第期刘萌等鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究 2!! "! "!!! " "! " &" &"!&! 2!!"! &! "! 在临床急性呼吸道感染患者中支原体感染所占比例最大病毒次之细菌最低在上述病原体中细菌对青霉素和头孢菌素类抗生素敏感支原体对红霉素和螺旋霉素类抗生

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饼铺湛
5 years ago
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1 !" 年 " 月第 & 卷第期首都医科大学学报 ) "!"! & ) & ) & 2)& & )!" &! 基础研究! 鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究刘萌"! 窦云鹏& 谷丽吕& 王一民B 刘颖梅B 安云庆&! 曹彬!"B!!R首都医科大学附属北京朝阳医院感染与临床微生物科北京呼吸疾病研究所"北京 """!"&!R首都医科大学呼吸病学系"北京 """C&&R首都医科大学免疫学系首都医科大学微生态研究中心"北京 """C& BR中日友好医院呼吸与危重症医学科二部"北京 """!C 摘要目的检测急性肺炎患者血清相关生物标志物含量"为建立一种快速鉴别诊断临床急性支原体肺炎病毒性肺炎细菌性肺炎的免疫胶体金检测法提供实验依据方法以临床病原学诊断明确的急性支原体肺炎" 病毒性肺炎" 细菌性肺炎患者 G F " L\bJ 和正常人血清为检测样品" 采用血小板衍生生长因子! 2 杀菌渗透增强蛋白! H 酶联免疫法! -n P -W PP- H - " OZY Ia 检测试剂盒检测上述血清中相关生 2 P H " NLY 物标志物含量结果! 正常人群血清 A 份"急性支原体肺炎患者血清 B 份"病毒性肺炎和细菌性肺炎患者血清 B! 份"其中 PZ& 血清 NLY最大值 ^A" - PZ& 病毒感者患者血清 & 份"细菌感染患者血清份&!! 正常人群血清 L\bJ最大值 ^ """ 2!& 以血清 L\bJ值 """ 2 PZ作为鉴别诊断急性支原体感染的基线值"支原体感染患者阳性检出率为 C& Bi!B& B &病毒 Bi!& B! &!B 以血清 NLY值 A" - PZ作为鉴别诊断急性细菌感染的基线和细菌感染患者出现支原体感染的假阳性率为 i! &病毒感染患者出现细菌感染的假阳性率为 &!!i! & 结论以血清 L\bJ 值"细菌感染患者阳性检出率为 A """ 2 PZ和 NLYA" - PZ作为鉴别诊断不同病原体感染的基线值"对临床急性支原体肺炎病毒性肺炎细菌性肺炎鉴别诊断具有一定意义关键词肺炎& 鉴别诊断& 血小板衍生生长因子& 杀菌渗透增强蛋白中图分类号 X& R! -" A " B - "!!! " C " C " " "! & & B &! Z 5 - " \ `-2 - " b Z " Z ef " f -` P -B " Z ` - P " a- `-r - " N -!"B!! " & ) & & & " 5 & & B & " 5 A & " 5 """!"" &&!" & ) )) " & & & " 5 """C" && &" & ) " A & " & & & " 5 """C" && B" & ) A & & )) " &U M & & E B & " 5 """!C" & && DA ) EA F E2 F g 2 P - H 2 PP- GF F P G F P 2 P2- P -! 5L H RG "! EF 2 G F! L\bJ - H 2 P H ! NLY - F P 2- P G F P 2 P2- P - H - F F - G P H -n P -W PP- H -! OZY Ia P F R H EF G A P P2 P F F - " B P 5L2 - " B! P H - 2- P - 2 -! PH 2- P - - & P 2- P R!! L\bJ F F - G F """ 2 PZ& NLY G F - A" - PZR!& Y - - FH - L\bJGF F - 5L - - """ 2 PZ" F2-5L2- P G C& Bi!B& B " - F5L G F H 2- P - G Bi!& B! R!B Y - - FH - NLYGF F - H - - A"- PZ" F2-2 - G F H 2- P - G A i! " - F H 2 2- P G &R!!i! & R5" " -L\bJ2 H - """ 2 PZ - NLY 2 A" - PZ - - F P L H P - -R 基金项目! 国家自然科学基金项目!A!AB" "国家青年杰出基金项目!AB!"" EF G 22 H - I - J - F -!A!AB" " - I - \ - F ` -I F!AB!"" R F " O P - -rs PR R -" W -vh -S&R P! 网络出版时间!!" T" T"U 网络出版地址!F 2 GGGR -W R- W P R &!RXR!""R "R ""BRF P

2 第期刘萌等鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究 2!! "! "!!! " "! " &" &"!&! 2!!"! &! "! 在临床急性呼吸道感染患者中支原体感染所占比例最大病毒次之细菌最低在上述病原体中细菌对青霉素和头孢菌素类抗生素敏感支原体对红霉素和螺旋霉素类抗生素敏感而病毒感染用上述抗生素治疗无效现有实验室诊断技术存在不能及时准确鉴别诊断上述相关病原体的缺陷临床医生通常多采用经验性抗生素治疗这不仅容易造成抗生素使用不当导致细菌耐药还可因未能及时合理使用抗生素而使某些患者特别是婴幼儿患者病情迅速恶化产生严重后果目前临床常用的血清炎性指标主要包括反应蛋白 &"! "! 和降钙素原 & &!"! - 最初发现急性细菌感染患者血清浓度显著升高后来发现在某些病毒感染患者血清中浓度也显著升高故患者血清浓度升高对急性细菌或病毒感染仅有一定的辅助诊断意义 - 血清浓度升高对临床重症细菌感染的诊断和指导抗生素的合理使用具有重要意义而对临床轻症细菌感染与病毒或支原体感染没有鉴别诊断价值因此在急性呼吸道感染患者血清中找到对不同病原体感染具有鉴别诊断意义的生物标志物建立一种快速简便准确有效的检测方法对指导及时合理使用抗生素有效控制患者病情和减少耐药菌产生有重要意义为此本课题组以临床病原学诊断明确的急性支原体病毒性肺炎细菌性肺炎患者和正常健康人血清为检测样品采用血小板衍生生长因子 " "! " &" 杀菌渗透增强蛋白 &"!&! 2!!"! &! "! 酶联免疫法 2!!22 " 检测试剂盒对上述血清样品中相关生物标志物进行检测材料与方法研究对象和检测样品选择年月至年月北京肺炎监测网病原学诊断明确的门诊或住院成人急性肺炎患者 )) 例其中急性细菌性肺炎患者血清份急性病毒性肺炎患者血清份急性支原体肺炎患者血清份作为检测样品选择首都医科大学年入学新生 ) 岁体检剩余血清 ) 份作为正常对照样品检测方法首先采用! C 悬液芯片技术对部分患者血清样品进行检测寻找具有鉴别诊断意义的候选生物标志物然后采用试剂盒对包括急性肺炎患者和正常对照组人群在内的所有血清样品进行检测试剂盒购自! &! & 公司参照操作说明对血清样品中的浓度进行检测试剂盒购自 & "! "& 公司参照操作说明对血清样品中含量进行检测结果正常健康人群组正常健康人群组血清样品 ) 份检测结果值 ) 2 最大值 2 值 2 最大值 ) 2 急性细菌性肺炎组急性细菌性肺炎患者血清样品份检测结果值 ) 2 其中份血清样品值 2 份血清样品值为 2 值 2 其中份血清样品值 ) 2 份血清样品值为 2 详见表表急性细菌性肺炎患者血清中和 5! 检测结果 ) 5! ) 2 "2 "2 ) ) ) ) ) ) ) " "! " &" 5! &"!&! 2!! "! &! "! 急性病毒性肺炎组急性病毒性肺炎组血清样品份检测结果值 ) 2 其中份血清样品值 2 份血清样品值 2 值份 )) 2 其中份血清样品值 ) 2 份血清样品

3 ) 首都医科大学学报第卷值 ) 2 详见表急性支原体肺炎组急性支原体肺炎组血清样品份检测结果值 ) ) 2 其中份血清样品值 2 份血清样品值 2 值份 2 其中份血清样品值 ) 2 份血清样品值 ) 2 详见表表急性病毒性肺炎患者血清中和 5! 检测结果 ) 5! 2 "2 "2 2 "2 "2 2 "2 "2 ) )) ) ) ) ) ) ) )) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) " "! " &" 5! &"!&! 2!!"! &! "! 表急性支原体肺炎患者血清中和 5! 检测结果 ) 5! 2 "2 "2 2 "2 "2 2 "2 "2 ) ) ) ) ) ) ) ) ))) ) ) ) ) ) ) )) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) ) " "! " &" 5! &"!&! 2!!"! &! "! 讨论血小板衍生生长因子 & 是参与机体组织损伤修复的重要因子 ) 研究发现升高与肺肝骨髓纤维化和动脉粥样硬化等疾病的发生密切相关肺炎支原体反复感染的大鼠肺组织中浓度显著升高并由此导致肺间质纤维化形成的研究报道提示支原体感染与体内水平升高存在一定的相关性杀菌渗透增强蛋白 & & &

4 第期刘萌等鉴别诊断临床急性肺炎病原体感染的血清标志物研究 ) 是一种具有中和内毒素和广谱杀菌作用的阳离子蛋白主要存在于中性粒细胞和黏膜上皮细胞中细菌感染后患者血清 ) 浓度显著升高和 ) 作为一种参与机体组织损伤修复诱导促进组织纤维化形成的细胞因子和一种抗菌蛋白或抗感染生物制剂受到医学界的重视但迄今尚未发现将和 ) 作为一种急性感染生物志志物用以鉴别诊断不同病原微生物感染的研究免疫胶体金检测法是一种快速定性诊断的技术在此基础上制备的免疫胶体金试纸卡检测试剂盒不仅具有快速内诊断的特点还具有测试准确性高操作简便结果容易判读适合在城乡基层医疗单位推广使用的优点建立免疫胶体金检测方法的核心问题是能够找到相关生物标志物并准确获得该生物标记物对相关疾病具有鉴别诊断意义的基线值根据本实验研究结果若以血清值作为鉴别诊断急性支原体肺炎细菌性肺炎病毒性肺炎的基线值则支原体感染患者阳性检出率为鉴于在份急性细菌性肺炎和份急性病毒性肺炎患者血清样品中分别有份和份样品值故上述患者出现支原体感染的假阳性率为该项研究结果表明血清值对急性支原体与细菌病毒感染具有很好的区分度若以血清 ) 值 ) 作为鉴别诊断急性细菌性肺炎与急性病毒性肺炎的基线值则细菌感染患者阳性检出率为 ) 鉴于在份急性病毒性肺炎血清样品中有份血清样品 ) 值 ) 故上述患者出现细菌感染的假阳性率为该项研究结果表明血清 ) 值 ) 对急性细菌和病毒感染具有很好的区分度在本实验中急性支原体肺炎血清样品中有份样品 ) 值 ) 份样品 ) 值 ) 故血清 ) 值 ) 不能作为鉴别诊断急性细菌性肺炎与急性支原体肺炎的基线值鉴于在本实验结果中血清值检测结果即支原体感染患者阳性检出率为已将急性支原体肺炎与急性细菌性肺炎病毒性肺炎有效鉴别区分因此部分急性支原体肺炎患者血清 ) ) 并不影响急性细菌性肺炎与急性支原体肺炎的鉴别诊断根据以上研究结果拟制备的免疫胶体金检测试剂盒包括检测血清含量的测试纸卡 ) 和检测血清 ) 含量的测试纸卡 ) 结果判读标准测试纸卡 ) 检测线处出现一条紫红色条带或测试纸卡 ) 和 ) 检测线处各出现一条紫红色条带鉴定为急性支原体肺炎测试纸卡 ) 检测线处无紫红色条带出现测试纸卡 ) 检测线处出现一条紫红色条带鉴定为急性细菌性肺炎测试纸卡 ) 和 ) 检测线处均无紫红色条带出现鉴定为急性病毒性肺炎用测试纸卡 ) 和 ) 检测正常人血清也会出现上述结果但正常健康人群无肺炎相关临床症状也不会来医院就诊因此不影响本试剂盒在临床上的使用本项研究获得的实验数据为免疫胶体金快速定性检测试剂盒的制备奠定了坚实的基础鉴于研究对象即急性肺炎患者病例数 )) 例和不同病原体感染特别是细菌性肺炎患者病例数例较少有可能影响 ) 鉴别诊断基线值的确定及相关病原体的阳性检出率和误诊率因此需要进一步扩大病例数以获得更为准确的 ) 鉴别诊断基线值及相关病原体的阳性检出率和误诊率参考文献 5 & & & 2) & ) 李福长刘梨平我国抗生素滥用现状及其对策临床合理用药杂志 2 & & & & & & & & ) & & & && & &! 2 & 曾德颖陈燕情汤利芹等降钙素原在儿童下呼吸道感染的应用研究中国医药科学 2& & & )! & &

5 首都医科大学学报第卷 ) ) 2& & & ) 刘健彭东信刘晓晴等肺炎支原体反复感染大鼠肺组织中变化的免疫组织化学研究中国组织化学与细胞化学杂 & "! & & 2 ))! 2! 2 & & &! & & ) ) 2 2 2! & ) & && & " &! & & 2 2 & & & & & & & ) &) ) ) 蒋旭李青竹邱月红等胶体金免疫层析技术研究进展兽医研究 ) 薛天羽赵杨林锦锋等免疫学方法确证人血痕的研究及应用现状中国煤炭工业医学杂志收稿日期编辑慕萌

材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人