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1 第 3 卷 第 1 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.1 Vol 年 2 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Feb. 216 文 章 编 号 :13-915(216) 高 效 利 用 内 醚 糖 微 生 物 的 筛 选 鉴 定 及 预 处 理 对 菌 株 利 用 热 解 液 的 影 响 孙 欢 1, 李 东 晓 1, 陈 育 如 1, 赵 乙 萱 1, 刘 军 利 2, 卫 民 (1. 南 京 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院, 江 苏 省 微 生 物 与 基 因 组 学 重 点 实 验 室, 江 苏 省 微 生 物 资 源 产 业 化 工 程 技 术 研 究 中 心, 江 苏 省 生 物 多 样 性 与 生 物 技 术 重 点 实 验 室, 江 苏 南 京 2123; 2. 中 国 林 业 科 学 院 南 京 林 产 化 学 工 业 研 究 所, 江 苏 南 京 2142) 2 摘 要 : 以 纤 维 素 热 解 产 物 内 醚 糖 为 碳 源 筛 选 到 4 株 高 效 利 用 内 醚 糖 的 微 生 物, 经 ITS 测 序 和 菌 落 形 态 特 征 鉴 定,4 株 菌 分 别 为 嗜 松 青 霉 (Penicillium pinophilum) 桔 青 霉 (Penicillium citrinum) 冠 突 散 囊 菌 (Eurotium cristatum) 和 红 假 单 胞 菌 (Rhodopseudomonas sp) 对 各 菌 株 利 用 内 醚 糖 的 研 究 结 果 表 明, 嗜 松 青 霉 和 桔 青 霉 5 d 内 对 2% 内 醚 糖 的 利 用 率 为 1%, 冠 突 散 囊 菌 7 d 内 对 2% 内 醚 糖 的 利 用 率 为 1%, 红 假 单 胞 菌 在 1 d 对 2% 内 醚 糖 的 利 用 率 为 52% 将 4 株 菌 作 用 于 热 解 液 发 现, 红 假 单 胞 菌 能 在 未 经 预 处 理 的 热 解 液 中 生 长,14 d 后 对 热 解 液 中 内 醚 糖 的 利 用 率 为 69%, 另 外 3 株 菌 能 在 经 5% 活 性 炭 +Ca(OH) 2 预 处 理 后 的 热 解 液 中 生 长 对 预 处 理 后 热 解 液 成 分 的 分 析 表 明, 预 处 理 对 热 解 液 成 分 有 显 著 影 响, 其 中 六 甲 基 环 三 氧 硅 烷 1,2- 环 戊 二 酮 5- 甲 基 糠 醛 3- 甲 基 -1,2- 环 戊 二 酮 和 羟 甲 基 呋 喃 酮 的 去 除 率 达 1%, 内 醚 糖 的 损 失 为 27.1% 关 键 词 : 内 醚 糖 ; 热 解 液 ; 嗜 松 青 霉 ; 桔 青 霉 ; 红 假 单 胞 菌 中 图 分 类 号 :Q935 文 献 标 识 码 : DOI:1.3969/j.issn Isolation and Identification of Efficient Levoglucosan-ssimilating Microorganisms and Effects of Pretreatment on their Utilization of Pyrolysis Liquids SUN Huan 1, LI Dong-xiao 1, CHEN Yu-ru 1, ZHO Yi-xuan 1, LIU Jun-li 2, WEI Min 2 (1. College of Life Science, Jiangsu Key Lab for iodiversity and iotechnology, Nanjing Engineering Research Center for Industrialization of Microbial Resources, Jiangsu Key Lab for Microbes and Functional Genomics, Nanjing Normal University, Nanjing 2123, China; 2. Institute of Chemical Industry of Forest Products, CF, Nanjing 2142, China) bstract: Four efficient levoglucosan-assimiliating microorganisms were screened using levoglucosan from cellulosis pyrolysis as carbon source, and they were identified as Penicillium pinophilum, Penicillium citrinum, Eurotium cristatum and Rhodopseudomonas sp based on morphology and ITS sequence analysis. The results show that the 2%-levoglucosan utilization efficiency of P. pinophilum, P. citrinum (4 d) and E. cristatum (7 d) are 1%, and that of Rhodopseudomonas sp is 52% (1 d). Rhodopseudomonas sp can be cultured in untreated pyrolysis liquids with utilization efficiency of 69% (14 d), while Penicillium pinophilum, Penicillium citrinum and Eurotium cristatum can be cultured in pretreated pyrolysis liquids (treated by 5% activated carbon+ca(oh) 2 ). The pretreated pyrolysis liquids were analyzed and the results show that pretreatment has obvious influence on the pyrolysis liquid. Hexamethylcyclotrisiloxane,1,2-Cyclopentanedione,5-methylfurfural, 3-methyl-1,2-Cyclopentanedione and hydroxymethylfuraneol are fully removed, and the loss rate of levoglucosan is 27.1%. Key words: levoglucosan; pyrolysis liquid; Penicillium pinophilum; Penicillium citrinum; Rhodopseudomonas sp. 收 稿 日 期 : ; 修 订 日 期 : 基 金 项 目 : 江 苏 省 高 校 自 然 科 学 研 究 重 大 项 目 (15KJ212); 江 苏 省 六 大 人 才 高 峰 人 才 培 养 项 目 (NY ) 作 者 简 介 : 孙 欢 (1987-), 女, 山 东 文 登 人, 南 京 师 范 大 学 硕 士 生 通 讯 联 系 人 : 陈 育 如, chenyuru@njnu.edu.cn
2 128 高 校 化 学 工 程 学 报 216 年 2 月 1 前 言 植 物 纤 维 素 原 料 是 地 球 上 最 丰 富 的 可 再 生 资 源, 其 生 成 与 降 解 构 成 了 生 物 圈 中 最 大 的 物 质 循 环 [1~3] 有 效 利 用 纤 维 素 原 料 是 解 决 目 前 人 类 面 临 的 资 源 能 源 环 境 等 重 大 问 题 的 途 径 之 一 [4,5] 纤 维 素 原 料 热 解 时 生 成 的 热 解 液 含 内 醚 糖 (Levoglucosan,1,6- 脱 水 -β-d- 吡 喃 葡 萄 糖, 简 称 LG) 芳 烃 衍 生 物 糠 醛 衍 生 物 等 [6,7] 随 着 热 解 工 艺 的 发 展, 热 解 液 中 内 醚 糖 的 量 大 幅 度 提 高 [8~1], 利 用 热 解 产 物 作 为 微 生 物 发 酵 碳 源 的 研 究 越 来 越 为 人 们 所 重 视 [11~13] 与 葡 萄 糖 等 常 规 碳 源 相 比, 自 然 界 中 能 利 用 内 醚 糖 的 菌 株 少 且 存 在 利 用 率 低 的 问 题 [14~16] 余 志 晟 对 89 种 菌 株 进 行 了 同 化 内 醚 糖 的 实 验, 发 现 仅 有 7 株 微 生 物 具 有 较 弱 的 内 醚 糖 同 化 能 力, 从 土 壤 中 筛 选 的 斯 达 油 脂 酵 母 对 内 醚 糖 的 利 用 率 低 (3 d,64%) [17], 因 此 筛 选 能 高 效 利 用 内 醚 糖 的 微 生 物 就 显 得 尤 为 重 要 [15] 本 工 作 对 相 关 微 生 物 进 行 了 筛 选 及 对 内 醚 糖 利 用 效 率 进 行 了 研 究 2 材 料 与 方 法 2.1 材 料 菌 株 真 菌 筛 选 自 南 京 仙 林 大 学 城 的 土 壤, 红 假 单 孢 菌 XJ 为 本 实 验 室 保 藏 菌 株 培 养 基 筛 选 培 养 基 :2% 内 醚 糖,1% 蛋 白 胨,.1%KH 2 PO 4,.4%MgSO 4,2% 琼 脂,pH5.. 热 解 液 培 养 基 :4% 纤 维 素 热 解 液 ( 内 醚 糖 含 量 约 为 1.8%), 1% 蛋 白 胨,.1%KH 2 PO 4,.4%MgSO 4,pH 试 剂 内 醚 糖 : 河 南 高 的 医 药 科 技 有 限 公 司 ( 纯 度 98%) 纤 维 素 热 解 液 : 本 课 题 组 成 员 制 备, 具 体 是 将 秸 秆 竹 子 木 材 等 农 业 废 料 烘 干 并 粉 碎, 利 用 管 式 炉 热 解 反 应 器 ( 主 要 由 管 式 炉 热 解 器 电 加 热 器 温 控 仪 冷 凝 和 真 空 系 统 组 成 ) 在 高 温 条 件 下 进 行 热 解, 收 集 冷 凝 得 到 的 组 分 即 为 热 解 液 仪 器 与 设 备 GNP-98 隔 水 式 恒 温 培 养 箱 ( 上 海 精 宏 实 验 设 备 公 司 );ES-315 高 压 蒸 汽 灭 菌 锅 (TOMY,Japan); F24 电 子 分 析 天 平 ( 上 海 良 平 仪 器 仪 表 公 司 ); 高 效 液 相 色 谱 仪 (gilent 11);HD-93 型 组 合 式 全 温 摇 床 ( 江 苏 太 仓 市 博 莱 特 实 验 仪 器 厂 );LC-MS(gilent Technologies 646 Triple Quad LC/MS); 高 速 离 心 机 Sigma 3k3(Sigma 公 司 ); 高 效 气 相 色 谱 仪 (gilent 789) 2.2 方 法 内 醚 糖 同 化 菌 株 的 筛 选 取 土 壤 1 g 加 入 盛 有 99 ml 无 菌 水 的 锥 形 瓶 中, 充 分 震 荡 后 放 置 将 清 液 稀 释 为 和 1 5 的 稀 释 度, 分 别 涂 布 于 筛 选 培 养 基 上, 经 3 培 养 5 d 后, 挑 取 菌 落 用 划 线 分 离 纯 化 纯 化 后 的 菌 株 接 种 于 液 体 筛 选 培 养 基,3 18 r min 1 培 养, 定 时 取 样, 经.45 m 微 孔 滤 膜 过 滤, 分 析 其 同 化 内 醚 糖 的 能 力 内 醚 糖 同 化 菌 株 的 鉴 定 形 态 鉴 定 将 菌 株 接 至 不 同 碳 源 的 培 养 基 中 培 养, 观 察 菌 落 形 态 及 生 理 生 化 等 特 征 分 子 生 物 学 鉴 定 PCR 扩 增 引 物 为 ITS1:TCCGTGGTGCCTGCGG;ITS4:TCCTCCGCTT TTGTTGC PCR 反 应 体 系 (2 μl): 1 Ex Taq buffer 2. μl; MgCl 2 (25 mmol L 1 )1.6 μl;dntp(2.5 mmol L 1 )1.6 μl; 引 物 各 1 μl;template.5 μl;5u Ex Taq.2 μl;ddh 2 O12.1 μl PCR 反 应 条 件 :95 预 变 性 5 min,95 变 性 3 s,55 退 火 3 s,72 延 伸 1 min3 s, 共 24 个 循 环,72 延 伸 1 min 所 得 测 序 结 果 用 blast
3 第 3 卷 第 1 期 孙 欢 等 : 高 效 利 用 内 醚 糖 微 生 物 的 筛 选 鉴 定 及 预 处 理 对 菌 株 利 用 热 解 液 的 影 响 129 与 Genank 中 的 核 酸 数 据 进 行 比 对 分 析, 用 MEG 4. 软 件 构 建 进 化 树 热 解 液 的 预 处 理 热 解 液 用 5% 活 性 炭 +Ca(OH) 2 常 温 预 处 理 1 h 后, 过 滤 除 去 活 性 炭 备 用 热 解 液 成 分 分 析 将 处 理 前 后 的 热 解 液 用 乙 酸 乙 酯 萃 取 3 次 (1:3 体 积 比 ), 合 并 乙 酸 乙 酯 用 无 水 硫 酸 钠 脱 水 后 过 滤 进 行 气 相 色 谱 (GC) 分 析 HPLC 及 GC 分 析 HPLC:minex HPX-87H Lon Exclusion column 分 析 柱, 流 动 相 为.5 mmol L 1 的 硫 酸 溶 液, 流 速.5 ml min 1, 柱 温 35 GC:gilent D-5MS(3 m.25 mm.25 m) 分 析 柱, 载 气 为 高 纯 氮, 升 温 程 序 : 初 始 温 度 4 维 持 2 min,3 min 1 升 至 12,5 min 1 升 至 25, 维 持 2 min 流 量 1.6 ml min 1, 分 流 比 1:1, 检 测 器 温 度 内 醚 糖 利 用 率 配 制 mg ml 1 的 内 醚 糖 溶 液, 梯 度 稀 释 为 mg ml 1, 经.45 μm 微 孔 滤 膜,HPLC 分 析, 得 内 醚 糖 浓 度 (x) 与 峰 面 积 (y) 对 应 的 标 准 曲 线 y= x+7.17(r 2 =.99958), 内 醚 糖 利 用 率 (%)=( 原 液 中 内 醚 糖 量 转 化 液 体 中 内 醚 糖 量 ) 1%/ 原 液 中 内 醚 糖 量 3 结 果 与 分 析 3.1 菌 株 内 醚 糖 同 化 能 力 将 筛 选 到 的 具 有 同 化 内 醚 糖 能 力 的 3 株 菌 分 别 为 命 名 为 ZS 2 GT FX 实 验 室 原 保 藏 的 红 假 单 胞 菌 XJ 对 内 醚 糖 的 利 用 率 为 52%(1 d),zs 2 和 FX 对 内 醚 糖 利 用 率 为 1%(4 d) GT 菌 对 内 醚 糖 的 利 用 率 为 1%(7 d),zs 2 GT FX 菌 对 内 醚 糖 的 利 用 率 见 图 1 所 示 与 文 献 中 斯 达 油 脂 酵 母 对 内 醚 糖 的 利 用 率 相 比 [15], 本 工 作 筛 选 到 的 ZS 和 FX 菌 转 化 效 率 更 高 图 1 FX/ZS2/GT 菌 株 对 内 醚 糖 的 转 化 利 用 Fig.1 Utilization rates of levoglucosan by 3.2 菌 株 鉴 定 FX/ZS2/GT strains ZS 2 菌 株 鉴 定 菌 液 呈 黄 绿 色, 在 内 醚 糖 培 养 基 平 板 上 2 d 可 长 出 菌 落,3 d 后 菌 落 中 间 生 成 黄 绿 色 孢 子, 菌 丝 发 达 多 分 枝, 有 膈, 孢 子 球 形 ( 图 2) Utilization rate / % % (FX) % (ZS2) % (GT) t / d :ZS2 spores Fig.2 图 2 ZS 菌 的 孢 子 与 菌 丝 形 态 Spore and hypha morphology of the ZS2 strain(4 1) :ZS2 hypha 经 分 析,ZS2 的 ITS 全 长 为 192 bp, 用 last 与 Gene ank 中 的 数 据 构 建 进 化 树 比 对 发 现, 该 微 生 物 与 嗜 松 青 霉 (Penicillium pinophilum) 吻 合, 结 合 菌 体 形 态 生 理 生 化 分 析 和 分 子 生 物 学 方 法, 鉴 定 该 菌
4 13 高 校 化 学 工 程 学 报 216 年 2 月 为 嗜 松 青 霉 (Penicillium pinophilum) FX 菌 株 鉴 定 在 PD 培 养 基 上 的 菌 落 呈 灰 绿 色 且 有 放 射 状 沟 纹, 菌 丝 无 膈, 有 帚 状 分 生 孢 子 头, 孢 子 呈 灰 绿 色 孢 子 和 菌 丝 的 形 态 见 图 3 所 示 据 分 析,FX 的 ITS 全 长 为 :FX spores :FX hypha 14 bp, 用 last 与 Gene ank 中 的 数 据 构 建 进 化 树 和 比 对 分 Fig.3 图 3 FX 菌 的 孢 子 与 菌 丝 形 态 Spore and hypha morphology of the FX strain(4 1) 析, 该 菌 与 桔 青 霉 (Penicillium citrinum) 最 为 吻 合, 结 合 形 态 生 理 生 化 和 分 子 生 物 学 方 法, 鉴 定 该 菌 为 桔 青 霉 (Penicillium citrinum) GT 菌 的 鉴 定 GT 菌 在 固 体 PD 培 养 基 上 生 长 初 期 呈 金 黄 色, 生 长 后 期 呈 褐 色, 菌 丝 发 达, 分 生 孢 子 头 :GT spores :GT hypha 呈 放 射 状, 孢 子 和 菌 丝 见 图 4 所 示 图 4 GT 菌 的 孢 子 与 菌 丝 形 态 Fig.4 Spore and hypha morphology of the GT strain(4 1) 据 分 析,GT 的 ITS 全 长 为 1534 bp, 利 用 last 程 序 将 序 列 与 Geneank 数 据 库 中 的 数 据 进 行 比 对 发 现, 与 冠 突 散 囊 菌 (Eurotium cristatum) 的 序 列 最 为 吻 合, 结 合 菌 落 与 生 理 生 化 特 征 及 分 子 生 物 学 分 析, 鉴 定 该 菌 为 冠 突 散 囊 菌 (Eurotium cristatum) 3.3 对 处 理 热 解 液 的 利 用 将 上 述 4 株 菌 接 入 未 经 处 理 的 热 解 液 中, 发 现 只 有 红 假 单 胞 菌 能 生 长 分 析 结 果 表 明, 经 14 d 的 培 养 后, 红 假 单 孢 菌 对 热 解 液 中 内 醚 糖 (15.35 min) 利 用 率 为 69%, 自 然 界 中 能 利 用 内 醚 糖 的 微 生 物 不 多 [17], 红 假 单 胞 菌 能 利 用 未 经 预 处 理 热 解 液 中 的 内 醚 糖 的 结 果 表 明 对 该 菌 株 进 行 综 合 利 用 有 着 非 常 积 极 的 意 义 mu 12 %(penicillium citrinum) 2 1 %(rhodopseudomonas sp) 16 Levoglucosan 8 %(penicillum pinophilum) %(eurotium cristatum) Time / min Utilization rate / % t / d Fig.5 图 5 热 解 液 的 HPLC 分 析 HPLC spectrum of the pyrolysis liquid 图 6 不 同 菌 株 对 4% 脱 毒 热 解 液 中 内 醚 糖 的 利 用 Fig.6 Utilization rates of levoglucosan by different strains in 4% pretreated pyrolysis liquid 3.4 对 预 处 理 热 解 液 的 利 用 对 热 解 液 用 5% 活 性 炭 和 Ca(OH) 2 经 1 h 的 常 温 吸 附 后, 过 滤 配 成 含 4% 的 培 养 液 分 别 接 入 4 菌 株
5 第 3 卷 第 1 期 孙 欢 等 : 高 效 利 用 内 醚 糖 微 生 物 的 筛 选 鉴 定 及 预 处 理 对 菌 株 利 用 热 解 液 的 影 响 131 培 养, 定 时 取 样 分 析 对 内 醚 糖 的 利 用 率, 结 果 见 图 6 所 示 由 图 6 可 见, 所 用 各 菌 可 在 预 处 理 后 的 热 解 液 培 养 基 中 生 长 (4 d) 桔 青 霉 红 假 单 胞 菌 嗜 松 青 霉 和 冠 突 散 囊 菌 对 内 醚 糖 的 利 用 率 分 别 为 1%,78%,72% 和 28% 3.5 预 处 理 对 热 解 液 成 分 的 影 响 对 预 处 理 前 后 的 热 解 液 进 行 气 相 色 谱 分 析, 结 果 见 图 7 所 示 对 热 解 液 成 分 的 分 析 结 果 表 明, 其 醛 酮 类 物 质 以 糠 醛 ( 抑 菌 能 力 强 ) 含 量 最 高 由 图 7 和 表 1 可 见, 热 解 液 经 处 理 后, 六 甲 基 环 三 氧 硅 烷 1,2- 环 戊 二 酮 5- 甲 基 糠 醛 3- 甲 基 -1,2- p Time / min () GC analysis of the pyrolysis liquid before pretreatment p 6 5 表 1 预 处 理 后 热 解 液 中 的 成 分 变 化 Table 1 Change of the components in pretreated pyrolysis liquid Retention time / min Compounds Removal rate 4.91 Hexamethylcyclotrisiloxane 1% Furancarboxaldehyde 77.1% cetylfuran 83.2% ,2-Cyclopentanedione 1% methylfurfural 1% methyl-1,2-Cyclopentanedione 1% Hydroxymethylfuraneol 1% Levoglucosenone 77.3% ,4,3,6-dianhydro-α-glucopyranose 78.8% 图 7 预 处 理 前 后 热 解 液 的 气 相 色 谱 GC analysis of the pyrolysis liquid before pretreatment() and after pretreatment() 环 戊 二 酮 和 羟 甲 基 呋 喃 酮 的 脱 除 率 达 1%, 糠 醛 脱 除 率 77.1%,2- 呋 喃 甲 醛 2- 乙 酰 呋 喃 左 旋 葡 糖 酮 烯 等 物 质 的 量 也 分 别 有 不 同 程 度 的 降 低 (77.1% 83.2% 和 77.3%) Fig Time / min () GC analysis of the pyrolysis liquid after pretreatment 4 结 论 (1) 本 工 作 筛 选 的 嗜 松 青 霉 (Penicillium pinophilum) 桔 青 霉 (Penicillium citrinum) 冠 突 散 囊 菌 (Eurotium cristatum) 和 红 假 单 胞 菌 (Rhodopseudomonas sp.) 都 能 高 效 同 化 内 醚 糖, 其 对 内 醚 糖 和 热 解 液 的 利 用 是 首 次 发 现 (2) 与 文 献 报 道 的 微 生 物 利 用 内 醚 糖 的 效 率 相 比, 本 工 作 筛 选 的 菌 株 对 内 醚 糖 的 利 用 率 很 高, 嗜 松 青 霉 桔 青 霉 在 4 d 对 内 醚 糖 的 利 用 率 达 1%, 冠 突 散 囊 菌 在 7 d 对 内 醚 糖 的 利 用 率 也 达 1% (3) 红 假 单 胞 菌 可 在 未 经 脱 毒 处 理 的 热 解 液 中 生 长, 在 14 d 对 内 醚 糖 的 利 用 率 达 69% (4) 对 热 解 液 的 预 处 理 可 使 三 株 真 菌 也 能 利 用 热 解 液 中 的 内 醚 糖, 其 中 红 假 单 孢 菌 的 利 用 效 率 大 为 提 高 ( 从 14 d 的 69% 提 高 至 4 d 的 78%) (5) 对 可 利 用 内 醚 糖 和 热 解 液 菌 株 的 筛 选 对 实 现 内 醚 糖 与 热 解 液 的 高 效 利 用 提 供 了 更 多 可 选 择 的 菌 株 与 方 法 参 考 文 献 : [1] ZHNG Hong-xun ( 张 洪 勋 ), DI Jiang-hong ( 代 江 红 ), WNG Xiao-yan ( 王 晓 燕 ), et al. method of promotion the growth of pichia stipitis and production ethanol by levoglucosan ( 一 种 促 进 树 干 毕 赤 酵 母 的 生 长 和 发 酵 产 乙 醇 的 方 法 ): CN, [P] [2] XIE Qing-ruo ( 谢 清 若 ), TONG Zhang-fa ( 童 张 法 ), WEI Teng-you ( 韦 藤 幼 ), et al. Optimization of bamboo pyrolysis process to
6 132 高 校 化 学 工 程 学 报 216 年 2 月 prepare bio-oil by response surface methodology ( 响 应 曲 面 法 优 化 竹 材 热 裂 解 制 备 生 物 油 的 工 艺 研 究 ) [J]. J Chem Eng of Chinese Univ ( 高 校 化 学 工 程 学 报 ), 212, 26(3): [3] FN Yong-sheng ( 樊 永 胜 ), CI Yi-xi ( 蔡 忆 昔 ), LI Xiao-hua ( 李 小 华 ), et al. io-oil analysis and optimization of bio-oil yield from vacuum pyrolysis of rape straw using response surface methodology ( 响 应 面 法 优 化 油 菜 秸 秆 真 空 热 解 液 化 工 艺 及 生 物 油 分 析 ) [J]. J Chem Eng of Chinese Univ ( 高 校 化 学 工 程 学 报 ), 215, 29(3): [4] Giannoni M, Martellini T, Del ubba M, et al. The use of levoglucosan for tracing biomass burning in PM 2.5 samples in Tuscany(Italy) [J]. Environmental Pollution, 212, 167: [5] CHNG Dong-dong ( 常 冬 冬 ), YU Zhi-sheng ( 余 志 晟 ), ZHNG Hong-xun ( 张 洪 勋 ). Progress on pyrolysis of cellulose and its conversion to ethanol ( 纤 维 素 热 解 液 及 其 产 物 转 化 乙 醇 的 研 究 进 展 ) [J]. Chinese gricultural Science ulletin ( 中 国 农 学 通 报 ), 212, 28(26): [6] REN Pu-xian ( 任 普 鲜 ), JING Jian-chun ( 蒋 剑 春 ), YNG Xiu-shan ( 杨 秀 山 ), et al. Research progress on production of ethanol as fuel from fast pyrolysis products of lignocellulose ( 木 质 纤 维 素 快 速 热 解 产 物 生 产 燃 料 乙 醇 研 究 进 展 ) [J]. iomass Chemical Engineering ( 生 物 质 化 学 工 程 ), 29, 43(3): [7] LU Qiang ( 陆 强 ), ZHU Xi-feng ( 朱 锡 峰 ). Production of levoglucosenone from pyrolysis of cellulose catalyzed by solid superacids ( 利 用 固 体 超 强 酸 催 化 热 解 纤 维 素 制 备 左 旋 葡 萄 糖 酮 ) [J]. Journal of Fuel Chemistry and Technology ( 燃 料 化 学 学 报 ), 211, 39(6): [8] DSTG Radlein, Grinshpun, J Piskorz, et al. On the presence of anhydro-oligosaccharides in the sirups from the fast pyrolysis of cellulose [J]. Journal of nalytical and pplied Pyrolysis, 1987, 12(1): [9] Scott D S, Piskorz J, Radlein D. Yield of chemicals from biomass-based fast pyrolysis oils [J]. Energy iomass Wastes, 1993, 16: [1] Lede J, Panagopoulos J, Li H Z, et al. Fast pyrolysis of wood: direct measurement and study of ablation rate [J]. Fuel, 1985, 64(11): [11] ridgwater V, oocock D G. Developments in thermochemical biomass conversion [M]. London: lackie cademic and Professional [12] ennett N M, Helle S S, Duff S J. Extraction and hydrolysis of levoglucosan from pyrolysis oil [J]. ioresource Technology, 29, 1(23): [13] Mullen C, oateng, Goldberg N, et al. io-oil and bio-char production from corn cobs and stover by fast pyrolysis [J]. iomass and ioenergy, 21, 34(1): [14] Nakagawa M, Sakai Y, Yasui T. Itaconic acid fermentation of levoglucosan [J]. Journal of Fermentation Technology, 1984, 62(2): [15] Prosen E M, Radlein D, Piskorz J, et al. Microbial utilization of levoglucosan in wood pyrolysate as a carbon and energy source [J]. iotechnology ioengineering, 1993, 42(4): [16] Zhuang X L, Zhang H X, Yang J Z, et al. Preparation of Levoglucosan by pyrolysis of cellulose and its citric acid fermentation [J]. ioresource Technology, 21, 79(1): [17] YU Zhi-sheng ( 余 志 晟 ), NING o-ying ( 宁 洎 英 ), ZHNG Ling ( 张 玲 ), et al. Microbial investigation on assimilation and ethanol fermentation of levoglucosan from cellulosic pyrolysis products ( 纤 维 素 热 解 产 物 内 醚 糖 的 微 生 物 同 化 与 乙 醇 发 酵 测 试 ) [J]. Chinese gricultural Science ulletin( 中 国 农 学 通 报 ), 211, 27(6): [19] WU Meng-yao ( 吴 梦 瑶 ), HU Xiang ( 胡 翔 ). Isolation and identification of a strain of 1-hexyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphatedegrading bacterium ( 一 株 降 解 1- 己 基 -3- 甲 基 咪 唑 六 氟 磷 酸 盐 微 生 物 的 筛 选 与 鉴 定 ) [J]. J Chem Eng of Chinese Univ ( 高 校 化 学 工 程 学 报 ), 214, 28(6):
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