4796 ISSN (print) ISSN (online) 研 发 前 沿 (diethylmitrosamine, DEN),,,. - -,, (diethylmitrosamine, DEN),,,. DEN,. 仓 鼠 1 只, 44 wk 处 死
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1 ; 22(31): ISSN (print) ISSN (online) RAPID COMMUNICATION DEN 诱 导 仓 鼠 肝 癌 模 型 的 建 立 及 其 异 种 成 瘤 性 incidence rate of liver cancer was 66.7% (8/12). The rate of xenograft tumor formation in nude mice was 62.5% (5/8). CONCLUSION: A hamster model of DEN induced hepatocellular carcinoma has been established successfully, and the incidence of hepatocellular carcinoma is high. This model can be used as a new and dynamic animal model. Establishment of a hamster model of diethylnitrosamine induced hepatocellular carcinoma Wan Zhao, Rong-Gan Liang, Qing Xu Wan Zhao, Rong-Gan Liang, Qing Xu, Department of Pharmacology, Guilin Medical College, Guilin , Guangxi Zhuang Autonomous Region, China Supported by: National Natural Science Foundation of China, No Correspondence to: Qing Xu, Professor, Department of Pharmacology, Guilin Medical College, 109 Huancheng Second North Road, Guilin , Guangxi Zhuang Autonomous Region, China. xq @163.com Received: Revised: Accepted: Published online: Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved. Key Words: Diethylmitrosamine; hepatocellular carcinoma; Animal model Zhao W, Liang RG, Xu Q. Establishment of a hamster model of diethylnitrosamine induced hepatocellular carcinoma. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2014; 2 2 ( 3 1 ) : U R L : h t t p : / / w w w. w j g n e t. com/ /22/4795.asp DOI: org/ /wcjd.v22.i 目 的 : (diethylmitrosamine, DEN). 背 景 资 料,,. Abstract AIM: To establish a hamster model of diethylnitrosamine (DEN) induced hepatocellular carcinoma. METHODS: Twenty-four hamsters, weighing from 70 to 100 g, were randomly divided into either an experimental group (n = 12) or a control group (n = 12). The experimental group was injected with DEN via the abdominal cavity and simultaneously administered DEN in drinking water. In the control group, DEN was replaced with normal saline. Pathological morphology was observed after HE staining. RESULTS: Pathology results confirmed that hepatocellular carcinoma was successfully induced in 8 hamsters of the experimental group, and the 方 法 : g 24, (n = 12) (n = 12), DEN,, HE. 结 果 :, 66.7%(8/12). 62.5%(5/8). 结 论 : DEN,,, 同 行 评 议 者,, 2014 WCJD Volume 22 Issue 31
2 4796 ISSN (print) ISSN (online) 研 发 前 沿 (diethylmitrosamine, DEN),,,. - -,, (diethylmitrosamine, DEN),,,. DEN,. 仓 鼠 1 只, 44 wk 处 死 所 有 仓 鼠. URL: DOI: 0 引 言 肝 癌 是 我 国 最 常 见 的 消 化 系 恶 性 肿 瘤, 具 有 发 病 隐 匿 病 程 短 死 亡 率 高 等 特 点 [1]. 肝 癌 动 物 模 型 是 研 究 肝 癌 的 发 生 发 展 及 治 疗 的 基 础. 目 前 已 报 道 的 肝 癌 模 型 有 自 发 性 诱 发 性 及 移 植 性 等. 其 中, 化 学 致 癌 剂 诱 发 的 动 物 模 型 癌 变 过 程 具 有 多 阶 段 多 步 骤 的 特 点, 与 人 类 肝 癌 形 成 的 过 程 相 仿, 为 动 态 研 究 肝 癌 的 发 生 转 移 及 治 疗 提 供 了 理 想 的 平 台. 此 类 肝 癌 模 型 常 用 动 物 为 大 鼠 及 小 鼠, 也 有 应 用 其 他 动 物 ( 豚 鼠 兔 旱 獭 恒 河 猴 ) 诱 发 肝 癌 的 报 道 [2]. 仓 鼠 (Syrian Hamster, 叙 利 亚 金 色 仓 鼠 ) 在 形 态 学 生 物 学 以 及 免 疫 学 等 方 面 与 人 有 相 似 之 处 [3], 可 用 [4] 于 制 作 人 类 肿 瘤 等 多 种 疾 病 的 动 物 模 型. Chen [5] 等 通 过 皮 下 注 射 和 饮 用 二 乙 基 亚 硝 胺 (diethylmitrosamine, DEN) 水 溶 液 诱 发 具 转 移 性 的 仓 鼠 诱 发 性 肝 癌 模 型, 但 其 诱 导 成 瘤 率 较 低 且 造 模 动 物 死 亡 率 较 高. 本 研 究 通 过 腹 腔 注 射 和 饮 用 DEN 水 溶 液 诱 导 仓 鼠 诱 发 性 肝 癌 模 型, 探 讨 仓 鼠 肝 脏 病 变 的 形 态 学 演 变 过 程 及 其 异 种 成 瘤 性, 现 将 结 果 报 道 如 下. 药 3 d, 连 续 3 wk. 第 4 周 起 给 予 0.01% 的 DEN 水 溶 液 ( 蒸 馏 水 配 制 ), 自 由 饮 水. 对 照 组 给 予 等 剂 量 的 生 理 盐 水 腹 腔 注 射 及 蒸 馏 水 自 由 饮 水. 每 日 观 察 动 物 的 一 般 情 况 ( 精 神 饮 食 毛 色 及 活 动 等 ), 如 动 物 出 现 精 神 萎 靡, 活 动 减 少 及 饮 食 减 少, 体 质 量 下 降 等 情 况, 暂 停 给 药, 好 转 后 再 继 续 给 药. 分 别 在 wk 处 死 实 验 组 : 1% 戊 巴 比 妥 钠 麻 醉 后 除 去 腹 部 被 毛 消 毒 开 腹, 肉 眼 观 察 肝 脏 病 变 后, 确 认 有 肿 块 形 成 者 处 死 动 物, 摘 取 肝 脏 固 定 于 40 g/l 中 性 甲 醛 溶 液 中, 24 h 后 进 行 常 规 石 蜡 包 埋 切 片, HE 染 色 并 观 察 拍 照. 如 动 物 自 然 死 亡, 处 理 方 法 同 上 : 35 wk 后 仓 鼠 肝 脏 形 成 明 显 肿 瘤, 分 离 肿 瘤, 取 鱼 肉 状 瘤 组 织, 切 成 1.0 mm 3 大 小 备 用 ; 裸 鼠 8 只, 体 质 量 18 g± 2 g, 适 应 性 饲 养 3 d, 0.1% 戊 巴 比 妥 钠 100 mg/kg 腹 腔 注 射 麻 醉, 消 毒, 在 剑 突 下 沿 腹 正 中 线 做 长 1 cm 切 口 ; 用 手 指 挤 压 裸 鼠 腹 腔, 挤 出 一 叶 肝 脏, 用 手 术 刀 片 于 肝 脏 接 种 部 位 以 30 度 做 一 斜 切 口 : 0.5 cm( 宽 ) 0.5 cm( 深 ); 用 镊 子 将 1.0 mm 3 大 小 的 瘤 组 织 植 入 切 口, 消 毒 棉 签 轻 压 切 口 止 血 固 定, 常 规 缝 合 关 腹. 全 程 均 为 无 菌 操 作 : 手 术 后 12 wk, 处 死 裸 鼠, 开 腹, 肉 眼 观 察 肝 脏 病 变 后, 摘 取 肝 脏 固 定 于 40 g/l 中 性 甲 醛 溶 液 中, 24 h 后 进 行 石 蜡 包 埋 切 片, HE 染 色 并 观 察 拍 照. 计 量 资 料 用 mean±sd 表 示, 采 用 SPSS19.0 软 件 进 行 统 计 分 析, 检 验 方 法 采 用 One-way ANOVA 分 析 和 t 检 验. P <0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义. 相 关 报 道 D E N,,. 1 材 料 和 方 法 1.1 SPF 级 叙 利 亚 仓 鼠, 由 上 海 斯 莱 克 实 验 动 物 有 限 公 司 提 供 ; 裸 鼠, 由 广 西 医 科 大 学 动 物 实 验 中 心 提 供 ; DEN, 纯 度 99.9%, 美 国 Sigma 公 司 产 品 ( 批 号 : ) : 仓 鼠 24 只, 3 wk, 体 质 量 g, 雌 雄 各 半, 分 笼 饲 养, 标 准 饲 料 喂 养, 定 期 更 换 垫 料, 适 应 性 饲 养 3 d, 采 用 完 全 随 机 分 实 验 组 (n = 12, 雌 雄 各 半 ) 和 对 照 组 (n = 12, 雌 雄 各 半 ). 实 验 组 : 按 10 mg/kg 给 予 腹 腔 注 射 DEN 水 溶 液 ( 生 理 盐 水 配 制 ), 每 周 连 续 给 2 结 果 2.1 实 验 开 始 时, 仓 鼠 进 食 饮 水 好, 好 活 动, 背 毛 柔 顺 有 光 泽. 诱 癌 6 wk 后, 实 验 组 仓 鼠 进 食 量 下 降, 行 动 迟 缓, 体 质 量 较 对 照 组 增 长 缓 慢, 停 用 DEN 溶 液, 第 8 周 仓 鼠 一 般 情 况 好 转 重 新 开 始 喂 食 DEN 溶 液. 诱 癌 7 wk 时, 实 验 组 开 始 出 现 死 亡, 未 见 尸 体, 死 前 体 质 量 未 见 明 显 减 轻, 考 虑 为 仓 鼠 互 斗 互 食. 第 13 周, 死 亡 1 只, 解 剖 时 见 少 量 腹 水, 肝 脏 肿 大, 表 面 不 光 滑. 第 17 周, 死 亡 数 量 最 多, 共 3 只, 解 剖 时 已 可 见 到 肝 脏 有 大 小 不 等 的 白 色 结 节. 44 wk 处 死 所 有 仓 鼠, 实 验 组 肝 癌 发 生 率 为 66.7%(8/12); 对 照
3 4797 A 创 新 盘 点 DEN,,. 图 1 形 成. 仓 鼠 肝 脏 表 面 形 成 大 小 不 等 的 结 节, 并 有 明 显 肿 物 B 组 无 肝 癌 发 生. 统 计 实 验 组 死 亡 率 33.3%(4/12), 对 照 组 死 亡 率 25%(3/12). 2.2 诱 癌 开 始 时, 实 验 组 仓 鼠 体 质 量 与 对 照 组 无 明 显 差 异 (P >0.05); 15 wk 时, 实 验 组 仓 鼠 体 质 量 较 对 照 组 增 长 缓 慢, 但 仍 无 明 显 差 异 (P >0.05); 30 wk 时, 实 验 组 明 显 低 于 对 照 组 (P<0.05). 2.3 实 验 组 仓 鼠 在 第 1-13 周, 死 亡 及 处 死 仓 鼠 肝 脏 肉 眼 观 病 变 不 明 显. 第 周, 肝 脏 肿 大, 表 面 粗 糙, 肝 脏 已 出 现 小 米 粒 大 小 淡 黄 色 斑 点. 第 周, 肝 脏 肿 大, 表 面 粗 糙, 肉 眼 可 见 直 径 cm 大 小 的 灰 白 色 癌 结 节 ( 图 1). 肝 脏 质 地 变 脆, 癌 结 节 质 硬, 内 部 可 见 坏 死. 其 中 3 只 出 现 腹 水. 2.4 对 照 组 仓 鼠 肝 小 叶 结 构 完 整, 肝 细 胞 索 排 列 整 齐. 实 验 组 肝 脏 病 变 大 致 可 分 为 3 期. 第 1-13 周 为 肝 硬 变 前 期 : 肝 小 叶 结 构 完 整, 但 可 见 坏 死 灶 内 炎 性 细 胞 浸 润 并 可 见 肝 细 胞 嗜 酸 性 变 ; 第 周 为 肝 硬 变 期 : 正 常 肝 小 叶 结 构 破 坏, 由 广 泛 增 生 的 纤 维 组 织 将 肝 小 叶 分 割 包 绕 成 大 小 不 等 的 圆 形 肝 细 胞 团, 可 见 典 型 的 假 小 叶 结 构. 假 小 叶 内 肝 细 胞 索 排 列 紊 乱, 小 叶 中 央 静 脉 缺 如 ; 第 周 为 癌 变 期 : 出 现 肝 癌, 癌 细 胞 呈 现 多 形 性, 异 型 性 明 显, 细 胞 核 增 大, 胞 质 少, 嗜 碱 性, 可 见 较 多 病 理 核 分 裂 象 畸 形 核 及 多 核 巨 细 胞 ( 图 2). 2.5 裸 鼠 于 接 种 手 术 后 6 wk 出 现 疑 似 肿 块 生 长, 第 9 周 时 已 有 明 显 肿 块 形 成, 第 12 周 时 处 死 所 有 裸 鼠. 移 植 瘤 形 成 率 62.5%(5/8), 无 死 亡. 2.6 处 死 裸 鼠, 开 腹, 见 肝 脏 表 面 光 滑, 可 见 明 显 肿 块 形 成, 肿 块 与 周 围 组 织 界 限 清 楚 ( 图 3). 病 理 检 查 确 认 为 C D 图 2 仓 鼠 肝 脏 病 理 变 化 过 程 (HE 200). 移 植 性 肝 癌 ( 图 4). 3 讨 论 诱 发 性 肝 癌 模 型 在 肿 瘤 基 础 研 究 致 癌 物 质 促
4 4798 ISSN (print) ISSN (online) 应 用 要 点,. A B 图 3 裸 鼠 移 植 瘤 肉 眼 观. 癌 作 用 研 究 临 床 中 的 诊 断 和 治 疗 以 及 影 像 学 检 查 方 面 是 不 可 替 代 的, 而 且 广 泛 被 应 用 于 从 多 角 度 研 究 肝 癌 的 发 生 发 展 规 律 及 分 子 机 制. DEN 具 有 很 强 的 化 学 毒 性, 所 含 的 亚 硝 胺 基 具 有 中 毒 剂 和 诱 癌 剂 的 双 重 效 应 [6], 而 且 DEN 诱 发 的 肿 瘤 多 为 肝 细 胞 癌, 与 人 类 肝 细 胞 癌 较 为 相 似 [7]. DEN 诱 发 肝 癌 模 型 的 特 点 是 成 功 率 高, 对 肝 脏 专 一, 肝 细 胞 癌 所 占 比 例 大, 是 迄 今 应 用 最 广 泛 的 一 种 化 学 性 药 物 诱 发 肝 癌 模 型 [8]. 本 实 验 图 4 裸 鼠 移 植 瘤 (HE 200). 通 过 实 验 组 不 同 时 间 的 仓 鼠 肝 脏 病 理 学 检 查 发 Atroch A, Moreno FS, Dagli ML. Protective effects 现 病 理 过 程 分 3 个 阶 段 : 诱 癌 早 期 第 1-13 周 表 现 of guarana (Paullinia cupana Mart. var. Sorbilis) 为 中 毒 性 肝 炎 ; 第 周 为 肝 硬 变 期 ; 第 against DEN-induced DNA damage on mouse [9-15] 周 为 癌 变 期. 与 相 关 报 道 的 基 本 一 致, 经 历 肝 liver. Food Chem Toxicol 2006; 44: [PMID: ] 炎 肝 硬 化 阶 段 进 而 形 成 肝 癌, 很 好 的 模 拟 了 5 Chen G, Dai ZK, Liang RG, Xiao SJ, He SQ, Zhao 人 类 肝 癌 的 发 生 发 展 过 程. 因 仓 鼠 对 环 境 要 求 较 高, 且 生 性 好 斗, 饲 养 时 经 验 不 足, 造 成 对 照 组 仓 鼠 出 现 死 亡. 实 验 需 要 注 意 下 列 方 面 : (1) 动 物 的 选 择 : 根 据 我 们 的 实 验 结 果 提 示, 应 选 择 3-4 wk 的 仓 鼠, 雌 雄 成 瘤 率 无 明 显 差 别 ; (2) 仓 鼠 饲 养 : 仓 鼠 生 性 好 斗, 每 笼 动 物 不 能 过 多, 2-3 只 为 HL, Xu Q. Characterization of diethylnitrosamineinduced liver carcinogenesis in Syrian golden hamsters. Exp Ther Med 2012; 3: [PMID: ] 6 Okubo H, Moriyama M, Tanaka N, Arakawa Y. Detection of serum and intrahepatic hepatocyte growth factor during DEN-induced carcinogenesis in the rat. Hepatol Res 2002; 24: [PMID: DOI: /S (02) ] 佳, 勤 换 垫 料, 防 止 动 物 生 病. 本 模 型 操 作 方 法 简 便, 周 期 较 短, 诱 癌 23 wk 以 后, 病 理 结 果 证 实 ; 7: 仓 鼠 已 经 形 成 肝 癌, 并 且 所 形 成 的 肿 瘤 有 很 好 8 Yoshiji H, Yoshii J, Ikenaka Y, Noguchi R, Tsujinoue H, Nakatani T, Imazu H, Yanase K, Kuriyama 的 异 种 成 瘤 性, 为 肝 癌 的 诊 断 和 治 疗 提 供 了 新 S, Fukui H. Inhibition of renin-angiotensin system 的 实 验 平 台. attenuates liver enzyme-altered preneoplastic lesions 4 参 考 文 献 and fibrosis development in rats. J Hepatol 2002; 37: [PMID: DOI: / S (02) ] 1 DEN 9 Qian Y, Ling CQ. Preventive effect of Ganfujian 2010; 35: granule on experimental hepatocarcinoma in rats World J Gastroenterol 2004; 10: [PMID: ] 2001; 18: van der Weyden L, Bradley A. Mouse chromosome engineering for modeling human disease. DEN 2005; 12: Annu Rev Genomics Hum Genet 2006; 7: [PMID: DOI: /annurev.genom ] 11 DEN PLCε 2013; 23: Fukumasu H, Avanzo JL, Heidor R, Silva TC, 12
5 4799 C3H/HeN 14 同 行 评 价 2012; 36: DEN 13 Kawaguchi T, Nomura K, Hirayama Y, Kitagawa 2009; 17: , T. Establishment and characterization of a chicken 15 hepatocellular carcinoma cell line, LMH. Cancer Res,, 1987; 47: [PMID: ] 2004; 12: , DEN, ,,. ISSN (print) ISSN (online) DOI: 年 版 权 归 百 世 登 出 版 集 团 有 限 公 司 所 有 世 界 华 人 消 化 杂 志 外 文 字 符 标 准 消 息 本 刊 讯 本 刊 论 文 出 现 的 外 文 字 符 应 注 意 大 小 写 正 斜 体 与 上 下 角 标. 静 脉 注 射 iv, 肌 肉 注 射 im, 腹 腔 注 射 ip, 皮 下 注 射 sc, 脑 室 注 射 icv, 动 脉 注 射 ia, 口 服 po, 灌 胃 ig. s( 秒 ) 不 能 写 成 S, kg 不 能 写 成 Kg, ml 不 能 写 成 ML, lcpm( 应 写 为 1/min) E%( 仪 器 效 率 ) 60 = Bq, ph 不 能 写 PH 或 P H, H pylori 不 能 写 成 HP, T1/2 不 能 写 成 tl/2 或 T, V max 不 能 Vmax, µ 不 写 为 英 文 u. 需 排 斜 体 的 外 文 字, 用 斜 体 表 示. 如 生 物 学 中 拉 丁 学 名 的 属 名 与 种 名, 包 括 亚 属 亚 种 变 种. 如 幽 门 螺 杆 菌 (Helicobacter pylori, H.pylori ), Ilex pubescens Hook, et Arn.var.glaber Chang( 命 名 者 勿 划 横 线 ); 常 数 K ; 一 些 统 计 学 符 号 ( 如 样 本 数 n, 均 数 mean, 标 准 差 SD, F 检 验, t 检 验 和 概 率 P, 相 关 系 数 r ); 化 学 名 中 标 明 取 代 位 的 元 素 旋 光 性 和 构 型 符 号 ( 如 N, O, P, S, d, l ) 如 n -(normal, 正 ), N -(nitrogen, 氮 ), o -(ortho, 邻 ), O -(oxygen, 氧, 习 惯 不 译 ), d -(dextro, 右 旋 ), p -(para, 对 ), 例 如 n -butyl acetate( 醋 酸 正 丁 酯 ), N -methylacetanilide(n- 甲 基 乙 酰 苯 胺 ), o -cresol( 邻 甲 酚 ), 3-O -methyl-adrenaline(3-o- 甲 基 肾 上 腺 素 ), d -amphetamine( 右 旋 苯 丙 胺 ), l -dopa( 左 旋 多 巴 ), p -aminosalicylic acid( 对 氨 基 水 杨 酸 ). 拉 丁 字 及 缩 写 in vitro, in vivo, in situ ; Ibid, et al, po, vs ; 用 外 文 字 母 代 表 的 物 理 量, 如 m ( 质 量 ), V ( 体 积 ), F ( 力 ), p ( 压 力 ), W ( 功 ), v ( 速 度 ), Q ( 热 量 ), E ( 电 场 强 度 ), S( 面 积 ), t ( 时 间 ), z ( 酶 活 性, kat), t ( 摄 氏 温 度, ), D ( 吸 收 剂 量, Gy), A ( 放 射 性 活 度, Bq), ρ( 密 度, 体 积 质 量, g/l), c ( 浓 度, mol/l), j( 体 积 分 数, ml/l), w ( 质 量 分 数, mg/g), b ( 质 量 摩 尔 浓 度, mol/g), l ( 长 度 ), b ( 宽 度 ), h ( 高 度 ), d ( 厚 度 ), R ( 半 径 ), D ( 直 径 ), T max, C max, V d, T 1/2 CI 等. 基 因 符 号 通 常 用 小 写 斜 体, 如 ras, c-myc ; 基 因 产 物 用 大 写 正 体, 如 P16 蛋 白.
1600 1000 40 50 2030 2000 采 取 行 动 的 机 会 90% 开 拓 成 功 的 道 路 2
简 略 版 本 :2015 3 10 2016 2021 全 球 卫 生 部 门 病 毒 性 肝 炎 战 略 2016 2021 2015 3 12 2012 2010 2014 2015 2016 2021 140 55% 35% 5 15% 5 20% 2.4 1.3 1.5 1 1600 1000 40 50 2030 2000 采 取 行 动 的 机 会 90% 开 拓 成 功 的 道 路
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