广东农业科学 112 2015 年第 20 期 罗氏沼虾胚胎发育观察及温度 对胚胎发育的影响 徐慈浩1 肖锐媛1 木亮亮1 段薛辉1 许爱娱2 潘 淦1 2 1. 华南师范大学生命科学学院 广东 广州 510631 2. 广州市金洋水产养殖有限公司 广东 广州 511447 摘 要 观察罗氏沼虾胚胎发育的形态变化并探究温度对胚胎发育的影响 结果表明 罗氏沼虾胚胎发 育可划分为 8 个阶段 包括受精卵 卵裂期 囊胚期 原肠胚期 前无节幼体期 后无节幼体期 前溞状幼体 期 溞状幼体期 在一定温度下 胚胎发育速度随温度的升高而减少 胚胎发育的最适温度为 30 此时幼 体开口率和孵化率最高 也可以起到节约成本的作用 发育温度和发育时间的回归方程为 y=181.127-9.921x +0.149x2 关键词 罗氏沼虾 胚胎发育 温度 开口率 中图分类号 S917 Q954.4 文献标识码 A 文章编号 1004-874X 2015 20-0112--06 Observation on development of Macrobrachium rosenbergii embryos and influence of temperature on embryonic development XU Ci-hao1 XIAO Rui-yuan1 MU Liang-liang1 DUAN Xue-hui1 XU Ai-yu2 PAN Gan1 2 1. College of Life Science South China Normal University Guangzhou 510631 China 2. Guangzhou Jinyang Aquaculture Co. Ltd. Guangzhou 511447 China Abstract The morphological changes were observed and the effect of temperature on embryonic development of Macrobrachium rosenbergii was studied. The results showed that the embryonic development could be divided into eight stages including fertilized egg stage cleavage stage blastula stage gastrula stage egg nauplius stage egg metanauplius stage protozoea stage and zoea stage. Within a certain temperature range speed of embryonic development decreased with increase of temperature with optimum temperature around 30. At 30 the aperture ratio and hatching rate of larvae were the highest and the cost was less. The regression equation of developmental temperature and development time was described as y=181.127-9.921 x+0.149 x2. Key words Macrobrachium rosenbergii embryonic development temperature aperture ratio 胚胎发育是个体生命活动的起点 通过对胚 胎发育的观察 可以了解虾类部分器官形成的起 点和特点 1-6 也可以了解环境因子对虾类个体 胚胎发育的影响和相关机制 这样可以极大避免 外界不适条件对虾类发育期间的危害 罗氏沼虾 Macrobrachium rosenbergii 又名马来西亚大虾 收稿日期 2015-05-05 基 金 项 目 广 州 市 民 生 科 技 重 大 专 项 计 划 项 目 2 0 1 2 Y 2-0 0 0 1 0 广 东 省 教 育 部 产 学 研 结 合 项 目 2011B090500009 2009B090300100 作 者 简 介 徐 慈 浩 1 9 9 1 - 男 在 读 硕 士 生 E-mail 1820844517@qq.com 通 讯 作 者 潘 淦 1 9 6 6 - 男 硕 士 副 教 授 E-mail pg2829@sina.com 淡水长臂大虾 隶属节肢动物门 Arthropoda 甲 壳纲 Crustacea 十足目 Decapoda 游泳亚目 Natantia 长臂虾科 Palaemonidae 沼虾属 Macrobrachium 它具有个体大 生长快 营养 丰富 易驯养 味道鲜美 养殖周期短 抗病能力 强等特点 是深受国内外养殖者和消费者喜爱的 优质水产养殖品种 7-9 我国于 20 世纪 70 年代从 国外引进罗氏沼虾 目前已经形成了极大的产业 规模 特别是在广东 广西 江苏 浙江 上海 福 建 海南等地进行大量的育苗生产 建立起一定规 模的苗种培育基地 并且在全国开展商品虾规模 化养殖 取得显著的经济效益 10-11 目前 对于罗 氏沼虾胚胎发育已有部分报道 但是大多限于手 绘资料 完整的图片资料还未见详细报道 虾类幼
113 体的质量不仅受亲本的影响, 还受外界环境因素的制约 在虾类胚胎发育和幼体发育的相关报道中, 可见温度在一定程度上影响发育的质量和速 [12-14] 率 胚胎发育的质量直接影响虾苗的培育, 而幼体的培育是制约罗氏沼虾产业发展的一个重要因素, 因此罗氏沼虾的胚胎发育过程是其育苗产业化极为关键的一环 本研究旨在探索罗氏沼虾胚胎发育与温度的关系, 确定适合大规模集约化培育种苗的最适温度 ; 同时在一定的温度条件下, 完整 系统地观察罗氏沼虾胚胎发育各时期的形态学变化并提供完整的图片资料, 完善罗氏沼虾早期生活史的发育数据, 为罗氏沼虾种苗繁育工作提供理论资料和科学依据, 以期能对提高罗氏沼虾种苗质量 增加虾苗存活率等工作起到一定的指导意义 1 材料与方法 1.1 试验材料试验于华南师范大学产学研基地广州金洋水产养殖有限公司进行 严格挑选性状优良的罗氏沼虾亲本, 雄虾体重约 50 g/ 只, 雌虾约 30 g/ 只 从外塘挑选亲本, 在亲本强化车间饲养, 经过一段时间的强化培育后, 待水温达到罗氏沼虾的繁殖温度, 挑选卵巢呈橙黄色并可以清晰看到卵粒的雌虾和螯足呈淡黄色的大个雄虾, 按照 3 1 的雌雄比例放入水泥池, 待亲虾交配后, 挑选抱卵虾进行单独养殖 养殖用水经过净化 过滤等处理, 完全符合国家养殖用水标准 1.2 试验方法 1.2.1 胚胎发育过程的观察亲虾抱卵后, 立即挑选一部分放入水族缸 (60 cm 80 cm 50 cm) 饲养, 水族缸温度保持在 28(±0.5) 抱卵前期 ( 卵裂期 ) 每隔 1 h 取样 1 次, 囊胚期每隔 4 h 取样 1 次, 原肠期每隔 12 h 取样 1 次, 在显微镜和解剖镜下观察并拍照, 直至幼体破膜而出, 每次取样至少取同时期抱卵虾 10 只 整个形态观察过程持续 2 个月, 观察不同批次的胚胎发育过程并记录 1.2.2 不同温度对胚胎发育及幼体开口的影响设置 26 28 30 32 4 个不同的温度梯度处理, 每个温度梯度设 3 个平行 其中 26 为水池净化车间的自然水温, 其他 3 个处理水体均采用加热棒加温至目标温度, 保证在整个胚胎发育期间, 水温波动范围不超过 0.5 每个处理组挑选大小相近 抱卵时间一致的母虾 5 只, 放入 200 L 白桶中进行饲养 饲养期间每天按时投喂饲料并用虹吸的方法去除饲料残渣和排泄物, 清理完毕后换水 1/4, 水桶中放入气石, 维持水体溶氧在 7 mg/l 以上, 按时记录虾卵的颜色变化 破膜时间 孵化率 取在不同水温情况下破膜的罗氏沼虾幼体放入同一温度的水体进行培育, 投喂卤虫无节幼体, 通过观察幼体胸部颜色来判断是否进食, 统计 3 d 内幼体的开口率 1.3 数据处理孵化率为孵化完成时所得到的幼体数量占抱卵量的百分比 有效积温 K [15] 发育阈温度 C [16] 计算公式如下 : K = N (T - C) V 2 T - V VT C = n V 2 -( V) 2 式中,N 为完成某阶段的发育所需时间 (d),t 为发育期间平均水温 ( ),C 为该生物的发育阈温度 ( ),K 为有效积温 ( d),v 为发育速率 (1/ N) 试验数据均用 SPSS 18.0 软件进行分析处理, 使用 Adobe photoshop 3.0 对相关图片进行编辑和调整 2 结果与分析 2.1 罗氏沼虾胚胎发育观察罗氏沼虾生殖期间, 雌虾腹甲变得宽大以保护虾卵, 虾卵之间有母体分泌的粘液使之紧密排列在一起, 附肢上的刚毛结构穿插包围着虾卵, 让虾卵和母体连接更牢固 ; 同时在游动过程中维持虾卵周围溶解氧的浓度, 保证虾卵的活力 在水温 28 的环境条件下, 罗氏沼虾胚胎发育过程长达 20 d 在这一阶段, 虾卵的内部结构持续不断变化, 表面的颜色也发生相应变化, 如图 1( 封二 ) 所示 抱卵初期, 虾卵颜色呈现亮黄色, 随着发育的进行, 逐渐变为橘黄色 浅黄色 浅灰色 深灰色 不同的颜色对应着不同的发育时期 在颜色变为浅黄色时, 肉眼即可看到黑色颗粒状的复眼 ; 在变为深灰色之后, 经短时间培育, 幼体破膜而出, 进入幼 [17] 体发育阶段 参照赵云龙等的胚胎发育分期方法, 对罗氏沼虾胚胎发育各阶段进行划分并详细描述各时期特点如下
114 2.1.1 受精卵未受精之前, 虾卵存在于雌虾头胸部的卵巢内, 呈亮黄色, 卵内的卵黄均匀分布 ( 图 2-1, 封二 ) 罗氏沼虾受精卵表面光滑呈椭圆形, 长径约 0.6 mm, 短径约 0.5 mm, 由母体分泌的粘液和附肢等结构使之紧密粘合在雌虾腹部, 外部由一层卵膜包被, 属于中黄卵 在显微镜下可以看到, 卵黄颗粒均匀紧密地充斥着卵内空间, 约 3 h 后可以看到卵内出现细胞核, 至此受精卵开始进行分裂 ( 图 2-2~3, 封二 ) 2.1.2 卵裂期在卵裂期, 初次卵裂的分裂沟不易观察, 但是在显微镜下可以看到核的分裂 ( 图 2-4, 封二 ); 从第 2 次卵裂开始, 就可以在显微镜下明显看到分裂沟 ( 图 2-5, 封二 ); 经过第 1~7 次卵裂, 受精卵分别变为 2 4 8 16 32 64 128 个细胞 ( 图 2-6~12, 封二 ), 每次卵裂的时间间隔是 2~2.5 h, 到 128 细胞期时, 分裂球呈螺旋状排列在细胞表面, 大小不一, 此时不易计数 ; 再进行一次卵裂, 变为 256 细胞时, 正式进入囊胚期 ( 图 2-13, 封二 ) 2.1.3 囊胚期雌虾排卵大约 1 d 后, 罗氏沼虾胚胎变成 256 分裂球, 此时是进入囊胚期的标志, 随后细胞的分裂速度加快, 分裂球数量很快增加, 胚胎表面细胞大小不一, 排列无序, 形状呈现出多角形, 计数变得更加困难 ( 图 2-14, 封二 ) 2.1.4 原肠胚期雌虾排卵大约 2 d 后, 在显微镜下胚胎边缘会看到极小一块透明区域, 这是原肠胚期开始的标志 ( 图 2-15, 封二 ) 随着发育的进行, 透明区域不断扩大, 靠近透明区域的细胞略显稀疏, 另外一端则排列紧密 从发育开始至此期, 胚胎均呈亮黄色, 这也是分辨发育时期的一个标志 待透明区域变为胚胎 1/6 大小的时候, 胚胎发育进入下一期 2.1.5 前无节幼体期胚胎发育进行到大约 2.5 d, 此时进入前无节幼体期 该阶段胚胎内部透明区域形状略微向下弯曲, 呈现两边厚 中间窄的状态, 空白区域长度大约为胚胎的 1/2( 图 3-4, 彩插一 ) 2.1.6 后无节幼体期雌虾排卵后 4.5 d, 透明区域逐渐扩大, 约为胚胎的 1/5 时, 后无节幼体期发育开始 该期细胞分化进一步加快, 逐渐表现出后期胚胎发育中各组织的分布形态 随着时间的进行, 空白区域大小超过胚胎整体空间的 1/4, 此时透明区域长度已经超过胚胎的 1/2( 图 3-5~6, 彩插一 ) 整个无节幼体发育期, 胚胎外部颜色呈现 橘黄色 2.1.7 前溞状幼体期当胚胎发育进行到约 7.5 d 时, 胚胎空白区域达到胚胎大小的 1/3 在显微镜下可以看到黑色的点, 这就是复眼 刚出现时, 表现为线状 ( 图 3-7, 彩插一 ), 随着发育的进行, 逐渐变为新月形 椭圆形 10 d 时, 可以在空白区域看到罗氏沼虾的尾部开始分化, 复眼呈新月形 ( 图 3-10, 彩插一 ) 待发育到 14 d 时, 空白区域面积已经超过胚胎 1/2, 此时在复眼中线的另一端可以看到心脏间歇性的跳动, 初期跳动缓慢无规律, 后期跳动逐渐增强, 心脏边缘细胞显著大于周围细胞, 呈球状 ; 接着可以明显看到头部中间有一凹陷, 这一阶段复眼呈椭圆形 ( 图 3-14, 彩插一 ) 该时期胚胎颜色由浅黄逐渐向灰色转变, 整体表现为浅灰色 2.1.8 溞状幼体期这一时期的胚胎颜色由灰色逐渐变为深灰色 待胚胎发育到约 16 d 时, 可以看到复眼周围出现放射状的黑色线状结构, 且尾部尖端已经超过复眼, 空白部分面积达到胚胎的 2/3 ( 图 3-16, 彩插一 ), 此时复眼为椭圆形 待发育到 18 d 时, 复眼接近圆形, 此时卵黄组织进一步被分解 吸收, 空白部分达到胚胎的 4/5( 图 3-18, 彩插一 ) 发育到约 20 d 时, 可以明显看到胚胎内部的运动, 罗氏沼虾幼体准备破膜而出 观察发现, 最先破膜的是尾部, 由尾部尖端刺破卵膜, 最后头部出来, 整个过程类似于 弹 出 ( 图 3-20~23, 彩插一 ) 2.2 温度对罗氏沼虾胚胎发育的影响通过计算, 罗氏沼虾胚胎发育的阈温度为 13.25, 其胚胎发育的有效积温为 318.75 d 从表 1 可见, 在不同的温度条件下, 罗氏沼虾胚胎发育持续时间表现出明显不同 随着温度的提高, 胚胎发育历时大大缩短,A 组和 D 组相差时间多达 8 d; 从孵化率来看,C 组表现最好,A 组次之,A C 两组之间无显著差异, 与 D 组存在显著差异,D 组孵化率与 B 组无差异, 但是低于其他各组 这可能是由于温度的升高有利于加快胚胎发育的速度, 但是过快的发育速率可能导致胚胎结构分化不够完整, 最终影响罗氏沼虾幼体的孵化率和孵化质量 从罗氏沼虾胚胎的发育温度和发育时间的回归方程 y=181.127-9.921x+0.149x 2 (R 2 =0.989) 中也可以看出, 随着温度的升高, 胚胎发育历时显著减少, 而且减少的幅度由大变小 ( 图 4)
115 表 1 不同温度对罗氏沼虾胚胎发育的影响 处理 温度范围 ( ) 平均温度 ( ) 孵化耗时 (d) 孵化率 (%) A 25.8~26.3 26.05±0.21 25.00±0.36a 87.33±2.58bc B 27.8~28.3 28.03±0.22 20.77±0.34b 84.73±0.85ab C 29.7~30.2 29.98±0.22 19.08±0.17c 89.00±1.83c D 31.6~32.3 31.95±0.31 17.23±0.22d 83.45±2.16a 注 : 同列数据后小写英文字母不同者表示差异显著 (p<0.05), 表 2 同 孵化时间 (d) 26 24 22 20 18 16 图 4 已观测 y=181.127-9.921x+0.149x 2 R 2=0.989 26 28 30 32 温度 ( ) 罗氏沼虾胚胎发育温度和时间的关系 不同温度条件下, 破膜幼体的开口情况不同 ( 表 2) 1 d 和 3 d 时,A 组开口率和 D 组无显著差异 ;2 d 和 3 d 时,A 组和 B 组差异显著 ;B 组和 D 组在前 3 d 差异不显著,C 组和另外 3 组差异显著 其他 3 组在 1 d 开口率均不及 C 组, 这可能是幼体从母虾池进入育苗池, 水温差异引起的 C 组与育苗池水温无差异, 表现最好 ;2 d 和 3 d 开口率均有明显的提高, 在 3 d 时,A D 两组无显著差异,B D 两组无显著差异, 均与 C 组差异显著, 在适应水温后, 各组开口率不如 C 组, 在罗氏沼虾胚 表 2 不同温度下破膜幼体在同一温度下的开口率情况 组别 孵化温度 ( ) 开口率 (%) 1 d 2 d 3 d A 26.05±0.21 6.70±1.14a 62.72±2.51a 82.94±1.94a B 28.03±0.22 8.06±0.52ab 74.09±3.22b 86.36±1.09b C 29.98±0.22 11.47±0.87c 81.84±2.85c 91.28±1.74c D 31.95±0.31 8.96±1.44b 70.45±2.49b 84.36±3.07ab 胎发育期, 水温最适控制在 30 左右, 可以节约成本, 保证破膜幼体质量 3 结论与讨论 3.1 罗氏沼虾胚胎发育分期及特点对于观察总结虾类胚胎发育有着极其重要的作用 不同种类的虾由于发育方式的不同, 其胚胎发育时期的划分方法不同, 但都遵循器官发育和 [18] 结构变化的规律 慕峰等将克氏原螯虾胚胎发育过程主要划分为受精卵 卵裂期 囊胚期 原肠期 前无节幼体期 后无节幼体期 复眼色素期 预备孵化期和孵化期, 胚胎颜色变化为橄榄绿色 灰绿色 灰褐色 棕褐色 红褐色 暗红色 ; 孟 [19] 凡丽等研究红螯螯虾胚胎发育, 将其胚胎发育时期划分为卵裂期 囊胚期 原肠期 前无节幼体期 后无节幼体期 复眼色素形成期及孵化准备期, 胚胎颜色依次为黄绿色 土黄色 桔黄色 桔 [20] 红色 红褐色 ; 吕建林等将红螯螯虾胚胎发育 分为受精卵 卵裂期 囊胚期 原肠前期 出现半圆形内胚层沟 出现圆形内胚层沟 原肠后期 无节幼体前期 无节幼体后期 前溞状幼体期 溞状 [21] 幼体期和后溞状幼体期 ; 梁华芳等将锦绣龙虾胚胎发育分为受精卵 卵裂期 囊胚期 原肠期 膜内无节幼体期 七对附肢期 九对附肢期 十一对附肢期 复眼色素形成期 准备孵化期和孵化 [22] 期, 其卵裂方式为完全卵裂 ; 张彬等将凡纳滨对虾胚胎发育分为受精卵期 卵裂期 囊胚期 原肠期 肢芽期 膜内无节幼体期和出膜幼体期, 其 [23] 分裂方式为完全均等卵裂 ; 朱冬发等将东方扁虾胚胎发育分为卵裂期 囊胚期 原肠胚期 卵内无节幼体期 五对附肢期 胸部附肢发生期 复眼色素形成期 近孵化期和孵化期 9 个阶段 本研究 [17] 主要采用赵云龙等的分期方法, 根据显微镜下所看到的胚胎变化情况, 将罗氏沼虾胚胎发育分为受精卵 卵裂期 囊胚期 原肠胚期 前无节幼体期 后无节幼体期 前溞状幼体期 溞状幼体期 8
116 个阶段, 胚胎外部颜色变化为亮黄色 橘黄色 浅黄色 浅灰色 深灰色, 各时期胚胎颜色也有着明显区别, 是简易分辨发育时期的方法之一 不同种类虾蟹卵裂方式不同, 如克氏原螯虾 东方扁虾 中华绒螯蟹的卵裂方式为表面卵裂 ; 锦绣龙虾则为完全卵裂 本研究罗氏沼虾卵裂方式在显微镜下可明显看出是表面卵裂 同一种类不同大小的雌虾抱卵量也有显著区别, 个体大的明显强于小个体雌虾, 且不同种类虾抱卵量也存在显著差异 本研究中罗氏沼虾抱卵量为 8 000~12 000 粒 有资料显示青虾抱卵量 1 500 粒左右, 红螯螯虾抱卵量为 400~1 400 粒, 而刀额新对虾产卵量高达 10 [24] 万 ~ 40 万粒 罗氏沼虾胚胎发育过程中, 通过显微镜, 最为直观的分辨标准就是复眼和心脏的分化, 在发育到 7 d 时就可以明显观察到眼点的出现, 最初为线状, 随后变为新月形 椭圆形 圆形 ; 胚体呈弯弓状, 空白部分逐渐增大, 随后由发育的尾部逐步伸长, 直至尾节包到头部上方 ; 心脏在发育到 14 d 时可明显看到其跳动, 最初为间隔性跳动, 时间间隔为 2~5 s, 随后跳动慢慢增强, 进入溞状幼体期后, 心脏跳动达到约 200 次 /min, 在显微镜下可以看到肠道的圆形小颗粒的流动 3.2 温度对罗氏沼虾胚胎发育及幼体质量的影响研究发现, 温度与胚胎发育速度密切相关 不同种类虾类的适宜温度和发育周期都存在显著特点, 温度的提高往往能明显加快胚胎发育的速度, 但过度的升高会造成幼体质量的下降, 甚至 [25] 孵化不出幼体 锦绣龙虾在水温 29.2, 盐度 [21] 30, 受精卵经 22~23 d 孵化出叶状幼体 ; 栗 [12] 智国等在脊尾白虾的孵化试验中也发现在温度为 19~31 的水中孵化, 孵化时间随着温度的升高而缩短, 但幼体变态存活率却在 28 达到最高, 随着温度的继续升高, 幼体变态存活率会大大降 [26] 低, 升高到 36, 幼体将无法变态 ; 王桂忠等在人工孵化东方扁虾的实验中也发现了该虾胚胎发育的适宜温度为 22~31,22 下胚胎发育时间为 43 d, 而 31 下则为 21 d, 当温度为 34 时, 1 周后会呈解体状, 温度为 37 时,1~2 d 就完全 [27] 呈解体状 ; 邢克智等研究了温度对青虾胚胎发育的影响, 发现温度为 22 时所用时间最长, 为 429.8 h, 在 32 时所用时间最短, 仅需 220.4 h, 而至 35 时, 则胚胎不能完成整个发育期 在一定温度范围内, 青虾卵的破膜时间也随温度的升高而缩 短 22 时所用时间最长 为 10 h, 在 35 时所用 [28] 时间最短 仅需 5 h; 赵云龙等在探讨温度对红螯螯虾胚胎发育的影响时发现, 在水温 24~30, 红螯螯虾的胚胎均能正常发育, 最适发育水温为 28~30,22 以下或 35 以上胚胎不能正常发育, 温度超过 28 后, 水温越高, 胚胎发育越快, [13] 发育周期越短, 成活率越低 ; 梁俊平等研究发现, 脊尾白虾胚胎发育最佳温度为 22~26, 但不宜超过 30 本试验研究温度对罗氏沼虾胚胎发育及幼体开口率影响时发现, 罗氏沼虾胚胎在 26~32 的情况下均能孵化出幼体, 随着温度增加, 幼体孵化时 [29] 间明显缩短, 这与相关报道吻合, 但从幼体孵化率和开口率来看,30 是比较适合罗氏沼虾胚胎发育的, 温度低于这一数值会增加养殖时间, 造成成本浪费, 温度过高会加快水体中微生物的繁殖, 引起水体变质, 同时升温过程也造成生产成本增加 本研究试验过程中发现部分坏死的胚胎, 可能是胚胎未受精或者是缺氧导致胚胎发育受阻 ( 图 5, 彩插一 ) 坏死的胚胎颜色较正常的深, 肉眼可明显区分 参考文献 : [1] Ha bashy M M,Sha rsha r K M,Hassan M M. Morphological and histological studies on the embryonic development of the freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii(crustacea,decapoda) [J]. The Journal of Basic & Applied Zoology,2012, 65(3):157-165. [2] Yao J J,Zhao Y L,Wang Q,et al. Biochemical compositions and digestive enzyme activities during the embryonic development of prawn,macrobrachium rosenbergii[j]. Aquaculture,20 06,253(1): 573-582. [3] 李红, 王群, 赵云龙, 等. 日本沼虾胚胎复眼发生的研究 [J]. 华东师范大学学报 ( 自然科学版 ),2003 (3):56-60. [4] 孟凡丽, 赵云龙, 陈立侨, 等. 红螯螯虾胚胎发育的研究 :Ⅱ. 消化系统的发生 [J]. 动物学研究,2001,22 (5):383-387. [5] 薛俊增, 郑璐, 陈樟福. 中华新米虾胚胎发育的初步研究 [J]. 杭州师范大学学报 ( 社会科学版 ),1995 (6):79-83. [6] 赵云龙, 王群. 罗氏沼虾胚胎发育研究 :Ⅱ. 原始器官原基形成和消化系统的发生 [J]. 海洋科学,1998
117 (5):42-46. [7] 张国强, 于伟君. 罗氏沼虾人工孵化育苗试验 [J]. 水产科学,1997,16(6):8-11. [8] 潘淦, 许爱娱. 智能型自动化罗氏沼虾繁育车间的研制与应用示范 [J]. 广东农业科学,2012(2): 142-144. [9] 潘淦, 林群, 许爱娱, 等. JY-100 型水产臭氧系统在罗氏沼虾工厂化育苗中的应用 [J]. 广东农业科学, 2011(7):130-131. [10] 杭小英, 叶雪平, 施伟达, 等. 枯草芽孢杆菌制剂对罗氏沼虾养殖池塘水质的影响 [J]. 浙江海洋学院学报 ( 自然科学版 ),2008,27(2):197-200. [11] 冯奇飞, 臧维玲, 戴习林, 等. 罗氏沼虾养殖塘底质硫化物含量及其与其他因子关系的研究 [J]. 广东农业科学,2014(12):175-182. [12] 栗治国, 张成松, 张岩, 等. 温度对脊尾白虾胚胎及幼体发育的影响研究 [J]. 海洋科学,2013,37 (10):9-16. [13] 梁俊平, 李健, 李吉涛, 等. 不同温度对脊尾白虾胚胎发育与幼体变态存活的影 [J]. 生态学报,2013,33 (4):1142-1152. [14] 邹盛希, 李永吉. 温度对青虾胚胎及幼体发育影响的初步观察 [J]. 内陆水产,2002,27(4):15. [15] 刘筠. 中国养殖鱼类繁殖生理学 [M]. 北京 : 农业出版社,1993:67-93. [16] 薛素燕. 中华原钩虾繁殖发育生物学与生态学初步研究 [D]. 青岛 : 中国海洋大学,2013. [17] 赵云龙, 王群. 罗氏沼虾胚胎发育的研究 :I. 胚胎外部结构形态发生 [J]. 动物学报,1998,44(3): 249-256. [18] 慕峰, 吴旭干, 成永旭, 等. 克氏原螯虾胚胎发育的形态学变化 [J]. 水产学报,2007,31(B09):6-11. [19] 孟凡丽, 赵云龙, 陈立侨, 等. 红螯螯虾胚胎发育研究 Ⅰ. 胚胎外部结构的形态发生 [J]. 动物学研究, 2000,21(6):468-472. [20] 吕建林, 龚世园, 李浪平. 克氏原螫虾胚胎发育的初步研究 [J]. 长江大学学报 ( 自然科学版 农学卷 ), 2007,3(4):179-182. [21] 梁华芳, 何建国. 锦绣龙虾人工繁殖和胚胎发育的研究 [J]. 水生生物学报,2012,36(2):236-245. [22] 张彬, 韦嫔媛, 熊建华, 等. 凡纳滨对虾胚胎发育进程及诱导染色体加倍时间确定 [J]. 南方农业学报, 2014,45(4):664-670. [23] 朱冬发, 王桂忠, 李少菁. 东方扁虾胚胎发育的观察 [J]. 水产学报,2000,24(6):494-499. [24] 谢忠明. 淡水经济虾类养殖技术 [M]. 北京 : 中国农业出版社,2002:105-221 [25] Manush S M,Pal A K,Das T,et al. The influence of temperatures ranging from 25 to 36 C on developmental rates,morphometrics and survival of freshwater prawn(macrobrachium rosenbergii)embryos[j]. Aquaculture,2006,256(1):529-536. [26] 王桂忠, 朱冬发, 李少菁. 东方扁虾胚胎发育温比率的初步研究 [J]. 海洋通报,1998(3):5. [27] 邢克智, 刘茂春. 温度对青虾胚胎发育的影响 [J]. 河北大学学报 ( 自然科学版 ),1996,16(5):22-26. [28] 赵云龙, 孟凡丽, 陈立侨, 等. 不同水温对红螫螫虾胚胎发育的影响 [J]. 湖泊科学,2000(1):59-62. [29] Ogasawara Y,Koizumi C.Ecology of prawns and shrimps. Prawns of Japan and the world[m]. CRC Press,2001:29-73. ( 责任编辑崔建勋 )