LOGO 武汉珈源量子点司 Jiayuan Quantum Dots 量子点免疫荧光试剂盒 (QDots-IF TM ) 生物医学事业部 Version 1,

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1 LOGO 武汉珈源量子点司 Jiayuan Quantum Dots 量子点免疫荧光试剂盒 (QDots-IF TM ) 生物医学事业部 Version 1,

2 珈源量子点介绍 试剂盒简介 量子点免疫荧光单染试剂盒 量子点免疫荧光双染试剂盒 量子点荧光原位杂交试剂盒 应用举例

3 量子点 理想的荧光标记试剂 量子点 (Quantum Dots) 又称半导体纳米晶半导体纳米晶, 是一类由 Ⅱ-Ⅵ 族和 Ⅲ-Ⅴ 族元素组成的纳米颗粒 生物标记中常见的 CdSe 量子点粒径在 1.8nm-7.0nm 变化时, 其发射荧光可覆盖整个可见光区 荧光发射波长可控 发射峰狭窄对称 激发谱宽而连续, 消光系数大 荧光强度高 光稳定性好 易与生物分子偶联 多色标记成像 长时动态监测

4 量子点在生物医学上的应用 蛋白印迹 免疫荧光 活细胞示踪 活体成像 病原微生物检测 生物传感器 SCIENCE, 2005, 538

5 产品编号 量子点免疫荧光单染系列试剂盒 产品名称 荧光最大发射波长 激发波长 QK525M 量子点超敏荧光试剂盒 (QDs-G/M IgG) nm 485, 紫外 QK525R 量子点超敏荧光试剂盒 (QDs-G/R IgG) nm 485, 紫外 QK605M 量子点超敏荧光试剂盒 (QDs-G/M IgG) nm 565, 蓝光 QK605R 量子点超敏荧光试剂盒 (QDs-G/R IgG) nm 565, 蓝光 QK525S 量子点超敏荧光试剂盒 (QDs-SA) nm 485, 紫外 QK605S 量子点超敏荧光试剂盒 (QDs-SA) nm 565, 蓝光

6 量子点单染试剂盒组成成分 Cat. QK525M QK605M QK525R QK605R 试剂 A Tween 20 试剂 B 缓冲液 :2% BSA( 用于封闭和稀释试剂 ) 试剂 C QDs-IgG 复合物 (1μM) 试剂 D 通透液 :0.1% Triton-X 100 试剂 E 缓冲甘油封固剂 Cat. QK525S QK605S 试剂 A Tween 20 试剂 B 缓冲液 :2% BSA( 用于封闭和稀释试剂 ) 试剂 C 生物素化二抗 ( 进口分装 ) 试剂 D QDs-SA 复合物 (1μM) 试剂 E 通透液 :0.1% Triton-X 100 试剂 F 缓冲甘油封固剂

7 原理及适用范围 QDs-IgG 复合物 QDs-SA 复合物 生物素化二抗 一抗 两步法 一抗 三步法 抗原 抗原 适用范围 : 冰冻切片 石蜡包埋组织切片 固定细胞 活细胞等

8 操作流程 一 组织预处理 1. 脱蜡入水 脱蜡液 Ⅰ 10 min 脱蜡液 Ⅱ 10 min 脱蜡液 Ⅲ 10 min 无水乙醇 5 min 95% 乙醇 5 min 80% 乙醇 5 min ddh 2 O 5 min 2. 抗原修复 : 微波或高压 二 免疫学反应 封闭 15min 封闭 15min QDs-IgG 37 1h ( 两步法 ) 一抗 37 2h 或 4 过夜 封闭 15min 封闭 15min 二抗 min QDs-SA min ( 三步法 )

9 量子点免疫荧光双染系列试剂盒 货号名称 荧光最大发射波长 激发波长 QK525MD 量子点双染荧光试剂盒 (605SA+ 525-G/M IgG) 485, 紫外 QK605MD 量子点双染荧光试剂盒 (525SA+ 605-G/M IgG) 485, 紫外 QK525RD 量子点双染荧光试剂盒 (605SA+ 525-G/R IgG) 485, 紫外 QK605RD 量子点双染荧光试剂盒 (525SA+ 605-G/R IgG) 485, 紫外

10 量子点双染试剂盒 组成成分 试剂 A Tween 20 试剂 B 缓冲液 :2% BSA( 用于封闭和稀释试剂 ) 试剂 C 生物素化二抗 ( 进口分装 ) 试剂 D 试剂 E QDs-SA 复合物 (1μM) QDs-IgG 复合物 (1μM) CK+PCNA 试剂 F 通透液 :0.1% Triton-X 100 试剂 G 缓冲甘油封固剂 要求两种一抗来自不同种属

11 原理及适用范围 QDs-SA 复合物 生物素化二抗 QDs-IgG 复合物 一抗 A 一抗 B 抗原 A 抗原 B 一抗要求 : 一抗源自不同种属适用范围 : 冰冻切片 石蜡包埋组织切片 固定细胞 活细胞等

12 操作流程 一 组织预处理 同量子点免疫荧光单染 二 免疫学反应 封闭 15min 两种一抗 37 2h 或 4 过夜 封闭 15min 生物素二抗 min 封闭 15min QDs-SA + QDs-IgG 37 1 h 注 : 两种一抗同时孵育, 例如抗体 A 和 B 均为浓缩型, 稀释比例均为 1:100, 则在 100 μl 稀释液中加入 1 μl 抗体 A 和 1 μl 抗体 B, 混匀后即可滴加于组织上 两种 量子点配制方法同此

13 量子点荧光原位杂交试剂盒 货号名称 荧光最大发射波长 激发波长 QK525FB 量子点荧光原位杂交试剂盒 (QDs-FISH) , 紫外 QK605FB 量子点荧光原位杂交试剂盒 (QDs-FISH) , 紫外 QK525FD 量子点荧光原位杂交试剂盒 (QDs-FISH) , 紫外 QK605FD 量子点荧光原位杂交试剂盒 (QDs-FISH) , 紫外 HER2 FISH

14 Cat. QK525FB QK605FB 量子点荧光原位杂交试剂盒组成成分 试剂 A Tween 20 试剂 B 缓冲液 :2% BSA ( 用于封闭和稀释试剂 ) 试剂 C 胃蛋白酶 试剂 D 杂交后洗液 试剂 E QDs-IgG 复合物 (1μM) 试剂 F 缓冲甘油封固剂 Cat. QK525FD QK605FD 试剂 A Tween 20 试剂 B 缓冲液 :2% BSA ( 用于封闭和稀释试剂 ) 试剂 C 胃蛋白酶 试剂 D 杂交后洗液 试剂 E 小鼠抗 DIG 试剂 F 生物素化二抗 ( 进口分装 ) 试剂 G QDs-SA 复合物 (1μM) 试剂 H 缓冲甘油封固剂

15 DIG 标记探针 QDs-FISH 原理及适用范围 生物素化二抗 biotin 标记探针 QDs-FISH QDs-SA 复合物 小鼠抗 DIG QDs-SA 复合物 DIG biotin DNA probe DNA probe 适用范围 : 冰冻切片 石蜡包埋组织切片 细胞等

16 操作流程 一 组织预处理 脱蜡入水热处理 ( 微波 ) 酶消化 ( 37 5~10 min ) 梯度酒精脱水 二 免疫学反应 探针 94 变性 5min(DNA) 37 杂交过夜 洗涤 封闭 15min QDs-SA min 封闭 15min 小鼠抗 DIG min 生物素化二抗 min QDs-SA min

17 量子点作为免疫荧光染料的优势 适用范围广 : 石蜡包埋组织切片新鲜组织活细胞固定细胞灵敏度高, 可检测低丰度抗原表达特异性强, 定位准确信噪比高, 可实现阳性信号与组织自发背景荧光完全区分荧光稳定性好, 无需避光操作 -- 操作便利可实现定量检测 -- 量子点荧光定量免疫组织化学技术可实现结果长期保存可实现多种颜色一次同时成像可实现抗原表达共定位分析 ( 结合多光谱 )

18 量子点免疫荧光适用范围广 石蜡包埋组织切片 正常胃黏膜上皮 CK( 绿色 ) 乳腺癌 calponin 表达 ( 红色 ) 胃癌 PCNA 冰冻组织切片 乳腺癌 HER2 表达 ( 红色 ) 移植瘤 MECA-79 骨肉瘤 PSMA

19 量子点免疫荧光适用范围广 活细胞 ( 黑色素瘤细胞 CD146 检测结果 ) 固定细胞 DAPI 细胞涂片胞核表达 ( 红色 ) 乳腺癌细胞系 HER2 表达 ( 红色 ) 某细胞浆表达 ( 红色 )

20 量子点免疫荧光灵敏度高 Figure1. EBER FISH 在胃癌组 织中的应用, 并与 CISH 方法平 行对比 本公司产品与传统的方法相比 具有相同的特异性, 较高的灵 敏性 ( 箭头所示 ) Experimental and Molecular Pathology, 2010, 89, J Nanosci Nanotechno, 2011.

21 量子点免疫荧光特异性强 定位准确 胞膜胞浆胞核 上皮组织 E-cadherin ( 武汉大学口腔医院 ) 胃癌 CK 胃癌 p53 Whu 细胞 IDH2 乳腺癌 HER2 ( 武汉大学中南医院骨科 ) 肺癌细胞 p53 乳腺癌 ki-67 Figure 2. 量子点免疫荧光检测不同定位抗原的表达

22 量子点免疫荧光特异性强 定位准确 A C E B D F Figure 3. 量子点免疫荧光与传统免疫组化对比 AB: 乳腺癌 Calponin;CD: 阑尾 LCA;EF: 前列腺增生 PSA ACE: 量子点免疫荧光结果 ;BDF: 传统免疫组化结果

23 量子点免疫荧光信噪比高 605nm QDs 背景 605nm QDs 背景 背景 FITC 肾脏 IgA, 紫外光激发 肾脏 IgA, 蓝光激发 胃腺癌 caveolin1, 蓝光激发 605nm QDs 背景 525nm QDs 背景 605nm QDs 背景 正常乳腺 calponin, 紫外光激发红色 :605nm QDs; 绿色 : 背景 乳腺癌 HER2, 紫外光激发绿色 :525nm QDs; 蓝色 : 背景 胃腺癌 caveolin1, 蓝光激发

24 量子点免疫荧光稳定性好 不同时间点 FITC 和 QSA 信号强度 0 min 3 min 5 min 10 min 20 min 30 min 0 min 3 min 5 min 10 min 20 min 30 min Figure 4. 胃癌组织切片 caveolin1 FITC 免疫荧光和量子免疫荧光不同 时间点对比 Olympus BX51, DP72, 400 分析软件 :CRi 多光谱成像系统

25 量子点免疫荧光结果可长期保存 封片剂 P53 信号强度 10d 40d 118d CD147 信号强度 175d 245d 275d Figure 5. 胃癌组织切片 CD147 和 p53 双标跟踪观察 (Olympus BX51, DP72, 200)

26 量子点免疫荧光可实现定量检测 Figure 6. 不同处理组小鼠胰腺组织 insulin 表达采集系统 :Olympus BX51 荧光显微镜成像及分析系统 :CRI 公司多光谱成像系统放大倍数 : 200 相关文献 :Biomaterials, 2010: 1-8.

27 量子点免疫荧光可实现多种颜色同时成像 胃癌 CK5&6+CK8&18 牙齿 CK+MECA-79 胃癌 CK+PCNA DAPI 细胞涂片量子点双标 红色绿色重叠为黄色 细胞爬片胞浆双标 细胞爬片胞浆胞核双标

28 量子点免疫荧光可实现抗原表达共定位分析 A C B D 表 1: 各指标所占百分比及共定位所占百分比 Percent (%) % Co-loc. % Area: CK5&6 % Area: CK8& 表 2: 各指标定量结果 Marker Total Avg Standard Area Signal Signal Deviation CK5& CK8& Figure7. 胃癌组织 CK5&6 和 CK8&18 双染结果 A: CK5&6 +CK8&18 ; B: CK5&6;C: CK8&18;D: 共定位图 ( 红色 :605nm QDs; 绿色 :545nm QDs; 黑色 : 背景 ; 蓝色 : 显示两者共表达部位 ) 荧光显微镜 :Olympus BX51 采集系统 : 多光谱成像系统分析系统 : 多光谱成像系统放大倍数 : 200 激发条件 : 紫外光

29 珈源量子点结合多光谱成像系统的实际应用 珈源公司多光谱成像系统, 可检测 420nm 到 720nm 区间任意波段的荧光信号, 结合本公司的量子点荧光标记试剂可实现同一样本中多色荧光的同时成像 完全去除自发荧光, 提高信噪比 ; 可分离多种信号, 便于分析多种蛋白表达, 尤其是不同蛋白的共定位 ; 定量分析 ( 包括不同蛋白表达的信号强度 不同蛋白共定位的百分比等 ) Multispectral imaging system (CRI, Nuance Fx) 正置荧光显微镜 (Olympus BX51)

30 胃癌组织切片 CD147( 胞膜 )PCNA( 胞核 ) 双标结果 背景 ( 蓝色 ) 表 3: 各指标所占百分比及共定位所占百分比 核阳性 ( 绿色 ) 膜阳性 ( 红色 ) Percent (%) % Coloc. % Area: CD147 % Area: PCNA 表 4: 各指标定量结果 Marker Total Avg Standard Area Signal Signal Deviation CD PCNA Figure 8. 胃癌组织 CD147 和 PCNA 量子点免疫荧光双染结果 A: 原始拍摄图 ;B: 光谱分离图 ; C: 分离 CD147 ;D: 分离 PCNA;E: 光谱图 ( 红色 :605nm QDs; 绿色 :545nm QDs; 黑色 : 背景 ) E

31 乳腺癌组织切片 HER2( 胞膜 )CK( 胞浆 ) 双标结果 Percent (%) Figure 9. 乳腺癌组织 CK 和 HER2 量子点免疫荧光双染结果 A: 原始拍摄图 ;B: 光谱分离图 ; C: 分离 CK ;D: 分离 HER2;E: 光谱图 ( 红色 :605nm QDs; 绿色 :545nm QDs; 蓝色 :DAPI; 黑色 : 背景 ) 表 5: 各指标所占百分比及共定位所占百分比 % Co-loc. % Area: CK % Area: HER 表 6: 各指标定量结果 Marker Avg Standard Total Signal Area Signal Deviation CK HER DAPI E

32 量子点免疫荧光多色标记 ( 胞膜 + 胞浆 + 胞核 ) 表 7: 各指标所占百分比及共定位所占百分比 % Coloc. % Area: % Area: % Area: 指标 1 指标 2 指标 表 8: 各指标定量结果 E F Marker Area Total Signal Avg Signal Standard Deviation 指标 指标 指标 Figure 10. 量子点免疫荧光三标结果 A: 原始拍摄图 ;B: 光谱分离图 ;CDE: 分离单色图 ; F: 光谱图 ( 黑色 : 背景 ; 红色 :655nmQDs; 绿色 :525nmQDs; 黄色 : 585nmQDs;) 发表文章 :. Biomaterials 2011, 32, ( 合作单位 : 中南医院 )

33 使用珈源量子点免疫荧光试剂盒发表的部分文章 1. Richard J. Quantum Dots Brighten Biological Imaging. Histochemistry and Cytochemistry 45 (2011) Chen, C., Li, Y. (2010) The quantitative detection of total HER2 load by quantum dots and the identification of a new subtype of breast cancer with different 5-year prognosis, Biomaterials. 3. Chen, H. L., (2010) Detection of EBV in nasopharyngeal carcinoma by quantum dot fluorescent in situ hybridization, Exp Mol Pathol 89, He, Y., Li, Y., (2011) In Situ Spectral Imaging of Marker Proteins in Gastric Cancer with Near-infrared and Visible Quantum Dots Probes, Talanta. 5. Peng, C. W., Li, Y. (2011) Patterns of cancer invasion revealed by QDs-based quantitative multiplexed imaging of tumor microenvironment, Biomaterials.

34 Nanotechnology 杂志对我公司介绍

35 LOGO 中国 武汉 光谷生物城 B6 栋 1 楼 sales@qds.net.cn

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