畜 牧 兽 医 学 报 家 兔 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 分 离 培 养 陈 秀 荔 赵 永 贞 靳 亚 平 张 彦 明 西 北 农 林 科 技 大 学 农 业 部 家 畜 生 殖 内 分 泌 与 胚 胎 工 程 重 点 开 放 实 验 室 杨 凌 摘 要 本 试 验 旨 在 体 外 分 离 培 养 兔 子 宫 内 膜 细 胞 腺 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 并 且 探 讨 纯 化 子 宫 内 膜 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 的 方 法 用 差 速 离 心 法 和 差 速 贴 壁 法 获 得 纯 化 的 子 宫 内 膜 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 用 滤 网 法 分 离 得 到 子 宫 平 滑 肌 细 胞 分 别 在 添 加 胎 牛 血 清 牛 胰 岛 素 雌 二 醇!" 孕 酮 #" 的 $%!%& 培 养 液 和 ' 的 饱 和 湿 度 条 件 下 培 养 用 免 疫 组 化 和 免 疫 荧 光 法 鉴 定 细 胞 并 检 测 分 离 的 细 胞 纯 度 结 果 表 明 用 该 方 法 成 功 地 分 离 培 养 了 兔 子 宫 内 膜 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 且 种 细 胞 纯 度 都 达 左 右 基 质 细 胞 出 现 蜕 膜 化 子 宫 平 滑 肌 细 胞 的 纯 度 为 左 右 而 且 出 现 横 纹 状 的 生 长 本 研 究 表 明 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 能 够 在 体 外 成 功 培 养 在 含 牛 胰 岛 素! "#" 的 $%!%& 培 养 液 和 ' 饱 和 湿 度 的 培 养 条 件 下 最 有 利 于 体 外 培 养 的 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 生 长 关 键 词 子 宫 内 膜 细 胞 平 滑 肌 细 胞 免 疫 组 织 化 学 免 疫 荧 光 蜕 膜 化 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号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收 稿 日 期 (( 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 "" 作 者 简 介 陈 秀 荔 ( 女 内 蒙 古 赤 峰 市 人 博 士 生 主 要 从 事 家 畜 生 殖 内 分 泌 与 生 殖 免 疫 研 究!()*+,-.*/*+ 通 讯 作 者 张 彦 明 ( 男 陕 西 南 郑 人 博 士 生 导 师 主 要 从 事 分 子 病 原 学 与 免 疫 学 研 究!()*0,)1)*/)-/+
期 陈 秀 荔 等 家 兔 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 分 离 培 养 " 9,/+-+- )*+!--9:*) +-9, /+-+-*/,*9+,-*9:1*//:-+-+- -+*/)*0)9* 子 宫 内 膜 作 为 性 激 素 作 用 的 靶 器 官 在 生 殖 生 理 研 究 中 占 有 重 要 的 地 位 对 子 宫 内 膜 细 胞 进 行 体 外 培 养 为 研 究 细 胞 的 生 长 分 化 和 代 谢 以 及 性 激 素 作 用 的 机 理 提 供 了 理 想 的 实 验 模 型 着 床 期 子 宫 内 膜 在 胚 泡 黏 附 后 发 生 蜕 膜 化 反 应 子 宫 内 膜 基 质 细 胞 逐 渐 转 化 为 蜕 膜 基 质 细 胞 影 响 滋 养 层 细 胞 的 侵 入 一 方 面 蜕 膜 组 织 中 细 胞 外 基 质 处 于 不 断 更 新 代 谢 的 动 态 平 衡 中 另 一 方 面 蜕 膜 组 织 能 够 产 生 多 种 细 胞 因 子 生 长 因 子 以 及 金 属 蛋 白 酶 调 节 滋 养 层 细 胞 的 多 种 基 因 表 达 因 此 体 外 研 究 基 质 细 胞 的 蜕 膜 " 化 现 象 对 进 一 步 研 究 胚 胎 植 入 机 理 十 分 必 要 子 宫 平 滑 肌 细 胞 的 体 外 培 养 为 研 究 子 宫 内 以 及 其 他 组 织 器 官 的 血 管 的 形 成 以 及 体 外 构 建 血 管 模 型 提 供 了 依 据 目 前 对 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 分 离 方 法 主 要 有 两 种 一 种 是 滤 网 法 另 一 种 是 离 心 法 本 实 验 室 曾 应 用 滤 网 法 分 离 子 宫 内 膜 细 胞 但 其 操 作 繁 琐 因 此 本 研 究 对 子 宫 内 膜 细 胞 的 体 外 培 养 加 以 改 进 采 用 离 心 法 获 得 细 胞 后 再 经 过 差 速 贴 壁 法 获 得 纯 化 的 子 宫 内 膜 细 胞 探 讨 更 为 简 单 有 效 的 纯 化 方 法 为 进 一 步 的 体 外 研 究 激 素 及 生 长 因 子 对 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 增 殖 的 影 响 提 供 依 据 同 时 为 体 外 模 拟 正 常 子 宫 模 型 的 建 立 奠 定 基 础 材 料 与 方 法, 试 验 动 物 试 验 用 母 兔 来 自 军 事 医 学 科 学 院 实 验 动 物 中 心 临 床 检 查 健 康 性 成 熟, 主 要 试 剂 孕 马 血 清 促 性 腺 激 素 #%8 北 京 奶 牛 中 心 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素,8 北 京 奶 牛 中 心 $%!% 培 养 基 8*;*+ 公 司 胎 牛 血 清 百 灵 克 公 司 孕 酮 # " *) 雌 二 醇! *) 牛 胰 岛 素 *):,!8#:-) 鼠 抗 人 的 角 蛋 白 19-:9* 北 京 中 杉 公 司 多 克 隆 抗 体 波 形 蛋 白 <*-9* 北 京 中 杉 多 克 隆 抗 体 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 ()+9* 北 京 中 杉 多 克 隆 抗 体 -+,9*) 公 司 分 析 纯 # 免 疫 组 化 试 剂 盒 及 $ 显 色 液 以 及 相 应 的 罗 丹 明 荧 光 二 抗 北 京 中 杉 公 司, 方 法 子 宫 内 膜 细 胞 的 分 离 雌 性 大 耳 白 兔 性 成 熟 体 质 量 为 肌 肉 注 射 6= 的 #%8 超 排 处 理 ", 后 耳 缘 静 脉 注 射 6= 的,8 于 第 天 空 气 栓 塞 处 死 超 排 处 理 兔 无 菌 条 件 下 取 出 子 宫 用 含 双 抗 的 # 冲 洗 子 宫 至 白 色 纵 向 剪 开 子 宫 刮 取 子 宫 内 膜 用 的 胰 蛋 白 酶 室 温 消 化 * 用 吸 管 反 复 吹 打 几 次 将 其 收 集 到 盛 有 培 养 液 含 血 清 的 离 心 管 中 吹 打 均 匀 采 取 以 下 的 几 种 方 法 进 行 分 离 纯 化 一 种 是 滤 网 法 用 目 不 锈 钢 网 筛 过 滤 收 集 滤 液 :* 离 心 * 得 基 质 细 胞 用 完 全 培 养 基 冲 洗 滤 网 上 的 细 胞 得 到 的 液 体 进 行 离 心 :* 离 心 * 得 上 皮 细 胞 另 一 种 分 离 纯 化 的 方 法 是 差 速 离 心 法 将 消 化 获 得 的 子 宫 内 膜 细 胞 :* 离 心 * 弃 去 上 清 然 后 再 加 入 完 全 培 养 液 将 其 重 悬 再 经 过 :* 离 心 * 取 其 上 的 悬 液 接 种 于 培 养 瓶 中 得 基 质 细 胞 取 下 悬 液 接 种 于 培 养 瓶 中 得 上 皮 细 胞 因 为 这 样 获 得 的 细 胞 不 是 很 纯 笔 者 尝 试 用 反 复 差 速 贴 壁 法 对 种 细 胞 进 行 纯 化 从 而 获 得 纯 度 较 高 的 子 宫 内 膜 细 胞 方 法 如 下 将 接 种 的 种 细 胞 放 置 于 ' 的 孵 箱 内 培 养, 后 吸 取 培 养 液 于 离 心 管 中 离 心 下 层 贴 壁 的 为 基 质 细 胞 因 其 属 于 成 纤 维 样 细 胞 所 以 易 于 贴 壁 再 重 复 以 上 操 作 次 每 次 计 数 未 贴 壁 的 细 胞 数 量 再 离 心 收 集 未 贴 壁 的 细 胞 重 新 接 种 到 瓶 中 进 行 培 养 得 到 上 皮 细 胞 子 宫 平 滑 肌 细 胞 的 分 离 在 以 往 报 道 的 基 础 上 加 以 改 进 将 刮 去 子 宫 内 膜 的 子 宫 用 # 冲 洗 几 次 每 次 冲 洗 的 液 体 收 集 到 离 心 管 中 内 含 基 质 细 胞 和 上 皮 细 胞 用 差 速 离 心 法 和 差 速 贴 壁 法 分 离 纯 化 种 细 胞 将 冲 洗 过 的 子 宫 用 眼 科 剪 修 剪 边 缘 再 将 剩 余 部 分 剪 成 的 小 块 加 入 适 量 的 胰 蛋 白 酶 室 温 消 化 * 用 目 不 锈 钢 网 筛 过 滤 将 滤 液 收 集 至 离 心 管 中 再 向 离 心 管 中 加 入 等 量 含 血 清 的 完 全 培 养 基 终 止 消 化 滤 网 上 面 的 组 织 刮 下 来 继 续 用 胰 蛋 白 酶 消 化 直 至 消 化 完 全 为 止 :* 离 心 * 收 集 细 胞 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 体 外 培 养
"" 畜 牧 兽 医 学 报 卷 将 分 离 纯 化 的 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 吹 打 均 匀 后 以 > 接 种 到 的 培 养 瓶 中 设 立 对 照 组 一 种 培 养 液 为 含 有! " # " 牛 胰 岛 素 的 $%!% 另 一 种 为 含 有 # " "! 牛 胰 岛 素 的 $%!% 将 其 培 养 瓶 置 于 ' 的 培 养 箱 内 培 养 后 更 换 相 应 的 培 养 液 每 天 在 倒 置 显 微 镜 下 观 察 细 胞 的 生 长 情 况 " 细 胞 爬 片 用 胰 蛋 白 酶 和!$ 消 化 长 成 单 层 的 子 宫 内 膜 细 胞 然 后 用 含 血 清 的 培 养 基 终 止 消 化 :* 离 心 * 重 悬 细 胞 并 计 数 以 " 接 种 到 " 孔 培 养 板 内 置 盖 玻 片 上 静 置 * 添 加 足 量 的 培 养 液 置 于 ' 饱 和 湿 度 的 培 养 箱 中 培 养 约, 后 细 胞 已 经 铺 满 瓶 底 左 右 细 胞 密 度 适 中 细 胞 间 存 在 一 定 的 空 隙 适 宜 做 免 疫 组 化 和 免 疫 荧 光 试 验 细 胞 免 疫 组 织 化 学 染 色 用 # 洗 细 胞 爬 片 次 再 用 " 的 多 聚 甲 醛 室 温 固 定 * 以 链 膜 上 皮 细 胞 较 基 质 细 胞 难 贴 壁 培 养 ", 后 发 现 贴 壁 伸 展 成 小 圆 形 基 质 细 胞 培 养, 观 察 发 现 其 长 成 小 星 星 形 的 细 胞 两 种 细 胞 在 ", 基 本 长 成 单 层 细 胞 纯 度 达 上 皮 细 胞 呈 铺 路 石 状 基 质 细 胞 多 呈 多 角 形 而 在 添 加 牛 胰 岛 素 # " "! 的 $%!%& 培 养 液 中 培 养 的 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 较 前 一 种 培 养 液 中 生 长 的 细 胞 状 况 差 平 滑 肌 细 胞 贴 壁 较 快, 后 将 观 察 到 伸 展 的 长 梭 形 细 胞 ", 后 可 见 到 形 成 横 纹 状 的 细 胞 单 层 有 时 可 见 峰 谷 样 的 结 构 如 图 所 示 霉 素 生 物 素 蛋 白 ( 过 氧 化 物 酶 9:-79)**(7-:.( *-# 进 行 免 疫 组 织 化 学 染 色 鉴 定 种 细 胞 的 抗 体 鉴 定 上 皮 细 胞 的 抗 体 为 小 鼠 抗 人 的 细 胞 角 蛋 白 19-:9*& 稀 释 鉴 定 基 质 细 胞 的 抗 体 为 小 鼠 抗 人 的 波 形 蛋 白 <*-9*& 稀 释 鉴 定 平 滑 肌 细 胞 的 抗 体 为 小 鼠 抗 人 的 ( 肌 动 蛋 白 ()+9* 以 # 为 阴 性 对 照 "' 过 夜 加 生 物 素 标 记 的 # 试 剂 盒 二 抗 工 作 液 进 行 染 色 最 后 $ 显 色 再 用 苏 木 素 复 染 凡 细 胞 质 染 成 棕 黄 色 的 为 阳 性 未 呈 棕 黄 色 的 为 阴 性 每 张 爬 片 取 个 不 同 的 视 野 计 数 阳 性 细 胞 统 计 阳 性 细 胞 率 细 胞 免 疫 荧 光 染 色 将 " 孔 培 养 板 中 长 成 单 层 的 细 胞 用 " 的 多 聚 甲 醛 室 温 固 定 * 进 行 免 疫 荧 光 染 色 用 中 叙 述 的 种 细 胞 的 抗 图 培 养 -.! 的 单 层 子 宫 内 膜 上 皮 细 胞 倒 置 相 差 显 微 镜 / 01-"#$#!$$$ +!$&!* &!# %!*/ 体 染 色 # 代 替 一 抗 作 阴 性 对 照 用 罗 丹 明 以 & 稀 释 北 京 中 杉 公 司 标 记 细 胞 的 胞 质 ( -+,9 以 & 稀 释 标 记 胞 核 细 胞 质 呈 红 色 的 为 阳 性 结 果 细 胞 质 不 着 色 的 是 阴 性 结 果 统 计 细 胞 质 和 细 胞 核 的 数 量 计 算 细 胞 的 纯 度 结 果 与 分 析, 子 宫 内 膜 细 胞 的 生 长 情 况 在 添 加 牛 胰 岛 素! "# " 的 $%!%& 培 养 液 和 的 饱 和 湿 度 条 件 下 培 养 子 宫 内 图 培 养! 的 单 层 子 宫 内 膜 基 质 细 胞 倒 置 相 差 显 微 镜 / 01-"#$#!$$!*&! # %!*/, 细 胞 爬 片 的 免 疫 组 化 染 色 分 别 对 种 细 胞 进 行 免 疫 组 化 染 色 上 皮 细 胞 阳 性 胞 质 呈 棕 褐 色 图 " 阳 性 率 达 基 质 细 胞 <*-9* 阳 性 胞 质 呈 棕 褐 色 而 且 还 见 到 膨 大 的 蜕 膜 化 的 基 质 细 胞 图 阳 性 率 达 平 滑 肌 细 胞 ()+9* 阳 性 胞 质 呈 棕 褐 色 出 现 横 纹
期 陈 秀 荔 等 家 兔 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 分 离 培 养 " 细 胞 的 纯 度 为 如 图 所 示 图 培 养! 的 单 层 子 宫 平 滑 肌 细 胞 倒 置 相 差 显 微 镜 / 01-"#$#!#$$!*&! # %!*/ 图 平 滑 肌 细 胞 阳 性 胞 质 呈 棕 褐 色 胞 核 呈 蓝 色 / 01- #$$ %*$ 1+ #$1$#/ 图 上 皮 细 胞 ") 阳 性 胞 质 呈 棕 褐 色 胞 核 呈 蓝 色 / 01-!$$")%*$ 1+ #$1$#/ 图. 基 质 细 胞 阳 性 胞 质 呈 棕 黄 色 胞 核 呈 蓝 色 / 01-.$$ %*$ 1+ #$1$#/ 状 的 生 长 方 式 图 细 胞 阳 性 率 达, 细 胞 爬 片 的 免 疫 荧 光 分 别 对 种 细 胞 进 行 免 疫 荧 光 染 色 罗 丹 明 染 胞 质 呈 红 色 -+,9 染 胞 核 呈 蓝 色 通 过 统 计 胞 质 和 胞 核 的 数 量 计 算 细 胞 的 纯 度 发 现 上 皮 细 胞 的 纯 度 为 基 质 细 胞 的 纯 度 为 平 滑 肌 讨 论 子 宫 内 膜 细 胞 的 分 离 与 培 养 方 法 各 异 子 宫 内 膜 在 体 内 受 雌 激 素 孕 激 素 等 的 共 同 作 用 在 体 子 宫 内 膜 细 胞 分 离 培 养 后 失 去 这 些 激 素 的 作 用 而 表 现 出 生 长 缓 慢 等 特 征 而 且 大 量 的 研 究 证 明 性 腺 激 素 对 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 的 作 用 是 不 可 忽 视 的 笔 者 通 过 差 速 离 心 法 和 反 复 差 速 贴 壁 法 成 功 地 在 体 外 分 离 和 培 养 了 子 宫 内 膜 细 胞 并 且 通 过 滤 网 法 获 得 平 滑 肌 细 胞 种 细 胞 的 形 态 比 较 均 一 笔 者 分 别 用 不 同 浓 度 的 # " 和! 培 养 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 结 果 发 现 在 高 浓 度! 情 况 下 种 细 胞 的 增 殖 能 力 强 这 也 符 合 在 体 的 激 素 浓 度 变 化 笔 者 还 观 察 了 在 此 培 养 条 件 下 培 养 了 代 以 后 的 上 皮 细 胞 研 究 它 的 生 长 情 况 结 果 发 现 上 皮 细 胞 形 态 正 常 增 殖 能 力 很 强 并 且 通 过 免 疫 荧 光 的 方 法 鉴 定 细 胞 的 纯 度 每 种 细 胞 的 纯 度 达 到 左 右 而 且 本 研 究 在 细 胞 培 养 基 中 加 入 一 定 浓 度 的 雌 激 素 和 孕 激 素 探 索 子 宫 内 膜 细 胞 体 外 生 长 的 条 件 为 以 后 的 研 究 提 供 支 持 子 宫 内 膜 基 质 细 胞 发 生 蜕 膜 化 是 指 成 纤 维 样 的 基 质 细 胞 在 形 态 和 功 能 上 向 蜕 膜 细 胞 转 变 的 过 程 蜕 膜 细 胞 在 胚 胎 着 床 和 发 育 等 方 面 起 重 要 的 作 " 用 - 等 报 道 的 蜕 膜 细 胞 对 来 自 于 滋 养 层 细 胞 的 旁 分 泌 的 信 号 的 反 应 证 明 了 蜕 膜 细 胞 对 胚 胎 植 入 的 重 要 意 义 妊 娠 早 期 类 固 醇 激 素!!9:- 和 # " #:-9-:- 通 过 控 制 子 宫 上 皮 细 胞 和 基 质 细 胞 的 增 殖 和 分 化 作 用 来 调 节 一 系 列 复 杂 的 胚 胎 与 母 体 子 宫 间 的 相 互 作 用 它 们 间 的 协 同
" 畜 牧 兽 医 学 报 卷 $8<*-9*()+9* 免 疫 荧 光 染 色 罗 丹 明 染 胞 质 阳 性 胞 质 呈 红 色!-+,9 非 特 异 性 染 核 细 胞 核 呈 蓝 色 的 重 叠 图 $! 的 重 叠 图 68 的 重 叠 图 $8<*-9*()+9**//:-+-99)**,)*-9)**:9,-+197)97*( 9*-+197)9,-:-!-+,9(7-+**+*919)**:/+-*/+-*,-;/- %-:-7*+9/:-)%-:-7*+9/:-$)!6%-:-7*+9/:-8) 图 子 宫 内 膜 第 代 上 皮 细 胞 基 质 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 免 疫 荧 光 染 色 01,#&$#!#$1&!1!$$!#$$ 作 用 保 持 子 宫 内 膜 的 蜕 膜 化 程 度 促 进 胚 胎 的 植 入 已 经 证 实 类 固 醇 激 素 可 通 过 调 节 基 因 来 控 制 这 些 作 用 本 研 究 在 前 期 研 究 的 基 础 上 进 一 步 调 整 激 素 浓 度 观 察 基 质 细 胞 的 变 化 结 果 发 现 基 质 细 胞 在 受 到 合 适 的 激 素 的 刺 激 下 由 以 前 梭 形 分 化 能 力 差 多 能 性 的 间 充 质 细 胞 向 两 个 方 向 分 化 其 中 约 一 半 的 细 胞 增 大 变 成 大 而 圆 的 蜕 膜 细 胞 另 一 半 分 化 为 小 而 圆 的 颗 粒 细 胞 这 和 以 前 的 报 道 相 一 致 体 外 研 究 子 宫 内 膜 细 胞 的 蜕 膜 化 的 调 节 机 制 可 以 了 解 体 内 激 素 的 调 节 水 平 有 助 于 正 确 地 了 解 子 宫 内 膜 的 容 受 性 及 其 与 胚 胎 间 的 作 用 机 理 子 宫 平 滑 肌 层 含 有 大 量 的 血 管 如 果 平 滑 肌 层 细 胞 过 度 生 长 势 必 造 成 血 管 壁 的 增 厚 管 腔 堵 塞 体 外 培 养 平 滑 肌 细 胞 有 利 于 研 究 子 宫 和 其 他 富 含 血 管 器 官 的 血 管 形 成 机 制 子 宫 平 滑 肌 细 胞 也 表 达 金 属 蛋 白 酶 %%#( 及 其 抑 制 剂 6%#( 而 雌 激
期 陈 秀 荔 等 家 兔 子 宫 内 膜 细 胞 和 平 滑 肌 细 胞 的 分 离 培 养 " 素 和 孕 激 素 对 %%# 的 表 达 有 调 控 作 用 它 们 之 间 的 不 协 调 表 达 会 造 成 子 宫 肌 瘤 本 试 验 以 兔 子 宫 组 织 为 材 料 通 过 滤 网 法 分 离 得 到 纯 度 较 高 的 平 滑 肌 细 胞 所 培 养 的 细 胞 呈 横 纹 状 生 长 部 分 区 域 可 见 典 型 的 峰 ( 谷 样 ()+9* 免 疫 组 织 化 学 染 色 阳 性 纯 度 较 高 该 方 法 的 建 立 为 进 一 步 研 究 平 滑 肌 的 功 能 代 谢 以 及 病 理 变 化 提 供 了 新 的 试 验 模 型 为 研 究 子 宫 方 面 的 生 理 变 化 和 疾 病 的 发 生 提 供 资 料 参 考 文 献 8*/*+-!/+*)9*--9:*) /+9**9,- 79(-*+-:)5/ -7: =7)9-7*5$67)9)9*9:7,;)9*-:-9*)9* ),)-+,:*) 7)+-9)9*-+,)*9*+-*-+- '')'55- +* #9" *,-:5$)1 /)+199:7,;)9*( )*5-*- *" ")79 ))-!.7:-*-( --::*;/+-*+)+*-+*)9:*.-9)7:9-*( )-)9,-*:9*/-*,*;*9:*:-)9-9-9:/( )9*55!+:*"" #*-::!%**+*-*)*"9:)(-7*9,-*( ) *9-:)+9* /)9--9:-:-7*--* :),/)--9:*/5* -7: " 8?:)*)#"!9);*,-9,/)--9:*) +- +/9/:-5/ -7: 陈 秀 荔 靳 亚 平 利 光 辉 等 孕 早 期 家 兔 子 宫 内 膜 细 胞 的 分 离 培 养 与 形 态 观 察 5 西 北 农 林 科 技 大 学 学 报 自 然 科 学 版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陈 秀 荔 靳 亚 平 张 彦 明 分 离 培 养 兔 子 宫 内 膜 细 胞 的 鉴 定 及 性 激 素 对 子 宫 内 膜 间 质 细 胞 形 态 的 影 响 5 畜 牧 兽 医 学 报 )4)$ %-% 3" -:*7)( 9)9*++/9/:-;)9+19)/9-:*---9:*/ **+-5* -7: -): %))# *-,*9:1-+*/) +-) :-*-55-7:6/ %),);--,):8 ))9, # 0) < %-9,:*)9*-9,-*) )9,/( +-+-)'7:*-:)9*))15%-9, % %- @))%;-*)*!"%)( 9:*.-9)7:9-*)-,/) -*1)*):*( /9)-9/::9,581-+ ;9-96( -9""