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1 434 中 华 预 防 医 学 杂 志 2016 年 5 月 第 50 卷 第 5 期 Chin J Prev Med,May 2016, Vol. 50, No. 5 囊 型 包 虫 病 患 者 包 囊 钙 化 相 关 基 因 研 究 尹 媛 婕 张 强 杨 银 学 杨 书 鲲 王 海 丰 施 锦 绣 王 志 敏 杨 延 辉 林 源 李 昭 宇 杨 玉 荣 摘 要 目 的 探 寻 与 囊 型 包 虫 病 患 者 包 囊 钙 化 相 关 的 基 因, 从 分 子 生 物 学 水 平 提 供 判 断 患 者 预 后 情 况 的 依 据 方 法 于 2013 年 6 月 至 2014 年 12 月, 收 集 前 往 宁 夏 3 家 医 院 就 诊 的 32 例 囊 型 包 虫 病 患 者 (10 例 进 行 mrna 基 因 芯 片 分 析,22 例 进 行 Real-time PCR 分 析 ) 和 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 的 肝 组 织 采 用 基 因 表 达 差 异 显 著 性 分 析 方 法 对 10 例 囊 型 包 虫 病 患 者 ( 钙 化 组 与 非 钙 化 组 各 5 例 ) 的 基 因 表 达 差 异 进 行 分 析 和 筛 选, 用 倍 数 变 化 衡 量 同 一 基 因 在 两 组 之 间 表 达 量 的 变 化 情 况 采 用 Real-time PCR 在 22 例 囊 型 包 虫 病 患 者 ( 钙 化 组 与 非 钙 化 组 各 11 例 ) 之 间 进 行 验 证, 以 GAPDH 作 为 内 参 基 因, 并 用 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 进 行 标 化, 计 算 钙 化 组 和 非 钙 化 组 之 间 半 乳 糖 凝 集 素 4() 和 酸 性 神 经 酰 胺 酶 () 的 相 对 表 达 量, 并 采 用 t' 检 验 比 较 两 组 的 差 异 结 果 经 基 因 表 达 谱 芯 片 筛 选 出 5 个 表 达 有 显 著 性 差 异 的 基 因, 且 都 在 钙 化 组 中 表 达 下 调, 其 中 和 下 调 程 度 较 明 显, 倍 数 变 化 分 别 为 和 Real-time PCR 验 证 结 果 显 示, 在 钙 化 组 的 相 对 表 达 量 为 0.49 ± 0.27, 非 钙 化 组 为 2.70 ± 2.61, 差 异 有 统 计 学 意 义 (t=-2.59,p=0.026); 在 钙 化 组 的 相 对 表 达 量 为 1.36 ± 0.33, 非 钙 化 组 为 1.68 ± 0.67, 差 异 无 统 计 学 意 义 (t=-1.44,p=0.167) 在 非 钙 化 组 中, 和 的 表 达 量 波 动 范 围 较 大, 且 两 者 表 达 量 变 化 的 趋 势 呈 正 相 关 (r=0.91,p=0.001), 即 表 达 量 较 低 的 患 者 其 表 达 量 也 相 对 较 低 结 论 型 包 虫 病 患 者 中 低 表 达, 可 能 成 为 判 断 囊 型 包 虫 病 自 愈 倾 向 的 标 志 基 因 关 键 词 包 虫 病 ; 基 因 表 达 谱 ; 半 乳 糖 凝 集 素 ; 酸 性 神 经 酰 胺 酶 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 ( ) 和 在 发 生 钙 化 的 囊 Study of the genes correlated with cyst calcification in patients with cystic echinococcosis Yin Yuanjie *, Zhang Qiang, Yang Yinxue, Yang Shukun, Wang Haifeng, Shi Jinxiu, Wang Zhimin, Yang Yanhui, Lin Yuan, Li Zhaoyu, Yang Yurong. * Department of Pathogen and Immunology,Ningxia Medical University, Yinchuan , China Corresponding author: Yang Yurong, @qq.com Abstracts Objective To explore the genes (biomarkers) correlated with cyst calcification in patients with cystic echinococcosis (CE), and to provide the evidence for the judgment on the patients' prognosis at molecular level. Methods The liver tissues from 32 patients with liver CE (10 cases for mrna microarray and 22 cases for real-time PCR analysis) and 11 patients with hepatic cystadenoma were collected from three hospitals in Ningxia from June, 2013 to December, A comparison of the different gene-expressions between five patients with calcified lesions and five cases with no calcification was carried out using Significant Analysis of Microarrays (SAM) to select a subset of differentially expressed genes (DEGs). Fold-change analysis was used to assess the changes of the expression quantity in the same genes between two groups. The verification was conducted among the liver tissues from 22 patients with liver CE (11 in the group of calcified or 11 in that of non-calcified) by real-time quantitative PCR (RT-qPCR). With GAPDH as a reference-gene and the liver tissues from 11 cases with hepatic cystadenoma as standardized control groups, the relative expressions of galecitin-4 () and acid ceramidase () in patients with calcified and non-calcified were calculated, respectively. The differences between two groups were compared using t'-test. Results Five screened genes presented siginificantly different expressions all had showed the low-regulated expressions in the calcified group, with the most distinct low-regulation of 基 础 研 究 DOI: /cma.j.issn 作 者 单 位 : 银 川, 宁 夏 医 科 大 学 基 础 医 学 院 ( 尹 媛 婕 杨 延 辉 林 源 杨 玉 荣 ); 山 东 菏 泽 市 立 医 院 胃 肠 外 科 ( 张 强 ); 宁 夏 医 科 大 学 总 医 院 普 外 科 ( 杨 银 学 李 昭 宇 ); 宁 夏 医 科 大 学 第 二 附 属 医 院 影 像 科 ( 杨 书 鲲 ); 上 海 南 方 科 技 有 限 公 司 ( 王 海 丰 ); 上 海 人 类 基 因 组 研 究 中 心 遗 传 部 ( 施 锦 绣 王 志 敏 ) 通 信 作 者 : 杨 玉 荣, @qq.com
2 中 华 预 防 医 学 杂 志 2016 年 5 月 第 50 卷 第 5 期 Chin J Prev Med,May 2016, Vol. 50, No and whose fold changes were , and , respectively. The verification by RT-qPCR illustrated that the relative expression of was showed at level of 0.49 ± 0.27 amongst patients with calcified, and at level of 2.70 ± 2.61 amongst non-calcified individuals,,indicating significant differences between two groups (t=-2.59, P=0.026); while the was relatively expressed at levels of 1.36 ± 0.33 and of 1.68 ± 0.67 amongst patients with calcified and non-calcified, respectively, showing insignificant changes statistically (t=- 1.44, P=0.167). In the non-calcified group, both and genes expression quantities had a small fluctuation range, but with positively correlated trend (r=0.91,p=0.001), which indicated that a patient with the low expression quantity also had a relative low level of expression quantity. Conclusions Low expression quantity of and genes in patients with CE in the calcification might be potential biomarker for an indication of the disease self-healing. Key words Echinococcosis; Gene expression profiling; ; Fund program: National Natural Science Foundation of China ( , ) 囊 型 包 虫 病 (cystic echinococcosis) 是 由 细 粒 棘 球 绦 虫 (Echinococcus granulosus,e.g) 的 幼 虫 即 棘 球 蚴 寄 生 在 人 体 组 织 器 官 ( 主 要 在 肝 脏 ) 所 致 [1] 的 一 种 人 畜 共 患 的 慢 性 寄 生 虫 病 中 国 包 虫 病 主 要 流 行 于 新 疆 宁 夏 西 藏 和 甘 肃 等 畜 牧 业 发 达 的 地 区, 此 病 严 重 危 害 着 当 地 群 众 的 健 康 以 及 [2] 经 济 的 发 展 在 临 床 上 根 据 影 像 学 将 囊 型 包 虫 病 分 为 5 型, 从 Ⅰ 型 和 Ⅱ 型 边 界 清 楚 具 有 较 高 生 存 能 力 的 单 房 囊 到 Ⅲ 型 的 内 囊 塌 陷 型 和 Ⅳ 型 的 囊 实 变 型, 最 终 包 虫 囊 发 生 钙 化 坏 死 (V 型 ) [3] 一 般 囊 型 包 虫 病 发 展 到 钙 化 坏 死 型 需 要 5~10 年, 囊 肿 发 生 钙 化 是 机 体 与 寄 生 虫 共 同 作 用 的 结 果, 标 志 着 包 虫 囊 被 宿 主 清 除 以 及 病 灶 向 愈 合 的 方 向 发 展 病 程 久 的 患 者 其 包 虫 外 囊 常 有 钙 盐 沉 积, 是 因 局 部 反 应 而 引 起 的 一 种 营 养 不 良 性 钙 化, 是 机 体 的 保 护 性 反 应, 即 表 示 患 者 已 有 自 愈 的 倾 向 [4] 钙 化 使 得 虫 体 退 化 变 性 和 衰 亡, 若 囊 肿 完 全 钙 化 说 明 机 体 已 基 本 自 愈, 此 时 无 需 进 行 手 术 治 [5] 疗, 避 免 了 术 后 复 发 的 风 险 此 外, 临 床 上 通 过 阿 苯 达 唑 等 药 物 干 预 虫 体 的 发 育, 有 效 的 加 快 包 虫 囊 的 钙 化 坏 死 即 机 体 自 愈 进 程 从 而 达 到 治 疗 [3] 包 虫 病 的 目 的 因 此 了 解 囊 型 包 虫 病 患 者 包 囊 的 钙 化 坏 死 情 况 不 仅 对 诊 断 此 病 有 重 要 意 义, 还 与 判 断 此 疾 病 的 预 后 情 况 有 着 密 切 的 关 系 本 研 究 通 过 基 因 表 达 谱 芯 片 对 囊 型 包 虫 病 钙 化 者 与 非 钙 化 者 进 行 对 比 分 析, 筛 选 差 异 表 达 基 因, 然 后 用 Real-time PCR 进 行 芯 片 分 析 结 果 的 验 证, 探 寻 与 囊 型 包 虫 病 患 者 包 囊 钙 化 相 关 的 基 因, 从 而 在 分 子 生 物 学 水 平 提 供 判 断 患 者 预 后 情 况 的 依 据 标 本 和 方 法 1. 标 本 来 源 : 于 2013 年 6 月 至 2014 年 12 月, 收 集 前 往 宁 夏 医 科 大 学 总 医 院 固 原 市 原 州 区 医 院 西 吉 县 医 院 和 彭 阳 县 人 民 医 院 就 诊 的 32 例 囊 型 包 虫 病 患 者 (10 例 进 行 mrna 基 因 芯 片 分 析,22 例 进 行 Real-time PCR 分 析 ) 和 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 (Real-time PCR 分 析 中 作 为 对 照, 对 钙 化 组 与 非 钙 化 组 基 因 相 对 表 达 量 进 行 标 化 ) 的 肝 组 织 囊 型 包 虫 病 患 者 的 纳 入 标 准 : 首 次 进 行 手 术 治 疗 且 术 前 均 未 口 服 阿 苯 达 唑 等 抗 寄 生 虫 药 物 肝 囊 腺 瘤 患 者 的 纳 入 标 准 : 排 除 包 虫 病 其 他 寄 生 虫 病 以 及 除 肝 囊 腺 瘤 之 外 的 系 统 性 疾 病 者 收 集 每 例 患 者 术 中 修 剪 囊 肿 时 裁 剪 后 欲 丢 弃 的 紧 贴 囊 壁 的 正 常 肝 组 织 1 份 ( 约 0.3 cm 0.3 cm), 将 其 浸 没 于 RNA 组 织 样 品 保 护 液 中,4 静 置 隔 夜 储 存 13 h, 然 后 转 入 -80 冰 箱 长 期 保 存 本 研 究 通 过 了 宁 夏 医 科 大 学 伦 理 委 员 会 审 核 通 过 ( 批 号 : 宁 医 大 伦 理 第 ) 所 有 调 查 对 象 均 签 署 了 知 情 同 意 书 2.mRNA 基 因 芯 片 分 析 : 肝 组 织 总 RNA 的 提 取 采 用 德 国 QIAGEN 公 司 的 RNeasy Total RNA Isolation Mini Kit 试 剂 盒 (Cat.No.74104) 用 美 国 Caliper 公 司 的 核 酸 蛋 白 质 分 析 仪 Labchip GX 对 RNA 完 整 性 进 行 评 估,RNA 质 量 评 分 值 (RQS) 均 大 于 6.5 选 取 100~200 ng 总 RNA, 进 行 GeneChip PrimeView 型 人 基 因 表 达 谱 芯 片 检 测, 具 体 实 验 操 作 和 所 用 试 剂 耗 材 均 按 照 美 国 Affymetrix 公 司 提 供 的 芯 片 杂 交 检 测 方 案 进 行 使 用 Affymetrix 公 司 的 GCOS 软 件 对 芯 片 扫 描 数 据 进 行 读 取 和 统 计 分 析 得 到 的 基 因 表 达 数 据 采 用 MeV 软 件 进 行 分 析, 用 基 因 表 达 差 异 显 著 性 分 析 方 法 (significant analysis of microarrays,sam) 对 钙 化 组 和 非 钙 化 组 包 虫 病 患 者 的 基 因 表 达 差 异 进 行 分 析, 统 计 量 为 d 值, 用 倍 数 变 化 (fold change) 来 衡 量 同 一 基 因 在 钙 [6] 化 组 和 非 钙 化 组 之 间 表 达 量 的 变 化 情 况 3.Real-time PCR 分 析 : 使 用 RNeasy Total RNA
3 436 中 华 预 防 医 学 杂 志 2016 年 5 月 第 50 卷 第 5 期 Chin J Prev Med,May 2016, Vol. 50, No. 5 Isolation Mini Kit 从 22 例 囊 型 包 虫 病 患 者 和 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 的 肝 组 织 中 提 取 总 RNA, 使 用 日 本 TaKaRa 公 司 生 产 的 PrimeScript TM RT reagent Kit 试 剂 盒 (Cat.No. RR037A) 进 行 总 RNA 的 反 转 录 用 上 海 灏 勤 生 物 科 技 有 限 公 司 生 产 的 HaoQin 快 速 mrna 荧 光 定 量 检 测 试 剂 盒 进 行 探 针 法 Real-time PCR 扩 增 反 应 体 系 包 括 : 荧 光 定 量 探 针 法 反 应 预 混 液 10 µl, 探 针 和 引 物 见 表 1, 预 混 液 1 µl, 模 板 脱 氧 核 糖 核 酸 1 µl, 用 水 补 足 至 20 µl PCR 扩 增 条 件 为 :95 30 s;95 5 s,57 15 s,40 个 循 环 4. 统 计 学 分 析 : 以 GAPDH 作 为 内 参 基 因, 对 PCR 产 物 的 扩 增 曲 线 进 行 分 析, 根 据 Ct 值 计 算 相 应 的 mrna 表 达 量, 采 用 相 对 定 量 的 方 法 在 钙 化 组 和 非 钙 化 组 间 对 目 的 基 因 表 达 量 进 行 分 析, 并 用 Graphpad 进 行 绘 图 采 用 SPSS 20.0 软 件 对 表 达 量 数 据 进 行 统 计 学 分 析, 钙 化 组 和 非 钙 化 组 目 的 基 因 相 对 表 达 量 呈 正 态 分 布, 采 用 xˉ ± s 表 示, 但 因 两 组 数 值 方 差 不 齐 故 利 用 t' 检 验 比 较 其 差 异 以 P< 0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 结 果 1. 基 本 情 况 :(1)mRNA 基 因 芯 片 分 析 :10 例 囊 型 包 虫 病 患 者 均 为 汉 族 合 并 非 合 并 钙 化 者 均 为 5 例 合 并 钙 化 者 中,4 例 男 性 (32~64 岁 ),1 例 女 性 (50 岁 ), 均 合 并 胆 瘘,3 例 肝 内 多 发 子 囊 未 合 并 钙 化 者 中,3 例 男 性 (32 ~ 46 岁 ),2 例 女 性 (41~ 49 岁 ),1 例 合 并 胆 瘘,2 例 Ⅱ 型,3 例 Ⅲ 型 (2) Real-time PCR 分 析 :22 例 囊 型 包 虫 病 患 者 中,21 例 汉 族,1 例 回 族 ( 属 合 并 钙 化 组 ), 合 并 非 合 并 钙 化 者 均 11 例 合 并 钙 化 者 中,8 例 男 性 (37~ 52 岁 ), 3 例 女 性 (23~ 46 岁 ),10 例 合 并 胆 瘘,8 例 肝 内 多 发 子 囊 未 合 并 钙 化 者 中,7 例 男 性 (30~65 岁 ),4 例 女 性 (32 ~ 51 岁 ),3 例 Ⅱ 型,5 例 Ⅲ 型,3 例 Ⅳ 型, 4 例 合 并 胆 瘘,5 例 肝 内 多 发 子 囊 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 中,1 例 回 族,10 例 汉 族,7 例 男 性 (45 ~ 63 岁 ), 4 例 女 性 (44 ~ 60 岁 ) 2. 运 用 SAM 筛 选 出 表 达 显 著 性 差 异 基 因 : 经 Mev 软 件 进 行 基 因 表 达 差 异 显 著 性 分 析,FDR 设 为 0.05, 筛 选 出 5 个 在 囊 型 包 虫 病 患 者 钙 化 组 和 非 钙 化 组 之 间 表 达 量 有 显 著 性 差 异 的 基 因 详 见 表 2 这 5 个 基 因 在 钙 化 组 都 表 达 下 调, 其 中 半 乳 糖 凝 集 素 4(lectin galactoside-binding soluble 4, ) 和 酸 性 神 经 酰 胺 酶 (N-acylsphingosineamidohydrolase1,) 表 达 变 化 倍 数 较 大, 即 下 调 程 度 最 明 显, 故 后 期 用 Real-time PCR 对 和 进 行 验 证 3. 显 著 差 异 表 达 基 因 的 验 证 : 在 钙 化 组 与 非 钙 化 组 之 间 的 表 达 量 差 异 有 统 计 学 意 义, 且 在 钙 化 组 中 表 达 量 较 非 钙 化 组 显 著 下 调 而 在 钙 化 组 表 达 量 较 非 钙 化 组 略 微 下 调, 但 两 组 之 间 表 达 量 差 异 无 统 计 学 意 义 详 见 表 3 在 非 钙 化 组 中, 和 在 不 同 样 本 中 的 表 达 量 波 动 范 围 较 大 故 对 非 钙 化 组 中 各 患 者 和 表 达 量 情 况 作 进 一 步 分 析, 结 果 显 示, 在 非 钙 化 组 中 两 基 因 表 达 量 变 化 的 趋 势 呈 正 相 关 (r=0.91,p=0.001), 即 表 达 量 较 低 的 患 者 其 表 达 量 也 相 对 较 低 详 见 图 1 讨 论 本 研 究 经 基 因 表 达 谱 分 析 发 现, 有 显 著 性 差 异 的 基 因 和 都 有 调 节 细 胞 增 殖 和 凋 亡 等 功 能 且 与 癌 症 的 预 后 有 关 半 乳 糖 凝 集 素 广 泛 表 达 在 各 种 哺 乳 动 物 的 组 织 和 细 胞 中 且 参 与 一 系 列 的 生 理 和 病 理 过 程, 包 括 细 胞 内 的 信 号 传 导 细 胞 黏 附 细 胞 凋 亡 和 肿 瘤 转 [7] 移 等 目 前 对 LGALS1~ 研 究 较 多, 多 为 与 癌 症 相 关 的 报 道, 肝 细 胞 癌 的 早 期 在 细 胞 表 面 高 表 达, 而 在 肿 瘤 晚 期 低 表 达 基 因 表 1 和 进 行 Real-time PCR 的 引 物 序 列 及 其 相 关 参 数 引 物 序 列 (5'~3') 长 度 (bp) 位 置 Tm 值 ( ) 上 游 :TTCATAGTCCTGGCTGAGCAC ~ 下 游 :CGGTGCCCGTACTCATAGA ~ 上 游 :ACAGTTCTGGAAAATAGCACAAGTT ~ 下 游 :GGTTGCCTCCCAGGATAAAG ~ GC 含 量 (%) 注 :Tm 值 :50% 的 引 物 与 模 板 配 对, 另 外 50% 的 引 物 处 于 解 离 状 态 时 的 温 度, 引 物 设 计 时 Tm 值 通 常 高 于 55, 且 保 证 两 个 引 物 的 Tm 值 相 近 GC 含 量 : 在 DNA 的 4 种 碱 基 中, 鸟 嘌 呤 和 胞 嘧 啶 所 占 比 率,PCR 引 物 设 计 原 则 中 GC 含 量 的 范 围 通 常 在 40%~60% : 半 乳 糖 凝 集 素 4;: 酸 性 神 经 酰 胺 酶
4 中 华 预 防 医 学 杂 志 2016 年 5 月 第 50 卷 第 5 期 Chin J Prev Med,May 2016, Vol. 50, No 表 2 基 因 表 达 差 异 显 著 性 分 析 方 法 筛 选 的 表 达 差 异 基 因 结 果 探 针 编 号 与 基 因 _a_at _at _x_at HLA-C _x_at HLA-DQA1 LOC _x_at HLA-DQA1 LOC d 值 倍 数 变 化 注 :: 半 乳 糖 凝 集 素 4;: 酸 性 神 经 酰 胺 酶 表 3 Real-time PCR 检 测 钙 化 组 和 非 钙 化 组 中 和 基 因 相 对 表 达 量 基 因 及 组 别 人 数 钙 化 组 11 非 钙 化 组 11 钙 化 组 11 非 钙 化 组 11 xˉ ± s t 值 P 值 ± ± ± ±0.67 注 :: 半 乳 糖 凝 集 素 4;: 酸 性 神 经 酰 胺 酶 ; 钙 化 组 与 非 钙 化 组 基 因 相 对 表 达 量 均 利 用 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 进 行 标 化 : 半 乳 糖 凝 集 素 4;: 酸 性 神 经 酰 胺 酶 ; 钙 化 组 与 非 钙 化 组 基 因 相 对 表 达 情 况 均 利 用 11 例 肝 囊 腺 瘤 患 者 进 行 标 化 图 1 非 钙 化 组 患 者 和 基 因 的 相 对 表 达 情 况 从 而 促 进 肿 瘤 的 转 移, 因 此 把 作 为 肝 细 胞 [8] 癌 潜 在 的 预 后 标 志 物 与 LGALS3 有 相 似 的 结 构, 即 共 有 的 糖 结 合 区, 此 结 构 与 β- 半 乳 糖 苷 可 通 过 交 联 糖 链 在 细 胞 表 面 和 基 质 中 行 使 功 能 [9] 目 前 有 研 究 发 现 LGALS3 低 表 达 会 促 进 细 胞 凋 亡 [10], 因 此 低 表 达 也 可 能 有 促 进 细 胞 凋 亡 效 应 包 虫 囊 发 生 钙 化 意 味 着 其 细 胞 变 性 坏 [5] 死, 因 此 包 囊 钙 化 与 细 胞 凋 亡 相 关 即 可 能 与 的 低 表 达 有 关 此 外, 包 虫 囊 的 形 态 学 改 变 与 宿 主 的 免 疫 应 答 密 切 相 关 [11], 机 体 可 通 过 对 包 虫 的 免 疫 反 应 而 促 进 自 愈, 半 乳 糖 凝 集 素 有 调 节 机 体 免 疫 应 答 的 功 能 [12-14], 因 此 包 囊 钙 化 患 者 低 表 达 还 可 能 具 有 调 节 宿 主 免 疫 应 答 的 作 用 然 而 关 于 在 细 胞 凋 亡 和 免 疫 应 答 方 面 的 具 体 机 制 还 未 有 研 究, 还 需 进 一 步 深 入 研 讨 多 表 达 在 心 脏 肾 脏 肺 脏 肝 脏 和 骨 骼 组 织 [15], 它 能 调 节 神 经 酰 胺 的 水 解 促 进 鞘 胺 醇 的 生 成, 而 鞘 胺 醇 能 转 化 为 有 抗 细 胞 凋 亡 作 用 的 鞘 胺 醇 -1- 磷 酸 [16] 此 外, 还 参 与 神 经 酰 胺 信 号 通 路, 其 表 达 下 调 可 减 弱 鞘 胺 醇 信 号, 从 而 促 进 细 胞 凋 亡 也 有 研 究 发 现 高 表 达 会 促 进 乳 腺 瘤 癌 细 胞 增 生, 提 示 预 后 不 良, 反 之 其 低 表 达 提 示 预 后 良 好 [17] 因 此, 有 促 细 胞 凋 亡 功 能, 包 囊 钙 化 患 者 的 低 表 达 可 能 与 之 有 关, 但 是 否 可 以 作 为 包 囊 钙 化 的 标 志 基 因 还 需 进 一 步 研 究 在 非 钙 化 囊 型 包 虫 病 患 者 中 和 的 表 达 量 波 动 范 围 较 大, 且 两 基 因 表 达 变 化 的 趋 势 呈 正 相 关 图 1 中 显 示 和 11 号 患 者 两 基 因 相 对 表 达 都 较 低, 且 接 近 钙 化 组 平 均 表 达 水 平, 结 合 其 临 床 资 料 研 究 发 现, 他 们 属 于 Ⅲ 或 Ⅳ 型, 年 龄 偏 大 且 在 55 岁 以 上, 并 伴 有 胆 管 瘘 和 肝 内 多 发 子 囊, 而 这 些 因 素 都 可 促 使 囊 型 包 虫 病 患 者 病 灶 发 生 钙 化 [3] 由 此 推 断 这 些 患 者 包 囊 可 能 已 有 钙 化 的 趋 势, 但 尚 未 形 成 钙 化 灶, 故 经 影 像 学 未 查 出 因 此 和 的 低 表 达 程 度 不 同 可 能 与 包 囊 钙 化 的 程 度 有 关 目 前 鲜 有 关 于 这 两 个 基 因 与 包 虫 病 之 间 的 报 道, 本 研 究 发 现 和 在 囊 型 包 虫 病 钙 化 患 者 中 表 达 下 调, 而 且 有 可 能 成 为 判 断 囊 型 包 虫 病 自 愈 标 志 基 因, 更 多 后 续 随 访 的 调 查 结 果 将 有 助 于 进 一 步 对 其 深 入 研 究 参 考 文 献 [1] Yang YR, Sun T, Li Z, et al. Echinococcosis, Ningxia, China [J]. Emerg Infect Dis, 2005,11(8): DOI: / eid [2] 张 文 斌. 囊 型 包 虫 病 社 区 人 群 流 行 病 学 调 查 长 期 随 访 治 疗 远 期 效 果 及 自 然 转 归 分 析 [D]. 乌 鲁 木 齐 : 新 疆 医 科 大 学,
5 438 中 华 预 防 医 学 杂 志 2016 年 5 月 第 50 卷 第 5 期 Chin J Prev Med,May 2016, Vol. 50, No [3] 丛 鹏, 白 磊, 赵 晋 明. 肝 囊 型 包 虫 病 坏 死 钙 化 相 关 因 素 分 析 [J]. 中 华 普 通 外 科 杂 志,2011,26(7): DOI: / cma.j.issn x [4] 彭 心 宇, 吴 向 未, 张 示 杰, 等. 肝 包 虫 囊 肿 周 围 纤 维 囊 壁 病 理 结 构 的 再 认 识 [J]. 世 界 华 人 消 化 杂 志,2005,13(3): DOI: /j.issn [5] 赵 玉 元. 肝 包 虫 囊 肿 钙 化 并 多 发 结 石 4 例 [J]. 兰 州 大 学 学 报 ( 医 学 版 ),2006,32(1): DOI: /j. issn [6] 李 运 明. 基 于 SAM 的 基 因 表 达 谱 数 据 分 析 方 法 研 究 及 应 用 [D]. 西 安 : 第 四 军 医 大 学, DOI: /d.d [7] 柯 佳 颖, 陈 寅 山, 饶 小 珍. 凝 集 素 及 其 生 物 学 作 用 [J]. 宁 德 师 专 学 报 ( 自 然 科 学 版 ),2005,17(1): DOI: /j. issn [8] Cai Z, Zeng Y, Xu B, et al. Galectin-4 serves as a prognostic biomarker for the early recurrence / metastasis of hepatocellular carcinoma[j]. Cancer Sci, 2014,105(11): DOI: /cas [9] 江 红 节. 半 乳 糖 凝 集 素 的 结 构 和 功 能 [J]. 生 命 的 化 学 ( 中 国 生 物 化 学 会 通 讯 ),1995,15(6): [10] 黄 垂 学, 赵 建 农, 邹 文 辉, 等. 半 乳 糖 凝 集 素 -3 对 垂 体 腺 瘤 细 胞 增 殖 和 凋 亡 的 影 响 [J]. 中 华 神 经 外 科 疾 病 研 究 杂 志, 2014,13(2): [11] Craig PS, Rogan MT, Allan JC. Detection, screening and community epidemiology of taeniid cestode zoonoses: cystic echinococcosis, alveolar echinococcosis and neurocysticercosis [J]. Adv Parasitol, 1996,38: [12] Boscher C, Dennis JW, Nabi IR. Glycosylation, galectins and cellular signaling[j]. Curr Opin Cell Biol, 2011,23(4): DOI: /j.ceb [13] Vasta GR. Roles of galectins in infection[j]. Nat Rev Microbiol, 2009,7(6): DOI: /nrmicro2146. [14] Vasta GR. Galectins as pattern recognition receptors: structure, function, and evolution[j]. Adv Exp Med Biol, 2012, 946: DOI: / _2. [15] 齐 攀. 鞘 脂 代 谢 关 键 酶 -[J]. 医 学 信 息 ( 中 旬 刊 ),2010, 05(7): DOI: /j.issn [16] Camacho L, Meca-Cortés O, Abad JL, et al. Acid ceramidase as a therapeutic target in metastatic prostate cancer[j]. J Lipid Res, 2013,54(5): DOI: /jlr.M [17] 齐 攀, 金 艳, 曹 兴 玥, 等. 乳 腺 癌 中 蛋 白 的 表 达 [J]. 中 国 医 药 导 报, 2010,7(24): DOI: /j. issn ( 收 稿 日 期 : ) ( 本 文 编 辑 : 梁 明 修 吕 相 征 ) 关 于 中 华 预 防 医 学 杂 志 刊 出 论 文 中 英 文 缩 写 的 公 告 读 者 作 者 编 者 2 h PG: 餐 后 两 小 时 血 糖 BMI: 体 质 指 数 CDC: 疾 病 预 防 控 制 中 心 CFU: 菌 落 形 成 单 位 Ct 值 : 每 个 反 应 管 内 荧 光 信 号 达 到 设 定 的 阈 值 时 所 经 历 的 循 环 数 DBP: 舒 张 压 EDTA: 乙 二 胺 四 乙 酸 ELISA: 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 FAO: 联 合 国 粮 农 组 织 FPG: 空 腹 血 糖 GMT: 几 何 平 均 滴 度 HDL-C: 高 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 HIV: 人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 LDL-C: 低 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 MTB: 结 核 分 枝 杆 菌 PBS: 磷 酸 盐 缓 冲 液 PCR: 聚 合 酶 链 反 应 PAGE: 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 PFGE: 脉 冲 场 凝 胶 电 泳 Real-time PCR: 实 时 定 量 荧 光 PCR RT-PCR: 逆 转 录 - 聚 合 酶 链 反 应 SBP: 收 缩 压 P n: 第 n 百 分 位 数 PM 2.5: 细 颗 粒 物 PM 10: 可 吸 入 颗 粒 物 SDS: 十 二 烷 基 硫 酸 钠 SPF: 无 特 定 病 原 体 TMB: 四 甲 基 联 苯 胺 TC: 总 胆 固 醇 TG: 甘 油 三 酯 Tris: 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 WHO: 世 界 卫 生 组 织
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