析 柱 中, 为 保 证 层 析 效 果, 在 柱 中 保 持 正 己 烷 液 面 为 2mm 左 右 时 上 样, 在 全 程 的 层 析 过 程 中 不 应 使 柱 干 涸, 用 正 己 烷 少 量 多 次 淋 洗 浓 缩 瓶, 一 并 注 入 层 析 柱 控 制 氧 化 铝 表 层 吸 附 的 色 素 带 宽 小 于 0.5cm, 待 样 液 完 全 流 出 后, 视 样 品 中 含 油 类 杂 质 的 多 少 用 10ml-30ml 正 己 烷 洗 柱, 直 至 流 出 液 无 色, 弃 去 全 部 正 己 烷 淋 洗 液, 用 含 5% 丙 酮 的 正 己 烷 60ml 洗 脱, 收 集, 浓 缩 后, 用 丙 酮 转 移 并 定 容 至 5ml, 经 0.45µm 有 机 滤 膜 过 滤 后 待 测 36

40 LC 实 验 结 果 4.1 标 准 工 作 曲 线 分 别 吸 取 ml, 用 乙 腈 定 容 至 25ml, 成 0.16µg/ml 0.32µg/ml 0.64µg/ml 1.28µg/ml 2.56µg/ml 的 系 列 标 准 溶 液, 分 别 进 行 测 定 以 浓 度 c 为 横 坐 标, 以 相 应 峰 面 积 A 为 纵 坐 标 进 行 线 性 回 归, 得 标 准 工 作 曲 线 方 程, 列 于 表 1 表 2 标 准 工 作 曲 线 及 检 出 限 分 析 物 回 归 方 程 线 性 范 围 /µg ml -1 相 关 系 数 检 出 限 /µg kg -1 苏 丹 红 Ⅰ A=56.233c 苏 丹 红 Ⅱ A=42.903c 苏 丹 红 Ⅲ A=55.943c 苏 丹 红 Ⅳ A=37.13c 苏 丹 红 Ⅰ;2- 苏 丹 红 Ⅱ;3- 苏 丹 红 Ⅲ;4- 苏 丹 红 Ⅳ 图 µg/ml 苏 丹 红 标 准 品 的 色 谱 图 由 表 可 知 苏 丹 红 浓 度 与 色 谱 峰 面 积 有 较 好 的 线 性 关 系, 相 关 系 数 大 于 以 3 倍 信 噪 比 计 算 样 品 中 苏 丹 红 的 检 出 限 为 10µg/mg. 4.2 加 样 回 收 率 测 定 在 两 份 空 白 辣 椒 粉 中 加 入 0.64µg/ml 的 混 合 标 准 品 250µl, 按 节 中 的 方 法 进 行 前 处 理, 作 回 收 率 测 定 ( 表 2 图 2 ) 表 3 各 组 分 回 收 率 的 测 定 苏 丹 红 各 组 分 加 入 量 (µg/ml) 测 定 量 (µg/ml) 回 收 率 平 均 回 收 率 SudanⅠ % 99.4% % SudanⅡ % 122.6% % Sudan Ⅲ % 40.2% % Sudan Ⅳ % 95.9% % 37

41 LC 图 2 辣 椒 粉 的 空 白 色 谱 图 图 3 辣 椒 粉 添 加 标 准 品 后 的 色 谱 图 5 结 论 采 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 法 检 测 辣 椒 粉 中 的 苏 丹 红 染 料, 用 氧 化 铝 层 析 柱 进 行 固 相 萃 取 净 化, 使 用 Alltima HP 色 谱 柱, 苏 丹 红 分 离 效 果 好, 灵 敏 度 高, 满 足 国 家 标 准 要 求 38

42 LC BTB 柱 后 衍 生 法 测 标 准 有 机 酸 (1mg/mL) 有 机 酸 类 是 分 子 结 构 中 含 有 羧 基 ( 一 COOH) 的 化 合 物 在 中 草 药 的 叶 根 特 别 是 果 实 中 广 泛 分 布, 在 医 药 与 食 品 工 业 中 有 着 广 泛 的 用 途 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2 个 ) (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2350 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2420 紫 外 可 见 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 分 离 柱 :GL C610H S 7.8mm I.D.*300mm 保 护 柱 :SMASH Acids G 4.6mm I.D.*10mm 流 速 :0.5mL/min 柱 温 :60 波 长 :440 nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 :3mmol/LHClO 4 3 标 样 与 试 剂 标 样 :1) 磷 酸 2) 柠 檬 酸 3) 酒 石 酸 4) 苹 果 酸 5) 丁 二 酸 6) 乳 酸 7) 蚁 酸 8) 醋 酸 9) 焦 谷 氨 酸 10) 丙 酸 11) 异 丁 酸 12) 正 丁 酸 13) 异 戊 酸 14) 正 戊 酸 反 应 试 剂 1:0.1 溴 百 里 酚 蓝 (BTB:C 27 H 28 Br 2 O 5 S=624.39) 15mMNa 2 HPO 4 4 系 统 结 构 分 析 柱 泵 自 动 进 样 器 柱 温 箱 UV VIS 检 测 器 流 动 相 保 护 柱 反 应 试 剂 图 1 系 统 结 构 图 39

43 LC 实 验 结 果 图 1 5μL 1mg/mL 混 合 标 样 色 谱 图 图 2 5μL 0.1mg/mL 混 合 标 样 色 谱 图 40

44 LC 图 3 柠 檬 酸 标 准 曲 线 图 图 4 醋 酸 标 准 曲 线 图 41

45 LC 酱 油 中 有 机 酸 分 析 有 机 酸 是 酱 油 中 主 要 呈 味 物 质, 它 是 增 进 酱 油 口 味 的 有 效 成 份, 与 酱 油 的 原 料 和 酿 造 工 艺 有 关 酱 油 中 有 机 酸 种 类 及 含 量 多 少 直 接 影 响 它 的 品 质 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2 个 ) (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2350 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2420 紫 外 可 见 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 分 离 柱 :GL C610H S 7.8mm I.D.*300mm 保 护 柱 :SMASH Acids G 4.6mm I.D.*10mm 流 速 :0.5mL/min 柱 温 :60 波 长 :440 nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 :3mmol/LHClO 4 3 标 样 与 试 剂 标 样 :1) 磷 酸 2) 柠 檬 酸 3) 酒 石 酸 4) 苹 果 酸 5) 丁 二 酸 6) 乳 酸 7) 蚁 酸 8) 醋 酸 9) 焦 谷 氨 酸 10) 丙 酸 11) 异 丁 酸 12) 正 丁 酸 13) 异 戊 酸 14) 正 戊 酸 反 应 试 剂 1:0.1 溴 百 里 酚 蓝 (BTB:C 27 H 28 Br 2 O 5 S=624.39) 15mMNa 2 HPO 4 4 实 验 结 果 图 1 5μL 酱 油 色 谱 图 说 明 : 酱 油 用 纯 水 稀 释 10 倍, 过 0.45μm 滤 膜, 然 后 进 样 实 验 系 统 图 参 考 LC , 与 其 同 42

46 LC 白 酒 中 有 机 酸 分 析 有 机 酸 本 身 具 有 香 气, 是 呈 味 物 质, 在 酒 中 还 起 到 调 味 作 用, 因 此 只 要 含 量 及 比 例 适 当, 饮 后 会 感 到 清 爽 利 口 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2 个 ) (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2350 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2420 紫 外 可 见 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 分 离 柱 :GL C610H S 7.8mm I.D.*300mm 保 护 柱 :SMASH Acids G 4.6mm I.D.*10mm 流 速 :0.5mL/min 柱 温 :60 波 长 :440 nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 :3mmol/LHClO 4 3 标 样 与 试 剂 标 样 :1) 磷 酸 2) 柠 檬 酸 3) 酒 石 酸 4) 苹 果 酸 5) 丁 二 酸 6) 乳 酸 7) 蚁 酸 8) 醋 酸 9) 焦 谷 氨 酸 10) 丙 酸 11) 异 丁 酸 12) 正 丁 酸 13) 异 戊 酸 14) 正 戊 酸 反 应 试 剂 1:0.1 溴 百 里 酚 蓝 (BTB:C 27 H 28 Br 2 O 5 S=624.39) 4 实 验 结 果 15mMNa 2 HPO 4 酒 石 酸 苹 果 酸 柠 檬 酸 磷 酸 丁 二 酸 乳 酸 醋 酸 焦 谷 氨 酸 图 1 5μL 白 酒 色 谱 图 说 明 : 白 酒 用 纯 水 稀 释 10 倍, 过 0.45μm 滤 膜, 然 后 进 样 实 验 系 统 图 参 考 LC , 与 其 同 43

47 LC 功 能 饮 料 中 有 机 酸 分 析 功 能 饮 料 中 含 有 多 种 有 机 酸, 这 些 有 机 酸 参 与 人 体 的 新 陈 代 谢, 在 这 个 生 物 反 应 过 程 中 给 人 体 提 供 能 量, 还 能 调 节 饮 料 的 味 道 口 感 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2 个 ) (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2350 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2420 紫 外 可 见 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 分 离 柱 :GL C610H S 7.8mm I.D.*300mm 保 护 柱 :SMASH Acids G 4.6mm I.D.*10mm 流 速 :0.5mL/min 柱 温 :60 波 长 :440 nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 :3mmol/LHClO 4 3 标 样 与 试 剂 标 样 :1) 磷 酸 2) 柠 檬 酸 3) 酒 石 酸 4) 苹 果 酸 5) 丁 二 酸 6) 乳 酸 7) 蚁 酸 8) 醋 酸 9) 焦 谷 氨 酸 10) 丙 酸 11) 异 丁 酸 12) 正 丁 酸 13) 异 戊 酸 14) 正 戊 酸 反 应 试 剂 1:0.1 溴 百 里 酚 蓝 (BTB:C 27 H 28 Br 2 O 5 S=624.39) 4 实 验 结 果 15mMNa 2 HPO 4 柠 檬 酸 乳 酸 图 1 5μL 功 能 饮 料 色 谱 图 说 明 : 市 售 功 能 饮 料 用 纯 水 稀 释 1 倍, 过 0.45μm 滤 膜, 然 后 进 样 实 验 系 统 图 参 考 LC , 与 其 同 44

48 LC 磷 酸 苯 肼 柱 后 衍 生 法 分 析 糖 糖 是 存 在 于 所 有 生 物 体 中 的 一 类 独 特 物 质, 是 自 然 界 广 泛 生 成 的 一 类 有 机 化 合 物, 是 我 们 身 体 的 主 要 能 源 人 体 组 成 的 要 素, 同 时 也 是 参 与 多 种 生 理 功 能 的 重 要 物 质, 在 我 们 人 体 中 起 着 非 常 巨 大 的 作 用 因 此, 糖 类 的 分 析 是 生 理 学 领 域 食 品 领 域 中 的 基 本 部 分 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Asahipack NH2P mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 反 应 试 剂 流 速 :0.4 ml/min 反 应 单 元 温 度 :150 柱 温 :40 荧 光 : 激 发 :330nm, 发 射 :470nm 进 样 量 :10μL 自 动 取 样 清 洗 器 : 油 溶 性 顺 滑 保 湿 剂 流 动 相 :(A)0.5%H 3 PO 4 :10%H2O:90%CH 3 CN (B)0.5%H 3 PO 4 :25%H2O:75%CH 3 CN (C)0.5%H 3 PO 4 :40%H2O:60%CH 3 CN 时 间 (min) A(%) B(%) C(%) 标 样 与 试 剂 每 个 标 准 为 1000mg/L:1) 鼠 李 糖 2) 树 胶 醛 糖 3) 山 梨 糖 4) 果 糖 5) 甘 露 糖 6) 葡 萄 糖 7) 半 乳 糖 8) 蔗 糖 9) 麦 芽 糖 10) 乳 糖 11) 蜜 二 糖 12) 蜜 三 糖 13) 水 苏 四 糖 45

49 LC 反 应 试 剂 : 乙 酸 180 ml 苯 肼 6 ml 磷 酸 220mL 乙 酸 加 苯 肼 溶 解, 然 后 与 磷 酸 混 合 4 系 统 结 构 5 实 验 结 果 图 1 系 统 结 构 图 图 2 10μL 1000mg/L 混 合 标 样 色 谱 图 46

50 LC 磷 酸 苯 肼 柱 后 衍 生 法 分 析 草 莓 中 糖 糖 是 存 在 于 所 有 生 物 体 中 的 一 类 独 特 物 质, 是 自 然 界 广 泛 生 成 的 一 类 有 机 化 合 物, 是 我 们 身 体 的 主 要 能 源 人 体 组 成 的 要 素, 同 时 也 是 参 与 多 种 生 理 功 能 的 重 要 物 质, 在 我 们 人 体 中 起 着 非 常 巨 大 的 作 用 因 此, 糖 类 的 分 析 是 生 理 学 领 域 食 品 领 域 中 的 基 本 部 分 本 文 建 立 了 草 莓 中 糖 的 测 定 方 法 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Asahipack NH2P 50 4E 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :1.0mL/min 反 应 试 剂 流 速 :0.4 ml/min 反 应 单 元 温 度 :150 柱 温 :40 荧 光 : 激 发 :330nm, 发 射 :470nm 进 样 量 :10μL 自 动 取 样 清 洗 器 : 油 溶 性 顺 滑 保 湿 剂 流 动 相 :(A)0.5%H 3 PO 4 :10%H2O:90%CH 3 CN (B)0.5%H 3 PO 4 :25%H2O:75%CH 3 CN (C)0.5%H 3 PO 4 :40%H2O:60%CH 3 CN 时 间 (min) A(%) B(%) C(%) 标 样 与 试 剂 每 个 标 准 为 1000mg/L:1) 鼠 李 糖 2) 树 胶 醛 糖 3) 山 梨 糖 4) 果 糖 5) 甘 露 糖 6) 葡 萄 糖 7) 半 乳 糖 8) 蔗 糖 9) 麦 芽 糖 10) 乳 糖 11) 蜜 二 糖 12) 蜜 三 糖 13) 水 苏 四 糖 47

51 LC 反 应 试 剂 : 乙 酸 180 ml 苯 肼 6 ml 磷 酸 220mL 乙 酸 加 苯 肼 溶 解, 然 后 与 磷 酸 混 合 4 样 品 制 备 称 草 莓 酱 1 克, 加 入 50% 甲 醇 30mL, 超 声 清 洗 器 超 声 震 荡, 用 50% 甲 醇 定 容 至 50mL 3000rpm 离 心 分 离 10min, 取 上 清 液, 加 乙 腈, 上 清 液 与 乙 腈 1:1 稀 释, 过 0.45μm 滤 膜 过 滤, 进 10μL 样 上 机 分 析 5 实 验 结 果 图 1 10μL 草 莓 酱 色 谱 图 说 明 : 系 统 结 构 及 标 样 色 谱 图 与 LC 相 同 48

52 LC 氧 四 环 素 和 四 环 素 测 定 四 环 素 类 是 由 链 霉 菌 产 生 或 经 半 合 成 制 取 的 一 类 碱 性 广 谱 抗 生 素, 国 家 规 定 动 物 性 食 品 中 兽 药 最 高 残 留 限 量 对 其 有 限 制 氧 四 环 素 :C 22 H 24 N 2 O 9 = 四 环 素 :C22H24N2O8= 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2480 荧 光 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*150mm(5μm) 流 速 :1.2mL/min 柱 温 :40 荧 光 : 激 发 :380nm, 发 射 :520nm 进 样 量 :50μL 流 动 相 : 咪 唑 缓 冲 液 (A): 甲 醇 (B)=17:3 咪 唑 缓 冲 液 :68.08 克 咪 唑 0.37 克 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 克 醋 酸 镁 用 水 溶 解 成 800mL, 溶 液 加 乙 酸 调 节 ph=7.2, 用 水 定 容 至 1000mL 3 实 验 结 果 氧 四 环 素 四 环 素 图 1 50μL 混 合 标 样 色 谱 图 ( 每 种 浓 度 为 10μg/L) 49

53 LC 图 2 氧 四 环 素 的 标 准 曲 线 图 图 3 四 环 素 的 标 准 曲 线 图 50

54 LC 氯 四 环 素 测 定 氯 四 环 素 为 一 种 抗 生 素 类 药 物, 国 家 规 定, 动 物 饲 料 及 食 品 中 氯 四 环 素 残 留 有 限 量 规 定 氯 四 环 素 :C 22 H 23 ClN 2 O 8 = 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2480 荧 光 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*150mm(5μm) 流 速 :1.2mL/min 柱 温 :40 荧 光 : 激 发 :380nm, 发 射 :520nm 进 样 量 :50μL 流 动 相 : 咪 唑 缓 冲 液 (A): 甲 醇 (B)=3:1 咪 唑 缓 冲 液 :68.08 克 咪 唑 0.37 克 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 克 醋 酸 镁 用 水 溶 解 成 800mL, 溶 液 加 乙 酸 调 节 ph=7.2, 用 水 定 容 至 1000mL 3 实 验 结 果 氯 四 环 素 图 1 50μL 标 样 色 谱 图 ( 浓 度 为 10μg/L) 51

55 LC 图 2 氯 四 环 素 的 标 准 曲 线 图 说 明 : 氯 四 环 素 标 准 曲 线 浓 度 范 围 为 0~100μg/L 52

56 LC 阿 替 洛 尔 测 定 阿 替 洛 尔, 又 名 氨 酰 心 安, 为 心 脏 选 择 性 β- 受 体 阻 断 剂, 一 般 用 于 窦 性 心 动 过 速 及 早 搏 等, 也 可 用 于 高 血 压 心 绞 痛 及 青 光 眼 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 275nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : 磷 酸 缓 冲 盐 溶 液 ( 取 磷 酸 二 氢 钾 6.8 克, 加 水 溶 解 并 稀 释 至 1000ml, 用 磷 酸 调 节 PH 至 3.0)700ml 加 入 甲 醇 300ml 与 辛 烷 磺 酸 钠 1.30g 3 实 验 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 图 2 阿 替 洛 尔 的 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X+0.16 R=

57 LC 阿 昔 洛 韦 测 定 阿 昔 洛 韦, 化 学 名 9 (2 羟 乙 氧 甲 基 ) 鸟 嘌 呤, 用 于 治 疗 带 状 疱 疹 病 毒 单 纯 疱 疹 病 毒 引 起 的 皮 肤 和 粘 膜 感 染 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : 甲 醇 : 水 = 10:90 3 实 验 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 图 2 阿 昔 洛 韦 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X R=

58 LC 丹 参 测 定 丹 参 是 一 味 常 用 中 药, 别 名 红 根 紫 丹 参 血 参 根 等, 最 早 记 载 于 神 农 本 草 经, 有 活 血 祛 瘀 安 神 宁 心 的 作 用 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 270nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 : 甲 醇 : 水 = 75:25 3 实 验 结 果 图 1 5μL 标 样 色 谱 图 图 2 丹 参 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X+0.03 R=

59 LC 对 乙 酰 基 酚 测 定 对 乙 酰 基 酚, 解 热 镇 痛 药, 用 于 普 通 感 冒 或 流 行 性 感 冒 引 起 的 发 热, 也 用 于 缓 解 中 度 疼 痛 如 头 痛 关 节 痛 偏 头 痛 牙 痛 肌 肉 痛 神 经 痛 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 : 磷 酸 缓 冲 盐 (ph4.5): 甲 醇 = 80:20 磷 酸 缓 冲 盐 (PH4.5): Na 2 PO 4.2H 2 O 15.04g, Na 2 HPO g, 加 水 至 1000ml, 调 节 PH4.5 3 实 验 结 果 图 1 5μL 标 样 色 谱 图 图 2 对 乙 酰 基 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X R=

60 LC 法 莫 替 丁 测 定 法 莫 替 丁, 别 名 高 舒 达 保 维 坚 保 胃 健 噻 唑 咪 胺 信 法 丁, 为 组 胺 H2 受 体 阻 滞 药, 对 胃 酸 分 泌 具 有 明 显 的 抑 制 作 用 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : 庚 烷 磺 酸 钠 溶 液 : 乙 腈 : 甲 醇 = 25:6:1 庚 烷 磺 酸 钠 溶 液 : 庚 烷 磺 酸 钠 2.0g 溶 于 900ml 水 中, 用 醋 酸 调 节 PH 至 3.9, 加 水 至 1000ml 3 实 验 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 图 2 法 莫 替 丁 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X 0.04 R=

61 LC 葛 根 素 测 定 葛 根 素, 豆 科 植 物 野 葛 的 块 根 提 取 物, 因 其 良 好 的 舒 张 血 管 作 用, 被 广 泛 应 用 于 高 血 压 冠 心 病 心 绞 痛 急 性 心 肌 梗 死 多 种 心 律 失 常 胰 岛 素 抵 抗 及 高 血 脂 等 病 的 治 疗 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 250nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : 甲 醇 : 0.1% 枸 橼 酸 钠 溶 液 = 25:75 3 实 验 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 图 2 葛 根 素 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X 0.06 R=

62 LC 灰 黄 霉 素 测 定 灰 黄 霉 素, 抗 生 素 类 药, 适 用 于 各 种 癣 病 治 疗 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 :0.05mol/L 磷 酸 二 氢 钾 : 乙 腈 : 甲 醇 = 57:38:5( 磷 酸 调 节 至 PH3.7) 3 实 验 结 果 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 图 2 灰 黄 霉 素 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X 0.03 R=

63 LC 克 拉 霉 素 测 定 克 拉 霉 素, 别 名 甲 红 霉 素, 充 红 霉 素, 抗 菌 谱 与 红 霉 素 相 似, 对 部 分 革 兰 阴 性 菌 链 球 菌 属 支 原 体 及 衣 原 体 等 均 有 抗 菌 活 性 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :45 波 长 : 210nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : 磷 酸 缓 冲 盐 : 乙 腈 = 60:40 磷 酸 缓 冲 盐 溶 液 : 磷 酸 二 氢 钾 9.11 克 加 水 溶 解 稀 至 1000ml, 加 三 乙 胺 2ml, 用 磷 酸 调 节 PH 至 实 验 结 果 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 图 2 克 拉 霉 素 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X R=

64 LC 尼 莫 地 平 测 定 尼 莫 地 平, 别 名 尼 膜 同 尼 莫 地 平, 周 围 血 管 扩 张 药 降 血 压 药 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 235nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : 甲 醇 : 乙 腈 : 水 = 35:38:27 3 实 验 结 果 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 图 2 尼 莫 地 平 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= R=

65 LC 头 孢 拉 定 测 定 头 孢 拉 定, 别 名 头 孢 菌 素 Ⅵ 号 头 孢 雷 定, 为 第 一 代 半 合 成 头 孢 菌 素, 抗 菌 活 性 与 头 孢 氨 苄 相 仿, 主 要 用 于 呼 吸 道 泌 尿 道 皮 肤 和 软 组 织 等 的 感 染 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :0.8mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : 水 : 甲 醇 : 3.86% 醋 酸 钠 : 4% 醋 酸 = 1564:400:30:6 3 实 验 结 果 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 图 2 头 孢 拉 定 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X R=

66 LC 头 孢 曲 松 纳 测 定 头 孢 曲 松 钠, 别 名 头 孢 氨 噻 三 嗪 头 孢 三 嗪 菌 必 治, 第 三 代 头 孢 菌 素 类 抗 生 素, 临 床 主 要 用 于 敏 感 菌 感 染 的 脑 膜 炎 肺 炎 皮 肤 软 组 织 感 染 腹 膜 炎 泌 尿 系 统 感 染 淋 病 肝 胆 感 染 外 科 创 伤, 败 血 症 及 生 殖 器 感 染 等 目 前 已 作 为 治 疗 淋 病 的 第 一 线 药 物 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :0.8mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 :0.02mol/l 正 辛 胺 : 乙 腈 = 73:27( 磷 酸 调 节 PH 至 6.5) 3 实 验 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 图 2 头 孢 曲 松 纳 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X+0.02 R=

67 LC 盐 酸 氟 桂 利 嗪 测 定 盐 酸 氟 桂 利 嗪, 别 名 孚 瑞 尔 西 比 灵, 哌 嗪 类 钙 拮 抗 药, 用 于 脑 动 脉 硬 化, 脑 血 栓 形 成, 脑 栓 塞, 高 血 压 所 致 的 脑 循 环 障 碍, 脑 出 血, 蛛 网 膜 所 致 的 脑 循 环 障 碍 等 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 254nm 进 样 量 :20μL 流 动 相 : 甲 醇 : 磷 酸 盐 缓 冲 液 = 75:25 磷 酸 盐 缓 冲 液 : 磷 酸 二 氢 钾 1.36g 加 水 稀 释 到 1000ml, 加 4ml 三 乙 胺, 用 磷 酸 调 节 PH 至 实 验 结 果 图 1 20μL 标 样 色 谱 图 图 2 盐 酸 氟 桂 利 嗪 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X 0.03 R=

68 LC 盐 酸 克 林 霉 素 测 定 盐 酸 克 林 霉 素, 别 名 : 氯 林 霉 素 林 大 霉 素, 抗 菌 作 用 强, 临 床 主 要 用 于 骨 髓 炎 厌 气 菌 引 起 的 感 染 呼 吸 系 统 感 染 胆 道 感 染 中 耳 炎 皮 肤 软 组 织 感 染 及 败 血 症 等 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 214nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : 磷 酸 二 氢 胺 : 甲 醇 = 210:300 磷 酸 二 氢 铵 2.88g, 加 水 溶 解 稀 释 至 1000ml, 用 80% 磷 酸 调 节 PH 至 实 验 结 果 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 图 2 盐 酸 克 林 霉 素 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X R=

69 LC 盐 酸 纳 络 酮 测 定 盐 酸 纳 洛 酮, 吗 啡 拮 抗 药, 用 于 吗 啡 类 复 合 麻 醉 药 术 后, 解 除 呼 吸 抑 制 及 催 醒 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2450 二 级 管 阵 列 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :apollo C18 4.6mm I.D.*250mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :35 波 长 : 229nm 进 样 量 :50μL 流 动 相 : 辛 烷 磺 酸 钠 溶 液 : 甲 醇 : 磷 酸 = 580:420:1 辛 烷 磺 酸 钠 溶 液 :1.36g 1 辛 烷 磺 酸 钠, 1.0g 氯 化 钠 加 水 580ml 溶 解 3 实 验 结 果 图 1 50μL 标 样 色 谱 图 图 2 盐 酸 纳 络 酮 标 准 曲 线 图 说 明 : 进 样 量 : 0.1μL 0.5μL 1μL 5μL 10μL 25μL 50μL Y= X 0.02 R=

70 LC 高 效 液 相 色 谱 测 定 醋 氯 芬 酸 醋 氯 芬 酸 (Aceclofenac), 化 学 名 称 2 [(2,6 二 氯 苯 基 ) 胺 基 苯 基 ] 乙 酰 氧 基 乙 酸, 是 一 种 新 型 的 强 效 非 甾 体 抗 炎 剂, 其 作 用 机 理 主 要 是 抑 制 炎 痛 部 位 前 列 腺 素 (PGE2) 的 生 物 合 成, 用 于 类 风 湿 性 关 节 炎 和 骨 关 节 炎 的 临 床 治 疗 与 同 类 药 物 相 比, 该 药 具 有 治 疗 指 数 好 胃 肠 道 副 作 用 低 耐 受 性 好 生 物 半 衰 期 长 等 特 点 其 几 乎 不 溶 于 水, 溶 于 乙 醇, 极 易 溶 于 丙 酮 1 仪 器 (1) Hitachi L-2130 输 液 泵 (2) Hitachi L-2300 柱 温 箱 (3) Hitachi L-2450 二 极 管 阵 列 检 测 器 (4) 组 织 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 色 谱 柱 :Alltima HP C18,5µm,4.6mm 150mm 流 速 :1ml/min 柱 温 :40 检 测 波 长 :275nm 进 样 量 :10µl 流 动 相 : (A):1.12g/L 磷 酸 用 42g/L 氢 氧 化 钠 调 ph 至 7.0 (B): 水 : 乙 腈 =1:9 表 1 梯 度 程 序 时 间 (min) 流 动 相 A (%) 流 动 相 B (%) 样 品 制 备 精 密 称 取 醋 氯 芬 酸 样 品 50.0mg, 用 流 动 相 A: 流 动 相 B=3:7 溶 解 并 稀 释 至 25.0 ml 摇 匀, 过 滤, 取 滤 液 作 为 供 试 品 溶 液 4 实 验 结 果 取 空 白 和 供 试 品 溶 液 进 样, 按 照 欧 洲 药 典 方 法 分 析 得 到 图 1 和 图 2, 供 试 品 溶 液 分 析 过 后, 随 即 进 一 针 空 白, 以 欧 洲 药 典 方 法 分 析 得 到 图 3 67

71 LC mau -2-2 mau Minutes 图 1: 醋 氯 芬 酸 空 白 图 谱 mau -2-2 mau Minutes 图 2: 醋 氯 芬 酸 图 谱 mau -2-2 mau Minutes 图 3: 醋 氯 芬 酸 残 留 图 谱 从 结 果 中 可 以 看 出, 醋 氯 芬 酸 在 色 谱 系 统 中 残 留 比 较 厉 害, 尤 其 是 杂 质 部 分, 在 系 统 中 较 易 残 留, 尤 其 是 在 进 样 口, 造 成 后 续 进 样 分 析 结 果 中 杂 质 含 量 较 高, 重 复 性 不 好, 对 样 品 重 复 性 影 响 很 大, 所 以 建 议 每 次 进 样 后, 用 对 样 品 及 杂 质 溶 解 性 更 好 的 乙 醇 清 洗 进 样 口, 然 后 再 次 进 样, 以 便 得 到 不 受 残 留 干 扰 重 复 性 较 好 的 结 果 68

72 LC 柱 后 衍 生 法 分 析 伏 格 列 波 糖 伏 格 列 波 糖 用 来 治 疗 糖 尿 病, 其 控 制 消 化 酶 的 功 能, 消 化 酶 分 解 从 食 物 如 米 饭 面 包 和 糖 中 碳 水 化 合 物, 伏 格 列 波 糖 通 过 延 迟 肠 道 中 糖 类 分 解 力 和 吸 收 力, 抑 制 饭 后 血 液 中 葡 萄 糖 水 平 激 增 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 7485 荧 光 检 测 器 (5) Hitachi L 5050 反 应 单 元 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Asahipak NH2P 50 4E 4.6mm I.D.*250mm 流 速 :0.8mL/min 柱 温 :25 荧 光 检 测 器 : 激 发 波 长 :350nm; 发 射 波 长 :430nm 进 样 量 :50μL 流 动 相 : 乙 腈 : 磷 酸 钠 缓 冲 液 (ph=6.5)=2:1 3 试 剂 反 应 试 剂 :6.25 克 牛 磺 酸 (H 2 NCH 2 CH 2 SO 3 H) 2.56 克 碘 酸 钠 (NaIO 4 ) 用 水 定 容 至 1000mL 4 系 统 结 构 图 1 柱 后 衍 生 法 分 析 伏 格 列 波 糖 系 统 结 构 图 69

73 LC 实 验 结 果 图 2 50μL 标 样 色 谱 图 (1.85mg/50mL) 图 3 标 准 曲 线 图 70

74 根 据 ABD-F 前 标 法 测 定 高 半 胱 氨 酸 Analysis of Homocysteine by ABD-F Pre-Label Method 高 半 胱 氨 酸 是 氨 基 酸 的 一 种, 其 是 动 脉 硬 化 症 的 危 险 因 子 使 用 ABD-F 荧 光 标 识 剂 与 硫 醇 基 反 应, 高 灵 敏 地 测 定 了 高 半 胱 氨 酸 标 样 高 半 胱 氨 酸 的 工 作 曲 线 ( 浓 度 是 1~100 pmol/10 μl) 高 半 胱 氨 酸 样 品 10 μl 标 样 (100 pmol/10 µl) * 压 力 柱 填 料 Hitachi-Inertsil ODS-3(5µm) 温 度 40 柱 尺 寸 4.6 mm ID 150 mm(p/n: ) 分 离 方 法 分 离 吸 附 流 动 相 梯 度 **, 检 测 器 荧 光 Ex 390 nm, Em 510 nm (A) 0.15 mol/l 磷 酸 缓 冲 液 / 乙 腈 = 96 / 4 (B) 0.15 mol/l 磷 酸 缓 冲 液 / 乙 腈 = 85 / 15 仪 器 L-2130 ( 泵 ), L-2200 ( 自 动 进 样 器 ), 流 速 1.0 ml/min L-2300 ( 柱 温 箱 ), L-2485 ( 荧 光 检 测 器 ) 注 意 * 标 准 样 品 的 前 处 理 法 是 参 照 LC 关 键 词 生 物 化 学, 高 半 胱 氨 酸, 氨 基 酸, 前 标 法, 柱 前 衍 生 反 应, 荧 光 测 定 法, 生 物 化 学,L-2000, 分 离 吸 附 高 效 液 相 分 析 仪 HPLC 编 号. LC

75 ABD-F 前 标 法 测 定 高 半 胱 氨 酸 Analysis of Homocysteine by ABD-F Pre-Label Method 前 处 理 方 法 标 准 溶 液 称 量 高 半 胱 氨 酸, 溶 于 0.02 mol/l 的 盐 酸 溶 液, 使 其 最 终 浓 度 为 1.0 nmol/10μl ( 标 准 原 液 ) 用 含 2 mmol/l EDTA / 2Na 的 0.1 mol/l 硼 酸 缓 冲 液 (ph 8.0) 将 标 准 原 液 稀 释 10 倍 (STD_100 pmol) 得 到 100 pmol 的 标 准 目 标 稀 释 液 衍 生 反 应 标 准 溶 液 (100 pmol/10μl) 0.25 ml 含 10 mmol/l ABD-F 的 0.1 mol/l 硼 酸 缓 冲 液 (ph 8.0) 0.25 ml 搅 拌 加 热 (50 温 浴,5 min) 冰 冷 却 0.1 mol/l HCI 0.15 ml 搅 拌 样 品 进 样 * 参 考 文 献 1) T.Toyooka, S.Uchiyama and Y.Saito. Sumuitaneous Detemination of Thiols and Disulfides by High-performance Liquid Chromatography with Fluoescence Detection, Anal. Chim.Acta ) DOJINDO 试 剂 目 录,2006/2007,P238 高 效 液 相 分 析 仪 HPLC 编 号 LC

76 生 理 体 液 分 析 法 测 定 S- 羧 甲 基 -L- 半 胱 氨 酸 (L-2000,NIN 法 ) Analysis of S - Carboxymethyl -L- cysteine using The Method for Physiological Fluids. (L-2000, NIN Method) S- 羧 甲 基 -L- 半 胱 氨 酸, 别 名 L- 羧 甲 司 坦 (L-carbocisteine), 是 氨 基 酸 的 一 种 使 用 生 理 体 液 分 析 法, 介 绍 该 氨 基 酸 与 其 他 的 氨 基 酸 的 分 离 测 定 蛋 白 质 中 的 半 胱 氨 酸 时, 其 被 还 原 为 S- 羧 甲 基 -L- 半 胱 氨 酸 后 被 定 量 其 亦 是 化 痰 药 的 有 效 成 分 样 品 10 µl 标 准 溶 液 * 压 力 柱 填 料 #2622PF [HITACHI] 温 度 35 流 动 相 L-8500 PF-Kit (A) (B) (C) ** 梯 度 *** 分 离 方 法 离 子 交 换 柱 尺 寸 检 测 器 VIS 570 nm 分 离 柱 4.6 mm ID 60 mm [#2622PF] 仪 器 除 氨 柱 4.6 mm ID 60 mm [#2650L] L-2130( 泵 ) 2, L-2200( 自 动 进 样 器 ), 流 速 P1 : 0.35 ml/min, P2 : 0.25 ml/min L-2300( 柱 温 箱 ), L-2420(UV-VIS 检 测 器 ), L-5050( 反 应 单 元 ), 655A51( 试 剂 单 元 ) 注 意 反 应 液 = 茚 三 酮 试 剂 R1 / R2 = 1 / 1, 反 应 液 流 量 = 0.25 ml/min, 反 应 单 元 温 度 = 130 梯 度 程 序, 系 统 构 成, 流 程 图 是 参 照 LC * 标 准 样 品 的 浓 度 是 参 照 LC 关 键 词 生 物 化 学, 氨 基 酸,S- 羧 甲 基 -L- 半 胱 氨 酸, 生 理 体 液 分 析 法, 茚 三 酮 法, UV-VIS 光 度 计, 食 品,SCMC,L-2000, 离 子 交 换 高 效 液 相 分 析 仪 HPLC 编 号 LC

77 生 理 体 液 法 分 析 氨 基 酸 系 统 System of Amino Acid Analysis using The Method for Physiological Fluids 高 效 液 相 分 析 仪 HPLC 编 号 LC

78 氨 基 酸 成 分 名 一 览 表 Amino Acid Components Analyzed 氨 基 酸 成 分 名 一 览 表 ( 浓 度 单 位 是 mmol/20 µl) 高 效 液 相 分 析 仪 HPLC 编 号 Sheet LC No. LC

79 LC 胰 岛 素 分 析 胰 岛 素 是 一 种 蛋 白 质 类 激 素, 主 要 作 用 在 肝 脏 肌 肉 及 脂 肪 组 织, 控 制 着 糖 蛋 白 质 脂 肪 三 大 营 养 物 质 的 代 谢 和 贮 存, 制 剂 用 于 治 疗 糖 尿 病 消 耗 性 疾 病 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4)Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil WP300 C8 4.6mm I.D.*150mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :37 波 长 :214nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : (A)0.05% 三 氟 乙 酸 / 水 (B)0.05% 三 氟 乙 酸 / 乙 腈 表 1 流 动 相 梯 度 程 序 时 间 (min) A(%) B(%) 实 验 结 果 图 1 10μL 标 样 色 谱 图 (0.38mg/mL) 图 2 10μL 空 白 ( 纯 水 ) 色 谱 图 76

80 LC 牛 血 清 蛋 白 和 胰 蛋 白 消 化 液 分 析 牛 血 清 白 蛋 白 就 是 我 们 常 说 的 BSA, 是 血 液 的 主 要 成 分 1 仪 器 (1)Hitachi L 2130 输 液 泵 (3)Hitachi L 2300 柱 温 箱 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (4)Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 2 色 谱 条 件 柱 :Hitachi Inertsil WP300 C8 4.6mm I.D.*150mm 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :37 波 长 :214nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : (A)0.05% 三 氟 乙 酸 / 水 (B)0.05% 三 氟 乙 酸 / 乙 腈 表 1 流 动 相 梯 度 程 序 时 间 (min) A(%) B(%) 实 验 结 果 图 1 10μL 含 胰 蛋 白 的 牛 血 清 蛋 白 5.7mg/mL 消 化 液 色 谱 图 图 2 10μL 空 白 ( 纯 水 ) 色 谱 图 77

81 LC 水 溶 性 维 生 素 标 样 测 定 维 生 素 又 名 维 他 命, 是 维 持 人 体 生 命 活 动 必 需 的 一 类 有 机 物 质, 但 大 多 数 的 维 生 素 机 体 不 能 合 成 或 合 成 量 不 足, 必 须 经 常 通 过 食 物 中 获 得 1 仪 器 (1)Hitachi L 2130 输 液 泵 (3)Hitachi L 2300 柱 温 箱 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (4)Hitachi L 2455 二 级 管 阵 列 检 测 器 2 色 谱 条 件 柱 : Hitachi Inertsil ODS 3 4.6mm I.D.*150mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 波 长 :210nm 245nm 260nm 290nm 360nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : (A)5mmol/L1 正 己 烷 钠 /0.2% 磷 酸 (B) 乙 腈 表 1 流 动 相 梯 度 程 序 时 间 (min) A(%) B(%) 标 样 1) 烟 酸 5) 叶 酸, 维 生 素 B 2) 泛 酸 钙 6) 维 生 素 B2, 核 黄 素 3) 维 生 素 B6 7) 维 生 素 B12 4) 维 生 素 B1 标 样 储 备 液 浓 度 为 1000mg/L, 烟 酸 维 生 素 B1 维 生 素 B2 维 生 素 B12 用 纯 水 稀 释, 泛 酸 钙 和 维 生 素 B6 用 乙 醇 稀 释, 叶 酸 用 0.01mol/L 氢 氧 化 钠 稀 释, 维 生 素 B2 用 0.05 mol/l 氢 氧 化 钠 稀 释, 标 样 储 备 液 浓 度 为 1000mg/L 标 准 使 用 液 用 纯 水 稀 释 储 备 液 得 到 4 实 验 结 果 4.1 实 验 图 图 1 10μL 混 合 标 样 色 谱 图 ( 每 个 标 样 50mg/L) 78

82 LC 标 准 曲 线 图 2 10μL 混 合 标 样 等 高 线 图 图 3 烟 酸 标 准 曲 线 图 4 叶 酸 标 准 曲 线 图 5 泛 酸 钙 标 准 曲 线 图 6 维 生 素 B2 标 准 曲 线 图 7 维 生 素 B6 标 准 曲 线 图 8 维 生 素 B12 标 准 曲 线 图 9 维 生 素 B1 标 准 曲 线 79

83 LC 光 谱 图 图 10 烟 酸 光 谱 图 图 11 叶 酸 光 谱 图 图 12 泛 酸 钙 光 谱 图 图 13 维 生 素 B2 光 谱 图 图 14 维 生 素 B6 光 谱 图 图 15 维 生 素 B12 光 谱 图 图 16 维 生 素 B1 光 谱 图 80

84 LC ADAM 衍 生 脂 肪 酸 分 析 DHA 对 于 大 脑 和 神 经 组 织 形 成 及 保 持 功 能 必 不 可 少 的, 其 大 量 存 在 于 人 体 大 脑 细 胞 中 EPA 对 于 缓 和 过 敏 性 症 状 有 用, 并 可 治 疗 比 如 动 脉 硬 化 脑 震 荡 和 高 血 压 等 疾 病 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2485 荧 光 检 测 器 (5) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 : Inertsil ODS P 4.6mm I.D.*150mm(5μm) 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :30 荧 光 : 激 发 波 长 :365nm 发 射 波 长 :412nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : (A) 乙 腈 / 水 = 98 / 2 (B) 乙 腈 / 乙 酸 乙 酯 = 90 / 10 表 1 流 动 相 梯 度 程 序 时 间 (min) A(%) B(%) 标 样 及 试 剂 1) EPA 二 十 碳 五 烯 酸 C 20 H 30 O 2 = ) DHA 二 十 二 碳 六 烯 酸 C 22 H 32 O 2 = ) 亚 油 酸 C 18 H 32 O 2 =

85 LC ) 十 四 烷 酸 C 14 H 28 O 2 = ) 十 八 烯 酸 C 18 H 34 O 2 = ) 十 六 酸 C 16 H 32 O 2 = ) 十 八 酸 C 18 H 36 O 2 = ) ADAM:9 蒽 亚 甲 基 氮, 溶 解 于 乙 酸 乙 酯 中 配 成 0.1% 的 溶 液 4 样 品 制 备 样 品 用 乙 酸 乙 酯 溶 解 成 10mg/L, 取 0.5mL, 加 入 0.1%ADAM 试 剂 0.5mL, 室 温 下 反 应 1 小 时, 加 入 乙 腈 1mL, 得 待 测 样 5 实 验 结 果 亚 油 酸 十 四 烷 酸 十 八 烯 酸 十 六 酸 十 八 酸 图 1 10μL 混 合 标 样 色 谱 图 ( 每 个 浓 度 为 2.5mg/L) 82

86 LC 尿 中 添 加 苦 杏 仁 酸 与 邻 间 对 甲 基 马 尿 酸 的 测 定 苦 杏 仁 酸, 俗 名 扁 桃 酸, 化 学 名 为 α 羟 基 苯 乙 酸, 是 尿 中 杀 菌 剂 ; 尿 中 甲 基 马 尿 酸 是 人 体 内 苯 甲 苯 和 二 甲 苯 的 代 谢 产 物, 用 于 评 价 人 体 接 触 这 些 苯 环 化 合 物 水 平 指 标 1 仪 器 (1)Hitachi L 2130 输 液 泵 (3)Hitachi L 2300 柱 温 箱 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (4)Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 2 色 谱 条 件 柱 : Develosil C30 UG 3 2.0mm I.D.*150mm 流 速 :0.15mL/min 柱 温 :40 波 长 :225nm 进 样 量 :5μL 流 动 相 : 乙 腈 : 水 : 乙 酸 =10:90: mmol/L 1 正 辛 基 磺 酸 钠 盐 4.2mmol/Lβ 环 糊 精 3 标 样 1) MA 苦 杏 仁 酸 10.0μg/mL 2) o MHA 邻 甲 基 马 尿 酸 10.1μg/mL 3) p MHA 间 甲 基 马 尿 酸 10.1μg/mL 4) m MHA 对 甲 基 马 尿 酸 10.0μg/mL 每 种 标 样 均 用 50% 甲 醇 水 溶 液 溶 解 4 样 品 制 备 取 0.5mL 尿 到 10mL 容 量 瓶 中, 加 入 苦 杏 仁 酸 邻 甲 基 马 尿 酸 间 甲 基 马 尿 酸 对 甲 基 马 尿 酸 各 0.5mL( 每 种 标 样 以 10 其 体 积 配 制 并 用 50% 甲 醇 水 溶 液 溶 解 ), 用 50% 甲 醇 水 溶 液 定 容 至 10mL,3000rpm 离 心 6min, 取 上 清 液 上 机 测 定 ( 加 标 尿 液 ) 5 实 验 结 果 图 1 5μL 加 标 尿 液 色 谱 图 83

87 LC 氰 化 物 及 卤 代 氰 化 物 分 析 氰 化 物 均 被 认 为 是 氢 氰 酸 化 合 物, 因 其 高 毒 性, 水 质 量 标 准 等 对 它 们 都 有 限 制 以 前 有 介 绍 过 用 HPLC 分 离 定 量 氰 化 物, 本 文 介 绍 采 用 小 尺 寸 柱 小 流 量 和 优 化 试 剂 以 更 高 的 灵 敏 度 和 更 短 的 时 间 分 析 氰 化 物 1 仪 器 (1) Hitachi L-7100(7110) 输 液 泵 (3 个 ) (2)Hitachi L-7200 自 动 进 样 器 (3)Hitachi L-7300 柱 温 箱 (2 个 ) (4)Hitachi L-7240 紫 外 可 见 检 测 器 (5)Hitachi D-7500 积 分 仪 (6) 组 织 器 2 色 谱 条 件 柱 : Hitachi gel 2618, 4.6mm I.D. * 100mm L 流 速 :0.4mL/min 柱 温 :40 波 长 :638nm 进 样 量 :50μL 流 动 相 :1mM H2SO4 试 剂 1:0.02M KH 2 PO 4,0.08 M NaH 2 PO 4,0.71mM 氯 胺 -T 试 剂 2:(1)1- 苯 基 -3- 甲 基 -5- 吡 唑 啉 酮 (2.5g)/NN-DMF:150mL ( 2) 4- 嘧 啶 钠 羧 酸 酯 (11.0g):850mL( 四 水 异 烟 酸 钠 : 定 量 分 析 氰 ) 试 剂 (1)30 ml+ 试 剂 (2)170 ml=200 ml* * 试 剂 (1) 和 (2) 最 后 浓 度 分 别 为 0.25% 和 50mM 试 剂 必 须 在 10 下 避 光 保 存 试 剂 在 20 天 内 使 用 完 3 系 统 结 构 及 流 路 框 图 图 1 系 统 结 构 图 84

88 LC 实 验 结 果 4.1 环 境 中 硫 化 氰 和 氰 离 子 测 定 特 点 1) 测 量 达 到 ppb 级, 适 用 于 工 业 废 水 和 环 境 水 分 析 2) 水 质 量 标 准 中 氰 化 物 规 定 为 10ppb, 其 1/10 的 量 也 可 以 测 出 3)6 分 钟 内 可 以 完 成 硫 氰 酸 离 子 和 氰 化 物 离 子 的 测 定 标 样 测 定 标 准 曲 线 图 2 50μL(1 ppb) 标 样 色 谱 图 图 3 硫 化 氰 标 准 曲 线 图 4 氰 标 准 曲 线 85

89 LC 环 境 中 氯 化 氰 的 测 定 标 样 的 测 定 图 5 1ppb 氯 化 氰 标 样 测 定 图 6 氯 化 氰 从 1 到 10ppb 的 标 准 曲 线 7 分 钟 内 完 成 氯 化 氰 的 测 定 环 境 中 实 际 样 品 的 测 定 图 7 加 1ppb 标 样 的 矿 泉 水 图 图 8 加 0.1ppb 硫 化 氰 和 氰 的 自 来 水 图 实 际 样 品 的 测 定 低 至 标 准 值 的 1/10; 氯 化 氰 的 洗 脱 依 靠 自 来 水 中 氯 的 浓 度 86

90 LC 二 硝 基 苯 腙 醛 8 种 化 合 物 测 定 甲 醛 及 其 他 醛 酮 类 物 质 是 目 前 人 们 愈 来 愈 重 视 的 空 气 污 染 物, 由 于 这 些 化 合 物 容 易 挥 发, 具 有 较 高 的 反 应 活 性, 不 易 保 存, 一 般 是 应 用 衍 生 法 进 行 采 样 分 析 近 年 来, 以 2,4 二 硝 基 苯 肼 (DNPH) 衍 生 /HPLC 分 离 分 析 法 收 集 和 分 析 大 气 中 的 醛 类 化 合 物, 得 到 了 广 泛 的 应 用 1 仪 器 (1)Hitachi L 2130 输 液 泵 (3)Hitachi L 2300 柱 温 箱 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (4)Hitachi L 2400 紫 外 检 测 器 2 色 谱 条 件 柱 : Hitachi Inertsil ODS 3 流 速 :1.0mL/min 柱 温 :40 波 长 :360nm 进 样 量 :10μL 流 动 相 : 乙 腈 / 水 =60/40 4.6mm I.D.*150mm(5μm) 3 标 样 1) 二 硝 基 苯 腙 甲 醛 2) 二 硝 基 苯 腙 乙 醛 3) 二 硝 基 苯 腙 丙 酮 醛 4) 二 硝 基 苯 腙 丙 醛 5) 二 硝 基 苯 腙 丁 醛 6) 二 硝 基 苯 腙 异 丁 醛 7) 二 硝 基 苯 腙 苯 甲 醛 8) 二 硝 基 苯 腙 正 戊 醛 4 实 验 室 与 新 建 办 公 室 中 二 硝 基 苯 腙 醛 样 品 制 备 空 气 臭 氧 净 化 器 捕 获 筒 吸 入 泵 2,4 二 硝 基 苯 腙 捕 获 筒 一 体 化 流 量 计 图 1 样 品 制 备 装 置 图 2,4 二 硝 基 苯 腙 臭 氧 净 化 器, 以 1L/min 流 速 捕 集 空 气 30min, 用 5mL 的 乙 腈 洗 脱, 用 乙 腈 定 容 到 10mL, 备 测 液 87

91 LC 实 验 结 果 5.1 标 样 色 谱 图 标 准 储 备 液 用 丙 酮 溶 解, 标 准 使 用 液 按 照 需 要 浓 度 用 适 量 丙 酮 稀 释 而 成 图 2 10μL 混 合 标 样 色 谱 图 ( 每 个 浓 度 均 为 0.5mg/L) 5.2 标 准 曲 线 图 2 10μL 混 合 标 样 色 谱 图 ( 每 个 浓 度 均 为 0.05mg/L) 图 3 二 硝 基 苯 腙 甲 醛 标 准 曲 线 图 图 4 二 硝 基 苯 腙 丁 醛 标 准 曲 线 图 图 5 二 硝 基 苯 腙 乙 醛 标 准 曲 线 图 图 6 二 硝 基 苯 腙 异 丁 醛 标 准 曲 线 图 88

92 LC 图 7 二 硝 基 苯 腙 丙 酮 标 准 曲 线 图 图 8 二 硝 基 苯 腙 苯 甲 醛 标 准 曲 线 图 图 9 二 硝 基 苯 腙 丙 醛 标 准 曲 线 图 图 10 二 硝 基 苯 腙 正 戊 醛 标 准 曲 线 图 注 : 每 种 标 样 标 准 曲 线 浓 度 范 围 为 :0.05 5mg/L 5.3 实 际 样 品 测 定 图 11 实 验 室 中 二 硝 基 苯 腙 醛 色 谱 图 ( 进 样 10μL) 图 12 新 建 办 公 室 中 二 硝 基 苯 腙 醛 色 谱 图 ( 进 样 10μL) 89

93 LC 杀 草 快 分 析 杀 草 快, 化 学 名 为 1,1- 二 甲 基 -4,4- 二 氯 二 吡 啶, 是 被 广 泛 使 用 的 除 草 剂 其 毒 性 强, 具 有 腐 蚀 性, 且 无 特 效 解 毒 剂, 中 毒 者 死 亡 率 高, 对 人 体 造 成 以 肺 为 主 的 多 器 官 功 能 衰 竭 1 仪 器 杀 草 快 C 12 H 12 Br 2 N 2 = (1)Hitachi L 2130 输 液 泵 (3)Hitachi L 2300 柱 温 箱 (5)EZChrom Elite 系 统 工 作 站 (2)Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (4)Hitachi L 2455 二 级 管 阵 列 检 测 器 2 色 谱 条 件 柱 : Asahipak ODP 50 6D 6.0mm I.D.*150mm 流 速 :0.8mL/min 柱 温 :40 波 长 :313nm 进 样 量 :80μL 流 动 相 : 13.5mL 磷 酸 3.0 克 1 戊 烷 磺 酸 钠 1mL/L 二 乙 胺 3 实 验 结 果 图 1 80μL 标 样 色 谱 图 (5μg/L) 图 2 标 准 曲 线 图 说 明 : 使 用 聚 丙 烯 自 动 进 样 瓶, 样 品 用 0.1mol/L 盐 酸 稀 释 定 量 限 (S/N=10):3.4μg/L 检 测 限 (S/N=3):1.0μg/L 90

94 LC 双 胍 辛 胺 醋 酸 盐 分 析 双 胍 辛 胺 醋 酸 盐 是 一 种 胍 类 杀 虫 剂 随 着 日 本 高 尔 夫 球 场 使 用 杀 虫 剂 防 止 水 污 染 修 订 ( ), 双 胍 辛 胺 醋 酸 盐 是 高 尔 夫 球 场 控 制 使 用 的 10 种 杀 虫 剂 中 的 一 种 双 胍 辛 胺 双 胍 辛 胺 三 乙 酸 盐 1 仪 器 (1) Hitachi L 2130 输 液 泵 (2) Hitachi L 2200 自 动 进 样 器 (3) Hitachi L 2300 柱 温 箱 (4) Hitachi L 2480 荧 光 检 测 器 (5) Hitachi L 5050 反 应 单 元 (6) EZChrom Elite 系 统 工 作 站 2 色 谱 条 件 柱 : Asahipak ODP 50 6D 6.0mm I.D.*150mm 流 速 :0.8mL/min 柱 温 :50 荧 光 : 激 发 :395nm, 发 射 :500nm 进 样 量 :50μL 流 动 相 : 高 氯 酸 钠 溶 液 : 乙 腈 =17:5 高 氯 酸 钠 溶 液 :14.1 克 高 氯 酸 钠 400 毫 克 氢 氧 化 钠 1.8 毫 升 乳 酸, 用 水 定 容 至 1 升 乙 腈 : 不 含 双 胍 辛 胺 醋 酸 盐 3 反 应 试 剂 R1:0.5mol/L 氢 氧 化 钠 R2:3g/L 茚 三 酮 4 系 统 结 构 图 1 双 胍 辛 胺 醋 酸 盐 分 析 系 统 结 构 图 91