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1 密 级 : 内 部 学 号 : 硕 士 学 位 论 文 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 有 效 部 位 筛 选 与 多 糖 的 化 学 研 究 研 究 生 指 导 教 师 学 科 专 业 所 在 学 院 毕 业 时 间 常 念 吴 皓 教 授 中 药 学 药 学 院 2009 年 6 月

2 Anti-hyperglycemic effective fraction screening from the flesh of Mactra veneriformis and Chemical Study of Mactra veneriformis Polysaccharide A Dissertation Submitted for the Master s Degree Candidate:Chang Nian Adviser:Prof. Wu Hao Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, China 2

3 学 号 : 硕 士 学 位 论 文 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 有 效 部 位 筛 选 与 多 糖 的 化 学 研 究 作 者 姓 名 常 念 申 请 学 位 级 别 医 学 科 学 硕 士 学 位 指 导 教 师 姓 名 吴 皓 职 称 教 授 学 科 专 业 中 药 学 研 究 方 向 中 药 海 洋 药 物 学 习 时 间 自 2006 年 9 月 15 日 起 至 2009 年 6 月 日 止 论 文 提 交 日 期 2009 年 4 月 10 日 论 文 答 辩 日 期 年 月 日 学 位 授 予 单 位 南 京 中 医 药 大 学 学 位 类 型 医 学 科 学 硕 士 学 位

4 原 创 性 声 明 本 人 郑 重 声 明 : 所 呈 交 的 学 位 论 文, 是 本 人 在 导 师 的 指 导 下, 独 立 进 行 研 究 工 作 所 取 得 的 成 果 除 文 中 已 经 注 明 引 用 的 内 容 外, 本 论 文 不 包 含 任 何 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 作 品 成 果 对 本 文 的 研 究 做 出 重 要 贡 献 的 个 人 和 集 体, 均 已 在 文 中 以 明 确 方 式 标 明 本 人 完 全 意 识 到 本 声 明 的 法 律 结 果 由 本 人 承 担 学 位 论 文 作 者 ( 需 亲 笔 ) 签 名 : 年 月 日 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书 本 学 位 论 文 作 者 完 全 了 解 学 校 有 关 保 留 使 用 学 位 论 文 的 规 定, 同 意 学 校 保 留 并 向 国 家 有 关 部 门 或 机 构 送 交 论 文 的 复 印 件 和 电 子 版, 允 许 论 文 被 查 阅 和 借 阅 本 人 授 权 南 京 中 医 药 大 学 可 以 将 本 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进 行 检 索, 可 以 采 用 影 印 缩 印 或 扫 描 等 复 制 手 段 保 存 和 汇 编 本 学 位 论 文 保 密, 在 年 解 密 后 适 用 本 授 权 书 本 学 位 论 文 属 于 不 保 密 ( 请 在 以 上 方 框 内 打 ) 学 位 论 文 作 者 ( 需 亲 笔 ) 签 名 : 年 月 日 导 师 ( 需 亲 笔 ) 签 名 : 年 月 日 4

5 目 录 摘 要 ABSTRACT 前 言 第 一 章 文 献 综 述 第 一 节 四 角 蛤 蜊 药 用 的 研 究 进 展 第 一 小 节 历 史 记 载 第 二 小 节 形 态 结 构 与 生 态 习 性 第 三 小 节 化 学 成 分 及 现 代 药 理 学 研 究 第 四 小 节 应 用 与 展 望 第 二 节 降 血 糖 多 糖 及 寡 糖 的 研 究 进 展 第 一 小 节 天 然 产 物 来 源 的 降 血 糖 多 糖 第 二 小 节 合 成 和 衍 生 化 的 多 糖 第 三 小 节 降 血 糖 机 制 第 四 小 节 降 血 糖 与 多 糖 的 构 效 关 系 参 考 文 献 第 二 章 四 角 蛤 蜊 软 体 化 学 成 分 系 统 预 试 验 参 考 文 献 第 三 章 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 活 性 部 位 的 筛 选 第 一 节 四 角 蛤 蜊 软 体 各 提 取 部 位 的 制 备 与 糖 含 量 蛋 白 含 量 测 定 第 二 节 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 活 性 部 位 的 筛 选 参 考 文 献 第 四 章 四 角 蛤 蜊 多 糖 降 血 糖 活 性 研 究 第 一 节 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 降 血 糖 活 性 的 研 究 第 一 小 节 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 对 正 常 小 鼠 及 糖 尿 病 小 鼠 口 服 糖 耐 量 的 影 响 第 二 小 节 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 对 正 常 小 鼠 糖 异 生 的 影 响 第 三 小 节 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 对 肾 上 腺 素 诱 发 高 血 糖 模 型 小 鼠 血 糖 的 影 响 第 四 小 节 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 对 正 常 小 鼠 空 腹 血 糖 和 脏 器 系 数 的 影 响 第 二 节 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 降 血 糖 活 性 的 研 究 第 一 小 节 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 的 制 备 与 糖 含 量 蛋 白 含 量 测 定 第 二 小 节 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 对 正 常 小 鼠 及 糖 尿 病 小 鼠 口 服 糖 耐 量 的 影 响 第 三 小 节 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 和 粗 多 糖 降 血 糖 活 性 的 比 较 研 究 参 考 文 献 第 五 章 四 角 蛤 蜊 多 糖 的 初 步 化 学 研 究 第 一 节 四 角 蛤 蜊 多 糖 的 组 成 分 析 第 一 小 节 四 角 蛤 蜊 多 糖 中 特 殊 基 团 含 量 测 定

6 第 二 小 节 四 角 蛤 蜊 多 糖 单 糖 组 成 分 析 第 二 节 四 角 蛤 蜊 多 糖 的 分 离 纯 化 第 一 小 节 Cellulose DEAE-52 分 离 纯 化 四 角 蛤 蜊 多 糖 第 二 小 节 MVPS-1 和 MVPS-2 的 总 糖 含 量 测 定 第 三 小 节 MVPS-1 和 MVPS-2 的 纯 度 鉴 定 第 三 节 MVPS-1 和 MVPS-2 的 分 子 量 测 定 第 四 节 MVPS-1 和 MVPS-2 的 红 外 光 谱 分 析 第 五 节 MVPS-1 和 MVPS-2 的 单 糖 组 成 分 析 第 六 节 MVPS-1 和 MVPS-2 的 核 磁 共 振 波 谱 分 析 参 考 文 献 结 语 攻 读 硕 士 学 位 期 间 取 得 的 学 术 成 果 致 谢

7 摘 要 本 论 文 课 题 来 源 于 国 家 海 洋 局 海 洋 公 益 性 行 业 科 研 专 项 四 角 蛤 蜊 深 加 工 功 能 性 保 健 品 的 研 究 开 发 ( 编 号 : ), 旨 在 中 医 理 论 的 指 导 下 对 四 角 蛤 蜊 软 体 进 行 降 血 糖 的 药 效 筛 选 和 其 中 活 性 部 位 的 化 学 研 究, 阐 明 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 作 用 的 物 质 基 础, 为 本 项 目 后 期 功 能 性 保 健 品 的 开 发 提 供 科 学 数 据 和 研 究 支 撑 本 论 文 主 要 内 容 包 括 以 下 几 个 部 分 : 一. 文 献 研 究 查 阅 有 关 四 角 蛤 蜊 的 研 究 文 献, 了 解 四 角 蛤 蜊 的 历 史 沿 革 和 现 代 研 究 进 展 ; 以 及 查 阅 国 内 外 有 关 糖 尿 病 多 糖 类 物 质 降 血 糖 的 研 究 报 告, 了 解 多 糖 类 成 分 降 血 糖 的 药 效 学 参 数 和 化 学 特 性, 为 进 一 步 实 验 工 作 奠 定 文 献 资 料 基 础 二. 四 角 蛤 蜊 软 体 化 学 成 分 系 统 预 试 验 通 过 系 统 成 分 预 试 验, 研 究 四 角 蛤 蜊 软 体 可 能 含 有 的 化 学 成 分 采 用 试 管 法 和 纸 色 谱 法, 对 四 角 蛤 蜊 软 体 的 水 提 液 石 油 醚 提 取 液 和 乙 醇 提 取 液 进 行 成 分 预 试, 结 果 表 明 四 角 蛤 蜊 软 体 中 含 有 糖 类 蛋 白 质 生 物 碱 有 机 酸 甾 体 三. 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 活 性 部 位 的 筛 选 1. 采 用 水 煎 煮 后 乙 醇 沉 淀 达 到 一 定 浓 度 的 方 法, 将 四 角 蛤 蜊 软 体 分 为 醇 沉 粗 多 糖 和 水 溶 性 浸 膏 两 个 提 取 部 位, 采 用 蒽 酮 - 硫 酸 法 测 定 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 部 位 的 总 糖 含 量 为 72.9%, 考 马 斯 亮 蓝 法 测 定 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 部 位 的 蛋 白 含 量 为 24.1% 2. 结 合 药 效 学 实 验, 筛 选 四 角 蛤 蜊 降 血 糖 有 效 部 位 通 过 尾 静 脉 注 射 四 氧 嘧 啶 建 立 小 鼠 糖 尿 病 模 型, 将 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖, 水 溶 性 浸 膏 部 位 各 分 为 高 低 两 个 剂 量 组 给 受 试 动 物 灌 胃 14d, 用 血 糖 仪 测 定 给 药 7d 和 14d 后 空 腹 血 糖 值, 并 测 定 各 组 小 鼠 每 日 饮 水 量, 每 两 日 的 耗 食 量 结 果 显 示 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 部 位 能 明 显 降 低 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 的 空 腹 血 糖, 减 少 糖 尿 病 小 鼠 的 饮 水 量 和 耗 食 量, 水 溶 性 浸 膏 部 位 无 明 显 的 降 血 糖 作 用 实 验 初 步 确 定 水 提 醇 沉 粗 多 糖 部 位 是 四 角 蛤 蜊 软 体 降 血 糖 的 活 性 部 位 四. 四 角 蛤 蜊 醇 沉 多 糖 降 血 糖 活 性 研 究 1. 采 用 正 常 及 糖 尿 病 小 鼠 的 口 服 糖 ( 单 糖 二 糖 和 多 糖 ) 耐 量 试 验 正 常 小 鼠 的 整 体 糖 异 生 实 验 和 肾 上 腺 素 诱 发 的 高 血 糖 小 鼠 模 型 验 证 了 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 的 I

8 降 血 糖 活 性 ; 并 考 察 了 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 对 正 常 小 鼠 的 空 腹 血 糖 和 脏 器 系 数 的 影 响 结 果 表 明 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 能 降 低 肾 上 腺 素 高 血 糖 模 型 动 物 的 血 糖, 能 显 著 改 善 正 常 及 糖 尿 病 小 鼠 的 口 服 糖 耐 量 水 平, 抑 制 由 L-α- 丙 氨 酸 糖 异 生 引 起 的 血 糖 升 高, 同 时 对 正 常 小 鼠 空 腹 血 糖 和 脏 器 系 数 无 明 显 影 响 2. 将 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 采 用 阳 离 子 交 换 树 脂 法 精 制, 得 到 总 糖 含 量 为 103.2%, 蛋 白 含 量 为 0.116% 的 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 的 口 服 糖 耐 量 试 验 结 果 显 示 其 能 改 善 正 常 及 糖 尿 病 小 鼠 的 口 服 糖 耐 量 水 平 ; 通 过 口 服 糖 耐 量 试 验 和 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 模 型 进 一 步 研 究 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 和 粗 多 糖 的 降 血 糖 活 性, 结 果 发 现 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 和 粗 多 糖 均 显 示 出 显 著 的 降 血 糖 作 用, 说 明 四 角 蛤 蜊 多 糖 是 其 软 体 降 血 糖 的 主 要 活 性 部 位 ; 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 和 粗 多 糖 的 降 血 糖 时 效 关 系 研 究 结 果 表 明 在 给 药 后 3~4h 时 降 血 糖 效 果 最 明 显, 和 模 型 组 比 较 有 显 著 性 差 异 五. 四 角 蛤 蜊 多 糖 的 化 学 研 究 1. 分 别 采 用 了 硫 酸 钡 比 浊 法 硫 酸 - 咔 唑 法 和 乙 酰 丙 酮 法 分 析 了 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 和 精 多 糖 的 硫 酸 基 糖 醛 酸 和 氨 基 糖 含 量, 结 果 显 示 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 中 含 有 硫 酸 基 团 葡 萄 糖 醛 酸 和 少 量 氨 基 糖, 其 中 硫 酸 基 含 量 为 2.19%, 葡 萄 糖 醛 酸 含 量 为 6.91%; 氨 基 糖 含 量 为 0.604% 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 中 硫 酸 基 含 量 为 2.28%, 葡 萄 糖 醛 酸 含 量 为 5.12% 2. 采 用 Cellulose DE52 柱 分 离 纯 化 四 角 蛤 蜊 多 糖, 得 到 两 个 均 质 多 糖 MVPS-1 和 MVPS-2, 其 总 糖 含 量 分 别 为 109.8% 和 107.6%, 多 糖 含 量 分 别 为 98.82% 和 96.84% 运 用 HPGPC 法 测 得 MVPS-1 和 MVPS-2 的 重 均 分 子 量 (Mw) 分 别 为 249 kda 和 202 kda, 多 分 散 系 数 (D) 分 别 为 1.65 和 IR 光 谱 分 析 结 果 显 示 MVPS-1 和 MVPS-2 可 能 是 一 种 α 型 葡 聚 糖 ; 采 用 GC/MS 和 GC 法 分 析 MVPS-1 和 MVPS-2 的 单 糖 组 成, 结 果 显 示 MVPS-1 和 MVPS-2 由 葡 萄 糖 和 阿 拉 伯 糖 组 成, 两 者 的 摩 尔 比 约 为 12:1 1 H-NMR 谱 和 l3 C-NMR 谱 分 析 结 果 表 明 MVPS-1 和 MVPS-2 分 子 中 糖 苷 键 构 型 均 为 α- 型 关 键 词 : 四 角 蛤 蜊 ; 多 糖 ; 降 血 糖 活 性 ; 组 成 分 析 II

9 ABSTRACT Surf clam (Mactra veneriformis Reeve) is a common commercially bivalve in China, which are extensively utilized as seafood, raw materials for manufacturing flavoring materials and live feed at various aquaculture farms. About 80 thousand tons of surf clam is harvested in Jiangsu coast each year, which account for almost 1/3 of total amount of China. For the comprehensive utilization of this abundant coastal resource, sponsored by State Oceanic Administration (SOA), a important research project on deep processing of surf clam is carried out; many research works, including aquaculture, harvesting and processing technologies, are performed in advance, ongoing pharmaceutical research is one of the most important branches in the project. Through this project, one or more pharmaceutical products are expected to be developed. This paper is one aspect of the pharmaceutical research, it focuses on the hyperglycemic activity and active components of Mactra veneriformis, main contents of this paper consist of five parts as follow: 1. Literature study By reviewing to the related literatures of Mactra veneriformis, historical and modern research results are systematic summarized; by referring to the literatures on Diabetes Mellitus and natural polysaccharides with hypoglycemic activity, chemical characteristics and basic parameters of pharmacology of this kind of substance are revealed. The follow-up experimental works are on the basis of these literature researches. 2. The preliminary test of chemical components The chemical components in the entire flesh of Mactra veneriformis were systematically investigated by conventional methods, it indicated that the flesh contains saccharides, proteins, alkaloids, organic acids and steroids. 3. The anti-hyperglycemic screening of the isolated major fractions from the flesh of Mactra veneriformis Extraction Method of water extracting-alcohol precipitating was used, and the flesh of Mactra veneriformis was roughly divided into two extracting fractions: crude polysaccharide and water soluble ointment. The content of sugar of crude polysaccharide III

10 fraction was determined by the anthrone-sulfuric acid colorimetry method, the result showed that its content of glucose is 72.9%. To screen the isolated major compounds from Mactra veneriformis, hyperglycemia mice model was established by intravenous injection of alloxan via mice tail and the hypoglycemic effect of crude polysaccharide and water soluble ointment on the animal model was observed. The results suggested that, diabetic mice treated by crude polysaccharide had less consumption of water and food and lower blood glucose level compared with model group, at the dose of 200 and 400 mg kg -1 ; but that treated by water soluble ointment has no significant changes in these indexes. It is concluded that the crude polysaccharide is the anti-hyperglycemia active fraction. 4. The study of hypoglycemic activity of Mactra veneriformis polysaccharide The oral carbohydrate tolerance test (monosaccharide, disaccharide and polysaccharide) in normal and diabetic mice, whole animal gluconeogenesis and adrenaline-induced hyperglycemic model was established to evaluated the hypoglycemic effect of crude Mactra veneriformis polysaccharide (crude MVPS), and its effect was furtherly confirmed. In addition, the influences of crude MVPS on fasting blood glucose and the indexes of organ weight in normal mice were measured, and the results showed that crude MVPS could not affect these indexes. Crude MVPS was refined by 732 cation exchange resin column and polysaccharide of much higher sugar content (MVPS) was obtained, its sugar and protein content were 103.2%, 0.116% respectively, determined by the anthrone-sulfuric acid colorimetry and coomassie brilliant blue method. Subsequent experiment results revealed MVPS could improve the oral glucose tolerance test (OGTT) level of normal and diabetic mice. In order to further investigate the hypoglycemic action of MVPS and crude MVPS, OGTT and alloxan-induced hyperglycemia mice experiment were performed, it was proved that MVPS was the main active fraction of Mactra veneriformis flesh. Finally, the results of study of time-effect relationship demonstrated that MVPS and crude MVPS have the best hypoglycemic effect after 3~4h oral administration. 5. The Chemical study of Mactra veneriformis polysaccharide IV

11 Barium sulfate turbidity, sulfate-carbazole and acetylacetone method were respectively applied to determine the contents of SO 2-4, glucuronic acid and glucosamine of MVPS and crude MVPS, the results revealed that the contents of SO 2-4, glucuronic acid of MVPS were 2.19%, 6.91% respectively; the contents of SO 2-4, glucuronic acid of crude MVPS were 2.28%, 5.12% respectively; the content of glucosamine of MVPS was 0.604%. MVPS was furtherly isolated and purified on DE-52 cellulose column, two homogeneous polysaccharides MVPS-1 and MVPS-2 were obtained, their sugar contents were 109.8% and 107.6% respectively. The molecular weight of MVPS-1 and MVPS-2 was determined by HPGPC. The Mw of MVPS-1 and MVPS-2 was 249, 202 kda respectively; the D value of MVPS-1 and MVPS-2 was 1.65, 1.63 respectively. The result of IR analysis of MVPS-1 and MVPS-2 revealed that they might be a kind of α-glucan.the monosaccharide compositon of MVPS-1 and MVPS-2 was analyzed by GC/MS and GC, the result showed that MVPS-1 and MVPS-2 consisted of D-glucose and D-arabinose, their molar ratio was about 12:1. The 1 H and l3 CNMR spectra of MVPS-1 and MVPS-2 confirmed that the configuration of the polysaccharide was the α form. Key words: Mactra veneriformis; polysaccharide; hypoglycemic activity; composition analysis V

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13 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 前 言 四 角 蛤 蜊 (Mactra veneriformis) 为 软 体 动 物 门 (Mollusca), 瓣 鳃 纲 (Lamellibranchia), 蛤 蜊 科 (Mactridae) 的 动 物, 是 一 种 广 泛 分 布 于 我 国 南 北 沿 海 的 较 大 型 经 济 贝 类, 别 名 蛤 剌, 沙 蛤 沙 蜊, 白 蚬 子 等 四 角 蛤 蜊 肉 质 细 嫩 鲜 美, 蛋 白 含 量 高, 贝 壳 和 软 体 部 均 可 入 药 现 代 研 究 发 现, 蛤 蜊 中 含 有 类 胡 萝 卜 素 不 饱 和 脂 肪 酸 牛 磺 酸 多 糖 多 肽 等 多 种 生 物 活 性 成 分, 具 有 抗 肿 瘤 抗 凝 血 保 护 心 血 管 抗 菌 和 抗 病 毒 等 药 理 作 用, 是 一 种 具 有 广 泛 开 发 前 景 的 药 源 江 苏 省 沿 海 海 岸 类 型 多 样 滩 涂 面 积 广 大, 滩 涂 海 洋 生 物 资 源 十 分 丰 富, 其 中 四 角 蛤 蜊 文 蛤 等 贝 类 资 源 尤 为 突 出 由 于 多 数 滩 涂 为 粉 沙 质 滩, 比 较 适 合 四 角 蛤 蜊 的 生 长 繁 殖, 每 年 我 省 的 四 角 蛤 蜊 产 量 巨 大 ( 可 达 8.5 万 吨 ), 约 占 全 国 的 1/3 但 是, 因 为 加 工 技 术 落 后, 目 前 我 省 养 殖 的 四 角 蛤 蜊 主 要 用 于 水 产 市 场 鲜 售 或 作 为 其 他 一 些 经 济 价 值 较 高 动 物 的 鲜 活 饵 料, 加 工 开 发 成 产 品 的 仅 占 总 产 量 的 5% 四 角 蛤 蜊 资 源 正 期 待 着 高 科 技 含 量 的 加 工 技 术, 以 使 其 得 到 充 分 的 利 用 本 课 题 项 目 来 源 于 国 家 海 洋 公 益 性 行 业 科 研 专 项 四 角 蛤 蜊 深 加 工 功 能 性 保 健 品 的 研 究 开 发 以 中 医 药 理 论 为 指 导, 致 力 于 对 四 角 蛤 蜊 进 行 深 加 工 医 药 产 品 开 发, 促 使 这 一 特 有 的 海 洋 生 物 资 源 高 值 利 用, 带 动 沿 海 经 济 和 海 洋 医 药 产 业 的 发 展 本 草 纲 目 记 载 : 蛤 蜊 肉 润 五 脏, 止 消 渴, 开 胃, 解 酒 毒, 具 有 滋 阴 利 水 化 痰 软 坚 的 功 效, 可 用 于 消 渴 水 肿 痰 积 癖 块 瘿 瘤 崩 漏 带 下 等, 现 代 中 医 食 疗 方 多 将 蛤 蜊 肉 用 于 糖 尿 病 的 治 疗 近 年 来 糖 尿 病 在 我 国 的 发 病 率 呈 逐 年 递 增 的 趋 势, 日 益 成 为 继 癌 症 和 心 血 管 疾 病 之 后 的 人 类 健 康 第 三 大 杀 手, 市 场 对 降 血 糖 保 健 品 的 需 求 日 见 迫 切 本 课 题 结 合 市 场 实 际, 以 中 医 应 用 蛤 蜊 的 功 效 主 治 为 指 导, 以 降 血 糖 作 用 为 切 入 点, 对 四 角 蛤 蜊 进 行 了 降 血 糖 药 效 学 筛 选 和 相 关 成 分 的 化 学 研 究 根 据 中 医 用 药 的 特 点, 结 合 成 分 预 试 验 结 果, 采 用 水 煎 煮 后 乙 醇 沉 淀 至 一 定 浓 度 的 工 艺, 初 步 将 四 角 蛤 蜊 分 成 醇 沉 粗 多 糖 水 溶 性 浸 膏 和 药 渣 三 个 部 位 通 过 整 体 药 效 实 验 模 型, 筛 选 出 四 角 蛤 蜊 降 血 糖 的 有 效 部 位 是 醇 沉 粗 多 糖 进 一 步 的 实 验 阐 明 了 四 角 蛤 蜊 醇 沉 粗 多 糖 的 时 效 关 系, 为 了 追 踪 四 角 蛤 蜊 降 血 糖 的 主 要 活 性 成 分, 将 脱 蛋 白 后 的 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 和 四 角 蛤 蜊 粗 多 糖 折 算 成 糖 含 量 相 近 的 剂 量 给 药, 同 时 进 行 了 降 血 糖 活 性 研 究, 结 果 显 示 四 角 蛤 蜊 精 多 糖 具 有 降 血 糖 作 用, 进 一 步 说 明 四 角 蛤 蜊 软 体 中 的 多 糖 类 成 分 是 其 降 血 糖 的 主 要 活 性 部 位, 为 后 期 产 品 开 发 的 功 效 验 证 奠 定 了 基 础 在 化 学 方 面, 测 定 了 四 角 蛤 蜊 多 糖 的 某 些 特 殊 基 团 含 量, 采 用 732 阳 离 子 树 脂 柱 和 1

14 前 言 DE-52 纤 维 素 柱 进 一 步 分 离 纯 化 蛤 蜊 多 糖, 并 对 分 离 得 到 的 均 质 多 糖 MVPS-1 和 MVPS-2 进 行 了 单 糖 组 成 分 析 元 素 分 析 分 子 量 测 定 和 红 外 核 磁 共 振 光 谱 分 析, 这 可 为 后 期 四 角 蛤 蜊 多 糖 的 结 构 阐 明, 构 效 关 系 和 降 血 糖 作 用 机 理 的 研 究 奠 定 基 础 2

15 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 第 一 章 文 献 综 述 第 一 节 四 角 蛤 蜊 药 用 的 研 究 进 展 四 角 蛤 蜊 (Mactra veneriformis ) 属 于 软 体 动 物 门 (Mollusca ), 瓣 鳃 纲 (Lamellibranchia), 真 瓣 鳃 目 (Eulamellibranchia), 蛤 蜊 科 (Mactridae) [1], 是 一 种 广 泛 分 布 于 我 国 南 北 各 海 区 的 较 大 型 经 济 贝 类 四 角 蛤 蜊 肉 质 细 嫩 鲜 美 营 养 丰 富, 沿 海 群 众 历 有 食 用 习 惯 ; 其 贝 壳 和 软 体 部 均 可 入 药, 是 具 有 研 究 开 发 潜 力 的 药 用 海 洋 生 物 近 年 来, 随 着 现 代 科 学 技 术 的 进 步 和 人 们 对 海 洋 湖 沼 资 源 认 识 的 提 高, 海 洋 湖 沼 药 物 的 研 究 开 发 逐 步 深 入, 已 成 为 新 药 研 发 的 热 点 之 一 [2] 对 四 角 蛤 蜊 进 行 药 学 研 究 和 产 品 开 发 可 以 充 分 利 用 我 国 丰 富 的 海 洋 生 物 资 源, 造 福 人 民 健 康, 具 有 重 要 的 意 义 第 一 小 节 历 史 记 载 蛤 蜊, 蛤 类 之 利 于 人 者, 故 名 自 古 各 地 有 多 种 名 称 : 蛤 梨 ( 淮 南 子 高 诱 注 ), 蛤 剌 ( 尔 雅 义 疏 ), 吹 潮 ( 动 物 学 大 辞 典 ), 沙 蛤 沙 蜊 ( 泉 州 本 草 ), 白 蚬 子 白 蚶 子 ( 中 国 药 用 动 物 志 ) [3] 等 蛤 蜊 药 用 始 载 于 梁 代 药 书 本 草 经 集 注, 继 后 历 代 本 草 均 有 收 载 宋 代 嘉 祐 本 草 中 记 载 蛤 蜊 肉 润 五 脏, 止 消 渴, 开 胃, 解 酒 毒 主 老 癖 能 为 寒 热 者, 及 妇 人 血 块, 宜 煮 食 之 唐 代 药 书 本 草 拾 遗 中 陈 藏 器 曰 : 此 物 性 虽 冷, 乃 与 丹 石 相 反, 服 丹 石 人 食 之, 令 腹 结 痛 此 后 诸 多 本 草 皆 述 及 了 服 丹 石 人 不 可 食 这 一 理 论 另 外, 医 林 纂 要 中 记 载 蛤 蜊 肉 功 同 蚌 蚬, 滋 阴 明 目 蛤 蜊 壳 经 炭 火 烧 煅 后 研 细 成 粉 是 为 蛤 蜊 粉 本 草 纲 目 记 载 蛤 蜊 粉 清 热 利 湿, 化 痰 饮, 定 喘 嗽, 止 呕 逆, 消 浮 肿, 利 小 便, 止 遗 精 白 浊, 心 脾 疼 痛, 化 积 块, 解 结 气, 消 瘿 核, 散 肿 毒, 治 妇 人 血 病 油 调, 涂 汤 火 伤 黄 宫 绣 本 草 求 真 中 记 载 : 蛤 蜊 粉 专 入 肾, 兼 入 肺 肝 清 人 杨 时 泰 在 本 草 述 钩 元 中 也 阐 述 了 肾 主 水 液, 而 痰 为 水 液 所 化, 病 于 湿 者 更 切 也 的 观 点, 强 调 了 蛤 蜊 粉 专 入 肾 经 的 功 效 第 二 小 节 形 态 结 构 与 生 态 习 性 1 形 态 结 构 四 角 蛤 蜊 贝 壳 坚 厚, 略 呈 四 角 形 两 壳 极 膨 胀, 壳 顶 突 出, 位 于 背 缘 中 央 稍 靠 前 方, 尖 端 向 前 弯 贝 壳 具 外 皮, 顶 部 白 色, 幼 小 个 体 呈 淡 紫 色, 边 缘 为 黄 褐 色, 腹 缘 常 有 一 条 很 窄 的 黑 色 镶 边 生 长 线 明 显, 形 成 凹 凸 不 平 的 同 心 环 纹 贝 壳 内 面 白 色, 略 具 光 泽 铰 合 部 宽 大, 左 壳 具 1 枚 分 叉 的 主 齿, 右 壳 具 2 枚 排 列 成 八 字 形 的 主 齿 外 韧 带 不 发 达, 呈 褐 色 膜 状 ; 内 韧 带 极 发 达, 呈 黄 褐 色, 三 角 形 闭 壳 肌 痕 明 显, 前 闭 壳 肌 痕 稍 3

16 第 一 章 文 献 综 述 小, 呈 卵 圆 形 ; 后 闭 壳 肌 痕 稍 大, 近 圆 形 外 套 膜 痕 清 楚, 接 近 腹 缘 四 角 蛤 蜊 内 部 由 左 右 外 膜 附 着 壳 内 面 包 围 整 个 肉 体 形 成 外 套 腔 外 套 膜 分 边 缘 中 央 两 部 分 : 边 缘 部 分 肌 肉 发 达, 较 肥 厚 ; 中 央 部 分 薄 而 透 明 外 套 膜 在 后 端 腹 侧 着, 形 成 两 个 水 管 体 中 部 稍 后 方 左 右 两 侧 有 两 个 鳃 瓣, 鳃 前 方 左 右 各 有 两 片 唇 瓣 唇 瓣 之 间 为 口 外 套 腔 偏 前 方 有 一 略 呈 扁 形 的 内 脏 块, 腹 面 为 呈 斧 刀 状 的 足 2 生 态 习 性 四 角 蛤 蜊 栖 息 在 水 流 畅 通, 饲 料 较 丰 富 的 近 河 口 浅 海 处, 主 要 分 布 在 潮 间 带 中 下 区, 埋 栖 在 5~10 厘 米 的 泥 沙 底, 栖 息 的 滩 质 主 要 以 直 径 0.09~0.015mm 的 细 沙 为 主 [4] 项 [5] 福 椿 对 四 角 蛤 蜊 喜 栖 滩 质 进 行 过 筛 测 试, 结 果 显 示 粉 砂 和 细 沙 约 占 80% 左 右, 粘 土 约 占 3~6% 四 角 蛤 蜊 属 滤 食 性 动 物, 食 物 组 成 主 要 是 藻 类 ; 其 摄 食 没 有 选 择 性, 流 入 外 套 腔 内 的 小 型 营 养 物 质 都 能 成 为 它 的 食 料 四 角 蛤 蜊 是 广 盐 广 温 性 贝 类, 对 水 温 的 适 应 范 围 6~35, 最 适 水 温 18~30 ; 对 盐 度 的 适 应 范 围 在 l6~34.5 之 间, 最 适 盐 度 是 21.5 [4] 四 角 蛤 蜊 的 生 长 具 有 较 明 显 的 季 节 性, 春 夏 季 生 长 较 快, 其 中 夏 季 水 温 25~28 时 是 它 的 快 速 生 长 期, 秋 冬 季 生 长 缓 慢 四 角 蛤 蜊 3 龄 前 个 体 生 长 较 快,1 龄 个 体 生 长 最 快,3 龄 个 体 生 长 最 为 缓 慢, 生 长 速 度 为 :1 龄 贝 >2 龄 贝 >3 龄 贝 [6] 四 角 蛤 蜊 在 我 国 南 北 各 海 区 均 有 分 布, 以 辽 宁 山 东 及 江 苏 的 连 云 港 南 通 沿 海 产 量 最 多 在 南 北 各 海 [4] 域, 四 角 蛤 蜊 的 生 长 繁 殖 盛 期 有 所 不 同 赵 匠 测 定 天 津 海 区 四 角 蛤 蜊 鲜 出 肉 率 的 结 [7] 果 显 示, 五 月 初 软 体 部 最 丰 满, 鲜 出 肉 率 可 达 41.1% 董 景 岳 等 计 算 山 东 东 营 一 带 海 [8] 区 四 角 蛤 蜊 肥 满 度 的 峰 值 出 现 在 5 月 中 旬 和 7 月 下 旬 崔 广 法 测 定 江 苏 如 东 海 区 四 角 蛤 [6] 蜊 肥 满 度 的 最 高 值 出 现 在 4 月 15~17 日 张 汉 华 等 计 算 广 东 汕 尾 海 区 四 角 蛤 蜊 肥 满 度, 最 高 则 出 现 在 10 月 份, 最 低 出 现 在 5 月 份 第 三 小 节 化 学 成 分 及 现 代 药 理 学 研 究 1 一 般 组 成 含 量 四 角 蛤 蜊 贝 壳 含 90% 以 上 碳 酸 钙, 为 正 交 晶 系, 文 石 结 构 ; 另 含 少 量 壳 角 蛋 白, 由 多 种 氨 基 酸 组 成 [9], 还 含 有 少 量 锰 镁 铁 钛 锆 钠 钾 锶 钡 及 微 量 钼 钇 银 镍 等 [10] [11] 白 石 淳 测 定 了 1992 年 3 月 ~1993 年 2 月 在 日 本 福 冈 县 采 集 的 四 角 蛤 蜊 全 软 体 部 一 般 成 分, 求 得 年 平 均 值, 水 分 82.4%, 灰 分 2.2%, 蛋 白 质 13.2%, 脂 质 0.9%, 碳 [12] 水 化 合 物 2.6% 陶 平 等 对 大 连 沿 海 四 角 蛤 蜊 软 体 部 的 无 机 营 养 元 素 进 行 测 定,K 为 2.11 mg/g( 干 重, 以 下 皆 是 ),Na 为 mg/g,ca 为 0.60 mg/g,mg 为 5.52 mg/g,p 为 1.92 mg/g, Mn 为 mg/g,cu 为 mg/g,fe 为 mg/g,co 为 1.84 mg/g,zn 为 mg/g 2 牛 磺 酸 [13] 四 角 蛤 蜊 的 软 体 中 有 较 高 含 量 的 牛 磺 酸, 谭 乐 义 等 测 得 蛤 蜊 中 牛 磺 酸 的 含 量 为 4

17 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 [14] 2110mg/kg 李 和 生 等 以 蛤 蜊 为 原 料, 通 过 正 交 试 验 研 究 自 溶 破 壁 水 提 取 的 条 件, 使 牛 磺 酸 溶 出 结 果 表 明, 蛤 蜊 的 最 适 水 提 取 条 件 是 温 度 45 ph5.5 时 间 24 小 时 提 取 液 去 除 杂 质 纯 化 后 浓 缩 结 晶, 最 后 干 燥 得 到 成 品, 牛 磺 酸 得 率 为 0.49% 牛 磺 酸 是 一 种 对 人 体 极 为 重 要 的 含 硫 必 需 氨 基 酸, 具 有 保 护 心 肌 [15] [16] 肝 脏 和 降 血 压 [17] 降 血 糖 [18] [19] 抗 氧 化 提 高 机 体 免 疫 功 能 等 作 用, 是 新 生 儿 大 脑 发 育 的 必 需 物 质 牛 磺 酸 还 是 维 持 视 网 膜 及 视 觉 功 能 的 物 质, 婴 幼 儿 缺 乏 它 时, 视 网 膜 色 素 上 皮 出 现 弥 散 性 颗 粒, 视 网 膜 电 图 (ERG) 异 常 [20] 3 脂 肪 酸 [21] 何 方 奕 等 以 无 水 乙 醚 为 溶 剂 提 取 蛤 蜊 油, 经 皂 化 和 甲 酯 化 后 利 用 GC/MS 技 术 对 其 脂 肪 酸 组 成 进 行 了 分 析 和 鉴 定, 共 分 离 鉴 定 出 15 种 脂 肪 酸, 占 总 脂 肪 酸 含 量 的 89.76% 其 中 饱 和 脂 肪 酸 7 种, 占 脂 肪 酸 总 含 量 的 50.77%, 以 十 六 烷 酸 ( 软 脂 酸 ) 和 十 八 烷 酸 ( 硬 脂 酸 ) 为 主 ; 不 饱 和 脂 肪 酸 8 种, 占 脂 肪 酸 总 含 量 的 38.99%, 以 二 十 碳 五 烯 酸 (EPA) [22] 9- 十 六 碳 烯 酸 和 11- 二 十 碳 烯 酸 为 主 李 太 武 等 的 研 究 结 果 表 明, 在 八 种 常 见 贝 类 脂 [23] 肪 酸 中 蛤 蜊 的 二 十 碳 五 烯 酸 (EPA) 含 量 最 高, 占 脂 肪 酸 总 含 量 的 31.71% Surh 等 报 道 了 12 种 韩 国 习 见 贝 类 脂 肪 酸 组 成 的 季 节 差 异 一 年 中 四 角 蛤 蜊 体 内 总 脂 肪 酸 含 量 的 最 高 值 出 现 在 6 月, 为 2.72g/100g; 而 EPA 的 最 高 值 出 现 在 3 月,DHA 的 最 高 值 出 现 在 5 月 和 10 月 ; 多 不 饱 和 脂 肪 酸 (PUFA) 和 饱 和 脂 肪 酸 (SFA) 的 比 值 (P/S) 最 大 值 出 现 在 5 月 4 凝 集 素 及 其 他 [24] 陈 寅 山 等 还 报 道 了 四 角 蛤 蜊 等 贝 类 凝 集 素 的 活 性, 四 角 蛤 蜊 的 凝 集 素 对 人 的 AB 型 血 红 细 胞 具 有 凝 血 活 性, 所 需 浓 度 只 有 mg L -1 其 凝 集 活 性 在 90 10min 热 处 [25] 理 后, 仍 对 兔 红 细 胞 有 凝 集 活 性, 显 示 出 较 高 的 热 稳 定 性 肖 静 等 从 四 角 蛤 蜊 肌 肉 中 获 得 凝 集 素 粗 提 液, 用 人 的 四 种 血 型 红 细 胞 和 三 种 动 物 红 细 胞 检 测 其 凝 集 活 性, 结 果 显 [26] 示 四 角 蛤 蜊 来 源 的 凝 集 素 粗 提 液 对 供 试 的 7 种 红 细 胞 全 部 具 有 凝 集 活 性 另 外, 胡 宏 等 提 示 了 四 角 蛤 蜊 的 乙 酸 乙 酯 部 分 对 铜 绿 假 单 胞 菌 有 较 强 的 抑 菌 作 用 第 四 小 节 应 用 与 展 望 1 应 用 蛤 蜊 是 一 种 药 食 两 用 贝 类, 民 间 早 有 食 用 历 史 北 魏 贾 思 勰 的 齐 民 要 术 中 记 载 了 烤 蛤 蜊 的 方 法, 清 朝 袁 枚 的 随 园 食 单 中 有 韭 菜 炒 蛤 蜊 肉 及 制 汤 的 记 述 中 医 认 为 蛤 蜊 肉 性 寒, 味 甘 微 咸, 具 滋 阴 利 水 化 痰 软 坚 的 功 效, 可 用 于 消 渴 水 肿 痰 积 癖 块 瘿 瘤 崩 漏 带 下 痔 疮 等 [10] ; 蛤 蜊 肉 一 般 单 方 煮 食 或 与 其 他 药 物 组 成 丸 剂, 蛤 蜊 肉 单 方 :1. 治 贫 血, 慢 性 肝 炎, 水 肿, 小 便 不 利 蛤 蜊 肉 50~100g, 煮 食 [27] 2. 治 肺 5

18 第 一 章 文 献 综 述 结 核, 阴 虚 盗 汗 蛤 蜊 肉 适 量, 加 韭 菜 煮 食 [28] 3. 治 糖 尿 病 蛤 蜊 肉 炖 熟 食 用,1 日 3 次 [29] 蛤 蜊 肉 组 方 :1. 地 方 性 甲 状 腺 肿 平 甲 灵 片 由 昆 布 海 藻 牡 蛎 蛤 蜊 穿 山 甲 等 七 味 药 组 成, 用 于 单 纯 性 甲 状 腺 肿 大 疗 效 明 显 [30] 2. 治 痈 疔 痘 毒 集 听 方 中 载 一 捻 金 方 用 到 乳 香 雄 黄 血 竭 没 药 蟾 酥 蛤 蜊 肉 等, 治 疗 一 切 痈 疽 肿 毒 初 起 蛤 蜊 粉 性 寒, 味 咸, 具 清 热 利 湿 化 痰 软 坚 的 功 效, 可 用 于 痰 饮 咳 喘, 水 气 浮 肿, 胃 痛 呕 逆, 白 浊, 崩 中 带 下, 瘿 瘤, 烫 伤, 胃 及 十 二 指 肠 溃 疡 等 [10] 蛤 蜊 粉 可 入 丸 散 或 煎 汤 : 1. 痰 火 型 咳 喘 蛤 蜊 壳 适 量, 放 火 上 烧 焙 去 火 毒, 研 粉, 加 适 量 炒 面 糊, 水 泛 为 丸 如 黄 豆 大, 日 服 3 次, 每 次 6~10 丸 2. 小 便 不 通 蛤 蜊 粉 15g 大 麻 根 15g, 捣 罗 为 散, 每 次 6g, 每 日 饭 前 服 3 次 3. 胃 脘 痛 蛤 蜊 粉, 香 附 各 等 量, 共 捣 罗 成 细 粉, 每 次 9g, 日 服 3 次 [31] 4. 烫 伤 蛤 蜊 粉, 茶 油 调 敷 5. 慢 性 支 气 管 炎 蛤 蜊 粉 10 份, 青 黛 1 份, 做 成 蜜 丸, 每 次 15g, 早 晚 各 1 次 6. 遗 精 蛤 蜊 粉 ( 煅 )500g, 五 味 子 200g, 山 茱 萸 100g, 研 细 末, 白 水 和 丸 梧 子 大 每 服 10 丸, 空 腹 温 酒 下,1 日 2 次 [32] 7. 鼻 衄, 齿 衄, 出 血 性 紫 癜 蛤 粉 30g, 槐 花 15g, 炒 焦 研 末, 混 合, 每 次 3g, 一 日 3 次 [33] 2 展 望 四 角 蛤 蜊 是 我 国 近 海 滩 涂 底 栖 贝 类 的 主 要 品 种, 分 布 广 泛, 资 源 丰 富, 有 着 很 大 的 开 发 潜 力 目 前 对 四 角 蛤 蜊 的 研 究 主 要 集 中 在 繁 殖 生 物 学 增 养 殖 技 术 和 食 品 加 工 等 方 面 ; 重 金 属 积 累 寄 生 虫 病 分 子 遗 传 特 征 等 也 有 零 星 报 道, 但 有 关 四 角 蛤 蜊 软 体 部 化 学 成 分 和 活 性 物 质 的 研 究 却 并 不 多 见 21 世 纪 是 海 洋 药 物 的 世 纪 在 开 发 海 洋 湖 沼 资 源, 创 建 中 国 蓝 色 药 业 战 略 设 想 的 指 引 下, 结 合 现 代 科 技 手 段, 以 中 医 药 理 论 为 指 导, 对 四 角 蛤 蜊 软 体 部 位 进 行 活 性 成 分 研 究 与 医 药 类 产 品 的 研 发 必 将 大 有 作 为 第 二 节 降 血 糖 多 糖 的 研 究 进 展 糖 尿 病 (diabetes mellitus) 是 一 组 以 慢 性 血 糖 水 平 增 高 为 特 征 的 代 谢 疾 病 群 高 血 糖 是 由 于 胰 岛 素 分 泌 缺 陷 和 ( 或 ) 胰 岛 素 作 用 缺 陷 而 引 起 除 碳 水 化 合 物 外, 尚 有 蛋 白 质 脂 肪 代 谢 异 常 久 病 可 引 起 多 系 统 损 害, 导 致 眼 肾 神 经 心 脏 血 管 等 组 织 的 慢 性 进 行 性 病 变, 引 起 功 能 缺 陷 及 衰 竭 [34] 目 前 全 球 患 者 已 逾 1 亿, 其 中 国 内 患 者 约 3000 万, 仅 次 于 美 国, 位 居 世 界 第 二 一 般 认 为, 糖 尿 病 与 遗 传 环 境 病 毒 感 染 肥 胖 种 族 营 养 物 质 代 谢 失 衡 以 及 内 分 泌 失 调 等 因 素 有 关 糖 尿 病 只 要 分 为 两 大 类,1 型 糖 尿 病 和 2 型 糖 尿 病 1 型 糖 尿 病 (T1DM) 主 要 表 现 为 胰 岛 B 细 胞 受 到 破 坏, 血 中 胰 岛 素 缺 乏, 但 对 胰 岛 素 仍 然 敏 感, 需 长 期 应 用 胰 岛 素 治 疗 2 型 糖 尿 病 (T2DM) 主 要 表 现 为 : (1) 胰 岛 B 细 胞 功 能 缺 陷, 如 胰 岛 素 分 泌 绝 对 量 不 足 胰 岛 素 分 泌 方 式 异 常 胰 岛 素 基 因 突 变 合 成 无 生 物 活 性 结 构 异 常 的 胰 岛 素 胰 淀 素 分 泌 异 常 (2)A 细 胞 在 2 型 糖 尿 病 时 呈 现 胰 升 糖 素 分 泌 增 加 从 而 促 进 氨 基 酸 及 游 离 脂 肪 酸 转 化 为 葡 萄 糖, 拮 抗 胰 岛 素, 增 6

19 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 加 肝 糖 产 生 及 输 出, 因 而 血 糖 升 高 (3) 胰 岛 功 能 失 调 2 型 糖 尿 病 对 胰 岛 素 敏 感 性 下 降, 多 数 患 者 不 需 要 长 期 使 用 胰 岛 素 治 疗 维 持 生 命 中 医 称 糖 尿 病 为 消 渴 症 近 年 来, 中 医 药 治 疗 糖 尿 病 逐 渐 被 国 外 研 究 学 者 认 可, 对 改 善 糖 尿 病 患 者 的 自 觉 症 起 到 了 相 当 重 要 的 作 用 李 时 珍 在 本 草 纲 目 第 三 卷 论 消 渴 应 用 单 味 中 药 治 疗, 共 记 载 187 种 [35] 根 据 消 渴 的 辨 证 论 治 的 疗 法 分 为 生 津 润 燥 类, 如 栝 楼 生 葛 根 白 芍 等 ; 降 火 清 金 类, 如 麦 门 冬 黄 连 桑 白 皮 茯 苓 等 ; 补 虚 滋 阴 类, 如 知 母 人 参 黄 芪 等 目 前 对 降 糖 中 药 化 学 结 构 的 研 究 发 现, 除 小 分 子 化 合 物, 如 萜 类 黄 酮 类 甾 体 类 和 生 物 碱 等 外, 大 分 子 化 合 物 如 多 糖 类 均 有 降 血 糖 作 用 多 糖 作 为 高 等 植 物 动 物 细 胞 膜 微 生 物 的 细 胞 壁 中 一 类 具 有 广 泛 生 物 活 性 的 天 然 生 物 大 分 子, 是 生 命 有 机 体 的 重 要 构 成 成 分, 是 维 持 生 命 必 不 可 少 的 结 构 材 料, 某 些 特 定 结 构 的 多 糖 有 显 著 的 降 血 糖 作 用 第 一 小 节 天 然 产 物 来 源 的 降 血 糖 多 糖 1 真 菌 类 多 糖 [36] 银 耳 多 糖 Tadashi Kiho 等 从 银 耳 中 分 离 出 一 种 酸 性 杂 多 糖 (TAP), 由 甘 露 糖 木 糖 葡 萄 糖 醛 酸 和 葡 萄 糖 组 成, 摩 尔 比 为 4:2:1:0.3 腹 腔 注 射 TAP50 mg/kg 能 显 著 增 加 正 常 小 鼠 和 ddy 糖 尿 病 小 鼠 葡 萄 糖 激 酶 己 糖 激 酶 葡 萄 糖 -6- 磷 酸 脱 氢 酶 的 活 性, 降 低 葡 萄 糖 -6- 磷 酸 酶 和 血 浆 胆 固 醇 水 平 提 示 TAP 降 血 糖 作 用 可 能 是 由 于 加 速 肝 脏 的 代 谢 TAP 无 促 进 胰 岛 素 分 泌 作 用 [37] 薛 惟 建 等 研 究 了 银 耳 孢 子 多 糖 对 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 高 血 糖 的 预 防 作 用, 结 果 表 明 银 耳 孢 子 多 糖 灌 胃 mg/kg 对 正 常 小 鼠 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 均 有 降 血 糖 作 用 灌 胃 300 mg/kgtap 对 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 有 明 显 预 防 作 用 冬 虫 夏 草 多 糖 Tadashi Kiho [38,39] 等 从 培 养 的 冬 虫 夏 草 菌 丝 体 中 提 取 两 种 杂 多 糖 CS-F10 和 CS-F30,CS-F10 由 半 乳 糖 葡 萄 糖 和 甘 露 糖 组 成, 摩 尔 比 为 43:33:24, 分 子 量 为 15000,CS-F30 单 糖 组 成 同 CS-F10, 但 摩 尔 比 为 62:28:10 二 者 腹 腔 注 射 50 mg/kg 能 显 著 降 低 正 常 小 鼠 和 链 脲 佐 菌 素 肾 上 腺 素 所 致 的 糖 尿 病 小 鼠 的 血 糖, 显 著 增 加 肝 脏 葡 萄 糖 激 酶 的 活 性, 降 低 肝 脏 葡 萄 糖 输 出, 显 著 降 低 促 葡 萄 糖 转 化 同 工 酶 -2(GLUT-2) 提 示 CS-F10 和 CS-F30 能 加 速 葡 萄 糖 代 谢 影 响 肝 脏 葡 萄 糖 输 入 和 输 出 同 时 CS-F30 还 能 降 低 血 中 甘 油 三 酯 和 胆 固 醇 的 水 平 人 工 虫 草 多 糖 [40] (PCS) 在 600mg/kg 剂 量 下 连 续 灌 胃 给 药 7d, 能 显 著 降 低 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 的 空 腹 血 糖 和 糖 化 血 清 蛋 白 含 量, 增 强 糖 尿 病 小 鼠 的 负 荷 糖 耐 量, 促 进 胰 岛 素 抵 抗 脂 肪 组 织 的 葡 萄 糖 摄 取 可 能 是 其 降 糖 作 用 机 制 之 一 [41] 灵 芝 多 糖 Hiroshi Hikino 等 从 灵 芝 中 分 离 一 种 多 糖 ganoderan B, 分 子 量 为 7400, 7

20 第 一 章 文 献 综 述 化 学 结 构 为 β-1-3 和 β-1-6 连 接 的 吡 喃 葡 萄 糖 腹 腔 注 射 ganoderan B 30mg/kg 可 显 著 降 低 血 糖, 增 加 肝 脏 葡 萄 糖 激 酶 磷 酸 果 糖 激 酶 葡 萄 糖 -6- 磷 酸 脱 氢 酶, 降 低 肝 脏 葡 萄 糖 -6- 磷 酸 酶 和 糖 异 生 合 成 酶 的 活 性, 对 己 糖 激 酶 糖 异 生 磷 酸 化 酶 无 影 响 ganoderan B 降 低 肝 糖 原 含 量, 但 不 影 响 血 浆 和 肝 脏 中 胆 固 醇 和 甘 油 三 酯 的 含 量 实 验 结 果 提 示 ganoderan B 能 加 速 肝 葡 萄 糖 代 谢, 提 高 血 浆 中 胰 岛 素 水 平, 加 速 外 周 组 织 对 葡 萄 糖 的 利 用 [42] 黑 木 耳 多 糖 Zuomin Yuan 等 从 黑 木 耳 中 提 取 水 溶 性 多 糖 FA, 研 究 对 KK-Ay 糖 尿 病 小 鼠 降 血 糖 作 用 实 验 结 构 表 明 FA 加 入 基 本 饲 料 中, 每 天 按 剂 量 200 mg/kg 给 药 能 明 显 降 低 血 糖 胰 岛 素 尿 糖 和 食 物 的 摄 入 量 ; 提 高 葡 萄 糖 耐 量 和 肝 糖 原 量 2 海 藻 多 糖 [43] 羊 栖 菜 多 糖 王 兵 等 从 羊 栖 菜 中 提 取 粗 多 糖 SFP, 腹 腔 注 射 SFP mg/kg 对 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 有 明 显 降 血 糖 作 用 ; 能 增 强 糖 尿 病 小 鼠 的 负 荷 糖 耐 量 实 验 还 显 示, 糖 尿 病 小 鼠 血 液 以 及 胰 腺 中 过 氧 化 脂 质 含 量 明 显 高 于 正 常 组, 从 而 破 坏 细 胞 膜 和 亚 细 胞 膜 的 结 构, 损 伤 膜 上 受 体 和 膜 运 输 功 能 脂 质 过 氧 化 物 的 分 解 产 物, 如 丙 二 醛 (MDA) 可 引 起 蛋 白 质 分 子 内 和 分 子 间 交 联 并 导 致 DNA 断 裂, 染 色 体 畸 变 SFP 有 明 显 降 低 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 血 液 及 胰 腺 组 织 中 过 高 的 MDA 的 作 用, 表 明 降 血 糖 作 用 与 其 抗 氧 化 损 伤 胰 岛 细 胞 有 密 切 关 系 SFP 对 正 常 小 鼠 的 血 糖 无 明 显 影 响, 说 明 降 血 糖 作 用 不 是 通 过 刺 激 胰 岛 素 分 泌 实 现 的 [44] 海 带 多 糖 李 福 川 等 从 海 带 中 提 取 三 种 多 糖 : 粗 多 糖 岩 藻 半 乳 多 糖 硫 酸 酯 (FGS) FGS 中 的 均 一 多 糖 F 4, 这 三 种 多 糖 纯 度 逐 渐 增 高 从 降 血 糖 作 用 看, 短 期 口 服 FGS 对 正 常 小 鼠 和 糖 尿 病 小 鼠 无 明 显 降 糖 作 用, 但 长 期 口 服 有 效, 且 强 于 粗 多 糖 腹 腔 注 射 F 4, 剂 量 为 30 mg/kg 即 有 快 速 明 显 降 糖 作 用, 提 示 纯 度 增 高 活 性 增 强 [45] 紫 菜 多 糖 周 慧 萍 等 从 紫 菜 中 提 取 粗 多 糖 PP, 腹 腔 注 射 50 mg/kg 对 正 常 小 鼠 和 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 有 降 血 糖 作 用 3 植 物 类 多 糖 [46] 人 参 多 糖 Masashi Tomoda 等 从 人 参 中 分 离 一 种 多 糖 panaxan A, 分 子 量 为 14000, 化 学 结 构 为 α-(1 6) 连 接 的 D- 吡 喃 葡 萄 糖,C-3 有 分 枝 点 panaxan A 腹 腔 注 射 能 显 著 降 低 正 常 小 鼠 和 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 血 糖 [47] Chohachi Konno 等 从 人 参 中 分 离 四 种 多 糖 panaxan A B C D, 酸 水 解 得 到 葡 萄 糖 和 一 定 数 量 的 氨 基 酸 腹 腔 注 射 mg/kg 均 能 显 著 降 低 正 常 小 鼠 和 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 血 糖 [48] 麦 冬 多 糖 杨 明 等 研 究 麦 冬 多 糖 GH 1 降 血 糖 作 用, 证 实 GH 1 腹 腔 注 射 皮 下 注 射 50~200 mg/kg 能 明 显 增 强 与 线 粒 体 氧 化 磷 酸 化 作 用 和 反 映 呼 吸 链 中 段 和 末 端 活 性 状 态 8

21 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 的 两 个 重 要 呼 吸 酶 琥 珀 酸 脱 氢 酶 和 细 胞 色 素 氧 化 酶 的 活 性, 从 而 加 速 了 糖 的 有 氧 氧 化 代 谢 过 程 而 降 低 肝 糖 原 作 用 可 能 与 其 抑 制 乳 酸 脱 氢 酶 活 性, 使 乳 酸 减 少 有 关 [49] 陈 卫 辉 等 研 究 口 服 麦 冬 粗 多 糖 降 血 糖 作 用, 结 果 证 实 麦 冬 多 糖 mg/kg 能 显 著 降 低 正 常 小 鼠 四 氧 嘧 啶 和 肾 上 腺 素 所 致 糖 尿 病 小 鼠 的 血 糖, 但 无 量 效 关 系 实 验 结 果 表 明 : 麦 冬 多 糖 可 能 减 弱 四 氧 嘧 啶 对 胰 腺 B 细 胞 的 损 伤 或 改 善 受 损 的 B 细 胞 功 能 ; 肾 上 腺 素 能 促 进 肝 糖 原 的 分 解 而 引 起 血 糖 升 高, 麦 冬 多 糖 能 拮 抗 肾 上 腺 素 的 升 血 糖 作 用, 可 能 与 抑 制 糖 原 分 解 有 关 [50] 知 母 多 糖 王 靖 等 从 知 母 中 提 取 粗 多 糖, 并 进 行 脱 蛋 白, 用 于 降 血 糖 研 究 结 果 表 明 知 母 多 糖 mg/kg 无 论 灌 胃 还 是 腹 腔 给 药, 均 能 减 低 正 常 小 鼠 和 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 的 血 糖, 同 时 降 低 正 常 小 鼠 肝 糖 原 的 含 量, 但 对 小 鼠 总 血 脂 的 影 响 较 小 [51] Michiko Tasahashi 等 从 知 母 中 提 取 4 种 均 一 多 糖 A B C D, 其 中 A 分 子 量 为 , Rha: Aba: Xyl: Gal=0.9: 1.9: 0.1: 1.0;B 分 子 量 为 ,Rha: Aba: Gal: Gly=0.1: 0.5: 1.0: 0.2;C 分 子 量 为 ,Fuc: Aba: Xyl: Gal: Gly=3.4: 15.9: 2.5: 1. 0:1.6;D 分 子 量 为 ,Man: Gly=4.5: 1.0 腹 腔 注 射 这 4 种 多 糖 mg/kg 对 正 常 小 鼠 均 有 降 血 糖 作 用,B 活 性 最 强 [52] 薏 苡 仁 多 糖 徐 梓 辉 等 从 薏 苡 仁 中 分 离 提 取 薏 苡 仁 多 糖 Coixan, 由 鼠 李 糖 阿 拉 伯 糖 甘 露 糖 半 乳 糖 和 葡 萄 糖 组 成, 分 子 量 为 口 服 Coixan mg/kg 对 正 常 小 鼠 无 明 显 降 血 糖 作 用, 腹 腔 注 射 Coixan mg/kg 能 显 著 降 低 正 常 小 鼠 四 氧 嘧 啶 和 肾 上 腺 素 所 致 的 高 血 糖 小 鼠 的 血 糖, 并 呈 量 效 关 系 同 时 薏 苡 仁 多 糖 能 够 降 低 糖 尿 病 大 鼠 血 清 LPO 水 平, 而 对 肝 脏 LPO 影 响 不 大, 并 能 显 著 提 高 糖 尿 病 大 鼠 红 细 胞 与 胰 腺 SOD 活 性, 因 此 薏 苡 仁 多 糖 能 够 对 抗 糖 尿 病 大 鼠 的 脂 质 过 氧 化 对 机 体 的 损 伤 [53] [54] 丹 皮 多 糖 刘 超 等 观 察 了 丹 皮 粗 多 糖 降 血 糖 作 用, 丹 皮 粗 多 糖 灌 胃 mg/kg 能 显 著 降 低 正 常 及 葡 萄 糖 所 致 的 高 血 糖 小 鼠 的 血 糖 在 一 定 范 围 内 有 量 效 关 系, 剂 量 过 高, 效 果 下 降 丹 皮 多 糖 -2b [55] 能 明 显 降 低 糖 尿 病 大 鼠 空 腹 血 糖, 改 善 其 糖 耐 量 异 常 及 血 脂 异 常, 提 高 肝 细 胞 低 亲 和 力 胰 岛 素 受 体 最 大 接 和 容 量, 能 使 胰 岛 素 敏 感 性 指 数 增 加 实 验 证 明 丹 皮 多 糖 -2b 对 T2DM 大 鼠 模 型 有 明 显 的 治 疗 作 用, 其 降 糖 机 制 与 提 高 胰 岛 素 受 体 数 目 有 关 [56] 南 瓜 多 糖 熊 学 敏 等 将 南 瓜 粗 多 糖 拌 入 饲 料 中 空 腹 喂 饲,6.88 g/kg 连 续 喂 养 21 天, 能 降 低 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 大 鼠 的 血 糖, 且 效 果 优 于 消 渴 丸 9

22 第 一 章 文 献 综 述 4 动 物 类 多 糖 [57] 泥 鳅 多 糖 钦 传 光 等 的 研 究 表 明 一 定 剂 量 的 泥 鳅 多 糖 能 明 显 降 低 四 氧 嘧 啶 和 链 脲 佐 菌 素 糖 尿 病 小 鼠 的 血 糖 同 时, 泥 鳅 多 糖 还 能 明 显 降 低 四 氧 嘧 啶 和 链 脲 佐 菌 素 糖 尿 病 小 鼠 血 清 总 胆 固 醇 甘 油 三 酯 和 低 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 实 验 结 果 表 明 泥 鳅 多 糖 具 有 降 血 糖 和 调 节 血 脂 的 双 重 作 用, 其 降 血 糖 作 用 可 能 是 通 过 增 强 机 体 消 除 活 性 氧 自 由 基 的 能 力, 抑 制 自 由 基 对 胰 岛 B 细 胞 的 损 伤, 促 进 胰 岛 B 细 胞 的 修 复 再 生 来 实 现 [58] 扇 贝 多 糖 王 长 云 等 从 海 湾 扇 贝 (Argopecten irradians) 边 中 提 取 分 离 出 一 种 糖 胺 聚 糖, 其 制 品 F3-3-3 的 氨 基 己 糖 含 量 为 22.60%, 总 己 糖 醛 酸 含 量 为 23.20%, 硫 含 量 为 6.66%, 含 氮 量 为 1.68%, 此 外 还 含 有 葡 萄 糖 半 乳 糖 木 糖 岩 藻 糖 及 鼠 李 糖 其 理 化 性 质 与 肝 素 类 似, 生 物 活 性 有 抗 凝 滋 补 功 用 [59] 刺 参 粘 多 糖 刺 参 粘 多 糖 为 氨 基 己 糖, 己 糖 醛 酸 岩 藻 糖 与 硫 酸 酯 基 组 成 的 聚 合 物, 刺 参 酸 性 粘 多 糖 钾 注 射 液, 对 肿 瘤 生 长 有 明 显 抑 制 作 用, 对 心 脑 血 管 等 栓 塞 有 较 好 的 疗 效 [60] 文 蛤 多 糖 蛤 素 是 从 文 蛤 (Meretrix meretrix) 中 提 取 的 多 糖, 具 有 抗 癌 和 调 节 免 疫 的 作 用 研 究 表 明, 可 显 著 抑 制 小 鼠 S180 实 体 瘤 的 生 长 ; 延 长 荷 瘤 小 鼠 的 存 活 时 间, 对 抗 环 磷 酰 胺 (CTX) 造 成 的 各 项 免 疫 指 标 降 低, 使 免 疫 器 官 胸 腺 脾 脏 增 强, 血 清 溶 血 素 水 平 升 高 [61] 第 二 小 节 合 成 和 衍 生 化 的 多 糖 多 糖 的 电 荷 性 质 立 体 结 构 等 性 质 发 生 改 变 可 使 多 糖 生 物 活 性 也 发 生 变 化 改 变 多 糖 电 荷 性 质 立 体 结 构 可 通 过 多 糖 的 降 解 衍 生 化 来 实 现 多 糖 的 衍 生 化 包 括 硫 酸 化 羧 甲 基 化 磷 酸 化 羟 乙 基 化 等 如 Dextran, Heparin 进 行 硫 酸 化 得 到 的 硫 酸 化 衍 生 物 具 有 降 血 糖 活 性 天 然 壳 多 糖 (chitin) 经 过 脱 乙 酰 化 得 chitosan, 其 中 低 分 子 量 ( u) 的 chitosan 具 有 降 血 糖 活 性 [62] 以 上 是 多 糖 引 入 或 脱 去 基 团 来 改 变 多 糖 电 荷 性 质 以 实 现 多 糖 生 物 活 性 的 转 变 多 糖 进 行 部 分 降 解 得 到 新 的 多 糖, 有 的 也 具 有 活 性, 如 银 耳 多 糖 TAP 是 具 有 1,3-α-D- 甘 露 糖 主 链 结 构 的 多 糖, 其 部 分 水 解 产 物 TAP-H 也 具 有 降 血 糖 活 性 [63,64] 第 三 小 节 降 血 糖 机 制 1 型 糖 尿 病 发 病 机 制 包 括 辅 助 性 T 细 胞 (CD 4 TH) 活 性 增 强 和 抑 制 性 T 细 胞 (CD 8 Ts 细 胞 ) 缺 陷 两 方 面, 造 成 免 疫 失 控 和 细 胞 因 子 不 平 衡 分 泌 IL-2,IFN-γ 等 因 子 的 TH1 细 胞 占 优 势, 使 免 疫 反 应 扩 大 而 产 生 1 型 糖 尿 病 2 型 糖 尿 病 主 要 表 现 为 胰 岛 B 细 胞 功 能 缺 陷, 胰 岛 功 能 失 调 等 药 理 研 究 表 明 各 种 多 糖 的 降 血 糖 机 理 有 所 不 同 如 人 参 多 糖 可 引 起 血 糖 肝 糖 原 降 10

23 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 低, 肾 上 腺 的 切 除 对 其 无 影 响, 并 且 人 参 多 糖 可 使 丙 酮 酸 含 量 增 加 以 及 抑 制 乳 酸 脱 氢 酶 活 性, 增 加 琥 珀 酸 脱 氢 酶 和 细 胞 色 素 氧 化 酶 的 活 性, 对 胰 岛 素 释 放 有 促 进 作 用 其 中 灵 芝 多 糖 B 可 增 加 HG ( hepatic glucokinase ) PFK ( phosphofructokinase ) G6PDH ( glucose-6-phosphate dehydrogenase ) 等 酶 的 活 性, 抑 制 HG6P ( hepatic [65] glucose-6-phosphatase),gs(glucogen synthetase) 酶 的 活 性 百 合 多 糖 可 促 进 小 鼠 受 损 细 胞 DNA RNA 合 成, 促 进 胰 腺 中 残 留 的 B 细 胞 代 偿 增 生 以 及 胰 岛 外 分 泌 部 分 的 管 上 皮 细 胞 形 成 新 的 B 胰 岛 细 胞, 增 加 血 浆 中 胰 岛 素, 降 低 血 糖 百 合 多 糖 还 能 修 复 B 胰 岛 细 胞, 增 强 分 泌 胰 岛 素 的 功 能 和 降 低 肾 上 腺 皮 质 激 素 分 泌, 以 促 进 肝 脏 中 血 糖 转 化 为 糖 原 的 联 合 作 用 黄 芪 多 糖 对 血 液 及 肝 糖 原 有 双 向 调 节 作 用, 既 可 保 护 低 血 糖, 又 可 抗 实 验 性 高 血 糖 [66] 南 瓜 多 糖 以 糖 蛋 白 形 式 存 在, 在 胃 肠 吸 收 过 程 中, 有 抑 制 糖 苷 酶 的 活 性, 减 缓 葡 萄 糖 吸 收 作 用, 与 降 糖 药 拜 糖 平 ( 假 性 四 糖 ) 的 降 血 糖 作 用 相 类 似 [67] 第 四 小 节 降 血 糖 与 多 糖 的 构 效 关 系 多 糖 的 活 性, 一 般 认 为 与 其 单 糖 组 成 摩 尔 比 分 子 量 溶 解 度 粘 度 和 溶 液 中 构 象 等 因 素 有 关 首 先 多 糖 的 水 溶 性 对 其 活 性 有 重 要 的 影 响, 例 如, 水 溶 性 β- 葡 聚 糖 具 有 较 高 的 抗 炎 与 抗 癌 活 性 而 不 溶 于 水 的 β-(1 3)-D- 葡 聚 糖 则 活 性 降 低, 但 若 使 其 部 分 羧 甲 基 化 后, 水 溶 性 提 高, 抗 癌 活 性 明 显 上 升 几 丁 质 (chitin) 本 无 降 血 糖 活 性, 当 脱 去 乙 酰 基 后 chitosan 便 显 示 降 血 糖 活 性 [62] 多 糖 在 溶 液 中 所 带 电 荷 的 性 质 对 其 活 性 也 有 很 重 要 的 影 响 作 用 研 究 发 现, 硫 酸 酯 化 匀 多 糖 如 卡 拉 胶 岩 藻 糖 (fucoidan) 等 具 有 很 强 的 免 疫 活 性, 具 有 抗 病 毒 作 用, 但 消 除 硫 酸 根 后 其 活 性 也 消 失 [68] 金 属 离 子 在 降 血 糖 中 也 扮 演 重 要 角 色 对 南 瓜 多 糖 的 结 构 研 究 发 现,Cu 在 其 中 处 于 稳 定 的 螯 合 状 态 Cu 是 机 体 内 氧 化 还 原 过 程 中 极 为 有 效 的 催 化 剂 铜 盐 可 促 进 酶 的 利 用, 有 利 于 降 低 血 糖 [67] 当 多 糖 与 受 体 作 用 时 只 有 分 子 中 几 个 低 聚 糖 片 段 与 受 体 结 合, 可 能 多 糖 像 蛋 白 质 和 酶 一 样, 在 多 糖 分 子 中 存 在 一 个 或 几 个 寡 糖 片 段 活 性 中 心 因 而 根 据 活 性 多 糖 的 结 构 比 较 可 以 得 出 多 糖 与 降 血 糖 活 性 的 一 些 构 效 关 系 1 α- 葡 聚 糖 从 植 物 中 分 离 出 大 量 具 有 降 血 糖 活 性 的 α- 葡 聚 糖, 如 乌 头 多 糖 A 和 B 人 参 多 糖 A-E 和 J 以 及 甘 蔗 多 糖 A 这 些 葡 聚 糖 均 为 α 构 型, 对 葡 聚 糖 结 构 与 糖 尿 病 活 性 研 究 发 现, 在 以 1,6 连 接 的 α- 葡 萄 糖 为 主 链 的 α- 葡 聚 糖 中, 当 在 O-3 位 含 有 支 链 时, 多 糖 表 现 出 降 血 糖 活 性, 如 人 参 多 糖 活 性 最 高 的 人 参 多 糖 A; 在 (1,6)-α- 葡 聚 糖 的 侧 链 含 有 α 或 β 葡 萄 糖 支 链 时, 多 糖 也 具 有 降 血 糖 活 性 但 是 仅 为 线 性 1,6 连 接 的 α- 葡 聚 糖 (dextran) 本 身 或 者 携 带 的 分 支 较 多 时, 降 血 糖 活 性 消 失 当 dextran 进 行 硫 酸 化 后 得 到 硫 酸 化 葡 聚 糖, 试 验 证 11

24 第 一 章 文 献 综 述 明 其 对 糖 尿 病 有 效, 但 是, 对 2 型 糖 尿 病 作 用 甚 微 2 β- 葡 聚 糖 在 众 多 已 知 具 有 降 血 糖 活 性 的 β- 葡 聚 糖 中, 普 遍 存 在 主 要 以 1,3 连 接 残 基 构 成 主 链 的 β- 葡 聚 糖 结 构 [69] 如 灵 芝 多 糖 B 是 以 (1,3)-β- 葡 萄 糖 为 主 链,(1,6)-β- 葡 萄 糖 为 支 链 的 结 构 药 理 实 验 发 现, 线 性 的 (1,3)-β- 葡 聚 糖 (curdlan) 以 及 O-6 连 有 末 端 β- 葡 萄 糖 (letinan, schizophyllan) 并 不 具 备 降 血 糖 活 性 或 者 降 血 糖 效 果 较 低, 而 具 有 显 著 降 血 糖 活 性 的 杨 树 菇 多 糖 AG-HN1 除 了 主 链 上 的 (1,6)-β- 葡 萄 糖 支 链 外, 主 链 主 要 由 (1,3)-β- 葡 萄 糖 残 基 以 及 掺 杂 有 少 量 1,4 和 1,6 葡 萄 糖 残 基 构 成 当 1,3 葡 萄 糖 主 链 中 掺 杂 其 他 1,6 连 接 的 残 基 时 仍 有 降 血 糖 活 性, 如 灵 芝 多 糖 C 是 以 (1,6)-β- 葡 萄 糖 为 支 链,(1,3)-β- 葡 萄 糖 为 主 链 并 杂 有 少 量 (1,6)-α- 半 乳 糖 残 基 大 麦 中 发 现,(1,3/1,4)-β- 葡 聚 糖 为 其 胚 乳 细 胞 壁 的 主 要 成 分, 经 分 析 表 明 其 中 含 有 20%~25%(w/w) 的 蛋 白 质 和 阿 拉 伯 半 乳 聚 糖, 大 麦 的 β- 葡 聚 糖 为 线 性 多 糖, 含 有 70% 的 (1,4)-β- 葡 萄 糖 残 基,30% 的 (1,3)-β- 葡 萄 糖 残 基 以 成 年 人 为 试 验 对 象 的 试 验 发 现, 随 (1,3/1,4)-β- 葡 聚 糖 含 量 的 增 加, 血 糖 指 数 呈 线 性 降 低 [70,71] 3 杂 多 糖 大 部 分 含 杂 多 糖 的 降 血 糖 多 糖 都 含 有 少 量 肽 链 或 乙 酰 基 具 有 药 理 活 性 的 果 胶 类 多 糖 通 常 包 含 半 乳 糖 醛 酸 聚 糖 区 ( 光 滑 区 ) 和 带 中 性 糖 侧 链 的 鼠 李 半 乳 糖 醛 酸 区 ( 发 形 区 ), 其 活 性 中 心 在 阿 拉 伯 半 乳 聚 糖 侧 链 和 光 滑 区 上 [72] 由 于 杂 多 糖 的 结 构 相 当 复 杂, 其 构 效 关 系 仍 需 继 续 研 究 参 考 文 献 [1] 丁 源. 我 国 海 产 贝 类 名 录 制 及 其 应 用 [J]. 海 洋 药 物,1984 (3):34-42 [2] 关 美 君, 林 文 翰, 丁 源. 海 洋 药 物 二 十 一 世 纪 中 国 药 学 研 究 的 新 热 点 [J]. 中 国 海 洋 药 物,20(1):1-5 [3] 南 京 中 医 药 大 学 编 著. 中 药 大 辞 典 [M]. 第 二 版. 上 海 : 上 海 科 学 技 术 出 版 社,2006:3323 [4] 赵 匠. 四 角 蛤 蜊 的 形 态 和 习 性 [J]. 松 辽 学 刊 ( 自 然 科 学 版 ),1992, (1):41-44 [5] 项 福 椿. 辽 宁 沿 海 四 角 蛤 蜊 生 殖 与 生 长 及 其 开 发 养 殖 技 术 的 探 讨 [J]. 水 产 科 学,1991,10 (4):16-19 [6] 张 汉 华, 梁 超 愉, 李 茂 照 等. 白 沙 湖 四 角 蛤 蜊 的 繁 殖 期 及 增 养 殖 效 果 的 研 究 [J]. 南 海 研 究 与 开 发,1996,(3):52-55 [7] 董 景 岳, 李 金 明, 何 贵 如 等. 渤 海 湾 南 部 四 角 蛤 蜊 渔 业 生 物 学 及 开 发 利 用 研 究 [J]. 齐 鲁 渔 12

25 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 业,1991,(1):41-44 [8] 崔 广 法, 于 业 绍, 于 志 华 等. 四 角 蛤 蜊 人 工 育 苗 的 初 步 研 究 [J]. 海 洋 科 学,1985,9(3):36-40 [9] 陈 贵 卿, 陈 俊 豪, 陈 恩 晔. 碳 酸 钙 类 药 材 的 结 构 成 分 和 加 温 处 理 研 究 [J]. 中 国 海 洋 药 物, 1992,(4):8-16 [10] 贾 玉 海. 中 国 海 洋 湖 沼 药 物 学 [M]. 北 京 : 学 苑 出 版 社,1996:125 [11] 白 石 淳. 北 部 九 州 產 シオフキガ(Mactra veneriformis)の 筋 肉 部 分, 内 臓 部 分 と 外 套 膜 鰓 部 分 の 一 般 成 分 の 周 年 变 化 [J]. 福 岡 女 子 大 学 人 間 環 境 学 部 紀 要,2005,37:21-28 [12] 陶 平, 许 庆 陵, 谭 淑 荣. 大 连 沿 海 几 种 腹 足 类 和 双 壳 类 的 营 养 成 分 分 析 [J]. 辽 宁 师 范 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ), 2000, 23(2): [13] 谭 乐 义, 张 超 桦, 薛 长 湖. 牛 磺 酸 的 生 物 活 性 及 其 在 海 洋 生 物 中 的 分 布 [J]. 湛 江 海 洋 大 学 学 报, 2000, 20(3):75-79 [14] 李 和 生, 王 鸿 飞, 陈 檬, 等. 蛤 蜊 中 牛 磺 酸 提 取 的 工 艺 条 件 研 究 [J]. 食 品 科 技,2005,(7):39-42 [15] 何 天 培, 顾 景 范. 牛 磺 酸 对 应 激 性 心 肌 损 伤 的 保 护 效 应 及 机 制 [J]. 国 外 医 学 : 卫 生 学 分 册,1997,24(6): [16] 陈 岳 祥, 王 慎 传, 赵 国 宁 等. 牛 磺 酸 对 实 验 性 肝 坏 死 大 鼠 血 浆 内 皮 素 的 影 响 [J]. 中 国 药 理 学 通 报,1993,9(2):117 [17] 张 沂, 孙 中 实, 石 湘 芸 等. 牛 磺 酸 在 人 体 内 药 物 动 力 学 及 对 血 压 心 率 影 响 的 药 效 学 研 究 [J]. 海 军 总 医 院 学 报,1997,10(3): [18] 杨 军, 田 青. 牛 磺 酸 与 糖 尿 病 [J]. 国 外 医 学 ( 内 分 泌 分 册 ),1995,15(1):8-11 [19] 田 庆 伟, 商 瑞 民. 牛 磺 酸 对 小 鼠 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 器 官 重 量 的 影 响 [J]. 营 养 学 报,1999,21(1):88-90 [20] 刘 武. 牛 磺 酸 的 生 物 学 作 用 [J]. 生 命 的 化 学,1990,10(3):12 [21] 何 方 奕, 张 捷 莉, 李 铁 纯 等. 辽 东 湾 产 蛤 蜊 中 脂 肪 酸 组 成 的 GC/MS 分 析 [J]. 食 品 科 技,2006,(10): [22] 李 太 武, 苏 秀 榕, 李 坤. 八 种 常 见 贝 类 脂 肪 酸 含 量 的 研 究 [J]. 中 国 海 洋 药 物,1996,(2):24-26 [23] Surh J, Ryu J S, Kwon H. Seasonal Variations of Fatty Acid Compositions in Various Korean Shellfish[J]. J Agric Food Chem, 2003, 51, [24] 陈 寅 山, 郑 怡, 许 友 勤 等. 福 建 11 种 海 洋 贝 类 凝 集 素 的 研 究 [J]. 中 国 海 洋 药 物,2001,(3):47-49 [25] 肖 静, 张 鹭, 刘 跟 成.4 种 软 体 动 物 凝 集 素 的 细 胞 凝 集 性 研 究 [J]. 牡 丹 江 师 范 学 院 学 报,2006,(1):1-2 [26] 胡 宏, 金 国 虔, 吴 梧 桐 等. 连 云 港 沿 海 5 种 贝 类 生 物 的 遗 传 多 样 性 分 析 [J]. 药 物 生 物 技 术,2006,13(6), [27] 中 国 药 用 动 物 志 协 作 组 编. 中 国 药 用 动 物 志 [M], 第 二 册. 天 津 : 天 津 科 学 技 术 出 版 社,1983:62 [28] 姜 卿 云 编. 食 治 本 草 [M]. 北 京 : 地 质 出 版 社,1989: [29] 彭 铭 泉 编. 中 国 药 膳 学 [M]. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,1985: [30] 周 文 丽, 高 源, 员 燕. 平 甲 灵 片 的 制 备 及 临 床 疗 效 观 察 [J]. 药 学 实 践 杂 志,2004,22(2): [31] 张 金 鼎 编. 海 洋 药 物 与 效 方 [M]. 北 京 : 中 医 古 籍 出 版 社,1998: [32] 何 一 骏 编. 海 味 营 养 与 药 用 指 南 [M]. 广 州 : 广 东 科 技 出 版 社,1990:110 13

26 第 一 章 文 献 综 述 [33] 吴 家 镜 编. 中 华 药 膳 大 宝 典 [M]. 广 州 : 华 南 理 工 大 学 出 版 社,2006: [34] 叶 任 高, 际 再 英. 内 科 学 [M], 第 6 版. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,2004:787 [35] 李 时 珍. 本 草 纲 目 [M]. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,1975:224 [36] Tadashi Kiho, et al. Effect of a polysaccharide(tap) from the fruiting bodies of Tremella auranitia on glucose metabolism in mouse liver[j].biosci. Biotechnol. Biochem, 2000, 64 (2):417 [37] 薛 惟 建 等. 银 耳 多 糖 和 木 耳 多 糖 对 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 小 鼠 高 血 糖 的 防 治 作 用 [J]. 中 国 药 科 大 学 学 报,1989,20(3):181 [38] Tadashi Kiho, et al. Structural features and hypoglycemic activity of a polysaccharide (CF-10) from the cultured mycelium of Cordyceps sinensis[j]. Biol. Pharm. Bull, 1999, 22 (9):966 [39] Tadashi Kiho, et al. Polysaccharides in fungi. XXXI. Hypoglycemic activity of a polysaccharides(cs-f30) from the cultured mycelium of Cordyceps sinensis and its effect on glucose metabolism in mouse liver[j]. Biol. Pharm. Bull, 1996, 19 (2):294 [40] 黄 志 江, 季 晖, 李 萍 等. 人 工 虫 草 多 糖 降 血 糖 作 用 及 其 机 制 研 究 [J]. 中 国 药 科 大 学 学 报,2002,33(1):51-54 [41] Hiroshi Hikino, et al. Methaniems of hypoglycemic activity of ganoderan B: A glycan of Ganoderma lucidum fruit bodies[j].planta Medica, 1989, 55:423 [42] Zuomin Yuan, et al. Hypoglycemic effect of water-soluble polysaccharide from Auricularia curicula-judae quell. on genetically diabetic KK-Ay mice[j]. Biosci. Biotechnol. Biochem, 1998, 62 (10):1898 [43] 王 兵, 李 靖, 马 舒 冰 等. 羊 栖 菜 多 糖 降 血 糖 作 用 的 实 验 研 究 [J]. 中 国 海 洋 药 物,2000,19(3):33 [44] 李 福 川, 唐 志 红, 崔 博 文 等. 三 种 海 带 多 糖 的 降 血 糖 作 用 [J]. 中 国 海 洋 药 物,2000,19(5):12 [45] 周 慧 萍 等. 紫 菜 多 糖 对 机 体 细 胞 的 保 护 作 用 [J]. 中 国 药 科 大 学 学 报,1989,20(6):340 [46] Masashi Tomoda, et al. Partial structure of Panaxan A, a hypoglycemic glycan of Panax ginseng roots[j]. Planta Medica, 1984, 50 (5):436 [47] Chohachi Konno, et al. Isolation and hypoglycaemic activity of Panaxans A, B, C, D and E, flycan of Panax ginseng roots[j]. Planta Medica, 1989, 50 (5):434 [48] 杨 明 等. 人 参 多 糖 降 血 糖 和 肝 糖 原 的 作 用. 中 国 药 理 学 报,1990,11(6):520 [49] 陈 卫 辉 等. 麦 冬 多 糖 对 正 常 和 实 验 性 糖 尿 病 小 鼠 血 糖 的 影 响 [J]. 中 国 现 代 应 用 药 学 杂 志,1998,15(4):21 [50] 王 靖 等. 知 母 多 糖 降 血 糖 活 性 研 究 [J]. 中 草 药,1996,27(10):605 [51] Michiko Takahashi, et al. Isolation and hypoglycemic activity of Anemarans A, B, C, and D, glycans of Anemarrhena asphodeloides rhizomes[j]. Planta Medica, 1985, 51 (2):100 [52] 徐 梓 辉 等. 薏 苡 仁 多 糖 的 分 离 提 取 及 降 血 糖 作 用 的 研 究 [J]. 第 一 军 医 大 学 学 报,2000,22(9):578 [53] 徐 梓 辉, 周 世 文, 黄 林 清. 薏 苡 仁 多 糖 对 实 验 性 糖 尿 病 大 鼠 LPO 水 平 SOD 活 性 变 化 的 影 响 [J]. 成 都 中 医 药 大 学 学 报,2002,15(1):38,43 14

27 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 [54] 刘 超 等. 丹 皮 多 糖 对 正 常 及 高 血 糖 小 鼠 的 降 血 糖 作 用. 安 徽 中 医 学 院 学 报,1998,17(6):45 [55] 王 钦 茂, 洪 浩, 赵 帜 平 等. 丹 皮 多 糖 -2b 对 2 型 糖 尿 病 大 树 模 型 的 作 用 及 其 降 糖 作 用 机 制 [J]. 中 国 药 理 学 通 报,2002,18(4): [56] 熊 学 敏 等. 南 瓜 多 糖 对 四 氧 嘧 啶 糖 尿 病 大 鼠 的 降 糖 作 用 [J]. 江 西 中 医 学 院 学 报,1998,10(4):174 [57] 钦 传 光, 黄 开 勋, 徐 辉 碧. 泥 鳅 多 糖 对 实 验 性 糖 尿 病 小 鼠 血 糖 血 脂 的 影 响 [J]. 中 国 药 理 学 与 毒 理 学 杂 志,2002,16(2): [58] 王 长 云, 管 华 诗. 海 湾 扇 贝 边 的 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 分 析 [J]. 中 国 海 洋 药 物,1996,15 (2):12-14 [59] 黄 卓 丽, 刘 骞. 扇 贝 的 生 理 活 性 物 质 和 药 用 价 值 [J]. 中 国 海 洋 药 物,2001,2 (80):45-48 [60] 张 广 森. 刺 参 酸 性 粘 多 糖 介 导 肝 素 因 子 Ⅱ 对 凝 血 酶 活 性 的 抑 制 [J]. 中 华 血 液 学 杂 志,1997,18 (3): [61] 窦 昌 贵, 黄 芳, 黄 罗 生 等. 文 蛤 多 糖 抗 癌 免 疫 药 理 作 用 的 研 究 [J]. 中 国 海 洋 药 物,1999,18 (002):15-19 [62] Hayashi K, Ito M. Antidiabetic action of low molecular weight chitosan in genetically obese diabetic KK-Ay mice[j].biol Pharm Bull, 2002,25 (2): [63] Kiho T, Kobayashi T, Morimoto H, et al. Structural features of an anti-diabetic polysaccharide (TAP) from Tremella aurantia[j]. Chem Pharm Bull, 2000, 48(11): [64] Kiho T, Kochi M, Usui S et al. Antidiabetic effect of an acidic polysaccharide(tap) from Tremella aurantia and its degradation product(tap-h)[j].biol Pharm Bull, 2002,24 (12): [65] 刘 成 梅, 付 桂 明, 涂 宗 财. 百 合 多 糖 降 血 糖 功 能 研 究 [J]. 食 品 科 学,2002,23(6): [66] 陈 蔚, 刘 芳, 俞 茂 华 等. 黄 芪 多 糖 对 NOD 小 鼠 1 型 糖 尿 病 的 预 防 作 用 [J]. 复 旦 学 报 ( 医 学 科 学 版 ),2001,28(1):57-60 [67] 左 耀 明, 叶 士 伶, 万 小 兰. 南 瓜 多 糖 的 提 取 分 析 和 降 血 糖 试 验 研 究 [J]. 食 品 科 学,2001,22 (12):56-58 [68] Ponce NMA, Pujol CA, Damonte EB, et al. Fucoidans from the brown seaweed Adenocystis utricularis: extraction methods, antiviral activity and structural studies[j]. Carbohydr Res, 2003, 338 (2): [69] Lowman DW, Williams DL. A proton nuclear magnetic resonance method for the quantitative analysis on a dry weight basis of (1 3)-β-D-glucans in a complex, solvent-wet matrix[j]. J Agric Food Chem, 2001,49 (9): [70] Jiang GS, Vasanthan T. MALDI-MS and HPLC quantification of oligosaccharides of lichenase-hydrolyzed water-soluble β-glucan from ten barley varieties[j]. J Agric Food Chem, 2000,48 (8): [71] Cavallero A, Empilli S, Brighenti F, et al. High (1 3, 1 4)-β-glucan barley fractions in bread making and their effects on human glycemic response[j]. J Cereal Sci, 2002,36 (1):59-66 [72] Yu KW, Kiyohara H, Matsumato T, et al. Structural characterization of intestinal immune system modulating new arabino-3, 6-galactan from rhizomes of Atractylodes lancea DC[J]. Carbohydr Polym, 2001,46 (2):

28 第 二 章 四 角 蛤 蜊 软 体 化 学 成 分 系 统 预 试 验 第 二 章 四 角 蛤 蜊 软 体 化 学 成 分 系 统 预 试 验 四 角 蛤 蜊 作 为 一 种 药 食 两 用 的 海 洋 贝 类, 其 软 体 不 但 有 极 高 的 营 养 价 值, 还 有 广 泛 的 药 用 研 究 开 发 前 景 在 对 四 角 蛤 蜊 软 体 进 行 活 性 部 位 ( 成 分 ) 研 究 之 前, 首 先 必 须 了 解 它 可 能 含 有 哪 些 化 学 成 分, 弄 清 楚 其 可 能 含 有 的 化 学 成 分 可 为 后 期 活 性 成 分 ( 部 位 ) 的 提 取 分 离 和 精 制 打 下 基 础 所 以, 本 章 采 用 化 学 成 分 系 统 预 试 验 进 行 软 体 中 成 分 类 别 的 研 究 1 实 验 仪 器 与 材 料 1.1 实 验 材 料 四 角 蛤 蜊 软 体 ( 江 苏 省 海 洋 水 产 研 究 所 提 供, 批 号 : , 经 省 海 洋 水 产 研 究 所 万 夕 和 研 究 员 鉴 定 为 蛤 蜊 科 动 物 四 角 蛤 蜊 (Mactra veneriformis Reeve) 的 新 鲜 软 体 部 分, 下 同 ) 1.2 实 验 试 剂 α 萘 酚 ( 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司, 批 号 :T ); 乙 酸 镁 ( 北 京 化 工 厂, 批 号 :890411); 三 氯 化 铁 ( 上 海 金 山 化 工 厂, 批 号 :041108); 铁 氰 化 钾 ( 上 海 实 验 试 剂 有 限 公 司, 批 号 : ); 苦 味 酸 ( 广 东 省 台 山 市 化 工 厂, 批 号 : ); 香 兰 素 ( 上 海 双 喜 香 料 助 剂 厂, 批 号 : ); 茚 三 酮 ( 上 海 前 进 试 剂 厂, 批 号 : ); 碘 ( 成 都 化 学 试 剂 厂, 批 号 : ); 碘 化 钾 ( 上 海 申 博 化 工 有 限 公 司, 批 号 : ); 碘 化 铋 钾 ( 国 药 集 团 上 海 化 学 试 剂 公 司, 批 号 :F ); 硅 钨 酸 ( 国 药 集 团 上 海 化 学 试 剂 公 司, 批 号 :F ); 溴 酚 蓝 ( 天 津 市 福 晨 化 学 试 剂 厂, 批 号 : ); 磷 钼 酸 ( 国 药 集 团 上 海 化 学 试 剂 公 司, 批 号 :000212); 硫 酸 铜 ( 上 海 中 试 化 工 总 公 司, 批 号 : ); 其 余 试 剂 为 国 产 分 析 纯 1.3 实 验 仪 器 FA1104 型 电 子 分 析 天 平 ( 上 海 精 密 科 学 仪 器 有 限 公 司 ); 组 织 绞 碎 机 ( 广 东 南 海 德 丰 电 热 设 备 厂 );725BASIC 高 速 匀 浆 机 (IKA 公 司 ); 电 热 恒 温 干 燥 箱 202 型 ( 上 海 索 谱 仪 器 有 限 公 司 );HH-4 数 显 恒 温 水 浴 锅 ( 国 华 电 器 有 限 公 司 ); 其 它 常 规 仪 器 2 实 验 方 法 [1, 2] 2.1 供 试 液 的 制 备 16

29 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 水 提 液 制 备 四 角 蛤 蜊 的 软 体 洗 去 泥 沙, 沥 干 绞 碎, 匀 浆, 称 取 50 g 加 入 300 ml 蒸 馏 水, 水 浴 回 流 1 h, 过 滤 水 提 液 ( 检 查 有 机 酸 酚 类 糖 及 其 苷 类 皂 苷 蛋 白 质 多 肽 氨 基 酸 ) 石 油 醚 提 取 液 制 备 上 述 匀 浆 5 g 加 入 30 ml 石 油 醚 ( 沸 程 60~90 ), 水 浴 回 流 1 h, 过 滤 石 油 醚 提 取 液 ( 检 查 挥 发 油 油 脂 甾 体 及 萜 类 ) 乙 醇 提 取 液 制 备 上 述 匀 浆 50 g 加 入 300 ml95% 乙 醇, 水 浴 回 流 1h, 过 滤 残 渣 乙 醇 提 取 液 17

30 第 二 章 四 角 蛤 蜊 软 体 化 学 成 分 系 统 预 试 验 乙 醇 提 取 液 ( 接 上 页 ) 加 入 适 量 水 使 成 70% 乙 醇 液, 将 溶 液 置 分 液 漏 斗 中, 加 入 等 量 石 油 醚 萃 取, 分 液 石 油 醚 层 乙 醇 提 取 物 ( 含 油 脂 ) 回 收 乙 醇 乙 醇 浸 膏 平 分 为 两 份 加 入 少 量 5% 盐 酸 搅 拌, 使 溶 解, 过 滤 加 入 95% 乙 醇 溶 解, 过 滤 酸 水 不 溶 部 分 酸 水 溶 解 部 分 乙 醇 提 取 液 滤 渣 ( 检 查 黄 酮 蒽 醌 酚 类 加 入 乙 酸 乙 酯 溶 解 后, 将 溶 ( 检 查 生 物 碱 ) 有 机 酸 甾 体 及 三 萜 皂 液 置 分 液 漏 斗 中, 加 入 适 量 苷 ) 5% 氢 氧 化 钠 溶 液, 充 分 振 摇, 分 液 碱 液 层 乙 酸 乙 酯 层 水 洗 至 中 性 中 性 乙 酸 乙 酯 部 分 水 浴 蒸 干, 以 95% 乙 醇 溶 解 乙 醇 溶 解 部 分 ( 检 查 强 心 苷 萜 类 内 酯 与 香 豆 素 ) 18

31 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 [3-10] 2.2 各 种 成 分 的 预 试 验 有 机 酸 检 查 ( 供 试 液 : 水 提 液 和 乙 醇 提 取 液 ) ph 试 纸 法 取 一 广 泛 ph 试 纸, 用 玻 棒 将 供 试 液 ( 水 提 液 ) 滴 于 试 纸 上 测 定 ph 值 溴 酚 蓝 试 验 取 供 试 液 ( 乙 醇 提 取 液 )1~2 滴, 滴 于 滤 纸 片 上, 喷 洒 0.1% 溴 酚 蓝 的 70% 乙 醇 溶 液, 观 察 斑 点 颜 色 变 化 糖 及 苷 类 检 查 ( 供 试 液 : 水 提 液 ) Fehling 反 应 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1 ml, 加 入 等 体 积 的 Fehling 试 剂, 于 沸 水 浴 中 加 热 反 应 数 分 钟, 观 察 试 管 中 是 否 有 砖 红 色 沉 淀 生 成 Molish 反 应 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1 ml, 加 入 70% 乙 醇 0.5 ml,10%α 萘 酚 乙 醇 溶 液 2~3 滴, 摇 匀 后 沿 试 管 壁 缓 慢 加 入 浓 硫 酸 1 ml, 观 察 二 液 面 间 的 颜 色 变 化 皂 苷 检 查 ( 供 试 液 : 水 提 液 和 乙 醇 提 取 液 ) 泡 沫 试 验 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1~2 ml 于 试 管 中, 猛 烈 振 摇 2 min, 观 察 是 否 有 持 续 性 泡 沫 产 生 另 取 供 试 液 1~2 ml, 加 入 适 量 乙 醇 后 再 振 摇, 观 察 泡 沫 量 与 第 一 次 相 比 是 否 有 明 显 减 少 Liebermann Burchard 反 应 取 供 试 液 ( 水 提 液 和 乙 醇 提 取 液 各 做 一 份 )3 ml 于 蒸 发 皿 中, 水 浴 蒸 干 后 冷 却, 残 渣 溶 于 1 ml 冰 醋 酸 中, 再 加 入 1 ml 乙 酸 酐, 最 后 滴 入 1 滴 浓 硫 酸, 观 察 溶 液 颜 色 变 化 泡 沫 对 比 试 验 取 供 试 液 ( 水 提 液 ) 各 1 ml 分 别 于 甲 乙 两 支 试 管 中, 向 甲 管 中 加 入 0.1 mol/l 氢 氧 化 钠 溶 液 2 ml, 向 乙 管 中 加 入 0.1 mol/l 盐 酸 溶 液 2 ml, 两 管 同 时 振 摇 1 min 对 比 两 管 内 泡 沫 高 度 酚 类 检 查 ( 供 试 液 : 水 提 液 和 乙 醇 提 取 液 ) 三 氯 化 铁 反 应 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1 ml, 加 入 1% 三 氯 化 铁 乙 醇 溶 液, 观 察 试 管 颜 色 变 化 层 析 法 在 一 层 析 好 的 扇 形 滤 纸 片 上 喷 洒 2% 三 氯 化 铁 乙 醇 溶 液 与 2% 铁 氰 化 钾 水 溶 液 的 等 量 混 合 液, 喷 洒 后 观 察 斑 点 颜 色 蛋 白 质 多 肽 氨 基 酸 检 查 ( 供 试 液 : 水 提 液 ) 加 热 沉 淀 试 验 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1 ml 于 试 管 中, 于 沸 水 浴 中 加 热 煮 沸, 观 察 是 否 产 生 混 浊 现 象 ; 另 取 供 试 液 1 ml, 加 入 少 量 5% 硫 酸, 摇 匀, 观 察 是 否 有 沉 淀 生 成 Ninhydrin 反 应 ( 茚 三 酮 反 应 ) 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1 ml, 加 入 0.2% 茚 三 酮 乙 醇 溶 液 2~3 滴, 摇 匀, 在 沸 水 浴 中 加 热 5 min, 冷 却 后 观 察 试 管 颜 色 变 化 19

32 第 二 章 四 角 蛤 蜊 软 体 化 学 成 分 系 统 预 试 验 Isatin 反 应 ( 吲 哚 醌 反 应 ) 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1~2 滴, 滴 于 滤 纸 片 上, 晾 干, 喷 洒 吲 哚 醌 试 剂, 用 电 吹 风 吹 干, 在 120 加 热 5 min 观 察 斑 点 颜 色 Biuret 反 应 取 供 试 液 ( 水 提 液 )1 ml, 加 40% 氢 氧 化 钠 溶 液 2 滴, 摇 匀, 滴 加 1% 硫 酸 铜 溶 液 1~2 滴, 摇 匀, 观 察 试 管 颜 色 变 化 生 物 碱 检 查 ( 供 试 液 : 酸 水 溶 解 部 分 ) Dragendorff 反 应 ( 碘 化 铋 钾 反 应 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 碘 化 铋 钾 试 剂 1~2 滴, 观 察 试 管 颜 色 变 化 Mayer 反 应 ( 碘 化 汞 钾 反 应 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 碘 化 汞 钾 试 剂 1~2 滴, 观 察 试 管 中 是 否 有 白 色 或 淡 黄 色 沉 淀 出 现 Bertrad 反 应 ( 硅 钨 酸 反 应 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 硅 钨 酸 试 剂 1~2 滴, 观 察 试 管 中 是 否 有 类 白 色 或 淡 黄 色 沉 淀 出 现 Hager 反 应 ( 苦 味 酸 反 应 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 苦 味 酸 试 剂 1~2 滴, 观 察 试 管 中 是 否 有 黄 色 沉 淀 出 现 Wagner 反 应 ( 碘 - 碘 化 钾 反 应 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 I 2 -KI 试 剂 1~2 滴, 观 察 试 管 中 是 否 有 红 棕 色 沉 淀 出 现 黄 酮 检 查 ( 供 试 液 : 乙 醇 提 取 液 ) 盐 酸 - 镁 粉 反 应 取 供 试 液 1 ml, 加 入 少 许 镁 粉 振 摇, 再 滴 加 浓 盐 酸 2~3 滴, 观 察 泡 沫 处 是 否 显 现 桃 红 色 三 氯 化 铝 反 应 取 供 试 液 1~2 滴, 滴 于 滤 纸 片 上, 喷 洒 1% 三 氯 化 铝 乙 醇 溶 液 ( 或 5% 三 氯 化 铝 水 溶 液 ), 晾 干, 在 滤 纸 上 显 出 黄 色 斑 点, 于 紫 外 灯 ( 波 长 为 365 nm) 下 观 察 是 否 有 荧 光 出 现 氨 熏 试 验 取 供 试 液 1~2 滴, 滴 于 滤 纸 片 上, 再 于 浓 氨 水 瓶 上 熏 半 分 钟, 立 即 置 于 紫 外 灯 下 观 察 是 否 有 黄 色 荧 光 出 现 层 析 法 将 一 层 析 好 的 扇 形 滤 纸 片 置 于 紫 外 灯 下 观 察, 若 呈 现 黄 绿 色 荧 光, 取 出 喷 洒 1% 三 氯 化 铁 甲 醇 溶 液, 再 于 紫 外 灯 下 观 察 前 后 荧 光 变 化 强 心 苷 检 查 ( 供 试 液 : 乙 醇 溶 解 部 分 ) Kedde 反 应 ( 供 试 液 : 乙 醇 溶 解 部 分 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 5 滴 新 配 制 的 碱 性 3,5- 二 硝 基 苯 甲 酸 试 剂, 观 察 试 管 颜 色 变 化 Baljet 反 应 ( 供 试 液 : 乙 醇 溶 解 部 分 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 1 ml 新 配 制 的 碱 性 苦 味 酸 试 剂, 观 察 试 管 颜 色 变 化 Keller-kiliani(K-K) 反 应 取 供 试 液 1 ml 于 蒸 发 皿 中, 水 浴 蒸 干 后 冷 却, 残 渣 溶 于 2 ml 冰 醋 酸 中, 加 入 1% 三 氯 化 铁 乙 醇 溶 液 1 滴, 混 合 均 匀, 倾 入 干 燥 小 试 管 中, 20

33 南 京 中 医 药 大 学 硕 士 学 位 论 文 再 沿 管 壁 缓 慢 加 入 1 ml 浓 硫 酸, 静 置 分 层, 注 意 观 察 界 面 和 乙 酸 层 的 颜 色 变 化 萜 类 内 酯 与 香 豆 素 类 化 合 物 检 查 ( 供 试 液 : 乙 醇 溶 解 部 分 ) 重 氮 化 反 应 取 供 试 液 1 ml, 加 入 等 量 的 3% 碳 酸 钠 溶 液 于 水 浴 上 煮 沸 3 分 钟, 冷 却 后, 加 入 新 配 制 的 重 氮 化 试 剂 1~2 滴, 观 察 试 管 颜 色 变 化 内 酯 化 合 物 的 开 环 与 闭 环 反 应 取 供 试 液 1 ml, 加 入 1% 氢 氧 化 钠 溶 液 2~3 滴, 若 出 现 混 浊 现 象 ; 于 沸 水 浴 煮 沸 3~4 min, 观 察 溶 液 是 否 重 新 变 为 清 亮 ; 再 加 2% 盐 酸 酸 化, 观 察 溶 液 变 化 荧 光 试 验 取 供 试 液 滴 于 滤 纸 片 上, 晾 干 后 置 于 紫 外 灯 下 观 察, 观 察 是 否 呈 现 荧 光, 再 喷 洒 1% 氢 氧 化 钾 试 剂, 观 察 前 后 荧 光 变 化 蒽 醌 检 查 ( 供 试 液 : 乙 醇 提 取 液 ) 硼 酸 试 验 取 供 试 液 滴 于 滤 纸 片 上, 晾 干 后, 喷 洒 1% 硼 酸 水 溶 液, 观 察 颜 色 变 化 或 是 否 呈 现 荧 光 Bornträger 反 应 ( 碱 性 试 验 ) 取 供 试 液 1 ml, 加 入 1% 氢 氧 化 钠 溶 液 1 ml, 振 摇, 观 察 试 管 颜 色 变 化 层 析 法 在 一 层 析 好 的 扇 形 滤 纸 片 上 喷 洒 1% 乙 酸 镁 甲 醇 溶 液 显 色,90 烘 干 5 分 钟, 观 察 斑 点 颜 色 变 化 甾 体 及 三 萜 类 化 合 物 检 查 ( 供 试 液 : 乙 醇 提 取 液 ) Liebermann-Burchard 反 应 ( 乙 酸 酐 - 浓 硫 酸 反 应 ) 取 供 试 液 3 ml 于 蒸 发 皿 中, 水 浴 蒸 干, 冷 却, 残 渣 溶 于 1 ml 冰 醋 酸 中, 再 加 入 1 ml 乙 酸 酐, 最 后 滴 入 1 滴 浓 硫 酸, 观 察 溶 液 颜 色 变 化 Salkowski 反 应 ( 氯 仿 - 浓 硫 酸 反 应 ) 取 供 试 液 3 ml 于 蒸 发 皿 中, 水 浴 蒸 干, 冷 却, 残 渣 溶 于 1ml 氯 仿 中, 再 将 氯 仿 液 置 于 试 管 内, 滴 入 浓 硫 酸 1 滴, 观 察 氯 仿 层 颜 色 变 化, 硫 酸 层 是 否 显 绿 色 荧 光 挥 发 油 及 油 脂 ( 供 试 液 : 石 油 醚 提 取 液 ) 一 般 检 查 取 供 试 液 滴 于 滤 纸 片 上, 观 察 滤 纸 上 的 油 斑 在 空 气 中 能 否 挥 发 磷 钼 酸 试 验 取 供 试 液 滴 于 滤 纸 片 上, 喷 洒 25% 磷 钼 酸 乙 醇 溶 液 后, 将 纸 片 放 入 115 烘 箱 中 2 min, 观 察 斑 点 颜 色 变 化 3 实 验 结 果 与 讨 论 3.1 结 果 实 验 结 果 表 明, 四 角 蛤 蜊 软 体 中 含 有 糖 类 蛋 白 质 ( 肽 ) 生 物 碱 有 机 酸 甾 体 系 统 预 试 验 结 果 详 见 表