BEIJING DAIRY CATTLE CENTER 奶 牛 常 规 冻 精 及 性 控 冻 精 的 人 工 授 精 操 作 要 点 ----------- 培 训 班 刘 振 君 ----- 年 ---- 月 ---- 日
主 要 内 容 : 一 常 规 冻 精 配 种 的 操 作 要 点 二 性 控 冻 精 使 用 的 操 作 要 点
1.1 合 格 的 冷 冻 精 液 A 外 观 : 封 口 严 密, 无 破 损 和 裂 痕, 标 记 规 范 清 晰 B 剂 型 剂 量 : 分 为 0.25 毫 升 的 微 型 管 和 0.5 毫 升 的 中 型 管 剂 量 0.18 毫 升 为 合 格 C 活 力 : 35% 为 活 力 合 格 即 通 过 显 微 镜 检 查 要 有 35% 以 上 的 精 子 呈 直 线 前 进 运 动 D 每 一 剂 量 中 直 线 前 进 运 动 精 子 数 : 800 万 个 E 存 活 率 :4 小 时 活 率 1% 即 精 液 解 冻 后 在 37 恒 温 水 浴 中 4 小 时 后 活 力 1% 为 合 格 F 畸 形 率 : 18% 为 畸 形 率 合 格 染 色 后 观 察 G 顶 体 完 整 率 : 40% 为 合 格 染 色 H 细 菌 菌 落 数 : 1000 个 即 1 支 细 管 经 48 小 时 37 培 养 后 其 生 长 的 细 菌 菌 落 数 1000 个
1.2 使 用 液 氮 罐 的 基 本 知 识 液 氮 罐 刚 充 入 液 氮 后, 暂 时 出 现 结 霜 或 水 珠, 属 正 常 现 象, 约 4 个 小 时 后, 结 霜 或 水 珠 会 蒸 发 消 失, 说 明 罐 子 良 好, 可 以 使 用 运 输 途 中 应 将 液 氮 罐 放 稳, 防 止 剧 烈 颠 簸, 碰 撞, 倾 倒 快 速 判 断 罐 的 保 温 性 能 :
1.3 冻 精 取 用 和 解 冻 在 提 取 冻 精 时, 不 能 将 冻 精 提 桶 提 到 距 罐 口 3cm 以 上, 时 间 应 在 6s 左 右, 若 超 过 6s 时 应 将 分 装 提 桶 放 回 液 氮 罐 内, 然 后 再 提 起 取 出, 以 保 持 冻 精 的 冷 度 本 次 需 用 的 冻 精 取 出 后 置 38-40 的 温 水 中 快 速 解 冻, 然 后 再 加 以 保 温, 并 在 最 短 时 间 内 将 精 液 输 入 母 牛 子 宫 内
1.5 输 精 操 作 要 点 和 注 意 细 节 1.5.1 器 械 的 卫 生 ( 枪, 细 管 剪 等 ) 使 用 以 后, 应 清 洗, 烘 干 消 毒 输 精 塑 料 外 套 管 一 牛 一 根, 不 能 重 复 使 用 1.5.2 冻 精 的 处 理 精 液 的 取 用 ( 镊 子 6 秒 限 制 ) 新 购 的 精 液 或 使 用 一 段 时 间 要 定 期 镜 检, 活 力 差 则 不 能 使 用 1.5.3 解 冻 先 甩 一 下, ( 干 毛 巾 或 纸 巾 擦 干, 防 水 进 入 剪 口 后 的 细 管 中, 引 起 渗 透 压 的 改 变 ), 解 冻 时 避 免 接 触 阳 光, 一 切 化 学 药 品 ) 细 节 决 定 成 败
1.5 输 精 操 作 要 点 和 注 意 细 节 1.5.4 剪 口, 用 专 业 细 管 剪, 剪 去 不 带 棉 塞 的 一 端 封 口, 剪 去 头 的 细 管 口 要 圆 齐 ( 防 止 精 液 旁 流 ) 1.5.5 装 枪 ( 安 装 时 严 禁 与 未 经 消 毒 的 物 品 或 用 手 接 触 塑 料 外 套 前 端 ) ; 且 装 好 精 液 细 管 的 输 精 枪 要 保 温, 避 免 温 度 变 化 过 大 ; 使 用 软 外 套 1.5.6 在 去 牛 舍 的 过 程 中, 输 精 枪 放 于 工 作 服 内, 要 随 时 保 护 输 精 枪 暴 露 于 低 温 或 阳 光 下 ;
1.5 输 精 操 作 要 点 和 注 意 细 节 1.5.7 输 精 同 时 借 助 直 肠 触 摸 母 牛 子 宫 和 卵 巢 的 变 化, 也 可 进 一 步 判 断 发 情 或 妊 娠 情 况, 防 止 误 配 或 造 成 流 产
1.6 输 精 操 作 要 点 和 注 意 细 节 1.5.8 切 实 保 持 无 菌 操 作, 输 精 管 插 入 母 牛 阴 道 时 严 防 粪 污 最 好 的 方 法 用 外 阴 使 用 清 水 清 洗, 纸 巾 由 内 向 外 擦 干 1.5.9 动 作 要 迅 速, 最 好 在 精 液 解 冻 后 15 分 钟 ( 最 长 不 要 超 过 1 小 时 ) 内 完 成 输 精 1.5.10 输 精 部 位 准 确, 输 精 时 动 作 温 柔 ; 输 精 完 毕 后, 缓 慢 抽 出 输 精 枪
1.5 输 精 操 作 要 点 和 注 意 细 节 1.5.11 检 查 枪 尖 是 否 有 精 液 倒 流 现 象, 再 检 查 是 否 带 血 ( 是 鲜 血 还 是 陈 血 ), 输 精 后 外 套 管 和 手 套 不 要 随 意 乱 丢 1.5.12 记 录 ( 最 少 两 套 : 配 种 流 水 记 录 全 场 牛 各 月 配 种 产 犊 记 录 ) 1.5.13 对 于 有 繁 殖 疾 病 的 患 牛, 要 先 治 疗 后 配 种 1.5.14 避 免 操 作 不 当 或 长 时 间 操 作, 引 起 子 宫 颈 损 伤 发 炎 甚 至 子 宫 颈 增 生, 导 致 繁 殖 障 碍 发 生
1.6 直 肠 检 查 法 检 查 卵 泡 检 查 项 目 : 卵 泡 大 小 : 卵 泡 大 小 处 于 动 态 发 育 变 化 中 ; 卵 泡 弹 性 : 指 卵 泡 壁 在 指 压 下, 放 松 手 指 压 力 后 的 回 缩 能 力, 也 指 泡 壁 由 厚 变 薄 的 程 度 及 速 度 卵 泡 波 动 性 : 卵 泡 壁 因 受 指 压, 卵 泡 液 受 挤 而 向 壁 部 冲 击 的 能 力 及 冲 击 的 范 围, 波 动 实 质 是 卵 泡 液 受 到 压 力 后 的 流 动
1.7 人 工 授 精 关 键 : 适 时 输 精 必 须 知 道 的 常 识 : 1) 奶 牛 发 情 持 续 时 间 短, 大 约 18 小 时 2) 排 卵 一 般 发 生 在 发 情 开 始 后 的 24-30 小 时 或 发 情 结 束 的 8-12 小 时 3) 精 子 进 入 母 畜 的 输 卵 管 后, 要 经 大 约 2 个 小 时 时 间 的 获 能 时 间 才 有 受 精 能 力 4) 精 子 在 输 卵 管 部 24 小 时 内 有 受 精 能 力, 卵 子 的 寿 命 大 约 6-10 小 时 5) 精 子 15 分 钟 就 会 到 达 输 卵 管 受 精 部 位 因 此, 让 精 子 早 于 卵 子 2 个 小 时 到 达 输 卵 管 受 精 部 位 是 提 高 受 胎 率 的 先 决 条 件 输 精 : 1 旺 情 期 之 后 6-12 小 时 输 精, 受 胎 率 最 高 ; 2 发 情 结 束 后 6 小 时 左 右 输 精, 受 胎 率 可 达 60-80%; 3 如 能 通 过 直 肠 检 查 卵 泡 情 况 鉴 定, 则 选 在 卵 泡 成 熟 期, 即 卵 泡 发 育 到 最 大 后 6-8 小 时 输 精
奶 牛 屡 配 不 孕 的 原 因 1 没 适 时 输 精 2 卵 巢 排 卵 延 迟 或 不 排 卵 3 不 消 毒 或 消 毒 不 当 4 子 宫 或 阴 道 有 炎 症 5 母 牛 营 养 供 给 不 均 衡 6 使 用 劣 质 冻 精 7 解 冻 操 作 不 当 8 胚 胎 的 早 期 死 亡
二 性 控 冻 精 使 用 的 操 作 要 点 主 要 内 容 : 1 为 什 么 养 牛 者 要 使 用 性 控 精 液 2 性 控 精 液 的 基 础 知 识 3 配 种 母 牛 的 选 择 4 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 要 点
2.1 为 什 么 养 牛 者 要 使 用 性 控 精 液 X XX X 经 济 价 值 高 提 高 扩 群 速 度 外 购 胚 胎 移 植 性 控 精 液
2.2 性 控 精 液 的 基 础 知 识 2.2.1 性 控 精 液 定 义 : 性 控 精 液 即 是 通 过 精 子 分 离 技 术 分 离 出 来 的 可 以 由 人 们 自 由 控 制 遗 传 性 别 的 单 性 精 液 目 前 我 国 的 奶 牛 改 良 工 作 的 快 慢 已 经 严 重 制 约 着 我 国 奶 业 的 发 展
哺 乳 动 物 精 子 分 离 技 术 研 究 开 发 1. 研 究 开 始 于 上 世 纪 八 十 年 代 : 英 国. 2. 首 例 牛 分 离 精 子 - 人 工 授 精 成 功 : 1997 年, 英 国. 3. 首 例 分 离 精 子 - 显 微 受 精 试 管 牛 成 功 : 1998 年, 日 本. 4. XY 公 司 的 精 子 分 离 技 术 研 究 开 发 : 1996-2000, 美 国. 5. 第 一 个 牛 精 子 分 离 - 性 别 控 制 技 术 产 业 化 应 用 国 :2000, 英 国. 6. 目 前 已 经 产 业 化 应 用 国 : 英 国, 美 国, 日 本, 加 拿 大, 阿 根 廷, 巴 西, 墨 西 哥.
精 子 分 离 设 备
精 子 分 离 设 备
性 控 冻 精 生 产 过 程 中
2.2 性 控 精 液 的 基 础 知 识 流 式 细 胞 仪 分 离 理 论 基 础 : 所 有 哺 乳 动 物 X 精 子 的 染 色 体 通 常 比 Y 精 子 的 大, 所 含 DNA 也 多 动 物 种 类 人 兔 猪 牛 马 羊 DNA 差 异 (%) 2.9 3.0 3.6 3.8 4.1 4.2
2.2 性 控 精 液 的 基 础 知 识 2.2.2 性 控 精 液 的 生 产 原 理 : 是 根 据 XY 精 子 DNA 的 含 量 不 同, X 精 子 比 Y 精 子 含 有 较 多 DNA, 所 以 用 荧 光 染 料 染 色 时,X 精 子 吸 收 的 染 料 多, 发 出 的 荧 光 也 强, 就 此 可 以 分 辨 出 X 与 Y 精 子, 然 后 再 利 用 计 算 机 控 制 使 荧 光 强 的 X 精 子 带 上 正 电 荷,Y 精 子 带 上 负 电 荷, 在 通 过 高 压 电 场 时 便 向 不 同 的 方 向 偏 转, 从 而 达 到 分 离 目 的, 分 辨 率 可 达 90%
X 精 子 +Y + 精 子 XY 精 子 荧 光 染 色 耦 合 ( 正 ) 激 光 发 生 器 ( 负 ) 电 荷 耦 合
分 离 精 子 速 度 1992 一 1997 年,200 一 300 个 / 秒 1998 一 2000 年,1000 一 2000 个 / 秒 2001 一 2003 年,3000-4000 个 / 秒 2004 一 2006 年,4000-5000 个 / 秒
2.2 性 控 精 液 的 基 础 知 识 2.2.3 性 控 精 液 的 特 点 : 1. 可 以 使 后 代 犊 牛 90% 以 上 为 母 犊 ; 2. 解 冻 后 精 子 活 率 要 比 常 规 冷 冻 精 液 高, 其 主 要 原 因 是 奶 牛 X 性 控 精 液 在 分 离 的 过 程 中, 除 了 保 留 X 精 子 筛 除 Y 精 子 外, 还 将 原 精 液 中 的 死 精 子 和 部 分 畸 形 精 子 筛 除 掉 ; 3. 有 效 精 子 数 为 200 万 个 /0.25ml 以 上 4. 奶 牛 X 性 控 冷 冻 精 液 的 存 活 时 间 相 对 于 常 规 冷 冻 精 液 要 短 ( 存 活 8 小 时 左 右 ) 因 此 在 使 用 奶 牛 X 性 控 冷 冻 精 液 进 行 人 工 授 精 时, 对 于 技 术 的 要 求 更 高
牛 分 离 精 液 的 技 术 指 标 指 标 常 规 精 子 分 离 精 子 精 子 活 力 0.3-0.5 0.5 0.3-0.4 0.4 有 效 精 子 数 800 800 万 个 /0.25ml 200 万 个 /0.25ml 分 离 纯 度 -- 90%~95% 存 活 时 间 20-24 24 小 时 8-10 小 时
分 离 精 子 人 工 授 精 组 别 输 精 计 量 输 精 部 位 妊 娠 率 ( 百 万 ) (%) A 1-1.5 子 宫 角 54 B 1-1.5 子 宫 体 50 C 3.0 子 宫 角 54 D 3.0 子 宫 体 52 对 照 10 子 宫 体 65
3 受 配 母 牛 的 选 择 3.1 选 择 合 适 的 受 配 牛 选 择 15-20 月 龄, 体 重 达 350 公 斤 的 育 成 奶 牛 青 年 母 牛 生 殖 生 理 机 能 旺 盛, 子 宫 环 境 好, 利 于 精 子 和 受 精 卵 的 成 活, 是 为 最 佳 受 体 牛
3 配 种 母 牛 的 选 择 3.2 成 母 牛 的 选 择 成 母 牛 泌 乳 期 应 处 在 产 后 2-4 个 月 最 好, 生 殖 道 恢 复 正 常 ( 配 种 人 员 直 检 确 定 ), 营 养 状 况 良 好, 发 情 周 期 正 常,3 胎 以 内, 无 生 殖 道 疾 病 流 产 史 传 染 性 疾 病 等 成 年 牛 由 于 妊 娠 产 犊 泌 乳 等 生 理 负 担 重, 营 养 处 于 负 平 衡 或 缺 乏 某 些 维 生 素 矿 物 质 等, 影 响 精 子 和 受 精 卵 的 成 活, 从 而 影 响 受 胎 率 另 外, 到 目 前 为 止, 还 没 有 一 个 实 用 的 方 法 可 准 确 地 诊 断 成 母 牛 是 否 患 有 子 宫 内 膜 炎, 尤 其 是 轻 度 的 炎 症 子 宫 内 环 境 不 好 是 造 成 成 母 牛 受 胎 率 低 的 主 要 因 素
青 年 牛 和 经 产 牛 受 胎 率 比 较 母 牛 种 类 输 精 母 牛 ( 头 ) 两 个 情 期 未 返 情 母 牛 (%) 直 检 妊 娠 牛 (%) 青 年 牛 126 104(82.5) 73(57.9) 经 产 牛 270 188(69.6) 124(45.9)
4 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 要 点 4.1 做 好 发 情 观 察 4.1.1 指 定 专 门 人 员 ( 农 户 ) 负 责 发 情 观 察 与 记 录 4.1.2 每 天 应 进 行 至 少 4 次 ( 早 午 前 午 后 晚 ) 发 情 观 察, 每 次 观 察 至 少 30 分 钟 以 上 4.1.3 对 每 日 不 同 时 间 观 察 到 的 母 牛 的 行 为 等 情 况 作 详 尽 的 记 录 ( 如 开 始 接 受 爬 跨 的 时 间 稳 定 接 受 爬 跨 的 时 间 拒 绝 接 受 爬 跨 的 时 间 粘 液 的 状 态 粘 液 的 量 阴 门 充 血 肿 胀 程 度 阴 道 粘 膜 的 颜 色 等 ) 成 功 的 人 工 授 精 依 赖 于 客 观 真 实 的 发 情 记 录!!!
4 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 要 点 发 情 鉴 定 :( 外 部 观 察 法 ) (1) 看 神 色 : 母 牛 兴 奋 不 安, 时 常 游 走, 哞 叫 抬 尾 眼 神 和 听 觉 锐 利 (2) 看 爬 跨 : 开 始 发 情 时, 对 其 它 牛 的 爬 跨 往 往 不 太 接 受, 随 着 发 情 的 发 展 有 较 多 的 母 牛 跟 随, 嗅 其 外 阴 部, 从 不 接 受 其 它 牛 的 爬 跨 转 为 接 受 或 强 烈 的 爬 跨 其 它 牛 只, 在 其 它 牛 拒 爬 时, 常 在 爬 跨 中 走 动, 并 作 交 配 的 抽 动 姿 势 (3) 看 外 阴 : 阴 门 肿 胀, 潮 红, 原 有 的 大 皱 纹 已 消 失 平 展 (4) 看 粘 液 : 从 阴 门 排 出 的 大 量 透 明 粘 液 呈 粗 线 状 俗 称 吊 线
发 情 在 群 体 中 的 表 现
发 情 牛 的 被 毛 表 现
发 情 牛 的 外 阴 表 现
建 议 : 由 于 性 控 冻 精 的 价 格 较 高, 故 我 们 建 议 主 要 对 外 部 发 情 明 显 ( 外 阴 潮 湿, 阴 道 黏 膜 红 润, 阴 户 肿 胀 外 阴 有 透 明, 线 状 粘 液 流 出, 或 粘 污 于 外 阴 周 围, 粘 液 有 强 的 拉 丝 性 臀 部, 尾 根 有 接 受 爬 跨 造 成 的 小 伤 痕 或 秃 斑 有 的 有 蒸 腾 症 状, 体 表 潮 湿 ), 卵 泡 发 育 正 常 的 奶 牛 应 用 性 控 冻 精, 而 那 些 发 情 不 明 显 的 奶 牛, 则 使 用 常 规 冻 精
4 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 要 点 4.2 发 情 鉴 定 发 情 鉴 定 是 适 时 输 精, 提 高 奶 牛 受 胎 率 的 一 项 重 要 技 术 因 此, 对 奶 牛 发 情 与 否, 输 精 是 否 适 时 都 要 做 出 正 确 判 定 ( 直 肠 检 查 法 ) 卵 泡 发 育 为 四 期 : 卵 泡 出 现 期 卵 泡 发 育 期 卵 泡 成 熟 期 : 卵 泡 不 再 增 大, 泡 壁 变 薄, 紧 张 度 增 强, 随 后 变 软, 有 一 触 即 破 之 感, 触 摸 时 用 力 不 均 或 过 猛 极 易 造 成 卵 泡 破 裂 此 时 母 牛 发 情 表 现 减 弱, 拒 绝 爬 跨, 转 入 平 静 一 般 维 持 6~12 小 时, 性 控 精 液 一 般 在 转 入 平 静 后 4-6 小 时 输 精 ; 第 四 期, 排 卵 期
4 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 要 点 4.3 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 4.3.1 器 械 消 毒, 一 牛 一 枪, 手 套 不 重 复 使 用 4.3.2 解 冻 装 枪 ( 解 冻 后 要 尽 快 输 精 ) 4.3.3 输 精 动 作 : 轻 柔, 一 定 不 要 损 伤 子 宫 颈 子 宫 体 及 子 宫 角 粘 膜 输 精 部 位 : 尽 量 快 速 将 精 液 输 至 卵 巢 上 卵 泡 发 育 侧 子 宫 角 深 部 约 子 宫 角 的 前 1/3 处 输 精 时 间 : 一 般 在 发 情 结 束 后 4-6 小 时 输 精 ( 输 精 后 3-6 小 时 排 卵 最 好 ) 4.4.4 记 录 : 母 牛 号 体 况 胎 次 发 情 时 间 哪 侧 卵 泡 产 后 天 数 与 配 公 牛 号 北 输 京 精 奶 时 间 牛 中 配 心 种 员 农 户 名 等
怎 样 得 到 最 大 的 授 精 效 率 确 定 正 确 的 授 精 时 间 正 确 的 操 作 处 理 冷 冻 精 液 准 确 地 将 精 液 输 入 到 子 宫 角 内 必 须 严 格 输 精 操 作 技 术 规 程, 避 免 生 殖 道 损 伤
4 性 控 精 液 人 工 授 精 操 作 要 点 4.4 人 工 授 精 后 其 他 操 作 4.4.1 授 精 后 8-10 小 时, 直 检 排 卵 情 况 4.4.2 未 排 卵 则 复 配 1 次, 同 时 注 射 促 排 3 号 4.4.3 成 母 牛 配 种 时 发 现 子 宫 内 环 境 差, 可 在 配 种 后 10-12 小 时, 注 入 子 宫 葡 萄 糖 青 霉 素 溶 液 50ml 4.4.4 青 年 牛 配 种 后 60 天 妊 检, 成 母 牛 75 天 妊 检
应 用 X 精 液 人 工 授 精 试 验 结 果 组 别 配 种 情 期 数 妊 娠 头 数 妊 娠 率 奶 牛 中 心 良 种 场 三 元 绿 荷 北 京 大 兴 北 京 延 庆 累 计 成 母 牛 26 13 50.0% 青 年 牛 38 22 57.8% 小 计 64 35 54.7% 成 母 牛 46 21 45.6% 青 年 牛 102 61 59.8% 小 计 148 82 55.4% 成 母 牛 17 7 41.2% 青 年 牛 51 28 54.9% 小 计 68 35 51.5% 成 母 牛 24 10 41.7% 青 年 牛 28 16 57.1% 小 计 52 26 50.0% 成 母 牛 113 51 45.1% 青 年 牛 219 127 58.0% 合 计 332 178 53.6%
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