浙 江 大 学 化 学 工 程 与 生 物 工 程 学 系 硕 士 学 位 论 文 混 合 模 式 吸 附 层 析 分 离 猪 血 免 疫 球 蛋 白 研 究 姓 名 : 庄 甜 甜 申 请 学 位 级 别 : 硕 士 专 业 : 化 学 工 程 指 导 教 师 : 林 东 强 20100101

混 合 模 式 吸 附 层 析 分 离 猪 血 免 疫 球 蛋 白 研 究 作 者 : 庄 甜 甜 学 位 授 予 单 位 : 浙 江 大 学 化 学 工 程 与 生 物 工 程 学 系 相 似 文 献 (4 条 ) 1. 期 刊 论 文 庄 甜 甜. 夏 海 锋. 林 东 强. 姚 善 泾.ZHUANG Tiantian.XIA Haifeng.LIN Dongqiang.YAO Shanjing 混 合 模 式 吸 附 层 析 从 猪 血 浆 中 分 离 免 疫 球 蛋 白 - 化 工 学 报 2010,61(2) 混 合 模 式 吸 附 层 析 是 一 种 新 型 的 生 物 分 离 方 法, 通 常 结 合 了 静 电 和 疏 水 相 互 作 用, 具 有 非 盐 依 赖 的 吸 附 特 性, 在 高 盐 和 低 盐 条 件 下, 都 可 以 高 效 吸 附 目 标 蛋 白. 本 文 将 混 合 模 式 吸 附 用 于 从 猪 血 浆 中 分 离 免 疫 球 蛋 白, 首 先 比 较 了 不 同 沉 淀 法 从 猪 血 浆 中 去 除 纤 维 蛋 白 原, 确 定 了 最 佳 硫 酸 铵 沉 淀 条 件 ; 进 一 步 考 察 了 混 合 模 式 吸 附 剂 对 猪 血 免 疫 球 蛋 白 的 静 态 和 动 态 吸 附 性 能, 确 定 了 吸 附 和 解 吸 条 件 ; 最 后 采 用 混 合 模 式 吸 附 层 析, 从 硫 酸 铵 沉 淀 的 上 清 液 中 直 接 分 离 免 疫 球 蛋 白, 得 率 为 11.5 mg ml~(-1) 血 浆,SDS-PAGE 凝 胶 图 像 分 析 纯 度 达 到 77.4%, 为 猪 血 资 源 的 综 合 利 用 提 供 了 新 方 法. 2. 学 位 论 文 何 瑜 芳 混 合 模 式 层 析 及 其 用 于 卵 黄 抗 体 分 离 纯 化 研 究 2007 混 合 模 式 吸 附 层 析 技 术 (Mixed-mode adsorption chromatography) 是 近 年 来 发 展 的 一 种 新 型 生 化 分 离 技 术. 混 合 模 式 吸 附 剂 的 功 能 配 基 同 时 含 有 疏 水 基 团 和 离 子 交 换 基 团, 兼 具 疏 水 作 用 和 静 电 相 互 作 用, 可 以 通 过 静 电 相 吸 来 强 化 吸 附 或 静 电 排 斥 来 协 助 解 吸. 另 外, 配 基 密 度 通 常 比 较 高, 具 有 典 型 的 耐 盐 吸 附 特 性, 可 以 不 需 要 调 节 原 料 液 的 离 子 强 度 直 接 层 析 分 离, 减 少 分 离 步 骤, 提 高 分 离 效 率. 本 文 重 点 研 究 了 两 种 混 合 模 式 吸 附 剂 -Streamline Direct HST 和 :MEP HyperCel, 考 察 了 模 型 蛋 白 的 吸 附 规 律 和 影 响 因 素, 探 讨 了 相 关 的 吸 附 机 理, 并 将 混 合 模 式 吸 附 层 析 应 用 于 卵 黄 抗 体 的 分 离 纯 化, 达 到 了 较 好 的 分 离 效 果. 主 要 内 容 可 分 为 以 下 四 个 方 面 :(1) Streamline Direct HST 对 模 型 蛋 白 的 静 态 吸 附. 以 牛 血 清 白 蛋 白 (BSA) 和 牛 血 红 蛋 白 为 模 型 蛋 白, 考 察 ph 和 盐 浓 度 对 Streamline Direct HST 吸 附 蛋 白 质 的 影 响. 结 果 表 明,Streamline Direct HST 对 蛋 白 质 的 吸 附 随 ph 的 变 化 而 变 化, 存 在 最 适 ph 使 得 吸 附 容 量 最 大, 蛋 白 质 分 子 体 积 的 变 化 在 一 定 程 度 上 会 影 响 吸 附 容 量. 当 蛋 白 质 与 吸 附 剂 存 在 静 电 吸 引 作 用 时, 吸 附 过 程 由 静 电 相 互 作 用 主 导, 吸 附 等 温 线 符 合 Langmuir 吸 附 方 程 ; 当 存 在 静 电 排 斥 作 用 时, 吸 附 等 温 线 则 呈 现 典 型 的 多 分 子 层 吸 附 模 式.(2)Streamline Direct HST 分 离 卵 黄 抗 体. 结 果 表 明, 在 ph4-6 范 围 内 StreamlineDirectHST 对 卵 黄 稀 释 液 中 大 多 数 蛋 白 质 都 有 较 强 的 吸 附 能 力, 盐 浓 度 对 卵 黄 抗 体 吸 附 的 影 响 很 小, 改 变 ph 可 以 实 现 蛋 白 质 洗 脱. 由 于 StreamlineDirect HST 对 卵 黄 抗 体 的 选 择 性 不 高, 通 过 改 变 上 样 ph 和 洗 脱 条 件 难 以 实 现 卵 黄 抗 体 的 有 效 分 离.(3)MEP HyperCel 对 模 型 蛋 白 的 静 态 吸 附. 以 溶 菌 酶 和 BSA 为 模 型 蛋 白,HCIC 吸 附 剂 MEP HyperCel 对 蛋 白 质 的 吸 附 呈 现 复 杂 的 规 律.MEPHyperCel 在 ph 6-12 间 对 溶 菌 酶 都 有 吸 附, 吸 附 容 量 随 着 ph 的 增 加 而 增 加. 结 果 表 明,pH 是 影 响 MEP HyperCel 吸 附 蛋 白 质 的 主 要 因 素.MEPHyperCel 对 蛋 白 质 吸 附 能 力 强, 可 能 造 成 洗 脱 困 难, 实 验 中 无 法 实 现 MEPHyperCel 对 血 红 蛋 白 的 有 效 洗 脱.(4):MEP HyperCel 分 离 卵 黄 抗 体. 结 果 表 明 MEP HyperCel 对 卵 黄 抗 体 具 有 良 好 的 吸 附 选 择 性. 通 过 分 离 条 件 的 优 化,MEP HyperCel 一 步 分 离 卵 黄 抗 体 纯 度 达 到 95% 以 上.MEP HyperCel 吸 附 具 有 耐 盐 特 性, 因 此 可 以 与 盐 析 过 程 相 结 合, 盐 析 沉 淀 重 新 溶 解 后 直 接 MEP HyperCel 层 析 分 离, 电 泳 分 析 IgY 纯 度 可 达 到 99.8%, 实 现 了 卵 黄 抗 体 的 高 效 分 离. 通 过 本 文 研 究, 揭 示 了 典 型 混 合 模 式 吸 附 剂 吸 附 蛋 白 质 的 一 些 规 律, 为 开 发 新 型 混 合 模 式 吸 附 剂 和 分 离 过 程 优 化 提 供 了 有 益 的 指 导. 采 用 疏 水 性 电 荷 诱 导 层 析 介 质 MEP HyperCel, 实 现 了 卵 黄 抗 体 分 离 的 高 效 分 离, 单 步 纯 化 因 子 高, 为 进 一 步 抗 体 分 离 的 应 用 打 下 了 一 定 基 础. 3. 期 刊 论 文 姚 善 泾. 高 栋. 林 东 强.YAO Shanjing.GAO Dong.LIN Dongqiang 一 种 新 的 生 物 分 离 方 法 混 合 模 式 吸 附 层 析 - 化 工 学 报 2007,58(9) 混 合 模 式 吸 附 层 析 是 一 种 新 型 的 生 物 分 离 方 法, 其 功 能 配 基 兼 有 两 种 或 两 种 以 上 的 作 用 模 式, 主 要 为 静 电 和 疏 水 相 互 作 用. 在 低 盐 和 高 盐 条 件 下, 都 可 以 实 现 对 目 标 物 的 有 效 吸 附, 具 有 明 显 的 耐 盐 吸 附 的 特 性, 可 避 免 对 料 液 的 额 外 预 处 理, 从 而 提 高 分 离 效 率, 减 少 分 离 成 本, 已 获 得 一 定 的 应 用. 本 文 对 混 合 模 式 吸 附 技 术 的 发 展 历 程 类 型 及 应 用 现 状 等 进 行 综 述, 以 推 动 该 技 术 的 发 展 和 进 一 步 应 用. 4. 会 议 论 文 庄 甜 甜. 夏 海 峰. 林 东 强. 姚 善 泾 从 猪 血 中 分 离 纤 维 蛋 白 原 和 免 疫 球 蛋 白 研 究 2008 猪 血 中 富 含 蛋 白 资 源, 如 纤 维 蛋 白 原 免 疫 球 蛋 白 等, 具 有 重 要 的 医 药 价 值, 开 发 合 适 的 分 离 工 艺, 提 取 高 附 加 值 的 蛋 白 产 品, 具 有 良 好 的 应 用 前 景 本 文 在 比 较 了 不 同 沉 淀 法 的 基 础 上, 得 到 了 优 化 的 从 猪 血 浆 中 分 离 纤 维 蛋 白 原 的 分 离 工 艺, 同 时 采 用 了 新 型 混 合 模 式 吸 附 剂 MEP hypercel, 对 硫 酸 铵 沉 淀 上 清 液 中 的 免 疫 球 蛋 白 和 血 清 白 蛋 白 进 行 了 层 析 分 离, 得 到 了 纯 度 >70% 的 免 疫 球 蛋 白, 这 些 工 作 和 结 果 为 猪 血 资 源 的 综 合 利 用 提 供 了 新 思 路 本 文 链 接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/thesis_y1647466.aspx 授 权 使 用 : 中 山 大 学 (zsdx), 授 权 号 :834fccd6-6804-422c-8a8d-9e2c01586b4e 下 载 时 间 :2010 年 11 月 12 日