全 国 兽 医 内 科 学 会 议 交 流 材 料 血 浆 Leptin 激 素 异 常 动 态 变 化 与 奶 牛 亚 临 床 酮 病 的 发 生 有 关 广 西 大 学 何 宝 祥 等 1
一 前 言 1 leptin 2 奶 牛 酮 病 3 本 研 究 的 必 要 性 2
二 材 料 与 方 法 试 验 牛 随 机 选 取 头 均 年 产 奶 量 近 6 吨 的 南 宁 市 某 奶 牛 场 的 16 头 荷 斯 坦 奶 牛 作 为 试 验 对 象, 被 检 奶 牛 的 胎 次 均 为 第 2 胎 饲 养 方 式 相 同, 年 龄 预 产 期 相 近, 被 检 牛 平 均 体 况 5 分 制 评 分 约 占 为 3.0 3
二 材 料 与 方 法 血 样 采 集 于 产 前 10 天 及 产 后 0 2 3 7 14 21 28 35 42 49 56 天 早 上 空 腹 颈 静 脉 采 血, 加 入 盛 有 抑 肽 酶 和 EDTA 二 钠 的 试 管 中, 然 后 立 即 2000 转 /min 离 心 10min,, 分 离 血 浆, 避 免 溶 血 用 于 测 定 Leptin 的 血 浆 样 品 分 装 于 1.5mL 的 EP 管 中, 储 存 于 -20 待 检 ; 其 余 血 浆 样 品 立 即 送 实 验 室 待 检 4
二 材 料 与 方 法 检 测 项 目 测 定 被 检 奶 牛 血 浆 中 的 Leptin 酮 体 葡 萄 糖 和 脂 肪 含 量 Leptin 采 用 放 射 免 疫 法 ; 血 糖 测 定 采 用 邻 甲 苯 胺 法 ; 血 酮 测 定 采 用 水 杨 醛 比 色 法 ; 血 脂 测 定 采 用 香 草 醛 法 5
二 材 料 与 方 法 分 析 内 容 与 数 据 处 理 在 试 验 中, 其 中 一 头 牛 因 淘 汰 而 该 资 料 被 删 除 本 试 验 产 前 10 天 的 血 液 样 品 包 括 产 前 10-4 天 内 采 的 样 品 1 统 计 各 项 指 标 的 检 测 结 果 2 用 SAS 统 计 软 件 进 行 方 差 分 析 和 显 著 性 检 验 和 多 重 比 较 3 分 析 各 指 标 的 动 态 变 化 规 律 6
二 材 料 与 方 法 4 分 析 血 浆 Leptin 水 平 与 酮 体 葡 萄 糖 和 血 脂 含 量 间 的 相 关 性 5 按 照 奶 牛 酮 病 的 判 定 标 准, 划 分 亚 临 床 酮 病 组 和 酮 体 正 常 组, 分 析 各 指 标 在 亚 临 床 酮 病 牛 与 血 酮 正 常 牛 之 间 的 差 异 显 著 性 以 及 每 组 牛 各 指 标 的 变 化 特 点 7
三 结 果 与 分 析 3.1 分 娩 前 后 奶 牛 血 浆 中 Leptin 酮 体 葡 萄 糖 脂 肪 含 量 的 检 测 结 果 及 动 态 变 化 血 浆 Leptin 酮 体 葡 萄 糖 脂 肪 含 量 的 检 测 结 果 见 表 1,, 其 动 态 变 化 曲 线 见 图 1 8
三 结 果 与 分 析 Tale 1 The lood plasma concentration of leptin, ketone odies, glucose and lipids at differient stages etween 10 day efore to 56 days after parturition in 15 dairy cows Day post partum Leptin (ng/ml) Ketone odies(mg/dl mg/dl) Glucose (mmol/l) Total Lipids (g/l) -10 1.47±1.68 1.68 1.48±0.55 aa 4.53±0.49 2.32±0.30 0.30 acdefg 0 1.10±1.26 1.26 a 2.18±0.75 4.24±0.62 2.04±0.37 0.37 a cdefg 2 1.41±1.57 1.57 2.11±0.69 4.34±0.48 1.86±0.33 0.33 acdefg 3 1.17±0.91 a 2.49±0.82 4.22±0.44 2.07±0.57 0.57 acdefg 7 1.40±0.95 0.95 2.53±1.61 4.36±0.40 1.95±0.40 14 1.77±1.23 1.23 2.92±2.03 2.03 4.25±0.80 2.38±0.55 21 1.58±1.40 1.40 4.30±3.69 3.69 B 3.91±0.53 3.09±0.51 0.40 acdefg 0.55 acdefg 0.51 cdeg 28 1.73±1.38 1.38 4.36±3.94 3.94 B 3.93±0.58 3.33±0.69 fg 35 2.15±2.32 2.32 3.89±2.84 3.86±0.55 3.51±0.70 fg 42 2.16±2.25 2.25 3.07±2.36 4.05±0.71 0.71 3.78±0.89 49 1.85±1.79 1.79 2.57±1.78 4.21±0.60 4.01±0.48 0.48 56 2.53±2.21 2.21 3.93±3.82 3.82 4.14±0.79 4.05±0.90 0.90 9
Chart 1 Dynamic changes of plasma levels of leptin(ng/ml) /ml),ketone(mg/dl), glucose(mmol/l)and lipids(g/l) in dairy cows around parturitions 三 结 果 与 分 析 4.5 5 4 concentrations 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 Leptin Ketone Glucose lipids -10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 49 56 Day post partum 10
3.2 血 浆 Leptin 等 指 标 的 动 态 相 关 性 三 结 果 与 分 析 分 析 本 研 究 获 得 的 180 组 血 浆 中 Leptin 血 酮 血 糖 血 脂 含 量 数 据, 其 相 关 性 结 果 见 表 10,, 可 以 看 出 Leptin 与 血 脂 的 相 关 系 数 为 0.276,, 呈 极 显 著 的 正 相 关 P<0.001), 血 酮 与 血 糖 相 关 系 数 为 - 0.438,, 呈 极 显 著 的 负 相 关 (P<0.001), 其 余 各 指 标 间 相 关 性 差 异 不 显 著 (P<0.05) 11
三 结 果 与 分 析 Tale2 Correlations of plasma leptin, ketone odies, glucose, lipids in cows around parturition Item Correlationship Leptin Ketone odies Glucose Sample numer(n (n) 180 180 180 180 Ketone odies Glucose Lipids Corr.. coefficient (r) t value Corr.. coefficient (r) t value Corr.. coefficient (r) t value 0.033 0.441 0.017 0.227 0.276* 3.831-0.438* 6.500 0.105 1.409-0.092 1.233 12
三 结 果 与 分 析 3.3 病 牛 和 正 常 牛 之 间 leptin 等 指 标 的 变 化 特 点 3.3 在 本 研 究 的 被 检 牛 中, 按 照 亚 临 床 酮 病 的 判 定 标 准 共 检 出 亚 临 床 酮 病 牛 3 头, 其 余 12 头 为 血 酮 正 常 牛, 未 检 出 临 床 型 酮 病 牛 依 据 试 验 设 计 分 成 两 组 亚 临 床 酮 病 组 的 血 浆 leptin 血 糖 血 酮 血 脂 的 动 态 变 化 曲 线 见 图 2,, 血 酮 正 常 组 的 见 图 3 13
Charter 2 Dynamic changes of plasma concentrations of 三 结 果 与 分 析 leptin(ng/ml) /ml),ketone(mg/dl), glucose(mmol/l)and lipid(g/l) in cows with suclinical ketosis around parturitions Concentration 8 7.5 7 6.5 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 49 56 Day post partum Leptin Ketone Glucose Lipids 图 注 : 产 后 21 28 28 35 天 的 血 酮 含 量 分 别 为 :10.84: 10.84 11.7011.70 和 8.46mg/dl 14
Chart 3 Dynamic changes of plasma concentrations of 三 结 果 与 分 析 leptin(ng/ml) /ml), ketone(mg/dl) /dl),glucose(mmol/l)and lipid(g/l) in healthy dairy cows around parturitions 4.5 5 4 Concentrations 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 Leptin Ketone Glucose Lipids -10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 49 56 Day post partum 15
三 结 果 与 分 析 两 组 各 指 标 动 态 变 化 比 较 Concentration 8 7.5 7 6.5 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 49 56 Day post partum Leptin Ketone Glucose Lipids levels 4.5 5 3.5 4 2.5 3 1.5 2 0.5 1 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 49 56 Day post partum Leptin Ketone Glucose Lipids 16
四 结 论 我 们 首 次 发 现 亚 临 床 酮 病 组 奶 牛 的 Leptin 血 酮 血 糖 含 量 的 低 频 率 和 血 脂 含 量 的 高 频 率 波 动 变 化, 是 此 期 奶 牛 机 体 对 正 常 能 量 代 谢 调 控 出 现 失 常 的 反 映 产 后 8 周 内 血 浆 Leptin 水 平 动 态 变 化 呈 单 峰 出 现 与 奶 牛 酮 病 的 发 生 有 关 17
奶 牛 产 后 肝 功 能 异 常 出 现 在 血 酮 升 高 之 前 广 西 大 学 何 宝 祥 等 18
1 目 的 了 解 荷 斯 坦 奶 牛 分 娩 前 后 酮 体 等 部 分 血 液 生 化 指 标 以 及 肝 功 酶 等 指 标 的 动 态 变 化 特 征 以 及 各 指 标 间 的 动 态 相 关 性, 为 认 识 酮 病 发 病 机 理 积 累 资 料 19
结 果 表 1 16 头 荷 斯 坦 奶 牛 产 前 10 天 至 产 后 42 天 内 血 酮 血 糖 各 种 蛋 白 含 量 分 娩 ( 天 ) 血 酮 (KET)(mg/ mg/dl) -10 1.48±0.55 0 2.16±0.75 a 血 糖 (GLU)(mg/ mg/dl) 总 蛋 白 (TP) (g/l) 80.98±9.01 9.01 a 67.32±6.50 6.50 59.45±4.30 4.30 a 75.33±11.82 a 2 2.10±0.69 0.69 a 77.07±9.33 a 60.65±3.95 a 白 蛋 白 (ALB) (g/l) 球 蛋 白 (GLO) (g/l) 32.99±2.60 2.60 34.34±7.77 a 32.79±4.67 26.77±6.21 6.21 a 31.47±4.59 4.59 29.16±4.98 a 3 2.47±0.82 a 75.12±8.64 a 64.26±6.49 6.49 a 33.36±4.81 30.90±6.16 a 7 2.43±1.74 a 79.20±6.30 a 63.11±4.45 a 32.03±4.61 31.05±5.11 5.11 a 14 2.83±2.06 2.06 a 76.60±14.20 a 66.75±4.81 21 4.23±3.70 3.70 a 28 4.26±3.96 a 69.90±9.77 9.77 a 67.94±3.24 67.30±4.37 70.39±10.58 a 35 3.82±2.86 2.86 a 67.52±8.01 66.85±4.61 42 3.18±2.37 a 68.66±4.50 73.07±14.37 a 31.46±4.38 4.38 35.15±7.21 31.45±5.82 5.82 36.50±6.90 6.90 33.08±3.52 3.52 34.63±4.23 4.23 34.31±3.65 3.65 34.20±5.94 32.23±5.93 34.35±4.59 4.59 20
图 1 16 头 荷 斯 坦 奶 牛 分 娩 前 后 血 浆 酮 体 葡 萄 糖 蛋 白 和 酶 含 量 的 动 态 变 化 曲 线 Concentrations 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 Day around parturition KET (mg/dl) GLU(10 mg/dl) TP(10 g/l) ALB(10 g/l) GLO(10 g/l) 21
结 果 表 1 16 头 荷 斯 坦 奶 牛 产 前 10 天 至 产 后 42 天 内 血 酮 血 糖 各 种 蛋 白 含 量 分 娩 ( 天 ) 血 酮 (KET)(mg/ mg/dl) -10 1.48±0.55 0 2.16±0.75 a 血 糖 (GLU)(mg/ mg/dl) 总 蛋 白 (TP) (g/l) 80.98±9.01 9.01 a 67.32±6.50 6.50 59.45±4.30 4.30 a 75.33±11.82 a 2 2.10±0.69 0.69 a 77.07±9.33 a 60.65±3.95 a 白 蛋 白 (ALB) (g/l) 球 蛋 白 (GLO) (g/l) 32.99±2.60 2.60 34.34±7.77 a 32.79±4.67 26.77±6.21 6.21 a 31.47±4.59 4.59 29.16±4.98 a 3 2.47±0.82 a 75.12±8.64 a 64.26±6.49 6.49 a 33.36±4.81 30.90±6.16 a 7 2.43±1.74 a 79.20±6.30 a 63.11±4.45 a 32.03±4.61 31.05±5.11 5.11 a 14 2.83±2.06 2.06 a 76.60±14.20 a 66.75±4.81 21 4.23±3.70 3.70 a 28 4.26±3.96 a 69.90±9.77 9.77 a 67.94±3.24 67.30±4.37 70.39±10.58 a 35 3.82±2.86 2.86 a 67.52±8.01 66.85±4.61 42 3.18±2.37 a 68.66±4.50 73.07±14.37 a 31.46±4.38 4.38 35.15±7.21 31.45±5.82 5.82 36.50±6.90 6.90 33.08±3.52 3.52 34.63±4.23 4.23 34.31±3.65 3.65 34.20±5.94 32.23±5.93 34.35±4.59 4.59 22
表 2 16 头 荷 斯 坦 奶 牛 产 前 和 产 后 42 天 内 血 浆 GGT AST AST ALT OCT 活 性 检 测 结 果 分 娩 ( 天 ) GGT(U/L) AST(U/L) ALT*(U/L) OCT(U/L/min) -10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 16.14±5.82 64.77±10.54 a 30.99±10.00 a 7.65±5.72 5.72 a 14.48±7.00 70.93±15.31 a 24.35±1.46 a 10.78±6.02 a 15.97±6.90 78.23±16.61 a 21.96±8.53 9.27±4.71 a 14.74±4.69 4.69 73.04±14.08 a 20.96±8.36 9.13±3.70 3.70 a 19.51±9.74 9.74 a 74.44±17.85 a 21.12±8.73 10.67±3.28 a 24.91±11.51 11.51 a 78.63±11.77 a 25.19±1.62 1.62 a 14.88±5.79 20.73±7.66 7.66 a 70.45±18.04 a 22.05±12.84 13.13±5.88 17.55±6.03 65.55±12.13 a 22.74±10.46 a 11.51±6.57 a 14.54±4.99 4.99 66.85±11.51 a 21.12±15.32 15.32 10.73±4.61 a 13.99±6.19 63.18±12.46 12.46 20.53±9.89 9.21±4.61 a 23
图 2 16 头 荷 斯 坦 奶 牛 分 娩 前 后 血 酮 血 糖 GGT GGT AST ALT OCT 活 性 的 动 态 变 化 曲 线 Concentrations 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 Day around parturition KET (mg /dl) GLU(10 mg/dl) GGT(10 U/L) AST(10 U/L) ALT(10 U/L) OCT(U/L/ min) 24
Tale3 Dynamic relation within plasma ketone and other eight parameters for 16 dairy cows in 10 stages 项 目 OCT ALT AST GGT GLO ALB TP GLU 样 本 数 160 160 160 160 160 160 160 160 KET 0.425 ** -0.137 0.145 0.352 ** 0.103-0.021 0.146 - GLU -0.267 ** GLU ** 0.070-0.040-0.107-0.001-0.094-0.083 TP 0.105 0.010-0.049 0.165 * 0.742 ** 0.132 0.4 93 * * ALB -0.037 0.110-0.066 0.066-0.268 ** -0.552 ** GLO 0.110-0.061 0.009 0.305 ** GGT 0.308 ** 0.029 0.142 AST 0.134 0.026 ALT 0.050 25
结 论 综 合 上 述 结 果, 血 浆 AST GGT GGT OCT ALT 在 产 后 14 天 活 性 异 常 增 高, 在 产 后 21 天 以 后 血 浆 球 蛋 白 相 对 升 高 和 白 蛋 白 降 低 都 出 现 在 酮 体 升 高 之 前, 表 明 肝 脏 功 能 先 出 现 病 理 性 改 变, 然 后 出 现 血 浆 酮 体 升 高, 首 次 揭 示 了 肝 脏 功 能 损 伤 在 前 发 生 酮 病 在 后 的 时 序 特 征, 反 映 了 肝 脏 功 能 与 酮 病 发 病 机 理 之 间 的 联 系 26
隐 性 酮 病 组 和 酮 体 正 常 组 牛 比 较 Concentrations 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 Day around parturition 血 酮 (mg/dl) 血 糖 (10 mg/dl) GGT(10U/ L) AST(10 U/L) ALT(10 U/L) OCT(U/L/ min) Concentrations 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0-10 0 2 3 7 14 21 28 35 42 Day around parturition 血 酮 (mg/dl) 血 糖 (10 mg/dl) GGT(10 U/L) AST(10 U/L) ALT(10 U/L) OCT(U/L/m in) 27