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裔践丁
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血清唾液酸检测在肿瘤诊疗中的临床应用研究进展一种能够在生化分析仪检测的肿瘤标志物齐军中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所山东济南 2012 年 12 月 27 日内容提要唾液酸研究历程检测方法国内外研究进展本实验室部分研究数据存在的问题与展望唾液酸基本概念唾液酸 (sialic acid,sa): N 乙酰基神经氨酸, 是一种天然存在的九碳单糖 SA

1 血清唾液酸检测在肿瘤诊疗中的临床应用研究进展一种能够在生化分析仪检测的肿瘤标志物齐军中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所山东济南 2012 年 12 月 27 日内容提要唾液酸研究历程检测方法国内外研究进展本实验室部分研究数据存在的问题与展望唾液酸基本概念唾液酸 (sialic acid,sa): N 乙酰基神经氨酸, 是一种天然存在的九碳单糖 SA 存在形式存在形式包括蛋白质结合型脂质结合型和游离型 3 种人体中, 脑的唾液酸含量最高主要食物来源是母乳, 也存在于牛奶鸡蛋和奶酪中研究历程分为 2 个阶段 : 第一阶段 :20 世纪 70 年代 90 年代中期 SA 在肿瘤诊疗中具有重要的应用价值研究集中在肺癌等常见肿瘤检测方法稳定性差第二阶段 : 本世纪初期至今研究领域扩展到心血管疾病等领域新型稳定的化学检测方法应用于临床检测方法日本和光株式会社 : 一步酶法 ( 干粉, 需溶解 ) ELISA 法 : 用纯化的抗体包被微孔板, 制成固相载体, 往包被抗 SA 抗体的微孔中依次加入标本或标准品生物素化的抗 SA 抗体 HRP 标记的亲和素, 经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色, 并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的 SA 呈正相关用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 (OD 值 ), 计算样品浓度稳定性较差,CV 在 10-15% 酶法 ( 速率法 ): 目前主流方法优点 : 简便快速通量大自动化程度高方法学稳定可靠国家食品药品监督管理局批准的 SA 试剂盒进口 :WAKO 日本和光纯药,2004 年国产 : 温州东瓯津玛,2006 年乌鲁木齐德纳,2006 年上海铂锦,2006 年浙江康特,2010 年北京九强,2011 年安徽大千,2011 年 1

血清唾液酸的临床应用 SA 在肿瘤诊断疗效监测中的应用肺癌肝癌结直肠癌及鼻咽癌 SA 在糖尿病诊疗中的应用 SA 在心血管疾病诊疗中的应用 SA 在炎症疾病诊疗中的应用恶性肿瘤严重危害人类健康 WHO 统计数据显示 : 全球恶性肿瘤每年发生 1270 万, 死亡 760 万中国恶性肿瘤的发病和死亡情况越来越严重 ; 未来 20 年, 发病率和死亡率还将呈现上升趋势 Global

2 血清唾液酸的临床应用 SA 在肿瘤诊断疗效监测中的应用肺癌肝癌结直肠癌及鼻咽癌 SA 在糖尿病诊疗中的应用 SA 在心血管疾病诊疗中的应用 SA 在炎症疾病诊疗中的应用恶性肿瘤严重危害人类健康 WHO 统计数据显示 : 全球恶性肿瘤每年发生 1270 万, 死亡 760 万中国恶性肿瘤的发病和死亡情况越来越严重 ; 未来 20 年, 发病率和死亡率还将呈现上升趋势 Global cancer statistics (2011). CA: A Cancer Journal for Clinicians, 2011, 61: Zhao P, Dai M, Chen WQ, et al.cancertrends in China.Jpn J Clin Oncol,2010,40: 代敏, 任建松, 李霓, 等. 中国 2008 年肿瘤发病和死亡情况估计及预测. 中华流行病学杂志, 2012, 33(1): SA 肿瘤标志物研究肺癌 1981 年, Krolikowski 等报道了肺癌患者 SA 水平 (0.697 ± mum/ml) 高于健康对照组 (0.432 ± mum/ml), 且不受吸烟月经状态口服避孕药等因素影响 Wang FL, Wang YQ, Zhang ZY, Zhao C.Serum sialic acid level (SSAL) in patients with cancer or tuberculosis of the lung. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi. 1981;3(3): Krolikowski FJ, Reuter K, Waalkes TP, Sieber SM, Adamson RH. Serum sialic acid levels in lung cancer patients.pharmacology. 1976;14(1): SA 肿瘤标志物研究肺癌 1990 年, 中国学者报道,LSA 在肺癌患者中的阳性率高于 CEA(82.4% VS 67.6)(N=86) 在肺腺癌和 SCLC 均高水平表达联合检测提高检测效率, 可用于疗效监测 1991 年, 希腊学者 Kakari 研究,TSA 和 LSA 在肺癌患者中的敏感度分别为 86.5% (800 mg/l) 和 77% (20 mg/l), CEA 为 46.4% (5 ng/ml) [N=152]; 但 TSA 和 LSA 在良性肿瘤患者中的假阳性均为 56%( 特异度仅为 44%) Zhu X..Comparative study of serum lipid-bound sialic acid and carcinoembryonic antigen in patients with lung cancer.honghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 1990;13(1):25-7, 61 Kakari S, Stringou E, Toumbis M, et al. Five tumor markers in lung cancer: significance of total and "lipid"-bound sialic acid. Anticancer Res Nov-Dec;11(6): SA 肿瘤标志物研究肺癌 2008 年山东省立医院张健等研究显示 ( 肺癌 =56 例 ) Cutoff 为 754mg/L, 敏感度 83.93%, 特异度 95%(7/141); 肿瘤患者病情好转的,3 个月时 SA 水平明显降低 2010 年山东临沂人民医院季海生等报道, ( 肺癌 =126 例 ) Cut-off 为 754mg/L, 敏感度 80.2%, 特异度 97.5%(2/80) 2012 年中日友好医院研究表明 (NSCLC=100 例 ),Cutoff 为 695mg/L, 敏感度 69%, 特异度 88.9%;NSCLC 患者中 SA 水平随着肿瘤分期分级而升高张健, 张炳昌, 武春晓, 等. 血清唾液酸在三种临床常见恶性肿瘤中的检测及临床意义. 医学检验与临床,2008,19(6): 季海生, 厉波, 杨爱, 等. 血清唾液酸检测在恶性肿瘤诊疗中的临床研究王萍, 王立伟, 张铁, 等. 血清唾液酸水平检测在非小细胞肺癌中的诊断价值中国医药,2012,7(5): SA 肿瘤标志物研究肝癌血清 SA 在肝硬化患者中低表达 TSA 的增高实际是有肝细胞的状态受损引起的, 而与个体的血脂代谢状态无关 LSA 的升高在很大程度上导致血清 TSA 水平增高 Arif S, Haq N, Hanif R, Khan AS, Rehman J, Mufti TA. Variations of serum sialic acid level in liver cirrhosis. J Ayub Med Coll Abbottabad 2005; 17: Cylwik B, Chrostek L, Panasiuk A, Szmitkowski M. Serum total and free sialic acid in patients with chronic liver disease.clin Chem Lab Med 2010; 48:

3 SA 肿瘤标志物研究研究了在不同肝脏疾病状态下 LSA 的表达, 肝癌中毒性肝炎等高表达, 而肝硬化 ( 含酒精性肝硬化 ) 低表达血清脂蛋白特别是糖脂蛋白中脂分子唾液酸化过程的改变, 导致血清 LSA 浓度的改变, 进而影响肝脏疾病的发生和发展 Chrostek L, Cylwik B, Panasiuk A, et al. Lipid bound sialic acid (LSA) in liver diseases of different etiologies. Ann Hepatol. 2011,10(2): SA 肿瘤标志物研究消化肿瘤 2007 年南昌一附院陈建华等研究了 SA 在消化肿瘤中的临床价值 : 共胃癌 91 例, 肝癌 76 例, 胰腺癌 25 例和肠癌 14 例, 阳性率为 76.7%(Cut-off=?) 胰腺癌表达水平最高 (871 ±79mg/L), 胃癌为 (659±115 mg/l); 肝硬化患者低水平表达 (451.5 ± 67.8mg/L) 2008 年山东省立医院张健等研究显示 ( 胃癌 =48 例 ) Cutoff 为 754mg/L, 敏感度 79.17%, 特异度 95%(7/141) 2011 年田亚平等研究结果显示 :46 例肠癌中高表达 (736 ±148mg/L), 阳性率仅为 45.7%( Cut-off =754mg/L) 陈建华, 徐勇, 郑晓丰, 等. 血清唾液酸检测对诊断消化性肿瘤的临床应用. 实用临床医学,2007(8)6:28-30,33. 贾兴旺, 王博, 田亚平, 等. 血清唾液酸检测在恶性肿瘤及炎性疾病中的临床应用 [J]. 军医进修学院学报,2011,32(1):23 24, 27. SA 肿瘤标志物研究妇科肿瘤 2009 年, 王春燕在妇科恶性肿瘤 ( 卵巢癌 48 例, 子宫内膜癌 34 例, 子宫颈癌 37 例, 输卵管癌 10 例 ) 研究 SA 表达 (602 ±160mg/L) 好转组的患者 (N=32) 有 27 例血清 sa 水平随临床症状的改善或好转而降低 ; 恶化组的患者 (N=13) 中有 10 例患者 SA 水平随临床症状加重而升高 ; 临床符合率分别为 84.38% 76.92% 王春燕, 刘健, 贾玫, 等. 血清唾液酸检测在妇科恶性肿瘤诊断中的评价. 中国实验诊断学, 2009, 13(10): SA 肿瘤标志物研究鼻咽喉癌健康人 50 例, 良性头颈肿瘤 50 例,65 例低分化 NPC 鳞癌 Cut-off 值 580mg/L, 免疫酶法 / 快速比色测定血清 SA 分别为 407± ±124 和 687±174mg/L SA 应用于鼻喉部恶性肿瘤的诊断时, 灵敏度为 87.7%, 特异性为 92%, 阳性结果预期值为 87.7 %, 阴性结果预期值为 92% 复发患者 (N=21)SA 浓度和阳性率均优于 EBVCA- IgA 蒋丽娜, 戴利成, 何建方等. 联合检测血清唾液酸和 EBVCA-IgA 对鼻咽癌诊断及疗效监测的意义 [J]. 中华实验和临床病毒学杂志,2006,20(2): SA 肿瘤标志物研究鼻咽喉癌健康人 100 例, 良性疾病 120 例, 肿瘤 90 例血清 SA 分别为 542±74 589±166 和 1079±422mg/L Cut-off 值 689mg/L,wako 生化试剂肿瘤组鼻咽癌上颌窦癌喉癌患者各 30 例 SA 应用于鼻喉部恶性肿瘤的诊断时, 灵敏度为 %, 特异性为 75.83%, 阳性结果预期值为 73.15%, 阴性结果预期值为 89.22% 冯忠盈, 邵明希, 黄依明等.120 例鼻喉部恶性肿瘤血清唾液酸检测分析 [J]. 检验医学与临床,2009,6(19): 研究小结以上研究分为 2 个阶段 : 第一阶段 :20 世纪 70 年代 90 年代中期 SA 在肿瘤诊疗中具有重要的应用价值研究集中在肺癌等常见肿瘤是什么影响了血清 SA 在临床的推广使用?( 研究低谷 ) 检测方法学低特异度更加科学的设计和临床研究第二阶段 : 本世纪初期至今研究更加深入探寻其机理将新型稳定的检测方法应用于临床 3

4 部分研究结果中国医学科学院肿瘤医院 SA 在肝癌中的应用 ( 国内外相关研究少 / 入组病例少, 缺乏大样本权威数据 ) SA 在鼻咽癌中的应用肝癌肿瘤标志物研究行动指南 2011 年 11 月, 中华医学会检验分会卫生部临床检验中心和中华检验医学杂志编辑部联合发布了由中华医学会检验分会临床疾病实验室检测项目应用建议编写组肿瘤标志物的临床应用建议 AFP 是目前唯一推荐在临床常规使用的肝细胞癌肿瘤标志物其他新兴的肿瘤标志物对肝细胞癌的诊断和监测作用仍需进行大规模的临床研究验证肝癌中的研究诊断价值组别 N( 例 ) 浓度值 (mg/l) 检验值 (U, P) 检验值 (U, P) 肝癌组 ±173 * , , 原发性肝癌 ±170 * , , 转移性肝癌 ±155 * 289, , 肝良性疾病组 ± , 健康对照组 ±62 与健康对照组相比,P<0.01; 与肝良性疾病组相比,P<0.01; 肝良性疾病组 : 包括肝血管瘤 27 例, 肝硬化 16 例, 肝囊肿 11 例, 脂肪肝 13 例组别肝癌中的研究随访数据肝癌组 (N=103) 手术治疗组 (N=33) 介入治疗组 (N=49) 射频消融治疗组 (N=21) 疗前 693± ±86 723± ±91 治疗后 7 天 817±193 * 840±215 * 796±187 * 653±122 治疗后 1 月 782±173 * 813±161 * 768± ±83 治疗后 3 月 662± ± ± ±53 治疗后 6 月 615±144 * 624± ±142 * 552±69 * 与治疗前水平相比,P<0.05; 与治疗后 3 月水平相比,P<0.05; 与介入组治疗前相比,P<0.05 王慜杰, 严翠娥, 李学祥, 等. 血清唾液酸在肝癌患者疗效监测中的临床价值研究. 王慜杰, 严翠娥, 李学祥, 等. 血清唾液酸在肝癌患者疗效监测中的临床价值研究. 肝癌中的研究随访数据患者 1 行手术治疗 ; 患者 2 行射频消融治疗 ; 患者 3 行介入治疗 ; 患者 4 和 5 在治疗后 9 月时病情进展 4

5 肝癌中的研究结论 SA 在肝癌中呈高表达 SA 在肝硬化及肝良性肿瘤患者中低表达, 这有助于慢性肝硬化与肝癌的鉴别诊断, 特别是肝硬化患者癌变的早期预警肝癌患者治疗过程中呈现规律性变化 SA 有助于肝癌的复发预警鼻咽癌研究数据健康人 50 例, 鼻炎 50 例, 鼻咽癌 51 例血清 SA 分别为 565.3± ±51.3 和 691.7±100.6mg/L 灵敏度 (Cut-off 为 650mg/L) 和特异度分别为 58.82% 和 84.0% 严翠娥, 王慜杰, 贾德强, 等. 血清 SA EA-IgA VCA-IgA CgA 联合检测对鼻咽癌诊断的临床价值. 存在的问题之一 : 正常人测量值发表年作者健康对照 SA 参考区间使用试剂发表期刊作者单位度组 2003 梁湘辉 ±65 温州东瓯湖南医科大学学报中南大学湘雅医院 2006 范厚臻 ±57 伊利康医学检验与临床山东省临沂中医院 2006 刘惠兰 ±115 WAKO 天津医药天津第一医院 2007 陈建华 ±56 温州东瓯实用临床医学南昌大学一附院 2008 张健 ±86 温州东瓯医学检验与临床山东省立医院 2009 王春燕 ±72 WAKO 中国实验诊断学北京大学人民医院 2009 冯忠盈 ±74 WAKO 检验医学与临床复旦附属耳鼻喉医院 2010 王丽萍 ±217 酶免山东医药山东聊城人民医院 2010 季海生 ±76 温州东瓯中华全科医师杂志山东临沂人民医院 2011 张铁 ±62 温州东瓯中华健康管理学杂志北京中日友好医院 2011 贾兴旺 ±63 温州东瓯军医进修学院学报解放军总医院 2012 刘沛 ±97 上海铂锦检验医学与临床河南镇平人民医院 2012 王萍 ±62 温州东瓯中国医药北京中日友好医院 2012 邢跃雷 ±40 温州东瓯国际检验医学杂志解放军总医院 2013 王慜杰 ±62 温州东瓯中国医学科学院肿瘤医院反映出来的几个问题不同品牌试剂检测结果差异大不同地区检测结果差异较大 2010 年后, 国产试剂应用越来越广泛近年来论文发表水平越来越高问题与展望质控品的合理应用血清 SA 稳定性 / 试剂稳定性系统评价不同检测方法结果的可比性研究 (Comparative Study) 合理参考区间 (Reference Interval) 的建立从诊断性研究到疗效监测复发预警的研究科学的设计与多中心大样本的研究临床推广与规范化应用鸣谢王慜杰实验设计样本收集等严翠娥样本收集与实验检测等胡书生数据统计等李学祥样本收集等韩彬彬样本收集等 5

6 讨论谢谢聆听! 6

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