西 北 植 物 学 报 文 章 编 号 枸 杞!" 基 因 克 隆 及 转 化 拟 南 芥 的 研 究 郑 蕊 岳 思 君 王 丽 娟 钱 贻 崧 代 金 霞 宁 夏 大 学 生 命 科 学 学 院 西 部 特 色 生 物 资 源 保 护 与 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室 银 川 南 昌 大 学 转 化 医 学 研 究 院 南 昌 摘 要 以 枸 杞 品 种 宁 杞 号 花 药 为 材 料 采 用 () 技 术 分 离 了 类 *+, 基 因 包 含 完 整 开 放 阅 读 框 -. 的 /0 片 段 碱 基 序 列 与 已 知 基 因 完 全 一 致 运 用 1# # 技 术 构 建 基 因 植 物 过 表 达 载 体 */)2*+, 利 用 基 因 枪 法 将 融 合 有 绿 色 荧 光 蛋 白 1.( 的 过 表 达 载 体 转 入 洋 葱 表 皮 细 胞 将 基 因 定 位 在 细 胞 核 实 时 荧 光 定 量 () 分 析 发 现 基 因 在 花 药 中 优 势 表 达 果 实 中 表 达 量 较 低 在 根 茎 和 叶 中 均 未 检 测 到 其 转 录 本 推 测 基 因 可 能 在 花 药 发 育 过 程 中 起 重 要 作 用 通 过 根 癌 农 杆 菌 介 导 法 将 */)2*+, 转 入 拟 南 芥 ) $ 经 筛 选 获 得 代 抗 性 再 生 植 株 棵 () 鉴 定 有 棵 阳 性 植 株 收 获 代 种 子 经 抗 性 筛 选 获 得 代 抗 性 植 株 棵 () 鉴 定 有 棵 阳 性 植 株 实 时 荧 光 定 量 () 分 析 表 明 在 拟 南 芥 植 株 的 基 因 组 中 正 常 表 达 表 型 观 察 发 现 代 拟 南 芥 花 药 发 育 异 常 花 发 育 迟 缓 果 荚 短 小 无 种 子 进 一 步 表 明 可 能 与 植 物 的 育 性 有 关 该 结 果 为 进 一 步 开 展 枸 杞 遗 传 转 化 深 入 研 究 基 因 在 枸 杞 花 药 发 育 过 程 中 可 能 发 挥 的 调 控 功 能 奠 定 了 基 础 关 键 词 枸 杞 植 物 过 量 表 达 载 体 拟 南 芥 遗 传 转 化 中 图 分 类 号 3 3 文 献 标 志 码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收 稿 日 期 修 改 稿 收 到 日 期 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 年 宁 夏 高 等 学 校 科 学 研 究 项 目 宁 夏 自 然 科 学 基 金 作 者 简 介 郑 蕊 女 博 士 副 教 授 硕 士 生 导 师 主 要 从 事 植 物 基 因 工 程 研 究!"# $%$&'"
期 郑 蕊 等 枸 杞 基 因 克 隆 及 转 化 拟 南 芥 的 研 究 # '# ;$$" ' ' 5 2' # #!" ;5' #"' 2 $#'$# ;$ '5$$# #; 5 # ;;5' 5' ''"#$# # 5$# $ ' ;$;2# '$ " &' "$;2 $ &'&' $#%! " # ;"# 植 物 的 生 殖 器 官 为 动 物 和 人 类 提 供 了 食 物 的 主 要 来 源 花 药 是 植 物 的 雄 性 生 殖 器 官 是 花 粉 发 育 的 场 所 花 药 发 育 过 程 涉 及 到 复 杂 而 精 细 的 生 理 过 程 和 分 子 机 制 对 花 药 及 花 粉 发 育 分 子 机 理 的 研 究 有 重 要 的 理 论 意 义 和 应 用 价 值 *+, 类 转 录 因 子 是 植 物 转 录 因 子 中 最 大 的 家 族 之 一 以 含 有 保 守 的 *+, 结 构 域 为 共 同 特 征 *+, 结 构 域 是 一 段 约 个 氨 基 酸 的 肽 段 包 含 一 系 列 高 度 保 守 的 氨 基 酸 残 基 和 间 隔 序 列 含 单 一 *+, 结 构 域 的 *+, 转 录 因 子 在 维 持 染 色 体 结 构 和 转 录 调 节 上 发 挥 着 重 要 作 用 含 个 *+, 结 构 域 的 *+, 转 录 因 子 在 植 物 体 内 主 要 参 与 次 生 代 谢 的 调 节 和 控 制 细 胞 的 形 态 发 生 含 个 *+, 结 构 域 的 *+, 蛋 白 可 能 在 调 节 细 胞 周 期 中 起 作 用 其 中 *+, 转 录 因 子 是 植 物 中 数 目 最 多 的 一 类 *+, 蛋 白 它 们 以 端 含 有 由 个 *+, 结 构 域 构 成 的 /0 结 合 功 能 域 为 共 同 特 征 /0 结 合 功 能 域 除 特 异 结 合 /0 外 有 时 其 中 的 碱 性 氨 基 酸 可 兼 作 核 定 位 序 列 *+, 具 有 广 泛 的 调 控 功 能 包 括 调 控 次 生 代 谢 细 胞 形 态 发 生 激 素 刺 激 生 长 发 育 环 境 胁 迫 应 答 分 生 组 织 形 成 及 细 胞 周 期 控 制 等 模 式 植 物 拟 南 芥 *+, 家 族 成 员 功 能 研 究 较 多 国 际 上 已 经 报 道 了 数 个 与 拟 南 芥 花 药 发 育 有 关 的 *+, 家 族 基 因 如 与 花 药 内 层 细 胞 的 细 胞 壁 发 育 相 关 影 响 花 药 的 开 裂 基 因 异 常 表 达 导 致 苯 基 丙 酸 类 物 质 合 成 途 径 的 变 化 从 而 影 响 花 粉 壁 的 形 成 和 是 同 源 基 因 在 这 个 基 因 的 双 突 变 体 中 绒 毡 层 过 度 肥 大 导 致 了 花 粉 在 减 数 分 裂 前 发 育 异 常 下 调 表 达 导 致 花 药 绒 毡 层 细 胞 发 育 缺 陷 小 孢 子 降 解 存 活 的 花 粉 粒 缺 失 细 胞 壁 而 产 生 雄 性 不 育 目 前 已 有 许 多 植 物 的 类 *+, 基 因 被 克 隆 并 被 证 明 与 植 物 的 花 药 发 育 有 关 枸 杞 基 因 也 属 于 类 *+, 蛋 白 家 族 成 员 但 关 于 其 生 物 学 功 能 和 表 达 特 性 的 研 究 还 未 见 报 道 本 研 究 分 析 了 该 基 因 的 表 达 特 征 并 构 建 了 其 植 物 过 量 表 达 载 体 通 过 农 杆 菌 介 导 法 转 化 拟 南 芥 验 证 其 功 能 为 进 一 步 转 化 枸 杞 深 入 研 究 该 基 因 在 枸 杞 花 药 发 育 过 程 中 可 能 发 挥 的 功 能 提 供 理 论 依 据 及 前 期 基 础 材 料 和 方 法 材 料 宁 夏 枸 杞 品 种 宁 杞 号 正 常 季 节 生 长 于 宁 夏 育 新 公 司 试 验 田 材 料 的 采 集 参 考 徐 青 等 的 方 法 分 别 采 取 四 分 体 形 成 前 期 四 分 体 早 期 及 四 分 体 后 期 的 花 蕾 花 根 茎 叶 和 果 实 用 0 ($#!% # 北 京 901! 公 司 提 取 总 0 ** < /0 合 成 试 剂 盒 上 海 9 公 司 反 转 录 成 /0 低 温 保 存 备 用 方 法 引 物 设 计 与 合 成 采 用 (" 软 件 在 的 /0 编 码 框 两 侧 设 计 带 有 #, 接 头 的 基 因 特 异 性 引 物 2*+,,.=11110 )001 1 0)0000001)011) ) 00 11) 0110)10 1 = 下 划 线 处 为 #, 接 头 2*+,, = ))0 0))0 110 )00 10111110))0) 1 0)001 0001) 111 = 下 划 线 处 为 #, 接 头 扩 增 特 异 片 段 引 物 由 上 海 生 工 生 物 工 程 公 司 合 成 植 物 过 量 表 达 载 体 ()*+ 的 构 建 及 鉴 定 通 过 () 的 方 法 从 枸 杞 /0 中 分 离 出 含 有 完 整 -. 含 终 止 密 码 子 和 #, 序 列 的 /0 片 段 纯 化 () 产 物 后 利 用 1# # ' $')$ # * 9 试 剂 盒 上 海 9 公 司 进 行,( 反 应 和 反 应 反 应 产 物 转 化 大 肠 杆 菌 /4 北 京 901! 公 司 在, 固 体 培 养 基 含 " # " 4, 上 筛 选 阳 性 克 隆 采 用 () 鉴 定 和 质 粒 酶 切 验 证 重 组 质 粒 */)2*+, 正 确 性 植 物 转 化 载 体 */) 南 京 农 业 大 学 喻 德 跃 教 授 惠 赠 含 有 增 强 型 7)#*< 启 动 子 可 提 高 目 的 基 因 在 受 体 植 物 中 的 表 达 量 洋 葱 表 皮 细 胞 转 化 和,- 检 测 制 备 感 受
西 北 植 物 学 报 卷 态 根 癌 农 杆 菌!40 南 京 农 业 大 学 喻 德 跃 教 授 惠 赠 通 过 冻 融 法 将 重 组 质 粒 */)2 *+,1.( 转 入 农 杆 菌 感 受 态 细 胞 中 在 +!, 固 体 培 养 基 含 " ; "# 平 板 上 筛 选 阳 性 克 隆 进 行 () 鉴 定 制 备 菌 液 通 过 基 因 枪 发 法 转 化 洋 葱 表 皮 细 胞 共 培 养 后 将 洋 葱 表 皮 置 于 载 玻 片 上 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 下 观 察 绿 色 荧 光 蛋 白 在 细 胞 中 的 位 置 用 含 有 * /) 1.( 空 载 质 粒 的 根 癌 农 杆 菌 转 化 洋 葱 表 皮 细 胞 其 1.( 定 位 结 果 作 为 阴 性 对 照.!" 基 因 组 织 特 异 性 表 达 随 机 选 取 株 枸 杞 取 样 后 混 合 分 别 提 取 不 同 时 期 不 同 部 位 总 0 反 转 录 为 /0 以 /0 为 模 板 以 枸 杞 组 成 型 表 达 $ " 基 因 1,# 登 录 号 为 43 为 内 部 参 照 进 行 实 时 荧 光 定 量 ()$ " 基 因 引 物 为 2#.=10)) )00 1)))1) 0 1= 2# = 1))0 )0))0101 ))00)0)= 基 因 引 物 为 2*+,.=0))01 )0 )0))0) ) 1)= 和 2*+, = 1))00 11)10)0 )0=() 反 应 结 束 后 分 析 荧 光 值 变 化 曲 线 以 及 融 解 曲 线 通 过 比 较 ) 的 方 法 进 行 基 因 表 达 水 平 的 相 对 定 量 分 析 每 个 样 品 次 重 复 /!" 基 因 转 化 拟 南 芥 通 过 根 癌 农 杆 菌!40 介 导 法 将 */)2*+, 转 化 拟 南 芥 ) $ 用 于 转 基 因 拟 南 芥 筛 选 的 抗 生 素 为 " 4, 0 转 基 因 拟 南 芥 鉴 定 及!" 表 达 分 析 采 用 沾 花 法 侵 染 拟 南 芥 ) $ 获 得 代 转 基 因 拟 南 芥 种 子 种 子 用 > 升 汞 消 毒 后 在 含 有 " 4, 的 *7 培 养 基 上 进 行 萌 发 将 野 生 型 植 株 及 筛 选 获 得 的 抗 性 植 株 移 栽 至 装 有 蛭 石 的 小 盆 中? 长 日 照 条 件 下 生 长 收 获 代 种 子 用 相 同 的 方 法 对 代 种 子 消 毒 抗 性 筛 选 及 获 得 转 基 因 抗 性 植 株 分 别 取 转 基 因 和 野 生 型 拟 南 芥 叶 片 采 用 ) 0, 法 提 取 基 因 组 /0 利 用 目 的 基 因 特 异 性 引 物 2*+,,. 2*+,, 检 测 基 因 编 码 框 是 否 插 入 拟 南 芥 基 因 组 /0 中 同 时 根 据 植 物 转 化 载 体 上 的 潮 霉 素 抗 性 基 因 # 设 计 引 物 '.=0 111)10)) )1 011= 和 ' =)10 1 0 )1 1)0) = 进 行 阳 性 植 株 的 () 鉴 定 实 验 设 野 生 型 拟 南 芥 /0 为 阴 性 对 照 随 机 选 择 () 鉴 定 为 阳 性 的 转 基 因 植 株 以 花 药 /0 为 模 板 进 行 实 时 荧 光 定 量 () 分 析 转 基 因 拟 南 芥 中 的 表 达 情 况 方 法 同 拟 南 芥 内 参 基 因 01 引 物 序 列 分 别 为 = 0 ) 1)1000111 0 ))0110)= 和 = 110101)10 1)1000 0))1= 1 转 基 因 拟 南 芥 的 表 型 观 察 将 代 及 转 基 因 拟 南 芥 ) $ 及 野 生 型 种 子 消 毒 后 播 种 于 固 体 筛 选 培 养 基 *7 @ " 4, 上 待 野 生 型 及 抗 性 植 株 长 出 片 真 叶 时 移 栽 于 装 有 蛭 石 的 盆 中? 长 日 照 周 期 条 件 下 生 长 观 察 并 记 录 转 基 因 拟 南 芥 的 生 长 发 育 情 况 和 表 型 性 状 结 果 和 分 析!" 基 因 植 物 过 量 表 达 载 体 的 构 建 与 验 证 利 用 1# # 技 术 通 过,( 反 应 和 反 应 构 建 植 物 表 达 载 体 */)2*+, /0 在 */)2*+, 载 体 中 的 结 构 如 图 0 所 示 该 载 体 具 有 A7)#*< 强 启 动 子 可 使 在 转 基 因 植 株 中 组 成 型 表 达 用 $ 酶 切 重 组 质 粒 确 认 目 的 基 因 的 插 入 得 到 了 预 期 的 片 段 图, 表 明 植 物 表 达 载 体 */)2 *+, 构 建 成 功 重 组 质 粒 经 过 测 序 验 证 正 确 性 后 转 入 根 癌 农 杆 菌!40 中 )*+ 亚 细 胞 定 位 蛋 白 序 列 分 析 发 现 2*+, 的 端 具 有 核 定 位 信 号 肽 推 测 2*+, 可 能 位 于 细 胞 核 内 为 验 证 这 一 推 测 利 用 洋 葱 表 皮 细 胞 瞬 时 表 达 系 统 对 2*+, 进 行 亚 细 胞 定 位 研 究 构 建 的 植 物 表 达 载 体 */)2*+,1.( 中 2 *+, 的 ) 末 端 与 1.( 融 合 图 0 质 粒 /0 经 测 序 验 证 后 转 入 根 癌 农 杆 菌 中 采 用 基 因 枪 法 转 化 洋 葱 表 皮 细 胞 7)#*< 组 成 型 启 动 子 能 够 启 动 基 因 在 细 胞 中 表 达 可 通 过 显 微 镜 观 察 报 告 基 因 的 绿 色 荧 光 信 号 来 确 定 2*+, 在 细 胞 中 的 分 布 结 果 显 示 未 与 2*+, 融 合 的 7 1.( 阴 性 对 照 分 布 于 整 个 细 胞 中 图 0 而 2*+,1.( 融 合 蛋 白 定 位 于 细 胞 核 中 图, 说 明 2*+, 是 具 有 细 胞 核 定 位 功 能 的 蛋 白!" 基 因 表 达 分 析 为 了 了 解 基 因 在 枸 杞 不 同 组 织 器 官 及 花 药 四 分 体 发 育 前 后 时 期 的 表 达 模 式 采 用 实
期 郑 蕊 等 枸 杞 基 因 克 隆 及 转 化 拟 南 芥 的 研 究 图 */)2*+, 植 物 表 达 载 体 的 构 建 0*/)2*+, 载 体 中 /0 结 构 示 意 图, 重 组 质 粒 */)2*+, 的 酶 切 验 证 * / */) 空 载 经 $ 酶 切 质 粒 */)2*+, 经 $ 酶 切. )5 ; */)2*+,; $# # ;"# 0/0 55 ; */)2*+,,!& ";"2 #$# " */)2*+, * / */) */)2*+, 图 2*+, 的 亚 细 胞 定 位 0 阴 性 对 照,2*+,1.( 融 合 蛋 白 箭 头 指 示 细 胞 核 位 置. 752$5$# $#$ &#; 2*+, 0 # $,.5; 2*+,1.( ' ##' ; ' 5 $ 5 时 荧 光 定 量 () 进 行 基 因 表 达 分 析 结 果 表 明 基 因 在 枸 杞 花 及 花 药 中 特 异 表 达 在 四 分 体 时 期 表 达 量 较 高 果 实 中 表 达 量 较 低 在 根 茎 及 叶 中 未 检 测 到 转 录 本 图 因 此 推 测 基 因 主 要 在 花 药 发 育 过 程 中 发 挥 作 用. 转 基 因 拟 南 芥 鉴 定 及 表 型 观 察 通 过 根 癌 农 杆 菌 介 导 的 沾 花 法 侵 染 获 得 转 基 因 代 拟 南 芥 代 4, 抗 性 植 株 的 筛 选 方 法 见 转 基 因 植 株 因 为 /0 的 插 入 而 获 得 4, 抗 性 可 在 筛 选 培 养 基 上 正 常 生 长 而 非 转 基 因 植 株 则 会 出 现 黄 化 现 象 最 终 枯 萎 死 亡 将 转 基 因 拟 南 芥 移 栽 至 装 有 蛭 石 的 小 盆 中? 长 日 照 条 件 下 生 长. 转 基 因 拟 南 芥 的 鉴 定 及 表 达 分 析 随 机 选 择 具 有 潮 霉 素 抗 性 的 代 转 基 因 拟 南 芥 提 取 叶 片 /0 进 行 () 检 测 确 定 目 的 基 因 插 入 植 株 的 基 因 组 /0 中 使 用 的 基 因 特 异 引 物 为 2*+,,. 2*+,, 图 基 因 在 枸 杞 不 同 组 织 器 官 的 实 时 荧 光 定 量 () 分 析 四 分 体 形 成 前 期 花 药 四 分 体 早 期 花 药 四 分 体 后 期 花 药 花 青 果 红 果 根 茎 叶. #$" () ##$ ; % ;5##;$;2 0 '2 ; #0 ' ; # $ #0 ' ;$# #.$ 6; 5; 5 7" #;
西 北 植 物 学 报 卷 以 野 生 型 拟 南 芥 /0 为 模 板 的 () 作 为 阴 性 对 照 阳 性 转 基 因 植 株 样 品 中 得 到 一 条 大 小 为 2 的 条 带 阴 性 对 照 中 没 有 条 带 图 0 同 时 用 潮 霉 素 抗 性 基 因 4 的 特 异 性 引 物 进 行 () 阳 性 转 基 因 植 株 中 得 到 长 度 为 2 扩 增 片 段 阴 性 对 照 中 没 有 条 带 图, 为 了 分 析 基 因 在 转 基 因 植 株 中 的 表 达 情 况 随 机 选 择 () 鉴 定 为 阳 性 的 株 代 转 基 因 拟 南 芥 进 行 #$" () 同 时 以 野 生 型 植 株 作 为 对 照 结 果 表 明 在 7)#*< 启 动 子 作 用 下 基 因 可 以 在 转 基 因 拟 南 芥 中 稳 定 表 达 但 表 达 水 平 有 所 差 异 图. 转 基 因 拟 南 芥 表 型 性 状 分 析 先 后 对 * /)2*+, 转 基 因 拟 南 芥 代 植 株 进 行 表 型 性 状 观 察 发 现 在 棵 代 植 株 中 有 棵 植 株 生 长 矮 小 花 药 及 角 果 发 育 异 常 棵 代 植 株 有 棵 发 育 异 常 表 现 有 不 育 现 象 与 野 生 型 拟 南 芥 图 0 )! 相 比 代 植 株 中 转 基 因 植 株 无 花 药 或 花 药 瘪 小 花 药 开 裂 后 无 花 粉 释 放 图, 花 发 育 时 间 异 常 同 一 植 株 上 部 已 有 长 角 果 而 植 株 下 部 花 发 育 迟 缓 或 停 止 发 育 图 / 果 荚 短 小 无 种 子 呈 现 不 育 图. 这 些 表 型 性 状 都 是 可 稳 定 遗 传 的 讨 论 类 *+, 基 因 是 *+, 蛋 白 家 族 中 最 大 的 亚 家 族 之 一 在 植 物 特 定 的 生 理 过 程 中 发 挥 着 重 要 的 作 用 已 经 研 究 证 明 的 一 些 *+, 蛋 白 如 0 *+, 0 *+,0 *+, 0 *+,0 *+, 0 *+,0"*+, 0"*+, 1'*+, 和 ( *+, 等 端 都 含 有 由 两 个 *+, 结 构 域 构 成 的 /0 结 合 功 能 域 都 具 有 保 守 的 8*//98 基 序 本 研 究 从 枸 杞 宁 杞 号 中 分 离 出 基 因 蛋 白 序 列 分 析 发 现 该 基 因 编 码 的 蛋 白 也 具 有 类 *+, 蛋 白 的 特 征 在 编 码 蛋 白 的 端 有 一 个 核 定 位 信 号 肽 推 测 该 蛋 白 定 位 于 细 胞 核 内 构 建 了 基 因 植 物 表 达 载 体 利 用 洋 葱 表 皮 细 胞 瞬 时 表 达 系 统 进 行 蛋 白 质 亚 细 胞 定 位 证 实 了 这 一 推 图 */)2*+, 转 基 因 拟 南 芥 的 () 鉴 定 * / 8 野 生 型 阴 性 对 照 转 基 因 植 株.();#; */)2*+, # $# * / 8 8 $ ##$# 图 基 因 在 转 基 因 拟 南 芥 中 的 实 时 荧 光 定 量 () 分 析 不 同 的 转 基 因 植 株 8 野 生 型 拟 南 芥. #$" () ##$ ; % # #$#88 $ 图 */)2*+, 转 基 因 拟 南 芥 ) $ 的 表 型 性 状 0 )! 野 生 型, /.*/)2*+, 转 基 因 植 株.02"#$" ' $; */)2*+,# $# 0)! 8 $,/.*/)2*+,#$#
期 郑 蕊 等 枸 杞 基 因 克 隆 及 转 化 拟 南 芥 的 研 究 测 说 明 2*+, 是 具 有 细 胞 核 定 位 功 能 的 蛋 白 实 时 荧 光 定 量 () 分 析 表 明 基 因 在 枸 杞 的 花 和 花 药 中 优 势 表 达 果 实 中 也 检 测 到 转 录 本 但 表 达 量 较 低 其 它 类 *+, 基 因 也 具 有 类 似 的 表 达 特 性 如 拟 南 芥 和 基 因 棉 花 基 因 主 要 在 花 中 表 达 在 花 药 发 育 过 程 中 受 调 控 由 此 推 测 可 能 在 花 药 的 发 育 过 程 中 有 重 要 的 作 用 在 拟 南 芥 中 基 因 的 突 变 引 起 花 药 发 育 异 常 绒 毡 层 细 胞 发 育 有 缺 陷 小 孢 子 降 解 存 活 的 花 粉 粒 缺 失 细 胞 壁 导 致 雄 性 不 育 过 量 表 达 引 起 转 基 因 植 株 花 异 常 产 生 异 常 的 花 粉 粒 花 药 不 能 裂 开 散 粉 棉 花 基 因 在 拟 南 芥 中 的 过 量 表 达 导 致 花 畸 形 雄 蕊 花 丝 短 化 花 药 不 开 裂 少 有 成 熟 的 花 粉 粒 形 成 本 研 究 将 编 码 框 全 长 与 7)#*< 组 成 型 启 动 子 相 连 转 化 拟 南 芥 ) $ 在 转 基 因 拟 南 芥 中 检 测 到 的 转 录 产 物 说 明 已 在 拟 南 芥 中 异 源 表 达 与 野 生 型 相 比 在 棵 代 和 棵 代 转 基 因 植 株 中 分 别 有 棵 和 棵 植 株 生 长 矮 小 出 现 了 无 花 药 或 花 药 瘪 小 花 药 开 裂 后 无 花 粉 释 放 现 象 其 中 还 发 现 花 发 育 时 间 异 常 同 一 植 株 上 部 已 有 长 角 果 而 植 株 下 部 花 发 育 迟 缓 或 停 止 发 育 部 分 角 果 短 小 果 荚 内 无 种 子 呈 现 不 结 实 现 象 结 合 基 因 组 织 器 官 表 达 特 征 及 表 型 推 测 枸 杞 可 能 与 花 药 的 发 育 与 花 粉 的 形 成 有 关 在 绒 毡 层 发 育 及 小 孢 子 的 成 熟 过 程 中 可 能 发 挥 重 要 作 用 但 其 中 的 具 体 机 制 还 有 待 进 一 步 探 讨 需 借 助 枸 杞 转 化 体 系 以 及 相 应 枸 杞 突 变 体 从 不 同 方 面 对 枸 杞 花 药 和 果 实 发 育 进 行 深 入 的 研 究 参 考 文 献 70)! 8!,! *%!' *+, ;#" $!" :(&%")"" "*! "! #. )4! ++01 B4! %!' *+,#;# 5 ;#" $;0 #2% ##$#' $ " # ' ' *+,;#" $:*! "!%$&!! #0-797 9:00 )4!+ 8 * $5$#$5; ' * 2;#" $;#;#;$' $ : + & "!,!%$&! -!&".0 7!9!01!76!67!) 7!9 %! / 5 ;!" 5$ "#$$5 ' # ':. %*! "+ & "!. (!7 -:84!!! :4!0!8--/:%!5;"#$$ $"!" :. %*! "+ & "!. *90 0 016,!.' 0 #2##" 0 5$#'#5 # $ ;#$## '$" :*! "(%!1 401,46:10-:.%! #;#0 *+, 5;# '$"25$## 5"$ " #$$5 #%;"#0 #2:. %*! "+ & "!/ B6 3 徐 青 39 秦 垦 %! ) $#$ ## '$" ;#"#$$ # ;$ $$ &'&' :+ & "!,/ "#01" -% # 5 #$7! 宁 夏 大 学 学 报 自 然 科 学 版 )' 9<0 :7)4*91! / 0#$ ;$#%# #5 #$"5# #() #' / $ #/ $ #) "' :% / 9:1+01 B +801 +%! 5 ;*+,#;#'##" ; '' '# # ## # :$%' $! " $! %%$ ( ''&" $ ". +9 + 尹 跃 )0- + 曹 有 龙 )4! B: 陈 晓 静 %!, ;"###$ ;*+,#;# $;2 :/% " $&!& % 北 方 园 艺 )' 749,)4-91+94%! # #;$ ;#;# 5$# 2 ()* :. %*! " + & "! +01B+ 9:1(!9*%! -%;#;$ ;#;# #5 #2 # # '$ " :*! "(%! %0 )4!1 47-177B90-%! 1 22 $ #'5 ' # " # $ '%; # " #" ; $#" ' :* %"% $/ +01 :90:/6 * %! 0 " 2$ #;# ;#$%$ #$ 5$#;$## '$ $" :*! " " (%!*! # /. 编 辑 宋 亚 珍