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北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 9 c V^ V M V ^#1 F V V V D ^ M ^ > 3 #1 F V V^ D ^ [ R c [ V? M V ^ M ^ D V M D V> * * [ ^ D [ *:<g> D [ M D M^ V ^-I>9 D? M V ^ [ D $ :g $ E:?g V $ :?*g $ <:g D D $ :E*g $ *:g D M [ 3 D #1 F $ 3+$ V < [ D D $:??g > #1 F $ 3++$ >< 3+$[ M V M > -I [ V V># V -I [ ^ M V V>- * -3M V M [ M D#1 F V V>-I D [ V V V D >D ^ M V 9 -I D [ V >? #1 F # ^ # ^ D V M # M V V D # V # M ^ D 金 黄 色 葡 萄 球 菌 $ #1 F 广泛 分 布 于 空 气 土 壤 水 中 人 和 动 物 的 带 菌 率 较 高 * ::主要仪器与试剂 mg IF浊度 仪 $ 法 国 ^ 3 M 实 验 用 去 离 金 黄 色 葡 萄 球 水浴摇床$ 德国 Y M ^ 子水系统$ 美国 3 菌及其毒素是引发细菌性食物中毒的主 要 病 原 之 脉冲场凝胶电泳仪 及 配 套 设 备 和 凝 胶 成 像 系 统 $ 美 一 金 葡 菌 污 染 食 物 所 引 发 的 食 源 性 疾 病 为 世 界 V 国 c 因此食品 受 其 污 染 的 机 会 较 多 性食品安 全 问 题该 菌 也 是 北 京 市 细 菌 性 食 物 中 脑心浸液 培 养 基 细 菌 琼 脂 粉 $ 北 京 陆 桥 技 术 毒 的 主 要 病 原 菌 之 一 年 北 京 市 共 报 有限责任公 司 革 兰 氏 阳 性 菌 冻 干 型 细 菌 定 量 药 告 细 菌 性 食 物 中 毒 E 起 其 中 金 黄 色 葡 萄 球 菌 食 6肉汤细菌 稀 释 液 $ 天 津 金 章 科 技 发 敏测试盒3 物 中 毒 占 g 多 重 耐 药 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 菌 株 ^ c + 展 有 限 公 司 琼 脂 糖 $ 美 国 1 的出现已 危 及 到 对 该 菌 引 发 食 源 性 疾 病 的 控 制 R V 蛋白 酶 F$ 德 国 3 R限 制 性 内 切 酶 有研究表 明 * 耐 药 菌 可 直 接 或 通 过 食 物 链 间 接? 限制性内切酶 #: 均购自大连宝生物葡 感 染 人 并 具 有 将 相 同 的 抗 药 特 性 通 过 食 物 链 转 $ V D 萄球菌溶菌素$ 美国 + 移给人体 病 原 菌 的 潜 在 危 险 目 前脉 冲 场 凝 胶 :方法 V V D -I 被 认 为 电 泳 $ M ::测定方法 是 食 源 性 病 原 菌 分 型 的 金 标 准 -I具 有 重 复 性 好 分 辨 率 高 的 特 点 <* 为了解北京市食源性金 采用冻 干 型 细 菌 定 量 药 敏 测 试 盒 定 量 测 定 金 D ^ 黄色 葡 萄 球 菌 的 最 小 抑 菌 浓 度 $ 黄 色 葡 萄 球 菌 的 耐 药 谱 和 -I型 别 分 布 以 及 两 3G 1 将待 测 定 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 和 者之间的 联 系建 立 北 京 市 食 源 性 金 黄 色 葡 萄 球 质控 菌 株 $ $11 < 接 种 到 脑 心 浸 液 肉 汤 菌耐药图 谱 库 和 分 子 溯 源 库提 高 北 京 市 金 葡 菌 $ c6g 管中过 夜 培 养 从 过 夜 培 养 的 c6g肉 汤 管 食物中毒监测预警能力 本研究通 过 采 用 美 国 临 中挑取菌液划线接种脑 心 浸 液 琼 脂 $ c6$ 平 板过 床 实 验 标 准 委 员 会 $ #118+ 推 荐 的 微 量 肉 汤 稀 释 夜培养 从过夜培养的 c6$平板上挑取单个菌 落 法 和 -I方 法 对 年 通 过 北 京 市 食 再次划线 接 种 c6$平 板 过 夜 培 养 从 D 培 养 源 性 致 病 菌 监 测 网 络 分 离 到 的?E 株 金 黄 色 葡 萄 的平 板 上 挑 取 < e 个 纯 新 鲜 菌 落 均 匀 悬 浮 于 球 菌 进 行 药 敏 试 验 及 -I分 型 : IF浊 度 计 调 细菌稀释管中将 该 菌 液 用 mg 整至 : 麦氏浊度 用微量移液器吸取已比浊好 浓 材料与方法 6肉汤管中混匀 度的菌液 加入到 3 :材料 缓慢倒入 m型无菌槽内使 用 微 量 移 液 器 一 次 加 入 ::菌株来源 自 动 设 置 $ e 到 * 孔药 敏 板 中 $ 每 孔 本次试验 菌 株 来 自 年 通 过 北 京 市 6 不加任何抗生素的孔里 个$ $ e 加 菌 食源性致 病 菌 监 测 网 络 分 离 到 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 作为生长 对 照# 个 $ I e6 不 加 菌 作 为 空 白 共?E 株 其中 株来自 餐 饮食品EE 株来自 未 对照 将接种好的 * 孔药敏板加盖置于培养箱 中 经过加工 的 食 品 原 料 质 控 菌 株 为 金 黄 色 葡 萄 球 $<* q f培养 D培 养 箱 中 放 置 水 槽 以 保 持 湿 菌$ $11< 度 同时满足 相 同 的 操 作 测 定 标 准 质 控 菌 株 检

< X#$8--6\G 年第 * 卷第 期 测的抗生素种类红霉 素 $ I\ 苯唑 西 林 $ ]$ :??gm$#: g 金黄色葡萄球菌对? 种抗 四 环 素 $ I 氯 霉 素 $ 168 环 克林霉 素 $ 18G 生素耐药情况见表 甲氧苄啶 万 丙沙星$ 1G 磺胺甲恶唑$ 3 表 金黄色葡萄球菌对? 种抗生素的耐药率 1值判读 古霉素$ m$# 根据药敏测试盒提供的 3G ^? R V ^ 1值: 8为敏 标准进行判定其中 I\的 3G 8为 中 介 #? 8为 耐 药 ]$ 的 感 e 抗生素 耐药菌 株数 耐药率 g 中介菌 株数 中介率 g 敏感菌 敏感率 g 株数 3G 1值 8为 敏 感 # 8为 耐 药 18G的 I\? : :*?< :< 3G 1值 : 8为 敏 感 e 8为 中 介 ]$ E:? : < E: 8为耐药I的 3G 1值 8为 敏 感 # 18G < :?* : EE: I * <: E: E E?:* 168 :E* : *?*: 1G *: :*E E : 3 :?? : E* : : :E??:<? 8为中介#* 8为耐药168的 3G 1值? 8为敏感* 8为中介#< 8为耐药 1G 的 3G 1值 8为 敏 感 8为 中 介 8为耐药3 的 3G 1值 <? 8 # E* 8为耐药m$#的 3G 1值 8 为敏感# 8为中介#* 8为耐药 为敏感 e? ::结果判读 当同时满 足 以 下 条 件 # 生 长 对 照 孔 中 的 细 菌 有明显生长空白对 照 孔 无 细 菌 生 长 $ 每 次 实 验 均 需用标准质控菌株$ $11< 同 步操 作进 行质 1值 在 规 定 的 范 围 内 时 目 测 量控制#质控菌株的 3G 结果可接受 ::<-I分型 参照金黄色葡萄球菌 -I分型的标 准操 作方 法 进 行 主 要 实 验 参 数 如 下 细 菌 悬 液 浓 度 用 ^ 3r M麦氏比浊仪调至 *:#使用 #: 限制性 内切酶$ X < f 酶 切 < D# 电 泳 参 数 为 : e : + D#胶块电 泳 后 使 用 V 染 色纯 水 脱 色读取电泳图谱#沙门菌标准株$ 6? 作为 分子 量标准 m$# : 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌$3+$耐药情况?E 株金黄色葡萄球菌中共检出 3+$ 株占 比为 E:?g 株 3+$共 表 现 出 * 种 耐 药 谱 其 中 < 株 菌 表 现 为 多 重 耐 药 占 3+$ 菌 株 *:<?g#? 株 菌 仅 表 现 出 对 ]$ 单 一 耐 药 占 3+$菌株 <:*g#双重耐药菌株共 E 株占 3+$ 菌株 <:*g#< 重耐药的菌株共 E 株占 3+$菌株 <:*g# 重 耐 药 的 菌 株 共 E 株 占 3+$ 菌 株 <:*g# 重 耐 药 的 菌 株 株 占 3+$ 菌 株 <:?g 3+$ 耐 药 谱 见 表 株 3+$ 中 有? 株菌表现出对 I\耐药耐药率 <:?g# 株表 现 出 对 I耐 药 耐 药 率 <:?g# 株 表 现 出 对 18G耐药耐 药 率 <:?g# 株 表 现 出 对 168耐 药 耐药耐药率 耐药率 :*g# 株表现出对 3 :*g# 株表现出对 1G 耐药耐药率 :g 表 3+$耐药谱 ::数据分析 -I图像录入 c M *: * 软件包进行处 理识别图像条带经同一的分子质量标准进行校准 ^ $ ^ M 3+$ 耐药谱 耐药菌数 株 ]$? ]$I\ 中 9: R^ 的条带忽略不计 -I电泳图谱中 ]$I 每条泳道代表 株 菌在 限制 性 内 切 酶 的 切 割 下不 ]$18G ]$I\18G 同的菌株会呈现不同的条带数和片段大 小 将条带 ]$I\168 数和位置相同的菌株归为同一 -I型别 ]$II\ 标定条带位置必要时进 行 手 工 校 正在 -I图 像 结果 :?E 株金黄色葡萄球菌对? 种抗生素的耐药情况?E 株金黄色葡萄球菌共检出 * 株耐药菌耐 ]$3 ]$II\168 ]$II\18G ]$I\16818G ]$II\3 ]$I\18G3 ]$II\18G1G 株耐药率为 <: <g 对两种及以上抗生素耐药 ]$II\16818G 的菌株 $ 多 重 耐 药 共 E 株耐 药 率 为 <?:g 耐 ]$II\18G3 药率为 *:<g 对一种抗生素表现为耐药的菌株共 g]$e:?g18g 药率由高到低依次为 I\: g168: E*g1G *: g3 :?*gi<: : <甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌$3++$耐药情况?E 株金黄色葡萄球菌中共检出 3++$< 株

北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 < 其中 E 株 菌 对 所 选 抗 生 素 敏 感其 余 * 株 菌 表 现 性病原菌耐药株的产生扩散且在食品中的药物残留 出 E 种 耐 药 谱 对 单 一 抗 生 素 耐 药 菌 株? 株占 可能干扰人肠道内的正常菌丛和诱导临床耐药病原菌 3++$菌株 :Eg#多 重 耐 药 菌 株 <* 株占 3++$ 株动物排泄物中的抗生素和耐药菌排入环境并长期 菌株 *:*Eg 多重耐药菌中 双重 耐 药菌 E 株占 保持耐药性质 3++$菌株 :g#< 重耐药菌 株占 3++$菌株 g 3+$ 中 耐 药 率 达 到 的耐 药 率 最 高 达 到 : <:Eg# 重 耐 药 菌 株 占 3++$ 菌 株?:g# <:?g3++$中耐 药率达 到 : gi\在 3+$ 重耐药 < 株 占 3++$菌 株 :g 耐 药 谱 见 表 和 3++$中耐药 率都 位居第一 位 除 I\外3+$ < < 株 3++$ 中 株 菌 对 I耐 药 耐 药 率 和 3++$都 表 现 出 对 I 18G相 对 较 高 的 耐 药 率 :<Eg#E 株 菌 对 I\ 耐 药 耐 药 率 :g# 168在 3+$和 3++$中 的 耐 药 率 近 似 3+$和 E 株 菌 对 168耐 药 耐 药 率 :g# E 株 菌 对 3++$对 m$#1g 3 相对敏感可作为优先选 18G耐药耐 药 率 :g# 株 菌 对 1G 耐 药 耐 择的抗生素用于治疗金黄色葡萄球引起的食 源 性 疾 耐 药 耐 药 率 药 率?:g# * 株 菌 对 3 病 长期以来万古霉素是治疗 3+$感染的基石和金 :g#全部 3++$均表现出对 m$#敏感 标准 ^ <$ ^ M 3++$ 耐药菌数 株 本研究的监测结果可以看出I\ 耐万古霉素的 3+$被列为未来 年的超级 耐药细菌 表 <3++$耐药谱 耐药谱 * * ** 除 株菌的 3G 1值表现为 8的中介 值外菌株均表现为对 m$#敏感 掌握食源性金黄色 葡萄球菌耐药谱对于在治疗由该菌引起的食源性疾病 I I\ 168 临床 研 究 显 示 年 全 国 个 城 市 1G 所教学综合医院的 3+$的流行率为 :g E* 3 II\ 时的抗生素选择有一定的指导意义 本研究结 果 显 示 的 北 京 市 食 源 性 3+$分 离 率 达 I\168 < 到 E:?g低 于 临 床 的 流 行 水 平 多 重 耐 药 菌 更 I\18G 多的存 在 于 3+$中 达 到 *:<?g 高 于 3++$中 II\18G II\1G I\16818G < 单一耐药 与 选 取 的 抗 生 素 种 类 相 对 较 少 有 关 与 II\18G1G 以往 的 研 究 比 较 发 现 不 同 地 区 不 同 食 品 来 源 II\16818G I\18G3 < I\16818G1G * 金黄 色 葡 萄 球 菌 的 耐 药 性 分 析 中 报 道 未 检 出 II\16818G1G 3+$?* 食品中 金 黄 色 葡 萄 球 菌 的 污 染 状 况 及 耐 II\18G3 :金黄色葡萄球菌的 -I分型?E 株 金 黄 色 葡 萄 球 菌 基 因 组 #$经 #:G 的 *:*Eg 表现出 * 种耐药谱仅对 ]$表现出 3+$的 分 离 率 可 能 不 同 如 四 川 省 动 物 性 食 品 源 药性分析 中 报 道 的 北 京 市 通 州 区 污 染 食 品 的 金 黄 * 色葡萄球菌 g 为 3+$ 本 研 究 中 3+$的 样品来源分布广 泛来 源 于 类 食 品其 中 包 括 中 酶切后将 -I图谱 进 行 聚 类 分 析见 图 其 中 式凉拌菜 株生禽畜肉? 株熟肉制品? 株米 面 株菌未形成任何条带经 复 测仍 无 条 带 形 成未 纳 制品? 株焙烤及油 炸 类 食 品 株冰 淇 淋 株豆 入软件分析 用于聚类分 析 的? 株 菌 中 株 菌 制品 株果蔬汁 < 株沙拉 株烧烤食品 株水 发生降解经 复 测 加 入 硫 脲 仍 出 现 降 解 无 法 聚 类 产品 株 提示北京市餐饮业即食食品是 3+$污 其余 *? 株菌共分为 种带型其中? 株菌 分离 染的高风险食品 自餐饮环节E 株 菌 分 离 自 食 品 原 料 带 型 分 布 分 散 未体现出优势带型 本研究结果显示北京市食源性金黄色葡萄球 菌 的 -I带型分散来自于不同区域不同样品的菌株 从图 中可以看到 -I图谱的聚集 性并 不明 带型可以完全一致流行的优势菌株不明显 耐药的 显在 -I带型完全相同的菌株 中样 品种类 及来 金黄色葡萄 球 菌的 -I图谱 与耐 药 谱 之 间 关 联 性 源呈多样性未表 现 出 菌 株 间 的 相 关 性 其 中 耐 药 较差 同一耐药谱可呈现多种带型不同耐药谱可呈 菌的 -I带型与耐药谱之间未体现出关联性 现完全一致的带型 来自相同区相同食品 来源 的 菌 株同源性较高来自崇文区的分离自米面制品的 株 <讨论 食源性金黄色葡萄球菌产生耐药的主要原因是由 于动物在饲养过程中使用亚治疗量的抗生素导致食源 菌表现出完全一致的带型来自通州区的分离自米面 制品的 < 株菌表现出完全一致的带型 本研究 揭 示 了 北 京 地 区 食 源 性 金 黄 色 葡 萄 球

< X#$8--6\G 图? 株金黄色葡萄球菌的 -I聚类图 - M -I? 年第 * 卷第 期

北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 << 续图 菌的耐药谱和 -I型 别 分 布 特 征建 立 了 包 含 耐 药信息的食源性金 黄 色 葡 萄 球 菌 分 子 分 型 数 据 库 为今后处 置 由 金 黄 色 葡 萄 球 菌 引 起 的 食 物 中 毒 事 件中的溯源诊断及 抗 生 素 治 疗 提 供 了 技 术 支 撑指 导动物饲养阶段合 理 的 选 择 抗 生 素从 源 头 上 控 制 和减少多重耐药金黄色葡菌球菌的产生 D V ^ #1 F V V V VM Y*> G Y M - V 3 ^ E$< *> < * 3 D + 1 R 1 Z > 1 M D V m ^ D M Y * >Y1 3 ^ <E $? E< E?> * 徐勤巢国祥>生 牛 奶 中 金 黄 色 葡 萄 球 菌 污 染 状 况 及 耐 药 性 * >中国卫生检验杂志 $? E E<> 状研究 Y 参考文献 * 吕素玲诸葛石养韦程媛等>广西食品中金黄色葡萄球菌污染 *> > 状况及耐药情况分析Y 应用预防医学?$ * # + V 8 ^ $ > M * 崔巧珍张燕军郭慧芳>金黄色葡萄球菌的 耐 药 变 迁 Y * >中 <E*> 国药物与临床< < $ <E * * Y -F M 3 I + + > $ M ^ R M jm V V^ M V ^ D #1 F

X#$8--6\G < Y *> I G M?$??> E * 贺文强陈宏斌赵春江等> 年 中 国 个 主 要 城 * >中 华 微 生 物 学 和 免 市金黄色葡萄球分 子 流 行 病 学 研 究 Y > 疫学杂志< << $ E 年第 * 卷第 期? * 刘东香刘书 亮张 晓 利等>四 川 省 动 物 性 食 品 源 金 黄 色 葡 * >中国兽医杂志 $ *?> 萄球菌的耐药性分析 Y * 张兰荣王连秀张文利>食品中 金 黄 色 葡 萄 球 菌 的 污 染 状 况 * > * $ < <E> 及耐药性分析 Y 论著 上海市闵行区初级农产品中金黄色葡萄球菌污染状况 及毒力基因分布特征研究 骆玲飞王小光刘继倩宋驰萍乔坤欧阳霖陈秀华刘芸 上海市闵行区疾病预防控制中心上海# 摘要 目的了解上海市闵行区初级农产品中金黄色 葡 萄 球 菌 的 污 染 状 况 及 毒 力 基 因 的 携 带 情 况 方 法 按 国标方法采用科玛嘉显色培养基对初级农产品中的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 进 行 分 离#生 化 鉴 定收 集 的 菌 株 采 用 实 时 耐 热 核 酸 酶 基 因 39 粘 附 素 基 因 和 肠 毒 素 基 因 6 #6? #6 #6 8#6 荧光 1方法检 测 血 浆 凝 固 酶 基 因 #39和 基 结果* 份食品中检出金黄色葡萄球菌 < 株检出率为 :?Eg$< 株金黄色葡萄球菌均含有 基因全部缺失其余 个毒力基因则表现为部分缺失 结论本地区初级农产品 中 存 在 金 黄 色 葡 萄 球 菌 因而 6 毒力 的污染生肉禽类食品中金黄色葡萄球菌污染比较严重应加强 监 督 管 理$金 黄 色 葡 萄 球 菌 菌 株 均 包 含 有 基因可以作为一项检测其致病力的指标 关键词 金黄色葡萄球菌$ 污染$ 毒力基因$ 食源性致病菌$ 初级农产品$ 农产品$ 食品安全?*$ < 中图分类号:#<E?:文献标志码$文章编号 # :< > D> ::* D3 - +8 -+ -3 +1 # # $ $+- 3 6 - * - - - 3 8+? + 8-3+- H3+-3+ 8X8 Z$#] M 8G XY j +#1D G $FM X\ 16I#] M DM 8G X\M $ 1 1 V 3 D +D D 1D 6 + 6 D V D M #1 F D VM 3 D +D D > 3 163 V M V $G#:9 [ M V V ^ D V #:9 V V V>m M 39 6 6? 6 6 8 V 6 [ V V ^ 1 D V > 9 * < [ V V * #> 9 V DV [ :?Eg>$ D V V D V 39 V M ^M 6 M [ MV V D M M [ > - * - D #:9 D VM V 3 D V +D D >+M V V D M V ^ D V [ V M M >$ #:9 M >G M V ^M V V M >? #1 F # # M # V^ D ^ # VM # VM # V 金黄色葡萄球菌在自然界中广泛存在可以引起 各种化脓性炎症和食物中毒是食源性疾病的重要病 原菌之一 据 报 道 * 收稿日期 基金项目上海市闵行区科委自然基金项目36o # 作者简介骆玲飞女主管技师研究方向为病原微生物 I ES > 通讯作者王小光男主任技师研究方向为病原微生物 I [ E<? S > * * 年 在 美 国 由 于 金 黄 色 葡 萄球菌引起的食物中毒有 起在细 菌 性食物中 毒 中居第三位 我国每年发生的此类食物中 毒事 件 也 非常多全国各地均有报道 i<* 金黄色葡萄球菌的 致病原理与其很多毒力基因有关 其中最重要的一 种就是肠毒素 $ +I 基因 常 见 的 肠 毒 素 分 为 种