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磁蔺
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1 第 36 卷第 6 期 2017 年 11 月华中农业大学学报 JnfHzhngAgUnvy V.36 N.6 Nv.2017,89~98 东方高原鳅的胚胎与胚后发育观察汪帆杨瑞斌樊启学华中农业大学水产学院, 武汉摘要对东方高原鳅 Tpphyn (Hznn ) 胚胎发育及胚后发育的全过程进行观察拍照并测量, 结果显示 : 东方高原鳅成熟卵呈淡黄色圆形, 卵径为 0.97~1.11 mm, 遇水具微黏性, 为沉性卵. 在水温 (16±0.5) 下, 受精卵历时 132h9mn 孵化出膜, 所需积温为 h, 整个胚胎发育过程分为 7 个时期 : 胚盘形成期卵裂期囊胚期原肠胚期神经胚期器官形成期出膜前期 ; 初孵仔鱼全长 (4.86±0.09)mm, 在水温 (16±0.5) 下, 胚后发育历时 34d, 分为卵黄囊和后期仔鱼阶段, 其中卵黄囊阶段历时 9d, 后期仔鱼历时 25d. 关键词东方高原鳅 ; 胚胎发育 ; 胚后发育 ; 卵黄囊 ; 后期仔鱼中图分类号 S917;Q132.4 文献标识码 A 文章编号 1000G2421(2017)06G0089G10 东方高原鳅 Tpphyn (HznG n) 属鲤形目 (Cypndfm) 条鳅科 (NmG hn) 高原鳅属 (Tpphy), 主要分布于西藏的拉萨河怒江上游青海甘肃和四川西部的长江黄河干流及其附属水体, 青海柴达木盆地和甘肃 [1G2] 河西走廊的自流水体等. 东方高原鳅作为雅鲁藏布江经济名优鱼类, 体表具漂亮花纹, 有较好的观赏性. 包括东方高原鳅在内的高原鳅是西藏雅鲁藏布江水域重要的土著鱼类, 在西藏高寒脆弱的生态系统中占据重要地位. 然而对于西藏地区高原鳅的 [3G7] 研究仅有渔业资源分类学等方面的报道. 近年来, 随着人类活动的日益加剧, 西藏鱼类资源面临着外来鱼种的入侵水电站建设过度捕捞等威胁, 加之西藏鱼类生长发育缓慢性成熟晚的特 [8G11] 点, 其种群资源一旦遭到破坏就难以恢复, 因此, 对高原鱼类的调查和保护就显得尤为重要和紧迫. 笔者对东方高原鳅胚胎和胚后发育过程进行系统观察, 并与鳅科其他鱼类进行比较, 从而为进一步了解其早期生活史, 以及开展西藏的高原鱼类增殖保护的相关工作提供参考资料. 1 材料与方法 1.1 试验地点试验地点在西藏林芝农牧学院水产基地, 该基地靠近尼洋河, 以地下水作试验用水. 1.2 亲本来源东方高原鳅于 2015 年 5 月 25 日, 从西藏雅鲁藏布江中上游支流年楚河及入江湖泊中获得. 从所获亲本中挑选 135 尾体质健康性腺发育良好的个体, 运输至西藏林芝农牧学院水产基地, 暂养在 60 m 60m 50m 的塑料盒中, 控制水温 (16± 0.5), 保持流速 0.2m/. 1.3 雌雄鉴别 [12] [13] [14] 参照耿龙武等陈修松等王志坚等和 [15] 候飞侠等对高原鳅雌雄性别的判定方法, 东方高原鳅亲鱼雌雄的主要区别在于头部形状 ( 图 1G1) 和胸鳍肉垫 ( 图 1G2). 雌鱼头部近似于等腰梯形, 从鳃盖后缘到吻端逐渐缩小, 而雄鱼整个头部以眼睛为界限, 分为前后两部分, 眼睛部分内凹, 从鳃盖后缘到眼睛的部分近似于等腰梯形, 从眼睛到吻端的部分略呈方形 ; 雌鱼胸鳍较薄呈半透明状表面色素较少 ; 雄鱼胸鳍颜色较深, 繁殖季节色素明显增多, 鳍条明显增厚, 尤其是第 1~3 鳍条尤为坚硬粗壮, 表面角质化明显. 1.4 催产药物选择催产药物选择浙江省宁波第二激素厂生产的绒毛膜促性腺激素 (HCG) 促黄体素释放素类似物 A2(LHRHGA2) 和马来地欧酮 (DOM). 催产剂量收稿日期 :2017G03G22 基金项目 : 农业公益性行业专项项目 ( ) 汪帆, 硕士研究生. 研究方向 : 鱼类遗传育种.EGm: @qq.m 通信作者 : 樊启学, 教授. 研究方向 : 水产养殖学.EGm:fnqx@m.hz.d.n

9 数据处理由于东方高原鳅胚胎发育不同时期卵黄囊形状不同,依据２种卵黄囊体积计算公式 [２０２４],提出东方头部形态 H 胸鳍肉垫 P １ dhp;２ f npd 图１东方高原鳅的雌雄鉴别 F １ Thm g dn f n f g ph T phy n p 为 HCG２０００IU LHRHA２２０ mg/g DOM ５ mg/g,雄性剂量减半. 1.

2 ９０第３６卷华中农业大学学报该发育阶段的开始,观察并拍摄记录其形态特征 [１６１９];出膜仔鱼放入３０m ２０m ４０m 的塑料白盒中培育,控制水温( １６± ５),保持水流２ m/,每天上午１０点,取５尾仔鱼观察并拍照记录胚后发育形态特征. 仔鱼开口后投喂煮熟后的蛋黄,每日上午９点和下午６点投喂２次,并及时用孔径２５ mm 的捞网清污. 1.9 数据处理由于东方高原鳅胚胎发育不同时期卵黄囊形状不同,依据２种卵黄囊体积计算公式 [２０２４],提出东方头部形态 H 胸鳍肉垫 P １ dhp;２ f npd 图１东方高原鳅的雌雄鉴别 F １ Thm g dn f n f g ph T phy n p 为 HCG２０００IU LHRHA２２０ mg/g DOM ５ mg/g,雄性剂量减半. 1.5 人工催产高原鳅的体积计算公式,当卵黄囊如图２A 所示,其体积计算公式为: V L１ H １２ π/６ L２H ２２ π/１２;当卵黄囊如图２B 所示,其体积计算公式为: V LH ２ π/１２. 图片用 AdbPh hpcs５进行处理;仔鱼生长和卵黄吸收曲线拟合均用 O n８５１软件进 g 行回归分析. 催产时间: ２０１５年５月２８日上午１０点.按照每尾雌鱼注射生理盐水１ ml 配置催产药物,采用一针注射法,从胸鳍基部以４５角注射催产药物, 进针深度约为１５~ ２０m;雌鱼注射１２h 后,给雄鱼注射催产药物,催产剂量减半.催产完后,将鱼放回塑料白盒中,控制水温( １６± ５),水流速度为２~ ３ m/. 1.6 人工授精雌鱼注射药物５２h 后,将雌鱼捞出检查,轻轻挤压腹部有卵从泄殖孔中顺利流出即可挤卵;以干毛巾吸干体表多余水分,将成熟的卵挤入干燥的铁盆中;剖杀雄鱼将其精巢取出,放到滤纸上吸干水 LT :全长 T ng h;l :卵黄囊长径 Lngd m fy ;H :卵黄囊短径 Sh d m fy ; L１:卵黄囊膨大部长径 Lngd m fmgnmy ;L２:卵黄囊狭长部长径 Lngd m fn wy ;H１:卵黄囊膨大部短分,之后放入研钵中研磨,用４ (质量体积比)的生理盐水将研磨好的精巢冲入盛有卵子的铁盆中 (生理盐水的剂量为卵子体积的１０~２０倍),并轻轻径 Sh d m fmgnmy ;H２:卵黄囊狭长部短径 Sh d m fn wy 图２东方高原鳅仔鱼用手迅速搅拌２０~３０,获得受精卵. 1.7 孵化 F ２ L v ft phy n g p 2 结果与分析铺在培养皿中,再将培养皿放置在有进出水口规格 2.1 为５０m ４０m ５０m 的塑料白盒中,控制水温胚胎发育过程东方高原鳅胚胎发育在( １６± ５) 条件下历时１３２h９ m n,所需积温为２１１３６ h. 取直径９m 的玻璃培养皿,消毒后将受精卵平在( １６± ５),保持水流２ m/.每日上午９点用１ mg/l 高锰酸钾溶液浸泡受精卵５ m n. 1.8 与多数鲤形目鱼类相似,东方高原鳅胚胎发育胚胎发育及胚后发育观察过程主要经过胚盘形成期卵裂期囊胚期原肠胚用 N nsmz １５００数码显微镜,连续观察胚期神经胚期器官形成期和出膜前期７个阶段. 胎发育过程,以５０受精卵发育进入某一阶段作为１)胚盘形成期.成熟卵呈淡黄色圆球形,卵径

3 第 6 期汪帆等 : 东方高原鳅的胚胎与胚后发育观察 ~1.11 mm, 卵质黄色透明, 无油球, 受精卵遇 5) 神经胚期. 受精后 33h46 mn 胚层细胞继水具有微黏性, 相对密度比水大, 为沉性卵续下包至卵黄的 3/4 至 5/6 以上, 进入神经胚期 ( 图 ( 图 3G1); 受精后 10 mn, 受精卵逐渐吸水膨胀, 卵 3G15); 随着胚层细胞继续下包 ; 受精后 35 h57 周隙逐渐形成 ; 受精后 35 mn 膜径达到最大, 受精 mn, 胚孔彻底闭合, 胚胎背面开始形成神经板, 受卵不再膨胀, 此时卵径为 (1.14±0.05)mm, 膜径为精卵进入胚孔封闭期 ( 图 3G16); 受精后 38h56mn 1.72~1.83mm, 卵周隙为 0.39~0.47mm( 图 3G2); 神经板的中线出现柱状的脊索, 神经板的前端隆起受精后约 45mn, 原生质向动物极移动集中, 形成显出头部, 神经板的中间出现 2 对肌节, 受精卵进入胚盘, 随着时间推移胚盘逐渐变大变高, 受精卵进入肌节出现期 ( 图 3G17). 胚盘隆起期, 受精后 1h 胚盘不再扩大, 高度约占卵 6) 器官形成期. 受精后 43h19mn, 胚体头部黄的 1/5~1/4( 图 3G3). 明显凸起, 形成脑泡, 侧面观呈半圆状, 脑泡的两侧 2) 卵裂期. 受精后 1h46mn, 受精卵发生第 1 出现 1 对椭圆隆起, 为眼的原基, 体节 4 对, 受精卵次分裂, 分裂为经裂, 胚盘从中间凹陷形成 2 个相似进入眼基出现期 ( 图 3G18); 受精后 47h52 mn, 眼的分裂球, 受精卵进入 2 细胞期 ( 图 3G4); 受精后基中央出现像 I 的横凹, 脑泡隆起变大, 可分出前 3h, 受精卵发生第 2 次分裂, 分裂为与第 1 次分裂中后三部分, 体节增加至 8 对, 受精卵进入眼囊期沟垂直的经裂, 将胚盘分裂成形状大小相似的 4 个 ( 图 3G19); 受精后 51h59mn, 尾端开始分化膨大, 分裂球, 受精卵进入 4 细胞期 ( 图 3G5); 受精后 4h 体节增加至 10~12 对, 受精卵进入尾芽期 ( 图 3G 20mn, 受精卵发生第 3 次分裂, 分裂为与第 1 次分 20); 受精后 56h16mn, 在脑后方出现 1 对椭圆透列沟平行的 2 个经裂, 将胚盘分裂成中间 4 个略大明的囊腔, 即为耳囊, 此时体节增加至 18 对, 尾芽更于边上 4 个的 8 个分裂球, 排成 2 排, 受精卵进入加膨大, 逐步脱离卵黄, 卵黄囊由圆形逐步变成不规 8 细胞期 ( 图 3G6); 受精后 5h40mn, 受精卵发生第则肾形, 受精卵进入耳囊期 ( 图 3G21); 受精后 60h 4 次分裂, 分裂为与第 2 次分裂沟平行的 2 个经裂, 18 mn, 耳囊出现白色透明点状耳石, 体节增加至将胚盘分裂成排成 4 排的 16 个分裂球, 中间 4 个分 20 对, 卵黄囊被拉长, 变成靠头部圆形和靠尾部小裂球略微大于周围的分裂球, 受精卵进入 16 细胞期泡状的 2 个部分, 受精卵进入耳石出现期 ( 图 3G22); ( 图 3G7); 随着分裂的继续, 卵裂球的数目逐渐增受精后 64h57 mn, 眼囊下陷, 眼杯口形成透明圆多大小逐渐减小, 受精后 10h12mn, 胚盘形成高形晶体, 眼囊后方出现圆形的鳃板轮廓, 体节增至举的多细胞胚体, 形状如同桑葚, 受精卵进入桑葚胚 24 对, 受精卵进入眼晶体期 ( 图 3G23); 受精后 65h 期 ( 图 3G8). 3) 囊胚期. 受精后 13h59mn, 随着分裂的继 27mn, 胚体出现不规则的轻微颤动, 约 4~7 次 /mn, 体节增至续, 胚盘细胞越来越小, 形成高举的囊胚, 高度约占 28 对, 受精卵进入肌肉效应期 ( 图卵黄的 1/2, 受精卵进入囊胚早期 ( 图 3G9); 受精后 3G24); 受精后 76h14 mn, 在头部和卵黄囊前 18h4mn, 胚层高度降低变薄透明, 可见囊胚腔, 端交接处形成白色膜状包囊, 为心脏原基, 受精卵进受精卵进入囊胚中期 ( 图 3G10); 受精后, 囊胚细胞入心脏出现期 ( 图 3G25); 受精后 87h4mn, 心脏开开始下包, 胚层高度逐渐降低, 受精卵进入囊胚晚期始跳动, 心率 50~55 次 /mn, 血液呈半透明液体开 ( 图始循环, 胚胎颤动明显加强, 约 3G11). 10~12 次 /mn, 受 4) 原肠胚期. 受精后 25h41mn, 胚层细胞逐精卵进入心跳期 ( 图 3G26); 受精后 96h32 mn, 尾渐下包, 约占卵黄的 1/3, 侧面观可见胚层细胞背唇部变得细长, 泡状结构消失, 出现鳍褶状结构, 即尾呈新月状, 胚盘边缘伴随着胚层细胞内卷形成一圈鳍出现, 心脏血液出现红色, 眼色素明显积累变黑, 肥厚的胚环, 受精卵进入原肠早期 ( 图 3G12); 受精体节增至 32~34 对, 受精卵进入尾部鳍褶期后 28h11mn, 胚层细胞继续下包至卵黄的 1/2, 此 ( 图 3G27). 时在胚环的一定部位内卷形成三角形隆起的胚盾, 7) 出膜前期. 受精后 120h24 mn, 受精卵进受精卵进入原肠中期 ( 图 3G13); 受精后 31h41 入出膜期, 出膜时仅胚体尾部破膜而出, 头部还留在 mn, 胚层细胞已经下包卵黄的 2/3, 背唇逐渐明显, 卵膜内, 随后卵膜逐渐塌陷, 开始脱落, 经过 21h45 受精卵进入原肠晚期 ( 图 3G14). mn, 所有受精卵完成脱膜 ( 图 3G28).

4 ９２华中农业大学学报第３６卷受精卵 F 卵周隙形成 P 胚盘隆起 B １ z dgg;２ v np ;３ d m p f ;４２细胞期２ ;５４细胞期４ ; 桑葚胚期 M 囊胚早期 E 囊胚中期 M 囊胚晚期 L ６８细胞期８ ;７１６细胞期１６ ;８ ;９ ;１ dd b ;１１ yb 原肠早期 E 原肠中期 M 原肠晚期 L 神经胚期 N 胚孔关闭期 b ;１２ ;１３ dd g ;１４ g ;１５ ;１６ yg 肌节出现 App 眼原基期 Eyp 眼囊期 Op 尾芽期 T C fb p ;１７ n fmym ;１８ m d ;１９ ;２ bd; 耳囊期 Ad 耳石出现期 App 眼晶体期 Ey 肌肉效应期 M 心脏出现２１ ;２２ n f h;２３ n;２４ f f ;２５ yv 期 App 心跳期 H 尾部鳍褶期 Cd 出膜前期 P n fh ;２６ p n;２７ f nf d;２８ h h ng 图３东方高原鳅的胚胎发育 F ３ Emb dv pmn ft phy n g yn p 2.2 胚后发育过程１)卵黄囊期初孵仔鱼:刚出膜仔鱼肌节３４对,全长( ４８６± ０９)mm,卵黄囊体积 ( ４０± ０３)mm ;除了眼部色素积累明显以外,仔鱼通体透明无色素积累,卵３黄囊前段膨大明显呈椭圆球状,后段呈长细棒状紧贴鱼体腹部,卵黄囊全长约占仔鱼全长的１/２;胸鳍细长紧贴在鱼体两侧,心脏跳动明显,血液透明且涌动明显;初孵仔鱼多数时间静卧在池底(图４１). 出膜后１d,头部上抬且两侧出现３~５个黑色素点,仔鱼作间歇性螺旋状上升游动,随即沉入池底 (图４２). 出膜后２d,头部黑色素沉积,出现８~１０个黑色素点,背部也开始出现少量黑色素点,胸鳍较出膜有贯通(图４４). 出膜后４d,头部与背部以及肌节和卵黄囊之间黑色素继续沉积,黑色素点增多明显;仅心脏部位血液的血红色沉积; 消化道前端膨大,后面逐渐变细呈透明细管状,不含内容物;卵黄囊前半部分短径继续缩 (. 小, 使其前后形状相似(呈细长棒球棒状) 图４５) 出膜后５d,周身血液开始变红,头部和体背黑色素沉积加剧;出现４对鳃弧,鳃丝不明显;卵黄囊继续缩小(图４６). 出膜后６d,头部及身体黑色素继续沉积,并且头部出现黄色素消化道贯通直至肛门;胸鳍明显增大,口微开但还不能摄食;体表颜色变成淡黄透明, 卵黄囊短径继续缩小(图４７). 出膜后７d,头部及身体黑色素继续沉积,体表１d 明显增大,卵黄囊前端椭圆状膨大部分短径减淡黄明显,心脏处血液红色加深;口张开并摄食,鳃 (图４３). 显增强,可自由游泳;卵黄囊缩小呈细条状,延伸至小,后半部分变化不大,仔鱼能够短距离平游出膜后３d,头部色素继续沉积,出现２０个左右黑色素点,背部色素沉积明显,肌节和卵黄囊之间黑盖雏形出现,消化道出现异物;仔鱼平衡身体能力明肛门(图４８). 出膜后８d,体表色素继续沉积,鳃盖形成,口张色素沉积;胸鳍较２d 时增大１倍,明显张开位于身开明显,肠道异物明显增多,有排泄现象,肛门处可半,后半部分变化不大;消化道雏形基本形成,但没出膜后９d,上下颌边缘出现锯齿状突起,鳃盖体两侧;卵黄囊前半部分短径较２d 时明显缩小一见少量粪便,卵黄囊进一步缩小呈细线状(图４９).

5 第６期汪帆等:东方高原鳅的胚胎与胚后发育观察９３张合明显,肛门处粪便明显增多,卵黄囊彻底消失, 加深成大颗粒黑色素,膜质鳔体积略有增大,背鳍皱仔鱼进入外源性阶段,完全依靠外源食物获取能量 (图４１０). ２)后期仔鱼期出膜后１０ d,肠道内容物明显增多,摄食量增大. 出膜后１１d,吻部出现第１对颌须,胸鳍基部加厚逐渐丰满,支鳍骨形成,尾鳍有內溢丝出现 (图４１１). 出膜后１２d,在消化道前端正上方出现椭圆形空泡状的膜质鳔,长径为( ４４± ０２)mm,短径为褶出现,尾鳍支鳍骨形成(图４１３). 出膜后１５d,头部黑色素继续沉积,黑色素颗粒逐渐增大,鳃丝明显;腹鳍皱褶出现;膜质鳔体积增大明显,为( ０２５０± ０００４)mm３(图４１５). 出膜后１７d,膜质鳔长径继续增大,尾鳍分化成上下两叶明显,呈正尾型(图４１８). 出膜后１９d,臀鳍皱褶出现,背鳍皱褶突起明显,可观察到鳍条原基的出现,膜质鳔短径略有增加,体积变化不大(图４１９). 出膜后２４d,背鳍的支鳍骨开始形成,膜质鳔正 ( １２９± ０４)mm,体积为 ( ００３８± ０００２) 前方有１对圆球状的空泡形成,为骨质鳔的原型３ (图４ mm (图４１２). ２０). 出膜后１３d,头部黑色素继续沉积,从点状逐渐出膜后２８d,腹鳍的支鳍骨形成,背鳍和尾鳍鳍 ( １)初孵仔鱼 Nw hd v ２) １d 仔鱼１dy v ３) ２d 仔鱼２dy v ４) ３d 仔鱼３dy v ５) ４d 仔鱼 yh ４dy v ６) ５d 仔鱼５dy v ７) ６d 仔鱼６dy v ８) ７d 仔鱼７dy v ９) ８d 仔鱼８dy v １０) ９d 仔鱼９dy v １１) １１d 仔鱼１１dy v １２) １２d 仔鱼１２dy v １３) １３d 仔鱼１３dy v １４) １４d 仔鱼１４dy v １５) １５d 仔鱼１５dy v １６) １６d 仔鱼１６dy v １７) １７d 仔鱼１７dy v １８) １８d 仔鱼１８dy v ; ( １９) １９d仔鱼１９dy v ２０) ２４d 仔鱼２４dy v ２１) ２８d 仔鱼２８dy v ２２) ３４d 仔鱼３４dy v 图４东方高原鳅胚后发育 F ４ P mb dv pmn ft phy n g yn p

6 94 华中农业大学学报第 36 卷条明显 ; 骨质鳔明显, 并且膜质鳔与骨质鳔之间有一卵黄囊体积 VY 和出膜后时间 D 的关系式 : 条细管将两者相连 ( 图 4G21). VY= ( D D2) (R 2 =0.684) 出膜后 34d, 各鳍发育完全, 鳍条骨清晰可见, 卵黄囊体积 VY 和全长 LT 的关系式 : 骨质鳔和膜质鳔清晰可见 ( 图 4G22). VY=-0.065LT (R 2 =0.65) 3) 卵黄囊的吸收与仔鱼的生长全长 LT 和出膜后时间 D 的关系式 : 东方高原鳅初孵仔鱼全长 LT 为 (4.95±0.16) LT=0.369D (R 2 =0.974) mm, 卵黄囊体积 VY 为 (0.3014±0.0705)mm 3 ( 图 4G1), 前半部分呈膨大的椭圆球形,H1(0.695± 0.068)mm,L1 (1.067±0.042 )mm, 体积为 (0.2727±0.0612)mm 3, 后半部分呈圆锥形,H2 (0.266±0.063)mm,L2(1.436±0.119)mm 3, 体积为 (0.0287±0.0148)mm 3 ; 出膜后第 1 天到第 2 天, 卵黄囊前半部分椭圆球 H1 减小明显, 其他部分变化不大 ; 出膜后第 4 天, 卵黄囊变成前端略膨大后从图 5A 中看出, 仔鱼出膜后 1~2d, 卵黄囊消耗最大 ; 出膜 4d 以后, 卵黄囊消耗速率随发育时间逐渐减小 ; 出膜后 8~9d, 卵黄囊彻底消耗完. 可见仔鱼从出膜到出膜后 4d 期间, 新陈代谢在整个卵黄囊阶段最为旺盛. 从图 5B 中看出, 随着发育过程的进行, 仔鱼卵黄囊体积与全长成反比 ; 仔鱼全长 LT 在 5.5~6mm 处, 卵黄囊体积减小明显, 消耗速率快 ; 仔鱼全长在端呈尖状的圆锥形, 体积 VY 为 (0.1180±0.0019) 6mm 之后, 卵黄囊消耗速率减缓, 全长增长速率趋 mm 3 ( 图 4G5); 到第 8 天, 卵黄囊仅剩紧贴消化道一条细线, 体积 VY 为 (0.0213±0.0153)mm 3 ( 图 4G 9); 到第 9 天, 卵黄囊彻底消失 ( 图 4G10). 对卵黄囊体积 VY, 出膜后时间 D, 全长 LT 进行拟合 ( 图 5): 于稳定 ; 卵黄囊消失时, 仔鱼全长在 8.5mm 左右. 从图 5C 中看出, 随着出膜时间增加, 仔鱼全长呈递增趋势 ; 在卵黄囊阶段, 仔鱼生长速度较为稳定, 在外源性阶段, 仔鱼生长速度波动性较大, 尤其在出膜后 10~20d 之间, 波动性尤为明显. A: 卵黄囊体积 VY 和出膜后时间 D 的关系 Rnhpbwnvmfynddyfhhng;B: 卵黄囊体积 VY 和全长 LT 的关系 Rnhpbwnvmfyndngh;C: 全长 LT 和出膜后时间 D 的关系 Rnhpbwn nghnddyfhhng. 图 5 东方高原鳅仔鱼发育 Fg.5 LvdvpmnfTpphyn 3 讨论鳅类是较为复杂的类群, 部分学者倾向于将鳅科鱼类分为 3 个亚科, 即条鳅亚科沙鳅亚科和花鳅亚科 [25G26] ; 而另外一些学者提出将鳅类的 4 个类群都提升为科, 分别命名为沙鳅科平鳍鳅科花鳅科和条鳅科 [27]. 东方高原鳅的早期发育与其他鳅类 [17,28G39] 的胚胎和胚后发育比较的结果如表 1 所示. 3.1 东方高原鳅卵和胚胎发育特点东方高原鳅的成熟卵子是呈淡黄色具微黏性的沉性卵, 与条鳅科其他几种鱼, 以及花鳅科的泥鳅和大鳞副泥鳅的成熟卵子相同, 与沙鳅科呈青色漂流性无黏性的成熟卵子不同 ; 而平鳍鳅科的犁头鳅的成熟卵子则是黄色漂流性无黏性的 [28G39]. 这种 [27] 在成熟卵子性状上的差异与唐琼英的研究相吻 [27] 合, 唐琼英指出花鳅科和条鳅科鱼类聚在一起,

7 第 6 期汪帆等 : 东方高原鳅的胚胎与胚后发育观察 95 条鳅科 Nmhd 花鳅科 Cbd 沙鳅科 Bd 平鳍鳅科 Bd 表 1 东方高原鳅与其他鳅类卵的性质胚胎和胚后发育的比较 Tb1 Thmpnfggh,mbynndpGmbyndvpmnmngTpphyn (Hznn )ndhbdfh 高原鳅属种类 Tpphy Sp 东方高原鳅 Tpphyn 安氏高原鳅 [28] Tpphyng 贝氏高原鳅 [29] Tpphyb 西昌高原鳅 [30] Tpphyxhngn 达里湖高原鳅 [12] Tpphyd 叶尔羌高原鳅 [17] Tpphyyndn 颜色 C 淡黄 Yw 金黄 Gdn 金黄 Gdn 浅黄 Yw 淡黄 Yw 卵的性质 Egg f 沉性 Dm 微黏性 Mhv 沉性 Dm 微黏性 Mhv 成熟卵径 /mm Egg dm 膜径 /mm Eggmmbn dm 孵化水温 / W mp 孵化时间 Inbn m 积温 /( h) Amd mp 卵黄囊阶段 /d Y g 初孵仔鱼长度 /mm Bdyngh fnwy hhdv 0.97~ ~ ± h9mn ~9 4.86± ~ ~ ~ h44mn 沉性 Dm 强黏性 Snghv 0.94~ ~ h30mn ±0.23 强黏性 Snghv 强黏性 Snghv 0.90± ~17 72h 1080~ ± h ±0.06 沉性 Dm 微黏性 Mhv 0.60± ±1.0 65h34mn ±0.65 副鳅属 Pb 短体副鳅 [31] Pbpnn 黄色 Yw 沉性 Dm 强黏性 Snghv 1.976± ~20 58h 986~ ±0.14 泥鳅 [32] Mgnngd 大鳞副泥鳅 [33] Pmgndbyn 淡黄 Yw 篾黄 Yw 沉性 Dm 微黏性 Mhv 0.72~ ~ ~ h40mn ~2.40 沉性 Dm 黏性 Chv 0.60~ ~ ~23 26h35mn 中华沙鳅 [34] Bp 宽体沙鳅 [35] Bv 花斑副沙鳅 [36] Pbf 长薄鳅 [37] Lpbng 紫薄鳅 [38] Lpbnp 艾绿 Gn 灰黄 Gyhyw 黄绿 Ovn 灰青 Gygn 青灰 Gph 漂流性 Pg 无黏性 NnGhv 0.90~ ~ ±0.5 33h15mn ~5.10 半漂流 Smpg 无黏性 NnGhv 0.90~ ~ ±0.5 27h ~3.80 漂流性 Pg 无黏性 NnGhv h 漂流性 Pg 无黏性 NnGhv 1.50~ ~ ~ h 漂流性 Pg 1.47± ± ~31.0 犁头鳅 [39] Lphhyfmb 黄色 Yw 漂流性 Pg 无黏性 NnGhv 1.76± ~ h 782 5

8 96 华中农业大学学报第 36 卷与平鳍鳅科鱼类形成姐妹群, 而沙鳅科为一单系, 最早发生分化, 处于所有鳅类的根部位置. 这种现象可能与各种群生存水域流速水深以及产卵场分布等栖息环境密切相关. 东方高原鳅的成熟卵径为 0.97~1.11 mm, 充分吸水后卵周隙明显增大, 膜径为 1.72~1.83mm. 东方高原鳅与安氏高原鳅贝氏高原鳅西昌高原鳅达里湖高原鳅 4 种高原鳅的卵径比较接近 [12,28G30], 且明显大于叶尔羌高原鳅的卵径 [17]. 何 [40] 德奎等对 22 种高原鳅属鱼类进行了分子系统发育和生物地理学研究, 研究提出将叶尔羌高原鳅归入赫氏鳅亚属. 可能位于高原地区的东方高原鳅与 [17] 作为塔里木河水系土著鱼类的叶尔羌高原鳅的生存环境有很大不同. 水温控制在 (16±0.5) 下, 东方高原鳅胚胎发育需要 130h9 mn, 所需积温 h, 初孵仔鱼全长为 (4.86±0.09)mm, 而安氏高原鳅胚胎发育温度为 16.3~18.1, 所需积温为 h, 初孵仔鱼全长为 4.58 mm, 两者最为接近. 安氏高原鳅是我国长江流域特有种, 主要分布于沿渡河金沙江雅砻江长江上游, 适于在急流中生活, 但产卵场一般分布在河道两岸流速较缓或近乎静水的浅水域, 水深不超过 30m [28] ; 而东方高原鳅主要分布于西藏的拉萨河怒江上游青海甘肃和四川西部的长江黄河干流及其附属水体, 青海柴达木盆地和甘肃河西走廊的自流水体等 [1G2]. 两者生存的海拔高度相近, 从试验结果可推测出安氏高原鳅与东方高原鳅产卵场的环境比较接近. 3.2 东方高原鳅胚后发育特点东方高原鳅初孵仔鱼的卵黄囊为前段膨大明显呈椭圆球状, 后段呈长细棒状紧贴鱼体腹部, 不同于沙鳅属的中华沙鳅宽体沙鳅棒球棒状的卵黄囊 ; 随着发育的进行, 东方高原鳅胚胎的卵黄囊前半部分短径逐渐缩小, 到出膜后 4d, 卵黄囊变成细长棒球棒状. 鉴于东方高原鳅发育不同阶段的卵黄囊形状不同, 本文提出了不同阶段的东方高原鳅卵黄囊体积计算公式, 从而更加准确地计算东方高原鳅卵黄囊体积. 东方高原鳅仔鱼的卵黄囊阶段为 8~9d, 与贝氏高原鳅最为接近, 明显短于短体副鳅. 在东方高原鳅仔鱼生长发育中, 东方高原鳅仔鱼的生长速率在出膜后 3~4d 达到最大值, 比贝氏高原鳅的 5~8d 生长速率快 [29], 比叶尔羌高原鳅的 2~3d 慢 [17]. [41] 朱松泉认为, 骨质鳔的形成增强了条鳅亚科鱼头后方身体的强度, 增强了水平运动的能力, 以适应于在急流和石砾缝隙中的生活. 东方高原鳅出膜后 12d, 在腹腔中央出现椭圆形空泡状的膜质鳔, 长径为 (0.44±0.02)mm, 短径为 (0.129±0.04)mm, 体积为 (0.0038±0.0002)mm 3, 出膜后 24d 在膜质鳔的前方形成 2 个空泡状的骨质鳔, 并且膜质鳔与骨质鳔之间有一条细管将两者相连. 东方高原鳅的鳔后室相当发达, 不同于多数条鳅科鱼类是鳔后室趋向退化, 前室趋向小型化, 可能东方高原鳅的祖先原本就生活在静水或缓流水体中, 随着青藏高原的急剧隆起, 引起了自然条件的急剧变化, 形成了干燥寒冷强辐射周年水位变化剧烈的特殊高原环境 [42]. 因而, 东方高原鳅这种特征也与其既能栖息于缓流中也能栖息于静水中的特征相适应. 3.3 东方高原鳅的资源保护随着青藏高原的隆升而出现的高原鱼类是已知世界上适应于高寒环境分布海拔最高的鱼类 [43], 并且高原鱼类是研究高原鱼类演化以及青藏高原隆起对生物的影响等问题的重要对象 [44]. 作为西藏土著鱼类之一, 东方高原鳅早期发育的特点是卵径较小胚胎发育温度低胚胎发育所需积温高以及卵黄囊阶段时间较长, 这种低温下孵化期长代谢率低的发育特点使得东方高原鳅在孵化阶段和仔鱼阶段极其容易受到敌害捕食和环境因子变动的影响, 加之西藏鱼类生长发育缓慢性成熟晚的特点 [8G11], 因此, 东方高原鳅的种群资源一旦遭到破坏就难以恢复. 综上所述, 东方高原鳅人工繁殖的相关工作, 不仅对发展西藏的特色养殖业具有重要价值, 更是对鱼类系统进化生物地理学青藏高原地质演变等问题具有重要的借鉴指导作用, 因此, 开展东方高原鳅等高原鱼类的相关研究及保护工作具有重要意义. 参考文献 [1] 李亮涛, 杨学芬, 杨瑞斌, 等. 藏布江中游东方高原鳅的年龄与生长特性 [J]. 华中农业大学学报,2016,35(6):117G123. [2] 西藏自治区水产局. 西藏鱼类及其资源 [M]. 北京 : 中国农业出版社,1995:50G51. [3] 梁文涛. 几种高原鳅属鱼类的生物学研究 [D]. 武汉 : 武汉轻工

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10 98 华中农业大学学报第 36 卷 EmbynndpGmbyndvpmnf Tpphyn (Hznn) WANGFn YANG Rbn FAN Qx CgfFh,HzhngAgUnvy,Whn430070,Chn Ab ThmbynndpGmbyndvpmnfTpphyn (HznG n)wbvdnddbdndndmpwhdgm.thhwd hhmnfzdggft.n wv,vd,whdmf0.97g1.11mm, ndhzdbynydhvwhnnnngw.awmpf(16±0.5),h mbyndvpmnd132hnd9mn,whmvmpf h.addg ny,hmbyndvpmnnbdvddnvnphygpdndngbg dmfmng,vgg,bg,gg,ngndgnfmn g.thnwyhhdvw (4.86±0.09)mmnnghndhpGmbyndvpmn d34dywmpf(16±0.5),whhnbdvddnhyndp vg,ng9nd25dy,pvy. Kywd Tpphyn (Hznn);mbyndvpmn;pGmbyndvG pmn;y;pv ( 责任编辑 : 边书京 )

人工催产干法授精孵化胚胎发育观察

人工催产干法授精孵化胚胎发育观察金万昆俞丽杨建新张慈军高永平赵宜双王春英人工催产干法授精孵化胚胎发育观察胚盘隆起细胞期细胞期细胞期细胞期细胞期多细胞期囊胚早期囊胚中期囊胚晚期原肠早期原肠中期原肠晚期神经胚期胚孔封闭期眼泡出现期尾芽期晶体出现期肌肉效应期心脏搏动期孵出期日龄仔鱼日龄仔鱼日龄仔鱼日龄仔鱼感谢中国水产科学院黑龙江水产研究所沈俊宝研究员的悉心指导