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胤班
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1 中国中西医结合杂志年月第卷第期! " 中药复方提取物,"' 对 - 慢性感染中国恒河猴胸腺输出功能的影响朱惠斌陈颂陈滢宇卢芳国宁兴旺摘要目的探讨中药复方提取物湘 ',." / ',"' 对猴免疫缺陷病毒 - /./ 0 1 /. - 慢性感染中国恒河猴胸腺输出功能的影响方法采用 - & 病毒液对 # 只中国恒河猴进行感染个月随机分为对照组和治疗组每组 % 只治疗组给予,"' 灌胃治疗每日次对照组给予等体积生理盐水灌胃两组给药个月观察两组一般情况体重采用实时荧光定量方法检测两组血浆病毒载量采用流式细胞法检测 )% 比例及数量 )% 的初始亚群实时荧光定量法检测细胞受体 )"' 重排删除环常规, 染色后观察胸腺组织的病理情况分析胸腺组织病变情况与 )% 细胞数初始型 )% 细胞数及的关联性结果治疗后两组体重病毒载量 )% 比例绝对数比较差异无统计学意义 2 对照组改变倍数明显呈下降趋势治疗组总体呈明显的上升趋势两组间差异有统计学意义 3 两组动物的胸腺组织均可见结构破坏粉红色无结构样物质填充结缔组织增多细胞密度降低排列紊乱等病理改变未见明显区别含量与初始型 )% 去除极值后呈正相关 4 & 4 而初始型 )% 数量与 )% 数量呈正相关 4 & 4 结论检测含量来测定新胸腺迁出细胞数量可作为评价胸腺输出功能的检测方法且,"' 可增加胸腺的输出功能而初始型 )% 数量及胸腺组织病理情况之间存在一定相关关系在感染晚期尤为明显关键词猴免疫缺陷病毒细胞受体 )"' 重排删除环初始型 )% 中药提取物 /, ,"' / 5 * / 5 / / - /./0 1 /. / /1 5 0 /. (. :,;,. 6 /, " -/, " /. ; 9 /. /0 "" / / 0 5 / /5 9 5 '11 5 0, 8 5,./ / ;/ 5 1 / 0 / / %$ / /. /. ;/ 5 1 / 0 /. /. % 0 -,./ / ;/ 5 1 / 0 / / %# '<- ' *6= / ,." / ',"' / / 5 / / - /./0 1 /. - / / (.! /. (. 0 6 / / & 1 5 /5 /0 5 / 5 / / /5.8 /0 5 /5.8 % /.8! / > / /5.8 0 / 5 0 5,"' 6 5 / 0 1. /5 5 / 5 /5.8 0 / (.. 1 / / 6 5 / 0 1. /5! / /0 5 / / /> 6 0! / 5 1. /5 (. /5 5 5! )% 8 /5 /0./5 / ) / 1 5 5! 85 7 / / 5 1. /5 (. /5 5 5! 5. 基金项目国家自然科学基金资助项目 "#$%& 湖南省高等学校科学研究重点项目 "' 作者单位! 湖南中医药大学第一附属医院医学检验中心长沙 %$! 广州中医药大学热带医学研究所广州 %! 湖南中医药大学医学院长沙 %# 通讯作者朱惠斌 %#$## #$$& ((! )* $+

2 中国中西医结合杂志年月第卷第期! " /.5 /, 5 / /! 5 / 6 5 / / )%./5 / )./5 /0 / 0!. 5 / / / ) / /5 2! / 6. 0 / 5 /0 / / 5 / / / / 5 /0 / / /5.8 3! / / />./ ! / 0 // // 5 0 / 5 /0 /1. 0 / / / / / /! /5 / / )%./5 15 / & 4! " )%./ )%./5 4 & 4! /. / /5 /5 0 5 / 5 / > 1 / 5 / > / 5 5 / / / 5 /! < 0,"' 5 5 /5 / / 1 /5 / - / /1 5 0 />! 5 / / / 5 /5 / )%./5 / / 5 /1 5 / 5!? * )- - /./0 1 / / / )% / 中药复方提取物湘 ',." / ',"' 是湖南省艾滋病防治小组推荐在艾滋病定点医院免费使用的中药复方提取物原方由白蔻仁茵陈石菖蒲黄芩等味中药组成具有清热祛湿解毒的功效本课题组在前期研究中发现,"' 具有促进免疫重建的疗效且研究中未发现不良反应治疗, 感染患者有一定疗效笔者用猴免疫缺陷病毒 - /./0 1 /. - & 感染的中国恒河猴模型进行了初步的实验证实,"' 虽然不能降低血浆病毒载量但能明显提高 - 感染猴模型的细胞数改善淋巴结组织结构的病理退变在亚群分布上主要体现为初始型细胞大幅上升细胞也有上升的趋势 % 由于初始型 )% 主要来自于胸腺因此,"' 极可能提高了胸腺输出的功能因此本研究中进行了细胞受体 )"' 重排删除环 85 7 / 的分析以证实笔者假设材料和方法动物恒河猴 # 只全部为雄性体重 %$ A $ > A$ 岁外观健康经血清学检测 - 猴逆转录 ) 型病毒 - 猴疱疹病毒, 8 <. 和猴淋巴细胞型病毒 - 抗体阴性结核菌素阴性痢疾菌阴性动物由广东康达实验动物公司繁育并提供动物实验室动物合格证号为 -? 粤 & 并参照美国实验动物饲养和使用指南的相应规范进行管理本实验获湖南中医药大学伦理委员会审批 - & 毒株及,"' 的制备健康中国恒河猴外周血单核细胞 < 体外扩增代的 - & 病毒液经 7$% 细胞滴定为 ) +,"' 由白蔻仁茵陈石菖蒲黄芩连翘白花蛇舌草藿香虎杖滑石川木通薄荷薏苡仁组成由湖南中医药大学药学院制剂教研室制备薄荷提取挥发油用环糊精包裹其余药物与提取后的薄荷水煎醇沉制备干膏粉根据猴 + 人换算系数 # $ 估算临床等效剂量得出干膏粉与环糊精包含物的等效剂量分别为 $% +> 和 $% +> 配成水溶液混悬剂使得每毫升混悬液含干膏粉 # 环糊精包含物 %% 即 > 猴灌胃试剂与仪器单克隆鼠抗人 )& / ) ) $ / - % )#9 / # )%9 / )# / '# 均购自 <) / / 公司美国 "' 提取液 /5 ( / 法实时荧光定量检测试剂盒 "'55-5 8? 5 购自 1 / 公司美国非人灵长类 )% 细胞分离试剂盒 )% < 0? 5 购自 5 / < 5 公司美国 )"' 提取试剂盒 B' 8 )"' /? 5 - < " 法实时荧光定量检测试剂盒 B. / < /? 5 购自 B / 公司美国流式细胞仪为 9'- 6. <) 公司美国实时荧光定量仪为 $ '< 公司美国血细胞分析仪为 ' 0 11< > /. 5 公司美国病理切片的观察及拍摄使用 ) 荧光

3 中国中西医结合杂志年月第卷第期! " 生物显微镜 )9% ) 和 B / 图文分析系统 % 病毒感染分组及给药方法本研究所采用的 # 只恒河猴来自其他项目对照组病毒感染后均未接受任何药物治疗原项目已结束个月以上其中 % 为直肠感染病毒用量 % ) 其余均使用静脉注射含 ) 的病毒液感染本课题组成员对使用 - & 病毒经不同途径感染中国恒河猴的方法以及感染后的病毒免疫学各项参数的改变进行过详细的观察研究并已发表未发现不同的感染途径对于模型的各项参数有影响 - 感染个月后根据 )% 数量对 # 只恒河猴分层后随机分为对照组和治疗组每组 % 只治疗组给予,"' 灌胃治疗每日次对照组给予等体积生理盐水灌胃两组给药个月具体各组动物情况见表组别猴号表实验动物情况及分组表年龄岁性别感染后月 )% 数个 + 感染途径对照 $ 雄 % 静脉 & 雄 & 静脉 % 雄静脉 % $ 雄直肠治疗雄 & 静脉雄静脉雄 %# 静脉雄 $ 静脉一般情况体重观察及采样从动物进入实验室后每天均对饮食精神粪便行为状态等进行观察每周称次体重并采集 )' 抗凝全血分离血浆及外周血单个核细胞 //. < 冻存病毒载量检测按文献报道 # 采用实时荧光定量的 ( / 探针法检测血浆病毒载量使用 "': 按说明书操作从冻存的抗凝血浆中提取病毒 "' 定量的上游引物为 ' '' '' ''' ' ' '' 下游引物为 ' '' '' 探针序列为 9 '' ' ' '' ' ' ' ' ' ' ' 反应条件为 %# /& / % 个循环每个样品均提取和检测复孔每次反应均建立标准曲线标准品由法国巴黎第五大学卢葳教授惠赠稀释范围为 A 拷贝数 + 根据标准曲线计算出样品中所含 - 病毒的拷贝数取个复孔的平均值作为最终结果 $ 外周血 )% 及其初始记忆亚群分析每周使用流式细胞法常规检测细胞比例具体步骤为按照每管个细胞数的量加入含适量抗体的反应管中 % 避光反应 / 后按常规洗去多余抗体以 C 多聚甲醛固定及上机检测获得细胞的比例后结合淋巴细胞数计算 )% 细胞的绝对数而初始 + 记忆细胞亚群的划分则 & 参照 ">5 ' 等建立的方法使用 )#+)& 的组合进行划分流式染色的方法同上分析时先对群体进行设门再根据 )#+)& 的表达情况将细胞划分为 )& 初始型 " 中央记忆型和 )# 效应记忆型等个群体着重分析初始型 )% 亚群细胞的比例及绝对数 # 冻存 < 的检测 < 经 $ 水浴复苏后按照 )% 6 0 的说明书进行阳性分选纯化出 )% 随后提取细胞 )"' 参照参考文献的方法以 5 方法检测的引物探针序列为正向引物 ' ' ' ' 反向引物 ' ' ' ' ' 探针序列 9' ' ' ' 反应条件为 /& / 继以 & /% 个循环所有 )"' 样品同时以 - < " 法检测 ' ), 作为外参以确定细胞的相对数量引物序列为 '' ' ' ' ' ' ' ' ' 反应条件为 &% # $ 个循环并继以到 & 的融解曲线以确认无明显非特异性扩增综合和 ' ), 的 5 值 5 0 即每个反应孔内的荧光信号到达仪器自动设定的域值时所经历的循环数结果按照参考文献计算 )"' 相对变化倍数计算公式为改变的倍数 4 指 '< 两个样本 ' ), 值的差值其含义为在相等 )% 数量中治疗后 %# 周含量相对于治疗前标化为的改变倍数 & 胸腺组织病理检测治疗结束后次日即麻醉下经颈动脉放血处死动物取胸腺组织福尔马林固定石蜡包埋切片后, 染色进行观察和摄像 $ 由于胸腺已完全萎缩未能成功取材是精英控制型因此移入其他研究项目未处死

4 "!" $ '" 中国中西医结合杂志!"#$ 年 % 月第 %$ 卷第 % 期 &'()*+! +,-./!"#$! 0123 %$! 41!% #" # 相关性分析检测 # 为进一步分析胸腺组织病变情况与 &A7 细胞数' 初始型 &A7 细胞数及于 (#"g %&而 O:": 实验前即有轻微下降$ 图 #9 %( 在 )O<& 的关联!根据胸腺组织的保持程度从好到差进行了排序' 并对 )O<& 含量 $ 以 &))O<&"\9NAD 来代表! 实验期间! 对照组 O:"6 在实验开始后 %8 天死亡 $ 紫色%!而其他动物的体重多维持稳定或略下降( 而治疗此值越低则含量越高 % 与初始型 &A7 的数量之间的关联进行了 N;,-L1G 相关分析( 考虑到 :#7 在感染组有 % 只动物的体重呈上升趋势&仅 O:": $ 绿色% 的体 #$ 个月后 &A7 依然长期稳定于 P #""" 个C $M 的水平!属于长期不进展型&而 :#: 属于 - 精英控制型.!因此在进行初始型 &A7 与 )O<& 相关分析时进行了去除极值处理( ## #统计学分析#采用 ENEE!"! " 软件包进行分析( 计量资料以 U (L 表示!多个时点的比较采用重表现( 治疗前大多数动物的体重均较为稳定 $ 变化低重在使用 D49 " # 后依然呈下降趋势!但在 7 '$ '5 周 % 个时间点体重维持稳定$ 图 #` %(! # 两组病毒载量' &A7 比例及细胞数结果比较 #在实验期间!两组动物的病毒载量大多呈小范围内 $ Q ("! % 21Z#" 拷贝数C=M % 波动( 治疗组经 D49 " # 治疗 7 周时! 病毒载量略有升高! 但组间比较! 差异无复测量&&A7 的组间比较采用 +,GG " */>SG;J 分析( 统计学意义 $N P "! ": %! 之后回落 $ 图!9 % ( &A7 的比例$ 图!` % 和绝对数$ 图!& % 两组间比较!差异无统部分数据进行线性拟合以观察其变化趋势( N Q "! ": 为差异有统计学意义( 计学意义$N P "! ": % ( % #两组 )O<& 结果比较 # 对照组经线性拟合后结##果 )O<& 改变倍数明显呈下降趋势! 其中 % 只动物降至接近治疗前的 #C! ( 治疗组在经过 D49 " # 治疗后! # #两组一般情况及体重比较$ 图 # %#所有 5 只动物在实验期间!食欲'精神'运动均正常!无腹泻等异常 )O<& 改变倍数总体呈明显的上升趋势( 经重复测量分析显示两组间差异有统计学意义$N Q "! ": % ( ##注#9 为两组治疗前体重变化&` 为两组感染后体重变化图 #$D49 " # 治疗对 E(0 感染恒河猴体重的影响 ##注#9 为 D49 " # 治疗后血浆病毒载量&` 为 &A7 比例&& 为 &A7 细胞数图!$两组病毒载量'&A7 比例及细胞数结果比较

5 中国中西医结合杂志年月第卷第期! " 注彩色细线为每个动物改变倍数的线性拟合治疗前为黑色粗线为该组动物的整体线性拟合图,"' 治疗后外周血改变的相对倍数 % 两组胸腺的病理学结果比较图 % 在获得的份病理样品中 % 的组织结构保存最好 & 仅取到了部分被脂肪填充的退化组织其他则介于二者之间大多数动物的胸腺组织均可见结构破坏粉红色无结构样物质填充结缔组织增多细胞密度降低排列紊乱等病理改变治疗组与对照组之间未见明显区别两组 )% 初始型 )% 细胞数 ' ), 值的结果比较表从表中可以看出 )% 数量与初始型 )% 数量的排序完全一致经 / 相关分析 4 & 4 呈正相关与胸腺组织保存情况的排序也很接近但差异无统计学意义 2 在取得胸腺的个动物中 % 和的组织病理情况较差 )% 和初始型 )% 数量也最低含量也处于最低的水平例外的是 & 的含量较高但胸腺为脂肪组织填充可能与取材有关而的病毒载量一直维持在低于检测水平其初始型 )% 也较高其相同数量的细胞中含量也最高但因动物未处死无法进行胸腺病理情况的比较对含量与初始型 )% 的数量进行 / 相关分析无明显相关性 4 4 $ 而在去除极值 % 后显示与初始型 )% 数存在正相关关系 4 & 4 而含量与 )% 数量无明显相关关系 2 讨论中医药因其安全廉价有效在艾滋病的临床治疗中逐渐得到了广泛运用并取得了较好的效果但由于中医药大多作用缓慢温和作用机制很不清楚因此对其临床运用尚存在着不少质疑特别是目前评价艾滋病疗效的指标通常仅限于病毒载量和 )% 而绝大多数中医药即使临床反应良好却并非通过降低病毒载量起作用而 )% 细胞数改变缓慢个体差异大也难以得到统计学的支持证据因此阐释中医药治疗艾滋病的作用机制有赖于对, 感染的病理机制的研究深入以及检测手段的更新近年来的研究发现艾滋病患者的免疫功能是否能够重建取决于细胞群中胸腺新生亚群的数量 % 这一发现解释了为何部分, 感染者即使病毒载量被表各动物 )% 初始型 )% 的值病毒载量和病理情况的比较组别猴号 )% 个 + )% 排序初始型 )% 个 + 病理情况排序 ' ), 病毒载量 8 + 对照 % &# # # % 治疗 # % # ;) &# 3 $ 治疗 %% # $ 对照 & %$ % $ # 治疗 # ;) # 对照 $ # ;) & # 治疗 # $ & 对照 % & # % $# $ 注 ;) 未获得组织标本其中 $ 为胸腺完全退化未能取材为病毒载量一直低于检测水平纳入其他研究

6 "!" $ (" 中国中西医结合杂志!"#$ 年 % 月第 %$ 卷第 % 期 &'()*+! +,-./!"#$! 0123 %$! 41!% ##注#9 为治疗组 :":!` 为治疗组 :"$!& 为治疗组 :"8&A 为对照组 :#7!< 为对照组 :7#&# 的放大倍数为 : 倍!! 的放大倍数为!" 倍!% 的放大倍数为 7" 倍&短箭头$ "% 示粉红色无结构样物质填充&长箭头$ #% 示细胞密度降低'排列紊乱图 7$各实验猴胸腺组织的病理改变$$ D< 染色% 完全抑制!却无法成功实现免疫重建 )#:* ( 很多中医药被认为有帮助免疫重建的效果! 提示改善胸腺功能可能是中医药治疗艾滋病的重要疗效机制之一( 初始型 &A7 d ) 细胞是免疫能否维持- 自稳. 和免疫重建能否成功的关键( 在 D(0CE(0 感染后! 记忆性 &A7 d ) 细胞快速减少! 而随着疾病的进展! 初始型 )#$* &A7 d ) 细胞也会大幅减少! 从而导致对新病原体免疫应答的降低和 &A7 d ) 细胞- 池. 结构的失衡( 而

7 中国中西医结合杂志年月第卷第期! " 在高效抗逆转录病毒, 5 / ,'' 治疗后细胞的数量重建过程分为两个时相在治疗的前个月以记忆型细胞为主在治疗 A 个月后以初始细胞为主 $ 如果初始细胞的比例和绝对计数均显著增加提示着成功的免疫重建免疫功能是否能够重建取决于细胞群中胸腺新生亚群的数量由于初始型细胞的重要作用它一直是多种艾滋病辅助治疗药物研制过程中的靶点包括重组人生长激素的临床试验 # & $ 胸腺肽等但至今为止还未有成功上市的药物考虑到胸腺功能在,'' 治疗后初始型细胞重建的过程中的重要作用以及在前期研究中,"' 能增加 )% 特别是初始型 )% 的作用 % 本研究重点观测了,"' 治疗对 - 慢性感染猴胸腺输出功能的影响是胸腺内早期细胞的抗原识别受体基因重排时删除掉的环状 )"' 片段该片段稳定地存在于细胞内不会扩增因此可以较直接反映人体内新近从胸腺迁出细胞的含量及胸腺的输出功能本项研究发现,"' 治疗可使含量明显增加提示,"' 可能促进了胸腺输出此外研究结果提示,"' 能缓解 ')- 导致的体重快速降低甚至可增加其体重对动物的精神食欲活动等均无明显影响显示出良好的研究价值和应用前景通过对与 )% 初始型 )% 及胸腺病理的比较还发现在晚期感染的动物含量与初始型 )% 数量胸腺的组织结构有更好的相关性这可能是由于在感染早期初始型 )% 可能通过外周增殖来加以补充而在感染后期 )% 极低时外周 )% 池更依赖于胸腺输出这也提示使用含量作为指标来评价胸腺输出功能对于,+- 晚期感染者更为可靠此外由于,"' 以祛湿类中药为主这一研究结果还提示中医学理论中的祛湿可能与与胸腺初始型细胞的输出有着一定的联系循着这一思路可尝试能否将处方进一步优化以简化药物组成便于制剂另外由于 - 感染猴模型的个体差异较大且胸腺输出水平明显受不同病程的影响本研究还将有针对性地设定研究方案进一步深入探讨,"' 促进胸腺输出的疗效机制并对其长期疗效进行全面评判以期研发出针对 )% 自稳和免疫重建的辅助药物致谢邓文娣赖春辉周映云于靓提供的技术支持本研究的检测分析在广州中医药大学省工程建设项目广州中医药大学中医临床基础国家重点学科实验室完成特此致谢参考文献白静峰! 湘 ' 号湘 ' 号合并抗病毒治疗艾滋病发病期患者的临床观察 )! 长沙湖南中医药大学 $! 朱惠斌卢芳国黄顺玲等! 湘 ' 号号对免疫缺陷动物免疫保护作用的研究! 中华中医药学刊 &% ## #! 朱惠斌符林春陈颂等! 中药复方提取物,"' 治疗猴免疫缺陷病毒感染的实验研究! 中华中医药杂志 % $& $! % 朱惠斌陈颂符林春等! 中药复方提取物对猴免疫缺陷病毒感染恒河猴外周淋巴细胞亚群的影响! 中国医药 #! / -. 5! / 8 5 / / /. (. / /./0 1 /. //. / 8 5 ')- 0! - */ # $$! / '/. / / 1 - / " 5 /./! / /! / 5/ ) " 5 / ' /! $ 黄继汉黄晓晖陈志扬等! 药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算! 中国临床药理学与治疗学 % && & $! #... 5! /0 5 / 1 / 0! " 5 0 & $! & ">5 ' ) " 5!, 5 1 / / / / / / 5 / /./0 1 /. /1 5 /! /1 5 ) #& %! ". /.7 < ( - 5! $ 5. 5 / 5.5 / / 8 5 / / /./0 1 /. / (.!./ $ # %%%$ %%! ' /?,. > - 5! - 5 / 1 / 5 / 1 / / 1 - < / ( /> ! < < # & $#!

8 中国中西医结合杂志年月第卷第期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收稿 % 修回 $ 第 $ 次全国中西医结合传染病学术会议征文通知由中国中西医结合学会传染病专业委员会主办的第 $ 次全国中西医结合传染病学术会议将于年月在山东省青岛市召开现征文要求如下征文内容各种传染病的中西医结合诊疗和实验研究中医药及中西医结合防治传染病的经验总结中西医结合传染病的研究方法思路和发展战略 % 中医药和中西医结合诊疗传染病的进展和评价运用多种疗法如针灸气功等多种给药途径栓剂保留灌肠皮肤给药器官给药腧穴给药等治疗各种传染病的应用和配合研究各种传染病动物模型病理机制检测技术诊断标准的最新进展及动态 $ 中西医结合传染病学术定位及体系研讨稿件要求在字以内未经正式发表提供字以内的中文摘要注明作者姓名单位地址邮编及投稿方式广东省深圳市龙岗区布澜路 & 号邮编 # 深圳市第三人民医院聂广收欢迎通过电子邮件投稿请发至 7 = 6! 并注明会议征文截稿日期年月日

福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析

福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析福建农业学报林甦朱春华陈珍刘斌琼施少华江斌蔡国漳林羽黄瑜甦男硕士助理研究员主要从事病毒学和动物传染病学研究福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析林甦等鸡亚型白血病病毒荧光定量检测方法的建立福建农业学报讨论林甦等鸡亚型白血病病毒荧光定量检测方法的建立责任编辑

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