642 罗 东 华, 等 鼻 咽 癌 患 者 外 周 血 全 基 因 组 表 达 谱 芯 片 结 果 初 步 分 析 中 图 分 类 号 R739.6 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2011) 鼻 咽 癌 是 我 国 南 方 及 东 南 亚 地 区

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1 中华肿瘤防治杂志 ２１１ 年 ５ 月第 １８ 卷第 ９ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ｍ２１１ Ｖ １８ Ｎ ９ ６４１ 前沿报道 论著 鼻咽癌患者外周血全基因组表达谱芯片 结果初步分析 罗东华 曹京燕 纪红 张华 曾木圣 洪明晃 华南肿瘤学国家重点实验室 中山大学 肿瘤防治中心鼻咽科 罗东华 纪红 实验研究部 曹京燕 张华 曾木圣 临床试验研究中心 药物临床试验机构 洪明晃 广东 广州 ５１６ Ｐ ｍ ｍ ｂ ｄ ｇ ｗ ｇｍｍ 犔犝犗犇狅狀犵 犺狌犪 犆犃犗犑 狀犵 狔犪狀 犑犐犎狅狀犵 犣犎犃犖犌 犎狌犪 犣犈犖犌 犕狌 狊 犺犲狀犵 犎犗犖犌 犕 狀犵 犺狌犪狀犵 狊 犲狀犝狀 狏 犲 狉 狊 犌狌犪狀犵狕犺狅狌 ５１６ 犘 犚 犆犺 狀犪 犛 犪 犲犓犲狔犔犪犫 狅 狉犪 狅 狉狔狅犳 犗狀犮 狅 犾 狅犵狔 狀犛狅狌 犺犆犺 狀犪 犛狌狀犢犪 狔 摘要 目 的 从 外 周 血 水 平 比 较 健 康 对 照 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｍ ｗ ｇｍｘ 者及鼻咽 癌 患 者 的 外 周 血 基 因 表 达 谱 差 异 ｄ ｂ ｗ ｄ ｇｄ 寻 找 新 的 ｍｒｎａ 分 子 标 志 方 法 选 取 ２ ｍ ｄ ｍｒｎａ ｍ ｕ ｂ ｍ ｋ 例鼻咽癌 患 者 和 ２ 名 健 康 对 照 者 进 入 本 研 ｂ ｄ ｍ 犕犈犜犎犗犇犛 ｇ 究 两组性别 年龄基本 匹 配 采 用 ＱＩＡＧＥＮ ｄ Ｔｗ ｍ ＮＰＣ ｇ Ｒ Ｍ Ｋ 分 离 纯 化 外 周 血 ｍｒｎａ ＲＮ ２ ｗ ｗ ｍ ｄ ｘｄｇ 行 Ａｇ 人 类 全 基 因 寡 核 苷 酸 芯 片 检 测 ｗ ｄ ｕｄ ｍｒｎａ ｗ ｘ ｄ ｍ ｗ 利用 ＧＳ ｇ１ 软 件 采 用 ｕ Ｒ ｂ ｄ ｍ ｂｑｉａｇｅｎ ＲＮ Ｍ Ｋ ｄ ｕ ｇ ｕ ｄ 算 法 计 算 犘 ５ 时 的 差 异 ｑｕ Ａｇ ｇ ｄ ｍ ｄ ｄ ｇｕ 基因 并 按 差 异 倍 数 排 序 利 用 Ｇ ｇ ｘ ｄｇ ｂ ｗ ｗｇ ｕ Ｕ ｇ ｕ ｑｕ 软件及 ＤＡＶＩＤ Ｂ ｍ Ｒ ｕ ６ ７ ｕ ｄ ｍ ＧＳ ｇ１ ｗ ｕ ｄ ｇ 对前期筛选的差异基因进行 聚 类 分 析 ＧＯ 分 ｄ ｇ ｗ 犘 ５ ｄ ｂ ｄ ｘ 析 Ｐ ｗ 分析 分 析 差 异 基 因 功 能 分 类 及 ｇ ＧＳ ｇｄ ＤＡＶＩＤ Ｂ ｍ Ｒ ｕ ６ ７ 相关通 路 结 果 差 异 倍 数 １ ５ 倍 且 犘 ｗ ｕ ｄ ｕ ｇ ＧＯ Ｐ ｗ Ｃ ５ 的包含 １２５７ 个 探 针 上 调 ６８７ 个 下 调 ｄ ｕ ｄ ｇ ｗ ｕ ｄ 犚犈 ５７ 个 差 异 倍 数 ２ 倍 的 包 含 １７１ 个 探 ｄ ｇ １ ５ １２５７ ｂ ｕ 犛犝犔犜犛 Ｆ ｇ ｇ 针 上调 １３２ 个 下 调 ３９ 个 差 异 基 因 主 要 ｕ ６８７ ｄｗ ５７ ｄ ｇ ２ ｇｕ ｇ 与细胞周 期 免 疫 反 应 及 对 病 毒 的 反 应 等 生 １７１ ｂ ｕ １３２ ｄｗ ３９ Ｔ ｇｕ ｇｕ 物学过程有关 主要 参 与 肿 瘤 信 号 通 路 细 胞 ｍｍｕ ｄ ｗ ｍ ｄ 周 期 通 路 和 ５３ 信 号 通 路 等 结 论 用 全 基 ｖ ｕ Ｔ ｍ ｖ ｖ ｄ ｗ ｗ 因组表达谱芯片可以 筛 选 出 鼻 咽 癌 患 者 与 健 ｗ ５３ ｇ ｗ 犐犗犖犛 Ｗ ｍ ｍ ｇ 犆犗犖犆犔犝犛 ｇ 康对照者 外 周 血 中 的 差 异 表 达 基 因 进 一 步 ｄ ｄ ｘ ｄｇ ｂ ｄ 筛选这些基因可能寻 找 到 鼻 咽 癌 诊 断 相 关 的 ｂ ｗ ＮＰＣ ｄ ｍｒｎａ ｍ ｕ ｂ ｍ ｍｒｎａ 分子标志 ｋ ｕ ｄｂ ｕｄ ｄ 中华肿瘤防治杂志 ２１１ １８ ９ ６４１ ６４６ 犆犺 狀犑犆犪狀犮 犲 狉犘狉 犲狏犜狉 犲犪 ２１１ １８ ９ ６４１ ６４６ 关键词 鼻咽肿瘤 基因芯片 生物信息学 ｍｒｎａ 分子标记物 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｍ ｗ ｂ ｍ ｍｒｎａ ｍ ｕ ｂ ｍ ｋ ｇ ｇｍｍ 基金项目 ８６３ 项目 ２７ＡＡ２Ｚ４７７ 国家自然科学基金 ３６３６８ 第一作者简介 罗东华 女 广东兴宁人 博士 主治医师 主要从事鼻咽癌诊断及综合治疗的临床与科研工作 ｍ Ｔ ８６ ２ ８７３４３３６１ Ｅ ｍ ｄｇｕ ｕ ｇｍ 通讯作者简介 洪明晃 男 江西南城人 教授 博士生导师 主要从事鼻咽癌的诊断治疗 临床流行病学及临床实验的管理工作 Ｔ ８６ ２ ８７３４３３６ Ｅ ｍ ｇｍ ｕ ｇ

2 642 罗 东 华, 等 鼻 咽 癌 患 者 外 周 血 全 基 因 组 表 达 谱 芯 片 结 果 初 步 分 析 中 图 分 类 号 R739.6 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2011) 鼻 咽 癌 是 我 国 南 方 及 东 南 亚 地 区 常 见 的 恶 性 肿 瘤, 严 重 威 胁 人 类 健 康 鼻 咽 癌 的 流 行 病 学 特 点 以 及 大 量 的 实 验 研 究 证 明, 鼻 咽 癌 的 发 生 发 展 是 一 个 多 因 素 多 基 因 和 多 阶 段 的 过 程, 其 基 因 的 异 常 要 远 远 先 于 [1] 形 态 改 变 及 时 检 测 异 常 基 因 正 成 为 肿 瘤 筛 查 的 一 个 方 向 基 因 芯 片 具 有 高 通 量 准 确 高 效 的 特 点, 能 够 研 究 细 胞 内 所 有 基 因 的 表 达 谱, 同 时 获 得 成 千 上 万 个 基 因 活 化 的 模 式, 为 临 床 上 寻 找 病 因 早 期 诊 断 病 理 分 型 及 临 床 分 期 分 型 等 提 供 了 强 有 力 的 工 具 外 周 血 细 胞 基 因 表 达 受 机 体 内 环 境 ( 病 理 生 理 改 变 ) 或 外 环 境 ( 物 理 化 学 刺 激 ) 影 响, 呈 动 态 变 化, 通 过 对 其 基 因 谱 分 析, 可 发 现 存 在 某 些 特 征 性 基 因 改 变, 以 此 鉴 别 患 [2] 者 群 与 健 康 人 群 国 外 已 有 文 献 报 道, 在 膀 胱 癌 口 [3] [4] 腔 癌 和 卵 巢 癌 中 利 用 外 周 血 作 全 基 因 组 表 达 谱 分 析 筛 选 分 子 标 志 本 研 究 的 目 的 是 从 外 周 血 水 平 发 现 健 康 对 照 者 鼻 咽 癌 患 者 的 外 周 血 基 因 表 达 谱 差 异, 初 步 分 析 差 异 基 因 的 功 能 及 分 类, 寻 找 鼻 咽 癌 相 关 的 mrna 分 子 标 志 1 材 料 与 方 法 1.1 标 本 来 源 自 开 始, 选 取 在 我 院 经 鼻 咽 组 织 病 理 学 检 查 确 诊 为 鼻 咽 未 分 化 型 非 角 化 癌, 未 行 抗 癌 治 疗 的 患 者 进 入 标 本 库 健 康 对 照 者 血 液 标 本 在 我 院 门 诊 体 检 者 及 本 院 职 工 体 检 时 获 得 全 部 经 知 情 同 意 每 位 进 入 标 本 库 的 个 体, 利 用 QIAGEN/BD COMPANY 的 PAXgene TM BloodRNA Tube 留 取 全 血 血 液 样 本, 置 -80 冰 箱 保 存, 分 批 提 取 mrna 从 标 本 库 中 选 取 20 例 鼻 咽 癌 患 者 及 20 名 健 康 对 照 者 的 血 样, 两 组 性 别 年 龄 基 本 匹 配 鼻 咽 癌 组 : 男 16 例, 女 4 例 年 龄 30~75 岁, 中 位 年 龄 41 岁 按 鼻 咽 癌 UICC 2002 年 分 期 标 准,Ⅱ 期 2 例,Ⅲ 期 9 例,Ⅳ 期 9 例 EB 病 毒 (EBV) 血 清 学 阳 性 19 例, 阴 性 1 例 健 康 对 照 组 : 男 16 例, 女 4 例 年 龄 28~56 岁, 中 位 年 龄 38 岁 EBV 血 清 学 全 部 为 阴 性 1.2 实 验 方 法 mrna 的 抽 提 纯 化 采 用 QIAGEN RNeas y R MiniKit 分 离 纯 化 mrna, 按 照 说 明 书 步 骤 进 行 对 所 有 抽 提 纯 化 的 RNA 样 本 均 进 行 紫 外 分 光 光 度 计 浓 度 测 定 及 1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 质 量 和 完 整 性 基 因 芯 片 杂 交 实 验 首 先 采 用 Ambion 公 司 的 GLOBINclear TM Kit 去 除 总 RNA 中 的 血 红 蛋 白 mrna 基 因 芯 片 采 用 Agilent 公 司 的 人 类 全 基 因 组 寡 核 苷 酸 芯 片 (Agilent Whole HumanGeneExpres sion Microarray4 44K array) 该 芯 片 个 60 mer 的 寡 核 苷 酸 片 段 代 表 >41000 条 人 类 基 因 和 转 录 本 芯 片 实 验 在 上 海 生 物 芯 片 公 司 完 成 按 下 列 步 骤 进 行 芯 片 杂 交 实 验 :1) 运 用 QIAGEN RNeasy R minikit, 纯 化 总 RNA 2) 一 步 法 合 成 cdna 第 一 链 和 第 二 链, 用 aautp 标 记, 纯 化 所 得 crna 3) 测 定 crna 浓 度 : 用 分 光 光 度 计 法 选 取 A260/A280 接 近 2.0 的 RNA( 比 值 在 1.9~2.1 也 可 ) 4) 用 荧 光 标 记 crna 样 品, 荧 光 分 子 掺 入 量 计 算 5) 使 crna 样 品 片 段 化 和 芯 片 杂 交 (4 44K microarrays);6) 芯 片 洗 涤 后, 于 AgilentG2565BA 扫 描 仪 中 扫 描, 分 辨 率 为 5μm, 扫 描 仪 自 动 以 100% 和 10%PMT 各 扫 描 1 次, 2 次 结 果 Agilent 软 件 可 自 动 合 并 Cy3 浓 度 ( ρ mol/ μ L)= A Cy3 掺 入 率 ( ρ mol/ μ g)= Cy3 浓 度 crna 浓 度 Agilent 生 物 芯 片 平 台 采 用 变 异 系 数 (CV) 与 检 出 率 评 价 芯 片 数 据 是 否 可 靠 CV 值 是 标 准 偏 差 与 平 均 值 之 比, 用 来 判 断 数 据 的 重 复 性, 用 百 分 比 表 示 Agi lent 建 议 的 质 控 标 准 是 CV 值 <15% CV= SD Mean 100% 芯 片 数 据 的 预 处 理 及 均 一 化 方 法 利 用 Gene Spring10.0 分 析 软 件 计 算 每 个 样 本 的 相 对 表 达 量 利 用 Quantile 方 法 将 样 本 原 始 数 据 进 行 标 准 化 处 理, 将 相 对 表 达 量 选 择 以 2 为 底 的 对 数, 使 数 据 分 布 符 合 正 态 分 布 方 便 对 于 基 因 表 达 量 变 化 的 研 究 通 过 Mi crosoftexcel 以 数 据 形 式 输 出 1.3 统 计 学 方 法 1) 聚 类 分 析 :GeneSpring10.0Clusteringanaly sis 软 件 ;2)GO(GeneOnto1ogy) 分 析 Pathway 分 析 : 美 国 NationalInstituteofAlergyandInfectiousDis eases(niaid,nih) 提 供 的 在 线 生 物 信 息 学 资 源 网 站 DAVIDBioinformaticsResources6.7(htp://david. abcc.ncifcrf.gov) 2 结 果 2.1 实 验 的 质 控 RNA 的 质 控 紫 外 分 光 光 度 计 浓 度 测 定 结 果 显 示, 所 有 外 周 血 样 本 RNA 的 A260/A280 比 值 接 近 2.0, 纯 度 较 好 1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 显 示, 各 标 本 的 电 泳 图 28S 和 18S 条 带 清 晰, 且 28S 条 带 的 亮 度 基 本 接 近 18S 的 2 倍, 没 有 DNA 杂 带 出 现 ( 图 1) 基 因 芯 片 实 验 的 质 控 40 张 芯 片 的 CV 除 了

3 中华肿瘤防治杂志 ２１１ 年 ５ 月第 １８ 卷第 ９ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ｍ２１１ Ｖ １８ Ｎ ９ ６４３ １ 张芯片在１ 其余３９ 张芯片的 ＣＶ 都在５ 左右 除去探针点无信号的 点 以 外 的 为 检 出 点 检 出 点 总 数 ２ ３ 芯片数据初步分析结果 利用 ＧＳ ｇ１ 软 件 采 用 ｕｑｕ 与全部探针数的比值 为 该 芯 片 的 检 出 率 即 有 表 达 的 ｕ ｄ 算法 将 犘 ５ 时 差 异 基 因 共 ８１８４ 个 其中上调基因３８１４ 个 下调基因４３７ 个 基因芯片 转录本 一般认为检出率 ６５ 比 较 正 常 ４ 张 芯 片样本检出率 均 在 ７ ７４ ８８ ７７ 符 合 Ａｇ 的质控标准 是一种半定量的检测 方 法 将 筛 选 出 的 差 异 基 因 根 据 差异倍数排序 差异倍数 １ ５ 倍的包含１２５７ 个探针 上调 ６８７ 个 下调 ５７ 个 差 异 倍 数 ２ 倍 的 包 含 １７１ 个探针 上调 １３２ 个 下调 ３９ 个 分层聚类分析对 检 验 后 差 异 倍 数 １ ５的差异 表达基因聚类结果显 示 鼻 咽 癌 组 和 健 康 对 照 组 能 很 好的区分 图 ３ 采 用 ＧＳ ｇ 软 件 的 支 持 向 量 机 ＳＶＭ 的分类方法 挑选 出 ４４９ 个 基 因 后 再 进 行 聚 类分析 结果显示能 将 鼻 咽 癌 组 和 健 康 对 照 组 更 好 区 分 而且组间的信号更一致 图 ４ ２ ４ ＧＯ 分析结果 差异基因在生物 学 过 程 主 要 与 细 胞 周 期 免 疫 反 图 １ １ 琼脂糖凝胶 ＲＮＡ 电泳结果 应 对病 毒 的 反 应 以 及 Ｔ 细 胞 介 导 的 免 疫 反 应 等 有 Ａ 部分鼻咽癌患者外 周 血 的 ＲＮＡ 电 泳 结 果 Ｂ 部 分 健 康 志 愿 者 外 周 关 表 １ 细 胞 成 分 方 面 差 异 基 因 与 多 种 细 胞 成 分 有关 分子功 能 方 面 主 要 与 ＤＮＡ 结 合 核 肽 结 合 以 血 ＲＮＡ 电泳结果 ２ ２ 杂交微阵列芯片扫描结果 Ａｇ ４ ４４Ｋ 人类全基因表达谱芯片的扫描结 果见图 ２ 杂交图是经过计算机数 据 叠 加 后 产 生 的 图 像 反映了每个被 检 测 基 因 表 达 丰 度 每 张 芯 片 上 共 有 ４４ 个点 含有人类全基因组４１ 个基因 图 中可见芯片杂交信号清晰 均衡 背景清晰 结果可靠 及嘌呤 核 苷 酸 结 合 等 密 切 相 关 有 关 的 基 因 有 １ 多个 ２ ５ Ｐ ｗ 分析 原始数据的 １２５７ 个 基 因 差 异 倍 数 １ ５ 犘 ５ 在 ＫＥＧＧ 的 映 射 中 分 析 出 １ 个 通 路 在 ＢＩＯＣＡＲＴＡ 中 分 析 出 一 条 通 路 按 参 与 基 因 数 多 少 排序 表 ２ 感 兴 趣 的 通 路 主 要 是 肿 瘤 相 关 信 号 通 路 ５３ 信号通路和细胞周期信号通路 表 ３ 结果可 见 Ｃ ｄ ｖ ＣＤＣ 基因家族及 Ｃ Ｂ１ Ｂ２ 基因与 ５３ 信号通路 和 细 胞 周 期 信 号 通 路 都 有 关 而 且均为表达上调 而 Ｂ ２ Ｘ ＢＡＸ 基 因与 ５３ 信号通路及 肿 瘤 信 号 通 路 有 关 而 且 均 为 表 达下调 ＴＧＦβ １在 细 胞 周 期 通路 与肿 瘤 信 号 通 路 均 表现为上 调 ＰＬＫ１ 在 细 胞 周 期 通 路 中 表 现 为 上 调 在 ＢＩＯＣＡＲＴＡ 的通路与 Ｔ 细胞活化有关 ３ 讨论 本研究利用外周血全血样本进行全基因组表达谱 芯片分析寻找鼻咽癌的 ｍｒｎａ 分子标志 近年来 基 因芯片技 术 已 经 成 功 地 应 用 在 多 种 肿 瘤 的 表 达 谱 分 析 肿瘤进展相关基因筛选 肿瘤基因诊断和抗肿瘤药 物研究上 特别是在恶性肿瘤分子学分类分型 肿瘤转 移复发及预后的预测方面具有显著的优越性 在鼻咽 癌方面 这些研究的 对 象 主 要 是 鼻 咽 癌 的 不 同 细 胞 株 或者鼻咽癌组织 癌 旁 组 织 和 鼻 咽 慢 性 炎 组 织 的 基 因 图 ２ 芯片杂交结果及 Ｑｕ 数据均一化的箱式图 Ａ 整个芯片的杂交结果 Ｂ Ａ 图左下角红色方框所选定区域的放大结果 表达差异 研究例数都较少 ５７

4 罗东华 等 鼻咽癌患者外周血全基因组表达谱芯片结果初步分析 ６４４ 图 ３ 差异倍数 １ ５ 且 犘 ５ 的差异基因 Ｇ ｇ 聚类分析结果 图 ４ 差异倍数 １ ５ 的差异基因经 Ｇ ｇ 软件 ＳＶＭ 后聚类分析结果 健康对照者 １ 鼻咽癌患者 红色 上调基因 绿色 下调基因 表 １ ＧＯ 分析生物学过程注释 部分 项目 计数 犘值 ＧＯ ７４９ ２２４２ ＧＯ ＧＯ ３１３２８ ｖ ｇｕ ｕ ｂ ６９５５ ｍｍｕ ＧＯ ＧＯ ９８９１ ｖ ｇｕ ｂ ＧＯ ２２４３ ２７８ ｍ ＧＯ ２８ ｕ ｄ ｖ ＧＯ ＧＯ ８７ Ｍ ｍ ５１３１ ｄ ｖ ＧＯ ＧＯ １６２７ ｇｕ ｋ ｄ ＧＯ ７３４６ ｇｕ ｍ ＧＯ ９６１５ ｖ ｕ ＧＯ １５６４ ｇｕ ＧＯ ４８４６９ ｍ ｕ ＧＯ ２７３ ｇｕ ｕｋ ｍｄ ｄｍｍｕ ＧＯ ７９３ ｍ ｋ ５６ ７ ３７ ４７ ６ １８ ４６ ６ ５ ４６ ６ ５ ６ ５ ４６ ４１ ５ ３９ ３５ ４ ６１ ３１ ４ ８ ３１ ４ ８ ２９ ３ ８２ ２１ ２ ７６ １７ ２ ２４ １３ １ ７１ １３ １ ７１ １２ １ ５８ １ １ ３２ ９ １ １８

5 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2011 年 5 月 第 18 卷 第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,May2011,Vol.18 No 表 2 鼻 咽 癌 与 健 康 对 照 者 差 异 表 达 基 因 Pathway 分 析 类 别 项 目 计 数 (%) 犘 值 KEGG hsa05200:pathwaysincancer 20(2.63) 0.03 KEGG hsa04110:celcycle 13(1.71) 0.00 KEGG hsa04914:progesterone mediatedoocytematuration 12(1.58) 0.00 KEGG hsa00230:purinemetabolism 10(1.32) 0.10 KEGG hsa04115:p53signalingpathway 8(1.05) 0.01 KEGG hsa05215:prostatecancer 8(1.05) 0.04 KEGG hsa05322:systemiclupuserythematosus 8(1.05) 0.06 KEGG hsa05210:colorectalcancer 7(0.92) 0.08 KEGG hsa03010:ribosome 7(0.92) 0.09 KEGG hsa05217:basalcelcarcinoma 6(0.79) 0.05 BIOCARTA h_tob1pathway:roleoftobint celactivation 4(0.53) 0.03 表 3 Pathway 分 析 中 与 肿 瘤 和 p53 信 号 通 路 及 细 胞 周 期 信 号 通 路 相 关 的 差 异 基 因 ID 基 因 名 称 基 因 标 志 差 异 倍 数 调 节 肿 瘤 信 号 通 路 A_23_P Bcl 2 associatedxprotein BAX 1.55 down A_24_P CCAAT/enhancerbindingprotein (C/EBP),alpha CEBPA 1.68 down A_23_P GLIfamilyzincfinger1 GLI down A_23_P GLIfamilyzincfinger3 GLI down A_24_P adenomatouspolyposiscoli APC 1.56 up A_23_P baculoviraliaprepeat containing5 BIRC up A_23_P fibroblastgrowthfactor9 (glia activatingfactor) FGF down A_23_P frizzledhomolog5 (Drosophila) FZD down A_23_P heatshockprotein alpha(cytosolic),classa member2; heatshockprotein alpha(cytosolic),classa member1 HSP90AA up A_24_P heatshockprotein alpha(cytosolic),classbmember1 HSP90AB down A_23_P hypotheticalloc ;ralabindingprotein1 RALBP down A_23_P13907 insulin likegrowthfactor1 (somatomedinc) IGF up A_23_P laminin,alpha4 U down A_24_P20630 lymphoidenhancer bindingfactor1 LEF down A_23_P peroxisomeproliferator activatedreceptorgamma PPARG 2.19 up A_23_P22970 phosphoinositide 3 kinase,regulatorysubunit3 (gamma) PIK3R down A_23_P platelet derivedgrowthfactoralphapolypeptide PDGFA 1.78 down A_24_P79054 transforminggrowthfactor,beta1 TGFβ up A_23_P89249 v erb b2erythroblasticleukemiaviraloncogenehomolog2, neuro/glioblastomaderivedoncogenehomolog(avian) ERBB down A_23_P wingless typemmtvintegrationsitefamily,member3 WNT down p53 信 号 通 路 A_23_P Bcl 2 associatedxprotein BAX 1.55 down A_24_P916195, A_23_P57588 G 2andS phaseexpressed1 GTSE up A_23_P celdivisioncycle2,g1tosandg2tom CDC up A_23_P CyclinB1 CCNB up A_23_P65757 CyclinB2 CCNB up A_23_P13907 insulin likegrowthfactor1 (somatomedinc) IGF up A_24_P ribonucleotidereductasem2polypeptide RRM up A_23_P35916 similartoserine proteinkinaseatm (Ataxiatelangiectasiamutated) (A T,mutated);ataxiatelangiectasiamutated ATM 1.74 up 细 胞 周 期 信 号 通 路 A_23_P buddinguninhibitedbybenzimidazoles1homolog(yeast) BUB up A_23_P buddinguninhibitedbybenzimidazoles1homologbeta(yeast) BUB1B 1.79 up A_23_P celdivisioncycle2,g1tosandg2tom CDC up A_23_P70249 celdivisioncycle25homologc (S.pombe) CDC25C 1.93 up A_23_P49972 celdivisioncycle6homolog(s.cerevisiae) CDC up A_23_P58321 CyclinA2 CCNA up A_23_P CyclinB1 CCNB up A_23_P65757 CyclinB2 CCNB up A_23_P Cyclin dependentkinaseinhibitor1c (p57,kip2) CDKN1C 1.52 down A_23_P45799 originrecognitioncomplex,subunit1 like(yeast) ORC1L 1.69 up A_23_P polo likekinase1 (Drosophila) PLK up A_23_P35916 similartoserine proteinkinaseatm (Ataxiatelangiectasiamutated) (A T,mutated);ataxiatelangiectasiamutated ATM 1.74 up A_24_P79054 transforminggrowthfactor,beta1 TGFβ up 本 研 究 采 用 了 外 周 血 mrna 来 进 行 芯 片 分 析 [8] Liew 等 提 出 所 谓 前 哨 原 则 假 说, 即 外 周 血 细 胞 存 在 独 特 的 基 因 表 达 谱 型, 能 反 映 人 体 组 织 稳 定 的 ( 遗 传 ) 和 动 态 的 ( 环 境 和 疾 病 影 响 ) 变 化 因 此, 通 过 对 外 周 血 基 因 表 达 谱 分 析, 可 发 现 某 些 特 征 性 基 因 改 变, 以 此 鉴 别 患 者 群 与 健 康 人 群, 对 肿 瘤 进 行 分 子 生 物 学 分 析

6 646 罗 东 华, 等 鼻 咽 癌 患 者 外 周 血 全 基 因 组 表 达 谱 芯 片 结 果 初 步 分 析 聚 类 分 析 结 果 显 示, 利 用 差 异 基 因, 尤 其 是 经 Gene spring 软 件 SVM 方 法 筛 选 出 的 差 异 基 因 可 以 将 40 张 样 本 分 为 鼻 咽 癌 患 者 和 健 康 对 照 组 两 类, 说 明 了 筛 选 的 差 异 表 达 基 因 是 可 靠 的 从 GO 分 类 的 生 物 学 过 程 来 看, 差 异 基 因 主 要 跟 细 胞 周 期 免 疫 反 应 对 病 毒 的 反 应 以 及 调 节 淋 巴 细 胞 介 导 的 免 疫 反 应 等 有 关 与 细 胞 周 期 有 关 的 差 异 基 因 多 达 56 个, 其 中 上 调 的 基 因 有 50 个, 多 数 为 免 疫 激 活 基 因, 下 调 的 只 有 6 个 可 见 鼻 咽 癌 患 者 外 周 血 中 细 胞 周 期 相 关 的 基 因 处 于 激 活 状 态 细 胞 周 期 的 过 度 活 跃 造 成 了 肿 瘤 细 胞 的 恶 性 增 殖, 而 造 成 细 胞 周 期 过 度 活 跃 的 可 能 原 因 就 是 这 些 外 周 血 细 胞 周 期 相 关 基 因 上 调 与 免 疫 反 应 相 关 的 差 异 基 因 有 47 个, 其 中 36 个 表 现 为 上 调,11 个 表 现 为 下 调 可 见 肿 瘤 的 存 在 激 活 了 机 体 的 免 疫 反 应, 如 上 调 的 OAS 基 因 家 族 主 要 与 对 病 毒 感 染 的 易 感 性 有 关 与 对 病 毒 的 反 应 有 关 的 基 因 共 有 13 个, 其 中 11 个 上 调, 只 有 2 个 下 调 鼻 咽 癌 的 发 生 与 EBV 感 染 密 切 相 关, 本 组 的 健 康 对 照 者 EBV 血 清 学 指 标 全 部 为 阴 性, 而 鼻 咽 癌 患 者 基 本 都 是 EBV 血 清 学 阳 性 EBV 的 感 染 可 能 引 起 机 体 对 病 毒 反 应 基 因 的 上 调 从 Pathway 分 析 结 果 来 看, 差 异 基 因 与 肿 瘤 信 号 通 路 细 胞 周 期 信 号 通 路 和 p53 信 号 通 路 等 密 切 相 关 有 些 基 因 与 多 条 通 路 有 关 如 Bax 与 肿 瘤 及 p53 信 号 通 路 有 关, 表 现 为 下 调 ;CDC2 与 p53 及 细 胞 周 期 信 号 通 路 有 关, 表 现 为 上 调 ;TGF β1 与 细 胞 周 期 及 肿 瘤 信 号 通 路 有 关, 表 现 为 上 调 ;CyclinA2 B1 B2 与 p53 及 细 胞 周 期 信 号 通 路 都 有 关 这 说 明 鼻 咽 癌 的 发 生 是 多 基 因 参 与 的 在 本 研 究 中,BAX 在 鼻 咽 癌 患 者 的 癌 症 相 关 通 路 及 p53 通 路 中 都 表 现 为 下 调 BAX 是 一 种 促 凋 亡 蛋 白 鼻 咽 癌 患 者 中 存 在 Bcl 2 过 表 达,BAX 蛋 白 与 之 结 合 可 以 抑 制 p53 [9] 依 赖 性 细 胞 凋 亡 的 发 生 Grimm 等 报 道,EB 病 毒 潜 伏 膜 蛋 白 (LMP 1) 是 通 过 抑 制 凋 亡 来 促 进 肿 瘤 发 生 的, 而 抑 制 BAX 是 它 抑 制 凋 亡 的 重 要 途 径 本 研 究 结 果 提 示, CDC2 上 调 与 p53 信 号 通 路 及 生 物 学 过 程 的 细 胞 周 期 均 [10] 有 关 Lin 等 报 道,LMP 1 上 调 CDC2 激 酶 的 活 性, 引 起 Op18/stathmin 磷 酸 化,CDC2 与 Op18/stathmin 的 相 互 作 用, 进 而 引 起 有 丝 分 裂 过 程 中 的 微 管 极 化, 促 进 鼻 咽 癌 细 胞 有 丝 分 裂 过 程 CDC2 上 调 说 明 患 者 细 胞 周 期 信 号 活 跃, 这 可 能 是 肿 瘤 细 胞 生 长 失 调 控 的 原 因 LMP 1 可 能 在 其 中 起 了 一 定 作 用 本 研 究 还 发 现, 鼻 咽 癌 患 者 外 周 血 中 PLK1mRNA 上 调 2.34 倍, 与 细 胞 周 期 生 物 学 过 程 有 关 PLK1 编 码 有 丝 分 裂 周 期 调 节 蛋 白, 其 蛋 白 的 表 达 水 平 减 少 可 使 细 胞 周 期 发 生 G 2 /M 期 停 滞, 在 多 种 肿 瘤 细 胞 中 证 实 其 表 达 水 平 增 高, 且 其 过 表 达 与 临 床 预 [11 12] [13] 后 差 有 关, 是 多 种 肿 瘤 治 疗 的 潜 在 靶 点 Shi 等 研 究 发 现, 鼻 咽 癌 组 织 中 70% 存 在 PLK1 过 表 达, 与 复 发 关 [11] 系 较 大 Gerster 等 研 究 发 现, 在 裸 鼠 身 上 种 植 小 分 子 干 扰 siplk1 基 因 的 FuDa 的 头 颈 肿 瘤 细 胞 可 以 延 迟 肿 瘤 的 生 长, 体 内 注 射 小 分 子 干 扰 siplk1, 可 以 增 强 放 疗 效 应, 抑 制 肿 瘤 生 长 上 述 结 果 也 表 明, 鼻 咽 癌 患 者 与 健 康 对 照 者 外 周 血 的 差 异 基 因 与 肿 瘤 组 织 发 现 的 差 异 基 因 存 在 一 致 性 基 于 目 前 分 析 软 件 及 方 法 的 局 限 性, 进 一 步 的 分 析 及 后 期 筛 选 验 证 mrna 分 子 标 志 的 工 作 将 继 续 深 入 进 行 参 考 文 献 [1] 鄢 践, 曾 益 新. 相 关 基 因 [M]// 洪 明 晃, 郭 翔. 鼻 咽 癌. 北 京 : 中 国 医 药 科 技 出 版 社,2003:31. [2] OsmanI,BajorinDF,SunTTetal.Novelbloodbiomarkersof humanurinarybladdercancer[j].clincancerres,2006,12(11 Pt1): [3] LiY,ElashofD,MyungshinO,etal.Serumcirculatinghuman mrnaprofilinganditsutilityfororalcancerdetection[j].j ClinOncol,2006,24(11): [4] ChaterjeeM,MohapatraS,IonanA,etal.Diagnosticmarkers ofovariancancerbyhigh throughputantigencloninganddetec tiononarrays[j].cancerres,2006,66(2): [5] LiuZQ,TianY Q,HuYF,etal.Alterationofgeneexpression duringnasopharyngealcarcinogenesisrevealedbyoligonucleotidemi croarrayaftermicrodissectionoftumortissueandnormalepithelia fromnasopharynx[j].chinmedj(engl),2009,122(4): [6] 梁 卫 江, 邱 枋, 洪 明 晃, 等. 上 行 型 与 下 行 型 鼻 咽 癌 的 基 因 差 异 表 达 研 究 [J]. 癌 症,2008,27(5): [7] Fang W Y,LiX,JiangQP,etal.Transcriptionalpaterns,bi omarkersandpathwayscharacterizingnasopharyngealcarcinoma ofsouthernchina[j].jtranslmed,2008,6:32. [8] LiewCC,MaJ,Tang H C,etal.Theperipheralbloodtran scriptomedynamicalyreflectssystem widebiology:apotential diagnostictool[j].jlabclin Med,2006,147(3): [9] Grimm T,SchneiderS,NaschbergerE,etal.EBVlatentmem braneprotein 1protectsBcelsfrom apoptosisbyinhibitionof BAX[J].Blood,2005,105(8): [10] LinX,LiuS,LuoX,etal.EBV encodedlmp1regulatesop18/ stathminsignalingpathwaybycdc2mediationinnasopharyngealcar cinomacels[j].intjcancer,2009,124(5): [11] GersterK,ShiW,NgB,etal.Targetingpolo likekinase1en hancesradiationeficacyforhead and necksquamouscelcarci noma[j].intjradiatoncolbiolphys,2010,77(1): [12] KimSA,KwonSM,YoonJH,etal.Theantitumorefectof PLK1and HSF1doubleknockdownonhumanoralcarcinoma cels[j].intjoncol,2010,36(4): [13] ShiW,AlajezN M,BastianutoC,etal.SignificanceofPlk1 regulationbymir 100inhumannasopharyngealcancer[J].IntJ Cancer,2010,126(9): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 边 莉 )

7 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2011 年 5 月 第 18 卷 第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,May2011,Vol.18 No 广 东 省 中 山 市 小 榄 镇 1453 名 居 民 鼻 咽 癌 防 治 知 识 问 卷 调 查 分 析 流 行 病 学 研 究 / 论 著 李 星 华 1,2, 季 明 芳 1, 吴 标 华 1, 俞 霞 1, 刘 智 伟 2, 柳 青 2 1. 中 山 大 学 附 属 中 山 医 院 肿 瘤 研 究 所, 广 东 中 山 中 山 大 学 肿 瘤 防 治 中 心, 广 东 广 州 Analysisofquestionnaireinvestigationonknowledgeaboutpreventionandtreatmentof nasopharyngealcarcinomaamong1453residentsinxiaolantown,zhongshancity, GuangdongProvince 1,2 犔 犐 犡 狀 犵 犺 狌 犪, 犑 犐 犕 狀 犵 犳 犪 狀 1 犵, 犠 犝 犅 犪 狅 犺 狌 犪 1, 犢 犝 犡 犪 1, 犔 犐 犝 犣 犺 狑 犲 2 2, 犔 犐 犝 犙 狀 犵 1. 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犚 犲 狊 犲 犪 狉 犮 犺 犐 狀 狊 狌 犲 狅 犳 犣 犺 狅 狀 犵 狊 犺 犪 狀 犆 狔, 犣 犺 狅 狀 犵 狊 犺 犪 狀 犎 狅 狊 狆 犪 犾 狅 犳 犛 狌 狀 犢 犪 狊 犲 狀 犝 狀 狏 犲 狉 狊 狔, 犣 犺 狅 狀 犵 狊 犺 犪 狀 , 犘. 犚. 犆 犺 狀 犪 2. 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犆 犲 狀 犲 狉, 犛 狌 狀 犢 犪 狊 犲 狀 犝 狀 狏 犲 狉 狊 狔, 犌 狌 犪 狀 犵 狕 犺 狅 狌 , 犘. 犚. 犆 犺 狀 犪 摘 要 目 的 : 了 解 鼻 咽 癌 高 发 区 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 知 晓 情 况, 并 探 讨 其 影 响 因 素 方 法 : 采 用 整 群 抽 样 的 方 式, 从 中 山 市 小 榄 镇 抽 取 两 个 有 代 表 性 的 社 区, 在 30~59 岁 年 龄 段 居 民 中, 随 机 调 查 1453 名 居 民, 采 用 现 场 一 对 一 的 方 式 进 行 问 卷 采 用 多 因 素 Logistic 回 归 分 析 探 讨 防 癌 知 识 影 响 因 素 结 果 : 调 查 对 象 对 鼻 咽 癌 危 险 因 素 的 知 晓 率 均 >50%, 二 级 预 防 知 识 的 知 晓 率 均 <50%,1453 名 调 查 对 象 中 54.2% 认 为 早 期 鼻 咽 癌 能 治 好,46.9% 知 道 早 期 鼻 咽 癌 治 疗 后 生 存 >10 年,63.0% 知 道 亲 属 中 有 患 鼻 咽 癌 的 应 多 做 筛 查, 居 民 不 参 加 筛 查 的 主 要 原 因 是 对 筛 查 认 识 不 够 查 出 病 后 有 心 理 负 担 经 多 因 素 Logistic 回 归 分 析, 性 别 对 居 民 关 于 鼻 咽 癌 危 险 因 素 认 识 的 影 响 有 统 计 学 意 义, 教 育 水 平 对 居 民 关 于 鼻 咽 癌 二 级 预 防 认 识 的 影 响 有 统 计 学 意 义, 犘 值 均 <0.05 结 论 : 调 查 人 群 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 掌 握 不 平 衡, 年 龄 因 素 性 别 受 教 育 程 度 影 响 人 群 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 认 知 度 开 展 公 众 健 康 教 育, 使 居 民 认 识 鼻 咽 癌 筛 查 的 好 处, 树 立 居 民 鼻 咽 癌 防 治 的 信 心 是 提 高 鼻 咽 癌 筛 查 参 与 率 的 关 键 因 素 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2011,18(9): [ 犃 犅 犛 犜 犚 犃 犆 犜 ] 犗 犅 犑 犈 犆 犜 犐 犞 犈 :Tounderstandthecognitioncondition ofresidentsinnasopharyngealcarcinoma (NPC)highriskareasto wardthenpcpreventionandtreatmentknowledge,andinvestigate theafectingfactors. 犕 犈 犜 犎 犗 犇 犛 :Tworepresentativecommunities wereselectedbyrandomclustersamplingmethodinxiaolantown, ZhongshanCity.In1453residentsagedfrom30to59years,one to one questionnaire interviews was conducted. Logistic regression modelwasusedtoanalyzethefactorsondiferentaspectsofnpc preventionknowledge. 犚 犈 犛 犝 犔 犜 犛 :Morethanhalfoftheresidents knewaltheriskfactorsofnpc.ontheotherhand,lessthanhalf oftheresidentswereawareofthesecondarypreventionknowledge. With54.2%(788/1453)subjectsknowingthatNPCinearlystage canbetreated,46.9% (560/1453)subjectsknewthatmoreearly stagenpcpatientshavea more10 yearsurvivalrate,and63.0% (916/1453)subjectswereawareofmorescreeningshouldbecon ductedinsubjectswhohaverelativesofnpc.mostofsubjectscon sideredthatresidentswhodidnotparticipatescreeningwerebecause ofunawarenessoftheadvantageofscreeningandpsychicburdenof thedisease.multiplelogisticregressionresultsshowedthatsexand educationlevelwereindependentfactorsofawarenessofriskfactors ( 犘 <0.05)andsecondarypreventionknowledge( 犘 <0.05)inNPC, respectively. 犆 犗 犖 犆 犔 犝 犛 犐 犗 犖 犛 :Itshowsthatknowledgeonalaspects ofnpcisunbalanceindiferentresidents.sexandeducationlevel arethetwomaininfluentialfactors.furtherpubliceducationinnpc screeningintheseendemicareascanbeakeysteptoincreasetherate ofnpcearlydetection. 犆 犺 狀 犑 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犘 狉 犲 狏 犜 狉 犲 犪,2011,18(9): 第 一 作 者 简 介 李 星 华, 女, 山 东 潍 坊 人, 主 要 从 事 鼻 咽 癌 早 期 诊 断 的 研 究 工 作 Tel: E mail:belive2010@sina.cn 通 讯 作 者 简 介 季 明 芳, 女, 江 苏 建 湖 人, 硕 士, 主 任 医 师, 硕 士 生 导 师, 主 要 从 事 鼻 咽 癌 早 期 诊 断 的 研 究 工 作 Tel: E mail:jmftbh@sina.com

8 648 李 星 华, 等 广 东 省 中 山 市 小 榄 镇 1453 名 居 民 鼻 咽 癌 防 治 知 识 问 卷 调 查 分 析 关 键 词 鼻 咽 肿 瘤 / 流 行 病 学 ; 问 卷 调 查 ; 知 晓 率 ; 中 山 市 [ 犓 犈 犢 犠 犗 犚 犇 犛 ] nasopharyngealneoplasms/epidemiology;questionnaire;awarenessrate;zhongshan 中 图 分 类 号 R739.6;R73-31(265) 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2011) 目 前 对 鼻 咽 癌 尚 无 确 切 的 一 级 预 防 措 施, 二 级 预 防 是 鼻 咽 癌 防 治 研 究 的 重 要 课 题 之 一, 筛 查 是 鼻 咽 癌 二 级 预 防 的 主 要 手 段 中 山 市 是 广 东 省 鼻 咽 癌 高 发 区 [1] 之 一, 为 了 解 广 东 省 30~59 岁 年 龄 段 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 知 晓 情 况 及 其 影 响 因 素, 本 研 究 对 中 山 市 小 榄 镇 2 个 具 有 代 表 性 社 区 的 居 民 在 进 行 鼻 咽 癌 筛 查 的 同 时 进 行 了 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 问 卷 调 查, 为 该 地 区 及 同 类 地 区 提 高 筛 查 参 与 率 的 健 康 教 育 和 其 他 鼻 咽 癌 防 治 工 作 提 供 科 学 依 据 1 材 料 与 方 法 1.1 调 查 对 象 采 用 整 群 抽 样 的 方 法, 于 从 中 山 市 小 榄 镇 抽 取 东 区 和 绩 西 社 区, 这 2 个 社 区 在 经 济 水 平 医 疗 服 务 及 居 民 组 成 等 方 面 均 具 有 代 表 性, 在 30~59 岁 年 龄 段 参 加 筛 查 的 户 籍 居 民 中 随 机 调 查, 共 调 查 1460 名, 获 得 有 效 问 卷 1453 份, 有 效 率 为 99.5%, 调 查 对 象 平 均 年 龄 为 (46.0±8.4) 岁, 男 584 名, 女 869 名, 年 龄 分 组 :30~44 岁 组 614 名 ( 低 年 龄 组 ),45~59 岁 组 839 名 ( 高 年 龄 组 ); 文 化 程 度 分 组 : 初 中 及 以 下 文 化 组 1250 名 ( 低 文 化 组 ), 高 中 及 以 上 文 化 组 203 名 ( 高 文 化 组 ) 1.2 方 法 调 查 问 卷 由 中 国 医 学 科 学 院 肿 瘤 医 院 流 行 病 学 室 和 卫 生 部 早 诊 早 治 鼻 咽 癌 项 目 组 专 家 设 计 制 定, 调 查 内 容 为 11 条 与 鼻 咽 癌 防 治 有 关 的 知 识 调 查 人 员 全 部 为 小 榄 镇 社 区 医 务 人 员, 经 统 一 培 训 和 现 场 陪 同 问 卷 调 查, 保 证 了 询 问 方 式 和 填 表 方 式 的 一 致 性 在 此 问 卷 调 查 前, 中 山 市 肿 瘤 研 究 所 小 榄 镇 政 府 卫 生 站 防 保 所 社 区 利 用 电 视 广 播 横 幅 标 语 发 放 宣 传 小 册 子 等 手 段 进 行 了 广 泛 宣 传 1.3 统 计 学 方 法 问 卷 所 得 数 据 采 用 双 录 入 输 入 Foxpro 数 据 库, 用 Excel 进 行 归 纳 分 析 根 据 性 别 分 组 描 述 每 个 问 题 的 回 答 情 况 应 用 SPSS13.0 软 件 采 用 多 因 素 Logistic 回 归, 分 别 对 鼻 咽 癌 危 险 因 素 认 识 二 级 预 防 的 认 识 疗 效 认 识 以 及 综 合 了 解 程 度 进 行 分 析 鼻 咽 癌 危 险 因 素 的 认 知 情 况 部 分, 所 有 危 险 因 素 均 能 答 正 确 的 人 群 归 类 为 了 解 组, 其 余 人 群 归 类 为 不 了 解 组 ; 鼻 咽 癌 二 级 预 防 认 识 部 分, 将 能 回 答 出 至 少 一 种 症 状, 至 少 一 种 筛 查 方 法, 至 少 一 种 治 疗 手 段 且 知 道 早 期 阶 段 的 人 群, 归 类 为 了 解 组, 其 余 人 群 为 不 了 解 组 ; 鼻 咽 癌 疗 效 部 分, 将 能 正 确 回 答 2 个 问 题 的 人 群 归 类 为 了 解 组, 其 余 人 群 归 类 为 不 了 解 组 将 至 少 了 解 以 上 2 个 部 分 内 容 的 人 群, 归 类 为 对 鼻 咽 癌 综 合 知 识 有 一 定 程 度 了 解 组, 其 余 人 群 归 类 为 不 了 解 组 多 因 素 Logistic 回 归 分 析 包 括 年 龄 性 别 教 育 程 度 的 比 数 比 (oddsratio,or) 和 95% 置 信 区 间 估 计 (95%CI) 检 验 水 准 α= 结 果 本 次 调 查 问 卷 所 设 的 11 个 问 题, 可 分 为 对 鼻 咽 癌 危 险 因 素 二 级 预 防 知 识 早 期 治 疗 效 果 的 知 晓 情 况 和 对 鼻 咽 癌 筛 查 的 认 识 4 部 分 内 容 2.1 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 知 晓 情 况 本 次 调 查 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 总 体 认 知 率 见 表 1 对 本 问 卷 调 查 中 涉 及 的 3 种 鼻 咽 癌 危 险 因 素, 一 种 都 不 知 道 的 有 148 名 (10.1%), 知 道 一 种 的 有 176 名 (12.1%), 知 道 2 种 的 有 285 名 (19.6%), 知 道 3 种 的 有 844 名 (58.1%) 对 涕 血 头 痛 耳 鸣 颈 淋 巴 结 肿 大 这 4 项 早 期 鼻 咽 癌 症 状, 一 项 都 不 知 道 的 有 760 名 (52.3%), 知 道 1 项 的 有 468 名 (32.2%), 知 道 2 项 的 有 55 名 (3.8%), 知 道 3 项 的 有 37 名 (2.6%), 知 道 4 项 的 有 132 名 (9.1%) 对 EB 病 毒 抗 体 检 查 和 鼻 咽 镜 检 查 这 2 种 可 以 早 期 发 现 鼻 咽 癌 的 方 法, 一 种 都 不 知 道 的 有 701 名 (48.3%), 知 道 1 种 的 有 249 名 (17.1%), 知 道 2 种 的 有 503 名 (34.6%) 对 放 疗 化 疗 和 手 术 治 疗 这 3 种 治 疗 早 期 鼻 咽 癌 的 方 法, 一 种 都 不 知 道 的 有 624 名 (43.0%), 知 道 1 种 的 有 325 名 (22.4%), 知 道 2 种 的 有 244 名 (16.8%), 知 道 3 种 的 有 260 名 (17.9%) 2.2 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 知 晓 率 的 影 响 因 素 分 析 年 龄 性 别 和 教 育 水 平 对 居 民 鼻 咽 癌 防 治 知 识 知 晓 率 的 多 因 素 分 析 OR 95%CI 和 犘 值 见 表 居 民 对 鼻 咽 癌 筛 查 的 认 识 居 民 不 参 加 普 查 的 各 种 原 因 所 占 的 比 率, 以 及 知 道 亲 属 中 有 患 鼻 咽 癌 的 人 应 多 做 筛 查 的 人 数 比 率 见 表 3 3 讨 论 了 解 筛 查 人 群 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 知 晓 情 况 及 其 影 响 因 素 和 不 参 加 筛 查 的 原 因, 对 提 高 鼻 咽 癌 防 治 知 识 知 晓 率 的 健 康 教 育 和 开 展 鼻 咽 癌 等 恶 性 肿 瘤 的 防 治 工 作 具 有 重 要 意 义 目 前 国 内 外 未 见 有 鼻 咽 癌 高 发 区 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 知 晓 情 况 的 调 查 报 道, 本 研 究 首 次 报 道 了 上 述 结 果

9 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2011 年 5 月 第 18 卷 第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,May2011,Vol.18 No 表 1 按 性 别 分 组 居 民 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 认 知 情 况 狀 (%) 调 查 内 容 男 性 (584 名 ) 女 性 (869 名 ) 合 计 (1453 名 ) 改 善 居 室 空 气 和 住 房 环 境 能 预 防 鼻 咽 癌 吗 能 488(83.6) 721(83.0) 1209(83.2) 不 能 8(1.4) 17(2.0) 25(1.7) 不 知 道 87(14.9) 131(15.0) 218(15.0) 儿 时 经 常 吃 咸 鱼 或 咸 鱼 汁 拌 饭 会 增 加 鼻 咽 癌 患 病 风 险 吗 会 358(61.3) 582(67.0) 940(64.7) 不 会 25(4.3) 12(1.4) 37(2.6) 不 知 道 201(34.4) 274(31.5) 475(32.7) 经 常 吸 烟 易 得 鼻 咽 癌 吗 能 444(76.0) 685(78.8) 1129(77.7) 不 能 24(4.1) 12(1.4) 36(2.5) 不 知 道 116(19.9) 164(18.9) 280(19.3) 你 知 道 早 期 鼻 咽 癌 的 症 状 吗 涕 血 195(33.4) 268(30.8) 463(31.9) 头 疼 103(17.6) 121(13.9) 224(15.4) 耳 鸣 95(16.3) 121(13.9) 216(14.9) 颈 淋 巴 结 肿 大 128(21.9) 182(20.9) 310(21.3) 不 知 道 300(51.4) 463(53.3) 763(52.5) 你 知 道 鼻 咽 癌 的 早 期 阶 段 吗 不 知 道 319(54.6) 474(54.6) 793(54.6) 听 了 宣 传 后 才 知 道 162(27.7) 225(25.9) 387(26.6) 本 来 就 知 道 101(37.6) 168(19.3) 269(18.5) 下 列 哪 些 方 法 可 以 早 期 发 现 鼻 咽 癌 EB 病 毒 抗 体 检 查 236(40.4) 355(40.9) 591(40.7) 鼻 咽 镜 检 查 268(45.9) 394(45.3) 662(45.6) 不 知 道 283(48.5) 427(49.1) 710(48.9) 其 他 方 法 7(1.2) 11(1.3) 18(1.2) 下 列 哪 些 方 法 可 以 治 疗 早 期 鼻 咽 癌 放 射 治 疗 ( 烤 电 ) 218(37.3) 336(38.7) 554(39.1) 化 疗 ( 药 物 治 疗 ) 275(47.1) 404(46.5) 679(46.7) 手 术 治 疗 147(25.2) 213(24.5) 360(24.8) 不 知 道 249(42.6) 380(43.7) 629(43.3) 其 他 5(0.9) 14(1.6) 19(1.3) 你 认 为 鼻 咽 癌 能 治 好 吗 不 能 37(6.3) 31(3.60) 68(4.7) 不 太 了 解 94(16.1) 127(14.6) 221(15.2) 能 157(26.9) 218(25.1) 375(25.8) 早 期 能 治 好 295(50.5) 493(56.7) 788(54.2) 你 知 道 早 期 鼻 咽 癌 治 疗 后 能 活 多 少 年 1 年 左 右 12(2.1) 27(3.1) 39(2.7) 5 年 左 右 78(13.4) 91(10.5) 169(11.6) >10 年 260(44.5) 421(48.5) 681(46.9) 不 知 道 233(39.9) 327(37.6) 560(38.5) 表 2 年 龄 和 性 别 及 教 育 水 平 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 掌 握 水 平 的 多 因 素 非 条 件 Logistic 回 归 分 析 变 量 名 Β SE ( β ) OR 95% CI 犘 值 鼻 咽 癌 危 险 因 素 认 识 年 龄 ~ 性 别 ~ 教 育 水 平 ~ 鼻 咽 癌 二 级 预 防 知 识 的 认 识 年 龄 ~ 性 别 ~ 教 育 水 平 ~ 鼻 咽 癌 早 期 治 疗 效 果 认 识 年 龄 ~ 性 别 ~ 教 育 水 平 ~ 鼻 咽 癌 防 治 综 合 知 识 认 识 年 龄 ~ 性 别 ~ 教 育 水 平 ~

10 650 李 星 华, 等 广 东 省 中 山 市 小 榄 镇 1453 名 居 民 鼻 咽 癌 防 治 知 识 问 卷 调 查 分 析 表 3 按 性 别 分 组 居 民 对 鼻 咽 癌 筛 查 的 态 度 狀 (%) 调 查 内 容 男 性 (584 名 ) 女 性 (869 名 ) 合 计 (1453 名 ) 你 认 为 不 参 加 普 查 主 要 是 因 为 不 认 识 检 查 的 好 处 228(39.0) 303(34.9) 531(36.6) 害 怕 抽 血 97(16.6) 133(15.3) 230(15.8) 查 出 病 后 有 心 理 负 担 216(37.0) 359(41.3) 575(39.6) 没 有 症 状, 所 以 不 愿 检 查 193(33.1) 254(29.2) 447(30.8) 查 出 鼻 咽 癌 也 治 不 好, 不 如 不 查 68(11.6) 105(12.1) 173(11.9) 害 怕 上 当 受 骗 23(3.9) 13(1.5) 36(2.5) 丈 夫 不 允 许 9(1.5) 9(1.0) 18(1.2) 其 他 84(14.4) 163(18.8) 247(17.0 ) 你 知 道 亲 属 中 有 患 鼻 咽 癌 的 名 应 多 做 筛 查 吗 知 道 362(62.0) 554(63.8) 916(63.0) 不 知 道 220(37.7) 312(35.9) 532(36.6) 3.1 居 民 对 鼻 咽 癌 危 险 因 素 的 知 晓 情 况 鼻 咽 癌 的 病 因 未 完 全 明 确, 可 能 与 EB 病 毒 感 染 [2] 遗 传 环 境 职 业 等 因 素 有 关 黄 志 碧 等 研 究 发 现, 居 住 环 境 腌 制 食 品 和 咸 鱼 吸 烟 鼻 咽 癌 发 病 的 危 险 因 素 本 次 调 查 结 果 显 示, 当 地 居 民 对 上 述 影 响 鼻 咽 癌 发 病 的 危 险 因 素 的 知 晓 率 均 >50%, 有 844 名 知 道 这 3 种 危 险 因 素, 占 总 名 数 的 58.1%, 这 与 七 五 八 五 九 五 的 鼻 咽 癌 筛 查 和 该 镇 实 施 的 恶 性 肿 瘤 防 治 宣 传 工 作 有 关 影 响 因 素 分 析 发 现, 女 性 对 这 部 分 的 认 知 率 大 于 男 性, 这 与 女 性 比 较 关 注 日 常 生 活 健 康 有 关, 根 据 此 调 查 结 果, 应 进 一 步 加 强 男 性 对 这 部 分 知 识 的 宣 传 教 育 力 度 3.2 居 民 对 鼻 咽 癌 二 级 预 防 的 认 知 情 况 早 期 鼻 咽 癌 患 者 的 症 状 比 较 不 明 显, 容 易 被 人 忽 视, 延 误 诊 断, 所 以 必 须 提 高 警 惕 性 涕 血 头 痛 耳 鸣 颈 部 淋 巴 结 肿 大 等 是 鼻 咽 癌 发 生 的 早 期 信 号 本 次 调 查 中 有 26.6% 的 调 查 对 象 在 宣 传 中 知 道 了 鼻 咽 癌 的 早 期 症 状, 可 见 宣 传 教 育 是 有 效 的 有 132 名 知 道 涕 血 头 痛 耳 鸣 颈 部 淋 巴 结 肿 大 这 4 项 早 期 鼻 咽 癌 症 状, 占 总 人 数 的 9.1%, 其 中 对 涕 血 这 一 早 期 症 状 的 知 晓 率 最 高, 为 31.9% 从 本 次 调 查 结 果 中 可 看 出 被 调 查 居 民 对 早 期 鼻 咽 癌 症 状 的 认 识 还 不 够, 对 鼻 咽 癌 早 期 症 状 的 宣 传 教 育 还 需 进 一 步 加 强 鼻 咽 癌 发 病 与 EB 病 毒 密 切 相 关,EB 病 毒 抗 体 检 [3] 测 和 鼻 咽 镜 检 查 是 早 期 发 现 鼻 咽 癌 的 重 要 手 段 VCA/IgA 和 EA/IgA 用 于 鼻 咽 癌 筛 查, 可 早 期 发 现 [4] 鼻 咽 癌, 季 明 芳 等 研 究 发 现, 鼻 咽 镜 检 查 和 鼻 咽 多 部 位 组 织 活 检 可 以 在 VCA/IgA 滴 度 较 高 且 无 鼻 咽 癌 症 状 的 人 群 中 检 出 早 期 鼻 咽 癌 本 次 调 查 显 示 对 这 2 种 早 期 发 现 鼻 咽 癌 方 法 的 知 晓 率 分 别 为 40.7% 和 45.6%, 有 503 名 知 道 这 2 种 早 期 发 现 鼻 咽 癌 的 手 段, 占 总 人 数 的 34.6%, 可 见 对 这 方 面 知 识 的 有 效 宣 传 和 持 续 性 宣 传 仍 很 重 要 鼻 咽 癌 对 放 射 线 较 敏 感, 放 射 治 疗 是 鼻 咽 癌 首 选 的 治 疗 方 法 本 次 调 查 结 果 显 示, 居 民 对 放 射 治 疗 的 知 晓 率 是 39.1%, 低 于 对 化 疗 的 知 晓 率 (46.7%), 高 于 对 手 术 治 疗 的 知 晓 率 (24.9%), 这 可 能 与 临 床 确 诊 的 鼻 咽 癌 多 为 晚 期, 需 要 辅 助 化 疗 有 关 本 次 调 查 仅 有 17.9% 的 人 知 道 这 2 种 治 疗 方 法, 由 此 可 见, 也 要 继 续 加 强 居 民 对 鼻 咽 癌 早 期 治 疗 方 法 的 认 识 3.3 居 民 对 鼻 咽 癌 早 期 治 疗 效 果 的 认 知 情 况 目 前 鼻 咽 癌 放 射 治 疗 5 年 生 存 率 已 达 70%, 早 期 鼻 咽 癌 甚 至 可 以 治 愈, 本 次 调 查 中 有 54.23% 的 居 民 知 道 早 期 鼻 咽 癌 能 治 好, 有 46.9% 的 居 民 认 为 早 期 鼻 咽 癌 治 疗 后 生 存 >10 年 加 强 居 民 对 早 期 治 疗 效 果 [5] 的 认 识, 有 助 于 树 立 居 民 鼻 咽 癌 防 治 的 信 心 和 提 高 鼻 咽 癌 筛 查 的 参 与 率 本 次 调 查 结 果 显 示, 癌 症 防 治 宣 传 活 动 的 开 展 提 高 了 调 查 对 象 对 鼻 咽 癌 防 治 知 识 的 知 晓 率, 宣 传 教 育 [5] 影 响 早 期 鼻 咽 癌 检 出 率, 因 此, 在 加 大 宣 传 教 育 力 度, 使 居 民 认 识 到 鼻 咽 癌 早 诊 早 治 和 筛 查 的 益 处 以 及 二 级 预 防 的 方 法, 旨 在 通 过 提 高 居 民 参 加 筛 查 的 积 极 性 和 对 鼻 咽 癌 二 级 预 防 知 识 的 知 晓 率, 提 高 鼻 咽 癌 防 治 水 平 志 谢 : 感 谢 中 山 市 小 榄 镇 社 区 医 务 人 员 在 问 卷 调 查 过 程 中 给 予 的 帮 助 参 考 文 献 [1] 闵 华 庆, 鼻 咽 癌 研 究 [M]. 广 州 : 广 东 科 学 出 版 社,1998:7 11. [2] 黄 志 碧, 姜 岳 明, 方 益 敏. 广 西 鼻 咽 癌 危 险 因 素 的 流 行 病 学 研 究 [J]. 工 业 卫 生 与 职 业 病,2002,28(4): [3] JiM F,WangD K,YuY L,etal.SustainedelevationofEp stein Barrvirusantibodylevelsprecedingclinicalonsetofnaso pharyngealcarcinoma[j].brjcancer,2007,96: [4] 季 明 芳, 郭 媛 卿, 郑 受 昂, 等. 中 山 市 鼻 咽 癌 高 发 现 场 13 年 前 瞻 性 研 究 [J]. 肿 瘤,2003,23(4): [5] 柳 青, 曾 楚 华, 刘 颜. 越 秀 区 居 民 防 癌 知 识 调 查 [J]. 中 国 肿 瘤, 2000,6(9): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 王 秀 华 )

11 中华肿瘤防治杂志 ２１１ 年 ５ 月第 １８ 卷第 ９ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ｍ２１１ Ｖ １８ Ｎ ９ ６５１ 流行病学研究 论著 肺癌患者医院感染危险因素分析 许崇安 刘艳 李琳 刘殊 中国医科大学附属第四医院肿瘤内科 辽宁 沈阳 １１３２ Ｒ ｋ ｍ ｕ ｇ 犡犝犆犺狅狀犵 犪狀 犔犐犝犢犪狀 犔犐犔 狀 犔犐犝犛犺狌 犇犲狆犪狉 犿犲狀 狅犳 犗狀犮 狅 犾 狅犵狔 犕犲犱 犮 狀犲 犉狅狌狉 犺犎狅 狊狆 犪 犾狅犳 犆犺 狀犪 犕犲犱 犮犪 犾犝狀 狏 犲 狉 狊 犛犺犲狀狔犪狀犵１１３２ 犘 犚 犆犺 狀犪 狔 摘要 目 的 探 讨 肺 癌 患 者 医 院 感 染 的 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｖ ｄ ｖ ｕ ｇ 特点 与 危 险 因 素 及 其 对 预 后 的 影 响 方 ｄ ｕ ｍ ｄ ｄ ｋ 法 回顾调查我院 １２８ 例肺癌的患 者 临 床 ｇ ｍｇ ｕｇ 犕犈犜犎犗犇犛 Ｒ 资 料 对 医 院 感 染 各 种 危 险 因 素 分 别 进 行 ｖ ｖ ｄ １２８ ｗ ｇ 单因素和多因素 分 析 结 果 １２８ 例 肺 癌 ｕｇ ｕ Ｃ ｄ ｗ ｄｄ 出院 病 例 中 ９８ 例 ７ ７ 发 生 医 院 感 染 ｖ ｚ ｄ ｗ ｕ ｖ ｄ ｍｕ ｖ 犚犈 感染部 位 依 次 为 呼 吸 系 ７３ ５ 胃 肠 系 犛犝犔犜犛 Ａｍｇ１２８ ｍ １１ ２ 和 泌 尿 系 ８ ２ 等 医 院 感 染 ｗ ７ ７ ｗ ９８ Ｔｍ ｍｍ 的 病 原 菌 多 为 耐 药 的 条 件 致 病 菌 和 真 菌 ｗ ７３ ５ ｗｄｂｇ １１ ２ 以革兰 氏 阴 性 菌 为 主 占 ５６ ７ 真 菌 占 ｄｕ ８ ２ Ｔ ｍｍ ｇ ｕｇ ２３ 医院 感 染 与 年 龄 犘 ３３ 临 ｗ ｍ ｗ ｕ ｇｄ 床分期 犘 １ ＰＳ 评 分 犘 １５ ｕｄｄ５６ ７ Ｇ ｄ２３ ｕｇ Ｓ ｕｇ 侵入性操作 犘 手术 犘 ２９ ｍｄ ｍ ｗ ｂｖ ｕ 放疗 犘 ２２ 化 疗 犘 １ 贫 血 犘 ３３ ｇ 犘 １ ＰＳ ｄｗ ｇ 犘 中性粒细胞减少 犘 犘 １５ ｖ ｖ ｄｕ 犘 ｕ 犘 ｇ 使用抗 生 素 犘 ３５ 使 用 激 素 犘 ２９ ｄ 犘 ２２ ｍ 犘 １ 犘 合 并 血清白蛋白降 低 犘 ｕｋ 犘 ｂ 犘 ｍ 糖尿病 犘 １９ 以 及 住 院 时 间 犘 ３５ ｍ 犘 ｗ ｂｕｍ 犘 ｄ ｂ 密 切 相 关 Ｌｇ 多 因 素 分 析 显 犘 １９ ｄ 犘 Ｃ ｇ 犘 示 临 床 分 期 犘 ２４ ＰＳ 评 分 犘 ２４ ＰＳ 犘 １２ ｖ ｖ ｄｕ 犘 １２ 侵入性操作 犘 化疗 犘 ｍ 犘 ｍ 犘 ３６ ｕｋ 犘 犘 ３６ 中 性 粒 细 胞 减 少 贫血 犘 ｗ ｄｄ ｇ １ ｄ 犘 １ 和住院时间 犘 是 肺 癌 Ｎ ｍ ｇｄ ｄ 患者发生医院 感 染 的 独 立 危 险 因 素 医 院 ｄ ｍ 犐犗犖犛 Ｌｕｇ ｍ ｄ 犆犗犖犆犔犝犛 感 染 不 但 延 长 患 者 的 住 院 时 间 还 增 加 患 ｍ ｗ ｖ Ｉ 者的病 死 率 结 论 肺 癌 患 者 是 医 院 感 染 ｇ ｍｇｍ ｍ 的 高 危 人 群 医 院 感 染 是 多 种 因 素 共 同 作 ｍｄ ｂ ｄ ｕｍ ｍ ｄ 用的结果 控制 感 染 的 危 险 因 素 规 范 抗 肿 ｖ ｄ ｖ ｖ ｄｕ ｕ ｇ 瘤 治 疗 提 高 机 体 免 疫 力 是 防 控 肺 癌 患 者 ｍ ｍ ｄ ｗ ｂｕｍ ｄ ｍ 医院感染的主要措施 ｄ 中华肿瘤防治杂志 ２１１ １８ ９ ６５１ ６５４ 犆犺 狀犑犆犪狀犮 犲 狉犘狉 犲狏犜狉 犲犪 ２１１ １８ ９ ６５１ ６５４ 关键词 肺肿瘤 医院感染 危险因素 防控措施 ｖ ｄ ｍ ｕ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｕｇ ｍ ｍ ｋ 中图分类号 Ｒ７３４ ２ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２１１ ９ ６５１ ４ 通讯作者简介 许崇安 男 辽宁大连人 硕士 副教授 硕士生导师 主要从事肿瘤内科的基础和临床研究工作 Ｔ ８６ ２４ ６２５７２９９４ Ｅ ｍ ｍｕ４ ｘ １２６ ｍ

12 652 许 崇 安, 等 肺 癌 患 者 医 院 感 染 危 险 因 素 分 析 随 着 医 学 的 发 展, 肺 癌 治 疗 不 断 优 化, 患 者 的 生 活 [1] 质 量 和 生 存 期 得 到 了 明 显 改 善 但 是, 由 于 肺 癌 患 者 自 身 免 疫 力 低 下 加 之 放 化 疗 手 术 以 及 侵 入 性 操 作 等 诊 治 措 施 的 应 用, 导 致 肺 癌 患 者 的 医 院 感 染 率 呈 升 [2] 高 趋 势 医 院 感 染 不 仅 影 响 肺 癌 患 者 治 疗 和 康 复, 延 长 住 院 时 间, 增 加 医 疗 费 用, 而 且 显 著 影 响 肺 癌 患 者 [3] 的 预 后, 甚 至 危 及 生 命 为 探 讨 肺 癌 患 者 医 院 感 染 的 特 点 及 危 险 因 素, 有 效 防 控 肺 癌 患 者 医 院 感 染 的 发 生, 改 善 患 者 的 预 后, 延 长 患 者 生 存 期, 总 结 1280 例 肺 癌 出 院 病 例 的 临 床 资 料 报 道 如 下 1 对 象 与 方 法 1.1 病 例 来 源 所 有 病 例 均 来 源 于 中 国 医 科 大 学 附 属 第 四 医 院 收 治 的 经 病 理 组 织 学 或 细 胞 学 确 诊 的 肺 癌 患 者 出 院 病 历 1280 例 肺 癌 患 者 的 出 院 病 历 中, 男 916 例, 女 364 例 年 龄 31~79 岁, 中 位 年 龄 62 岁 其 中 小 细 胞 肺 癌 289 例, 非 小 细 胞 肺 癌 944 例, 未 分 型 47 例 按 UICC 肺 癌 TNM 临 床 分 期 标 准 (1997 年 ),Ⅰ 期 80 例,Ⅱ 期 248 例,Ⅲ 期 421 例,Ⅳ 期 531 例 1.2 医 院 感 染 诊 断 标 准 按 照 卫 生 部 颁 布 的 医 院 感 染 诊 断 标 准 (2001 年 ) 确 立 医 院 感 染 的 诊 断 1.3 调 查 方 法 及 内 容 采 用 回 顾 性 调 查 方 法, 以 病 历 记 录 为 依 据, 统 一 调 查 表 登 记 调 查 内 容 包 括 性 别 年 龄 疾 病 分 期 PS 评 分 侵 入 性 操 作 手 术 放 疗 化 疗 贫 血 中 性 粒 细 胞 减 少 应 用 激 素 血 清 白 蛋 白 水 平 应 用 抗 菌 药 物 是 否 合 并 糖 尿 病 住 院 时 间 感 染 部 位 以 及 病 原 菌 等 因 素 进 行 调 查 分 析 ; 并 探 讨 医 院 感 染 对 肺 癌 患 者 预 后 的 影 响 1.4 统 计 学 方 法 采 用 Excel10.0 建 立 数 据 库, 应 用 SPSS13.0 软 件, 采 用 χ 2 检 验 秩 和 检 验 单 因 素 和 多 因 素 Logistic 回 归 分 析 等 对 数 据 进 行 分 析, 检 验 水 准 α= 结 果 2.1 感 染 率 1280 例 肺 癌 中,98 例 (7.7%) 发 生 医 院 感 染, 小 细 胞 肺 癌 (7.27%) 与 非 小 细 胞 肺 癌 (8.16%) 之 间 医 院 感 染 率 差 异 无 统 计 学 意 义, χ 2 =0.072, 犘 = 感 染 部 位 医 院 感 染 以 呼 吸 系 最 为 多 见, 占 73.5%(72/98), 余 依 次 为 胃 肠 系 11.2% (11/98), 泌 尿 系 8.2% (8/98), 手 术 部 位 2.0%(2/98), 败 血 症 2.0%(2/98), 其 他 部 位 3.1%(3/98) 呼 吸 系 感 染 明 显 高 于 胃 肠 系 ( χ 2 =77.761, 犘 <0.001) 和 泌 尿 系 ( χ 2 =86.510, 犘 <0.001) 2.3 病 原 菌 98 例 医 院 感 染 患 者,67 例 病 原 菌 培 养 阳 性, 共 分 离 出 病 原 菌 74 株, 其 中 革 兰 阴 性 菌 42 株 (56.7%), 前 3 位 为 克 雷 伯 菌 (18.9%) 假 单 胞 菌 属 (17.6%) 和 大 肠 埃 希 菌 (8.1%); 革 兰 阳 性 菌 15 株 (20.3%), 主 要 为 金 黄 色 葡 萄 球 菌 (9.5%) 和 表 皮 葡 萄 球 菌 (6.7%); 真 菌 17 株 (23.0%), 主 要 为 白 色 假 丝 酵 母 菌 (13.5%) 和 热 带 假 丝 酵 母 菌 (5.4%) 病 原 菌 多 数 为 条 件 致 病 菌, 耐 药 率 较 高, 其 中 克 雷 伯 菌 属 耐 药 率 为 46.7%, 假 单 胞 菌 属 耐 药 率 为 60.0%, 大 肠 埃 希 菌 耐 药 率 达 80.0% 2.4 危 险 因 素 分 析 单 因 素 分 析 年 龄 临 床 分 期 PS 评 分 侵 入 性 操 作 手 术 放 疗 化 疗 血 红 蛋 白 水 平 中 性 粒 细 胞 水 平 使 用 抗 生 素 使 用 激 素 血 清 白 蛋 白 水 平 合 并 糖 尿 病 及 住 院 时 间 是 肺 癌 患 者 发 生 医 院 感 染 重 要 的 危 险 因 素 ( 表 1) 多 因 素 分 析 疾 病 分 期 PS 评 分 侵 入 性 操 作 化 疗 粒 细 胞 减 少 贫 血 和 住 院 时 间 是 肺 癌 患 者 发 生 医 院 感 染 的 独 立 危 险 因 素 ( 表 2) 不 同 感 染 部 位 的 危 险 因 素 分 析 临 床 分 期 PS 评 分 化 疗 中 性 粒 细 胞 减 少 侵 入 性 操 作 及 住 院 时 间 是 呼 吸 系 消 化 道 和 泌 尿 系 感 染 共 同 的 独 立 危 险 因 素, 犘 值 均 <0.05 使 用 激 素 是 呼 吸 系 和 消 化 道 感 染 的 独 立 危 险 因 素 ( 犘 值 均 <0.001), 与 泌 尿 系 感 染 无 关 ; 合 并 糖 尿 病 仅 与 呼 吸 系 感 染 有 关, 犘 < 不 同 病 原 菌 感 染 的 危 险 因 素 分 析 PS 评 分 侵 入 性 操 作 使 用 激 素 应 用 抗 生 素 及 住 院 时 间 是 细 菌 感 染 和 真 菌 感 染 共 同 的 危 险 因 素, 犘 值 均 <0.05; 手 术 化 疗 及 合 并 糖 尿 病 是 细 菌 感 染 的 独 立 危 险 因 素 ( 犘 值 分 别 为 <0.001 和 0.027), 与 真 菌 感 染 无 关 2.5 医 院 感 染 与 预 后 的 关 系 医 院 感 染 与 住 院 时 间 98 例 合 并 医 院 感 染 的 肺 癌 患 者 中 位 住 院 时 间 为 16d(2~73d),1182 例 未 发 生 医 院 感 染 患 者 中 位 住 院 时 间 为 9d(2~113d), 两 者 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义, 犣 =-4.127, 犘 < 医 院 感 染 与 病 死 率 1280 份 出 院 病 历 共 有 284 例 肺 癌 患 者, 其 中 64 例 死 亡, 病 死 率 为 22.5%, 合 并 医 院 感 染 者 病 死 率 为 29.6%(29/98), 未 合 并 医 院 感 染 者 病 死 率 为 18.8% (35/186), 前 者 明 显 高 于 后 者, χ 2 =4.268, 犘 =0.039

13 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2011 年 5 月 第 18 卷 第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,May2011,Vol.18 No 表 例 肺 癌 出 院 病 例 医 院 感 染 危 险 因 素 的 单 因 素 分 析 相 关 因 素 狀 感 染 率 狀 (%) χ 2 值 犘 值 OR(95%CI) 性 别 男 (7.3) 女 (8.5) 年 龄 ( 岁 ) < (6.5) (9.8) 病 理 类 型 中 央 型 (7.9) 周 围 型 (7.4) 临 床 分 期 Ⅰ+Ⅱ (3.4) Ⅲ+Ⅳ (9.1) PS 评 分 0~ (6.4) (10.1) 侵 入 性 操 作 有 (19.8) 无 (6.3) 手 术 是 85 12(14.1) 否 (7.2) 放 疗 是 67 10(14.9) 否 (7.3) 化 疗 是 (10.5) 否 (5.6) 血 红 蛋 白 (g/l) > (5.9) (18) 中 性 粒 细 胞 ( 10 9 L -1 ) (5.2) < (21.0) 使 用 抗 生 素 是 (9.9) 否 (6.7) 使 用 激 素 是 73 14(19.2) 否 (7.0) 血 清 白 蛋 白 (g/l) (14.5) > (5.8) 合 并 糖 尿 病 有 75 11(14.7) 否 (7.2) 住 院 时 间 (d) < (2.3) (23.5) (0.544~1.323) (0.430~1.056) (0.714~1.627) (0.182~0.654) (0.401~0.923) (2.266~6.053) (1.108~4.055) (1.107~4.544) (1.307~3.013) (0.182~0.450) (0.133~0.317) (1.013~2.361) (1.465~5.021) (1.803~4.238) (1.124~4.342) (0.047~0.125) 3 讨 论 医 院 感 染 是 由 宿 主 因 素 和 医 源 性 因 素 两 大 危 险 因 素 引 发 的 凡 是 能 够 导 致 机 体 免 疫 力 低 下 的 疾 病 和 能 够 降 低 机 体 抵 抗 力 的 各 种 原 因 均 可 诱 发 医 院 感 染 由 于 肺 癌 疾 病 本 身 削 弱 了 机 体 免 疫 功 能, 加 之 抗 肿 瘤 治 疗 进 一 步 破 坏 机 体 免 疫 防 御 功 能, 使 其 更 易 发 生 医 院 [2] 感 染, 且 明 显 高 于 非 肿 瘤 患 者 肺 癌, 尤 其 是 晚 期 肺 癌 化 疗 的 患 者, 其 医 院 感 染 率 高 达 7.93%~18.90%, 而 老 年 肺 癌 患 者 则 更 高 (24.0%) [3 5] 本 研 究 中 1280 例 肺 癌 出 院 病 例 医 院 感 染 率 为 7.66% 与 既 往 研 究 相 一 致 的 是 呼 吸 系 感 染 明 显 高 于 胃 肠 系 和 泌 尿 系 等 部 位, 感 染 部 位 依 次 为 呼 吸 系 (73.5%) 胃 肠 系 (11.2%) 和 泌 尿 系 (8.2%) [3 6]

14 654 许 崇 安, 等 肺 癌 患 者 医 院 感 染 危 险 因 素 分 析 表 例 肺 癌 患 者 医 院 感 染 危 险 因 素 的 多 因 素 Logistic 回 归 分 析 独 立 危 险 因 素 回 归 系 数 Wald 值 犘 值 OR 值 95%CI 临 床 分 期 ~4.721 PS 评 分 ~2.980 侵 入 性 操 作 ~7.458 化 疗 ~3.788 中 性 粒 细 胞 减 少 ~4.151 贫 血 ~3.287 住 院 时 间 ~8.871 肺 癌 患 者 医 院 感 染 的 主 要 致 病 菌 为 革 兰 阴 性 菌 和 [7 8] 真 菌, 且 多 为 耐 药 性 很 强 的 条 件 致 病 菌 和 真 菌 本 研 究 结 果 显 示, 肺 癌 患 者 医 院 感 染 的 病 原 菌 依 次 为 革 兰 阴 性 菌 (56.7%) 真 菌 (23.0%) 和 革 兰 阳 性 球 菌 (20.3%), 病 原 菌 多 为 条 件 致 病 菌 和 真 菌, 耐 药 率 达 [7 8] 46.7%~80.0%, 与 报 道 相 近 其 原 因 可 能 是 不 合 理 使 用 抗 菌 药 物, 导 致 机 体 正 常 菌 群 被 抑 制, 而 条 件 致 病 菌 真 菌 大 量 增 殖, 不 但 增 加 致 病 菌 耐 药 性, 还 增 加 [9] 了 医 院 感 染 的 发 生 率, 也 加 大 了 治 疗 的 难 度 本 研 究 结 果 显 示, 使 用 抗 菌 药 物 的 患 者 医 院 感 染 率 明 显 高 于 未 使 用 者 (9.9% 狏 狊 6.5%), 犘 =0.035 肺 癌 患 者 发 生 医 院 感 染 是 多 种 因 素 共 同 作 用 的 结 果 本 研 究 结 果 显 示, 侵 入 性 操 作 手 术 放 疗 化 疗 白 细 胞 减 少 使 用 抗 生 素 及 应 用 激 素 等 均 是 诱 发 医 院 感 染 的 危 险 因 素 这 是 由 于 侵 入 性 操 作 手 术 破 坏 了 机 体 自 然 防 护 屏 障, 为 细 菌 侵 入 创 造 了 条 件 而 应 用 激 素 放 疗, 尤 其 是 化 疗 导 致 的 白 细 胞 减 少 等 严 重 影 响 机 体 的 免 [7,10 11] 疫 功 能, 增 加 了 医 院 感 染 的 发 生 率 临 床 分 期 越 晚, 肿 瘤 性 消 耗 越 大, 高 龄 并 发 贫 血 低 蛋 白 血 症 及 PS 评 分 差 的 患 者, 其 机 体 抵 抗 力 亦 明 显 降 低, 并 发 医 院 感 [12] 染 者 也 多 多 因 素 Logistic 回 归 分 析 结 果 证 实, 临 床 分 期 PS 评 分 侵 入 性 操 作 化 疗 粒 细 胞 减 少 使 用 抗 生 素 贫 血 及 住 院 时 间 是 肺 癌 患 者 发 生 医 院 感 染 的 独 立 危 险 因 素 分 层 分 析 发 现, 不 同 部 位 感 染 的 危 险 因 素 大 致 相 同, 使 用 激 素 与 呼 吸 系 和 消 化 道 感 染 相 关 而 与 泌 尿 系 感 染 无 关, 合 并 糖 尿 病 仅 与 呼 吸 系 感 染 有 关 细 菌 和 真 菌 感 染 的 危 险 因 素 亦 基 本 相 同, 但 手 术 化 疗 及 合 并 糖 尿 病 仅 与 细 菌 感 染 相 关, 与 真 菌 感 染 无 关 [13] 医 院 感 染 明 显 延 长 了 患 者 的 住 院 时 间 本 研 究 发 现, 住 院 时 间 与 医 院 感 染 互 为 因 果 关 系, 住 院 时 间 越 长, 医 院 感 染 的 发 生 率 越 高, 而 一 旦 发 生 医 院 感 染, 住 院 时 间 也 随 其 延 长 医 院 感 染 是 加 速 和 导 致 肿 瘤 患 者 死 亡 的 重 要 原 [14] 因 胡 桃 红 等 发 现, 因 医 院 感 染 直 接 或 间 接 造 成 患 者 死 亡 占 82.05% 本 研 究 结 果 显 示, 发 生 医 院 感 染 的 肺 癌 患 者 病 死 率 明 显 高 于 未 感 染 者, 犘 =0.039 可 见 医 院 感 染 是 造 成 肺 癌 患 者 死 亡 的 重 要 原 因 综 上 所 述, 医 院 感 染 的 危 险 因 素 主 要 取 决 于 患 者 基 础 疾 病 的 严 重 程 度 和 诊 治 手 段 对 机 体 免 疫 力 影 响 程 度, 医 院 感 染 是 多 种 因 素 共 同 作 用 的 结 果 肺 癌 患 者 是 医 院 感 染 的 高 发 人 群, 医 院 感 染 不 但 延 长 住 院 时 间, 还 增 加 患 者 的 病 死 率 为 减 少 医 院 感 染 的 发 生, 必 须 加 强 医 院 感 染 的 防 范 意 识, 针 对 医 院 感 染 的 危 险 因 素 制 定 有 效 的 综 合 防 治 措 施 ; 控 制 危 险 因 素, 规 范 治 疗 原 发 病, 提 高 患 者 机 体 免 疫 力 是 防 控 医 院 感 染 的 关 键 措 施 参 考 文 献 [1] 郭 其 森. 非 小 细 胞 肺 癌 内 科 治 疗 的 现 状 [J]. 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2009,16(10): [2] KambojM,SepkowitzK A.Nosocomialinfectionsinpatientswith cancer[j].lancetoncol,2009,10(6): [3] 赵 建 国, 熊 建 萍, 项 晓 军, 等. 晚 期 肺 癌 化 疗 患 者 医 院 感 染 特 点 与 危 险 因 素 分 析 [J]. 中 华 医 院 感 染 学 杂 志,2009,19(15): [4] VentoS,CaineliF,TemesgenZ.Lunginfectionsaftercancer chemotherapy[j].lancetoncol,2008,9(10): [5] 姜 宏 宁, 余 敏. 老 年 肺 癌 患 者 医 院 感 染 的 相 关 因 素 分 析 [J]. 中 华 医 院 感 染 杂 志,2009,19(8): [6] 张 金 玉, 肖 小 炜. 肿 瘤 患 者 化 疗 后 医 院 感 染 的 危 险 因 素 调 查 分 析 [J]. 基 层 医 学 论 坛,2009,13(4): [7] AlpE,Güven M,YildizO,etal.Incidence,riskfactorsand mortalityofnosocomialpneumoniainintensivecareunits:apro spectivestudy[j]. Ann Clin Microbiol Antimicrob,2004, 3(17):1 7. [8] 陈 正 勤, 李 冬 梅, 赵 慧 红. 肿 瘤 患 者 下 呼 吸 道 铜 绿 假 单 胞 菌 感 染 的 耐 药 性 分 析 [J]. 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2008,15(17): [9] 廖 致 红, 蒋 洪 昆, 侯 蓓 蕾, 等. 医 院 内 获 得 性 感 染 洋 葱 伯 克 霍 尔 德 菌 的 临 床 分 布 及 耐 药 性 分 析 [J]. 实 用 医 学 杂 志,2010, 26(2): [10] MianoT A,ReichertM G,HouleTT,etal.Nosocomialpneu moniariskandstressulcerprophylaxis:acomparisonofpanto prazole vs ranitidinein cardiothoracic surgery patients[j]. Chest,2009,136(2): [11] YamadaY,SekineY,SuzukiH,etal.Trendsofbacterialcolo nisationandtheriskofpostoperativepneumoniainlungcancer patientswithchronicobstructivepulmonarydisease[j].eurj CardiothoracSurg,2010,37(4): [12] AlibertiS,AmirA,PeyraniP,etal.Incidence,etiology,tim ing,andriskfactorsforclinicalfailureinhospitalizedpatients withcommunity acquiredpneumonia[j].chest,2008,134(5): [13] KilgoreM L,GhoshK,BeaversC M,etal.Thecostsofnoso comialinfections[j].medcare,2008,46(1): [14] 胡 桃 红, 梁, 赵 贵 峰. 恶 性 肿 瘤 死 亡 患 者 医 院 感 染 分 析 [J]. 现 代 预 防 医 学,2006,33(9): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 杨 靖 )

15 中华肿瘤防治杂志 ２１１ 年 ５ 月第 １８ 卷第 ９ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ｍ２１１ Ｖ １８ Ｎ ９ ６５５ 实验研究 论著 消癌平治疗小鼠恶性腹水的实验研究 时艳艳１ 岳麓１ 齐卫卫１ 魏红梅２ 王秀美１ 邱文生１ １ 青岛大学医学院附属医院肿瘤科 山东 青岛 ２６６３ ２ 解放军第八十八医院肿瘤科 山东 泰安 ２７１ Ｅｘ ｍ ｕｄ Ｘ ｇｍ ｍ ｇ 犛犎犐犢犪狀 狔犪狀１ 犢犝犈犔狌１ 犙犐犠犲 狑犲 １ 犠犈犐 犎狅狀犵 犿犲 ２ 犠犃犖犌 犡 狌 犿犲 １ 犙犐犝 犠犲狀 狊 犺犲狀犵１ １ 犇犲狆犪狉 犿犲狀 狅犳 犗狀犮 狅 犾 狅犵狔 犃犳犳 犾 犪 犲犱犎狅 狊狆 犪 犾狅犳 犙 狀犵犱犪狅犝狀 狏 犲 狉 狊 犮犪 犾犆狅 犾 犾 犲犵犲 犙 狀犵犱犪狅２６６３ 犘 犚 犆犺 狀犪 狔 犕犲犱 ２ 犇犲狆犪狉 犿犲狀 狅犳 犗狀犮 狅 犾 狅犵狔 犖狅 ８８ 犎狅 狊狆 犪 犾狅犳 犘犔犃 犜犪 犪狀２７１ 犘 犚 犆犺 狀犪 摘要 目的 观察 消 癌 平 注 射 液 治 疗 小 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔｂ ｖ Ｘ ｇ 鼠 肝 癌 Ｈ２２ 细 胞 腹 水 瘤 效 果 并 初 步 探 ｍ ｗ ｇｕ ｕｍ ｍ ｊ 讨其 作 用 机 制 方 法 建 立 小 鼠 Ｈ２２ 腹 Ｈ２２ｄ ｍ ｍ 犕犈犜犎犗犇犛 Ａ ｍｄ 水瘤模型 随机区组分 为 生 理 盐 水 组 和 消 ｕｍ ｍ ｗ Ｈ２２ｗ ｄ Ｔｍ ｗ ｄｍ 癌平组 每 组 小 鼠 各 ２ 只 建 模 后 ４８ ｍ ｇ ｕｄｘ ｇｇ ｕ ｗ ２ ｚ ｄ ２ｇ ｕ 开 始 给 药 消 癌 平 组 连 续 腹 腔 给 药 ｍ ｇ ｕ Ｍｄ ｄ ４８ｕ ｍｄ ２ｍＬ ｄ ６ｄ 生 理 盐 水 组 给 予 同 体 积 ｗ ｄ Ｘ ｇ ２ｍＬ ｄ ｗ ｇ ｖ ｕｇ 生理盐水 末次 给 药 ２４ 后 处 死 各 组 小 ６ｄ ｍｖ ｕｍ ｗ ｇ ｖ ｊ 鼠半数 计算各组小 鼠 平 均 腹 水 量 腹 水 ｇ ｕ Ｈ ｍ ｗ ｋ ｄ ２４ｕ 抑制率 腹 水 中 瘤 细 胞 数 肿 瘤 细 胞 生 存 ｍｄ Ｔｖ ｇｖ ｕｍ ｂ 率 并检测 腹 水 肿 瘤 细 胞 凋 亡 细 胞 周 期 ｕｍ ｕｍｂ ｄ ｕ ｖ ｖ ｗ ｄ ｄ Ｔ 及 Ｂ ２ 蛋白表达 剩余小 鼠 继 续 观 察 一 ｇｇ ｄ ｘ 般状态及生存期 结 果 和 生 理 盐 水 组 相 Ｂ ２ ｕｍ ｕｍ ｗ ｍ ｕ ｄ Ｔ ｖ ｇ 比 消癌平 组 小 鼠 精 神 好 动 作 灵 敏 反 应 ｄ ｄ ｗ ｂ ｖｄ ｍ 犚犈 快 消癌平组平均腹水体积 ７ ５±１ ３ ｍｌ 犛犝犔犜犛 Ｃｍ ｄ ｗ ｍ ｇ ｕ ｍ Ｘ ｇ 低于生 理 盐 水 组 平 均 腹 水 体 积 １ ３± ｋ ｕ ｗ ｗ ｄ ｗ ｗ ｍ ｄ ｑｕ ｇ １ ７ ｍｌ 犘 ５ 消 癌 平 组 腹 水 中 肿 瘤 ｄ Ｔｖ ｕｍ Ｘ ｇｇ ｕ ７ ５± 细胞数 ２ ±１ １ １ 明 显 低 于 生 理 盐 ｗ ｍ ｇ ｕ １ ３± １ ３ ｍｌ ｗ 水组腹 水 中 肿 瘤 细 胞 数 ６ ６±２ ８ ５ Ｔｕｍｂ ｕｍ Ｘ ｇｇ ｕ １ ７ ｍｌ 犘 ７ １ 消 癌 平 组 腹 水 肿 瘤 细 胞 生 １ 犘 ２ ±１ １ １７ ｗ ｍ ｇ ｕ 存率 ３４ 明 显 低 于 生 理 盐 水 组 肿 瘤 细 ６ ６±２ ８ １７ 犘 １ Ｔｕ ｖ ｖ ｕｍ 胞生存率 ５８ 犘 １ 消 癌 平 组 小 ３４ ｗ ｄ ｄ Ｘ ｇｇ ｕ ５８ 犘 １ Ｔ 鼠生存期 １６ ±１ ５ ｄ 高 于 生 理 盐 水 组 Ｘ ｇｇ ｕ １６ ±１ ５ ｄ ｗ ｇ ７ 小鼠生存期 １４ ２±１ １ ｄ 犘 ５ 消 ｇ ｕ １４ ２±１ １ ｄ 犘 ５ Ｉ Ｘ ｇ 癌平组小鼠腹水 Ｈ２２ 细 胞 凋 亡 增 加 犘 ｕ Ｈ２２ ｗ ｄ ｗ ｇ ５ Ｈ２２ 细胞 Ｇ２ Ｍ 期百分比增高 犘 ｂ ｄ Ｇ２ Ｍ ｇｄ ｘ Ｂ ２ ｕｍ ５ Ｂ ２ 蛋 白 表 达 减 少 犘 ５ 结 犘 ５ 犆犗犖犆犔犝 ｕｍ ｗ ｗ ｇ ｕ 论 消癌 平 对 Ｈ２２ 肝 癌 腹 水 瘤 的 生 长 具 犛 犐犗犖犛 Ｘ ｇ ｂ ｍ ｂ ｇ ｇ 有明 显 抑 制 作 用 其 机 制 可 能 与 下 调 Ｈ２２ ｕｍ Ｔｍ ｍ ｍ ｂ ｄ ｄｗ ｇｕ ｇ Ｂ ２蛋白表达及诱导细胞凋亡有关 ｘ Ｂ ２ｄ ｄｕ 中华肿瘤防治杂志 ２１１ １８ ９ ６５５ ６５８ 犆犺 狀犑犆犪狀犮 犲 狉犘狉 犲狏犜狉 犲犪 ２１１ １８ ９ ６５５ ６５８ 关键词 肝肿瘤 并发症 腹水 治疗 抗肿瘤药 细胞凋亡 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｖ ｍ ｍ ｇ 第一作者简介 时艳艳 女 山东青岛人 硕士 主要从事肿瘤综合治疗的研究工作 Ｔ ８６ ５３２ ８２９１３３６ Ｅ ｍ ｍ １２６ 通讯作者简介 邱文生 男 山东青岛人 副教授 硕士生导师 主要从事肿瘤综合治疗的研究工作 ｍ Ｔ ８６ ５３２ ８２９１３３６ Ｅ ｍ ｗ ｕ６７ ｇｍ ｑ

16 656 时 艳 艳, 等 消 癌 平 治 疗 小 鼠 恶 性 腹 水 的 实 验 研 究 中 图 分 类 号 R735.7;R730.6 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2011) 恶 性 腹 腔 积 液 是 晚 期 恶 性 肿 瘤 的 常 见 并 发 症 之 一, 尤 以 腹 盆 腔 肿 瘤 发 病 率 高 目 前 恶 性 腹 水 患 者 预 后 不 佳, 以 胃 肠 道 来 源 的 预 后 最 差, 生 存 期 仅 12~20 [1] 周 关 于 恶 性 腹 腔 积 液 的 治 疗 手 段 很 多, 但 疗 效 不 理 想, 且 治 疗 后 往 往 患 者 的 免 疫 功 能 降 低, 严 重 影 响 生 活 质 量 抗 癌 中 药 消 癌 平 对 胃 癌 食 管 癌 及 卵 巢 癌 均 [2] 有 明 显 的 抑 瘤 作 用 而 且 能 够 提 高 机 体 免 疫 力, 有 减 毒 增 效 的 作 用 本 研 究 以 小 鼠 肝 癌 H22 细 胞 腹 水 瘤 动 物 模 型 为 研 究 对 象, 腹 腔 给 药, 观 察 其 治 疗 恶 性 腹 水 的 效 果, 并 探 讨 其 可 能 的 作 用 机 制 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 ICR 小 鼠 购 自 上 海 斯 莱 克 实 验 动 物 有 限 责 任 公 司,6 周 龄, 体 质 量 17~20g, 雌 性, 饲 养 于 SPF 级 环 境 中, 动 物 编 号 :SCXK( 沪 ) 小 鼠 肝 癌 H22 细 胞 株 由 中 科 院 上 海 细 胞 所 提 供 (ATCC 产 品 ) 消 癌 平 注 射 液 购 自 南 京 圣 和 药 业 有 限 公 司 细 胞 周 期 检 测 试 剂 盒 Annexin V FITC 细 胞 凋 亡 检 测 试 剂 盒 和 Bcl 2 蛋 白 表 达 试 剂 盒 均 购 自 上 海 浩 然 生 物 技 术 有 限 公 司 1.2 小 鼠 腹 水 瘤 模 型 的 建 立 将 H22 细 胞 快 速 解 冻 复 苏, 用 RPMI1640(Gib co) 培 养 液 基 ( 内 含 10% 胎 牛 血 清 ), 置 于 37 5% CO 2 孵 箱 中 培 养, 取 对 数 生 长 期 的 细 胞 用 RPMI1640 稀 释, 制 成 单 细 胞 悬 液, 用 0.4% 台 盼 蓝 染 色 计 数 活 细 胞 数 >95% 取 200μL 细 胞 悬 液 注 射 于 2 只 ICR 小 鼠 腹 腔 ( / 只 ),7~8d 腹 水 生 成 明 显 取 接 种 第 8 天 的 ICR 小 鼠, 于 超 净 工 作 台 无 菌 抽 取 小 鼠 腹 水, 用 PBS( 冷 磷 酸 缓 冲 液 ) 稀 释, 并 调 整 细 胞 浓 度 至 ml -1 待 用 1.3 实 验 分 组 和 给 药 方 法 将 小 鼠 随 机 区 组 分 为 对 照 组 ( 生 理 盐 水 组 ) 和 实 验 组 ( 消 癌 平 组 ), 每 组 模 型 鼠 20 只, 分 组 后 腹 腔 接 种 腹 水 瘤 细 胞 建 模 后 48h 起 给 药, 实 验 组 每 日 腹 腔 注 入 0.2mL 消 癌 平 注 射 液, 对 照 组 每 日 注 射 同 等 剂 量 的 生 理 盐 水, 连 续 用 药 6d, 末 次 给 药 24h 后 以 颈 椎 脱 位 法 处 死 各 组 小 鼠 半 数 1.4 检 测 指 标 和 检 测 方 法 观 察 各 组 小 鼠 的 一 般 状 态 在 实 验 过 程 中, 每 日 观 察 各 组 小 鼠 饮 食 精 神 状 态 反 应 和 体 型 的 变 化 等 记 录 各 组 小 鼠 腹 水 平 均 体 积 颈 椎 脱 位 法 处 死 各 组 小 鼠 半 数, 无 菌 条 件 下 开 腹, 用 无 菌 吸 管 收 集 腹 水 入 离 心 管, 计 算 腹 水 平 均 体 积 及 腹 水 抑 制 率 治 疗 组 平 均 腹 水 体 积 腹 水 抑 制 率 (%)=(1- 对 照 组 平 均 腹 水 体 积 ) 100% 记 录 各 组 小 鼠 腹 水 中 瘤 细 胞 数 目 上 述 标 本 中 每 个 标 本 取 腹 水 0.5mL, 稀 释 10 倍, 按 白 细 胞 计 数 法 计 算 瘤 细 胞 密 度 瘤 细 胞 总 数 = 瘤 细 胞 密 度 腹 水 体 积 台 盼 蓝 拒 染 法 检 测 肿 瘤 细 胞 生 存 率 分 别 收 集 上 述 标 本 中 腹 水 1mL, 离 心 (r=8cm,2000r/min, 5min), 用 PBS 洗 涤 细 胞 2 次, 稀 释, 使 每 组 细 胞 数 相 同, 约 为 ml -1, 并 将 细 胞 吹 打 成 单 细 胞 悬 液, 分 别 吸 出 9 滴 细 胞 液 移 入 0.5mL 的 EP 管 中, 再 加 1 滴 0.4% 的 台 盼 蓝 溶 液, 混 匀,3 min 内 于 倒 置 显 微 镜 下 计 数, 镜 下 观 察 : 死 细 胞 被 染 成 淡 蓝 色, 而 活 细 胞 拒 染, 每 瓶 细 胞 计 数 3 次, 取 均 值 活 细 胞 总 数 细 胞 生 存 率 (%)= 活 细 胞 总 数 + 死 细 胞 总 数 100% 流 式 细 胞 术 检 测 腹 水 肿 瘤 细 胞 凋 亡 收 集 各 组 小 鼠 腹 水, 离 心 (r=8cm,2000r/min,5 min) 弃 上 清 并 收 集 腹 水 肿 瘤 细 胞, 用 PBS 洗 涤 细 胞 2 次, 收 集 (1~5) 10 6 细 胞, 加 入 500μL 的 BindingBufer 悬 浮 细 胞 ; 加 入 5μL Annexin V FITC 混 匀 后, 加 入 5μLPropidium Iodide(PI), 混 匀 ; 室 温 避 光 反 应 15min, 加 入 400μL 缓 冲 液 混 合 后 上 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 试 验 重 复 3 次 流 式 细 胞 术 检 测 腹 水 肿 瘤 细 胞 周 期 收 集 各 组 小 鼠 腹 水, 离 心 (r=8cm,2000r/min,5 min) 收 集 腹 水 肿 瘤 细 胞, 用 PBS 洗 涤 细 胞 2 次, 收 集 细 胞, 制 备 的 单 细 胞 悬 液 用 体 积 分 数 为 70% 乙 醇 固 定 2h( 或 过 夜 ),4 保 存, 染 色 前 用 PBS 洗 去 固 定 液 ; 加 100μLRNaseA37 水 浴 30min; 再 加 入 400μLPI 染 色 混 匀,4 避 光 30 min; 上 机 检 测, 记 录 激 发 波 长 488nm 处 红 色 荧 光 试 验 重 复 3 次 流 式 细 胞 术 检 测 腹 水 肿 瘤 细 胞 Bcl 2 蛋 白 的 表 达 收 集 各 组 小 鼠 腹 水, 离 心 (r=8cm,2000r/min, 5min) 收 集 腹 水 肿 瘤 细 胞, 用 PBS 洗 涤 细 胞 2 次, 收 集 细 胞, 制 备 的 单 细 胞 悬 液 用 体 积 分 数 为 70% 乙 醇 固 定, 室 温 暗 处 孵 育 15 min;3 mlpbs 洗 1 次, 离 心 (r=8cm,1000r/min,5min), 去 上 清, 于 标 本 管 的 细 胞 沉 淀 上 加 入 100μL 破 膜 剂 及 5μL 的 FITC 标 记 细 胞 内 抗 体 (Bcl 2/FITC) 和 相 应 的 阴 性 对 照 (MouseIgG1/FITC), 混 匀 2s, 于 4 冰 箱 内 孵 育 20min,3mLPBS 洗 1 次, 离 心 (r=8cm,1000r/min, 5min) 去 上 清,0.5mLPBS 重 悬 细 胞, 立 即 上 流 式 细 胞 仪 检 测 以 标 记 阳 性 细 胞 的 百 分 比 表 示 表 达 情 况

17 中华肿瘤防治杂志 ２１１ 年 ５ 月第 １８ 卷第 ９ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ｍ２１１ Ｖ １８ Ｎ ９ ６５７ 试验重复 ３ 次 观察 小 鼠 的 生 存 期 记 录 各 组 小 鼠 的 生存时间 １ ５ 统计学方法 采用 ＳＰＳＳ１７ 统 计 学 软 件 进 行 数 据 处 理 数 据 以狓 ±狊 表示 计量 资 料 采 用 独 立 样 本 检 验 计 数 资 料用 χ２ 检验 检验水准 α ５ ２ 结果 ２ １ 消癌平对小鼠生活质量的影响 消癌 平 组 小 鼠 的 饮 食 正 常 精 神 好 活 动 自 由 皮 毛光滑 晚期出现精神欠佳 饮食差 生理盐水组小鼠 呈萎靡状态 进 水 进 食 少 皮 毛 粗 乱 呆 滞 少 动 态 不 稳 反应差 晚期腹部极度膨隆 呈恶液质状态 ２ ２ 消癌平对小鼠腹水生长的抑制作用 消癌平组小鼠 腹 水 平 均 体 积 为 ７ ５±１ ３ ｍｌ 生理盐水组为 １ ３±１ ７ ｍｌ 消癌平组 低于 生 理 盐 水组 差异有统计学 意 义 ４ ３９ 犘 ５ 消 癌 平 组腹水抑制率为 ２７ ２ ２ ３ 消癌平对小鼠腹水肿瘤细胞的抑制作用 ５ｍＬ 腹水中消癌平 组 小 鼠 瘤 细 胞 数 为 ２ ± １ １ １７ 生理盐水组为 ６ ６±２ ８ １７ 消癌 平组 明显 低 于 生 理 盐 水 组 差 异 有 统 计 学 意 义 ４ ８２ 图 １ 流式细胞术检测消癌平对 Ｈ２２ 细胞凋亡的影响 Ａ 对照组 Ｂ 消癌平组 犘 １ ２ ４ 各组小鼠腹水肿瘤细胞生存率 对照组腹水肿瘤细胞生 存 率 为 ５８ 消 癌 平 组 腹 水肿瘤细胞生存率为 ３４ 消癌平组 肿 瘤 细 胞 的 生 存 ２ 率较 生 理 盐 水 组 低 差 异 有 统 计 学 意 义 ６ χ １１ 犘 １ ２ ５ 各组小鼠生存期情况 对照组 小 鼠 第 １２ 天 开 始 出 现 死 亡 第 １６ 天 全 部 死亡 平 均 生 存 时 间 为 １４ ２±１ １ ｄ 而 消 癌 平 组 小 鼠第 １４ 天开始出现死亡 第 １８ 天全部死亡 平均生存 时间为 １６ ±１ ５ ｄ 与对照组 相 比 消癌 平组小 鼠 生存期延长 差异有统计学意义 ３ ４ 犘 ５ ２ ６ 消癌平对腹水瘤 Ｈ２２ 细胞的致凋亡作用 腹腔注射消 癌 平 组 小 鼠 腹 水 中 Ｈ２２ 细 胞 凋 亡 率 为 ６ ４±２４ ３ 腹 腔 注 射 生 理 盐 水 组 为 ２５ ９± １２ 消癌平组细 胞 凋 亡 率 高 于 生 理 盐 水 组 差 异 有统计学意义 ３ ２ 犘 ５ 图 １ ２ ７ 消癌平对小鼠腹水肿瘤细胞周期的影响 消 癌 平 组 的 Ｇ Ｇ１ 期 细 胞 百 分 比 为 １９ ３± ２ ９ 生 理 盐 水 组 为 ２８ １±６ ５ 消 癌 平 组 明 显 低于 生 理 盐 水 组 差 异 有 统 计 学 意 义 ３ ９ 犘 １ 消癌 平 组 的 Ｇ２ Ｍ 期 细 胞 百 分 比 为 ５３ ± ７ ３ 生 理 盐 水 组 Ｇ２ Ｍ 期 细 胞 百 分 比 为 ３９ ７± ８ ６ 消癌 平 组 高 于 生 理 盐 水 组 差 异 有 统 计 学 意 义 ３ ２７ 犘 ５ 图 ２ 图 ２ 流式细胞术检测消癌平对细胞周期的影响 Ａ 对照组 Ｂ 消癌平组

18 时艳艳 等 消癌平治疗小鼠恶性腹水的实验研究 ６５８ ２ ８ 各组小鼠腹水肿瘤细胞 Ｂ ２ 蛋白表达情况 消癌平组小鼠腹水 肿 瘤 细 胞 Ｂ ２蛋白表达率为 １４ ５±２ ２ 生理盐水组为 １８ ９±２ ３ 消癌平 组低于生理盐水组 差 异 有 统 计 学 意 义 ３ ６ 犘 肿瘤的发生发展与肿瘤细胞的凋亡密切相关 细 胞凋亡是由基因调控的细 胞的 程 序 化 死 亡 包 括 Ｆ Ｆ Ｌ 介导的死亡受体通路 ４５ 和 Ｂ ２ 家 族调 节的 线 ６ 粒体通路 Ｂ ２ 基 因 是 细 胞 凋 亡 拮 抗 基 因 该 基 因在肿瘤发生中的作 用 不 是 促 进 细 胞 增 殖 而 是 通 过 １ 图 ３ 抑 制 细 胞 凋 亡 延 长 细 胞 寿 命 而 导 致 细 胞 的 异 常 聚 集 ６ 细胞周期阻 滞 可 引 起 肿 瘤 细 胞 的 凋 亡 从 而 影 响细胞的生殖 在细 胞 周 期 中 有 Ｇ Ｇ１ Ｓ 及 Ｇ２ Ｍ ３ 个调控点 任 何 一 个 调 控 点 改 变 都 有 可 能 影 响 肿 瘤 细胞 的 增 长 ７ 本 实 验 发 现 消 癌 平 能 够 诱 导 Ｈ２２ 肝 癌细胞株发生凋亡 流 式 细 胞 术 结 果 表 明 消 癌 平 组 呈 现 Ｇ２ Ｍ 期阻 滞 现 象 Ｂ ２蛋白表达明显少于对照 组 差异有统计学意义 表明消癌平可使恶性肿瘤细胞 生长停滞于细胞周期的 Ｇ２ Ｍ 期 诱导细胞凋亡 从而 抑制恶性 腹 水 的 生 长 达 到 对 恶 性 腹 水 的 治 疗 作 用 其诱导 Ｈ２２ 细 胞 凋 亡 的 机 制 可 能 与 下 调 Ｂ ２表达 有关 综上所述 消癌平对小鼠 Ｈ２２ 腹水瘤 具有 抑制 作 用 能够延长荷瘤小鼠生存期 提高其生活质量 在后 续研究中 将进一步扩 大 样 本 例 数 并 行 基 因 表 达 水 平 蛋白表达水平的相 关 性 分 析 寻 找 消 癌 平 疗 效 相 关的预测分子 进一步探讨其机制 参考文献 １ 任习芳 陈岳祥 谢渭芬 等 恶 性 腹 水 治 疗 现 状 及 对 策 Ｊ 中 华 图 ３ 流式细胞术检测消癌平对 Ｈ２２ 细胞 Ｂ ２ 蛋白 消化杂志 ２６ ２８ ８ ５７３ ５７６ ２ 曹艳芳 消癌平联合奥宁治疗 晚 期 卵 巢 癌 ６５ 例 临 床 观 察 Ｊ 临 表达的影响 床医学 ２９ ２９ １ ７１ ７３ Ａ 对照组 Ｂ 消癌平组 ３ 钱军 华海清 秦叔逵 等 通关 藤 制 剂 抗 肿 瘤 作 用 研 究 进 展 Ｊ ３ 讨论 中国中药杂志 ２９ ３４ １ １１ １３ 消癌平制 剂 是 由 通 关 藤 的 干 燥 藤 茎 经 水 提 醇 制 成 其有效成分为各种酚酸性成分 包括绿原酸和咖啡 酸等 ３ 体外实验 表 明 消 癌 平 能 够 杀 灭 多 种 肿 瘤 细 胞 且能够阻断肿瘤细胞有丝分裂 有效遏止肿瘤扩散 与转移 减少放 化疗引起的各类毒副反应 ２ 本 研究 腹腔内注入消癌平治疗 Ｈ２２ 癌性 腹 水 和生 理盐水 组 比较 消癌平注射液腹腔灌注对癌性 腹水的 抑制 率为 ２７ ２ 并能明显改善恶性腹腔积液小鼠的生活质量 且消癌平组小鼠腹水 量 瘤 细 胞 及 瘤 细 胞 生 存 率 较 生 ４ Ｃｕｚ ｚ Ｄ Ｓ Ｅ Ｈｕｋ Ｗ Ｗ Ｆ ｘ ｄ ｍ ｗ ｄ ｇｄｕ ｖ ｖ ｇ Ｊ Ｃ ２８ ８８ １ ２４ ３４ ５ Ｂ ｋ ＢＥＳ Ｇ ＧＪ Ｄ ｂ ＢＨ３ｄｍ ｄ ｖ ｕ Ｊ ＡｍＪＰ Ｇ Ｌ ｖ ｊ ９９ Ｐ ２５ ２８９ ９８７ ６ ＷｇＢ Ｃ Ｚｕ Ｇ Ｈ Ｌｍ Ｓ Ｋ Ａ ｄｕ ｄ Ｊ Ｂ ｍｄ Ｐ ｍ １９９９ ５３ ７ ｇ ３１５ ３１８ ７ 赵和平 梁利群 消 癌 平 联 合 奥 曲 肽 对 Ｈ ６细胞作用的实 验研究 Ｊ 中国医药与临床 ２１ １ １ ５９ ６ 理盐水组下降 生存 期 延 长 差 异 有 统 计 学 意 义 表 明 消癌平腹 腔 灌 注 能 够 抑 制 腹 水 的 生 成 或 加 速 腹 水 的 排泄 收稿日期 ２１１ １ ２６ 修回日期 ２１１ ３ ２ 编辑 马骏

19 中华肿瘤防治杂志 ２１１ 年 ５ 月第 １８ 卷第 ９ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ｍ２１１ Ｖ １８ Ｎ ９ ６５９ 实验研究 论著 喉癌 Ｈ２ 细胞凋亡调控中 ＨＬＡ Ｂ 的作用机制 郭艳１ 富伟能２ 钟鸣１ 孙开来２ １ 中国医科大学口腔医学院中心实验室 辽宁 沈阳 １１７ ２ 中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室 辽宁 沈阳 １１１ Ｒｇｕ ｍ ｍ ＨＬＡ Ｂ ｍｈ２ ｇ 犌犝犗犢犪狀１ 犉犝 犠犲 狀犲狀犵２ 犣犎犗犖犌 犕 狀犵１ 犛犝犖 犓犪 犾 犪 ２ １ 犇犲狆犪狉 犿犲狀 狅犳 犆犲狀 狉犪 犾犔犪犫 狅 狉犪 狅 狉狔 犛 狅犿犪 狅 犾 狅犵狔犆狅 犾 犾 犲犵犲 犆犺 狀犪犕犲犱 犮犪 犾犝狀 狏 犲 狉 狊 犘 犆犺 狀犪 狔 犛犺犲狀狔犪狀犵１１７ 犚 ２ 犇犲狆犪狉 犿犲狀 狅犳 犕犲犱 犮犪 犾犌犲狀犲 犮 狊 犅犪 狊 犮犕犲犱 犮犪 犾犆狅 犾 犾 犲犵犲 犆犺 狀犪犕犲犱 犮犪 犾犝狀 狏 犲 狉 狊 犘 犆犺 狀犪 狔 犛犺犲狀狔犪狀犵１１１ 犚 摘 要 目 的 探 讨 人 类 白 细 胞 抗 原 Ｂ 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔｘ ｇｕ ｍ ＨＬＡＢ 在喉癌 Ｈ２ 细 胞 凋 亡 调 控 中 的 作 用 ｍ ＨＬＡＢ ｍｈ２ ｇ 机制 方法 免 疫 共 沉 淀 结 合 蛋 白 质 印 迹 技 术 犕犈犜犎犗犇犛 Ｃ ｍｍｕ ｇ ｗ Ｗ 鉴定 ＨＬＡＢ 与 Ｓ１ 结 合 蛋 白 Ａ８ Ｓ１Ａ８ ｂ ｇ ｗ ｕ ｄ ｄ ｂ ｗ Ｓ１Ａ８ 与 Ｓ１Ａ９ 及 ＨＬＡＢ 与 Ｓ１Ａ９ 在 体 ＨＬＡＢ ｄ Ｓ１Ａ８ Ｓ１Ａ８ ｄ Ｓ１Ａ９ ＨＬＡＢ ｄ 外发 生 相 互 作 用 的 情 况 免 疫 细 胞 化 学 对 狀狏 狉 狅 Ｍ ｗ ｍｍｕ ｍ Ｓ１Ａ９ ｗ ＨＬＡＢ Ｓ１Ａ８ 和 Ｓ１Ａ９ 在 Ｈ２ 细 胞 中 的 ｄ ｚ ｄ ｄ ｂ ｍｇ 表达进行定位 同时验证 三 者 之 间 可 能 的 关 系 ＨＬＡＢ Ｓ１Ａ８ｄＳ１Ａ９ Ｈ２ Ｆｕ ｍ 进 一 步 应 用 ＲＮＡ 干 涉 技 术 通 过 Ｒ ｍ ｍｐｃｒｄ Ｗ ｂ ｗ ｄ ｖ ｕ ｘ ＰＣＲ 及蛋白质印迹评估相互作用基因的 表 达 情 ｖ ｇ ＲＮＡ 犚犈 况 结 果 Ｈ２ 细 胞 中 ＨＬＡＢ 和 Ｓ１Ａ８ 蛋 ｄｗ Ｓ １Ａ８ 狀狏 狉 狅 ｗ 犛犝犔犜犛 ＨＬＡＢ 白在体外 存 在 相 互 作 用 而 Ｓ１Ａ８ 和 Ｓ１Ａ９ ｄ ｍ ｄｗ Ｓ １Ａ９ Ｈ ２ Ｉｍｍｕ ｍ 并没有以异源二聚体 的 形 式 存 在 免 疫 细 胞 化 ｖ ｄ Ｓ １Ａ８ ｗ ｘ ｄ ｍ ｄ 学结果显示 Ｈ２ 细 胞 中 Ｓ１Ａ８ 蛋 白 主 要 表 Ｓ １Ａ９ ＨＬＡＢｗ ｚ ｄ ｍ ｄ ｍｍｂ ｗ 达于细胞质中 ＨＬＡＢ 主 要 定 位 于 细 胞 质 和 细 ｗ ｍ ｂｕ ｄ ｕ ｕ Ａｄｄ ｄ ＲＮＡ 胞膜 上 而 Ｓ１Ａ９ 蛋 白 主 要 分 布 于 细 胞 核 中 ＨＬＡＢ ｕ ｄ ｍｒｎａ ｄ ｇ ｄｗ ｇｕ 另外 与转染 ＰＢＳ 及 无 义 小 分 子 干 扰 ＲＮＡ ｘ ｖ Ｓ １Ａ８ｇ ｍ ｄｗ ＰＢＳ 组相 比 ＲＮＡ 干 涉 ＨＬＡＢ 基 因 能 明 显 下 调 ｄ ＲＮＡ ｇ ｕ 犉ｖ ｕ ｗ ５５３ ２４ Ｓ１Ａ８ｍＲＮＡ 和蛋白的表达水平 犉 值分别为 ｄ 犘 ｖ ｕ ｗ ｗ ｄ６３ ５８２ ｇ ５５３ ２４ ６３ ５８２ 犘 值 均 为 而 ＲＮＡ 干 ＨＬＡＢ ｍｒｎａ ｄ ｘ ｄ ｗ ｂ ｄ 涉 Ｓ１Ａ８ 基 因 对 ＨＬＡＢ ｍｒｎａ 和 蛋 白 表 达 ｕｄ ｇｓ １Ａ８ｇ ＲＮＡ 犉ｖ ｕ ｗ １ ２６６ ｇ 变化无 显 著 影 响 犉 值分别为１ ２６６ １ ８７ ｄ１ ８７ ｄ犘 ｖ ｕ ｗ ３４８ ｄ ３９５ 犆犗犖犆犔犝犛 犐犗犖 犘 值 分 别 为 ３４８ ３９５ 结 论 ＨＬＡＢ 与 ＨＬＡＢ ｇ ｗ Ｓ １Ａ８ ｍ ｇｇ ｇ Ｓ１Ａ８ 相互作用 部分通 过 调 节 Ｓ１Ａ８ Ｂ ２ Ｈ ２ ｕｇ ｇ ｘ ｇｕ 的表达而激发喉癌 Ｈ２ 细胞凋亡发生 ２ Ｓ １Ａ８ Ｂ 中华肿瘤防治杂志 ２１１ １８ ９ ６５９ ６６２ 犆犺 狀犑犆犪狀犮 犲 狉犘狉 犲狏犜狉 犲犪 ２１１ １８ ９ ６５９ ６６２ 关键词 喉肿瘤 细胞凋亡 ＨＬＡ 抗原 免疫沉淀法 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｍ ＨＬＡ ｍｍｕ ｇ ｇ 中图分类号 Ｒ７３９ ６ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２１１ ９ ６５９ ４ 基金项目 辽宁省自然科学基金 ２９２１１ 肿瘤的免疫治疗 近 年 来 发 展 迅 速 提 高 肿 瘤 的 免 疫 原 性 制 备 高 效 的 肿 瘤 疫 苗 已 成 为 免 疫 治 疗 的 热 通讯作者简介 郭艳 女 辽宁大 连 人 博 士 讲 师 主 要 从 事 点 １２ 人类白 细 胞 抗 原 Ｂ ｍ ｕｋ ｇ 肿瘤分子生物学的研究工作 ＨＬＡＢ 为 ＨＬＡⅠ 类 分 子 研 究 表 明 ＨＬＡⅠ 类 Ｂ 分子能通过激发自身的免疫应答系统而对肿瘤细胞的 Ｔ ８６ ２４ ２２８９１９６１ Ｅ ｍ ｄｇ ｍ ｍ

20 660 郭 艳, 等 喉 癌 Hep2 细 胞 凋 亡 调 控 中 HLA B 的 作 用 机 制 [3] 消 灭 产 生 重 要 的 作 用 目 前 已 经 有 应 用 HLAⅠ 类 分 子 的 转 基 因 产 物 治 疗 恶 性 肿 瘤 的 相 关 报 道, 尤 其 是 [4 5] 治 疗 黑 色 素 瘤 和 头 颈 部 肿 瘤 本 研 究 前 期 通 过 RNA 干 涉 技 术 研 究 表 明,HLA B 具 有 抑 制 喉 癌 Hep2 细 胞 增 殖 和 侵 袭, 促 进 Hep2 细 胞 凋 亡 的 作 用, 但 RNA 干 涉 HLA B 后 Hep2 细 胞 的 凋 亡 率 由 对 照 组 的 [6] 2.04% 升 高 到 4.79%, 这 与 黄 带 发 等 干 涉 S100 结 合 蛋 白 A8 (sloo calcium binding protein A8, S100A8) 基 因 后 喉 癌 Hep2 细 胞 系 的 凋 亡 率 升 高 情 况 ( 将 近 9 倍 ) 相 比 差 异 很 大, 表 明 HLA B 在 喉 癌 中 的 促 凋 亡 作 用 可 能 与 S100A8 相 关, 但 其 具 体 机 制 仍 然 不 清 楚 另 一 方 面,S100A8 S100A9 同 属 S100 蛋 白 家 族 成 员, 其 复 合 物 具 有 抑 制 多 种 肿 瘤 细 胞 凋 亡 促 进 [7 8] 侵 袭 转 移 的 功 能 本 研 究 将 采 用 免 疫 共 沉 淀 结 合 RNA 干 涉 技 术 深 入 研 究 HLA B 参 与 喉 癌 发 生 发 展 的 机 制, 不 仅 为 喉 癌 的 免 疫 治 疗 提 供 有 力 的 理 论 依 据, 也 为 喉 癌 疫 苗 的 研 制 提 供 新 的 方 向 1 材 料 与 方 法 1.1 试 剂 及 仪 器 μmacs TM 蛋 白 G 微 珠 μ 柱 和 磁 性 分 选 器 购 自 德 国 美 天 旎 公 司 ; 免 疫 共 沉 淀 (Co immunoprecipitation, Co IP) 及 蛋 白 质 印 迹 细 胞 裂 解 液 和 BCA 蛋 白 浓 度 测 定 试 剂 盒 为 碧 云 天 生 物 技 术 研 究 所 产 品 ; 山 羊 抗 人 HLA B S100A8 和 S100A9 多 克 隆 抗 体 购 自 美 国 SantaCruz 公 司 ; 辣 根 过 氧 化 物 酶 (horseradishperox idase,hrp) 标 记 抗 山 羊 IgG FITC 或 TRITC 荧 光 标 记 二 抗 IgG 为 北 京 中 杉 金 桥 产 品 ;Silencer R sirna 合 成 试 剂 盒 和 Trans Messenger TM 转 染 试 剂 分 别 为 Ambion 和 Qiagen 公 司 产 品 1.2 免 疫 共 沉 淀 裂 解 蛋 白 的 所 有 步 骤 均 在 冰 上 或 4 进 行,Co IP 细 胞 裂 解 液 碧 云 天 (20 mmol/l Tris,pH 7.5) 150mmol/L NaCl 1% Triton X 100 sodium pyro phosphate β glycerophosphate EDTA Na 3VO 4 和 leupeptin 等 多 种 抑 制 剂 在 使 用 前 数 分 钟 内 加 入 PMSF, 使 其 终 浓 度 为 1 mmol/l; 常 规 培 养 Hep2 细 胞,24~48h 后 去 除 培 养 基,PBS 漂 洗 1 次, 按 照 6 孔 板 中 每 孔 加 入 100~200μL 裂 解 液 的 比 例 加 入 裂 解 液, 用 枪 吹 打 数 下, 使 裂 解 液 和 细 胞 充 分 接 触, 充 分 裂 解 后,10000~14000r/min, 离 心 3~5 min(r= 8.2cm), 取 上 清, 采 用 BCA 蛋 白 浓 度 测 定 试 剂 盒 检 测 抽 提 的 蛋 白 质 浓 度, 分 装 后 于 -70 保 存 备 用 Co IP 按 照 德 国 美 天 旎 公 司 的 定 性 免 疫 沉 淀 μmacs TM 蛋 白 G 微 珠 的 使 用 说 明 进 行 操 作 IgG 为 阴 性 对 照 1.3 免 疫 细 胞 化 学 取 泡 酸 后 的 洁 净 盖 玻 片 置 于 6 孔 板 内, 将 细 胞 密 度 调 整 为 个 / 孔, 培 养 24~48h 后 甲 醇 -20 预 固 定 过 夜,PBS 漂 洗 后 将 盖 玻 片 转 移 至 玻 璃 器 皿 中, 加 入 丙 酮 固 定 6 min; 弃 去 丙 酮,PBS 漂 洗 3 次 后 加 入 非 特 异 血 清 室 温 封 闭 0.5h; 特 异 性 一 抗 杂 交 1~2h,PBS 漂 洗 3 次,5 min/ 次 后, 加 入 稀 释 的 FITC 或 TRITC 荧 光 标 记 的 二 抗, 37 孵 育 45min;PBS 漂 洗 后 按 照 同 样 的 操 作 完 成 另 一 种 蛋 白 质 的 荧 光 标 记, 最 后 50% 甘 油 封 片, 于 荧 光 显 微 镜 下 观 察 标 记 效 果, 共 聚 焦 显 微 镜 摄 片 PBS 代 替 一 抗 组 为 阴 性 对 照, 1.4 小 RNA 合 成 及 转 染 RNA 干 涉 用 小 RNA 的 合 成 及 转 染 见 参 考 文 献 [9] 转 染 PBS 和 无 义 小 分 子 干 扰 RNA(smalinter feringrna,sirna) 组 为 特 异 性 对 照 1.5 Real timepcr 常 规 TRizol 法 抽 提 细 胞 总 RNA, 逆 转 录 合 成 cd NA, 采 用 荧 光 定 量 PCR 法 检 测 RNA 干 涉 后 S100A8 及 HLA B 表 达 情 况 HLA B 上 游 引 物 序 列 为 5 C CAGCAGGAGATAGAACCTT 3, 下 游 为 5 TCA GTCCCTCACAAGACAG 3 ;S100A8 上 游 为 5 T TGCTAGAGACCGAGTGTCC 3, 下 游 为 5 CTTT GTGGCTTTCTTCATGG 3 应 用 美 国 ABI 公 司 7500 型 荧 光 定 量 PCR 仪, 以 β actin 为 内 参, 通 过 2 -ΔΔCT 法 评 估 基 因 在 mrna 水 平 上 的 相 对 表 达 量, 分 析 软 件 为 每 组 实 验 设 置 3 个 复 孔 1.6 蛋 白 质 印 迹 总 蛋 白 的 提 取 在 冰 上 或 4 进 行 收 集 sirna 转 染 后 7d 的 细 胞, 加 入 适 量 蛋 白 质 印 迹 细 胞 裂 解 液, 充 分 裂 解 后,12000r/min, 离 心 30min(r=8.2cm), 收 集 上 清, 采 用 96 孔 板 通 过 考 马 斯 亮 蓝 法 定 量 样 品 蛋 白 质 浓 度, 将 样 品 蛋 白 质 浓 度 调 为 一 致, 上 样 量 为 50μg, 连 接 电 泳 装 置, 调 节 电 压 至 40 V, 以 恒 电 压 的 方 式 进 行 电 泳, 当 染 料 前 沿 进 入 分 离 胶 后, 将 电 压 提 高 至 80V, 直 至 溴 酚 蓝 迁 移 至 凝 胶 下 端 附 近 ( 约 4h), 关 闭 电 源, 停 止 电 泳, 取 出 凝 胶, 切 角 标 记 ; 半 干 式 电 转 移 30min 后, 将 PVDF 膜 放 入 5% 脱 脂 奶 粉 (PBST 配 制 ) 中, 于 水 平 摇 床 上 缓 慢 摇 动, 室 温 封 闭 1~2h, 然 后 依 次 进 行 一 抗 杂 交 1 (500~1000),1 PBST 洗 膜, 二 抗 杂 交 1 (2000~5000),ECL 化 学 发 光 显 色 反 应 与 曝 光, 观 察 结 果 β actin 的 操 作 同 上, 一 抗 杂 交 浓 度 为 , 二 抗 杂 交 浓 度 为 统 计 学 方 法 每 组 实 验 均 重 复 3 次, 通 过 SPSS13.0 对 数 据 进 行 统 计 学 分 析, 转 染 PBS 无 义 sirna 和 转 染 相 应 基 因 sirna 后, 各 基 因 在 mrna 及 蛋 白 质 水 平 表 达 的 改 变 采 用 单 因 素 方 差 分 析 检 验 水 准 α=0.05