2015 年第 1 期沈佳品等, 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响 81 肉生长抑制素前肽基因插入到 Tol2 转座子供体质粒中, 通过电穿孔和精子介导的方法将外源基因导入到受精卵, 孵育而成转基因红鲤 ( 汤泽源等, 2013); 非转基因红鲤孵育不导入外源基因在室温条件下 (21 左右

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棼董
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1 第 36 卷第 1 期 2015 年 1 月 DOI: /j 水生态学杂志 JournalofHydroecology Vol.36,No.1 Jan 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响沈佳品, 薛良义 ( 宁波大学海洋学院, 宁波 ) 摘要 : 在构建转基因红鲤的基础上, 采用生物预警系统比较和分析了非转基因和转基因红鲤 (Cyprinuscarpio) 在不同铜离子浓度条件下的游速和活动范围的变化转基因红鲤和非转基因红鲤孵育自同一批受精卵, 转基因红鲤体长 (5.31±0.64)cm 体重 (3.40±0.55)g, 非转基因红鲤体长 (4.58±0.59)cm 体重 (2.40±0.58)g Cu SO 4 的浓度设置 0( 对照 ) 和 45μg/L 共 6 组生物预警系统包括储水池数字摄像仪和数据运算处理器, 可以记录鱼的二维移动轨迹, 并计算出鱼的平均游速试验结果表明, 非转基因和转基因红鲤的平均游速分别为 : 对照组 BL/s,5μg/L 组 BL/s,15μg/L 组 BL/s,25μg/L 组 BL/s,35μg/L 组 BL/s,45μg/L 组 BL/s 非转基因和转基因红鲤的活动范围: 除 35μg/L 组外, 其他组的坐标 X 值非转基因与转基因红鲤间差异都极显著 (P<0.01); 对照组 5 和 25μg/L 浓度组, 转基因红鲤坐标 X 值极显著高于非转基因红鲤 ;15 和 45μg/L 浓度组, 非转基因红鲤坐标 X 值极显著高于转基因红鲤低于 45μg/L 时, 铜离子没有对转基因和非转基因红鲤产生明显的毒性 ; 在 45μg/L 浓度组, 转基因红鲤对铜离子不敏感, 而非转基因红鲤较敏感关键词 : 铜离子 ; 红鲤 ; 转基因 ; 游速 ; 活动范围中图分类号 :Q958.8 文献标志码 :A 文章编号 : (2015) 工农业发展造成地表水资源污染加剧, 重金属含量超过渔业水质标准, 甚至超过地表水质标准, 给渔业资源和人类健康带来了威胁 (Bidaretal, 2009) 在云南 38 个湖库中, 有 22 个 Cu 2+ 含量达到 10μg/L 以上, 超出渔业水质标准 ( 刘总堂等, 2010); 在珠海竹银水库污染程度评估中, 检出 Cu 2+ 含量达到 33μg/L, 超过国家 I 类水质标准, 属于轻度污染 ( 朱毅等,2012) 在山东微山湖,Cu 2+ 平均含量 35.9μg/L, 最高含量 41 3μg/L, 最低含量 24.6μg/L( 蒋万祥等,2012), 污染超渔业水质标准 2 59 倍, 超标率 100% 铜作为生命必需元素之一, 是构成酶活性的组成部分它可以影响鱼类的中枢神经系统, 引起神经紧张 (Kuz mina,2011); 减弱鱼的游动能力, 引起行为异常 (McIntyreetal,2008) 铜在极小的浓度条件下, 就可以影响生物体体内生理代谢和呼吸作用 (Yadav&Trivedi,2009) 水环境中的铜离子可以引起鱼类的黏液分泌增多, 从而导致呼吸和感受收稿日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金项目 ( ) 作者简介 : 沈佳品,1990 年生, 男, 研究方向为水产生物学 E mail:jiapin1705@qq.com 通信作者 : 薛良义,1962 年生, 男, 教授, 博士生导师, 主要从事水产生物技术研究 E mail:xueliangyi@nbu.edu.cn 功能衰弱 ; 在高浓度条件下, 甚至会对鱼类或者其他生物构成不可恢复的伤害对里海拟鲤 (Rutilus caspicus) 的血清皮质醇葡萄糖丙谷转氨酶 (ALT) 和钠水平检测中发现, 铜离子会影响鱼的生长发育和生理机能 (Hoseinietal,2013) 此外, 铜离子可以影响鱼类的嗅觉功能 (Tierneyetal,2010), 还会引起氧化应激反应, 影响脂质膜和 DNA 的完整性 (Carvalho& Fernandes,2008) 鱼类生活在水中, 对污染物较敏感目前, 斑马鱼 (Daniorerio) 在环境毒理研究领域已经成为一种灵敏有效的生物试验模型 (Sipesetal,2011), 可以通过斑马鱼的呼吸频率对水环境中的铜离子污染进行监控, 并对异常数据进行水样分析检测, 及时采取有效的预防措施 ; 也可通过斑马鱼的行为差异分析, 对水中铜离子的污染程度作出判断红鲤是常见的观赏鱼, 对水质的要求不高, 铜离子是否对其行为造成影响, 目前尚无报道作者在构建转基因红鲤基础上, 比较和分析了非转基因红鲤与转基因红鲤在不同铜离子浓度下的游泳行为 1 材料与方法 1.1 试验用鱼及分组红鲤亲本购自宁波天胜花鸟市场, 转基因红鲤和非转基因红鲤孵育自同一批受精卵将大黄鱼肌

2015 年第 1 期沈佳品等, 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响 81 肉生长抑制素前肽基因插入到 Tol2 转座子供体质粒中, 通过电穿孔和精子介导的方法将外源基因导入到受精卵, 孵育而成转基因红鲤 ( 汤泽源等, 2013); 非转基因红鲤孵育不导入外源基因在室温条件下 (21 左右 ), 将红鲤分别饲养在 20L 水族饲养箱内,24h 供氧选择外形完整鳞片完好

2 2015 年第 1 期沈佳品等, 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响 81 肉生长抑制素前肽基因插入到 Tol2 转座子供体质粒中, 通过电穿孔和精子介导的方法将外源基因导入到受精卵, 孵育而成转基因红鲤 ( 汤泽源等, 2013); 非转基因红鲤孵育不导入外源基因在室温条件下 (21 左右 ), 将红鲤分别饲养在 20L 水族饲养箱内,24h 供氧选择外形完整鳞片完好条纹清晰的红鲤作为试验用鱼红鲤的体型特征 : 转基因红鲤体长 (5.31±0.64)cm, 体重 (3.40±0.55) g; 非转基因红鲤体长 (4.58± 0.59)cm, 体重 (2.40±0.58)g CuSO 4 的浓度设置 A~F6 个组其中 A 组为对照,B~F 组 CuSO 4 浓度分别为和 45μg/L 1.2 试验仪器生物预警系统是以观测鱼作为传感生物, 根据鱼的行为参数变化对水环境进行早期预警包括 3 部分 : 储水池, 数字摄像仪和数据运算处理器 ( 图 1) 试验用储水池(72cm 12cm 38cm) 用 2 块挡鱼板分为 3 部分, 中间大的区域用来饲养试验鱼, 是摄像头集中监测区 ( 为了提高计算机对鱼的识别率, 水池背景和底部为乳白色 ), 左右两侧小的区域用于过滤和充气在试验记录过程中, 预警系统会在间隔时间内对画面进行捕捉分割, 根据鱼体形和活动区域的投影面积计算平均游速 (AverageSwim mingvelocity,asv) 并记录鱼的二维移动轨迹位置 ( 计算机系统自行计算建立原点, 水平方向为 X 轴方向, 竖直方向为 Y 轴方向 ) 1: 数字摄像仪,2: 试验用储水池,3: 计算机,4: 分析处理软件和试验记录窗口图 1 生物预警系统组成 1:digitalcamera,2:testtank,3:computer,4:windowsofanaly sissoftwareandexperimentalrecords Fig.1 Biologicalearlywarningsystem 1.3 行为观察试验前, 先待红鲤适应水池环境 24h, 能自如游动, 以消除容器变化带来的行为改变, 期间不喂食, 试验条件尽量保持一致再开始用生物预警系统记录红鲤行为特征参数试验由低浓度组到高浓度组依次进行, 每个浓度组选取 5 尾已经在相应浓度水环境中暴露 24h 的健康红鲤作为试验观察对象, 每一组的行为数据由 5 尾鱼的平均数据求得所有数据进行 3 次生物学重复观察的行为包括游速和活动范围游速 (BL/s) 是指红鲤在单位时间内移动的距离 ( 以体长倍数计 ) 活动范围指正对摄像头的水池二维观测面红鲤的二维移动轨迹位置, 即水平横向位置 (Co ordinatesonthexaxis,cx) 和竖直方向位置 (Coordi natesontheyaxis,cy), 位置以像素点 (pixels) 为单位 (Xuetal,2005) 1.4 数据处理用 EXCEL2003 对数据作图, 用 MINITAB16 SPSS17.0 统计软件对数据进行统计分析从每组数据中随机抽取容量为 50 的样本用 MINITAB16 时间序列分析窗对样本进行独立检验, 再用 SPSS17.0 进行非参数型 Mann WhitneyU 检验, P<0.05 为显著差异,P<0.01 为极显著差异 2 结果与分析 2.1 非转基因红鲤的行为变化游速的变化铜离子浓度对非转基因红鲤游速的影响见图 2 非转基因红鲤的平均游速, 对照组为 1BL/s, 5μg/L 组为 1.24BL/s,15μg/L 组为 1.61BL/s, 25μg/L 组为 1.50BL/s,35μg/L 组为 1.62BL/s, 45μg/L 组为 1.25BL/s 5 45μg/L 组平均游速均极显著低于其他 3 浓度组, 显著高于对照组 ; μg/L 组之间平均游速差异不显著, 极显著高于对照组活动范围的变化铜离子浓度对非转基因红鲤活动范围的影响见图 3 各组红鲤的活动范围 : 对照组 X 值 274,Y 值 93.8;5μg/L 组 X 值 ,Y 值 34.99;15μg/L 组 X 值 397.7,Y 值 92.48;25μg/L 组 X 值 , Y 值 72.09;35μg/L 浓度组 X 值 ,Y 值 80.23;45μg/L 浓度组 X 值 ,Y 值根据各组样本差异比较显示,5 和 15μg/L 浓度组 X 值与对照组有极显著差异 (P<0.01),25 和 35μg/L 浓度组 X 值与对照组无显著差异 (P>0.05) 45μg/L 浓度组, 无论是 X 值还是 Y

transgeniccyprinuscarpio 图 3 铜离子浓度对非转基因红鲤活动范围的影响 Fig.

3 82 第 36 卷第 1 期水生态学杂志 2015 年 1 月图 2 铜离子浓度对非转基因红鲤游速的影响 Fig.2 EfectsofdiferentCu 2+ concentrationsontheswimmingvelocityofthenon transgeniccyprinuscarpio 图 3 铜离子浓度对非转基因红鲤活动范围的影响 Fig.3 EfectsofdiferentCu 2+ concentrationsontherangeofactivityofthenon transgeniccyprinuscarpio

4 2015 年第 1 期沈佳品等, 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响 83 值, 与对照组均存在极显著差异 (P<0.01) 2.2 转基因红鲤的行为变化游速的变化铜离子浓度对转基因红鲤游速的影响见图 4 对照组, 转基因红鲤平均游速维持在 1.57BL/s 左右 ;5 和 15μg/L 浓度组中, 平均游速下降到 BL/s 左右, 与对照组的游速差异均极显著 (P<0.01);25 和 35μg/L 浓度组, 平均游速分别在 1.59 和 1.61BL/s 左右, 与对照组均无显著差异 (P>0.05);45μg/L 浓度组, 平均游速维持在 1.97BL/s 左右, 与其他组的差异均极显著 (P<0.01) 图 4 铜离子浓度对转基因红鲤游速的影响 Fig.4 EfectsofdiferentCu 2+ concentrationsontheswimmingvelocityofthetransgeniccyprinuscarpio 活动范围的变化铜离子浓度对转基因红基因红鲤游速极显著高于转基因红鲤 ; 在 25 和鲤活动范围的影响见图 5 对照组, 转基因红鲤 X 值 , Y 值 35μg/L 浓度组, 非转基因与转基因红鲤游速无显著差异 ;5μg/L 浓度组,X 值 359.8,Y 值 ; 活动范围比较非转基因与转基因红鲤活 15 μg/l 浓度组,X 值 ,Y 值 ; 动范围比较见图 7 25μg/L 浓度组,X 值 ,Y 值 79.81;35μg/L 浓度组,X 值 ,Y 值 ;45μg/L 浓度组, X 值 ,Y 值与对照组比较显示, 当 CuSO 4 浓度到达 35μg/L 以后, 无论是 X 值还是 Y 值都有显著性差异 (P<0.05) 2.3 非转基因与转基因红鲤间行为差异比较除 35μg/L 组外, 非转基因与转基因红鲤间其他组的坐标 X 值差异均极显著 (P<0.01) 对照 5 和 25μg/L 浓度组, 转基因红鲤坐标 X 值极显著高于非转基因红鲤 ;15 和 45μg/L 浓度组, 非转基因红鲤坐标 X 值极显著高于转基因红鲤各组非转基因与转基因红鲤间的坐标 Y 值差异均极显著 (P<0.01) 对照和 35μg/L 游速比较非转基因与转基因红鲤游速比浓度组, 转基因红鲤 Y 值极显著高于非转基因红较见图 6 鲤 ; 而在 45μg/L 浓度组, 非转基因红鲤 Y 值极显著对照组和 45μg/L 浓度组, 转基因红鲤游速极高于转基因红鲤显著高于非转基因红鲤 ;5 和 15μg/L 浓度组, 非转

84 第 36 卷第 1 期水生态学杂志 2015 年 1 月图 5 铜离子浓度对转基因红鲤活动范围的影响 Fig.5 EfectsofdiferentCu 2+ concentrationsontherangeofactivityofthetransgeniccyprinuscarpio 图 6 非转基因与转基因红鲤平均游速比较 Fig.

本试验非转基因红鲤在不同试验浓度组的游速都不相同, 在 Cu 2+ 浓度 0~15μg/L 范围内, 平均游速随铜离子浓度升高而增加, 但在 45μg/L 浓度组游速下降 ; 而转基因红鲤在 5~15μg/L 浓度范围, 平均游速明显低于对照组, 在 25~45μg/L 浓度组, 游速随浓度增加而变大可见, 在较低的铜离子浓度条件下, 转基因与非转基因红鲤的游速表现出了明显的差异,

5 84 第 36 卷第 1 期水生态学杂志 2015 年 1 月图 5 铜离子浓度对转基因红鲤活动范围的影响 Fig.5 EfectsofdiferentCu 2+ concentrationsontherangeofactivityofthetransgeniccyprinuscarpio 图 6 非转基因与转基因红鲤平均游速比较 Fig.6 Comparisonoftheaverageswimmingvelocityin diferenttreatmentsbetweenthenon transgenic andtransgeniccyprinuscarpio 3 讨论鱼类的游动能力与摄食躲避天敌迁移能力有着密切的联系而暴露在含一定浓度的重金属水环境中, 鱼的游动能力和摄食行为都会受到影响本试验非转基因红鲤在不同试验浓度组的游速都不相同, 在 Cu 2+ 浓度 0~15μg/L 范围内, 平均游速随铜离子浓度升高而增加, 但在 45μg/L 浓度组游速下降 ; 而转基因红鲤在 5~15μg/L 浓度范围, 平均游速明显低于对照组, 在 25~45μg/L 浓度组, 游速随浓度增加而变大可见, 在较低的铜离子浓度条件下, 转基因与非转基因红鲤的游速表现出了明显的差异, 但游速与铜离子浓度并不总是存在正相关汪红军等 (2010) 发现,Cu 2+ 暴露下斑马鱼的呼吸频率和呼吸强度也不是随着 Cu 2+ 暴露浓度的增加而增加, 而是出现先升高再降低的趋势, 但与暴露前相比, 仍然存在极显著差异转基因红鲤与非转基因红鲤的游速变化趋势不一致, 原因有很多种由于转基因鱼转入的外源基因是肌肉生长抑制素前肽基因, 其表达产物能够与肌肉生长抑制素结合, 从而促进转基因鱼肌肉的生长, 因此转基因红鲤的肌肉更加发达无论是体重还是体长, 转基因红鲤都明显高于同龄的非转基因红鲤转基因红鲤在组织代谢能量储存上会比非转基因红鲤更占优势, 这会直接体现在临界游速值上因此, 在正常水环境中, 转基因红鲤的游速明显高于非转基因红鲤而当水环境中存在重金属离子时, 鱼类可能会产生回避行为, 主要表现为平均速度在短时间内突然持续增大, 并且强度明显高于对照组黄东龙和周勤 (2011) 发现在 Zn 2+ 和 Cr 6+ 的突发性胁迫中, 斑马鱼的平均速度在经历第一时间的行为增大并快速增大达到最高点以后, 其行为强度都出现剧烈降低在本试验中, 非转基因红鲤对铜离子的耐受能力低于转基因红鲤, 在 5μg/L

6 2015 年第 1 期沈佳品等, 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响 85 图 7 非转基因与转基因红鲤活动范围的比较 Fig.7 Comparisonoftherangeofactivityindiferenttreatmentsbetweennon transgenicandtransgeniccyprinuscarpio CuSO 4 环境中, 非转基因红鲤的游速就明显高于正转基因红鲤较敏感常水环境中的游速, 也高于转基因红鲤但当铜离子浓度到达 45μg/L 时, 非转基因红鲤的游速明显参考文献下降, 低于其他低浓度组这一结果与黄东龙和周黄东龙, 周勤水体突发性重金属污染胁迫下斑马鱼的勤 (2011) 的发现类似行为反应分析 [J]. 环境监测管理与技术,23(4): 在 CuSO 4 浓度低于 45μg/L 的各试验组, 非转蒋万祥, 田忠景, 陈静, 等微山湖水域重金属分布特基因红鲤与转基因红鲤 Y 值均小于对照组, 且 Y 轴征及水质评价 [J]. 淡水渔业,42(4): 坐标值的变化与铜离子浓度的改变之间没有一定的刘总堂, 李春海, 章钢娅运用主成分分析法研究云南关联性, 表明 CuSO 4 浓度低于 45μg/L 时, 铜离子没湖库水体中重金属分布 [J]. 环境科学研究,23(4):459 有对转基因和非转基因红鲤产生明显的毒性 ; 在 CuSO 4 浓度 45μg/L 的试验组, 转基因红鲤 Y 值仍汤泽源, 薛良义, 胡铭炎利用不同基因转移方法构建小于对照组, 非转基因红鲤 Y 值极显著高于对照转基因红鲤 [J]. 农业生物技术学报,21(1): 组, 表明此时铜离子对非转基因红鲤的行为产生了朱毅, 关小桃, 王晓彬, 等珠海竹银水库入库污染现明显的影响状评估及水环境容量分析 [J]. 生态科学,31(2):93- 在活动范围上,X 轴和 Y 轴坐标位置变化幅 103. 汪红军, 李嗣新, 周连凤, 等种重金属暴露对斑马鱼度, 一般可以体现鱼的行为特征 X 轴坐标值表示呼吸运动的影响 [J]. 农业环境科学学报,29(9):1675 鱼在水平位置的移动距离变化 ( 反映鱼类活动能力 ),Y 轴坐标值表示鱼在竖直方向的位置变化 ( 在 BidarG,PruvotC,GarconG,etal.2009.Seasonalandannu 一定程度上反映鱼类中毒程度, 比如中毒的鱼会在 alvariationsofmetaluptake,bioaccumulation,andtoxicity 水池的底部或水面活动 )(Xuetal,2005) 试验表 intrifoliumrepensandlolium perennegrowinginaheavy 明, 在正常水环境中转基因红鲤 X 值显著大于非转 metal contaminatedfield[j].environmentalscienceand 基因红鲤, 表明转基因红鲤的活动能力更强, 原因是 polutionresearchinternational,16(1): 转入了促进肌肉生长的基因 ; 而在含不同浓度铜离 CarvalhoCdosS,FernandesMN.2008.Efectofcopperonliver 子水环境中, 非转基因红鲤 X 值变化较大, 说明非 keyenzymesofanaerobicglucosemetabolismfromfreshwa 转基因红鲤受铜离子影响比较大各浓度组转基因 tertropicalfishprochiloduslineatus[j].comparativebio 红鲤的 Y 值均小于对照组, 且 Y 轴坐标值的变化与 chemistryandphysiology:parta:molecular& integrative physiology,151(3): 铜离子浓度的改变之间没有一定的关联性, 不能体 HoseiniSM,RajabiesterabadiH,KordrostamiS.2013.Chronic 现转基因红鲤对铜离子浓度变化反应的行为特点 ; exposureofrutilusrutiluscaspicusfingerlingstoambient 非转基因红鲤在低于 45μg/LCuSO 4 的各试验组, copper:efectsonfoodintake,growthperformance,bio 其 Y 值也低于对照组, 与转基因红鲤一样, 其 Y 轴 chemistryandstresresistance[j].toxicologyandindus 坐标值的变化与铜离子浓度的改变之间也没有一定 trialhealth:1-9. 的关联性研究表明低于 45μg/L 时, 铜离子没有 Kuz minavv.2011.theinfluenceofzincandcopperonthela 对转基因和非转基因红鲤产生明显的毒性 ; 在 tencyperiodforfeedingandthefooduptakeincommon 45μg/L 浓度组, 转基因红鲤对铜离子不敏感, 而非 carp,cyprinuscarpiol[j].aquatictoxicology,102(1-

7 86 第 36 卷第 1 期水生态学杂志 2015 年 1 月 2): McIntyreJK,BaldwinDH,MeadorJP,etal.2008.Chemosen sorydeprivationinjuvenilecohosalmonexposedtodis solvedcopperundervaryingwaterchemistryconditions [J].Environmentalscience& technology,42(4): SipesNS,PadilaS,KnudsenTB.2011.Zebrafish:asaninte grativemodelfortwenty firstcenturytoxicitytesting[j]. Birthdefectsresearch:PartC,Embryotoday:reviews,93 (3): TierneyKB,BaldwinDH,HaraTJ,etal.2010.Olfactorytox icityinfishes[j].aquatictoxicology,96(1):2-26. XuJY,MiaoXW,LiuY,etal.2005.Behavioralresponseof tilapia(oreochromisniloticus)toacuteammoniastresmo nitoredbycomputervision[j].journalofzhejianguni versityscienceb,6(8): YadavKK,TrivediSP.2009.Sublethalexposureofheavymet alsinducesmicronucleiinfish,channapunctata[j]. Chemosphere,77(11): ( 责任编辑张俊友 )

8 2015 年第 1 期沈佳品等, 铜离子对转基因和非转基因红鲤行为的影响 87 EfectofCopper(I)ontheBehaviorofTransgenicandNon transgeniccyprinuscarpio SHENJIA pin,xueliang yi (ColegeofMarineSciences,NingboUniversity,Ningbo ,P.R.China) Abstract:Copperisamajorcontaminantinwater,andcanafectthebehaviorandmetabolism offish.cyprinus carpioisacommonornamentalfish,andcapableofadaptingtopoorqualitywater.todate,theefectofcopper (I)onthebehaviorofCyprinuscarpiohasnotbeenreported.AfterestablishingtransgenicCyprinuscarpio,we comparedtheswimmingbehaviorofbothnon transgenicandtransgeniccyprinuscarpiounderdiferentconcentra tionsofcopper(i)ions.theaverageswimmingvelocity(asv)andtherangeofactivityofnon transgenicand transgeniccyprinuscarpioofacontrolgroup(a)andfivetestgroups(b F)withCuSO 4 concentrationsof5,15, 25,35and45μg/Lwerecompared.Theinitialbodylengthandbodyweightofthetransgenictestfishwere(5.31 ±0.64)cmand(3.40±0.55)gand,forthenon transgenicfish,thevalueswere(4 58±0.59)cmand(2.40 ±0.58)g.Theexperimentwascariedoutusingabiologicalearlywarningsystem consistingofanaquarium e quippedwithadigitalcameraandacomputerprogramwasusedtoanalyzetherecordedmotionsoftestfish.analy sisoffishmovementgaveasvandtwodimensionaltrajectories,withthexaxis(cx)representinghorizontalmo tionandtheyaxis(cy)representingverticalmotion.theasvfornon transgenicandtransgeniccyprinuscarpio was,respectively,1.00and1.57bl/s(groupa),1.24and1.07bl/s(groupb),1 61and1.03BL/s (groupc),1 50and1 59BL/s(groupD),1.62and1.61BL/s(groupE),1.25and1.97BL/s(groupF). TheaverageswimmingvelocityoftransgenicCyprinuscarpiowassignificantlyhigherthanthatofnon transgenic Cyprinuscarpiointhecontrolgroups,consistentwiththestrongskeletalmusclesoftransgenicfish.However,at CuSO 4 treatmentlevelsof5μg/land15μg/l,theswimmingvelocityofnon transgenicfishwassignificantlyhigh erthanthatoftransgenicfishanditscontrolgroup(p<0.01),indicatingthattheendurancecapacityofnon transgeniccyprinuscarpiotocopperionwaslowerthanthatofthetransgeniccyprinuscarpio.exceptinthe 35μg/LCuSO 4 group,xcoordinatesfornon transgenicandtransgeniccyprinuscarpioshowedsignificantdifer ences(p<0.01).incontrol,5and25μg/lcuso 4 groups,thexcoordinatesfortransgeniccyprinuscarpiowere significantlyhigherthanthoseofthenon transgenicfishes;whilein15and45μg/lcuso 4 groups,thexcoordi natesfornon transgeniccyprinuscarpioweresignificantlyhigherthanthoseofthetransgenicfishes.theycoordi natesofaltreatmentsfornon transgenicandtransgeniccyprinuscarpio(exceptofthe45μg/lcuso 4 group) werelowerthantheircontrolgroups,butthechangesofyvalueshadnocorelationwithcopperionconcentrations. Incontrol,5,15,25and35μg/LCuSO 4 groups,theycoordinatesoftransgeniccyprinuscarpioweresignificantly higherthanthoseofthenon transgenicgroups;in45μg/lcuso 4 group,theyvalueofnon transgeniccyprinus carpiowasmarkedlyhigherthanthatoftransgenicfishesandcontrolgroup(p<0.01).theseresultsrevealthat copperionafectedthebehaviorofnon transgenicandtransgeniccyprinuscarpioinbothswimmingvelocityand swimmingcoordinates;non transgeniccyprinuscarpiowasmoresensitivetocopperionthantransgenicones. Keywords:copperions;Cyprinuscarpio;transgenic;swimmingvelocity;rangeofactivity

第期黄雪莲等响应面优化绿色木霉菌培养基材料与方法菌种仪器与试剂菌种的活化单因素试验响应面优化试验优化工艺的验证数据处理结果与分析

第期黄雪莲等响应面优化绿色木霉菌培养基材料与方法菌种仪器与试剂菌种的活化单因素试验响应面优化试验优化工艺的验证数据处理结果与分析第卷第期年月食品与生物技术学报响应面优化绿色木霉菌培养基黄雪莲于新仲恺农业工程学院轻工食品学院广东广州利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化通过测量不同营养条件下绿色木霉菌落生长直径研究其生物学特性在单因素实验的基础上选定葡萄糖添加量丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量个因素进行中心组合实验建立二次回归方程并应用响应面分析法进行优化结果表明绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖