274 ChinJOphthalmolandOtorhinolaryngol,September2011,Vol11,No.5 带来的扩瞳 影响调节的不良反应, 目前还没有可广泛应用于临床治疗近视眼的 M 受体阻滞剂药物 山莨菪碱是我国从茄科植物唐古特莨菪中分离出来的生物碱, 其消旋异构物消旋山莨菪

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1 中国眼耳鼻喉科杂志 2011 年 9 月第 11 卷第 5 期 消旋山莨菪碱对豚鼠形觉剥夺性 近视的作用和安全性 273 基础研究 杨颖周行涛李涛刘红 摘要 目的探讨 10% 消旋山莨菪碱对豚鼠形觉剥夺性近视的作用及安全性 方法 2~3 周龄英国短毛花色豚鼠 30 只, 随机分为 3 组, 每组 10 只, 采用右眼遮盖半透膜建造形觉剥夺模型 左眼为自身对照 ;A 组 : 形觉剥夺 +10% 消旋山莨菪碱 20μL 玻璃体腔注射 1 次 ;B 组 : 形觉剥夺 + 生理盐水 20μL 玻璃体腔注射 1 次 ;C 组 : 单纯形觉剥夺组 所有动物饲养于 500lx 白光照明环境中, 照明周期 12h 干预前后用 A 超测量眼轴长度 前房深度和晶状体厚度, 计算玻璃体腔长度 ; 带状光检影法测量屈光度 ; 右眼与左眼的差异作为评价指标以消除饲养过程中的组间差异 2 周后实验结束, 每组随机选取 2 只豚鼠处死后立即摘取眼球, 行苏木素 伊红 (HE) 染色, 观察眼部组织结构 结果各组基线左右眼眼轴长度 前房深度 晶状体厚度 玻璃体腔长度 屈光度差异均无统计学意义 (P>0.05) 干预后 2 周复测,A 组左右眼眼轴长度和玻璃体腔长度差异小于 B 组及 C 组, 差异有统计学意义 (P<0.01), 玻璃体腔长度差异与眼轴长度差异显著相关 (r=0.904,p<0.001) 各组间左右眼屈光度 晶状体厚度 前房深度差异均无统计学意义 (P>0.05) HE 染色后显微镜下观察 : 给药组视网膜 巩膜 脉络膜均未见毒性改变 结论 10% 消旋山莨菪碱可抑制豚鼠形觉剥夺性近视眼轴的增长, 主要抑制玻璃体腔长度 10% 消旋山莨菪碱玻璃体腔注射未发现组织学毒性改变 ( 中国眼耳鼻喉科杂志, 2011,11: ) 关键词 消旋山莨菪碱 ; 形觉剥夺性近视 ; 豚鼠 Thesafetyandeficacyofracanisodamineonform deprivationinguineapigs YANGYing,ZHOUXing tao,li Tao,LIUHong. DepartmentofOphthalmology,EyeEarNoseandThroatHospital,FudanUniversity,Shanghai ,China Corespondingauthor:LIUHong, liuhongzef@263.net Abstract Objective Toinvestigatethesafetyandeficacyof10% racanisodamineonform deprivationin guineapigs.methods Thirtyguineapigsagedfrom2to3weekswererandomlydividedinto3groups(n=10).Form deprivationmodelswereestablishedinrighteyeswithtranslucentmembraneswhilethelefteyesweretreatedascontrol. GroupAwasform deprivationwithintravitrealinjectionof20μl10% racanisodamineforonetime.groupbwasform deprivationwithintravitrealinjectionof20μlsalineforonetime.groupcwasform deprivationgroup.alanimalswere raisedin500lxwhitelightenvironment,withthelightingperiodof12haday.axiallength,anteriorchamberdepthand lensthickneswasmeasuredbyultrasound,thenthevitreouslengthwascalculated.refractionwasmeasuredbyretino scopy.measurementswerecariedoutbeforeand2weeksafterinterventionandthediferencebetweenrightandlefteye wasevaluatedtoeliminatetheintergroupdisparityduringgrowing.hematoxylineosinstainingwasperformedtoobserve themicrostructureofeyesundermicroscope.results Therewasnosignificantdiferenceinthebaselinevalueofbio metricmeasurements(p>0.05).thediferenceinaxialandvitreouslengthbetweenrightandlefteyewassignificantly smaleringroupathanintheothertwogroups(p<0.05).thediferenceinvitreouslengthwassignificantlycorelated tothatinaxiallength(p<0.05).nosignificantdiferencewasfoundinrefraction,lensthicknesoranteriorchamber depthbetweenbilateraleyesamongthegroups(p>0.05).notoxicchangeinretina,scleraorchoroidwasfoundafter racanisodamineinjection.conclusions 10% racanisodaminemaypreventtheaxialelongationofform deprivationmyo piainguineapigs,mainlythroughtheinhibitionofvitreouslengthelongation.notoxicchangewasfoundafterintravitreal injectionof10% racanisodamine.(chinjophthalmolandotorhinolaryngol,2011,11: ) Keywords Racanisodamine; Form deprivation; Guineapigs 基金项目 : 上海市科技人才计划 (09PJ402400) 上海市科学技术委员会 创新行动计划 生物化学领域重点定向项目 (09DZ ) 作者单位 : 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科卫生部近视眼重点实验室上海 通讯作者 : 刘红 ( liuhongzef@263.net) M 受体阻滞剂对近视的作用研究已取得明确结论, 以阿托品和哌仑西平为代表的动物实验研究和临床研究都表明, 此类药物通过一种剂量依赖的作用方式有效地抑制近视眼轴增长 [1 2] 在一定浓度范围内, M 受体阻滞剂不会对眼部组织造成毒性, 但浓度过高可能会带来视网膜的毒性反应 [2] 由于强效作用可能

2 274 ChinJOphthalmolandOtorhinolaryngol,September2011,Vol11,No.5 带来的扩瞳 影响调节的不良反应, 目前还没有可广泛应用于临床治疗近视眼的 M 受体阻滞剂药物 山莨菪碱是我国从茄科植物唐古特莨菪中分离出来的生物碱, 其消旋异构物消旋山莨菪碱在眼科临床已有应用, 影响调节和扩瞳的作用较小 [3] 但消旋山莨菪碱作为一种非选择性 M 受体阻滞剂, 尚缺乏相关实验研究证实对近视眼的治疗作用 因此, 本文拟探讨玻璃体腔注射高浓度消旋山莨菪碱对动物近视的作用及其对眼部组织的毒性 材料与方法 1.1 材料实验对象为 2~3 周龄英国短毛花色豚鼠 30 只, 由复旦大学附属眼耳鼻喉科医院动物房提供, 体质量 150~180g, 雌雄各半 30 只豚鼠随机分为 3 组, 每组 10 只 A 组 : 形觉剥夺 +10% 消旋山莨菪碱 20μL 玻璃体腔注射 1 次 ;B 组 : 形觉剥夺 + 生理盐水 20μL 玻璃体腔注射 1 次 ;C 组 : 单纯形觉剥夺组 1.2 方法 形觉剥夺模型制备采用单眼形觉剥夺法, 即以自制半透膜粘于右眼眼周遮盖, 造成形觉剥夺 左眼作为自身对照眼 每天检查眼罩 3 次, 如有脱落及时贴上 饲养室内温度维持在 22~26, 相对湿度 55% ~65% 饲养笼具的照明强度为 500lx, 光照周期 12h( 上午 8:00 至下午 8:00), 保证充足食物供应 眼轴 屈光度检测造模干预前和 2 周后分别进行眼轴和屈光度检测 采用单盲法, 由同一位技术娴熟人员进行操作 A 超 (OpticonHiscanA 超,Opticon 公司, 意大利 ) 测量眼轴各组成部分长度 A 超频率为 11MHz, 本实验参照文献中超声在眼内不同介质的传播速度 : 前房和玻璃体为 1540m/s, 晶状体 1645m/s 测量前用 0.4% 盐酸奥布卡因滴眼液行角膜表面麻醉 测量时探头垂直于角膜平面, 每眼重复测量 5 次, 取平均值 记录数据包括前房深度 ( 包括角膜厚度和前房深度 ) 晶状体厚度 眼轴长度, 并用眼轴长度减去前房深度和晶状体厚度得出玻璃体腔长度 所有豚鼠在验光前均置于暗室中 1h 后再行屈光检查 带状光检影验光前双眼使用环戊通进行睫状肌麻痹, 每 5min 滴 1 次, 共 5 次, 滴完 1h 后在瞳孔充分散大的情况下于暗室中进行检影验光 [4], 每只眼重复测量 3 次取平均值 给药方法由上海信谊制药有限公司提供无菌灌装 10% 消旋山莨菪碱液 玻璃体腔注射均采用微量注射器, 在显微镜下进行 注射在第 1 天上午 9:00~11:00 进行,A 组注射 10% 消旋山莨菪碱 20μL,B 组注射生理盐水 20μL 注射前用 0.4% 盐酸奥布卡因滴眼液麻醉, 聚维酮碘消毒, 注射完毕后涂氧氟沙星眼膏以预防感染 1.3 组织学观察 2 周后实验结束时, 给药组随机取 2 只豚鼠进行组织学观察 摘除双侧眼球, 放入眼球固定液内固定 48h, 行石蜡包埋切片, 常规苏木素 伊红 (hematoxylineosin,he) 染色, 在光学显微镜下观察 1.4 统计学处理以右眼与左眼差异作为指标进行统计分析, 统计方法采用组间分析, 数据使用 SPSS 13.0 统计分析软件进行处理, 以 P<0.05 为差异有统计学意义 结果实验前左右眼眼轴长度 晶状体厚度 前房深度 玻璃体腔长度 屈光度 曲率差异均无统计学意义 (P>0.05), 详见表 1 实验 2 周后复测, 相比对侧眼, 遮盖眼有明显的近视, 眼轴和玻璃体腔显著增长, 差异有统计学意义 (P<0.05), 详见表 2 A 组左右眼眼轴和玻璃体腔长度差异明显小于 B 组及 C 组, 差异有统计学意义 (P<0.01), 详见表 2 及图 1~2; 玻璃体腔长度差异与眼轴长度差异具有显著相关 (r=0.904,p< 0.001) 左右眼屈光度 晶状体厚度 前房深度差异在各组间均无统计学意义 (P>0.05) 将给药组和对照组眼球在光学显微镜下比较, 视网膜 巩膜 脉络膜组织均未发生细胞肿胀 变形 融解 破坏, 细胞核萎缩 崩解或核周空泡, 以及胶原纤维水肿 断裂等异常形态学改变 ( 封三图 3) 表 1 实验前豚鼠眼球生物参数基线情况 ( x±s,n=30) 珋 眼别 眼轴长度 (mm) 玻璃体腔长度 (mm) 屈光度 (D) 角膜曲率半径 (mm) 前房深度 (mm) 晶状体厚度 (mm) 右眼 7.67± ± ± ± ± ±0.11 左眼 7.63± ± ± ± ± ±0.10

3 中国眼耳鼻喉科杂志 2011 年 9 月第 11 卷第 5 期 275 表 2 治疗 2 周后豚鼠眼球生物参数情况 ( 珋 x±s) 组别眼别眼轴长度 (mm) 玻璃体腔长度 (mm) 屈光度 (D) 角膜曲率半径 (mm) 前房深度 (mm) 晶状体厚度 (mm) A 组 (n=10) 右眼 7.92±0.11 a 3.50±0.15 a -0.78±1.21 a 3.08± ± ±0.14 左眼 7.75± ± ± ± ± ±0.14 右眼 左眼 0.17±0.13 b 0.12±0.19 b -4.66± ± ± ±0.15 B 组 (n=10) 右眼 8.06±0.29 a 3.52±0.11 a -2.67±1.03 a 3.34± ± ±0.16 左眼 7.64± ± ± ± ± ±0.17 右眼 左眼 0.42± ± ± ± ± ±0.11 C 组 (n=10) 右眼 8.15±0.14 a 3.52±0.17 a -1.07±1.77 a 3.05± ± ±0.16 左眼 7.74± ± ± ± ± ±0.21 右眼 左眼 0.41± ± ± ± ± ±0.16 注 : a 示各组右眼与左眼相比, 差异有统计学意义 (P<0.05); b 示 A 组与 B 组 C 组相比, 差异有统计学意义 (P<0.01) 图 1. 干预后 A 组左右眼眼轴长度差异小于 B 组和 C 组 (P< 0.01) 图 2. 干预后 A 组左右眼玻璃体腔长度差异小于 B 组和 C 组 (P<0.01) 讨论本实验对 2~3 周龄豚鼠进行单眼遮盖 2 周, 成功建造形觉剥夺模型, 剥夺眼比对照眼相对近视 5~6 D, 眼轴相对增长 0.41mm, 玻璃体腔相对延长 0.37 mm 按照豚鼠模型眼 1D 的近视对应于 23~32μm 的眼轴变化 [5], 与本文结果有出入 由于样本的差异, 模型眼可能与实际中的变化情况还是有差别的 魏欣 [6] 等报道 2 周形觉剥夺后屈光度差异可达 9D, 眼轴相对延长达 0.75mm 本研究发现, 形觉剥夺豚鼠玻璃体腔注射 10% 消旋山莨菪碱后, 左右眼眼轴和玻璃体腔长度的差异只有对照组的 50% 左右, 证实较高浓度的消旋山莨菪碱也可抑制动物近视模型的眼轴和玻璃体腔增长 眼轴变化和玻璃体腔长度变化有显著相关性, 前房和晶状体无显著变化, 说明眼轴的变化主要由玻璃体腔长度变化导致 本文采用左右眼眼轴和玻璃体腔长度的差异来评价, 而非直接评估右眼数据, 以避免不同实验组在饲养过程中由于自身原因造成的组间差异 动物实 [2,7 10] 验研究表明, 以阿托品和哌仑西平为代表的 M 受体阻滞剂对延缓近视进展有效, 表现为屈光度和眼 [11] 轴相对缓慢进展 我们前期的研究也表明,2.5% 消旋山莨菪碱对雏鸡形觉剥夺性近视眼轴有一定抑制作用 消旋山莨菪碱为人工合成品 的消旋异构物, 也是一种非选择性 M 受体阻滞剂, 该药物作用的浓度与阿托品的关系有待进一步研究 值得探讨的是, 本文实验组和对照组相比, 左右眼眼轴和玻璃体腔的长度变化差异有统计学意义, 但是屈光度的变化并无显著差异 屈光度和眼轴变化的不对称, 可能是由样本量的限制 主观的误差 角膜曲率的影响等原因所致的 总体而言, 眼轴和屈光度是评价近视的 2 个重要指标 相比之下, 眼轴更为稳定 客观, 应成为主要指标 当然, 该药物对豚鼠近视眼轴的作用也需更多证据支持, 并在此基础上进行可能机制的探讨 因为本实验所用消旋山莨菪碱浓度较高, 所以对眼部安全性进行了观察, 结果显示, 巩膜 视网膜 脉络

4 276 ChinJOphthalmolandOtorhinolaryngol,September2011,Vol11,No.5 膜等眼前 后节组织均未发现毒性反应 曾有报道 [2], 大剂量哌仑西平会造成眼部毒性反应, 表现为视网膜结构紊乱 本文中消旋山莨菪碱作用较温和, 但仍然需要更大样本的安全性观察 消旋山莨菪碱眼液已经运用于临床, 但目前仍缺乏严格对照的临床实验研究, 长期应用的效果 对不同程度近视的效果 有效的使用时机等问题还有待进一步探讨 在此基础上进行剂型和浓度 使用频次的改进, 以便更好地用于青少年近视眼的临床防治 [11] 参考文献 [1] ShihYF,ChenCH,ChouAC,etal.Efectsofdiferentconcentra tionsofatropineoncontrolingmyopiainmyopicchildren[j].j OculPharmacolTher,1999,15(1): [2] CotrialCL,McBrienNA,AnniesR,etal.Preventionofform dep rivationmyopiawithpirenzepine:astudyofdrugdeliveryanddistri bution[j].ophthalmicphysiolopt,1999,19(4): [3] ChenZ,LiT,YaoP,etal.Efectsof0.05% racanisodamineon pupilsizeandaccommodation[j].optomvissci,2010,87(12): [4] 蒋丽琴, 吕帆, 周翔天, 等. 环戊通松弛豚鼠睫状肌的调节作用 [J]. 中华眼视光学与视觉科学杂志,2004,6(4): [5] HowletMH,McFaddenSA.Emmetropizationandschematiceye modelsindevelopingpigmentedguineapigs[j].visionres,2007, 47(9): [6] 魏欣, 刘双珍. 视网膜早基因 c fos 在豚鼠实验性近视眼中的表达及其对 TH 调控作用的研究 [D]. 长沙 : 中南大学,2006. [7] MetlapalyS,McBrienNA.Theefectofpirenzepineonpositive and negative lens inducedrefractiveerorandoculargrowthinchicks [J].InvestOphthalmolVisSci,2010,51(11): [8] 戴淑真, 曾骏文, 王丽娅. 哌仑西平对鸡形觉剥夺性近视的疗效及作用机制 [J]. 中华眼科杂志,2006,42(1): [9] McBrienNA,MoghaddamHO,ReederAP.Atropinereducesexperi mentalmyopiaandeyeenlargementviaanonaccommodativemecha nism[j].investophthalmolvissci,1993,34(1): [10] BaramovaE,FoidartJM.Matrixmetaloproteinasefamily[J].Cel BiolInt,1995,19(3): [11] 杨颖, 李涛, 陈志, 等. 球结膜下注射不同浓度消旋山莨菪碱液对小鸡形觉剥夺近视眼轴的影响 [J]. 中国实验动物学报,2011,19 (4): ( 收稿日期 ) ( 本文编辑诸静英 ) 晶状体疾病的诊治及进展 与 眼表疾病的诊治及进展 学习班通知 学术动态 由复旦大学附属眼耳鼻喉科医院举办的 晶状体疾病的诊治及进展 ( 项目代码 ,Ⅰ 类学分 10 分 ) 与 眼表疾病的诊治及进展 ( 项目代码 ,Ⅰ 类学分 10 分 ) 学习班将于 2011 年 11 月 7~11 日在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院举行 学习期满并合格者将授予国家级继续教育 Ⅰ 类学分 晶状体疾病的诊治及进展 学习班 : 由国内著名专家卢奕教授 陆国生教授和罗怡教授等担任主讲和手术示范 授课内容包括白内障手术的最新进展与趋势 超声乳化机械和液体动力学 新型超乳技术和各种劈核技术的应用 IOL 度数的精细计算 角膜屈光手术后 IOL 的测量 个性化 IOL 的选择 白内障手术散光的控制 微创白内障手术 合并小瞳孔 硬核 葡萄膜炎等复杂白内障的超乳手术及示教 晶状体脱位的处理 虹膜缺损时白内障手术 先天性白内障诊断和治疗等 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院是卫生部和上海市眼科住院医师培训基地, 并拥有专门的白内障手术模拟训练室, 有 8 台 Infiniti 超乳设备 8 台 Leica 显微镜手术操作系统和 8 个工作台以及多媒体教学系统, 让学员体验真实的动物实验超声乳化感觉 眼表疾病的诊治及进展 学习班 : 由国内著名专家徐建江教授 张朝然教授和龚岚教授等担任主讲 授课内容包括 :1 各类常见眼表疾病, 诸如感染性角膜病变 免疫性角膜病变 干眼 角膜营养不良以及过敏性结膜炎等的传统治疗和诊疗进展 ;2 主要眼表手术及进展, 除对穿透性角膜移植 板层角膜移植等常规手术进行讲解, 还将重点对近年来国际上出现的深部前板层和后弹力层撕除的角膜内皮移植等新型手术方式进行演示和讲解 ;3 新型眼前节检查设备在眼表疾病诊治中的应用, 主要包括角膜共聚焦显微镜和眼前节 OCT 的应用及结果分析 ;4 疑难和典型病例分享, 通过实际病例分析, 进一步加深学员对眼表疾病知识的掌握 本次学习班学费 1000 元, 资料费 150 元 ( 含 1 本讲义和 1 张光盘 ) 联系人 : 陆萍, 电话 : , 具体相关要求及报名回执表可从复旦大学附属眼耳鼻喉科医院网站 ( 下载 竭诚欢迎广大眼科医师前来学习 交流 陆萍

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